KR102446729B1 - 복분자로부터 유효성분을 추출하는 방법 - Google Patents

복분자로부터 유효성분을 추출하는 방법 Download PDF

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Abstract

복분자(Rubus coreanus Miquel fruits)를 준비하는 단계; 준비된 복분자를 유기 용매와 혼합하여 유효성분을 포함하는 용액을 추출하는 단계; 및 추출된 용액을 감압농축 및 동결건조하여 복분자 추출물을 제조하는 단계;를 포함하는 복분자 유효성분 추출방법이 개시된다.

Description

복분자로부터 유효성분을 추출하는 방법{Method for extracting active ingredients from rubus coreanus miquel fruits}
본 발명은 복분자로부터 유효성분을 추출하는 방법에 관한 것이다.
복분자(Rubus coreanus Miquel fruits)는 장미과에 속하는 다년생의 낙엽 활엽성 관목으로 한국, 중국, 그리고 일본이 원산지이다. 복분자는 5~6월에 연한 분홍색의 꽃이 피고, 7~8월에 열매를 수확하여 식용한다. 복분자는 철과 칼륨, 인 등의 무기질, ascorbic acid 및 여러 종류의 유기산이 포함되어 있으며, quercetin이나 kamferol과 같은 페놀성 화합물, 가수분해성 탄닌 등이 함유되어 있다. 이외에도 기능성 물질로 알려진 천연 수용성 안토시아닌 색소가 함유되어 있어 생과로 섭취하거나 술, 음료, 식초 등 다양한 가공제품들의 판매로 재배가 증가되기 시작한다. 최근까지 보고된 복분자 함유 성분으로는 복분자 열매에 4-hydroxybenzoic acid, 3, 4-hydroxy-3-methoxybenzoic acid quercetin과 4-dihydroxybenzoic acid 및 다양한 phenolic acids, 안토시아닌 색소인 cyanidin-3-O-rutinoside (C3R), cyanidin-3-O-glucoside (C3G), 그리고 cyanidin-3-rhamnoglucoside가 함유되어 있으며, 복분자 미숙과에는 가수 분해성 탄닌인 gallic acid, 2-3(S)-HHDP-D-glucopyranose, sanguin H-4 및 H-6가 함유되어 있다고 보고되었다. 줄기에 ellagitannin, flavan-3-ol, proanthocyanidin, 잎에는 flavonoid로서 kaemp -ferol, quercetin, quercetin 3-O-β-D-glucuronide (Q3G)의 sodium salt, Q3G의 sodium carboxylate 및 ellagitannin인 ellagic acid, sanguiin H-5 등이 함유되어 있으며, 복분자 씨에는 피토스테린과 같은 지방산이 함유되어 있다고 보고되었다. 현재까지 복분자의 효능에 대해 보고된 내용에 의하면 한방에서는 복분자 미숙과 말린 것을 한약재로 사용하고 있고, 간 기능 강화, 갈증 해소, 성기능 상승, 시력보호, 배뇨개선 및 기력상승 등이 알려져 있다. 이 외에도 항종양 및 암 유발 억제활성, 항염증 효과, 당뇨억제효과, 콜레스테롤 저하작용, 정장작용 등의 기능을 가지는 것으로 보고되었다. 복분자 열매는 과일과 채소 중 가장 높은 항산화활성을 가지며, 뼈 보호 효과, 그리고 병원성 세균에 대한 항균 및 항바이러스 활성을 가지는 것으로 보고되었다. 1997년부터 복분자를 식재하기 시작하여 1999년부터 복분자를 본격 생산 출하하여 복분자주 및 음료 등을 만들어 출하하고 부산물은 퇴비화하여 폐기하였으나 재배면적이 늘어나고 부산물 생산량도 많아져 활용방안에 대한 연구가 절실히 필요하다.
한편, Superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPX), catalase (CAT), glutathione reductase, glutathione-S-transferase 등과 같이 인체 내에는 활성산소에 방어하는 항산화 효소를 가지고 있지만 산업화와 더불어 증가되는 각종 환경오염 물질, 흡연, 스트레스 등에 의해 인체 내의 항산화계의 역할만으로는 방어 체계가 초과되어 단백질 분해, DNA 손상 등이 유발된다.
