KR102481026B1

KR102481026B1 - 인터루킨 23의 항체를 포함하는 화학요법유발 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Info

Publication number: KR102481026B1
Application number: KR1020200048958A
Authority: KR
Inventors: 정승준; 이한규; 최영인
Original assignee: 한양대학교 산학협력단
Priority date: 2020-04-22
Filing date: 2020-04-22
Publication date: 2022-12-22
Also published as: KR20210130570A

Abstract

본 발명은 인터루킨 23의 IL-23p19와 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서는 인터루킨 23의 IL-23p19에 특이적으로 결합하는 항체가 인터루킨 수용체와의 상호작용을 차단하여 통증을 억제시키는 것을 새롭게 규명하였는바, 상기 항체를 포함하는 조성물은 약제에 의한 말초신경병증의 예방 및 치료를 목적으로 하는 관련분야에서, 새로운 치료제 및 항암 보조제 등으로 다양하게 이용될 수 있을 것이다.

Description

인터루킨 23의 항체를 포함하는 화학요법유발 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 {Pharmaceutical composition for preventing or treating chemotherapy-induced peripheral neuropathy comprising the antibody of interleukin 23}

본 발명은 인터루킨 23의 항체를 포함하는 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 본 발명은 인터루킨 23의 소단위(subunit)인 P19에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 약제에 의해 유발되는 화학요법유발 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

항암화학요법의 부작용 중 하나인 약제에 의해 유발되는 말초신경병증(Chemotherapy-Induced Peripheral Neuropathy, CIPN)은 말초신경섬유의 손상, 염증, 퇴화로 정의할 수 있다. 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 증상으로는 운동, 감각신경과 관련한 증상은 손가락 및 발가락의 저림(tingling), 둔한 느낌(numbness), 타는 듯한 느낌(burning), 찌르는 느낌(stabbing), 쑤시는 느낌(shooting) 및 따끔거림(pricking) 등이 있으며, 일반적으로 양측성으로 나타나고, 하지가 더 심하게 나타난다. 증상은 통증을 느낄 정도로 악화될 수 있고 심부건반사 상실, 진동, 온도, 접촉 및 위치 감각의 상실로 진행될 수 있으며, 이러한 증상은 급성으로 나타나거나 경미하거나 일시적이며 항암화학요법을 종료한 후 회복되기도 하지만, 일부의 경우 더 악화되는 경우도 있으며 비가역적인 상태로 남을 수 있다.

약제에 의해 유발되는 말초신경병증은 다양한 원인으로 발생할 수 있는데, 크게는 유전, 만성질환, 환경독소, 알코올 중독, 영양결핍, 그리고 약물 등이다. 약제에 의해 유발되는 말초신경병증을 경험하는 암 환자들의 경우, 그들이 받았던 항암화학요법이 발생원인이 되는 것으로 알려져 있으며, 일반적으로 사용한 항암제의 누적용량과 관련이 있다. 항암 치료에 의한 경우 약 25%에서 CIPN이 발생할 수 있으며 CIPN의 정도는 항암제 종류, 투여된 용량 및 누적용량에 의하고, 특히 항암제 치료 전에 당뇨병성 신경병증, 알코올성 신경병증, vitamin B12 결핍증 등의 병력이 있던 환자에서 발생 위험이 높다(Kor. J. Clin. Pharm., Vol. 22, No.4. 2012 356p-366p).

말초신경병증을 유발하는 약제인 항암제로는 시스플라틴(cisplatin), 카보플라틴(carboplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin) 등의 플래티넘(platinum) 계열, 파클리탁셀(paclitaxel), 도세탁셀(docetaxel)과 빈카알카로이드(vinca alkaloid) 계열인 빈크리스틴(vincristine), 비노렐빈(vinorelbine) 등과 그 외에 에토포사이드(etoposide), 메토트렉세이트(methotrexate), 탈리도마이드(thalidomide), 보테조밉(bortezomib) 등이 있다.

