KR102482197B1 - 인돌리논 화합물 및 이의 용도 - Google Patents

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Abstract

본원은 EWS-FLI1 전사 인자 억제제로서 작용하는 인돌리논 유도체 화합물을 제공한다. 또한 인돌리논 유도체의 약학적 조성물, 이의 제조방법, 이를 사용하여 치료하는 방법 및 EWS-FLI1 종양단백질의 억제제를 동정하는 방법을 제공한다.

Description

인돌리논 화합물 및 이의 용도{INDOLINONE COMPOUNDS AND USES THEREOF}
이 출원은 2014년 10월 9일자로 출원된 미국 특허출원 제62/062086호(발명의 명칭 "인돌리온 화합물 및 이의 용도")의 우선권의 이익을 주장하며, 선행 출원의 내용 전부는 본 명세서에 참고로 포함된다.
본원은 EWS-FLI1 전사 인자 억제제로서 작용하는 인돌리논 유도체 화합물을 제공한다. 또한 인돌리논 유도체의 약학적 조성물, 이의 제조방법, 이를 사용하여 치료하는 방법 및 EWS-FLI1 종양 단백질의 억제제를 동정하는 방법을 제공한다.
유잉 육종 계열의 종양(Ewing's sarcoma family of tumors, ESFT)에서 광범위하게 존재하는 EWS-FLI1 전사 인자는 지난 10여년에 걸쳐특성화되었. 소아 및 청소년에게서 두 번째로 흔한 골종양인 유잉 육종의 치료는 국소종양환자의 생존율을 향상시켰다. 그러나, 전이가 있는 환자에서는 여전히 효과가 좋지 못하며, 단기 및 장기 독성이 동반된다. 유잉 육종 계열의 종양(ESFT)은 발암성 융합 전사 인자에 대한 EWS-FLI1을 생성하는 염색체 전이를 특징으로 하며, 그 발현은 ESFT 세포의 생존에 결정적이다(Balamuth, NJ, Womer, RB., Lancet Oncology 11, 184-192 (2010)).
생체 외 및 생체 내 연구를 통해 종양 단백질인 EWS-FLI1의 RNA Helicase A (RHA)에 대한 억제가 ESFT 세포주의 증식 및 종양 부피의 감소로 이어진다는 것이 밝혀졌다. EWS-FLI1은 효소 활성을 나타내지는 않지만, RNA Helicase A (RHA)와 EWS-FLI1 사이의 단백질-단백질 상호작용은 종양 생성을 조절하므로 종양 성장의 유지에 필요하다(Hyariye N Erkizan et al. Nature Medicine 15(7) 750-756 (2009)). 주요 단백질의 상호작용을 방해하는 패러다임은 유사한 전좌가 있는 육종 및 MLL 전좌가 있는 백혈병을 비롯한 질병의 치료에 유용할 수 있다((Helman LJ, Meltzer P. Mechanisms of sarcoma development. Nat Rev Cancer 2003;3(9):685-94); and Pui CH, et al., N Engl J Med 2004;350(15):1535-48). 더욱이, 무질서화된 단백질은 그 본질적인 생화학적 특성에 기초하여 우수한 치료 표적이 될 수 있다(Cheng Y, LeGall T, Oldfield CJ, et al., Trends Biotechnol 2006;24(10):435-42).
수년간의 생체 외 및 EWS-FLI1에 대한 안티센스와 siRNA를 이용한 이종이식 연구에도 불구하고, 이들 중 어느 것도 부적절한 전달과 안정성에 기초한 인간 치료법으로서 지금까지 실용적이지 못하였다. 따라서, ESFT와 같은 질환을 치료하기 위한 개선된 요법이 필요하다.
FLI-1는 태아 발육에서는 정상적으로 활동하는 ETS 계열 전사 인자의 구성원이지만, 출생 이후에는 그렇지 않다. 이 전사 인자 계열에는 29종이 있는데, 이중 4가지, FLI-1, ETV1, ETV4 및 ERG는 광범위한 암과 관련이 있다.
FLI-1, ETV1, ETV4 또는 ERG의 발암성 융합 단백질 또는 전사 인자 자체의 결합 억제를 표적으로 하는 치료용 화합물은 유잉 육종 계열의 종양, 췌장암, 전립선암, 아교모세포종, 비-소세포 폐암 및 다른 여러 가지 암을 비롯한 암 치료에 유용하게 사용될 수 있다. 본원의 바람직한 실시 형태는 이러한 필요를 충족시키고, 기타의 이점도 제공한다.
본원에 개시된 일부 실시 형태는 입체이성질체, 유리 형태(free form), 약학적으로 허용가능한 염 또는 이의 에스테르, 용매화물과 같은 형태 또는 이들 형태의 조합을 포함하는 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이며, 여기서, A, D, R1, R2, R3, R4, R5, R6 및 R12는 본원에서 정의된 바와 같다.
Figure 112017044035581-pct00001
본원에 개시된 일부 실시 형태는 입체이성질체, 유리 형태, 또는 약학적으로 허용가능한 염과 같은 형태를 포함하는 화학식 (I)의 화합물 1종 이상의 유효량을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는 포유동물의 암 치료 방법, 또는 입체이성질체, 유리 형태 또는 약학적으로 허용가능한 염과 같은 형태를 포함하는 화학식 (I)의 화합물을 1종 이상 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
본원에 기술된 다른 실시 형태는 암의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 입체이성질체, 유리 형태 또는 약학적으로 허용가능한 염과 같은 형태를 포함하는 화학식 (I)의 화합물을 1종 이상 포함하는 사용에 관한 것이다.
본원에 기술된 또 다른 실시 형태는 유잉 육종, 교모세포종, 급성 골수성 백혈병, 유방암, 두·경부암, 흑색종, 비-소세포 폐암, 난소암, 전립선암 및 자궁암으로 이루어진 군으로 부터 선택된 암의 치료를 위한 입체이성질체, 유리 형태 또는 약학적으로 허용가능한 염과 같은 형태를 포함하는 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다. 이들 및 다른 실시 형태를 아래에서 보다 상세하게 설명한다.
이하, 발명의 설명 및 실시예를 통해 본원의 바람직한 실시 형태를 보다 상세하게 설명한다. 당업자라면 본원의 범주에 본원의 다양한 변형 및 수정이 포함됨을 인식할 것이다. 따라서, 바람직한 실시 형태의 설명이 본원의 범위를 제한하는 것으로 간주되어서는 안된다.
발암성 전사 인자를 생성하는 염색체 전좌는 다수의 육종이 포함된 다양한 종양의 특징이다. 유잉 육종 계열의 종양(Ewing's sarcoma family of tumors, ESFT)은 이 종양의 매우 악성인 표현형을 유발하는 유잉 육종 절단점 영역 1 및 프렌드 백혈병 바이러스 인테그레이션(integration) 1(EWS-FLI1) 융합 전사 인자를 생성하는 t(11;22)(q24;q12) 전좌가 특징이다. EWS-FLI1의 지속적인 발현은 ESFT 세포 생존에 결정적인 역할을 한다고 믿어지고 있다. EWS-FLI1는 악성 세포 특이성 때문에 유잉 육종에 대한 치료 표적으로 매력적이다. 또한, 실험적 증거들은 RWS/FLI 발현이 유잉 육종 종양 세포에 필수적임을 나타낸다. EWS-FLI1를 안티센스 올리고데옥시뉴클레오타이드와 RNA 간섭(RNAi)으로 생체 외(in vitro)에서 표적화하면 EWS-FLI1 감쇄를 잠재적인 치료 방식으로 지원하여, 유잉 육종 세포의 생존력, 성장 및 발암성 변이를 억제한다. 바람직한 실시 형태의 치료제는 보다 큰 그룹의 종양에 광범위하게 적용 가능하며, 화학요법-내성 육종 및 백혈병과 같은 다른 발암성 전사 인자 관련 악성 종양 및 유잉 육종과 같은 치료가 어려운 종양의 치료를 위한 치료제로서 유용하다.
정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명 분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 언급된 모든 특허, 출원, 공개된 출원 및 기타 간행물은 달리 명시하지 않은 한 그 전체가 참고문헌에 포함된다. 본원의 용어에 대한 정의가 여러 개인 경우, 별도로 명시하지 않는 한 이 구획의 내용이 우선시된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 비제한적으로 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11 및 R12 와 같은 임의의 "R" 기는 지시된 원자에 부착될 수 있는 치환기를 나타낸다. R 기는 치환되거나 또는 치환되지 않을 수 있다. 두 개의 "R"기가 "함께 결합"되는 것으로 기술된다면, R 기 및 이들이 부착된 원자는 시클로알킬, 시클로알케닐, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클을 형성할 수 있다. 예를 들어, 비제한적으로 NRaRb기의 Ra 및 Rb가 "함께 결합"되는 것으로 표시된다면, 이들은 서로 공유결합하여 환을 형성함을 의미한다.
Figure 112017044035581-pct00002
또한, 2 개의 "R" 기가 이들이 부착된 원자와 "함께 결합"되어 선택적으로 고리를 형성하는 것으로 기술되는 경우, R 기는 이전에 정의된 변수 또는 치환기로 제한되지 않을 수 있다.
본원에서 사용된 "알킬"은 완전히 포화된(이중 결합 또는 삼중 결합 없음) 탄화수소기를 포함하는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 사슬을 의미한다. 알킬기는 1 내지 20개의 탄소 원자를 가질 수 있다(본 명세서에서 "1 내지 20"과 같은 수치범위는 주어진 범위의 각 정수를 의미하며, 예를 들어, "1 내지 20개의 탄소 원자"는 알킬기가 탄소 원자 1개, 탄소 원자 2개, 탄소 원자 3개, 등, 20개 이하의 탄소 원자를 포함할 수 있음을 의미하지만, 본 정의는 숫자 범위가 지정되지 않은 "알킬"의 발생을 또한 포함한다). 상기 알킬기는 또한 1 내지 10개의 탄소 원자를 가지는 중간 규모의 알킬일 수 있다. 상기 알킬기는 또한 1 내지 6개의 탄소 원자를 가지는 저급 알킬일 수 있다. 화합물의 알킬기는 "C1-C6 알킬" 또는 유사한 명칭으로 표시될 수 있다. 단지 예로서, "C1-C6 알킬"은 알킬 사슬에 1 내지 6개의 탄소 원자가 있음을 나타내며, 즉, 알킬 사슬은 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소-부틸, sec-부틸, t-부틸, 펜틸(직쇄 및 분지형) 및 헥실(직쇄 및 분지형)이다. 전형적인 알킬기는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 3차 부틸, 펜틸(직쇄 및 분지형) 및 헥실(직쇄 및 분지형)을 포함하나 이에 한정되지는 않는다. 상기 알킬기는 치환되거나 또는 치환되지 않을 수 있다.
본원에서 사용된 "시클로알킬"은 완전히 포화된(이중 결합 또는 3중 결합 없음) 단일- 또는 다중-고리의 탄화수소 고리 시스템을 나타낸다. 둘 이상의 고리로 구성되는 경우, 고리는 융합된 방식으로 함께 결합될 수 있다. 시클로알킬기는 고리 내에 3 내지 10개의 원자 또는 고리 내에 3 내지 8개의 원자를 함유할 수 있다. 시클로알킬기는 비치환되거나 또는 치환될 수 있다. 전형적인 시클로알킬기는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸 및 시클로옥틸을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
본원에서 사용된 "아릴"은 모든 고리에 걸쳐 완천히 비편재된 π전자계를 갖는 탄소고리형(모두 탄소) 단일 고리 또는 다중 고리 방향족 고리 시스템(두개의 탄소고리형 고리가 화학결합을 공유하는 융합 고리 시스템 포함)을 의미한다. 아릴기의 탄소 원자 수는 다양할 수 있다. 예를 들어, 아릴기는 C6-C14 아릴기, C6-C10 아릴기 또는 C6 아릴기일 수 있다. 아릴기의 예로는 벤젠, 나프탈렌 및 아줄렌을 포함하나 이에 한정되지는 않는다. 아릴기는 치환되거나 치환되지 않을 수 있다.
본원에서 사용된 "헤테로아릴"은 하나 이상의 헤테로 원자(예를 들어 1 내지 5개의 헤테로 원자), 즉 탄소 이외의 원소를 함유하는 단일 고리 또는 다중 고리의 방향족 고리 시스템(완전히 비편재화된 π전자계를 갖는 고리 시스템)을 지칭하며, 질소, 산소 및 황을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 헤테로아릴기의 고리의 원자 수는 다양할 수 있다. 예를 들어, 헤테로아릴기는 고리 내에 4 내지 14개의 원자, 5 내지 10개의 원자 또는 5 내지 6개의 원자를 함유할 수 있다. 또한, 용어 "헤테로아릴"은 적어도 하나의 아릴 고리 및 적어도 하나의 헤테로아릴 고리 또는 적어도 두 개의 헤테로아릴 고리와 같은 두 개의 고리가 하나 이상의 화학 결합을 공유하는 융합된 고리 시스템을 포함한다. 헤테로아릴 고리의 예로, 퓨란, 퓨라잔, 티오펜, 벤조티오펜, 프탈라진, 피롤, 옥사졸, 벤즈옥사졸, 1,2,3-옥사디아졸, 1,2,4-옥사디아졸, 티아졸, 1,2,3-티아디아졸, 1,2,4-티아디아졸, 벤조티아졸, 이미다졸, 벤즈이미다졸, 인돌, 인다졸, 피라졸, 벤조피라졸, 이속사졸, 벤조이속사졸, 이소티아졸, 트리아졸, 벤조트리아졸, 티아디아졸, 테트라졸, 피리딘, 피리다진, 피리미딘, 피라진, 퓨린, 프테리딘, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 퀴나졸린, 퀴녹살린, 시놀린 및 트리아진을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 헤테로아릴기는 치환되거나 또는 치환되지 않을 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 헤테로시클로알킬은 탄소 원자가 1 내지 5개의 헤테로 원자와 함께 상기 고리 시스템을 구성하는, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9, 10-원에서 최대 18-원까지, 1환, 2환 및 3환 고리 시스템을 지칭한다. 헤테로 고리는 선택적으로 하나 이상의 불포화 결합을 함유할 수 있지만, 완전히 비편재화된 π전자계가 모든 고리에 걸쳐 발생하지는 않는다. 헤테로 원자는 탄소 이외의 원소이며, 산소, 황 및 질소를 포함하나, 이에 한정되지는 않는다. 헤테로 고리는 하나 이상의 카보닐 또는 티오카보닐 작용기를 추가로 포함할 수 있으며, 상기 정의는 락탐, 락톤, 고리형 이민, 고리형 티오이민 및 고리형 카바메이트와 같은 옥소-시스템 및 티오-시스템을 포함한다. 둘 이상의 고리로 구성되는 경우, 고리는 융합된 방식으로 함께 결합될 수 있다. 또한, 헤테로시클로알킬 중 임의의 질소는 4급화 될 수 있다. 헤테로시클로알킬기는 비치환되거나 또는 치환될 수 있다. 이러한 헤테로시클로알킬기의 예로는, 1,3-다이옥신, 1,3-다이옥산, 1,4-다이옥산, 1,2-다이옥솔란, 1,3-다이옥솔란, 1,4-다이옥솔란, 1,3-옥사티안, 1,4-옥사티인, 1,3-옥사티올란, 1,3-디티올, 1,3-디티올란, 1,4-옥사티안, 테트라하이드로-1,4-티아진, 2H-1,2-옥사진, 말레이미드, 숙신이미드, 바비툴산, 티오바비툴산, 디옥소피페라진, 히단토인, 디하이드로우라실, 트리옥산, 헥사하이드로-1,3,5-트리아진, 이미다졸린, 이미다졸리딘, 이속사졸린, 이속사졸리딘, 옥사졸린, 옥사졸리딘, 옥사졸리디논, 티아졸린, 티아졸리딘, 모폴린, 옥시란, 피페리딘 N-옥사이드, 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 피롤리돈, 피롤리디온, 4-피페리돈, 피라졸린, 피라졸리딘, 2-옥소피롤리딘, 테트라하이도로피란, 4H-피란, 테트라하이드로티오피란, 티아모폴린, 티아모폴린 설폭사이드, 티아모폴린 설폰 및 이들의 벤조-융합 유사체(예, 벤즈이미다졸리디논, 테트라하이드로퀴놀린 및 3,4-메틸렌디옥시페닐)이 포함되나, 이에 한정되는 것은 아니다.