따라서, 항산화제로 butylated hydroxyanisole (BHA)과 butylated hydroxytoluene(BHT)와 같은 합성물질들이 개발되었으나, 이들의 경우 다량을 섭취하면 여러 가지 부작용을 나타낼 수 있어 천연으로부터 안전한 식이성 항산화물질을 찾는 연구가 활발히 진행되고 있다.
한편, 염증은 감염으로 인한 인체 조직손상을 막는 방어기전으로 발전, 발열, 통증과 같은 증상을 수반한다. 이러한 염증반응이 장기간 지속적으로 반복될 경우 신경퇴행성질환과 같은 각종 만성질환과 암 등을 발병할 수 있는 요인이 된다.
대식세포(macrophage)는 인체 내 면역반응에서 일산화질소(nitric oxide; NO)와 프로스타글란딘(prostaglandin; PG)과 pro-inflammatory cytokine 등과 같은 염증매개물질 생성에 관여하고 이를 조절한다. 이러한 염증매개물질은 염증반응을 유도하며, 숙주의 면역반응이 적절하게 대응하지 못할 경우 염증성 질환을 유발한다.
한편, 생리활성이 우수한 소재를 산업적 소재로 활용하기 위해서는 생리활성에 대한 탐색과 별도로 소재의 특징을 고려한 최적의 제조공정에 관한 연구 및 검토가 요구되고 있다. 생물소재는 생산과정 중 한계를 가지고 있어 적은 공간과 낮은 비용으로 다량의 기능성 물질을 생산할 수 있어야 하며, 저렴한 비용으로 동일한 양의 생물소재로부터 가급적 다량의 유용물질을 생산할 수 있는 추출공정개발이 필요하다.
특허문헌 1: 대한민국특허출원 10-2018-0109297
이에, 본 발명자들은 복분자로부터 주요성분을 효과적으로 추출하는 방법을 제공하고자 노력한 결과, 추출공정, 공정온도, 추출용매, 첨가제에 대해 최적화를 수행하여 주요성분 및 활성성분인 폴리페놀 및 플라보노이드의 추출량을 향상시킬 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하였다.
또한, 본 발명의 목적은, 현저히 향상된 주요성분을 포함하는 복분자 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 신경 퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은
복분자(Rubus coreanus Miquel fruits)를 준비하는 단계;
준비된 복분자를 유기 용매와 혼합하여 유효성분을 포함하는 용액을 추출하는 단계; 및
추출된 용액을 감압농축 및 동결건조하여 복분자 추출물을 제조하는 단계;를 포함하는 복분자 유효성분 추출방법을 제공한다.
또한, 상기 유효성분을 포함하는 용액을 추출하는 단계는 준비된 복분자를 유기 용매, 공융 용매 및 이온성액체와 혼합하여 수행되는 것이고, 상기 유기 용매는 에탄올 및 디클로로메탄을 1:1의 부피비로 혼합된 것이고, 상기 공융 용매는 염으로 테트라메틸암모늄클로라이드 및 수소결합주개로 1,2-부탄디올을 1:2의 몰비로 혼합한 것이고, 상기 이온성액체는 [BMIm][TFSI](1-Butyl-3-methylimidazoliumbis(trifluoromethylsulfonyl)imide)이고, 상기 공융 용매 및 이온성액체의 혼합 비율은 1:0.5이고,
상기 추출은 디핑공정으로 30℃의 온도에서 24시간 동안 수행되는 것을 특징으로 한다.
나아가, 상기의 복분자 유효성분 추출방법으로 추출된 복분자 추출물을 유효성분으로 포함하는, 염증성 신경 퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 복분자 추출물은 총 폴리페놀 함량 30.42 mg/g, 총 플라보노이드 함량 17.20 mg/g으로 매우 높은 주요성분의 함량을 나타낸다.
본 발명은
복분자(Rubus coreanus Miquel fruits)를 준비하는 단계;
준비된 복분자를 유기 용매와 혼합하여 유효성분을 포함하는 용액을 추출하는 단계; 및
추출된 용액을 감압농축 및 동결건조하여 복분자 추출물을 제조하는 단계;를 포함하는 복분자 유효성분 추출방법을 제공한다.