상기와 같은 문제점에도 불구하고, 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 표준 예방법이나 치료법은 아직 확립되어 있지 않은 실정이다. 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 예방법으로는 글루타티온(glutathione), 비타민 E, 아미포스틴(amifostine), 글루타민(glutamine), 글루탐산염(glutamate), 칼슘/마그네슘(calcium/magnesium) 등을 사용한 연구들이 있으나 아직 근거가 불충분하다. 현재 임상에서는 통증 증상 경감을 위하여 삼환계 항우울제(tricyclic antidepressant), 항경련제인 카바마제핀(carbamazepine)과 가바펜틴(gabapentin), 벤라팍신(venlafaxine), 아편계 진통제(opioid analgesics) 등을 사용하고 있으나, 효과적으로 조절되지 않는 경우가 흔하다. 이처럼 현재까지 CIPN을 예방, 치료하기 위한 여러 약물이 연구되고 있으나, 사용되고 있는 치료제들은 많은 경우 효능 면에서 그 한계성을 보이고 있는 실정이며, 아직까지 일관된 호전을 보이는 약제가 없어 CIPN이 발생하기 전에 약제의 용량을 조절하거나 중단하는 것만이 예방할 수 있는 유일한 방법이다.

이러한 배경 하에서, 본 발명자들은 약제에 의해 유발되는 말초신경병증 치료 물질을 찾기 위해 노력한 결과, 인터루킨 23의 구성성분의 하나인 P19(IL-23p19)에 대한 항체가 인터루킨 23과 인터루킨 수용체의 상호작용을 차단하여 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 예방 또는 치료제로서 사용할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 인터루킨 23의 IL-23p19에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는, 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는, 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 예방 또는 치료용 항암보조제를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 조성물을 이용하여 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 예방 또는 치료방법을 제공하는 것이다.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은

IL-23p19에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는, 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현예로 상기 항체는 단일클론항체(monoclonal antibody)일 수 있다.

본 발명의 일 구현예로 상기 IL-23p19는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어질 수 있다.

본 발명의 일 구현예로 상기 조성물을 이용해 약제에 의해 유발되는 말초신경병증에 의한 통증을 경감시킬 수 있다.

본 발명의 일 구현예로 상기 약제는 시스플라틴(cisplatin), 카보플라틴(carboplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin) 등의 플래티넘(platinum) 계열, 파클리탁셀(paclitaxel), 도세탁셀(docetaxel) 등의 탁산(taxane) 계열과 빈크리스틴(vincristine), 비노렐빈(vinorelbine) 등의 빈카알카로이드(vinca alkaloid) 계열 그 외에 에토포사이드 (etoposide), 메토트렉세이트(methotrexate), 탈리도마이드(thalidomide) 및 보테조밉(bortezomib)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.

본 발명은 상기 조성물을 포함하는, 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 예방 또는 치료용 항암보조제를 제공한다.

본 발명의 일 구현예로 상기 항암보조제는 항암제와 병용하여 투여하는 것일 수 있다.

본 발명의 일 구현예로 상기 항암보조제는 동시에(simultaneous), 별도로(separate) 또는 순차적(seqeuntial)으로 투여되는 것일 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 예방 또는 치료방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 조성물의 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 예방 또는 치료용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 보조제를 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 예방 또는 치료방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 보조제의 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 예방 또는 치료용도를 제공한다.

본 발명에서는 IL-23p19에 특이적으로 결합하는 항체가 인터루킨 수용체와의 상호작용을 차단하여 통증을 억제시키는 것을 새롭게 규명하였는바, 상기 항체를 포함하는 조성물은 약제에 의한 말초신경병증의 예방 및 치료를 목적으로 하는 관련분야에서, 새로운 치료제, 항암 보조제 등으로 다양하게 이용될 수 있을 것이다.