용어 "약학적으로 허용 가능한 염"은 그것이 투여되는 유기체에 유의한 자극을 유발하지 않고, 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 방해하지 않는 화합물의 염을 지칭한다. 일부 실시 형태에서, 염은 화합물의 산 부가염이다. 약학적 염은 할로겐화수소산(예: 염산 또는 브롬산), 황산, 질산 및 인산과 같은 무기산과 화합물을 반응시킴으로써 수득될 수 있다. 약학적 염은 또한, 화합물을 지방족 또는 방향족 카복시산 또는 술폰산과 같은 유기산, 예를 들어 포름산, 아세트산, 숙신산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트트산, 아스코르브산, 니코틴산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, p-톨루엔산, 살리신산 또는 나프탈렌술폰산과 반응시킴으로써 수득될 수 있다. 약학적 염은 화합물을 염기와 반응시켜 암모늄염, 나트륨염 또는 칼륨염과 같은 알칼리 금속염, 칼슘염 또는 마그네슘염과 같은 알카리 토금속염, 디시클로헥실아민, N-메틸-D-글루카민, 트리스(히드록시메틸)메틸아민, C1-C7 알킬아민, 시클로헥실아민, 트리에탄올아민, 에틸렌디아민과 같은 유기 염기의 염, 및 아르기닌 및 리신과 같은 아미노산과의 염을 형성함으로써 수득될 수 있다.
하나 이상의 키랄 중심을 갖는 본원에 기재된 임의의 화합물에서 절대 입체 화학이 명시적으로 표시되지 않으면, 각각의 중심은 독립적으로 R-배위 또는 S-배위 또는 이들의 혼합물일 수 있는 것으로 이해된다. 따라서, 본원에서 제공하는 화합물은 거울상 이성질적으로 순수하거나, 거울상이성질적으로 풍부하거나, 라세미 혼합물, 부분입체이성질적으로 순수하거나, 부분입체이성질적으로 풍부하거나 또는 부분입체이성질체 혼합물일 수 있다. 또한, E 또는 Z로 정의될 수 있는 기하 이성질체를 생성하는 하나 이상의 이중결합을 갖는 본원에 기재된 임의의 화합물에서 각 이중결합은 독립적으로 E 또는 Z, 또는 이들의 혼합물일 수 있는 것으로 이해된다.
본원에 개시된 화합물이 채워지지 않은 원자가(unfilled valencies)를 갖는 경우, 원자가는 수소, 또는, 예를 들면 이들의 동위원소, 수소-1(경수소, protium) 및 수소-2(중수소, deuterium)로 채워진다는 것을 이해해야 한다.
본원에 개시된 화합물은 동위원소로 표지될 수 있는 것으로 이해된다. 중수소와 같은 동위원소로 대체함으로써, 예를 들어, 증가된 생체 내 반감기 또는 감소된 투여량 요건과 같은, 보다 큰 대사안정성으로 인한 특정 치료 이점을 제공할 수 있다. 화합물 구조 내에 표시된 각 화학원소는 상기 원소의 임의의 동위원소를 포함할 수 있다. 예를 들어 화합물 구조에서 수소 원자가 화합물에 존재하는 것으로 명시적으로 개시되거나 이해될 수 있다. 수소 원자가 존재할 수 있는 화합물의 임의의 위치에서 수소 원자는 수소-1(경수소) 및 수소-2(중수소)를 포함하나 이에 한정되지 않는, 수소의 임의의 동위원소일 수 있다. 따라서 본원에서 화합물에 대한 언급은 문맥에 따라 다르게 명시하지 않는 한 모든 잠재적인 동위원소 형태를 포괄한다.
본원에 기술된 방법 및 조합물은 결정형(화합물의 동일한 원소 조성의 상이한 결정 충전 배열을 포함하는 다형체로도 알려짐), 비정질상, 염, 용매화물 및 수화물을 포함하는 것으로 이해된다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기재된 화합물은 물, 에탄올 등과 같은 약학적으로 허용가능한 용매와 함께 용매화된 형태로 존재한다. 다른 실시 형태에서, 본원에 기재된 화합물은 비용매화된 형태로 존재한다. 용매화물은 화학량론적 또는 비화학량론적 양의 용매를 함유하고, 물, 에탄올 등과 같은 약학적으로 허용가능한 용매로 결정화하는 과정 중에 형성될 수 있다. 수화물은 용매가 물인 경우 형성되고, 또는 알콜레이트는 용매가 알콜인 경우 형성된다. 또한, 본원에서 제공된 화합물은 용매화된 형태 뿐만 아니라 비용매화된 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로 용매화된 형태는 본원에 제공된 화합물 및 제조방법의 목적을 위해 비용매화된 형태와 동일한 것으로 간주된다.
범위의 값이 제공되는 경우, 범위의 상한과 하한 사이에 각각 나타나는 값이 실시예 내에 포함되는 것으로 이해된다.
화합물
제1 측면에서, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물을 제공한다:
Figure 112017044035581-pct00003
식 중에서
R1, R2, R3 및 R4는 독립적으로 H, Cl, -CN 및 -CF3로 이루어진 군으로부터 선택되고; A는 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; D는 -OH 및 -O(C1 -6 알킬)로 이루어진 군으로부터 선택되고; R5 및 R6은 독립적으로 H, F 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R5 및 R6은 함께 결합하여 치환 또는 비치환 시클로알킬 고리를 형성하고; R12는 독립적으로 C3 - 8시클로알킬 및
Figure 112017044035581-pct00004
로 이루어진 군으로부터 선택되고; 여기서, 상기 R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 H, 할로겐, CN, CF3, C1-6 알킬, 아릴, 헤테로아릴, -O(아릴), -O(헤테로아릴), -CO2H, -CO2(C1-6 알킬), -NHSO2(C1-6 알킬), -NHSO2(아릴), -NHCONH(C1-6 알킬), -NHCON(C1-6 알킬)2, -N(C1-6 알킬)CONH2, -N(C1-6 알킬)CONH(C1-6 알킬), -N(C1-6 알킬)CON(C1-6 알킬)2, -SO2(C1-6 알킬), -SO2NH2, -SO2NH(C1-6 알킬), -SO2N(C1-6 알킬)2, C3-8 시클로알킬 및 C3-8 헤테로시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 제1 측면의 한 가지 실시 형태에서, R1, R2, R3 및 R4는 독립적으로 수소 및 Cl로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 제1 측면의 한 가지 실시 형태에서, R5 및 R6은 함께 치환 또는 비치환 시클로알킬 고리를 형성한다
상기 제1 측면의 한 가지 실시 형태에서, A는 H이다.
상기 제1 측면의 한 가지 실시 형태에서, D는 OH이다
상기 제1 측면의 한 가지 실시 형태에서, A는 H이고, D는 OH이다.
상기 제1 측면의 한 가지 실시 형태에서, R9은 아지리디닐, 아제티디닐, 피롤리디닐 및 모폴리닐로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 제1 측면의 한 가지 실시 형태에서, 화학식 (Ia)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물을 제공한다:
Figure 112017044035581-pct00005
식 중에서
R1, R2, R3 및 R4는 독립적으로 H 및 Cl로 이루어진 군으로부터 선택되고; R7, R8, R10 및 R11은 독립적으로 H 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택되고; R9는 독립적으로 C3 -8 시클로알킬 및 C3 -8 헤테로시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 제1 측면의 한 가지 실시 형태에서, R1 및 R4는 Cl이고, R2 및 R3은 H이다.
상기 제1 측면의 한 가지 실시 형태에서, 화학식 (I)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것, 또는 이의 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염, 에스터 또는 용매화물이다:
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Figure 112017044035581-pct00007
Figure 112017044035581-pct00008
Figure 112017044035581-pct00009
Figure 112017044035581-pct00010
Figure 112017044035581-pct00011
상기 제1 측면의 한 가지 실시 형태에서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물, 또는 이의 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염, 에스터 또는 용매화물을 제공한다:
Figure 112017044035581-pct00012
제2 측면에서, 상기 제1 측면의 임의의 실시 형태의 화합물 또는 이의 임의의 실시 형태의 화합물, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
제3 측면에서, 상기 제1 측면의 임의의 실시 형태의 화합물 또는 이의 임의의 실시 형태의 화합물, 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
제4 측면에서, 상기 제1 측면의 임의의 실시 형태의 화합물 또는 이의 임의의 실시 형태의 화합물, 및 하나 이상의 추가적인 약학적 활성제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
제5 측면에서, 유효량의 상기 제1 측면의 임의의 실시 형태의 화합물 또는 이의 임의의 실시 형태의 화합물을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다.
상기 제5 측면의 한 가지 실시 형태에서, 상기 대상은 포유류이다.
상기 제5 측면의 한 가지 실시 형태에서, 상기 대상은 인간이다.
상기 제5 측면의 한 가지 실시 형태에서, 상기 암은 유잉 육종, 전립선암, 교모세포종, 급성 골수성 백혈병, 유방암, 두·경부암, 흑색종, 비-소세포 폐암, 난소암 및 자궁암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
제6 측면에서, 세포를 유효량의 상기 제1 측면의 화합물 또는 임의의 실시 형태의 화합물과 접촉시키는 것을 포함하는, 종양 세포의 사멸 또는 성장 억제 방법을 제공한다.
상기 제6 측면의 한 가지 실시 형태에서, 상기 세포는 포유류의 것이다.
상기 제6 측면의 한 가지 실시 형태에서, 상기 세포는 인간의 것이다.
상기 제6 측면의 한 가지 실시 형태에서, 상기 세포는 생체 외에 존재하는 것이다.
상기 제6 측면의 한 가지 실시 형태에서, 상기 세포는 생체 내에 존재하는 것이다.
상기 제6 측면의 한 가지 실시 형태에서, 상기 세포는 암 세포이고, 상기 암은 유잉 육종, 전립선암, 교모세포종, 급성 골수성 백혈병, 유방암, 두·경부암, 흑색종, 비-소세포 폐암, 난소암 및 자궁암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이다.
제 7 측면에서, 상기 세포를 유효량의 상기 제1 측면의 화합물 또는 임의의 실시 형태의 화합물 유효량과 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 세포는 ETS 유전자가 과발현되거나 또는 ETS 융합 유전자를 포함하는 것인 세포 증식 억제 방법을 제공한다.
상기 제7 측면의 한 가지 실시 형태에서, 상기 ETS 유전자 또는 ETS 융합 유전자는 FLI1, ERG, ETV1 및 ETV4로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 제7 측면의 한 가지 실시 형태에서, 상기 세포는 포유류의 것이다.
상기 제7 측면의 한 가지 실시 형태에서, 상기 세포는 인간의 것이다.
상기 제7 측면의 한 가지 실시 형태에서, 상기 세포는 생체 외에 존재하는 것이다.
상기 제7 측면의 한 가지 실시 형태에서, 상기 세포는 생체 내에 존재하는 것이다.
상기 제7 측면의 한 가지 실시 형태에서, 상기 세포는 암 세포이고, 상기 암은 유잉 육종, 전립선암, 교모세포종, 급성 골수성 백혈병, 유방암, 두·경부암, 흑색종, 비-소세포 폐암, 난소암 및 자궁암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이다.
합성법
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본원에 개시된 화학식 (I)의 화합물은 다양한 방법으로 제조될 수 있다. 화학식 (I)의 화합물에 대한 일반적인 합성 경로를 본 명세서에 도시 및 기술하였다. 본 명세서에 도시 및 기술된 경로는 단지 예시적인 것이며, 어떠한 방식으로도 청구범위를 제한하도록 의도되거나 해석되지 않는다. 본 발명 분야의 숙련자는 개시된 합성법의 변형을 인식할 수 있으며, 본 명세서에 개시된 내용에 기초하여 대안적인 경로를 고안할 수 있을 것이며; 그러한 모든 변경 및 대체 경로는 청구범위 내에 있다.
존재하는 치환기에 따라 소분자(small molecule) 억제제는 약학적으로 허용 가능한 염 형태일 수 있다. 본원에서 사용된 용어 "약학적으로 허용 가능한 염"은 광범위한 용어이며, 본 발명 분야의 통상의 기술자에게 통상 및 관례적인 의미(그리고, 특수하거나, 사용자 정의된 의미로 제한되어서는 안됨)를 가지며, 비제한적으로 약학적으로 허용가능한 무독성 산 또는 염기로부터 제조된 염을 의미한다. 적합한 약학적으로 허용가능한 염은 금속염, 예를 들어 예를 들어, 알루미늄염, 아연염, 리튬염, 나트륨염 및 칼륨염과 같은 알칼리 금속 염, 칼슘염 및 마그네슘염과 같은 알칼리 토금속 염; 유기 염, 예를 들어, 리신염, N'N'-디벤질에틸렌디아민, 클로로프로카인, 콜린, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 메글루민(N-메틸글루카민), 프로카인 및 트리스의 염; 유리산 또는 유리염기의 염; 무기염, 예를 들어 황산염, 염산염 및 브롬산염; 및 현재 광범위하게 약학적으로 사용되는 다른 염을 포함하며, 머크 인덱스와 같은 본 발명 분야의 통상의 기술자에게 잘 알려진 출처에 열거되어 있다. 비독성이고, 목적하는 활성을 실질적으로 방해하지 않는다면 임의의 적합한 성분을 선택하여 본원에서 논의된 치료제의 염을 제조할 수 있다.
바람직한 실시 형태의 화합물은 이성질체, 라세미체, 광학이성질체, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변체 및 시스/트랜스 형태이성질체(conformer)를 포함할 수 있다. 이러한 모든 이성질체 형태는 바람직한 실시 형태 내에 포함되며, 이들의 혼합물을 포함한다. 상기 논의된 바와 같이, 바람직한 실시 형태의 화합물은 키랄 중심을 가질 수 있으며, 예를 들어, 이들은 비대칭 탄소 원자를 함유할 수 있으며, 따라서 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체 및 이들의 혼합물, 예를 들어 라세미체의 형태로 존재할 수 있다. 비대칭 탄소 원자는 (R)- 또는 (S)- 형태로 존재할 수 있거나, (R)- 및 (S)- 형태의 혼합물로서 존재할 수 있다. 아래는 화학식 (I)의 화합물의 이성체 형태이다:
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Figure 112017044035581-pct00015
Figure 112017044035581-pct00016
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상기 화합물은 비정질형 또는 결정형일 수 있다. 바람직한 실시 형태의 화합물의 결정형은 바람직한 실시 형태에 포함되는 다형체로서 존재할 수 있다. 또한 바람직한 실시 형태의 일부 화합물은 물 또는 다른 유기 용매와 함께 용매화물을 형성할 수도 있다. 이러한 용매화물은 유사하게 바람직한 실시 형태의 범위 내에 포함된다.
특정 약학적 조성물
정맥 내 또는 피하 단위 투여 형태로 바람직한 실시 형태의 억제제를 투여하는 것이 일반적으로 바람직하나, 다른 투여 경로도 고려된다. 고려되는 투여 경로는 구강, 비경구, 정맥 내 및 피하를 포함하나, 이에 한정되지는 않는다. 바람직한 실시 형태의 억제제는 예를 들어 경구 투여용 액제로 제제화될 수 있다. 적합한 형태는 현탄액, 시럽, 엘릭서 등을 포함한다. 경구 투여용으로 특히 바람직한 단위 투여형은 정제 및 캡슐을 포함한다. 1일 1회 투여를 위해 구성된 단위 투약 형태가 특히 바람직하나, 특정 실시 형태에서는 1일 2회 또는 그 이상 투여하기 위한 단위 투여형을 구성하는 것이 바람직할 수 있다.
바람직한 실시 형태의 약학적 조성물은 바람직하게는 수혈자의 혈액 또는 다른 체액과 등장성이다. 조성물의 등장성은 타르타르산나트륨, 프로필렌 글리콜 또는 다른 무기 또는 유기 용질을 사용하여 달성될 수 있다. 염화나트륨이 특히 바람직하다. 아세트산과 염, 시트릭산과 염, 붕산과 염, 및 인산과 염이 완충제로서 사용될 수 있다. 비경구적 수단은 염화나트륨 용액, 포도당 수액, 포도당 및 염화나트륨, 젓산 수액 또는 고정 오일을 포함한다. 정맥 운송 수단은 유체 및 영양 보충제, 전해질 보충제(예를 들어, 포도당 수액에 기반한 것) 등을 포함한다.
약학적 조성물의 점도는 약학적으로 허용가능한 증점제를 사용하여 선택된 수준으로 유지할 수 있다. 메틸셀룰로오스가 쉽고 경제적으로 입수할 수 있으며, 작업하기 용이하기 때문에 바람직하다. 다른 적합한 증점제는 예를 들어 잔탄 검, 카복시메틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필 셀룰로오스, 카보머 등을 포함한다. 바람직한 증점제의 농도는 선택된 증점제에 의존한다. 선택된 점도를 달성하는 양이 바람직하게 사용된다. 점성 조성물은 이러한 증점제를 첨가함으로써 용액으로부터 제조된다.
