KR102443539B1 - Development of fermented black ginseng extract on the anti-carcinogenic activity - Google Patents

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Abstract

본 발명에 따른 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물 및 그 제조방법은 정제수에 흑삼 분말을 첨가하여 흑삼 분말 배지를 제조하는 배지 제조 단계(S100); 산성의 흑삼분말 배지 pH를 중성 또는 염기성으로 보정하는 pH 보정 단계(S200); 흑삼분말 배지를 멸균하는 멸균 단계(S300); 흑삼분말 배지에 유산균을 접종하여 발효하는 배양 단계(S400); 및 흑삼 유산균 발효 조성물을 열처리하는 단계(S500);를 포함한다.Fermented black ginseng having anticancer immune activity and a method for producing the same according to the present invention include a medium preparation step of preparing a black ginseng powder medium by adding black ginseng powder to purified water (S100); pH correction step (S200) of correcting the acidic black ginseng powder medium pH to neutral or basic; Sterilizing the black ginseng powder medium (S300); A culture step of inoculating and fermenting black ginseng powder medium with lactic acid bacteria (S400); and heat-treating the black ginseng lactic acid bacteria fermentation composition (S500).

Description

항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물 및 제조방법{Development of fermented black ginseng extract on the anti-carcinogenic activity}Fermented black ginseng having anti-cancer immune activity and manufacturing method {Development of fermented black ginseng extract on the anti-carcinogenic activity}

본 발명은 항암 면역효능을 가지는 흑삼발효물의 개발에 관한 것으로, 보다 상세하게는 자궁암 등 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물 및 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to the development of a fermented black ginseng product having anticancer immunological activity, and more particularly, to a fermented black ginseng product having anticancer immune activity such as uterine cancer and a manufacturing method.

지난 1999년부터 2015년까지 우리나라 암 환자 수는 161만 여명에 달하며 암은 우리나라 사망원인 1위로 사회적인 부담이 상당한 상황이며, 이중 발생률이 가장 높은 암은 위암인 것으로 나타났다. 기존에 가장 높은 발생률을 보였던 갑상선암은 세 번째로 하락했고, 대장암은 최다 발생 2위로 증가하였으며, 2015년에 새로 발생한 암환자 수는 21만 4701명(남자 11만3,335명·여자 10만1366명)으로 통계되었다. (하기 표 1 참조)From 1999 to 2015, the number of cancer patients in Korea reached 1.61 million, and cancer is the number one cause of death in Korea and carries a significant social burden. Thyroid cancer, which had previously had the highest incidence, fell for the third time, and colorectal cancer rose to the second highest incidence, and the number of new cancer patients in 2015 was 214,701 (113,335 men, 101,366 women). ) was statistically (See Table 1 below)

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세계보건기구 산하 국제 암 연구 기관 (International Agency for Research on Cancer, IARC)에 따르면 2018년에 전 세계적으로 1,700만 명이 암으로 진단됐으며 950만 명이 암으로 사망하였고, 세계 사망자 6명당 1명이 암으로 사망하고 있는 실정이다. (하기 표 2, 표 3 참조)According to the World Health Organization's International Agency for Research on Cancer (IARC), in 2018, 17 million people worldwide were diagnosed with cancer and 9.5 million died from cancer, and 1 in 6 people worldwide died from cancer. is currently doing. (See Table 2 and Table 3 below)

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이러한 상황에서 현재 시판되고 있는 항암 치료제는 약물에 대한 경제적 부담, 지속적인 사용으로 인한 부작용의 위험, 약물에 대한 내성발생 우려로 인해 질병 예방에 대해 효과적이고, 경쟁력 있는 기능성 식품을 개발하기 위한 연구가 활발하게 진행 중이다.In this situation, anticancer drugs currently on the market are actively researched to develop effective and competitive functional foods for disease prevention due to the economic burden of the drug, the risk of side effects due to continuous use, and concerns about resistance to the drug. is proceeding

이러한 시점에서 특히 항암효능이 탁월한 것으로 알려진 인삼 제품의 항암관련 건강기능식품 제품화 개발이 활발하게 진행되고 있는 상황이다. 인삼의 약리작용과 임상 응용분야는 매우 다양하여 고혈압, 협심증 등 심혈관 계통 질환, 만성 위염 등의 소화기 계통 질환, 당뇨병, 우울증과 신경쇠약 등의 정신신경과 질환, 음위나 정력감퇴 등의 질환에 다양하게 이용되고 있는데, 그 중에서도 흑삼은 수삼을 증숙한 후에 건조시킨 인삼을 말하며, 그 기본 효능은 홍삼과 유사하고 통상적으로 9증9포하여 인삼을 쪄서 말린 것이지만 성분 면에서는 증숙하는 과정에서 수삼 또는 백삼과 다른 유효성분이 생성되는 것으로 알려져 있다.At this point, especially, the development of anticancer-related health functional food products of ginseng products, which are known to have excellent anticancer effects, are being actively developed. The pharmacological action and clinical applications of ginseng are very diverse, so it is widely used in cardiovascular diseases such as hypertension and angina pectoris, digestive system diseases such as chronic gastritis, psychiatric diseases such as diabetes, depression and neurasthenia, and diseases such as yin and energy loss. Among them, black ginseng refers to ginseng dried after steaming fresh ginseng, and its basic efficacy is similar to that of red ginseng and is usually steamed and dried by steaming and drying ginseng in 9 steamed or white ginseng, but in terms of ingredients, fresh ginseng or white ginseng is and other active ingredients are known to be produced.

인삼 사포닌(Ginsenoside)의 구성에서 수삼의 경우는 Rb1, Rg1, Re 등이 많이 함유된 반면, 홍삼은 증숙과정에서 물리적으로 만들어진 Rg3가 가장 많고, 다음으로 Rg1과 Rh2의 순서이며, 흑삼은 Rg3, Rk1, Rg5 인지력, 기억력 향상에 도움이 되는 성분이 함유되어 있다.In the composition of ginseng saponin (Ginsenoside), fresh ginseng contains a lot of Rb1, Rg1, Re, etc., whereas in red ginseng, Rg3, which is physically created during the steaming process, is the most, followed by Rg1 and Rh2, and black ginseng is Rg3, Rk1, Rg5 Contains ingredients that help improve cognition and memory.

한국등록특허 제10-2053735호 “흑삼 유산균 발효 조성물 및 그 제조방법”Korean Patent Registration No. 10-2053735 “Fermented composition of black ginseng lactic acid bacteria and its manufacturing method”

본 발명은 상술한 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 생물전환기술을 통해 발효한 고기능 흑삼 발효물로부터 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물 및 그 제조방법을 제공함에 있다.The present invention has been devised to solve the above problems, and it is to provide a fermented black ginseng product having anticancer immune activity from a high-functional black ginseng fermented product fermented through bioconversion technology and a manufacturing method thereof.

또한, 본 발명은 인삼 원료의 전처리 공정을 확립하여 유효물질 전환 효소의 선정 및 특성을 분석하고 생물전환기술을 통해 발효한 고기능성 흑삼 발효물 및 그 제조방법을 제공하고자 한다.In addition, the present invention aims to provide a highly functional black ginseng fermented product and a manufacturing method thereof by establishing a pretreatment process of ginseng raw material, analyzing the selection and characteristics of an active substance converting enzyme, and fermenting it through bioconversion technology.