도 1은 마우스(C57BL/6 mouse)의 복강에 빈크리스틴(vincristine)을 투여하여 화학요법유발 말초신경병증 동물모델을 제조하는 방법의 개략도를 나타낸 것이다.
도 2a, 도 2b, 도 2c 및 도 2d는 빈크리스틴을 투여한 실험군과 대조군을 대상으로 말초신경병증 유발 여부를 확인한 결과에 관한 것으로, 도 2a는 역치자극을 측정한 결과를 나타낸 것이고, 도 2b는 von-Frey 테스트 점수를 나타낸 것이며, 도 2c는 실험군과 대조군의 무게 변화를 측정한 결과를 나타낸 것이고, 도 2d는 실험군과 대조군의 운동능력 변화를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 3a, 도 3b 및 도 3c는 빈크리스틴을 투여한 실험군과 대조군에 대한 조직소견에 관한 것으로, 도 3a는 발바닥 조직표본의 H&E 염색 결과를 통해 발바닥 조직의 두께를 시각적으로 나타낸 것이고, 도 3b는 발바닥 조직의 피부 두께를 측정한 결과를 나타낸 것이며, 도 3c는 H&E 양성인 염증세포 수를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 4 및 도 4b는 빈크리스틴 투여에 의한 말초신경병증 동물모델에서 발현된 인터루킨 23 수용체의 빈크리스틴에 통증관련성에 관한 것으로, 도 4a는 실험군과 대조군에서 인터루킨 23과 그 수용체의 관련성을 상대적인 mRNA 양을 측정한 결과를 나타낸 것이고, 도 4b는 실험군과 대조군에서 혈중 인터루킨23의 양을 나타낸 것이다.
도 5a 및 도 5b는 피부의 면역조직염색결과에 관한 것으로, 도 5a는 빈크리스틴 투여에 의한 말초신경병증 동물모델에서 피부 수지상 세포의 증가 및 활성화 여부를 조직소견으로 확인한 결과를 나타낸 것이고, 도 5b는 수지상세포를 표적으로 하여 IL-23의 증가여부를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 타겟인 IL-23과 IL-23R 그리고 IL-23 수용체의 소단위인 12Rβ1(IL-12 receptor beta 1) 사이의 신호전달 기전에 대한 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 빈크리스틴 투여에 의한 말초신경병증 동물모델에서, IL-23p19와 IL-12p40에 대한 각각의 항체를 투여할 때 통증 경감 측정 결과를 나타내는 것이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명자들은 약제에 의해 유발되는 말초신경병증치료와 관련하여 다양한 연구를 진행한 결과, 빈크리스틴에 의해 말초신경병증이 유도된 동물모델에 항-IL-23p19 항체(antibody)를 투여한 결과, 기계적 통증에 대한 역치가 정상으로 회복됨을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

이에, 본 발명은 IL-23p19와 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는, 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 용어 "예방"이란, 약제에 의해 유발되는 말초신경병증 및 만성통증의 발병이 예상되는 개체에게 본 발명에서 제공하는 항-IL-23p19 항체를 포함하는 약학적 조성물을 투여하여 상기 질환의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명의 용어 "치료"란, 치료하고자 하는 개개인 또는 세포의 천연과정을 변경시키기 위해 임상적으로 개입하는 모든 행위를 의미하는데, 임상 병리 상태가 진행되는 동안 또는 이를 예방하기 위해 수행될 수 있다. 목적하는 치료 효과에는 질병의 발생 또는 재발의 예방, 증상의 완화, 질병에 따른 모든 직접 또는 간접적인 병리학적 결과의 저해, 전이의 예방, 질병 진행속도의 감소, 질병 상태의 경감 또는 일시적인 완화 및 예후의 개선이 포함된다. 본 발명의 목적상 상기 치료는 약제에 의해 유발되는 말초신경병증 및 만성통증이 발병된 환자에게 항-IL-23p19 항체를 포함하는 약학적 조성물을 투여하여 상기 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 경과를 호전시키는 모든 행위를 포함하는 것으로 해석될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지는 않는다.

본 발명에서 대상으로 하는 질환인 "약제에 의해 유발되는 말초신경병증"은 항암제 투여에 의해 말초염증이 발생되어 이를 통한 다양한 염증 관련 사이토카인의 작용에 의해 만성통증이 발생하는 질환으로, 일반적으로 통증 감각 신경세포의 이온통로 등의 변화를 통해 흥분도의 변화가 지속적인 만성통증으로 이어지는 질병을 의미한다.

본 발명에서 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 발병원인으로 알려진 항암제는 시스플라틴(cisplatin), 카보플라틴(carboplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin) 등의 플래티넘(platinum) 계열, 파클리탁셀(paclitaxel), 도세탁셀(docetaxel) 등의 탁산(taxane) 계열과 빈크리스틴(vincristine), 비노렐빈(vinorelbine) 등의 빈카알카로이드(vinca alkaloid) 계열 그 외에 에토포사이드 (etoposide), 메토트렉세이트(methotrexate), 탈리도마이드(thalidomide) 및 보테조밉(bortezomib)으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상일 수 있으며, 이에 제한되지는 않는다.