약학적으로 허용 가능한 보존제는 약학적 조성물의 저장 수명을 증가시키는데 사용될 수 있다. 벤질 알콜이 적합할 수 있으며, 예를 들어 파라벤, 티메로살, 클로로부탄올 또는 염화 벤잘코늄을 포함하는 다양한 보존제가 사용될 수 있다. 상기 보존제의 적절한 농도는 전형적으로 조성물의 총 중량을 기준으로 약 0.02 내지 2%이지만, 선택된 제제에 따라 더 많거나 또는 적은 양이 바람직할 수도 있다. 전술한 바와 같은 감속제(reducing agent)는 제형의 양호한 저장 수명을 유지하는데 유리하게 사용될 수 있다.
바람직한 실시 형태의 억제제는 적합한 담체, 희석제 또는 멸균수, 생리 식염수, 포도당 등과 같은 부형체와 혼합될 수 있으며, 투여 경로 및 목적하는 제제에 따라서 습윤제 또는 유화제, pH 완충제, 겔화 또는 점도 강화 첨가제, 보존제, 향료, 착색제 등의 보조 물질을 함유할 수 있다. 예를 들어,“Remington: The Science and Practice of Pharmacy”, Lippincott Williams & Wilkins; 20th edition (June 1, 2003) 및 “Remington’s Pharmaceutical Sciences,” Mack Pub. Co.; 18th 및 19th editions (December 1985, and June 1990) 참조. 이러한 제제는 착화제, 금속이온, 폴리아세트산, 폴리글리콜산, 하이드로겔, 덱스트란 등의 고분자 화합물, 리포솜, 마이크로에멀젼, 미셀, 단일층 또는 다중층 베시클, 적혈구 고스트 또는 스피로블라스트(spheroblast)를 포함할 수 있다. 리포솜 제형에 적합한 지질은 모노글리세라이드, 디글리세라이드, 설파타이드, 리소레시틴, 인지질, 사포닌, 담즙산 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 부가적인 성분의 존재는 물리적 상태, 용해도, 안정성, 생체 내 방출속도 및 생체 내 클리어런스에 영향을 줄 수 있으며, 이에 따라 의도하는 적용 방식에 따라 선택되어 담체의 특성을 성택된 투어 경로에 맞춘다.
경구 투여의 경우, 약학적 조성물은 정제, 수성 또는 유성 현탄액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀젼, 경질 또는 연질 캡슐, 시럽 또는 엑릭서로서 제공될 수 있다. 경구용을 목적으로 하는 조성물은 약학적 조성물의 제조를 위해 본 발명 분야에 공지된 임의의 방법에 따라 제조될 수 있으며, 다음 첨가제 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 감미제, 향료, 착색제 및 보존제. 수성 현탄액은 수성 현탄액의 제조에 적합한 부형제와 함께 혼합된 활성 성분을 함유할 수 있다.
경구용 제제는 활성 성분이 탄산칼슘, 인산칼슘 또는 카올린과 같은 불활성 고체 희석제와 혼합된 경질 젤라틴 캡슐로서, 또는 연질 젤라틴 갭슐로서 제공될 수 있다. 연질 캡슐에서, 억제제는 적합한 액체, 예컨대, 물 또는 땅콩 오일, 올리브 오일, 유지, 액체 파라핀 또는 액체 폴리에틸렌글리콜과 같은 오일 매질에 용해되거나 현탁될 수 있다. 경구 투여용으로 제형화된 안정화제 및 미소구체(microsphere) 역시 사용될 수 있다. 캡슐은 젤라틴으로 제조된 압입 캡슐(push-fit capsules)뿐만 아니라, 젤라틴 및 글리세롤 또는 솔비톨과 같은 가소제로 제조된 연질, 밀봉 캡슐을 포함할 수 있다. 압입 캡슐은 활성 성분을 락토오스와 같은 충진제, 전분과 같은 바인더, 및/또는 탈크 또는 마그네슘스테아레이트과 같은 윤활제 및 임의로 안정화제의 혼합물로서 함유할 수 있다.
정제는 위장관에서의 붕해 및 흡수를 지연시키는 공지된 방법에 의해 코팅되거나, 코팅되ㅈ 않을 수 있으며, 이에 의해 장기간에 걸쳐 지속된 작용을 제공할 수 있다. 예를 들어 글리세릴 모노스테아레이트와 같은 시간 지연 물질이 사용될 수 있다. 정제 형태와 같은 고체 형태로 투여되는 경우, 고체 형태는 전형적으로 활성 성분을 약 0.001 중량% 이하부터 약 50 중량% 이상까지, 바람직하게는 약 0.005, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9 또는 1 중량% 내지 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 또는 45 중량%로 포함한다.
정제는 비활성 물질을 포함하는 비독성의 약학적으로 허용가능한 부형제와 혼합된 활성 성분을 함유할 수 있다. 예를 들어, 정제는 압축 또는 성형에 의해 임의로 하나 이상의 추가 성분과 함께 제조될 수 있다. 압축된 정제는 선택적으로 결합제, 윤활제, 불활성 희석제, 표면 활성제 또는 분산제와 혼합된 분말 또는 과립과 같은 자유 유동 형태의 활성 성분을 적절한 기계 내에서 압축함으로써 제조될 수 있다. 성형 정제는 적절한 기계에서 불활성 액체 희석제로 습윤화된 분말형 억제제의 혼합물을 성형함으로써 제조될 수 있다.
바람직하게는, 각각의 정제 또는 캡슐은 약 1 mg 이하에서 약 1,000 mg 이상까지의 바람직한 실시 형태의 억제제, 보다 바람직하게는 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100 mg 내지 약 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800 또는 900 mg을 함유한다. 가장 바람직하게는 정제 또는 캡슐은 분할된 투여량이 투여되도록 투여량의 범위로 제공된다. 따라서 환자에게 적합한 투여량 및 매일 투여해야하는 투약량을 편리하게 선택할 수 있다. 특정 실시 형태에서 2종 이상의 치료제를 단일 정제 또는 다른 투여형(예를 들어, 병용 요법으로) 투여하는 것이 바람직할 수 있다. 그러나, 다른 실시 형태에서는 치료제를 별도의 투여 형태로 제공하는 것이 바람직할 수 있다.
적합한 불활성 물질은 탄수화물, 만니톨, 락토오스, 무수락토오스, 셀룰로오스, 수크로오스, 변형된 덱스트린, 전분 등의 희석제, 또는 삼인산칼슘, 인산칼슘, 인산나트륨, 탄산칼슘, 탄산나트륨, 탄산마그네슘 및 염화나트륨과 같은 무기염을 들 수 있다. 붕해제 또는 과립화제, 예를 들면 옥수수 전분과 같은 전분, 알긴산, 전분 글리콜산나트륨, 엠버라이트, 나트륨 카복시메틸셀룰로오스, 울트라아밀로펙틴, 알긴산나트륨, 젤라틴, 오렌지 껍질, 산 카복시메틸셀룰로오스, 천연 스폰지 및 벤토나이트, 불용성 양이온 교환 수지, 한천, 카라야 또는 트라가칸트, 또는 알긴산과 같은 분말 검 또는 이들의 염이 제형에 포함될 수 있다.
바인더는 단단한 정제를 형성하는데 사용될 수 있다. 바인더는 아카시아, 트라가칸트, 전분 및 젤라틴과 같은 천연물, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 카복시메틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 히드록시프로필메틸셀룰로오스 등을 포함한다.
윤활제, 예를 들어 스테아르산 또는 이의 마그네슘 또는 칼슘염, 폴리테트라플루오로에틸렌, 액체 파라핀, 식물성 오일 및 왁스, 소듐 라우릴설페이트, 마그네슘 라우릴설페이트, 폴리에틸렌글리콜, 전분, 탈크, 발열성 실리카, 수화된 실리코 알루미네이트 등이 정제 제형(formulation)에 포함될 수 있다.
계면활성제, 예컨데 소듐 라우릴설페이트, 디옥틸 소듐 설포숙시네이트 및 디옥틸 소듐 설포네이트와 같은 음이온성 세제, 벤잘코늄 클로라이드 또는 벤제토늄 클로라이드와 같은 양이온성, 또는 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 글리세롤 모노스테아레이트, 폴리소르베이트, 수크로스 지방산 에스테르, 메틸 셀룰로오스 또는 카복시메틸셀룰로오스와 같은 비이온성 세제가 사용될 수 있다.
아미포스틴 또는 이의 유사체가 확산 또는 침출 메카니즘에 의한 방출을 허용하는 불활성 기질에 혼입된 제어 방출 제형을 사용할 수 있다. 느리게 약화하는 매트릭스도 제형에 혼입될 수 있다. 다른 전달 시스템에는 시간제 방출, 지연 방출 또는 서방형 전달 시스템이 포함될 수 있다.
예를 들면, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 메틸 히드록시-에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 나트륨 카복시메틸셀룰로오스, 프로비돈 및 폴리에틸렌글리콜과 같은 비장용성 물질, 또는 프탈산 에스테르와 같은 장용성 물질을 사용하여 코팅될 수 있다.
액체의 형태로 경구 투여되는 경우, 액체는 물, 광유(petroleum), 동물에서 또는 땅콩기름, 미네랄유, 대두유 또는 참기름과 같은 식물에서 기원한 오일, 또는 합성오일과 같은 액체 담체가 활성 성분에 첨가될 수 있다. 생리 식염수 용액, 덱스트로스 또는 다른 당류 용액, 또는 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 폴리에틸렌글리콜과 같은 글리콜 또한 적합한 액체 담체이다. 약학적 조성물은 또한 수중유(oil-in-water) 에멀전의 형태일 수 있다. 유상(oily phase)은 올리브 오일 또는 아라키스 오일과 같은 식물성 오일, 액상 파라핀과 같은 미네랄 오일, 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 적합한 유화제는 아카시아 검 및 트라가칸트 검과 같은 천연 검, 대두 레시틴과 같은 자연 발생 인산염, 지방산 및 소르비탄 모노-올레이트와 같은 헥시톨 무수물로부터 유도된 에스테르 또는 부분 에스테르, 및 이들 부분 에스테르와 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노-올레이트와 같은 에틸렌 옥사이드의 축합 생성물을 포함한다. 에멀젼은 또한 감미료 및 향료를 포함할 수 있다.
또한, 폐 전달에 이용될 수 있다. 이 화합물은 흡입과 동시에 폐로 전달되며, 폐 상피 내벽을 통과하여 혈액으로 흐른다. 치료용 산물의 폐 전달을 위해 고안된 광범위한 기계적 장치가 사용될 수 있으며, 본 발명 분야의 통상의 기술자에게 익숙한 분무기, 정량 흡입기 및 분말 흡입기가 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이러한 장치는 화합물의 분배에 적합한 제제을 사용한다. 일반적으로, 각 제제는 사용되는 장치의 유형에 따라 다르며, 적절한 추진 물질, 희석제 뿐만 아니라, 보조제 및/또는 치료에 유용한 담체의 사용을 포함할 수 있다.
화합물 및/또는 다른 임의의 활성 성분은 평균 입자 크기가 0.1 ㎛이하 내지 10 ㎛이상, 보다 바람직하게는 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8 또는 0.9 ㎛ 내지 .0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0 및 9.5 mm의 평균 입자 크기를 갖는 미립자 형태로 제조된다. 억제제의 폐 전달용 약학적으로 허용가능한 담체는 트레할로오스, 만니톨, 자일리톨, 수크로오스, 락토오스 및 솔비톨과 같은 탄수화물을 포함한다. 제제에 사용되는 기타 성분으로는 DPPC, DOPE, DSPC 및 DOPC가 있다. 폴리에틸렌글리콜 및 시클로덱스트란과 같은 덱스트란을 포함하는 천연 또는 합성 계면활성제가 사용될 수 있다. 담즙염 및 다른 관련 증강제 뿐만 아니라 셀룰로오스 및 셀룰로오스 유도체와 아미노산이 또한 사용될 수 있다. 리포솜, 마이크로캡슐, 마이크로스피어, 포접 복합체 및 다른 유형의 담체가 또한 사용될 수 있다.
분무기, 분사(jet) 또는 초음파와 함께 사용하기에 적합한 약학 제제는 일반적으로 용액 1 mL당 억제제 약 0.01 이하 내지 100 mg 이상의 농도, 바람직하게는 0.1, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 mg 내지 약 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 또는 90 mg으로 물에 용해 또는 현탁된 억제제를 포함한다. 상기 제형은 또한 완충액 및 단순 설탕을 포함할 수 있다(예를 들어, 단백질 안정화 및 삼투압조절). 분무기 제형은 또한 에어로졸 형성시 용액의 원자화에 의해 야기되는 억제제의 표면에 유도된 응집을 감소시키거나 방지하기 위해 계면활성제를 함유할 수 있다.
계량 투입형 흡입기 장치와 함께 사용하기 위한 제제는 일반적으로 계면활성제를 사용하여 압축가스(propellant)에 현탁시킨 활성 성분을 함유하는 미세하게 분쇄된 분말을 포함한다. 압축가스는 클로로플루오로카본, 하이드로클루오로플루오로카본, 하이드로플루오로카본 및 하이드로카본과 같은 통상적인 압축가스를 포함할 수 있다. 바람직한 압축가스는 트리클로로플루오로메탄, 디클로로디플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 1,1,1,2-테트라플루오로에탄 및 이들의 조합물을 포함한다. 적합한 계면활성제는 소르비탄 트리올레이트, 대두레시틴 및 올레산을 포함한다.
분말 흡입기 장치로부터 분배하기 위한 제제는 일반적으로 장치로부터 분말의 분산을 용이하게 하는 양으로, 일반적으로는 제제의 1 중량% 이하 내지 99 중량% 이상, 바람직하게는 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50 중량% 내지 약 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 또는 90 중량%로 존재하는 락토오스, 소르비톨, 수쿠로오스, 만니톨, 트레할로오스 또는 자일리톨과 같은 증량제를 선택적으로 포함하는 미세하게 분쇄된 건조 분말 함유 억제제를 포함한다.
바람직한 실시 형태의 화합물이 정맥 내, 비경구 또는 다른 주사에 의해 투여되는 경우, 바람직하게는 발열원이 없는 비경구적으로 허용되는 수용성 또는 유성 현탁액 형태일 수 있다. 현탁액은 적절한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 당해 분야에 널리 공지된 방법에 따라 제제화될 수 있다. 적절한 pH, 등장성, 안정성 및 이와 같은 수용 가능한 수용액의 제조는 본 발명 분야의 기술 범위 내에 있다. 바람직한 주사용 약학적 조성물은 1,3-부탄디올, 물, 등장성 염화나트륨 용액, 링거 용액, 덱스트로스 용액, 덱스트로오스 및 염화나트륨 용액, 락티드 링거액과 같은 등장성 비히클 또는 본 발명 분야에 공지된 다른 비히클을 함유한다. 또한, 멸균 유지가 용매 또는 현택 매질로서 통상적으로 사용될 수 있다. 이러한 목적으로, 합성 모노 또는 디글리세라이드를 포함하는 임의의 완하성 지방유(bland fixed oil)가 사용될 수 있다. 또한, 올레산과 같은 지방산은 주사제를 형성하는데 마찬가지로 사용될 수 있다. 약학적 조성물은 또한 안정화제, 보존제, 완충제, 항산화제 또는 당해 분야의 통상의 기술자에게 잘 알려진 다른 첨가제를 함유할 수 있다.
주사의 지속시간은 다양한 인자에 따라 조절 될 수 있으며, 수초 이하 내지 5, 0.1, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24 시간 이상 연속적으로 정맥내 투여과정을 통해 투여되는 단일 주사를 포함한다.