이와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 실시예에 따른 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물 제조방법은 정제수에 흑삼 분말을 첨가하여 흑삼 분말 배지를 제조하는 배지 제조 단계(S100); 산성의 흑삼분말 배지 pH를 중성 또는 염기성으로 보정하는 pH 보정 단계(S200); 흑삼분말 배지를 멸균하는 멸균 단계(S300); 흑삼분말 배지에 유산균을 접종하여 발효하는 배양 단계(S400); 및 흑삼 유산균 발효 조성물을 열처리하는 단계(S500);를 포함한다.In order to achieve this object, the method for producing a fermented black ginseng product having anticancer immune activity according to an embodiment of the present invention includes a medium manufacturing step of preparing a black ginseng powder medium by adding black ginseng powder to purified water (S100); pH correction step (S200) of correcting the acidic black ginseng powder medium pH to neutral or basic; Sterilizing the black ginseng powder medium (S300); A culture step of inoculating and fermenting black ginseng powder medium with lactic acid bacteria (S400); and heat-treating the black ginseng lactic acid bacteria fermentation composition (S500).

본 발명의 일 실시예에 따른 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물 제조방법에 있어, 상기 흑삼분말은 인삼을 세척하는 세척 단계(S10); 세척된 인삼을 건조하는 예비 건조 단계(S20); 건조된 인삼을 60 내지 70℃에서 10 내지 20 분 유지한 후, 90 내지 98℃으로 승온하고 2 내지 5 시간 증삼하는 증삼 단계(S30); 증삼된 인삼을 건조하는 1차 건조 단계(S40); 건조된 인삼을 90 내지 98℃로 승온하고 2 내지 5 시간 증삼하는 2차 증삼 단계(S50); 증삼된 인삼을 건조하는 2차 건조 단계(S60); 건조된 인삼을 90 내지 98℃로 승온하고 2 내지 5 시간 증삼하는 3차 증삼 단계(S70); 및 증삼된 인삼을 최종 수분함량이 15% 이하가 되도록 건조하는 3차 건조 단계(S80);를 포함할 수 있다.In the method for producing fermented black ginseng having anticancer immune activity according to an embodiment of the present invention, the black ginseng powder is washed with ginseng; a washing step (S10); A preliminary drying step of drying the washed ginseng (S20); After maintaining the dried ginseng at 60 to 70 ℃ for 10 to 20 minutes, the temperature is raised to 90 to 98 ℃ and steaming step (S30) of steaming for 2 to 5 hours; A primary drying step of drying the steamed ginseng (S40); The second steaming step (S50) of raising the temperature of the dried ginseng to 90 to 98 ℃ and steaming the dried ginseng for 2 to 5 hours; Secondary drying step of drying the steamed ginseng (S60); The third steaming step (S70) of raising the temperature of the dried ginseng to 90 to 98 ° C and steaming the ginseng for 2 to 5 hours; and a third drying step (S80) of drying the steamed ginseng so that the final moisture content is 15% or less.

또한 본 발명은 상술한 흑삼 발효물 제조방법으로 제조된 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물을 제안한다.In addition, the present invention proposes a fermented black ginseng having anticancer immune activity prepared by the above-described fermented black ginseng production method.

본 발명에 따른 흑삼 발효물은 특히 인간자궁암세포(HeLa)에 대한 세포증식 억제활성과 면역세포 활성과 동반한 IL-2, γ-IFN 등의 cytokine 분비활성을 촉진시켜 항암면역 활성을 가지고 있는 것으로 확인되었다.The fermented black ginseng according to the present invention has anticancer immune activity by promoting cytokine secretion such as IL-2 and γ-IFN accompanied by cell proliferation inhibitory activity against human uterine cancer cells (HeLa) and immune cell activity. Confirmed.

또한 본 발명은 세포생존율 실험을 통하여 흑삼 발효물이 HeLa(인간자궁암세포주), HL-60(인간전골수성백혈병세포주), Molt-4(인간림프아구성백혈병세포주) 및 AGS(인간위암세포주)의 생존율에 미치는 영향(암세포 사멸)을 in vitro 배양세포주 실험계로 확인하였다.In addition, the present invention showed that the fermented black ginseng was produced by using HeLa (human uterine cancer cell line), HL-60 (human promyelocytic leukemia cell line), Molt-4 (human lymphoblastic leukemia cell line) and AGS (human gastric cancer cell line) through the cell viability test. The effect on the survival rate (cancer cell death) was confirmed with an in vitro cultured cell line test system.

본 발명에서 얻을 수 있는 효과는 이상에서 언급한 효과로 제한되지 않으며, 언급하지 않은 또 다른 효과들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.The effects obtainable in the present invention are not limited to the above-mentioned effects, and other effects not mentioned will be clearly understood by those of ordinary skill in the art to which the present invention belongs from the description below. .

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물 제조방법의 공정 순서도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물 제조방법의 다른 공정 순서도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물 제조방법의 배양 시간에 따른 pH 및 유산균 수를 도시한 도면이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물이 HeLa(인간자궁암세포주)의 생존율에 미치는 영향을 도시한 도면이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물이 HL-60(인간전골수성백혈병세포주)의 생존율에 미치는 영향을 도시한 도면이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물이 Molt-4(인간림프아구성백혈병세포주)의 생존율에 미치는 영향을 도시한 도면이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물이 AGS(인간위암세포주)의 생존율에 미치는 영향을 도시한 도면이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물이 암세포의 아폽토시스를 촉진하는 효과를 보여주는 도면이다.
도 9 내지 도 12는 본 발명의 일 실시예에 따른 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물이 항암활성에 미치는 흑삼의 효과를 보여주는 도면이다.
1 is a process flow chart of a method for producing fermented black ginseng having anticancer immune activity according to an embodiment of the present invention.
Figure 2 is another process flow chart of the method for producing a fermented black ginseng having anticancer immune activity according to an embodiment of the present invention.
Figure 3 is a view showing the pH and the number of lactic acid bacteria according to the culture time of the fermented black ginseng production method having anticancer immune activity according to an embodiment of the present invention.
4 is a view showing the effect of fermented black ginseng having anticancer immune activity on the survival rate of HeLa (human uterine cancer cell line) according to an embodiment of the present invention.
5 is a view showing the effect of fermented black ginseng having anticancer immune activity on the survival rate of HL-60 (human promyelocytic leukemia cell line) according to an embodiment of the present invention.
6 is a view showing the effect of fermented black ginseng having anticancer immune activity on the survival rate of Molt-4 (human lymphoblastic leukemia cell line) according to an embodiment of the present invention.
7 is a view showing the effect of fermented black ginseng having anticancer immune activity on the survival rate of AGS (human gastric cancer cell line) according to an embodiment of the present invention.
8 is a view showing the effect of fermented black ginseng having anticancer immune activity according to an embodiment of the present invention to promote apoptosis of cancer cells.
9 to 12 are views showing the effect of black ginseng on anticancer activity of fermented black ginseng having anticancer immune activity according to an embodiment of the present invention.