이하, 본 발명에 따른 복분자 유효성분 추출방법에 대하여 상세히 설명한다.
먼저, 본 발명에 따른 복분자 유효성분 추출방법은 복분자(Rubus coreanus Miquel fruits)를 준비하는 단계를 포함한다.
상기 단계에서는 복분자 열매를 적절한 크기로 자른 뒤 동결 건조시키고, 믹서기로 갈아서 분말 형태로 준비할 수 있다.
다음으로, 본 발명에 따른 복분자 유효성분 추출방법은 준비된 복분자를 유기 용매와 혼합하여 유효성분을 포함하는 용액을 추출하는 단계를 포함한다.
상기 단계에서는 준비된 복분자를 유기 용매와 혼합하여 유효성분을 포함하는 용액을 추출하는 것으로, 복분자의 추출물에서 추출되는 유효성분 및/또는 활성성분을 늘리는 것이 수행되어야 하며, 유기 용매(또는 추출용매)의 종류, 이와 혼합되는 첨가제의 종류와 함량, 추출공정, 공정온도가 주요 조건이 될 수 있다.
상기 유기 용매(또는 추출용매)는 메탄올, 에탄올, 아세톤, 클로로포름, 에틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, n-헥산, 디클로로메탄 등을 사용할 수 있으며, 바람직한 일례로 에탄올 및 디클로로메탄을 1:1의 부피비로 혼합하여 사용할 수 있다.
상기 추출은 디핑공정, 초음파공정, 환류공정 등으로 수행될 수 있으며, 바람직한 일례로 디핑공정을 통해 추출을 수행할 수 있다.
상기 추출은 20-40℃의 온도범위에서 24시간 동안 수행될 수 있으며, 바람직한 일례로 30℃의 온도에서 24시간 동안 수행될 수 있다.
상기 추출을 위해서 첨가제로서 공융용매를 사용할 수 있으며, 상기 공융용매는 염과 수소결합주개를 포함한다. 상기 공융용매에서 염은 콜린클로라이드(choline chloride, ChCl), 테트라메틸암모늄클로라이드(Tetramethylammonium chloride, Me4NCl), 메틸 트리페닐 포스포늄 브로마이드(Methyl triphenyl phosphonium bromide, Me(Ph)3PBr) 등을 사용할 수 있으며, 바람직한 일례로 테트라메틸암모늄클로라이드를 사용할 수 있다. 상기 공융용매에서 수소결합주개는 에틸렌 글라이콜(Ethylene glycol), 1,2-부탄디올(1,2-Butanediol), 페놀(Phenol), 우레아(Urea) 등을 사용할 수 있으며, 바람직한 일례로 1,2-부탄디올을 사용할 수 있다. 상기 복분자의 추출을 위해서 바람직한 일례로 테트라메틸암모늄클로라이드 및 1,2-부탄디올을 1:2의 몰비로 혼합하여 사용할 수 있다.
상기 공융 용매의 함량은 유기 용매 1 ml에 대하여 0.01-1.0 g일 수 있으며, 바람직한 일례로 상기 공융 용매의 함량은 유기 용매 1 ml에 대하여 0.3 g을 사용할 수 있다.
또한, 상기 추출을 위해서 첨가제로서 이온성액체를 사용할 수 있으며, 상기 이온성액체는 [BMIm][TFSI](1-Butyl-3-methylimidazoliumbis(trifluoromethylsulfonyl)imide)를 사용하는 것이 바람직하다.
나아가, 상기 공융 용매 및 이온성액체의 혼합 비율은 1:0.5인 것이 바람직하다.
다음으로, 본 발명에 따른 복분자 유효성분 추출방법은 추출된 용액을 감압농축 및 동결건조하여 복분자 추출물을 제조하는 단계를 포함한다.
최종적으로 추출된 용액을 감압농축 및 동결건조하여 복분자 추출물을 제조하게 되며, 추출물을 여과지로 여과한 뒤 농축기로 55℃에서 감압농축 및 동결건조하는 것일 수 있다.