바람직한 실시 형태의 화합물은 본 발명 분야에서 확립된 방식 및 본 발명 분야에 확립된 수준의 약학적 조성물에서 통상적으로 발견되는 보조성분을 추가로 사용할 수 있다. 따라서, 예를 들어 조성물은 조합요법(예를 들어, 보조 항균제, 항소양제, 수렴제, 국소 마취제, 환원제, 화학요법제 등)을 위해 추가의 상용의 약학적 활성 물질을 함유하거나, 또는 부형제, 염료, 증점제, 안정화제, 보존제 또는 산화방지제와 같이 바람직한 실시 형태의 다양한 투여 형태를 물리적으로 제형화하는데 유용한 물질을 함유할 수 있다. 바람직한 실시 형태의 화합물과 조합하여 사용될 수 있는 항암제로는 빈블라스틴 및 빈크리스틴과 같은 빈카 알칼로이드계; 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신과 같은 안트라시클린계; 비스안트렌 및 미토산트론과 같은 안트라센계; 에토포사이드 및 테니포사이드와 같은 에피포도필로-톡신계; 및 악티노마이오신 D, 도세탁셀, 에토포사이드(VP-16), 파클리탁셀, 도세탁셀 및 아드리아마이신)과 같은 다른 항암제; 및 면역억제제(예; 시클로스포린 A, 타크롤리무스)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본원에서 제공된 화합물, 조성물 및 제조 방법은 히스톤 탈아세틸화 효소 억제제(HDAC), 오로라 키나제 억제제, 탈메틸화제(예: 5-AZA 시티딘), 자연 살해 세포의 면역요법, IGF-IR 항체, 유잉 항원 항체, 면역 억제 약물 및 히드록시우레아와 배합될 수 있다. 히스톤 탈아세틸화 효소 억제제의 예로는 보리노스탯, 로미데피신, 파노비노스탯, 발프로산, 베리노스탯, 모세티노스탯, 기비노스탯 및 트리코스테틴 A를 포함한다. 오로라 키나제 억제제의 예는 ZM447439, 헤스페라딘 및 VX-680를 포함한다. 탈메틸화제의 예는 5-아자시티딘, 5-아자데옥시시티딘 및 프로카인을 포함한다. 면역 억제 약물의 예는 6-머캅토퓨린 및 아자티오프린을 포함한다.
특정 키트
바람직한 실시 형태의 화합물은 키트의 형태로 관리 의사 또는 다른 건강 관리 전문가에게 제공될 수 있다. 상기 키트는 적절한 약학 조성물의 화합물을 함유하는 용기 및 약학 조성물을 환자에게 투여하기 위한 지시를 담은 패키지이다. 키트는 임의로 하나 이상의 추가 치료제, 예를 들어 본원에 기술된 육종을 치료하기 위해 현재 사용되는 화학요법제를 또한 함유할 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 추가의 화학요법제와 조합하여 바람직한 실시 형태의 화합물을 포함하는 하나 이상의 조성물을 함유하는 키트가 제공되거나, 또는 바람직한 실시 형태의 억제제 및 추가의 치료제를 함유하는 별도의 약학조성물이 제공될 수 있다. 키트는 또한, 연속 투여 또는 순차적 투여를 위한 바람직한 실시 형태의 화합물의 개별적인 투여량을 함유할 수 있다. 키트에는 선택적으로 하나 이상의 진단도구와 사용지침이 포함될 수 있다. 상기 키트는 억제제 및 임의의 다른 치료제를 투여하기 위한 설명과 함께 적합한 전달 장치, 예를 들어, 주사기 등을 포함할 수 있다. 키트는 선택적으로 포함된 임의의 또는 모든 치료제의 보관, 재구성(적용 가능한 경우) 및 투여에 대한 지침을 포함할 수 있다. 상기 키트는 대상에게 투여될 횟수를 반영하는 다수의 용기를 포함할 수 있다.
사용방법
본원에서 제공되는 일부 실시 형태는 유잉 육종 종양(ESFT)의 치료 방법에 관한 것이다. ESFT는 독특한 융합 단백질 EWS-FLI1을 포함한다. ESFT는 3세 내지 40세 사이의 환자에게 영향을 미치며, 대부분의 경우 20년 이내에 발생한다. ESFT의 발생학적 세포 유형은 알려지지 않았지만, 종양은 종종 뼈에 근접하여 성장하지만, 연조직 종괴로 나타날 수 있다. 국소 종양이 있는 환자의 40% 이상이 재발성 질환을 앓고 있으며, 대다수는 ESFT로 사망하며, 전이성 ESFT를 가진 환자의 75-80%는 고용량의 화학요법에도 불구하고 5년 이내에 사망하였다(Grier HE, Krailo MD, Tarbell NJ, et al. Addition of ifosfamide and etoposide to standard chemotherapy for Ewing's sarcoma and primitive neuroectodermal tumor of bone. N Engl J Med 2003;348(8):694-701). 이러한 생존율은 복용량을 증가시킨 화학요법에도 지난 20년간 향상되지 않았다. 생존율을 향상시키고 치료관련 이환율을 감소시키기 위해 바람직한 실시 형태에서 제공되는 바와 같이, ESFT 환자를 치료하기 위한 신규의 표적화된 전략이 사용될 수 있다.
ESFT는 종양의 95%에서 염색체 22에 있는 EWS 유전자(유잉 육종)의 중심 엑손과 ets 계열 유전자; 염색체 11번에 위치한 FLI1 (Friend Leukemia Insertion), t(11;22) 또는 21 번 염색체에 있는 ERG, t(21;22)의 중심엑손 사이에서 일어나는 전좌가 특징이다. EWS-FLI1 융합 전사는 두 개의 주요 도메인을 가진 55 kDa 단백질(전기 영동 운동성 약 68 kD)을 암호화한다. EWS 도메인은 강력한 전사 활성제이며, FLI1 도메인은 고도로 보존된 DNA 결합 도메인이다(May WA, Lessnick SL, Braun BS, 외, The Ewing's sarcoma EWS/FLI-1 fusion gene encodes a more potent transcriptional activator and is a more powerful transforming gene than FLI-1. Mol Cell Biol 1993;13(12):7393-8); 생성된 EWS-FLI1 융합 단백질은 일탈적인 전사 인자로서 작용한다. 마우스 섬유아세포의 EWS-FLI1 형질 전환은 EWS 및 FLI1 기능성 도메인이 손상시키지 않는다 (May WA, Gishizky ML, Lessnick SL, 외 Ewing sarcoma 11;22 translocation produces a chimeric transcription factor that requires the DNA-binding domain encoded by FLI1 for transformation. Proc Natl Acad Sci U S A 1993;90(12):5752-6).
EWS-FLI1은 종양 세포에서만 발현되고, ESFT 세포주의 성장을 유지한다는 점에서 탁월한 치료 표적이다. 안티센스 올리고데옥시뉴클레오타이드(ODN) (Toretsky JA, Connell Y, Neckers L, Bhat NK. Inhibition of EWS-FLI-1 fusion protein with antisense oligodeoxynucleotides. J Neurooncol 1997;31(1-2):9-16; Tanaka K, Iwakuma T, Harimaya K, Sato H, Iwamoto Y. EWS-Fli1 antisense oligodeoxynucleotide inhibits proliferation of human Ewing's sarcoma and primitive neuroectodermal tumor cells. J Clin Invest 1997;99(2):239-47) 또는 작은 간섭 RNA(siRNA) ) (Toretsky JA, Connell Y, Neckers L, Bhat NK. Inhibition of EWS-FLI-1 fusion protein with antisense oligodeoxynucleotides. J Neurooncol 1997;31(1-2):9-16; Tanaka K, Iwakuma T, Harimaya K, Sato H, Iwamoto Y. EWS-Fli1 antisense oligodeoxynucleotide inhibits proliferation of human Ewing's sarcoma and primitive neuroectodermal tumor cells. J Clin Invest 1997;99(2):239-47)를 사용한 EWS-FLI1의 발현 수준 감소는 누드 마우스에서 ESFT 세포주의 증식과 종양 퇴화를 감소시킨다. 최근 나노 테크놀로지의 발전으로 siRNA의 전달과 방출이 개선되었지만, 현재 인간의 EWS-FLI1에 대한 안티센스 ODN과 siRNA의 감소는 현재의 기술로 가능하지 않다(Maksimenko A, Malvy C, Lambert G, 외. Oligonucleotides targeted against a junction oncogene are made efficient by nanotechnologies. Pharm Res 2003;20(10):1565-7; Lambert G, Bertrand JR, Fattal E, 외. EWS FLI-1 antisense nanocapsules inhibits Ewing sarcoma-related tumor in mice. Biochem Biophys Res Commun 2000;279(2):401-6). EWS-FLI1 표적화에 대한 흥미로운 접근법 중 하나는 siRNA 감소된 EWS-FLI1과 작은 분자의 라이브러리 사이의 비교발현을 사용하여 Ara-C로 임상 시험을 이끌었다(Stegmaier K, Wong JS, Ross KN, 외. Signature-based small molecule screening identifies cytosine arabinoside as an EWS/FLI modulator in Ewing sarcoma. PLoS medicine 2007;4(4):e122). Ara-C를 확인하는 이 방법은 또한 독소루비신과 퓨로마이신이 EWS-FLI1 수준을 감소시킬 것이라고 지적했다. 독소루비신은 현재 ESFT 환자의 표준 요법으로 사용되고 있지만 생존율은 받아들일 수 없는 수준이다(Grier HE, Krailo MD, Tarbell NJ, et al. Addition of ifosfamide and etoposide to standard chemotherapy for Ewing's sarcoma and primitive neuroectodermal tumor of bone. N Engl J Med 2003;348(8):694-701). ESFT 환자에서의 Ara-C 사용은 현재 임상 2상에서 평가 중이다. 이것이 필요한 임상적 돌파구가 되기를 희망하는 동안, 이것은 EWS-FLI1의 작은 분자 표적화의 중요성을 분명히 보여준다. 바람직한 실시 형태는 중요한 단백질 동반자로부터 EWS-FLI1을 파괴시켜 EWS-FLI1의 종양 특이성 및 보다 정확한 표적화를 달성하는 소분자 단백질-단백질 상호 작용 억제제(SMPPII)를 제공한다.
EWS-FLI1은 종양 세포에서만 발현되기 때문에 훌륭한 치료 표적이다, 그러나 이 종양 특이 유전자를 표적으로 하는 능력은 이전에는 성공적이지 못했다. 소분자 개발에 대한 도전 중 하나는 EWS-FLI1이 알려진 효소 도메인을 결핍하고, 효소 도메인이 표적화된 치료법에 대해 중요하다고 생각되어 왔다. 또한 EWS-FLI1은 혼란된 단백질로서, 구조 기반 약물 설계에 사용될 수 있는 강체 구조를 나타내지 않는다는 것을 나타낸다 (Uren A, Tcherkasskaya O, Toretsky JA. Recombinant EWS-FLI1 oncoprotein activates transcription. Biochemistry 2004;43(42):13579-89). 사실, EWS-FLI1의 무질서한 성질은 전사 조절에 중요하다(Ng KP, Potikyan G, Savene RO, Denny CT, Uversky VN, Lee KA. Multiple aromatic side chains within a disordered structure are critical for transcription and transforming activity of EWS family oncoproteins. Proc Natl Acad Sci U S A 2007;104(2):479-84). 불규칙 단백질은 특히 생화학적으로 무질서한 특성 때문에 작은 분자 단백질-단백질 상호작용 억제제에 대해 더 매력적인 표적으로 간주된다(Cheng Y, LeGall T, Oldfield CJ, 외. Rational drug design via intrinsically disordered protein. Trends Biotechnol 2006;24(10):435-42).
EWS-FL1의 단백질-단백질 상호작용은 발암 가능성에 기여한다고 믿어진다. 따라서 EWS-FLI1과 직접 상호작용하고 기능적으로 조절하는 새로운 단백질이 연구되어 왔다. 전사 활성인 재조합 EWS-FLI1은 상업적 펩티트 파지 디스플레이 라이브러리를 스크리닝 하기 위한 표적으로 사용되었다(Uren A, Tcherkasskaya O, Toretsky JA. Recombinant EWS-FLI1 oncoprotein activates transcription. Biochemistry 2004;43(42):13579-89). EWS-FLI1에 차별적으로 결합하는 28 개의 신규 펩티드가 파지 시퀀싱으로부터 동정되었다. 이 펩타이드에 상동인 인간 단백질을 위해 생명 공학 정보데이터베이스 검색 센터는 인간 RNA 헬리케이즈 A의 aa823-832와 상동성 있는 펩티드를 확인했다.(RHA, gene bank accession number A47363) (Toretsky JA, Erkizan V, Levenson A, 외. Oncoprotein EWS-FLI1 activity is enhanced by RNA helicase A. Cancer Res 2006;66(11):5574-81).
EWS-FLI1은 ESFT 세포에 매우 특이적인 반면, EWS 및 RHA는 편재되어(ubiquitously) 발현된다. EWS-FLI1과 RHA 사이의 영역은 특이성을 가질 수있는 분자 치료법의 표적이 되며; EWS-FLI1은 종양에서만 발현되기 때문에 RHA와의 상호 작용 지점이 고유할 수 있다. 치료제, 즉 소분자 단백질-단백질 상호 작용 억제제가 본원에서 EWS-FLI1 기능을 억제하기 위해 제공된다.
대부분의 전좌-융합 단백질 육종은 ESFT를 포함한 나쁜 예후를 예고한다. 독특하고 치명적인 융합 단백질인 EWS-FLI1을 이끌어내는 염색체 전좌 t(11;22)는 완벽한 암 표적이다. 많은 다른 육종은 유사한 전좌 변종을 공유한다(Table 2. from Helman LJ, Meltzer P. Mechanisms of sarcoma development. Nat Rev Cancer 2003;3(9):685-94).
EWS-FLI의 전좌가 췌장의 고형 의사 유두 신생물에서 보고되었으나(Maitra A., 외, Detection of t(11;22)(q24;q12) translocation and EWS-FLI-1 fusion transcript in a case of solid pseudopapillary tumor of the pancreas. Pediatr Dev Pathol 2000;3:603-605), 모든 고형 의사 유두 신생물에서 EWS-FLI1의 역할은 여전히 해결되어야 한다(Katharina Tiemann et al., Solid pseudopapillary neoplasms of the pancreas are associated with FLI-1 expression, but not with EWS/FLI-1 translocation).
EWS 또는 FLI1 동족체는 육종 및 백혈병에서 광범위하게 발생하는 전좌의 동반자이다. EWS, 또는 그 동족체 TLS 또는 FUS는 명확한 세포 육종, 점액성 지방 육종, 결합조직성 소원형 세포 종양, 연골 육종 및 급성 골수성 백혈병의 염색체 전좌에 관여한다. FLI1은 유전자의 ets 계열에 속한다. FLI1 동족체 ERG는 유잉 육종의 약 10%와 급성 골수성 백혈병의 20%에서 전이된다. 이것은 EWS-FLI1이 다수의 환자에게 영향을 미치는 질병 계열(전좌 동반자와 관련이 있음)에 영향을 줄 수 있는 모델 시스템으로 작용할 수 있음을 시사한다(Uren A., Tcherkasskaya O. 및 Toretsky J.A. Recombinant EWS-FLI1 oncoprotein activates transcription. Biochemistry 43(42) 13579-89 (2004)).
ERG는 또한 TMPRSS2:ERG 융합이 질병 진행의 위험을 정의할 수 있는 별개의 분자 아형을 제시하는 전립선 암에서 전좌된다(F. Demichelis 외, TMPRSS2:ERG gene fusion associated with lethal cancer in a watchful waiting cohort. Oncogene (2007)26, 4596-4599). EWS 또는 FLI1 계열 구성원의 전좌가 관찰된 다른 질병으로는 전립선암, 교모세포종, 급성 골수성 백혈병, 유방암, 두·경부암, 흑색종, 비-소세포 폐암, 난소암 및 자궁암이 포함된다(Janknecht, Ralf; Shin, Sook, 및 Oh, Sangphil, ETV1, 4 및 5: An Oncogenic Subfamily of ETS Transcription Factors. Biochim. Biophys. Acta 1826 (1), 1-12 (2012)).
따라서, 바람직한 실시 형태의 치료제는 많은 다른 종양에서의 적용 가능성을 갖는다. 보다 광범위하게, 가장 어려운 백혈병 중 일부는 혼합 계통의 백혈병 유전자(MLL,11q23)를 포함하는 전좌-유발 융합 단백질을 가지고 있으며, 우리의 연구는 매우 치료에 저항하는 암 그룹의 패러다임으로 작용할 수 있다(Pui CH, Chessells JM, Camitta B, 외. Clinical heterogeneity in childhood acute lymphoblastic leukemia with 11q23 rearrangements. Leukemia 2003;17(4):700-6.). 따라서, 실시 형태는 전좌가 발생한 암을 포함한다. 전좌 융합 유전자를 표 1에 열거하였다.
유잉 육종
전좌 유전자 융합유전자 종류
t(11;22)(q24;q12) EWSR1 - FLI1 전사 인자
t(21;22)(q22;q12) EWSR1 -ERG 전사 인자
t(7;22)(p22;q12) EWSR1 - ETV1 전사 인자
t(17;22)(q21;q12) EWSR1 - ETV4 전사 인자
t(2;22)(q33;q12) EWSR1 - FEV 전사 인자
다수의 장애는 ETS 유전자의 과발현 또는 ETS 유전자의 융합, 즉, ETS 유전자를 포함하는 유전자 전좌를 포함한다. 그러한 ETS 유전자의 예는 FLI1, ERG, ETV1 및 ETV4를 포함한다. 융합 유전자의 예는 EWS-FLI, TMPRSS2-ERG을 포함한다.