이하 본 발명에 관하여 상세히 설명한다. 다음에 소개되는 실시예 및 도면들은 당업자에게 본 발명의 사상이 충분히 전달될 수 있도록 하기 위해 예로서 제공되는 것이다. 또한, 본 발명의 사용되는 기술 용어 및 과학 용어에 있어서 다른 정의가 없다면, 이 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 통상적으로 이해하고 있는 의미를 가지며, 하기의 설명 및 첨부 도면에서 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있는 공지 기능 및 구성에 대한 설명은 생략한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail. The embodiments and drawings introduced below are provided as examples so that the spirit of the present invention can be sufficiently conveyed to those skilled in the art. In addition, unless there is another definition in the technical and scientific terms used in the present invention, it has the meaning commonly understood by those of ordinary skill in the art to which this invention belongs, and in the following description and accompanying drawings, the present invention Description of known functions and configurations that may unnecessarily obscure the gist of will be omitted.

이하, 본 발명의 기술적 사상을 첨부된 도면을 사용하여 더욱 구체적으로 설명한다.Hereinafter, the technical idea of the present invention will be described in more detail with reference to the accompanying drawings.

첨부된 도면은 본 발명의 기술적 사상을 더욱 구체적으로 설명하기 위하여 도시한 일예에 불과하므로 본 발명의 기술적 사상이 첨부된 도면의 형태에 한정되는 것은 아니다.Since the accompanying drawings are merely examples shown to explain the technical idea of the present invention in more detail, the technical idea of the present invention is not limited to the form of the accompanying drawings.

본 발명의 일 실시예에 따른 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물 제조방법은 배지 제조 단계(S100), pH 보정 단계(S200), 멸균 단계(S300), 배양 단계(S400) 및 열처리 단계(S500)를 포함한다.The method for producing fermented black ginseng having anticancer immune activity according to an embodiment of the present invention includes a medium preparation step (S100), a pH correction step (S200), a sterilization step (S300), a culturing step (S400) and a heat treatment step (S500) includes

배지 제조 단계(S100)는 정제수에 흑삼 분말을 첨가하여 흑삼 분말 배지를 제조하는 단계이다.The medium preparation step (S100) is a step of preparing a black ginseng powder medium by adding black ginseng powder to purified water.

상세하게, 상기 배지 제조 단계(S100)는 정제수에 흑삼분말을 흑삼분말 배지 100중량%를 기준으로 1 중량% 이상 첨가하여, 흑삼분말 배지가 흑삼분말을 1%의 농도 이상으로 함유하도록 제조하는 것일 수 있다.In detail, the medium preparation step (S100) is to add 1 wt% or more of black ginseng powder to purified water based on 100 wt% of the black ginseng powder medium, so that the black ginseng powder medium contains black ginseng powder at a concentration of 1% or more. can

보다 바람직하게는, 흑삼분말 배지 100중량%를 기준으로, 흑삼분말을 1 내지 2 중량%을 혼합하여, 흑삼분말 배지가 흑삼분말을 1 내지 2%의 농도로 함유하도록 제조할 수 있다.More preferably, based on 100% by weight of the black ginseng powder medium, 1 to 2% by weight of black ginseng powder may be mixed, so that the black ginseng powder medium contains the black ginseng powder at a concentration of 1 to 2%.

이에 따라, 흑삼분말이 1%의 농도 미만일 경우 진세노사이드 전환 효과가 미미하며, 흑삼분말이 2중량%를 초과하여도 무방하나 현실적인 단가 및 발효 효율을 고려하면, 흑삼분말액이 흑삼분말을 1 내지 2%의 농도로 함유하는 것이 바람직하다.Accordingly, when the concentration of black ginseng powder is less than 1%, the ginsenoside conversion effect is insignificant, and the black ginseng powder may exceed 2% by weight, but considering the realistic unit price and fermentation efficiency, the black ginseng powder is 1% by weight. It is preferable to contain it at a concentration of ∼ 2%.

다음으로, pH 보정 단계(S200)는 산성의 흑삼분말 배지 pH를 중성 또는 염기성으로 보정하는 단계이다.Next, the pH correction step (S200) is a step of correcting the acidic black ginseng powder medium pH to neutral or basic.

상기와 같이 얻는 흑삼분말 배지는 pH 3~5의 산성을 나타내는데, 산성인 흑삼분말 배지를 중성 또는 염기성으로 보정하기 위하여, 흑삼분말 배지에 염기를 첨가한다.The black ginseng powder medium obtained as described above exhibits an acidity of pH 3 to 5. In order to correct the acidic black ginseng powder medium to neutral or basic, a base is added to the black ginseng powder medium.

상기 염기는 KOH, NaOH, LiOH, Ba(OH)2, Mg(OH)2 및 Ca(OH)2 중에서 선택된 1종 이상의 물질을 포함하고, 바람직하게는 NaOH인 것이 좋고, 이때, 상기 염기의 농도는 1 ~ 10 N 인 것을 특징으로 한다.The base includes at least one material selected from KOH, NaOH, LiOH, Ba(OH) 2 , Mg(OH) 2 and Ca(OH) 2 , and is preferably NaOH, in this case, the concentration of the base is characterized in that it is 1 to 10 N.

본 발명에 따른 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물 제조방법은 상술한 배지 제조 단계(S100), pH 보정 단계(S200), 멸균 단계(S300), 배양 단계(S400) 및 열처리 단계(S500) 중 상기 pH 보정 단계(S200)를 생략하면 항암면역 활성을 가지기 어렵다. 예컨대 HeLa(인간자궁암세포주), HL-60(인간전골수성백혈병세포주), Molt-4(인간림프아구성백혈병세포주) 및 AGS(인간위암세포주)의 생존율에 미치는 영향(암세포 사멸)에 대한 세포 생존율을 유의적으로 감소시키기 어렵게 된다.The method for producing fermented black ginseng having anticancer immune activity according to the present invention includes the above-described medium production step (S100), pH correction step (S200), sterilization step (S300), culturing step (S400) and heat treatment step (S500). If the pH correction step (S200) is omitted, it is difficult to have anticancer immune activity. For example, HeLa (human uterine cancer cell line), HL-60 (human promyelocytic leukemia cell line), Molt-4 (human lymphoblastic leukemia cell line), and AGS (human gastric cancer cell line) cell viability on the effect (cancer cell death) on the survival rate is difficult to significantly reduce.

다음으로, 멸균 단계(S300)는 제조된 흑삼분말 배지를 약 110~130℃에서 약 10~20분 동안 멸균하여, 원료 흑삼에 숙주하고 있을지 모를 미생물 또는 미생물의 포자 등을 완전 사멸시킬 수 있다.Next, in the sterilization step (S300), the prepared black ginseng powder medium is sterilized at about 110 to 130° C. for about 10 to 20 minutes, thereby completely killing microorganisms or spores of microorganisms that may be hosting the raw black ginseng.

또한, 멸균 단계(S300)는 후술할 배양 단계(S400) 시 유산균의 최적 배양 조건을 맞춰주기 위해 흑삼분말 배지에 당류를 더 첨가하여 혼합할 수 있다. 이때, 당류는 흑삼분말 배지의 당도가 4 내지 6brix가 되도록 첨가될 수 있으며, 5 brix가 되는 것이 바람직하다. 이는 상기 당도에서 균의 생육과 관능척도가 가장 우수하기 때문이다. 구체적인 일 예로, 상기 당류는 수크로즈일 수 있으며, 첨가시, 수크로즈 4.5% 와 정제수 300 mL를 수행할 수 있다.In addition, the sterilization step (S300) may be mixed by adding more sugar to the black ginseng powder medium in order to match the optimal culture conditions of the lactic acid bacteria during the culturing step (S400) to be described later. At this time, the sugar may be added so that the sugar content of the black ginseng powder medium is 4 to 6 brix, preferably 5 brix. This is because the growth and sensory scale of bacteria is the best at the sugar content. As a specific example, the saccharide may be sucrose, and upon addition, 4.5% sucrose and 300 mL of purified water may be used.