본 발명의 용어, "항체"는 면역학적으로 특정 항원과 반응성을 갖는 면역글로불린 분자를 포함하는, 항원을 특이적으로 인식하는 수용체 역할을 하는 단백질 분자를 의미한다. 본 발명에서 사용될 수 있는 항체는 IL-23p19의 활성을 억제하는 항체라면 특별히 제한되지 아니하며, 바람직하게는 단일클론항체 일 수 있다. 단일클론항체는 mAb또는 moAB로 쓰이며 동일한 에피토프(epitope)에 결합하여 해당 물질을 감지하거나 중화하는 역할을 하며, 당업계에 알려져 있는 통상적인 방법으로 제조 가능하다.

본 발명에서 "특이적으로 결합하는"은 항체가 특정 항원에 대하여만 결합하고, 다른 항원에 대하여는 결합하지 않는 특성을 의미한다.

본 발명의 용어 "IL-23p19"는 P40과 함께 이량체를 이루면서 인터루킨 23(IL-23)을 구성하는 소단위를 의미하며, 'regenerating family member 1 alpha'의 동의어이다. 상기 IL-23p19 단백질은 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어질 수 있다.

본 발명에서 "IL-23p19와 특이적으로 결합하는 항체"란, IL-23의 P19를 에피토프로 작용하여 결합하는 항체로서, P19와 결합하여, IL-23과 IL-23 수용체와의 작용을 상대적으로 방해함으로써 IL-23 수용체에 의한 신호 전달 경로를 조절하는 기능을 수행할 수 있다. 보다 구체적으로, 본 발명에서 사용된 항-IL-23p19 항체는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 IL-23p19에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있다.

본 발명자들은 구체적인 실시예를 통해 IL-23p19 항체가 약제에 의한 말초신경병증을 유의적으로 차단함을 구체적으로 규명하였다.

즉, 본 발명의 일 실시예에서는 마우스에서 말초신경병증을 유발하기 위해 빈크리스틴을 복강 주사함과 동시에 항-IL-23p19 항체를(25ug/kg)로 각각의 마우스에 주사한 결과, 말초신경병증이 관찰되지 않음을 확인하였으며, 빈크리스틴 및 IL-23p19 항체의 처리를 중단한 이후에도 기계적 통증에 대한 민감성이 나타나지 않은 반면, 또 다른 소단위인 P40 항체의 경우에는 말초신경병증이 전혀 억제되지 않을 것으로 확인하였다.

상기 실시예의 결과는 상기 항-IL-23p19 항체를 포함하는 본 발명에 따른 약학적 조성물이 항암제에 의한 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 예방 또는 치료제로 유용하게 이용될 수 있음을 보여준다. 또한, 항암제의 부작용을 억제하기 위한 항암보조제 조성물로서 이용될 수 있음을 시사한다.

이에, 본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 항-IL-23p19 항체를 포함하는 항암보조제를 제공한다. 이때, 상기 항암보조제는 항암제와 동시에(simultaneous), 별도로(separate) 또는 순차적(seqeuntial)으로 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서의 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 용도에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 약제에 의해 유발되는 말초신경병증에서 통증을 억제 또는 완화하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명에서 용어 "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 대상에게 본 발명의 약학적 조성물을 도입하는 것을 말하며, 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 목적 또는 필요에 따라 당업계에서 사용되는 통상적인 방법, 투여 경로, 투여량에 따라 적절하게 개체에 투여될 수 있다. 투여 경로의 예로는 경구, 비경구, 피하, 복강 내, 폐 내, 및 비강 내로 투여될 수 있으며, 비경구 주입에는 근육 내, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내 또는 피하투여가 포함된다.

또한 당업계에 공지된 방법에 따라 적절한 투여량 및 투여 횟수가 선택될 수 있으며, 실제로 투여되는 본 발명의 약학적 조성물의 양 및 투여 횟수는 치료하고자 하는 증상의 종류, 투여 경로, 성별, 건강 상태, 식이, 개체의 연령 및 체중, 및 질환의 중증도와 같은 다양한 인자에 의해 적절하게 결정될 수 있다.

본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 항-IL-23p19 항체를 포함하는 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.

본 발명의 용어 "개체"란, 상기 약제에 의해 유발되는 말초신경병증이 발병될 가능성이 있거나, 또는 발병된 인간을 포함한 모든 동물을 의미한다. 본 발명의 약학적 조성물을 개체에 투여함으로써, 약제에 의해 유발되는 말초신경병증을 완화 또는 치료할 수 있다.