표 1A에 ETS 유전자 계열 구성원 하나 이상이 과발현되고/되거나 재배열된 여러 암을 열거하였다.
Figure 112017044035581-pct00020

적응증
본원에서 제공된 특정 화합물, 조성물 및 방법은 표 1에 열거된 것과 같은 전좌 유전자 융합을 포함하는 종양 또는 종양 세포, 유잉 육종, 전립선암, 교모세포종, 급성 골수성 백혈병, 유방암, 두·경부암, 흑색종, 비-소세포 폐암, 난소암 및 자궁암과 같은 다수의 질환을 치료하는 데에 사용될 수 있다. 본원에서 제공된 방법의 일부 실시 형태는 세포의 증식을 억제하는 방법을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 세포는 ETS 유전자를 과발현한다. 일부 실시 형태에서, 과발현된 ETS 유전자는 FLI1, ERG, ETV1 또는 ETV4를 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 상기 세포는 ETS 융합 유전자를 포함한다. 일부 실시 형태에서, ETS 융합 유전자는 FLI1, ERG, ETV1 및 ETV4와 같은 ETS 유전자를 포함할 수 있다.
실시예
화합물 (I)의 제조
Figure 112017044035581-pct00021
화학식 (I)의 화합물은 본원에 제시된 합성 반응식에 따라 제조되었다.
디에틸렌아민(10 방울) 메탄올(5 mL) 용액에 화학식 (II)의 케톤(4.0 당량)을 화학식 (III)의 아사틴 유도체(1 당량)와 혼합하고, 혼합물을 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축한 뒤, 용리액으로 디클로로메탄/메탄올을 사용하는 플래쉬 크로마토그래피를 사용하여 정제하여 순수한 생성물을 수득하였다. 메탄올로 재결정하여 추가 정제를 수행하였다. 케톤 및 이사틴 유도체의 치환기는 하기 실시예 1-23으로 표시된 화학식 (I)의 화합물을 생성하도록 선택되었다. 1H에 대해 베리안-400 분광기(400 MHz)를 사용하여 수득된 실시예 1-26의 화합물에 대한 NMR 스펙트럼을 기록하였다. 화학적 이동은 내부 표준 물질인 테트라메틸실란으로부터 ppm 다운필드로 주어지며, 커플링 상수(J-값)는 헤르츠(Hz)이다.
키랄 분리는 이성질체 혼합물을 메탄올/메틸렌클로라이드 (4/1) 혼합물 또는 깨끗한 메탄올에 용해시키고, 분리는 키랄팩 IA 칼럼(250mm x 4.6 mm; 입자 크기 5 mm)을 사용하고, 메탄올/CO2 (50/50)의 혼합물을 사용하여 용리되는 초임계 유체 크로마토그래피(Supercritical Fluid Chromatography, SFC)에 의해 수행되었다. 용매를 진공하에 제거하여 순수한 거울상 이성질체를 수득하였다.
일부 실시 형태에서 화합물은 하기 합성 반응식에 따라 제조될 수 있다.
Figure 112017044035581-pct00022
상기 반응식에서, 케톤 (4 .0 당량) 및 촉매량의 디에틸아민(10 방울)을 치환된 이사틴(1 당량)의 메탄올 (5 mL) 용액에 첨가하였다. 출발 물질(치환된 이사틴)이 완전히 사라질 때까지 혼합물을 상온에서 교반하였다. 생성된 용액을 농축시키고, 헥산/에틸아세테이트로 용출시키는 프래쉬 크로마토그래피에 적용하여 정량적 수율로 순수한 생성물을 수득하였다. 헥산/에틸아세테이트로 재결정하여 추가정제를 수행하였다.
상기 반응식으로 합성된 화합물의 예는 4,7-디클로로-3-히드록시-3-[2-(4-메톡시페닐-2-옥소에틸)]-1,3-디하이드로인돌-2-온을 포함한다: 흰색 고체; mp 149-151 ℃; 1H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 10.93 (s, 1H), 7.86 (d, 2H, J = 9.2 Hz), 7.26 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.98 (d, 2H, J = 8.8 Hz), 6.86 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 6.39 (s, 1H), 4.31 (d, 1H, J = 18.0 Hz), 3.80 (s, 3H), 3.61 (d, 1H, J = 18.0 Hz).
Figure 112017044035581-pct00023
일부 실시 형태에서, 화합물은 하기 합성 반응식에 따라 제조될 수 있다.
Figure 112017044035581-pct00024
이러한 실시 형태에서, 적절한 아세토페논 및 4,7-디클로로이사틴을 촉매량의 디에틸아민 존재하에 축합시켜 정량적 수율로 원하는 화합물을 제조할 수 있다. 예시적 합성은 다음을 포함한다:
Figure 112017044035581-pct00025
4,7-디클로로이사틴(30.05 g, 139.1 mmol, 1.0 당량, Alfa Aesar 로트 # 10173559) 및 MeOH (450 mL, 15 vol)을 질소라인, 오버헤드 기계식 교반기 및 온도프로브가 장착된 2L 3구 둥근 바닥 플라스크에 채웠다. 디에틸아민(3.25 g, 0.32 당량, Sigma-Aldrich 로트 # SHBD5313V)을 3분에 걸쳐 적가하였다(슬러리는 진한 적색이 되었음). 아주 약간의 온도 상승이 관찰되었다(17.5℃에서 18.8℃로). 이어서 플라스틱 깔때기를 이용해 1-[4-(디메틸아미노)페닐]에타논 2(44.3 g, 1.95 당량, ArkPharm 로트 # 0000197-130717000)를 첨가하고, 깔때기를 MeOH(75 mL, 2.5 vol)로 헹구었다. 반응 온도가 15.1℃로 내려가는 것이 관찰되었다. 수분 동안 교반하여 용해되지 않는 입자가 약간 포함된 진한 적색 용액이 얻어졌다. 상기 용액을 상온에서 교반하고, 공정 관리(in-process control, IPC)를 위해 HPLC로 주기적인 샘플링을 하였다. 반응 23시간 후, 추가의 디에틸아민을 주사기를 이용해 첨가(1.42 g, 0.14 당량)하고, 상온에서 교반을 계속하였다. 40.5 시간 후, 가벼운 슬러리가 형성되었다. 고체 2를 부분적으로 첨가하여(54.1 g, 2.38 당량, ArkPharm 로트 # 0000197-130717000 및 3.2 g, 0.14 당량, TCI 로트 # GK01-BRAH) 총 4.47 당량의 아세토페논 2를 수득하였다. 반응 88시간 후, HPLC에 의한 IPC는 반응 혼합물에 존재하는 이사틴 1의 AUC가 1 % 미만임을 보여주었다. 무거운 침전물이 형성되었다. 4.5일 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축시키고(수조 온도 < 40℃), 고 진공하에서 약 84 g의 고체 혼합물, 로트 # BIO-W-22-11을 수득하였다. 고체를 디클로로메탄(385 mL)과 MeOH(140 mL)의 혼합물에 용해시키고 100 g의 실리카 겔에 흡착시켰다. 용매를 감압하에 제거하고, 건조 생성물/실리카 혼합물을 플래시 크로마토그래피 정재를 위해 실리카 겔(1 kg, 헵탄으로 미리 충전함)을 함유하는 칼럼 상에 로딩하였다. 용리는 10% 에틸아세테이트가 헵탄 용액으로 시작하고, 에틸아세테이트 100%까지 구배를 적용한 다음, 10% 메탄올 에틸아세테이트 용액으로 전환시켰다. 500 mL 및 2 L까지의 분획을 수집하였다. 생성물이 침전되기 시작한 분획을 함유하는 생성물을 합하고, 약 1 L까지 농축시켰다. 생성된 침전물을 여과하고, EtOAc/MeOH (75:25 비율, 200 mL) 중에서 재슬러리화 시킨뒤, 여과하고, MeOH로 세척하여 화합물의 첫 번째 수득물을 얻었다. 첫 번째 여액을 적은 부피가 되도록 농축시키고 MeOH를 첨가하여 화합물의 두 번째 수득물을 침전시켰다. 각 수득물의 분리된 여과액을 합하고, 적은 부피가 되도록 농축시킨 뒤, 25 mL의 MeOH에 용해시키고, 생성된 고체를 여과하여 화합물의 세 번째 수득물을 얻었다. 세 수득물을 모두 상온에서 하루 동안 고진공 하에 건조시키고, 40℃에서 4일 동안 건조시켰다. 합한 총 중량은 40.03g이고, 이는 76 %의 화합물 수율(순도 또는 용매 함량에 의해 보정되지 않음)에 대응한다. 고체는 미색(off-white, 매우 연한 노란색에서 짙은 복숭아 색을 가짐)을 나타내었다.
다른 예시적인 합성은 다음을 포함한다:
Figure 112017044035581-pct00026
4,7-디클로로이사틴(4.26 g, 19.7 mmol, 1.0 당량, Alfa Aesar 로트 # 10173559) 및 MeOH (70 mL, 16.4 vol)을 질소라인, 오버헤드 기계식 교반기 및 온도프로브가 장착된 2L 3구 둥근 바닥 플라스크에 채웠다. 디에틸아민(0.43 g, 0.30 당량, Sigma-Aldrich 로트 # SHBD5313V)을 주사기를 이용해 1분에 걸쳐 적가하였다(슬러리는 진한 적색이 되었음). 아주 약간의 온도 상승이 관찰되었다(17.5℃에서 18.8℃로). 이어서 플라스틱 깔때기를 이용해 1-[4-(메틸아미노)페닐]에타논 3(11.4 g, 3.9 당량, Sigma-Aldrich 로트 # 01129HHV)를 15분에 걸쳐 나누어 첨가하였다. 반응물을 용액을 상온(약 18-20℃)에서 교반하고, 공정 관리(in-process control, IPC)를 위해 HPLC로 주기적인 샘플링을 하였다. 반응 40시간 후, 추가의 디에틸아민을 주사기를 이용해 반응액에 첨가(0.16 g, 0.11 당량)하고, 상온에서 교반을 계속하였다. 64 시간 후, 가벼운 슬러리가 형성되었다. 추가의 디에틸아민을 주사기를 통해 반응물에 첨가(0.13g, 0.09 당량)하고, 상온에서 교반을 계속하였다. 반응 92시간 후, HPLC 분석에 의한 IPC는 반응 혼합물에 이사틴 1의 AUC가 2.1 % 존재하는 것을 나타내었다. 추가의 디에틸아민을 주사기를 통해 반응물에 첨가(0.07g, 0.05 당량)하여 총 0.55 당량의 염기에 대해 반응 시키고, 주말동안 상온에서 교반을 계속하였다. 총 7일 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축시키고(수조 온도 < 40℃), 고체 잔류물을 30℃의 디클로로메탄(450 mL)과 MeOH(50 mL)의 혼합물에 용해시키고 20 g의 실리카 겔에 흡착시켰다. RediSep 일회용 플래쉬 220g 실리카 겔 칼럼(catalog # 69-2203-422)을 사용하여 Combiflash Companion XL 시스템에서 정제하였다. 출발 물질 3의 용리는 디클로로메탄(약 20 칼럼 용적, 생성물 TK-202는 함량이 10 % 메탄올 디클로로메탄 용액으로 용리)으로 수행하였다. 생성물이 침전되기 시작한 분획을 함유하는 생성물을 두 개의 상이한 로트에서 합하고, 감압 하에 부분적으로 농축시켰다. 생성된 슬러리를 여과하고, 고형의 케이크를 MeOH로 세척하여 2개의 분획을 수득하고, 이를 상온, 고 진공하에서 24시간 동안 건조시킨 다음, 50℃에서 24 시간 동안 건조시켜 로트 # BIO-W-30-17 및 로트 # BIO-W-30-18를 수득하였다. 두 결정으로부터의 여액을 합하고, 용출을 위해 디클로로메탄부터 5% 메탄올 디클로로메탄 용액 까지의 구배를 사용하여 두 번째 크로마토그래피 정제(40g RediSep Gold 칼럼, 카탈로그 # 69-2203-347)를 수행하였다. 생성물 함유 분획(HPLC에 의한 99% AUC 이상의 순도)을 합하고, 생성물을 2시간에 걸쳐 침전시켰다. 고체를 여과하고, 메탄올로 세척한 뒤 고진공 하의 50℃에서 24시간 동안 건조하여 로트 # BIOW-30-19을 수득하였다. HPLC에 의한 95% AUC 순도의 생성물을 함유하는 분획의 두 번째 세트를 합하고, 고체를 여과하고, 디클로로메탄에 재용해시키고, 20% 메탄올을 첨가하여 밤새 침전시켰다. 침전된 R-202를 여과하고, 메탄올로 세척한 뒤, 고진공 하의 50℃에서 24시간 동안 건조하여 로트 # BIO-W-30-16을 수득하였다. 총 합계 중량 5.99g은 83%의 화합물 수율에 해당한다. 고체는 미색(off-white; 매우 연한 복숭아색에서 어두운 황갈색)을 나타내었다.
4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-(4-(메틸설포닐)페닐)-2-옥소에틸)인돌린-2-온 (실시예 1): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 3.28 (s, 3H), 3.81 (d, 1H, J=16 Hz), 4.42 (d, 1H, J=16Hz), 6.53(s, 1H), 6.92 (d, 1H, J=8Hz), 7.32 (d, 1H, J=8Hz), 8.05 (d, 2H, J=8Hz), 8.17 (d, 2H, J=8Hz), 11.04 (s, 1H).
3-(2-(4-(아지리딘-1-일)페닐)-2-옥소에틸)-4,7-디클로로-3-히드록시인돌린-2-온 (실시예 2):
Figure 112017044035581-pct00027
메탄올 15 mL 중의 4,7-디클로로인돌린-2,3-디온 (A) (300 mg, 1.39 mmol)에 1-(4-(아지리딘-1-닐)페닐)에타논 (B) (0.9 g, 5.5 mmol) 및 디에틸아민(2) 10 방울을 넣었다. 반응물을 50℃에서 24시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물은 플래쉬 칼럼크로마토그래피(0-5% Methanol/CH2Cl2)로 정제하였으며, 미색 고체를 얻었다.
3-(2-(4-(아지리딘-1-일)페닐)-2-옥소에틸)-4,7-디클로로-3-히드록시인돌린-2-온 (실시예 2): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 2.16 (s, 4H), 3.64 (d, 1H, J=16 Hz), 4.32 (d, 1H, J=16Hz), 6.41(s, 1H), 6.89(d, 1H, J=8Hz), 7.05 (d, 2H, J=8Hz), 7.30 (d, 1H, J=8Hz), 7.80 (d, 2H, J=8Hz), 10.95 (s, 1H).
4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-(4-이소프로필벤질)-2-옥소에틸)인돌린-2-온 (실시예 3): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ1.21 (d, 6H, J=4Hz), 2.95 (m, 1H), 3.69 (d, 1H, J=16 Hz), 4.39 (d, 1H, J=16Hz), 6.45(s, 1H), 6.90 (d, 1H, J=8Hz), 7.29 (d, 1H, J=8Hz), 7.38 (d, 2H, J=8Hz), 7.85 (d, 2H, J=8Hz), 10.98 (s, 1H).
4,7-디클로로-3-(1-(4-(디메틸아미노)페닐)-1-옥소프로판-2-일)-3-히드록시인돌린-3-온 (실시예 4): 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 1.48 (d, 3H, J=8 Hz), 3.00(s, 6H), 4.78 (m, 1H), 6.35 (s, 1H), 6.66 (d, 2H, J=8Hz), 6.76 (d, 1H, J=8Hz), 7.17 (d, 1H, J=8Hz), 7.69 (d, 2H, J=8Hz), 10.74 (s, 1H).
4,7-디클로로-3-(2-(4-시클로프로필페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온 (실시예 7):
Figure 112017044035581-pct00028
메탄올 15 mL중의 4,7-디클로로인돌린-2,3-디온 (A) (300 mg, 1.39 mmol)에 1-(4-(시클로프로필페닐)에타논 (B) (0.9 g, 5.5 mmol) 및 디에틸아민(2) 10 방울을 넣었다. 반응물을 50 ℃에서 24시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물은 플래쉬 칼럼크로마토그래피(0-5% Methanol/CH2Cl2)로 정제하였으며, 미색 고체를 얻었다. 4,7-디클로로-3-(2-(4-시클로프로필페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온 (실시예 7): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 0.76 (m, 2H), 1.06 (m, 2H), 2.0(m, 1H), 3.65 (d, 1H, J=16 Hz), 4.35 (d, 1H, J=16Hz), 6.43(s, 1H), 6.89(d, 1H, J=8Hz), 7.19 (d, 2H, J=8Hz), 7.30 (d, 1H, J=8Hz), 7.79 (d, 2H, J=8Hz), 10.97 (s, 1H).