다음으로, 배양 단계(S400)는 흑삼분말 배지에 유산균을 접종하여 발효하는 것으로, 흑삼분말 배지를 40~60 rpm으로 교반하면서 흑삼 유산균 발효 조성물을 제조할 수 있다.Next, the culturing step (S400) is to inoculate the lactic acid bacteria in the black ginseng powder medium and ferment, while stirring the black ginseng powder medium at 40 to 60 rpm, it is possible to prepare a black ginseng lactic acid bacteria fermentation composition.

여기서, 유산균은 프로바이오틱스 활성(내산성, 내담즙성 등) 및 효소활성이 확보된 것이며, 또한 우수한 항균 활성을 나타내는 것으로서 한국미생물보존센터에 2018년 12월 12일 기탁된 기탁번호 KFCC11812P인 Lactobacillus plantarum SRCM 102370이다.Here, the lactic acid bacteria have probiotic activity (acid resistance, bile resistance, etc.) and enzyme activity, and also exhibit excellent antibacterial activity. to be.

상기 Lactobacillus plantarum SRCM 102370은 (재)발효미생물산업진흥원에서 알타리 김치로부터 분리 배양하여 확립된 균주로서 서열 상동성 검색 결과 Lactobacillus plantarum임을 확인하였으며, 특이적으로 내산성, 내담즙성 및 효소활성이 우수하고, 항균활성으로 식중독 유해 미생물에 대한 억제능이 우수하고, 진세노사이드를 전환시킬 수 있으며, 흑삼에 대한 발효 적성이 우수하다.The Lactobacillus plantarum SRCM 102370 is a strain established by separating and culturing Altari kimchi at the Fermentation Microbiology Industry Promotion Agency, and as a result of a sequence homology search, it was confirmed that it was Lactobacillus plantarum . Specifically, it has excellent acid resistance, bile resistance and enzyme activity, With antibacterial activity, it has excellent inhibition ability against harmful microorganisms from food poisoning, can convert ginsenosides, and has excellent fermentation aptitude for black ginseng.

상세하게, 배양 단계(S400) 시 흑삼분말 배지에 유산균을 3중량% 이상으로 접종하여 30 내지 40℃에서 45시간 이상 동안 발효시킬 수 있으며, 유산균을 3~7 중량%로 접종하여 37℃에서 48시간 동안 발효시키는 것이 바람직하다. 또한, 유산균을 5중량%로 접종하는 것이 가장 바람직하다.In detail, during the culture step (S400), lactic acid bacteria can be inoculated into the black ginseng powder medium at 3% by weight or more and fermented at 30 to 40°C for 45 hours or more, and lactic acid bacteria are inoculated at 3-7% by weight to 48°C at 37°C. It is preferred to ferment for a period of time. In addition, it is most preferable to inoculate the lactic acid bacteria at 5% by weight.

이때, 발효온도는 유산균 배양 결과에 따라 30 내지 37℃와 유사한 범위로 잡은 것이며, 상기 발효 온도를 벗어나면 발효 효율이 저하될 수 있어, 즉 25℃ 미만일 경우 효소활성이 낮아 발효에 많은 시간이 소요되어 충분한 발효가 이루어지지 않을 수 있고, 45℃를 초과할 경우 효소가 불활성화가 되어 발효 효율이 저하될 수 있기 때문에, 상기 문제를 벗어난 30 내지 40℃에서 발효시키는 것이 바람직하다. 또한, 발효 시간이 45시간 미만일 경우 발효가 충분하게 이루어지지 않을 수 있다.At this time, the fermentation temperature is set in a range similar to 30 to 37°C depending on the results of culturing the lactic acid bacteria, and if it is outside the fermentation temperature, the fermentation efficiency may decrease, that is, if it is less than 25°C, the enzyme activity is low and fermentation takes a lot of time. It may not be sufficiently fermented, and if it exceeds 45 ℃, the enzyme is inactivated and fermentation efficiency may be lowered, so it is preferable to ferment at 30 to 40 ℃ outside the above problem. In addition, if the fermentation time is less than 45 hours, the fermentation may not be performed sufficiently.

마지막으로, 열처리 단계(S500)는 배양 단계(S40)에서 제조된 흑삼 유산균 발효 조성물을 75 내지 85℃에서 0.1 내지 1 시간동안 열처리하는 단계이다.Finally, the heat treatment step (S500) is a step of heat-treating the black ginseng lactic acid bacteria fermentation composition prepared in the culturing step (S40) at 75 to 85° C. for 0.1 to 1 hour.

또한 본 발명의 다른 일 실시예에 따른 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물 제조방법에 있어, 상기 흑삼 분말은 세척 단계(S10); 예비 건조 단계(S20); 1차 증삼 단계(S30); 1차 건조 단계(S40); 2차 증삼 단계(S50); 2차 건조 단계(S60); 3차 증삼 단계(S70); 3차 건조 단계(S80);을 포함한다.In addition, in the method for producing fermented black ginseng having anticancer immune activity according to another embodiment of the present invention, the black ginseng powder is washed (S10); preliminary drying step (S20); First steaming step (S30); primary drying step (S40); Second steaming step (S50); secondary drying step (S60); 3rd steaming step (S70); It includes a tertiary drying step (S80).

먼저, 세척 단계(S10)는 인삼을 세척하는 단계이다.First, the washing step (S10) is a step of washing the ginseng.

상기 세척 단계(S10)는 인삼을 원통형 세척기에 넣고 흙, 비닐 등 이물질을 제거하는 단계이다. 세척 단계(S10) 시 최대한 인삼에 상처가 나지 않도록 주의하며, 인삼 피부에 반점이나 상처가 있는 것은 상품가치가 저하되고, 건조시에 부러지기 쉬우므로 세척후 품질이 양호한 것을 선별하는 것이 좋다.The washing step (S10) is a step of removing foreign substances such as soil and vinyl by putting ginseng in a cylindrical washing machine. In the washing step (S10), be careful not to damage the ginseng as much as possible, and if there is a spot or a wound on the ginseng skin, the product value decreases and it is easy to break when drying, so it is better to select a good quality product after washing.

다음으로, 예비 건조 단계(S20)는 상기 세척 단계(S10)에서 세척된 인삼을 30 내지 40℃에서 3 내지 10 시간 내부 건조하고, 햇볕에서 1 내지 2일 외부 건조하는 것이다. 이때, 내부 건조는 열풍 건조기를 사용하는 것일 수 있다.Next, in the preliminary drying step (S20), the ginseng washed in the washing step (S10) is internally dried at 30 to 40° C. for 3 to 10 hours, and externally dried in the sun for 1 to 2 days. In this case, the internal drying may be using a hot air dryer.