이를 통해 제조되는 복분자 추출물은 총 폴리페놀 함량 30.42 mg/g, 총 플라보노이드 함량 17.20 mg/g을 포함하는 것을 특징으로 한다.
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이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의해 보다 상세하게 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 발명의 범위가 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 복분자 추출물의 제조-1
복분자(Rubus coreanus Miquel fruits) 열매를 준비하여 동결건조 시킨 후, 믹서기로 갈아서 복분자 분말을 준비하였다.
준비된 복분자 분말 0.05 g를 유기 용매인 70% 에탄올 5 ml에 첨가하였다.
이후, 디핑(dipping), 초음파공정(ultra sonic) 및 환류(reflux) 공정을 수행하여 20-40℃의 온도에서 24시간 동안 추출한 후, 여과지(Watman No. 2)로 여과한 뒤 농축기(EYELA N-3000, Japan)로 55℃에서 감압농축 및 동결건조하여 추출물을 얻었다. 실시예 1에서 수행된 복분자 추출의 조건은 하기 표 1에 나타내었다.
제조된 복분자 추출물의 총 폴리페놀 함량 및 총 플라보노이드 함량을 분석하였으며, 구체적으로, 총 폴리페놀 함량은 Folin-Denis법을 응용하여 측정하였으며, 총 플라보노이드 함량은 Nieva Moreno 방법을 응용하여 측정하였고 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
실시예 1 추출용매 추출공정 공정온도 (℃)
실시예 1-1 에탄올 디핑 20
실시예 1-2 초음파 20
실시예 1-3 환류 20
실시예 1-4 디핑 10
실시예 1-5 디핑 30
실시예 1-6 디핑 40
실시예 1 총 폴리페놀 함량
(mg/g)
총 플라보노이드 함량
(mg/g)
실시예 1-1 14.80 8.95
실시예 1-2 13.85 8.58
실시예 1-3 11.25 6.53
실시예 1-4 12.18 7.60
실시예 1-5 15.45 9.10
실시예 1-6 13.80 5.48
상기 표 1 및 표 2에 나타낸 바와 같이, 추출공정으로 디핑을 적용하고 공정온도로 30℃를 적용하는 경우 에탄올 추출용매 하에서 총 폴리페놀 함량 15.45 mg/g, 총 플라보노이드 함량 9.10 mg/g으로 우수한 추출효율을 나타냄을 확인할 수 있다.
<실시예 2> 복분자 추출물의 제조-2
복분자(Rubus coreanus Miquel fruits) 열매를 준비하여 동결건조 시킨 후, 믹서기로 갈아서 복분자 분말을 준비하였다.
준비된 복분자 분말 0.05 g를 에탄올, 메탄올, 아세톤, 클로로포름, 에틸렌클로라이드, n-헥산, 디클로로메탄 중 1종 이상을 포함하는 유기 용매 5 ml에 첨가하였다.
이후, 디핑(dipping) 공정을 수행하여 30℃의 온도에서 24시간 동안 추출한 후, 여과지(Watman No. 2)로 여과한 뒤 농축기(EYELA N-3000, Japan)로 55℃에서 감압농축 및 동결건조하여 추출물을 얻었다. 실시예 2에서 수행된 복분자 추출의 조건은 하기 표 3에 나타내었다.
제조된 복분자 추출물의 총 폴리페놀 함량, 총 플라보노이드 함량을 분석하였으며, 구체적으로, 총 폴리페놀 함량은 Folin-Denis법을 응용하여 측정하였으며, 총 플라보노이드 함량은 Nieva Moreno 방법을 응용하여 측정하였고 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.