3-(2-(4-(1H-피라졸-1-일)페닐)-2-옥소에틸)-4,7-디클로로-3-히드록시인돌린-2-온 (실시예 8): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 3.72 (d, 1H, J=16 Hz), 4.41 (d, 1H, J=16Hz), 6.47 (s, 1H), 6.62(d, 1H, J=4Hz), 6.90 (d, 1H, J=8Hz), 7.31 (d, 1H, J=8Hz), 7.84, (d, 1H, J=4H), 7.99(d, 2H, J=8Hz), 8.06 (d, 2H, J=8Hz),8.66 (d, 1H, J=4Hz), 10.98 (s, 1H).
4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-옥소-2-(4-(피롤리딘-1-일)페닐)에틸)인돌린-2-온 (실시예 10):
Figure 112017044035581-pct00029
메탄올 800 mL중의 4,7-디클로로인돌린-2,3-디온 (A) (12.5 g, 0.06 mol)에 1-(4-(피롤리딘1-일)페닐)에타논 (B) (45 g, 0.24 mol) 및 디에틸아민(2) 0.5 mL을 넣었다. 반응물을 상온에서 24시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물은 플래쉬 칼럼크로마토그래피(0-5% Methanol/CH2Cl2)로 정제하였으며, 13.5 g의 갈색 고체를 얻었다. 이를 다시 에틸아세테이트/헥산을 사용하는 플래쉬 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 11.5g의 미색(off-white) 고체를 수득하였다. 동일한 규모(scale)로 반응을 반복하여 다른 11.5g의 생성물을 얻었다.
두 배치의 생성물을 합치고, 메탄올로부터 재결정하여 20.5g의 미색 고체를 수득하였다. 4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-옥소-2-(4-(피롤리딘-1-일)페닐)에틸)인돌린-2-온 (실시예 10): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 1.96 (m, 4H), 3.30 (m, 4H), 3.65 (d, 1H, J=16 Hz), 4.29(d, 1H, J=16Hz), 6.34 (s, 1H), 6.53(d, 2H, J=8Hz), 6.88(d, 1H, J=8Hz), 7.28 (d, 1H, J=8Hz), 7.72 (d, 2H, J=8Hz), 10.97(s, 1H). 키랄 분리는 하기 조건하에서 수행하였다. 준비 방법은 다음을 이용하였다: RegisCell 칼럼 L: 250 mm, IS: 50 mm, 입자 크기: 5 ㎛; 이동상: 메탄올/CO2, 비율: 35/65, 검출 파장: 254 nm, 유속: 325 g/min, 공용매 유속 113.75 ml/min. 0.020 g/ml의 농도가 되도록 메탄올 1000 ml에 19.72 g을 용해시켰다. 총량 0.500 g/주입를 위해 25 mL을 주입하였다. 수율은 20℃에서 선광도 +247으로 (+):9.73 g 및 (-):9.26 g이었다.
4-(2-(4,7-디클로로-3-히드록시-2-옥소인돌린-3-일)아세틸)벤젠설폰아마이드 (실시예 11): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 3.78 (d, 1H, J=16 Hz), 4.41 (d, 1H, J=16Hz), 6.51(s, 1H), 6.90 (d, 1H, J=8Hz), 7.31 (d, 1H, J=8Hz), 7.56(s, 2H), 7.91 (d, 2H, J=8Hz), 8.11 (d, 2H, J=8Hz), 10.98 (s, 1H).
4,7-디클로로-3-(2-(3-플루오로-4-(피롤리딘-1-일)페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온 (실시예 12): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 1.91(m, 4H), 3.46 (m, 4H), 3.57 (d, 1H, J=16 Hz), 4.27 (d, 1H, J=16Hz), 6.36(s, 1H), 6.71(t, 1H, J=4Hz,J=8Hz), 7.29 (d, 1H, J=8Hz), 7.46 (d, 1H, J=8Hz), 7.61 (d, 1H, J=4Hz), 7.64 (d, 1H, J=8Hz), 11.01 (s, 1H).
3-(2-(4-(아제티딘-1-일)페닐)-2-옥소에틸)-4,7-디클로로-3-히드록시인돌린-2-온 (실시예 13):
Figure 112017044035581-pct00030
메탄올 15 mL중의 4,7-디클로로인돌린-2,3-디온 (A) (300 mg, 1.39 mmol)에 1-(4-(아제티딘-1-일)페닐)에탄 1-온 (B) (972 mg, 5.5 mmol) 및 디에틸아민(2) 몇 방울을 넣었다. 반응물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물은 플래쉬 칼럼크로마토그래피(0-5% Methanol/CH2Cl2)로 정제하였으며, 미색 고체를 얻었다. 3-(2-(4-(아제티딘-1-일)페닐)-2-옥소에틸)-4,7-디클로로-3-히드록시인돌린-2-온 (실시예 13): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 2.32 (m, 2H), 3.51 (d, 1H, J=16 Hz), 3.95(m, 4H), 4.30 (d, 1H, J=16Hz), 6.35(s, 1H), 6.36 (d, 2H, J=8Hz), 6.87 (d, 1H, J=8Hz), 7.28 (d, 1H, J=8Hz), 7.73 (d, 2H, J=8Hz), 10.89 (s, 1H).
4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-(4-메톡시시클로헥실)-2-옥소에틸)인돌린-2-온 (실시예 14): 미색 고체; 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 1.24 (m, 4H), 1.92 (m, 2H), 2.08 (m, 2H), 2.32 (m, 1H), 3.06 (m, 1H), 3.26 (s, 3H), 3.33 (d, 1H, J=16Hz), 3.69 (s, 1H), 3.70 (d, 1H, J=16 Hz), 6.91 (d, 1H, J=8Hz), 7.20 (d, 1H, J=8Hz), 7.61 (s, 1H).
4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-(4-메톡시바이시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-2-옥소에틸)인돌린-2-온 (실시예 15): 미색 고체; 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 1.59 (m, 12H), 3.16 (s, 3H), 3.22 (d, 1H, J=16Hz), 3.58 (s, 1H), 4.14 (d, 1H, J=16 Hz), 6.90 (d, 1H, J=8Hz), 7.23 (d, 1H, J=8Hz), 7.67 (s, 1H).
4,7-디클로로-3-(2-(4-(디메틸아미노)바이시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온 (실시예 16): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 1.59 (m, 12H), 2.5 (s, 3H), 3.18 (d, 1H, J=16Hz), 3.85(d, 1H, J=16 Hz), 6.31(s, 1H), 6.90 (d, 1H, J=8Hz), 7.30 (d, 1H, J=8Hz), 10.95 (s, 1H).
4,7-디클로로-3-(2-(4-시클로프로필-3-플루오로페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온 (실시예 17):
Figure 112017044035581-pct00031
메탄올 15 mL중의 4,7-디클로로인돌린-2,3-디온 (A) (261 mg, 1.21 mmol)에 1-(4-(시클로프로필-3-플루오로페닐)에타논 (B) (280 mg, 1.57 mmol) 및 디에틸아민(2) 10 방울을 넣었다. 반응물을 50 ℃에서 24시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼크로마토그래피(0-5% Methanol/CH2Cl2)로 정제하여 미색 고체를 얻었다.
4,7-디클로로-3-(2-(4-시클로프로필-3-플루오로페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온 (실시예 17): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 0.83 (m, 2H), 1.08 (m, 2H), 2.11(m, 1H), 3.68 (d, 1H, J=16 Hz), 4.34 (d, 1H, J=16Hz), 6.43(s, 1H), 6.90(d, 1H, J=8Hz), 7.11 (m, 1H), 7.30 (d, 1H, J=8Hz), 7.60(d, 1H, J=8Hz),7.68 (d, 1H, J=8Hz), 10.96 (s, 1H). 키랄 분리는 전술한 방법과 실질적으로 유사한 방법으로 수행하였다. LC 스크리닝은 칼럼: AD-H, 250 mm x 4.6 mm, 5㎛, 헥산/에탄올 (65/35), 4.5 ml/min, 주입량: 10.0 ㎕, 압력 102.9 bar로 수행하였다. Peak 1: 체류 시간: 5.40 분, 폭(width): 0.171 분, 면적(area): 4502.21, 면적%: 50.08. Peak 2: 체류 시간: 7.23 분, 폭: 0.239 분, 면적: 4488.43, 면적%: 49.92.
4,7-디클로로-3-(2-(4-시클로프로필-2-플루오로페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온 (실시예 18):
Figure 112017044035581-pct00032
메탄올 15 mL중의 4,7-디클로로인돌린-2,3-디온 (A) (261 mg, 1.21 mmol)에 1-(4-(시클로프로필-2-플루오로페닐)에타논 (B) (280 mg, 1.57 mmol) 및 디에틸아민(2) 10 방울을 넣었다. 반응물을 50℃에서 24시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 플래쉬 칼럼크로마토그래피(0-5% Methanol/CH2Cl2)로 정제하여 미색 고체를 얻었다. 4,7-디클로로-3-(2-(4-시클로프로필-2-플루오로페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온 (실시예 18): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 0.82 (m, 2H), 1.07 (m, 2H), 2.01(m, 1H), 3.66 (d, 1H, J=16 Hz), 4.26 (d, 1H, J=16Hz), 6.44(s, 1H), 6.91(d, 1H, J=8Hz), 7.01 (m, 2H), 7.31 (d, 1H, J=8Hz), 7.57(m, 1H), 10.96 (s, 1H). 키랄 분리는 전술한 방법과 실질적으로 유사한 방법으로 수행하였다. LC 스크리닝은 칼럼: RegisCell, 250 mm x 4.6 mm, 5㎛, 헥산/IPA (80/20), 1.5 ml/min, 주입량: 2.0 ㎕, 압력 51.5 bar로 수행하였다. Peak 1: 체류 시간: 5.16 분, 폭(width): 0.238 분, 면적(area): 3716.20, 면적%: 49.78. Peak 2: 체류 시간: 6.49 분, 폭: 0.324 분, 면적: 3749.55, 면적 %: 50.22.
4-클로로-7-플루오로-3-히드록시-3-(2-(4-메톡시페닐)-2-옥소에틸)인돌린-2-온 (실시예 19): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 3.63 (d, 1H, J=16 Hz), 3.84 (s, 3H), 4.36 (d, 1H, J=16Hz), 6.38 (s, 1H), 6.88(d, 1H, J=8Hz), 7.02 (d, 2H, J=8Hz), 7.16 (m, 1H), 7.89(d, 2H, J=8Hz), 11.01 (s, 1H).
4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-(4-모폴리노페닐)-2-옥소에틸)인돌린-2-온 (실시예 20): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) d 3.28 (m, 4H), 3.53 (d, 1H, J=16 Hz), 3.71 (m, 4H), 4.33 (d, 1H, J=16Hz), 6.37 (s, 1H), 6.87 (d, 1H, J=8Hz), 6.97 (d, 2H, J=8Hz), 7.30 (d, 1H, J=8Hz), 7.77 (d, 2H, J=8Hz), 10.95 (s, 1H).
4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-옥소-2-(피리딘-4-일)에틸)인돌린-2-온 (실시예 21): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 3.78 (d, 1H, J=16 Hz), 4.39 (d, 1H, J=16Hz), 6.53 (s, 1H), 6.92 (d, 1H, J=8Hz), 7.32 (d, 1H, J=8Hz), 7.79 (d, 2H, J=4Hz), 8.80 (d, 2H, J=4Hz), 11.03 (s, 1H).
4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-옥소-2-(피리딘-3-일)에틸)인돌린-2-온 (실시예 22): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 3.78 (d, 1H, J=16 Hz), 4.39 (d, 1H, J=16Hz), 6.50 (s, 1H), 6.90 (d, 1H, J=8Hz), 7.30 (d, 1H, J=8Hz), 7.57 (m, 1H), 8.28 (d, 1H, J=4Hz), 8.80 (d, 1H, J=4Hz), 9.09 (s, 1H), 11.03 (s, 1H).
4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-옥소-2-(피리딘-2-일)에틸)인돌린-2-온 (실시예 23): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 3.78 (d, 1H, J=16 Hz), 4.68(d, 1H, J=16Hz), 6.50 (s, 1H), 6.90 (d, 1H, J=8Hz), 7.30 (d, 1H, J=8Hz), 7.70 (d, 1H,J=4Hz), 7.81 (d, 1H, J=4Hz), 7.98 (m, 1H), 8.76 (s, 1H), 11.01 (s, 1H).
4-(2-(4,7-디클로로-3-히드록시-2-옥소인돌린-3-일)아세틸)벤즈아마이드 (실시예 24): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 3.74 (d, 1H, J=16 Hz), 4.42 (d, 1H, J=16Hz), 6.49(s, 1H), 6.92 (d, 1H, J=8Hz), 7.31 (d, 1H, J=8Hz), 7.57 (s, 1H), 7.95 (d, 2H, J=8Hz), 7.97 (d, 2H, J=8Hz), 8.10 (s, 1H), 11.01 (s, 1H).
4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-(4-히드록시페닐)-2-옥소에틸)인돌린-2-온 (실시예 25): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 3.60 (d, 1H, J=16 Hz), 4.30 (d, 1H, J=16Hz), 6.39 (s, 1H), 6.82 (d, 2H, J=8Hz), 6.90 (d, 1H, J=8Hz), 7.30 (d, 1H, J=8Hz), 7.80 (d, 2H, J=8Hz), 10.45(s, 1H), 10.93 (s, 1H).
4,7-디클로로-3-(2-(3,4-디플루오로페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온 (실시예 26): 미색 고체; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 3.70 (d, 1H, J=16 Hz), 4.37 (d, 1H, J=16Hz), 6.48(s, 1H), 6.91(d, 1H, J=8Hz), 7.30 (d, 1H, J=8Hz), 7.56 (m, 1H), 7.96 (m, 1H), 8.01 (m, 1H), 11.01 (s, 1H).
화합물의 생물학적 활성
표 2에 열거된 특정 화합물의 생물학적 활성을 결정하였다.