다음으로, 1차 증삼 단계(S30)는 상기 예비 건조 단계(S20)에서 건조된 인삼을 60 내지 70℃에서 10 내지 20 분 유지한 후, 90 내지 98℃으로 승온하고 2 내지 5 시간 증삼하는 단계이다.Next, the first steaming step (S30) is a step of maintaining the ginseng dried in the preliminary drying step (S20) at 60 to 70° C. for 10 to 20 minutes, then raising the temperature to 90 to 98° C. and steaming the ginseng for 2 to 5 hours. to be.

상기 1차 증삼 단계(S30) 시, 건조된 인삼을 증삼기에 투입하고 상온(약 20 내지 30℃)에서 상기 온도 범주로 신속하게 승온할 수 있다. 승온 속도는 10 ~ 100℃/분 일 수 있으며, 상기 승온 속도 범주를 만족하면 본 발명의 목적 달성에 좋다.At the time of the first steaming step (S30), the dried ginseng is put into the steaming machine and the temperature can be quickly raised from room temperature (about 20 to 30°C) to the above temperature range. The temperature increase rate may be 10 ~ 100 ℃ / min, if the temperature increase rate range is satisfied, it is good to achieve the object of the present invention.

또한 상기 1차 증삼 단계(S30) 시 온도가 90℃ 미만이면 살균처리 및 인삼(수삼)에 함유된 유해물질이나 독성의 제거가 원활하지 못하며, 98℃보다 높아도 더 이상의 효과도 없으면서 에너지만 낭비하게 되는 단점이 있으며, 특히 인삼의 특성상 증숙시에는 인체에 유용한 사포닌 함량이 증가하여 색상의 변화를 일으키는 것으로 상기한 온도에서의 사포닌 증가 현상이 가장 활발하며, 증삼 시간도 2시간 미만이거나 5시간을 초과하면 상기한 온도의 범위와 같은 문제점이 있기 때문이며, 본 공정에서 인삼의 색상이 갈색으로 변하게 되어 홍삼과 유사한 색상을 띄게 되는 것이다.In addition, if the temperature in the first steaming step (S30) is less than 90 ℃, it is difficult to sterilize and remove harmful substances or toxins contained in ginseng (fresh ginseng). In particular, due to the characteristics of ginseng, the content of saponin useful for the human body increases during steaming, causing a change in color. This is because there is a problem such as the above-mentioned temperature range, and in this process, the color of ginseng is changed to brown, so that it has a color similar to that of red ginseng.

다음으로, 1차 건조 단계(S40)는 1차 증삼 단계(S30)에서 증삼된 인삼을 20 내지 40℃에서 15 내지 24 시간 건조하는 단계이다.Next, the first drying step (S40) is a step of drying the ginseng steamed in the first steaming step (S30) at 20 to 40° C. for 15 to 24 hours.

1차 건조 단계(S40)는 상기 온도로 유지되는 건조기에서 건조시킴으로 인해, 인삼이 지니고 있는 향의 발산을 방지하여 인삼 고유의 향을 유지하기 위함이다. 건조 시간이 15 시간 미만이면 원하는 정도의 건조 효과가 없으며, 24 시간을 초과하면 과도한 건조로 인삼으로서의 가치가 저하되기 때문에 시간의 안배가 중요한 것이다.The primary drying step (S40) is to maintain the unique flavor of ginseng by preventing the divergence of the scent possessed by ginseng by drying in a dryer maintained at the above temperature. If the drying time is less than 15 hours, there is no desired drying effect, and if it exceeds 24 hours, the value of ginseng is reduced due to excessive drying, so the time arrangement is important.

다음으로, 2차 증삼 단계(S50)는 상기 1차 건조 단계(S40)에서 건조된 인삼을 90 내지 98℃로 승온하고 2 내지 5 시간 증삼하는 단계이다.Next, the second steaming step (S50) is a step of raising the temperature of the ginseng dried in the first drying step (S40) to 90 to 98°C and steaming the ginseng for 2 to 5 hours.

상기 2차 증삼 단계(S30) 시 온도가 90℃ 미만이면 살균처리 및 인삼(수삼)에 함유된 유해물질이나 독성의 제거가 원활하지 못하며, 98℃보다 높아도 더 이상의 효과도 없으면서 에너지만 낭비하게 되는 단점이 있으며, 특히 인삼의 특성상 증숙시에는 인체에 유용한 사포닌 함량이 증가하여 색상의 변화를 일으키는 것으로 상기한 온도에서의 사포닌 증가 현상이 가장 활발하며, 증삼 시간도 2시간 미만이거나 5시간을 초과하면 상기한 온도의 범위와 같은 문제점이 있기 때문이며, 본 공정에서 인삼의 색상이 진한 갈색으로 변하게 된다.If the temperature in the second steaming step (S30) is less than 90 ℃, sterilization and removal of harmful substances or toxins contained in ginseng (fresh ginseng) is not smooth, and even if it is higher than 98 ℃, there is no further effect and only energy is wasted There are disadvantages, especially due to the characteristics of ginseng, when the content of saponin useful for the human body increases and causes a change in color during steaming, the increase in saponin at the above temperature is the most active. This is because there is a problem such as the above temperature range, and the color of ginseng changes to dark brown in this process.

또한 2차 증삼 단계(S50)는 증삼후 원하는 성분별 함량, 색택을 증가시키기 위해 상기 2차 증삼 단계(S50)를 일 단위공정으로 하여 상기 단위공정을 복수회 수행할 수 있는데, 상기 단위공정 수행시 두번째 단위공정부터는 인삼을 동일한 온도에서 1 내지 3 시간 더 증삼할 수 있다.In addition, in the second steaming step (S50), the second steaming step (S50) may be performed a plurality of times as a unit process in order to increase the content and color of each desired component after steaming, and the unit process is performed. From the second unit process, ginseng can be steamed for 1 to 3 hours more at the same temperature.

다음으로, 2차 건조 단계(S60)는 상기 2차 증삼 단계(S50)에서 증삼된 인삼을 20 내지 40℃에서 15 내지 24 시간 건조하는 단계이다.Next, the secondary drying step (S60) is a step of drying the ginseng steamed in the second steaming step (S50) at 20 to 40° C. for 15 to 24 hours.

상기 2차 건조 단계(S60)는 상기 온도로 유지되는 건조기에서 건조시킴으로 인해, 인삼이 지니고 있는 향의 발산을 방지하여 인삼 고유의 향을 유지하기 위함이다. 건조 시간이 15 시간 미만이면 원하는 정도의 건조 효과가 없으며, 24 시간을 초과하면 과도한 건조로 인삼으로서의 가치가 저하되기 때문에 시간의 안배가 중요한 것이다.The secondary drying step (S60) is to maintain the unique flavor of ginseng by preventing the divergence of the scent possessed by ginseng by drying in a dryer maintained at the above temperature. If the drying time is less than 15 hours, there is no desired drying effect, and if it exceeds 24 hours, the value of ginseng is reduced due to excessive drying, so the time arrangement is important.

다음으로, 3차 증삼 단계(S70)는 상기 2차 건조 단계(S60)에서 건조된 인삼을 90 내지 98℃로 승온하고 2 내지 5 시간 증삼하는 단계이다.Next, the third steaming step (S70) is a step of raising the temperature of the ginseng dried in the second drying step (S60) to 90 to 98° C. and steaming the ginseng for 2 to 5 hours.