실시예 2 추출용매 추출공정 공정온도 (℃)
*실시예 1-5 에탄올 디핑 30
실시예 2-1 메탄올
실시예 2-2 아세톤
실시예 2-3 클로로포름
실시예 2-4 에틸렌클로라이드
실시예 2-5 n-헥산
실시예 2-6 디클로로메탄
**실시예 2-7 에탄올+디클로로메탄
* 실시예 1-5는 실시예 1에서 가져옴
** 실시예 2-7은 에탄올과 디클로로메탄의 혼합비율이 1:1 부피비임(2.5 ml씩 사용)
실시예 2 총 폴리페놀 함량
(mg/g)
총 플라보노이드 함량
(mg/g)
실시예 1-5 15.45 9.10
실시예 2-1 13.20 7.73
실시예 2-2 12.87 7.70
실시예 2-3 12.32 6.88
실시예 2-4 10.88 5.40
실시예 2-5 14.95 8.59
실시예 2-6 16.75 11.54
실시예 2-7 19.30 12.25
상기 표 3 및 표 4에 나타낸 바와 같이, 추출용매로로 에탄올, n-헥산 및 디클로로메탄을 적용하는 경우 우수한 추출효율을 나타냄을 확인할 수 있었다. 더욱이, 추출용매로 에탄올과 디클로로메탄을 1:1 부피비로 혼합하여 적용하는 경우 가장 높은 추출량으로, 총 폴리페놀 함량 19.30 mg/g, 총 플라보노이드 함량 12.25 mg/g을 나타내어 추출량이 현저히 높아지는 것을 확인할 수 있었다.
<실시예 3> 복분자 추출물의 제조-3
복분자(Rubus coreanus Miquel fruits) 열매를 준비하여 동결건조 시킨 후, 믹서기로 갈아서 복분자 분말을 준비하였다.
준비된 복분자 분말 0.05 g와 공융 용매 0.01-1.00 g을 에탄올 2.5 ml 및 디클로로메탄 2.5 ml의 혼합 용매 5 ml에 첨가하였다.
이후, 디핑(dipping) 공정을 수행하여 30℃의 온도에서 24시간 동안 추출한 후, 여과지(Watman No. 2)로 여과한 뒤 농축기(EYELA N-3000, Japan)로 55℃에서 감압농축 및 동결건조하여 추출물을 얻었다. 실시예 3에서 수행된 복분자 추출의 조건은 하기 표 5에 나타내었다.
제조된 복분자 추출물의 총 폴리페놀 함량, 총 플라보노이드 함량을 분석하였으며, 구체적으로, 총 폴리페놀 함량은 Folin-Denis법을 응용하여 측정하였으며, 총 플라보노이드 함량은 Nieva Moreno 방법을 응용하여 측정하였고 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다.
실시예 3 공융용매 염:수소결합주개 몰비 공융용매 첨가량 (g)
수소결합주개
실시예 3-1 테트라메틸암모늄클로라이드 우레아 1:2 0.01
실시예 3-2 테트라메틸암모늄클로라이드 에틸렌글리콜 1:4 0.01
실시예 3-3 테트라메틸암모늄클로라이드 1,2-부탄디올 1:2 0.01
실시예 3-4 콜린클로라이드 우레아 1:2 0.01
실시예 3-5 메틸트리페닐 포스포늄 브로마이드 우레아 1:2 0.01
실시예 3-6 테트라메틸암모늄클로라이드 1,2-부탄디올 1:2 0.05
실시예 3-7 0.1
실시예 3-8 0.2
실시예 3-9 0.3
실시예 3-10 0.4
실시예 3-11 0.6
실시예 3-12 1.0
실시예 3 총 폴리페놀 함량
(mg/g)
총 플라보노이드 함량
(mg/g)
실시예 3-1 21.50 13.05
실시예 3-2 20.12 12.85
실시예 3-3 22.38 13.52
실시예 3-4 20.25 13.15
실시예 3-5 20.58 12.98
실시예 3-6 22.58 13.90
실시예 3-7 23.58 14.28
실시예 3-8 24.02 14.55
실시예 3-9 25.59 15.80
실시예 3-10 23.88 13.81
실시예 3-11 23.65 13.59
실시예 3-12 22.01 13.25
상기 표 5 및 표 6에 나타낸 바와 같이, 공융용매를 적용하는 경우 더욱 우수한 추출효율을 나타냄을 확인할 수 있었다. 특히, 공융용매로 테트라메틸암모늄클로라이드 및 1,2-부탄디올을 1:2의 몰비로 적용한 공융용매를 0.3 g 사용하는 경우 총 폴리페놀 함량 25.59 mg/g, 총 플라보노이드 함량 15.80 mg/g을 나타내어 추출량이 현저히 높아지는 것을 확인할 수 있었다.