본 발명에서 용어, "완화"는 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여로 약제에 의해 유발되는 말초신경병증 및 만성통증이 호전되거나 이롭게 되는 모든 행위를 말한다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 약제에 의해 유발되는 말초신경병증 동물모델의 준비 및 검증

1-1. 약제에 의해 유발되는 말초신경병증 동물모델의 준비

본 발명에 따른 실험을 수행하기 위해 대조군과 실험군을 디자인하였고, 도 1에서 나타낸 바와 같은 방법으로 동물모델을 제조하였다. 보다 구체적으로, 대조군은 마우스(C57BL/6mouse)의 복강에 생리식염수를 0.1mg/kg의 용량으로 연속 7일 동안 투여하였고, 실험군은 빈크리스틴(vincristine)을 0.1mg/kg의 용량으로 연속 7일 동안 투여하였다.

1-2. 약제에 의해 유발되는 말초신경병증 동물모델의 검증

말초신경병증 유발 동물모델(실험군)이 제대로 만들어졌는지 확인하기 위해, 상기 실험군을 대상으로 일주일 후에 Von-Frey 테스트를 이용하여 역치자극을 측정하였다.

그 결과, 도 2a 및 도 2b에서 나타낸 바와 같이 말초신경병증 유발전에 1.0g 이상의 역치자극에 대한 반응이 0.3g 이하로 감소하여 기계적 통증에 대하여 민감하게 반응하는 등 항암제에 의한 약제에 의해 유발되는 말초신경병증이 발생함을 확인하였다.

또한, 도 2c에서 나타낸 바와 같이 빈크리스틴을 투여한 마우스에 대한 체중 감소를 확인하였다. 그러나, 도 2d에서 나타낸 바와 같이 상기 항암제에 의한 운동능력 저하는 관찰되지 않았다.

항암제에 의한 말초염증소견 여부를 통해 말초신경병증 유발 동물모델(실험군)이 제대로 만들어졌는지 확인하기 위해, 발바닥 조직표본을 획득한 후 H&E 염색을 수행하여 조직소견을 관찰하는 실험을 수행하였다.

그 결과, 도 3a 및 도 3b에서 나타낸 바와 같이 발바닥 피부 두께가 증가한 것을 확인하였다.

또한, 도 3c에서 나타낸 바와 같이 진피 내에 H&E 양성 염증세포가 통계적으로 유의하게 증가하였음을 확인하였다.

1-3. 말초신경병증 유발 동물모델에서 통증 민감도의 증가 기전 확인

말초신경병증 유발 동물모델에서 통증 민감도가 증가하는 기전을 확인하기 위해, 빈크리스틴에 의한 통증 유발 시 통증에 관련된 신경세포에서 특이적으로 발현되는 mRNA 분석, 웨스턴블롯을 통한 단백질 분석, 그리고 면역염색을 이용한 분석을 수행하였다.

그 결과, 도 4a 및 도 4b에서 나타낸 바와 같이 유발된 말초신경병증 동물모델에서 면역에 관련된 수지상세포와 IL-23의 단백질이 현저하게 증가한 것을 확인하였다. 상기 실험 결과를 종합해 볼 때, 마우스 복강에 빈크리스틴을 연속 7일 동안 0.1mg/kg의 용량으로 투여하는 경우 말초부위에 염증을 유발시켜 약제에 의해 유발되는 말초신경병증이 발생함을 확인할 수 있었다. 또한, 도 5a 및 도 5b를 통해 수지상세포와 IL-23의 발현 양상에 대한 조직소견을 관찰한 결과 상기의 말초신경병증의 발병은 IL-23의 발현과 관계 있음을 확인할 수 있었다.

실시예 2. 약제에 의해 유발되는 말초신경병증 동물모델에 대한 IL-23의 신호전달 경로 확인

말초신경병증을 유발시킴과 동시에 siRNA(small interfering RNA)를 이용하여 IL-23 수용체의 IL-12Rβ1(IL-12 receptor beta 1)과 IL-23R을 knock down하여 유전자적으로 각 수용체를 제거하고, 대조군과 실험군에서 기계적 통증에 대한 반응을 관찰하였다.

그 결과, 도 6에서 나타낸 바와 같이 IL-23R을 knock down한 모델에서만 약제에 의해 유발되는 말초신경병증이 관찰되지 않음을 확인하였다. 상기의 결과를 통해 약제에 의해 유발되는 말초신경병증은 IL-23과 IL-23R을 통한 신호 전달로 인해 발생한다는 사실을 확인했다.