상기 3차 증삼 단계(S70) 시 온도가 90℃ 미만이면 살균처리 및 인삼(수삼)에 함유된 유해물질이나 독성의 제거가 원활하지 못하며, 98℃보다 높아도 더 이상의 효과도 없으면서 에너지만 낭비하게 되는 단점이 있으며, 특히 인삼의 특성상 증숙시에는 인체에 유용한 사포닌 함량이 증가하여 색상의 변화를 일으키는 것으로 상기한 온도에서의 사포닌 증가 현상이 가장 활발하며, 증삼 시간도 2시간 미만이거나 5시간을 초과하면 상기한 온도의 범위와 같은 문제점이 있기 때문이며, 본 공정에서 인삼의 색상이 검은 갈색 또는 검은색으로 변하게 되어 흑삼과 유사한 색상을 띄게 되는 것이다.If the temperature in the third steaming step (S70) is less than 90 ℃, sterilization and removal of harmful substances or toxins contained in ginseng (fresh ginseng) is not smooth, and even if it is higher than 98 ℃, there is no further effect and only energy is wasted. There are disadvantages, especially due to the characteristics of ginseng, when the content of saponin useful for the human body increases and causes a change in color during steaming, the increase in saponin at the above temperature is the most active. This is because there is a problem such as the above temperature range, and in this process, the color of ginseng is changed to black brown or black, so that it has a color similar to that of black ginseng.

또한 상기 3차 증삼 단계(S50)는 증삼후 원하는 성분별 함량, 색택을 증가시키기 위해 상기 3차 증삼 단계(S70)를 일 단위공정으로 하여 상기 단위공정을 복수회 수행할 수 있는데, 상기 단위공정 수행시 두번째 단위공정부터는 인삼을 동일한 온도에서 1 내지 3 시간 더 증삼할 수 있다.In addition, in the third steaming step (S50), the third steaming step (S70) may be performed a plurality of times as a unit process in order to increase the desired component content and color after steaming. When performing, from the second unit process, ginseng can be steamed for 1 to 3 hours more at the same temperature.

다음으로, 3차 건조 단계(S80)는 3차 증삼 단계(S70)에서 증삼한 인삼을 50 내지 60℃에서 15 내지 24 시간 건조하고, 건조기 또는 양건장에서 최종 수분함량이 15% 이하가 되도록 48 내지 55 시간 건조하여 흑삼을 얻는 단계이다.Next, in the third drying step (S80), the ginseng steamed in the third steaming step (S70) is dried at 50 to 60° C. for 15 to 24 hours, and the final moisture content is 15% or less in a dryer or in a dry field 48 It is a step of obtaining black ginseng by drying for 55 hours.

상기 3차 건조 단계(S80)는 상기 온도로 유지되는 건조기에서 건조시킴으로 인해, 인삼이 지니고 있는 향의 발산을 방지하여 인삼 고유의 향을 유지하기 위함이다. 건조 시간이 15 시간 미만이면 원하는 정도의 건조 효과가 없으며, 24 시간을 초과하면 과도한 건조로 인삼으로서의 가치가 저하되기 때문에 시간의 안배가 중요한 것이다.The third drying step (S80) is to prevent the divergence of the scent of ginseng by drying it in a dryer maintained at the above temperature to maintain the unique scent of ginseng. If the drying time is less than 15 hours, there is no desired drying effect, and if it exceeds 24 hours, the value of ginseng is reduced due to excessive drying, so the time arrangement is important.

또한 건조기 또는 양건장에서의 건조는 상술한 1차, 2차 건조 단계(S40, S60) 시에 완전한 수분을 제거할 수 없으므로 서서히 수분을 제거하기 위한 것으로, 건조시간이 48시간 미만이면 제품에 수분함량이 많아서 장기간 보관시 품질이 변질될 염려가 있으며, 55시간을 초과하면 과도한 건조로 상품의 중량이 감소될 뿐만 아니라, 제품 취급시에 외부의 충격 등에 의해 제품이 부러지기 쉬운 단점이 발생한다.In addition, drying in a dryer or dry house is intended to remove moisture gradually because it is impossible to completely remove moisture during the first and second drying steps (S40, S60) described above. There is a risk of quality deterioration when stored for a long period of time due to its high content, and when it exceeds 55 hours, the weight of the product is reduced due to excessive drying, and the product is easily broken due to external impact when handling the product.

또한, 본 발명은 상술한 흑삼 발효물 제조방법으로 제조된 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물을 포함한다.In addition, the present invention includes a black ginseng fermented product having anticancer immune activity prepared by the above-described fermented black ginseng manufacturing method.

이하 본 발명의 구체적인 설명을 위하여 하기의 실시예를 들어 상세하게 설명하겠으나, 본 발명이 다음 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the following examples will be used to describe the present invention in detail, but the present invention is not limited to the following examples.

(제조예) : 흑삼 분말 제조(Production Example): Black ginseng powder production

금산에서 생산되어 유통되는 5년근 인삼(수삼)을 구입한 후, 세척기에 넣고 10분간 총 3회 반복하여 세척하였다. 세척한 인삼을 열풍건조기에서 35℃에서 7 시간 건조한 다음, 햇볕에서 1일 건조하였다.After purchasing 5-year-old ginseng (fresh ginseng) produced and distributed in Geumsan, it was placed in a washing machine and washed repeatedly for a total of 3 times for 10 minutes. The washed ginseng was dried in a hot air dryer at 35° C. for 7 hours, and then dried in the sun for 1 day.

다음으로, 건조 임삼을 증삼기에 투입하고 20℃/분 승온속도로 실온에서 65℃로 급속하게 승온하여 15분간 유지한 다음, 목적온도 95℃까지 재차 승온한 다음 3시간 동안 1차 증삼하였다.Next, dried ginseng was put into a steam ginseng machine, and the temperature was rapidly raised from room temperature to 65° C. at a heating rate of 20° C./min, maintained for 15 minutes, and then heated again to the target temperature of 95° C., followed by the first steaming for 3 hours.

1차 증삼된 인삼을 증삼기에서 꺼내어 약 30℃에서 1일간 건조하였다. 건조된 인삼을 다시 증삼기에 투입하고 목적온도 95℃까지 승온하여 3시간동안 2차 증삼하였다.The first steamed ginseng was taken out of the steam ginseng machine and dried at about 30°C for 1 day. The dried ginseng was put into the steam ginseng machine again, and the temperature was raised to the target temperature of 95°C, followed by second steaming for 3 hours.

2차 증삼된 인삼을 증삼기에서 꺼내어 약 30℃에서 1일간 건조하였다. 건조된 인삼을 다시 증삼기에 투입하고 목적온도 95℃까지 승온하여 3시간동안 3차 증삼하였다.The second steamed ginseng was taken out of the steam ginseng machine and dried at about 30° C. for 1 day. The dried ginseng was put into the steam ginseng machine again, and the temperature was raised to the target temperature of 95° C., followed by third steaming for 3 hours.

3차 증삼된 인삼을 꺼내어 약 55℃의 중온으로 유지되는 건조실에서 1일간 건조하여 표면에 잔존하는 수분을 제거하였다. 이후, 양건장에서 최종 수분이 15%이하가 되도록 건조하여 흑삼을 얻었다. 건조된 흑삼은 분쇄기로 분쇄하여 흑삼분말로 제조하였다.The tertiary steamed ginseng was taken out and dried in a drying room maintained at a medium temperature of about 55° C. for 1 day to remove moisture remaining on the surface. Thereafter, black ginseng was obtained by drying in a dry field so that the final moisture was 15% or less. The dried black ginseng was pulverized with a grinder to prepare black ginseng powder.