<실시예 4> 복분자 추출물의 제조-4
복분자(Rubus coreanus Miquel fruits) 열매를 준비하여 동결건조 시킨 후, 믹서기로 갈아서 복분자 분말을 준비하였다.
준비된 복분자 분말 0.05 g와 공융용매로 테트라메틸암모늄클로라이드 및 1,2-부탄디올을 1:2의 몰비로 적용한 공융용매를 0.3 g 및 이온성액체 0.1-0.4 g을 에탄올 2.5 ml 및 디클로로메탄 2.5 ml의 혼합 용매 5 ml에 첨가하였다.
이후, 디핑 공정을 수행하여 30℃의 온도에서 24시간 동안 추출한 후, 여과지(Watman No. 2)로 여과한 뒤 농축기(EYELA N-3000, Japan)로 55℃에서 감압농축 및 동결건조하여 추출물을 얻었다. 실시예 4에서 수행된 당유자 추출의 조건은 하기 표 7에 나타내었다.
제조된 당유자 추출물의 총 폴리페놀 함량, 총 플라보노이드 함량을 분석하였으며, 구체적으로, 총 폴리페놀 함량은 Folin-Denis법을 응용하여 측정하였으며, 총 플라보노이드 함량은 Nieva Moreno 방법을 응용하여 측정하였고 그 결과를 하기 표 8에 나타내었다.
실시예 4 이온성액체의 종류 이온성액체의 양 (g)
실시예 4-1 [BMIm][TFSI] 0.1
실시예 4-2 [BMIm][BF4] 0.1
실시예 4-3 [BMIm][PF6] 0.1
실시예 4-4 [BMIm][TFSI] 0.15
실시예 4-5 [BMIm][TFSI] 0.2
실시예 4-6 [BMIm][TFSI] 0.3
실시예 4-7 [BMIm][TFSI] 0.4
실시예 4 총 폴리페놀 함량
(mg/g)
총 플라보노이드 함량
(mg/g)
실시예 4-1 27.43 16.23
실시예 4-2 24.67 13.86
실시예 4-3 25.31 12.30
실시예 4-4 30.42 17.20
실시예 4-5 28.86 16.62
실시예 4-6 27.51 16.50
실시예 4-7 27.49 16.25
상기 표 7 및 표 8에 나타낸 바와 같이, 이온성액체로서 [BMIm][TFSI]를 적용하는 경우 더욱 우수한 추출효율을 나타냄을 확인할 수 있었다. 반면, [BMIm][BF4] 및 [BMIm][PF6]를 적용하는 경우 오히려 추출효율이 떨어짐을 확인할 수 있었다. 특히, 이온성액체의 함량이 0.15 g인 경우 우수한 추출효율을 나타냄을 확인할 수 있고, 최대 총 폴리페놀 함량 30.42 mg/g, 총 플라보노이드 함량 17.20 mg/g을 나타내어 추출량이 현저히 높아지는 것을 확인할 수 있었다.
이상, 본 발명내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 정의된다고 할 것이다.

Claims (3)

  1. 복분자를 준비하는 단계;
    준비된 복분자를 에탄올 및 디클로로메탄을 1:1의 부피비로 혼합한 유기 용매, 염으로 테트라메틸암모늄클로라이드 및 수소결합주개로 1,2-부탄디올을 1:2의 몰비로 혼합한 공융 용매 및 이온성액체로 [BMIm][TFSI](1-Butyl-3-methylimidazoliumbis(trifluoromethylsulfonyl)imide)와 혼합하되, 공융 용매의 함량은 유기 용매 1 ml에 대하여 0.06 g을 사용하고, 상기 공융 용매 및 이온성액체의 혼합 비율은 1:0.5의 중량비율이고, 디핑공정으로 30℃의 온도에서 24시간 동안 유효성분을 포함하는 용액을 추출하는 단계; 및
    추출된 용액을 감압농축 및 동결건조하여 복분자 추출물을 제조하되, 상기 복분자 추출물은 총 폴리페놀 함량이 30.42 mg/g이고, 총 플라보노이드 함량이 17.20 mg/g인 것을 특징으로 하는 단계;를 포함하는 복분자 추출물의 제조방법.
  2. 삭제
  3. 삭제
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