화합물(선광도) 구조 화합물명
1 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00033
 4,7-디클로로-3-히드록시-3-[2-(4-메톡시페닐-2-옥소에틸)]-1,3-디하이드로인돌-2-온
2 (-)
Figure 112022062904672-pct00034
 4,7-디클로로-3-히드록시-3-[2-(4-메톡시페닐-2-옥소에틸)]-1,3-디하이드로인돌-2-온
3 (+)
Figure 112022062904672-pct00035
 4,7-디클로로-3-히드록시-3-[2-(4-메톡시페닐-2-옥소에틸)]-1,3-디하이드로인돌-2-온
4 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00036
 4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-(4-(메틸설포닐)페닐)-2-옥소에틸)인돌린-2-온
5 (-)
Figure 112022062904672-pct00037
 4,7-디클로로-3-히드록시-3-[2-[4-(메틸아미노)페닐]-2-옥소에틸]-1H-인돌-2-온
6 (+)
Figure 112022062904672-pct00038
 4,7-디클로로-3-히드록시-3-[2-[4-(메틸아미노)페닐]-2-옥소에틸]-1H-인돌-2-온
7 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00039
 4,7-디클로로-3-히드록시-3-[2-[4-(메틸아미노)페닐]-2-옥소에틸]-1H-인돌-2-온
8 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00040
 3-(2-(4-(아지리딘-1-일)페닐)-2-옥소에틸)-4,7-디클로로-3-히드록시인돌린-2-온
9 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00041
 4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-(4-이소프로필페닐)-2-옥소에틸)인돌린-2-온
10 (+)
Figure 112022062904672-pct00042
 4,7-디클로로-3-(1-(4-(디메틸아미노)페닐)-1-옥소프로판-2-일)-3-히드록시인돌린-2-온
11 (-)
Figure 112022062904672-pct00043
 4,7-디클로로-3-(1-(4-(디메틸아미노)페닐)-1-옥소프로판-2-일)-3-히드록시인돌린-2-온
12 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00044
 4,7-디클로로-3-(1-(4-(디메틸아미노)페닐)-1-옥소프로판-2-일)-3-히드록시인돌린-2-온
13 (+)
Figure 112022062904672-pct00045
 4,7-디클로로-3-(2-(4-시클로프로필페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온
14 (-)
Figure 112022062904672-pct00046
 4,7-디클로로-3-(2-(4-시클로프로필페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온
15 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00047
 4,7-디클로로-3-(2-(4-시클로프로필페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온
16 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00048
 3-(2-(4-(1H-피라졸-1-일)페닐)-2-옥소에틸)-4,7-디클로로-3-히드록시인돌린-2-온
17 (+)
Figure 112022062904672-pct00049
 4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-옥소-2-(4-(피롤리딘-1-일)페닐)에틸)인돌린-2-온
18 (-)
Figure 112022062904672-pct00050
 4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-옥소-2-(4-(피롤리딘-1-일)페닐)에틸)인돌린-2-온
19 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00051
 4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-옥소-2-(4-(피롤리딘-1-일)페닐)에틸)인돌린-2-온
20 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00052
 4-(2-(4,7-디클로로-3-히드록시-2-옥소인돌린-3-일)아세틸)벤젠설폰아마이드
21 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00053
 4,7-디클로로-3-(2-(3-플루오로-4-(피롤리딘-1-일)페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온
22 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00054
 3-(2-(4-(아제티딘-1-일)페닐)-2-옥소에틸)-4,7-디클로로-3-히드록시인돌린-2-온
23 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00055
 4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-(4-메톡시시클로헥실)-2-옥소에틸)인돌린-2-온
24 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00056
 4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-(4-메톡시바이시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-2-옥소에틸)인돌린-2-온
25 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00057
 4,7-디클로로-3-(2-(4-(디메틸아미노)바이시클로[2.2.2]옥탄-1-일)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온
26 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00058
 4,7-디클로로-3-(2-(4-시클로프로필-3-플루오로페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온
27 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00059
 4,7-디클로로-3-(2-(4-시클로프로필-2-플루오로페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온
27 (-)
Figure 112022062904672-pct00060
 4,7-디클로로-3-(2-(4-시클로프로필-2-플루오로페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온
27 (+)
Figure 112022062904672-pct00061
 4,7-디클로로-3-(2-(4-시클로프로필-2-플루오로페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온
28 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00062
 4-클로로-7-플루오로-3-히드록시-3-(2-(4-메톡시페닐)-2-옥소에틸)인돌린-2-온
29 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00063
 4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-(4-모폴리노페닐)-2-옥소에틸)인돌린-2-온
30 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00064
 4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-옥소-2-(피리딘-4-일)에틸)인돌린-2-온
31 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00065
 4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-옥소-2-(피리딘-3-일)에틸)인돌린-2-온
32 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00066
 4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-옥소-2-(피리딘-2-일)에틸)인돌린-2-온
33 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00067
 4-(2-(4,7-디클로로-3-히드록시-2-옥소인돌린-3-일)아세틸)벤즈아마이드
34 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00068
 4,7-디클로로-3-히드록시-3-(2-(4-히드록시페닐)-2-옥소에틸)인돌린-2-온
35 (+/-)
Figure 112022062904672-pct00069
 4,7-디클로로-3-(2-(3,4-디플루오로페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온
36 (-)
Figure 112022062904672-pct00070
 4,7-디클로로-3-(2-(4-시클로프로필-3-플루오로페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온
37 (+)
Figure 112022062904672-pct00071
 4,7-디클로로-3-(2-(4-시클로프로필-3-플루오로페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온
38 (-)
Figure 112022062904672-pct00072
 4,7-디클로로-3-(2-(4-시클로프로필-2-플루오로페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온
39 (+)
Figure 112022062904672-pct00073
 4,7-디클로로-3-(2-(4-시클로프로필-2-플루오로페닐)-2-옥소에틸)-3-히드록시인돌린-2-온
화합물의 활성
CCK-8 키트 (Sigma-Aldrich; St Louis, MO)를 이용한 개질된 테트라졸륨 염 분석으로 인간 종양 세포 성장의 억제를 측정하였다. 종양 세포(웰 당 5000-7500)를 96 웰 플레이트에 첨가하고, 4-5시간 동안 부착시켰다. 화합물을 연속적으로 희석시키고 0.02 내지 5 μM로 농도가 3배로 되도록 첨가하였다. DMSO는 운송 수단 컨트롤로서 포함되었다. 세포를 화합물의 존재하에서 3일간 배양하였다. 배양 후, CCK-8 시약을 각 웰에 첨가하고 2-4시간 동안 배양하였다. 생존 세포를 450 nm 파장에서 분광광도계로 정량하였다. 각 샘플의 생존률은 다음과 같이 A450 값으로부터 계산하였다: % 생존률 = (A450 nm 샘플 / A450 nm DMSO-처리 세포×100). IC50는 세포 생존력의 50% 억제를 야기하는 농도로 정의된다. 특정 화합물의 IC50 활성을 SKES 세포(유잉 육종 세포주)를 사용하여 측정하였다. 결과는 표 3에 나타내었다. 표 4에 열거된 세포주를 사용하여 특정 화합물의 IC50 활성을 결정하였다.
화합물 IC50 화합물 IC50 화합물 IC50 화합물 IC50 화합물 IC50
1 B 9 A 17 A 25 A 33 A
2 B 10 A 18 B 26 B 34 A
3 A 11 B 19 C 27 B 35 A
4 A 12 C 20 A 28 A 36 C
5 C 13 A 21 A 29 A 37 C
6 C 14 B 22 B 30 A 38 C
7 C 15 C 23 A 31 A 39 C
8 B 16 A 24 A 32 A
A는 IC50 > 5 μM; B는 IC50 < 5 μM; C는 측정되지 않음
세포주 암종류 ETS 유전자군 전위
SKES ES EWS-FLI1 Type 2
A4573 ES EWS-FLI1 Type 3
TC71 ES EWS-FLI1 Type 1
LNCap Prostate rearranged ETV1
PC3 Prostate none
MDA-MB-231 Breast increased ETV1
MCF7 Breast none
BxPC3 Pancreas increased FLI1
PANC1 Pancreas none
특정 화합물의 IC50에 대한 결과는 다음과 같이 요약된다: 화합물 1: SKES: C A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 2: SKES: B; A4573: B; TC71: B; LNCap: B; PC3: A; MDA-MB-231: B; MCF7: A; BxPC3: B; 및 PANC1: A. 화합물 3: SKES: C; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 4: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 5: SKES: C; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 6: SKES: C; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 7: SKES: C; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 8: SKES: B; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 9: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 10: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 11: SKES: B; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 12: SKES: C; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 13: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 14: SKES: B; A4573: B; TC71: B; LNCap: B; PC3: A; MDA-MB-231: B; MCF7: A; BxPC3: B; 및 PANC1: A. 화합물 15: SKES: C; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 16: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 17: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 18: SKES: B; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 19: SKES: C; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 20: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 21: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 22: SKES: B; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 23: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 24: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 25: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 26: SKES: B; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 27: SKES: B; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 28: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 29: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 30: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 31: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 32: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 33: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 34: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 35: SKES: A; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 36: SKES: C; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 37: SKES: C; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 38: SKES: C; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. 화합물 39: SKES: C; A4573: C; TC71: C; LNCap: C; PC3: C; MDA-MB-231: C; MCF7: C; BxPC3: C; 및 PANC1: C. A는 IC50 > 5 μM; B는 IC50 < 5 μM; C는 측정되지 않은 것이다. 이종 이식 연구에서, A4573 종양 세포를 마우스에 이식하였다. 상기 마우스를 특정 화합물(경구로 하루 두번)로 처리하였다. A4573 종양의 평균 부피를 여러 번 측정하였다. 운송 수단 대조군에 비해 화합물 14는 100 mg/kg bid에서 57%의 종양 성장 억제(TGI)를 보였으며, 화합물 2는 200 mg/kg bid에서 TGI를 나타내지 않았다. 유사한 랫트 이종 이식 연구에서, 각각 운송 수단 대조군과 비교하여, 화합물 2는 87 % TGI를 나타냈으며, 화합물 14는 53% TGI를 나타내었다.
특정 화합물의 대사 활성
특정 화합물의 대사 활성을 NADPH 재생 시스템 및 표준 프로토콜을 이용하여 간 마이크로솜으로 분석하였다. 간략하게, 화합물을 분리된 인간, 랫트, 개 또는 마우스의 간 마이크로솜과 함께 배양하였다. NADPH 재생시스템(β-니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오티드 포스페이트; 이소시트르산; 및 이소시트르산 탈수소효소)을 첨가하여 96-웰 플레이트에서 반응을 개시하였다. 반응물을 차가운 아크릴로니트릴로 5, 10, 20, 30 및 60 분간 퀸칭(quenching)시키고, 진탕한 뒤, 4000 rpm으로 20분간 원심분리하였다. 검출된 분석용 화합물을 함유하는 상층액을 LC: Shimadzu LC 20-AD, MS: API4000, 오토샘플러: CTC PAL을 갖는 LC/MS/MS로 분석하였고, 사용된 칼럼은 CHIRALPAK AS-RH 150*4.6 mm, 5 μm Part No:ASRHCD-KK008 및 Ace 5 Phenyl, 50 × 2.1 mm , Part No.ACE-125-0502를 포함하였다. 데이터 분석: T1 /2 및 CL은 1차 반응 속도론(first order kinetics)의 방정식을 사용하여 계산하였다: Ct = C0*e-kt; Ct = (1/2)*C0; t1 /2 = In2/k = 0.693/k; CL = Vd* k; 및 Vd = 2 mL/mg. 표 5-8은 결과를 요약한 것이다. 표 5-8에서 R2는 운동 상수 결정을 위한 선형 회기의 상관계수이고; T1/2는 반감기이며, NCF는 보조인자 없음(no cofactor)이다.
인간 간 마이크로솜
화합물 R2 T1 /2 (min) 남은양
(T=60 분)		 남은양
(NCF=60 분)
2 0.9771 20.2 12.7% 112.1%
3 0.7345 >145 77.1% 112.6%
18 0.9869 23.0 17.8% 99.4%
13 0.9268 103.4 68.5% 105.1%
14 0.9901 27.7 22.8% 104.5%
37 0.9659 85.6 62.8% 103.4%
36 0.9972 23.8 17.9% 104.0%
39 0.9910 79.7 60.4% 100.0%
38 0.9970 18.7 11.2% 99.5%
테스토스테론 0.9928 18.9 10.9% 88.1%
디클로페낙 0.9855 7.3 0.3% 77.8%
프로파페논 0.9315 6.8 0.2% 92.5%92.5%
간 중량: 22 g/kg 인간의 상대적인 간 중량
랫트 간 마이크로솜
화합물 R2 T1 /2 (min) 남은양
(T=60 분)		 남은양
(NCF=60 분)
2 0.9991 3.8 2.3% 92.7%
3 0.9989 7.1 2.7% 92.6%
18 0.9995 1.3 0.0% 88.5%
13 0.9885 3.6 0.2% 97.0%
14 0.9971 2.8 0.1% 97.6%
37 0.9968 3.5 0.3% 95.4%
36 0.9943 2.6 0.2% 97.8%
39 0.9849 3.0 0.2% 90.5%
38 0.9137 2.9 0.2% 94.7%
테스토스테론 1.0000 1.0 0.0% 87.3%
디클로페낙 0.9985 13.3 4.1% 94.1%
프로파페논 0.9926 2.0 0.0% 89.2%
간 중량: 40 g/kg 랫트의 상대적인 간 중량
마우스 간 마이크로솜
화합물 R2 T1 /2 (min) 남은양
(T=60 분)		 남은양
(NCF=60 분)
2 0.9919 16.2 7.7% 90.2%
3 0.9902 7.4 0.4% 97.5%
18 0.9820 9.6 1.6% 88.4%
13 0.9780 26.6 19.6% 85.6%
14 0.9474 23.1 19.7% 102.0%
37 0.9871 20.7 12.8% 88.6%
36 0.9904 11.9 3.0% 89.6%
39 0.9917 15.4 6.4% 89.7%
38 0.9968 6.8 0.0% 93.0%
테스토스테론 0.9992 3.3 0.0% 83.6%
디클로페낙 0.9887 39.2 32.6% 88.1%
프로파페논 0.9891 2.0 0.0% 91.7%
간 중량: 88 g/kg 마우스의 상대적인 간 중량
개 간 마이크로솜
화합물 R2 T1 /2 (min) 남은양
(T=60 분)		 남은양
(NCF=60 분)
2 0.9911 30.3 24.6% 100.6%
3 0.9977 21.3 14.0% 100.1%
18 0.9932 24.1 18.7% 92.9%
13 0.9935 8.4 0.7% 98.4%
14 0.9932 40.8 36.2% 97.1%
37 0.9855 9.1 1.0% 94.1%
36 0.9908 35.0 29.9% 93.1%
39 0.9857 2.4 0.1% 96.3%
38 0.9961 33.5 28.3% 97.6%
Testosterone 0.9900 19.8 12.5% 91.0%
Diclofenac 0.7395 >145 75.5% 89.6%
Propafenone 0.9765 5.2 0.1% 89.6%
간 중량: 32g/kg 개의 상대적인 간 중량
특정 화합물의 대사 안정성
인간 간 마이크로솜 및 인간 간세포를 이용하여 특정 화합물에 대한 반감기 및 제거율을 분석하였다. 인간 마이크로솜(또는 인간 간세포) 존재 하에 5% CO2, 95% 습도의 배양기에 화합물을 배양하여 반응을 시작하였다. 각 시점(0, 5, 15, 30, 60, 90 분)에서 반응을 멈추고, 와류 및 원심분리하였다. 상등액은 LC/MS/MS 분석을 할때까지 동결시켰다. 인간 간 마이크로솜 및 인간 간세포에 대한 결과를 각각 표 9 및 10에 요약하였다.
화합물 % 잔류량 반감기(분) CLhep (mL/min/kg)*
1 5 10.3 17.28
12 18 18 15.69
7 49 >45 ~11.54
*간의 hepatic clearance where blood flow = 20 mL/min/kg
화합물 % 잔류량 반감기(분) CLhep (mL/min/kg)*
1 48 226 8.7
12 56 >240 <8.7
7 100 >240 <8.7
*hepatic clearance where blood flow = 20 mL/min/kg
또 다른 연구에서는 다양한 종의 간 세포에 대한 화합물의 대사를 조사하였다. 간세포를 화합물과 접촉시키고, 화합물의 반감기를 측정하였다. 결과는 표 11에 요약하였다.
화합물의 반감기 (분)
화합물 1 18 14 7-에톡시코우마린 7-히드록시코우마린
마우스 30.9 60.0 62.79 37.86 15.82
랫트 14.2 18.8 27.41 38.24 12.41
개 16.7 30.6 20.26 9.14 9.38
인간 45.5 63.6 75.87 45.29 20.78
인간 간 마이크로솜(HLM) 및 인간 간세포를 사용하여 특정 화합물을 분석하고, 대사 산물을 검출하였다. 간략하게, 하나의 TA 농도(예를 들어 1μM)에서 대사안정성을 2회 검사하였다. 시간 경과에 따른 테스트 물질의 손실은 0, 5, 10, 20, 30 및 45 분에서의 NADPH가 포함되거나 포함되지 않은 HLM(0.5 mg / mL) 및 0, 15, 30, 60, 120 및 240 분에서의 간세포(0.5 x 106 cells/mL)로 평가하였다. 양성대조군(디클로페낙)과 음성대조군(끓인 HLM 또는 열로 불활성화시킨 간세포)을 포함하였다. 디클로페낙은 테스트 물질과 유사한 배양 시간에서 모니터링하였고, 음성대조군은 HLM은 0 및 45분에, 간세포는 0 및 240 분에 측정하였다. 배양물을 저장하고, LC/MS/MS를 사용하여 대사산물을 식별하였다. 상위 분석물/내부 표준 피크 면적비율은 시간=0 피크 영역 비율 값을 100%로 사용하여 남은 약물의 비율로 변환하였다. 배양 시간 관계(-k) 대 로그 백분율로부터의 선형 회기의 기울기는 선형 회기 분석에 의해 결정되었다. 개별 로그 백분율 잔여 시간 프로파일로부터 평균 반감기 및 내적 청소율(intrinsic clearance)이 보고되었다. UHPLC-HRMS 또는 UHPLC-MS/MS 실험은 가능한 일반적인 단편 이온을 검사하기 위해 실제 테스트 물질로 실시하였다. 예비 대사 물질 확인은 0, 10, 20 및 45분에서의 분취량 및 0, 60, 120 및 240 분에서의 간 세포 배양 분취량으로부터 선택된 마이크로솜 샘플을 사용하였다. 대사 산물은 질량 분석 피크 면적을 기준으로 요약하였다. 표 12, 3 및 14에 각각 화합물 1, 12 및 7에 대한 결과를 요약하였다.