(실시예)(Example)

상기 제조예에서 얻은 흑삼 분말 1 중량%(30 g)과 정제수 2,550 mL을 혼합하여 흑삼분말 배지를 제조하였다. 상기 흑삼분말 배지에 5N NaOh를 첨가하여 pH를 4.0에서 7.0으로 중화시켰다. 중화된 배지를 약 121℃에서 15분간 멸균하되, 수크로스 4.5중량% 첨가된 정제수 300 mL를 첨가하여 수행하였다.Black ginseng powder medium was prepared by mixing 1 wt% (30 g) of black ginseng powder obtained in Preparation Example and 2,550 mL of purified water. 5N NaOh was added to the black ginseng powder medium to neutralize the pH from 4.0 to 7.0. The neutralized medium was sterilized at about 121° C. for 15 minutes, and 300 mL of purified water containing 4.5 wt% of sucrose was added.

멸균처리된 배지에 Lactobacillus plantarum SRCM 102370 유산균을 5중량%로 접종하여 37℃에서 48시간 동안 발효시켰다. 마지막으로 80℃에서 30분 동안 열처리하여 당도가 5brix인 최종 흑삼 발효물을 제조하였다.Lactobacillus plantarum SRCM 102370 Lactobacillus plantarum SRCM 102370 lactic acid bacteria were inoculated in the sterilized medium at 5% by weight and fermented at 37° C. for 48 hours. Finally, the final fermented black ginseng product having a sugar content of 5brix was prepared by heat treatment at 80° C. for 30 minutes.

(평가예)(evaluation example)

1) 흑삼 발효물의 세포생존율 분석 (MTT assay)1) Cell viability analysis of fermented black ginseng (MTT assay)

상기 실시예에서 제조된 흑삼 발효물에 대한 세포생존율 실험을 통하여, 흑삼 발효물이 HeLa(인간자궁암세포주), HL-60(인간전골수성백혈병세포주), Molt-4(인간림프아구성백혈병세포주) 및 AGS(인간위암세포주)의 생존율에 미치는 영향(암세포 사멸)을 in vitro 배양세포주 실험계로 확인하였다.Through the cell viability test for the fermented black ginseng prepared in the above example, the fermented black ginseng was HeLa (human uterine cancer cell line), HL-60 (human promyelocytic leukemia cell line), Molt-4 (human lymphoblastic leukemia cell line) And the effect (cancer cell death) on the survival rate of AGS (human gastric cancer cell line) was confirmed with an in vitro cultured cell line test system.

도 4는 상기 실시예에서 제조된 흑삼 발효물이 HeLa(인간자궁암세포주)의 생존율에 미치는 영향을 도시한 도면이고, 도 5는 상기 실시예에서 제조된 흑삼 발효물이 HL-60(인간전골수성백혈병세포주)의 생존율에 미치는 영향을 도시한 도면이고, 도 6은 상기 실시예에서 제조된 흑삼 발효물이 Molt-4(인간림프아구성백혈병세포주)의 생존율에 미치는 영향을 도시한 도면이며, 도 7은 상기 실시예에서 제조된 흑삼 발효물이 AGS(인간위암세포주)의 생존율에 미치는 영향을 도시한 도면이다.4 is a view showing the effect of the black ginseng fermented product prepared in the above example on the survival rate of HeLa (human uterine cancer cell line), and FIG. It is a view showing the effect on the survival rate of leukemia cell line), and FIG. 6 is a view showing the effect of the black ginseng fermented product prepared in the above example on the survival rate of Molt-4 (human lymphoblastic leukemia cell line), FIG. 7 is a view showing the effect of the black ginseng fermented product prepared in the above example on the survival rate of AGS (human gastric cancer cell line).

도 4 내지 도 7에 도시된 바와 같이, 흑삼 발효물의 암세포 생존율에 대한 실험 결과는, 실험에 사용한 4종류의 암세포 (HeLa, HL-60, Molt-4, AGS) 생존율에 대한 흑삼 발효물의 효과를 살펴보기 위하여 각각의 세포주에 농도별(1 ~ 1000 μg/ml)로 24시간 동안 처리한 후 세포 생존율을 측정한 결과, AGS 세포주를 제외한 나머지 전 세포주에서 유의적으로 세포 생존율을 감소시키고 있음을 관찰하였고, 특히 HeLa세포주가 가장 유의적으로 농도의존적인 세포생존율 감소효과가 나타나서 항암활성이 있음을 확인하였다.As shown in Figures 4 to 7, the experimental results for the cancer cell survival rate of the fermented black ginseng were the effect of the fermented black ginseng on the survival rate of the four types of cancer cells (HeLa, HL-60, Molt-4, AGS) used in the experiment. As a result of measuring the cell viability after treating each cell line at each concentration (1 ~ 1000 μg/ml) for 24 hours, it was observed that the cell viability was significantly reduced in all cell lines except for the AGS cell line. In particular, the HeLa cell line showed the most significant concentration-dependent cell viability reduction effect, confirming that it had anticancer activity.

2) 아폽토시스 관련 단백질 발현 (Western blot analysis)2) Apoptosis-related protein expression (Western blot analysis)

HeLa 자궁암세포주에서 apoptosis 관련 인자인 Bax, Bcl-2, P53, PCNA 등의 단백질 발현 패턴을 측정하기 위해 실험 진행을 위한 다양한 조건을 수립해서 각각의 단백질 발현 패턴의 결과를 확인하였다.To measure the expression patterns of proteins such as Bax, Bcl-2, P53, and PCNA, which are factors related to apoptosis in HeLa uterine cancer cell line, various conditions were established for the experiment and the results of each protein expression pattern were confirmed.

도 8은 상기 실시예에서 제조된 흑삼 발효물이 암세포의 아폽토시스를 촉진하는 효과를 보여주는 도면이다.8 is a view showing the effect of the black ginseng fermented product prepared in the above example to promote apoptosis of cancer cells.

도 8에 도시된 바와 같이, HeLa 세포주에 흑삼시료를 처리하고 24시간 동안 배양한 후 apoptosis관련 단백질(PCNA, Bcl-2, Bax, p53)의 발현을 확인한 결과 PCNA, Bcl-2 단백질은 흑삼시료 처리군에서 농도의존적으로 감소하였고, Bax, p53단백질은 증가하였다. 따라서 흑삼이 암세포의 아폽토시스를 촉진하는 효과를 가지고 있는 것으로 추정된다.As shown in FIG. 8, the expression of apoptosis-related proteins (PCNA, Bcl-2, Bax, p53) was confirmed after the HeLa cell line was treated with black ginseng samples and cultured for 24 hours. As a result, PCNA and Bcl-2 proteins were found in the black ginseng sample. It decreased in a concentration-dependent manner in the treatment group, and Bax and p53 proteins increased. Therefore, it is presumed that black ginseng has the effect of promoting apoptosis of cancer cells.