실시예 3. 약제에 의해 유발되는 말초신경병증 동물모델에 대한 IL-23P19 항체의 효과

빈크리스틴 유발 말초신경병증을 발생시키는 중에 인터루킨 23의 P19 항체(25 ug/kg)와 P40 항체(25 ug/kg)를 이용하여 IL-23을 중화하고 기계적 통증 반응을 평가하였다. 이때에 상기 P19 항체는 BioLegend에서 구입할 수 있는 항체 (Ultra-LEAF^TM Purified Mouse IgG2b, κ Isotype Ctrl Antibody)를 사용하였다.

그 결과, 도 7에서 나타낸 바와 같이 항-IL-23p19 항체(25 ug/kg)로 4회 주입한 경우에는 통증이 완화됨을 확인하였다. 상기 실험 결과를 보면, 항암제와 항- IL-23p19 항체를 동시에 투여하면 항암제로 인해 유발될 통증이 사전에 차단됨을 확인할 수 있었다. 이로부터 항-IL-23p19 항체가 항암제에 의해 유발되는 말초신경병증을 예방을 할 수 있음을 시사해준다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

<110> University-Industry Cooperation Group of Han Yang University <120> Pharmaceutical composition for preventing or treating chemotherapy-induced peripheral neuropathy comprising the antibody of interleukin 23 <130> PD20-017 <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 196 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Met Leu Asp Cys Arg Ala Val Ile Met Leu Trp Leu Leu Pro Trp Val 1 5 10 15 Thr Gln Gly Leu Ala Val Pro Arg Ser Ser Ser Pro Asp Trp Ala Gln 20 25 30 Cys Gln Gln Leu Ser Arg Asn Leu Cys Met Leu Ala Trp Asn Ala His 35 40 45 Ala Pro Ala Gly His Met Asn Leu Leu Arg Glu Glu Glu Asp Glu Glu 50 55 60 Thr Lys Asn Asn Val Pro Arg Ile Gln Cys Glu Asp Gly Cys Asp Pro 65 70 75 80 Gln Gly Leu Lys Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile Arg Gln 85 90 95 Gly Leu Ala Phe Tyr Lys His Leu Leu Asp Ser Asp Ile Phe Lys Gly 100 105 110 Glu Pro Ala Leu Leu Pro Asp Ser Pro Met Glu Gln Leu His Thr Ser 115 120 125 Leu Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Asp His Pro Arg Glu 130 135 140 Thr Gln Gln Met Pro Ser Leu Ser Ser Ser Gln Gln Trp Gln Arg Pro 145 150 155 160 Leu Leu Arg Ser Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Leu Ala Ile 165 170 175 Ala Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Thr Glu Pro Leu 180 185 190 Val Pro Thr Ala 195 <210> 2 <211> 189 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Leu Gly Ser Arg Ala Val Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro Trp Thr 1 5 10 15 Ala Gln Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln 20 25 30 Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His 35 40 45 Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr 50 55 60 Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln 65 70 75 80 Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly 85 90 95 Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu 100 105 110 Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu His Ala Ser Leu 115 120 125 Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr 130 135 140 Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu 145 150 155 160 Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala 165 170 175 Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro 180 185

Claims

IL-23p19에 특이적으로 결합하는 단일클론항체를 포함하는, 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서,
상기 약제는 IL-23 발현을 증가시키는 것이며,
상기 조성물은 상기 말초신경병증에 의한 통증을 경감시키는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 IL-23p19는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어지는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
삭제
제1항에 있어서,
상기 약제는 시스플라틴(cisplatin), 카보플라틴(carboplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 파클리탁셀(paclitaxel), 도세탁셀(docetaxel), 빈크리스틴(vincristine), 비노렐빈(vinorelbine), 에토포사이드(etoposide), 메토트렉세이트(methotrexate), 탈리도마이드(thalidomide) 및 보테조밉(bortezomib)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
삭제
제1항, 제2항, 제4항 중 어느 한 항의 약학적 조성물을 포함하는, 약제에 의해 유발되는 말초신경병증의 예방 또는 치료용 항암보조제.
제6항에 있어서,
상기 항암보조제는 항암제와 병용 투여하는 것을 특징으로 하는, 항암보조제.
제7항에 있어서,
상기 병용 투여는 동시에(simultaneous), 별도로(separate) 또는 순차적(seqeuntial)으로 투여되는 것을 특징으로 하는, 항암보조제.