구분 [M+H] (m/z) 체류시간(분) 구조 인간 간
마이크로솜		 인간
간 세포
상위 화합물 366.0292 2.52
Figure 112017044035581-pct00074
 d d
탈메틸화+글루쿠로니드화 528.0482 1.97
Figure 112017044035581-pct00075
 nd d
산화 382.0249 2.24
Figure 112017044035581-pct00076
 d nd
탈메틸화 352.0141 2.27
Figure 112017044035581-pct00077
 d d
d: 검출됨, nd: 검출되지 않음
구분 [M+H] (m/z) 체류시간(분) 구조 인간 간
마이크로솜		 인간
간 세포
상위 화합물 379.063 2.55
Figure 112017044035581-pct00078
 d d
탈메틸화+산화 381.0406 2.13
Figure 112017044035581-pct00079
 d nd
디-탈메틸화 351.0305 2.25
Figure 112017044035581-pct00080
 d d
산화 395.0552 2.28
Figure 112017044035581-pct00081
 d nd
d: 검출됨, nd: 검출되지 않음
구분 [M+H] (m/z) 체류시간 (분) 구조 인간 간
마이크로솜		 인간
간 세포
상위 화합물 365.0458 2.40
Figure 112017044035581-pct00082
 d d
산화 381.0402 2.21
Figure 112017044035581-pct00083
 d nd
탈메틸화 351.0301 2.25
Figure 112017044035581-pct00084
 d d
d: 검출됨, nd: 검출되지 않음
특정 화합물의 약동학
특정 약물동력학 변수를 정맥 내 및 경구 투여를 통한 생체 내 특정 화합물에 의해 결정하였다. 간단히 설명하면, 화합물을 제형화하고, IV 볼러스, 연속 IV 주입 또는 경구 투여를 사용하여 투여하였다. 24 시간 동안 여러 지점에서 혈액을 채취하였으며, 혈장으로 가공하였다. 혈장은 LC/MS/MS를 사용하여 상위 화합물을 대상으로 분석하였다. 특정 화합물에 대한 특정 변수는 두 번에 걸쳐 얻었다. 표 15는 마우스 또는 개에서 연속 주입 연구를 통한 화합물 14의 결과를 요약한 것이다. 표 16은 BALB/c 마우스 및 스프라그 다울리 랫트(Sprague-Dawley rat)에서의 연구 결과를 요약한 것이다.
투여량
(mg/kg/day)		 T1 /2 (h) kelim (1/h) Vd (mL/kg) CL (mL/h/kg) MRT24 -inf (h) Css(3-24h)
(ng/mL) μM
24# 0.824 0.846 3457 2922 1.11 344 0.91
96# 1.00 0.703 4231 2976 1.73 1376 3.7
10^ 1.9 0.4 5643 2016 2.5 210 0.56
25^ 1.7 0.4 5663 2238 2.2 466 1.24
#: 랫트; ^: 개
화합물 투여량 (mg/kg), 방법 운송 수단 Cmax (ng/mL) AUC h*(ng/mL) %F T1 /2 (hr) Tmax (hr)
2 5, IV 캡티솔 9381 1991 0.033
2 20, po 라브라졸/테트라글리콜# 2243 3890 49 1
2 20, po 라브라졸/테트라글리콜/물* 2835 4574 57 1
2 5, IV 캡티솔 9381 1991 　 nd 0.033
2 20, po 라브라졸/테트라글리콜# 2243 3896 40 1.6 1
2 20, po 라브라졸/테트라글리콜/물* 2835 4574 47 1.5 1
11 5, IV 캡티솔 12362 2102 0.033
11 20, po 라브라졸/테트라글리콜# 1673 3783 45 1
11 20, po 라브라졸/테트라글리콜/물* 1168 3828 46 0.5
11 5, IV 캡티솔 12362 2871 　 0.8 0.033
11 20, po 라브라졸/테트라글리콜# 1673 3787 34 1 1
11 20, po 라브라졸/테트라글리콜/물* 1168 3832 34 0.8 0.5
5 5, IV 캡티솔 12993 2324 0.033
5 20, po 라브라졸/테트라글리콜# 2179 5192 56 1
5 20, po 라브라졸/테트라글리콜/물* 1569 4354 47 1
5 5, IV 캡티솔 12993 3207 　 1.7 0.033
5 20, po 라브라졸/테트라글리콜# 2179 4939 47 3.1 0.5
5 20, po 라브라졸/테트라글리콜/물* 1569 4081 39 2.8 0.5
14 5, IV 캡티솔 10891 4131 0.8 0.03
14 20, po 라브라졸/테트라글리콜# nd nd nd nd nd
14 25, po 라브라졸/테트라글리콜/물* 2772 13152 64 3.1 1
14 10, IV 캡티솔 39800 6059 1.43 0.03
14 100, po 라브라졸/테트라글리콜 32999 146167 100 7.71 2
14 100, po PEG-400 / 트윈(tween) 25967 92219 100 3.83 0
18 5, IV 캡티솔 14343 3738 　 0.8 0.033
18 20, po 라브라졸/테트라글리콜# 3217 7497 50 1.4 1
18 20, po 라브라졸/테트라글리콜/물* 6422 11029 74 0.9 1
# 라브라졸/테트라글리콜: 9:1
* 라브라졸/테트라글리콜:물 72:8:20
nd: 측정되지 않음
변수는 BALB/c 마우스 또는 스프라그 다울리 랫트에서 결정함
본 개시된 내용이 도면 및 전술한 설명에 상세하게 도시되고 기술되었지만, 이러한 예시 및 설명은 예시적이거나 또는 모범적인 것으로 간주되어야 하며, 이에 제한되지는 않는다. 본원은 개시된 실시예에 한정되지는 않는다. 개시된 실시 형태에 대한 변형은 도면, 개시된 내용 및 첨부된 청구 범위의 연구로부터 청구된 개시 내용을 실시하는 통상의 기술자에게 이해될 수 있고, 영향받을 수 있다.
본원에 인용된 모든 문헌은 그 전체가 참고 문헌으로 포함된다. 본원에 포함된 간행물 및 특허 또는 특허 출원이 포함된 범위가 명세서에 포함된 개시 내용과 모순되는 경우, 명세서는 그러한 모순되는 자료를 대체하거나 우선하도록 의도된다.
달리 정의되지 않는 한, 모든 용어(기술 및 과학 용어 포함)는 통상의 기술자에게 통상적이고 관습적인 의미를 부여해야 하며, 여기서, 명시적으로 정의되지 않는 한, 특별하거나 맞춤화된 의미로 제한하지 않아야 한다. 본원에 개시된 특정 특징 또는 실시 형태들을 기술할 때, 특정 용어의 사용은 이 용어가 본원에 개시된 특징들 또는 그 용어와 관련이 있는 개시된 내용의 측면을 포함하도록 제한되는 것으로 재정의되는 것을 의미하지 않는다.
범위의 값이 제공되는 경우, 범위의 상한과 하한 사이의 각각의 개재된 값이 실시예 내에 포함되는 것으로 이해된다.
본원에서 사용된 용어 및 어구, 그리고 이들의 변형은, 특히 첨부된 청구 범위에서, 달리 명시적으로 언급되지 않는 한 제한되는 것이 아니라 제한이 없는 것으로 해석되어야 한다. 상기의 예로서, 용어 '포함하는(including)'은 '제한없이 포함하는', '포함되나, 이에 국한되지 않는' 또는 이와 유사한 것을 의미하는 것으로 해석되어야 하며; 본원에서 사용된 용어 '포함하는(comprising)'은 '포함하는(including)', '함유하는(containing)' 또는 '특징 지어지는(characterized by)'과 동의어이며, 포괄적이거나 제한이 없고, 추가의 인용되지 않는 요소 또는 방법 단계를 배제하지 않으며; 용어 '갖는(having)'은 '적어도 갖는' 것으로 해석되어야 하며; 용어 '포함하는(includes)'은 '포함되지만, 이에 국한되지는 않는' 것으로 해석되어야 하고, 용어 '실시예'는 논의의 항목의 예시적인 예를 제공하기 위해서 사용된 것일 뿐, 그 전부 또는 일부로 제한하고자 함이 아니며; '알려진', '보통', '표준' 및 이와 유사한 의미의 용어와 같은 형용사는 설명된 항목을 주어진 기간 또는 주어진 시간에 사용 가능한 항목으로 제한하는 것으로 해석되어서는 안되며, 대신, 현재 또는 미래에 언제든지 이용 가능하거나 알려질 수 있는 알려진, 보통의 또는 표준 기술을 포괄하도록 해석되어야 하고; 용어 '바람직한(preferably, preferred, desired 또는 desirable)'과 같은 용어를 사용하거나 유사한 의미의 단어를 사용하는 것은 특정 특징이 본원의 구조 또는 기능에 결정적이거나, 본질적이거나 또는 훨씬 중요하다는 것을 의미하는 것으로 이해되어서는 안되며, 단지 본원의 특정 실시예에서 이용될 수 있고, 이용되지 않을 수도 있는 대안적이거나 또는 부가적인 특징들을 강조하기 위한 것이다. 마찬가지로 '및'으로 연결된 항목은 그 항목의 각각 하나하나가 그 그룹에 존재해야한다는 것을 의미하는 것으로 해석되어서는 안되며, 달리 명시하지 않는 한 '및/또는'으로 해석되어야 한다. 유사하게 '또는' 접속사와 연결된 항목 그룹은 해당 그룹간에 상호 배타성을 요구하는 것으로 해석되어서는 안되며, 달리 명시하지 않는 한 '및/또는'으로 해석되어야 한다.
본원에서 실질적으로 임의의 복수 및/또는 단수의 사용과 관련하여, 통상의 기술자는 문맥 및/또는 적용이 적절할 때, 복수형으로부터 단수형 및/또는 단수형으로부터 복수형으로 번역할 수 있다. 다양한 단수/복수순열은 명료성을 위해 본원에서 명백하게 설명될 수 있다. 부정관사 "a" 또는 "an"은 복수를 배제하지 않는다. 특정 측정값이 서로 다른 종속항에 인용되어 있다는 단순한 사실은 이러한 측정값의 조합을 활용할 수 없다는 것을 의미하지 않는다. 청구 범위 내의 임의의 참조 부호는 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
특정 수의 도입된 청구의 기재가 의도되는 경우, 그러한 의도는 청구항에서 명시적으로 언급될 것이고, 그러한 기재가 없는 한, 그러한 의도는 존재하지 않는 다는 것이 통상의 기술자에게 의해 더욱 이해될 것이다. 예를 들어, 이해를 돕기 위해, 다음의 첨부된 청구 범위는 "적어도 하나" 및 "하나 이상"의 도입 어구를 사용하여 청구항에 기재를 도입할 수 있다. 그러나 이러한 어구의 사용은 부정관사 "a" 또는 "an"에 의한 청구의 서술의 도입이 그것이 도입된 청구항을 포함하는 임의의 특정 청구항을 단 하나의 설명만을 포함하는 실시예로 제한한다는 것을 의미하는 것으로 해석되어서는 안되며, 동일한 청구항이 "하나 이상" 또는 적어도 하나"라는 서두 어구와 "a" 또는 "an"과 같은 부정관사를 포함하는 경우에도 마찬가지이고(예를 들어 "a" 및/또는 "an"은 일반적으로 "적어도 하나"또는 "하나 이상"을 의미하는 것으로 해석되어야 함); 청구항 기재 사항을 서술하는데 사용된 명확한 조항의 사용에도 동일하게 적용된다. 특정 수의 도입된 청구항이 명시적으로 인용되더라도 당해 기술분야의 숙련자는 그러한 인용이 전형적으로 적어도 인용된 번호를 의미하는 것으로 해석되어야 함을 인식할 것이다(예를 들어, 다른 수식어를 사용하지 않고, "두 가지 설명"을 설명한 것은 일반적으로 적어도 두 개의 설명 또는 두 개 이상의 설명을 의미한다). 또한, "A, B 및 C 중 적어도 하나"와 유사한 형식이 사용되는 경우, 일반적으로 그러한 구성은 통상의 기술자가 형식을 이해한다는 의미에서 의도된다(예를 들어, "A, B 및 C 중 적어도 하나를 갖는 시스템"은 A 단독, B 단독, C 단독, A 및 B 함께, A 및 C 함께, B 및 C 함께, 및/또는 A, B, C 등 함께). 설명, 청구 범위 또는 도면에서 두 개 이상의 대안적인 용어를 제시하는 사실상 임의의 이원적인 단어 및/또는 어구는 용어 중 하나, 용어 중 다른 하나 또는 두 용어 모두 포함할 가능성을 고려하도록 이해되어야 한다는 것을 통상의 기술자들은 이해할 것이다. 예를 들어, "A 또는 B"라는 문구는 "A", "B" 또는 "A 및 B"의 가능성을 포함하는 것으로 이해될 것이다.
본원에서 사용되는 성분의 양, 반응 조건 등을 나타내는 모든 숫자는 모든 경우에서 "약"이라는 용어로 변경된 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 달리 지시되지 않는 한, 본원에 기재된 수치 파라미터는 얻어야 하는 원하는 특성에 따라 변할 수 있는 근사치이다. 적어도 본 출원의 우선권을 주장하는 임의의 출원의 청구항의 범위에 대해 등가물의 교리의 적용을 제한하려는 시도는 아니며, 각 숫자 매개 변수는 유효 자릿수 및 일반적인 반올림 접근법에 비추어 해석되어야 한다.
또한, 앞서 명확성 및 이해의 목적으로 설명 및 실시예로서 일부가 상세하게 기술되었지만, 특정 변경 및 수정이 실시될 수 있음은 통상의 기술자에게 자명하다. 따라서, 상세한 설명 및 실시예는 본원의 범위를 본원에 기재된 특정 구현예 및 실시예로 제한하는 것으로 해석되어서는 안되며, 오히려 발명의 진정한 범위 및 사상으로 오는 모든 변형 및 대안을 포함하는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (21)

  1. 하기 화학식 (Ia)의 구조를 갖는 것인 화합물, 또는 이의 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르 또는 용매화물:
    Figure 112022062904672-pct00085

    상기 화학식 (Ia)에서
    R1, R2, R3 및 R4는 독립적으로 H 및 Cl로 이루어진 군으로부터 선택되고; R7, R8, R10 및 R11은 독립적으로 H 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택되고; R9는 C3-8 시클로알킬이다.
  2. 제1항에 있어서, R1 및 R4는 Cl 이고, R2 및 R3은 H인 화합물, 또는 이의 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르 또는 용매화물.
  3. 제1항에 있어서, 하기 화합물들로부터 선택되는 것인 화합물, 또는 이의 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르 또는 용매화물:
    Figure 112022062904672-pct00086
  4. 제3항에 있어서, 하기 화합물들로부터 선택되는 것인 화합물, 또는 이의 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르 또는 용매화물:
    Figure 112022062904672-pct00087
  5. 제3항에 있어서, 하기 화합물들로부터 선택되는 것인 화합물, 또는 이의 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르 또는 용매화물:
    Figure 112022062904672-pct00088
  6. 제1항에 있어서, 하기 구조를 갖는 것인 화합물, 또는 이의 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르 또는 용매화물:
    Figure 112022062904672-pct00089
  7. 제1항에 있어서, 하기 구조를 갖는 것인 화합물, 또는 이의 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르 또는 용매화물:
    Figure 112022062904672-pct00090
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함하는 화합물.
  9. 제1항에 있어서, 세포 증식을 억제하기 위한 화합물로서, 상기 세포는 ETS 유전자가 과발현되거나 또는 ETS 융합 유전자를 포함하는 것인, 화합물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 ETS(Erythroblast Transformation Specific) 유전자 또는 ETS 융합 유전자는 FLI1(Friend leukemia integration 1 transcription factor), ERG(ETS-related gene), ETV1(ETS translocation variant 1) 및 ETV4(ETS translocation variant 4)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물.
  11. 제1항에 있어서, 신생물성 세포(neoplastic cell)를 사멸시키거나 또는 성장을 억제하기 위한 화합물.
  12. 제9항 또는 제11항에 있어서, 상기 세포는 포유동물 세포인 화합물.
  13. 제9항 또는 제11항에 있어서, 상기 세포는 인간의 것인 화합물.
  14. 제9항 또는 제11항에 있어서, 상기 세포는 생체 외에 존재하는 것인 화합물.
  15. 제9항 또는 제11항에 있어서, 상기 세포는 생체 내에 존재하는 것인 화합물.
  16. 제9항 또는 제11항에 있어서, 상기 세포는 암세포이며, 상기 암은 유잉 육종, 전립선암, 교모세포종, 급성 골수성 백혈병, 유방암, 두부암, 경부암, 흑색종, 비-소세포 폐암, 난소암 및 자궁암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물.
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