3) Cytokine 분비 활성 (ELISA assay) 3) Cytokine secretion activity (ELISA assay)

흑삼 발효물을 6주 동안 생쥐(C57BL/6J)에 경구섭취시켜 수집한 혈청 중 항암 면역 반응계를 조절하는 사이토카인 (IL-2, IL-4, IFN-γ, TNF-α)의 분비 패턴을 분석하여 항암활성에 미치는 흑삼의 효과를 확인하였다.The secretion pattern of cytokines (IL-2, IL-4, IFN-γ, TNF-α) regulating the anticancer immune system in the serum collected by oral ingestion of black ginseng fermented product to mice (C57BL/6J) for 6 weeks The effect of black ginseng on anticancer activity was confirmed by analysis.

도 9 내지 도 12는 상기 실시예에서 제조된 흑삼 발효물이 항암활성에 미치는 흑삼의 효과를 보여주는 도면이다.9 to 12 are views showing the effect of black ginseng on the anticancer activity of the fermented black ginseng prepared in the above example.

도 9 내지 도 12에 보는 바와 같이, 흑삼 발효물 시료를 4주 동안 생쥐(C57BL/6J)에 경구투여(250-500mg/mouse)로 섭취시켜 얻은 혈청내에서 항암면역 반응계를 조절하는 사이토카인 (IL-2, IL-4, IFN-γ, TNF-α)을 분석한 결과 전반적으로 증가하는 경향을 보였으며 그중 IL-2와 IFN-γ활성은 유의적으로 증가하였으며, IL-4활성은 감소하였다. 이러한 결과는 흑삼이 주로 Th1림프구를 자극해서 항암면역 활성을 주도하고 있는 것을 반영하는 결과라 평가된다.As shown in FIGS. 9 to 12, cytokines ( IL-2, IL-4, IFN-γ, TNF-α) showed an overall tendency to increase, among which IL-2 and IFN-γ activity increased significantly, and IL-4 activity decreased. did. These results are evaluated to reflect the fact that black ginseng mainly stimulates Th1 lymphocytes to lead anticancer immune activity.

본 명세서에서 설명되는 실시예와 첨부된 도면은 본 발명에 포함되는 기술적 사상의 일부를 예시적으로 설명하는 것에 불과하다. 따라서, 본 명세서에 개시된 실시예들은 본 발명의 기술적 사상을 한정하기 위한 것이 아니라 설명하기 위한 것이므로, 이러한 실시예에 의하여 본 발명의 기술 사상의 범위가 한정되는 것이 아님은 자명하다. 본 발명의 명세서 및 도면에 포함된 기술적 사상의 범위 내에서 당해 기술분야에 있어서의 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 유추할 수 있는 변형예와 구체적인 실시예는 모두 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.The embodiments described in this specification and the accompanying drawings are merely illustrative of some of the technical ideas included in the present invention. Accordingly, since the embodiments disclosed in the present specification are for explanation rather than limitation of the technical spirit of the present invention, it is obvious that the scope of the technical spirit of the present invention is not limited by these embodiments. Modifications and specific embodiments that can be easily inferred by a person of ordinary skill in the art within the scope of the technical idea included in the specification and drawings of the present invention are included in the scope of the present invention. will have to be interpreted.

Claims (3)

정제수에 흑삼 분말을 첨가하여 흑삼 분말 배지를 제조하는 배지 제조 단계(S100);
산성의 흑삼분말 배지 pH를 중성 또는 염기성으로 보정하는 pH 보정 단계(S200);
흑삼분말 배지를 멸균하는 멸균 단계(S300);
흑삼분말 배지에 유산균을 접종하여 발효하는 배양 단계(S400) 및
흑삼 유산균 발효 조성물을 열처리하는 단계(S500)를 포함하되,
상기 배지 제조 단계(S100)에서 상기 흑삼분말은
인삼을 세척하는 세척 단계(S10);
세척된 인삼을 건조하는 예비 건조 단계(S20);
건조된 인삼을 60 내지 70℃에서 10 내지 20 분 유지한 후, 90 내지 98℃으로 승온하고 2 내지 5 시간 증삼하는 증삼 단계(S30);
증삼된 인삼을 건조하는 1차 건조 단계(S40);
건조된 인삼을 90 내지 98℃로 승온하고 2 내지 5 시간 증삼하는 2차 증삼 단계(S50);
증삼된 인삼을 건조하는 2차 건조 단계(S60);
건조된 인삼을 90 내지 98℃로 승온하고 2 내지 5 시간 증삼하는 3차 증삼 단계(S70) 및
증삼된 인삼을 최종 수분함량이 15% 이하가 되도록 건조하는 3차 건조 단계(S80)를 포함하고,
상기 pH 보정 단계(S200)에서 상기 염기는 KOH, NaOH, LiOH, Ba(OH)2, Mg(OH)2 및 Ca(OH)2 중에서 선택된 1종 이상의 물질을 포함하며 상기 염기의 농도는 1 ~ 10 N 이고,
상기 열처리하는 단계(S500)는
상기 배양 단계(S400)에서 제조된 흑삼 유산균 발효 조성물을 75 내지 85℃에서 0.1 내지 1 시간 동안 열처리하는 것을 포함하고,
상기 예비 건조 단계(S20)는
상기 세척 단계(S10)에서 세척된 인삼을 30 내지 40℃에서 3 내지 10 시간 내부 건조하고, 햇볕에서 1 내지 2일 외부 건조하는 것을 포함하고,
상기 1차 건조 단계(S40) 및 2차 건조 단계(S60)는
증삼된 인삼을 20 내지 40℃에서 15 내지 24 시간 건조하는 것을 포함하며,
상기 3차 건조 단계(S80)는
3차 증삼 단계(S70)에서 증삼한 인삼을 50 내지 60℃에서 15 내지 24 시간 건조하고, 건조기 또는 양건장에서 최종 수분함량이 15% 이하가 되도록 48 내지 55 시간 건조하는 것을 특징으로 하는 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물 제조방법.
A medium preparation step of adding black ginseng powder to purified water to prepare a black ginseng powder medium (S100);
pH correction step (S200) of correcting the acidic black ginseng powder medium pH to neutral or basic;
Sterilizing the black ginseng powder medium (S300);
A culture step (S400) of inoculating and fermenting lactic acid bacteria in the black ginseng powder medium and
Including the step of heat-treating the black ginseng lactic acid bacteria fermentation composition (S500),
In the medium manufacturing step (S100), the black ginseng powder is
A washing step of washing the ginseng (S10);
A preliminary drying step of drying the washed ginseng (S20);
After maintaining the dried ginseng at 60 to 70 ° C. for 10 to 20 minutes, the temperature is raised to 90 to 98 ° C. and a steaming step of steaming ginseng for 2 to 5 hours (S30);
A primary drying step of drying the steamed ginseng (S40);
The second steaming step (S50) of raising the temperature of the dried ginseng to 90 to 98 ℃ and steaming the dried ginseng for 2 to 5 hours;
Secondary drying step of drying the steamed ginseng (S60);
The third steaming step (S70) of raising the temperature of the dried ginseng to 90 to 98 ° C and steaming the ginseng for 2 to 5 hours and
A third drying step (S80) of drying the steamed ginseng so that the final moisture content is 15% or less,
In the pH correction step (S200), the base includes at least one material selected from KOH, NaOH, LiOH, Ba(OH) 2 , Mg(OH) 2 and Ca(OH) 2 , and the concentration of the base is 1 to 10 N,
The heat treatment step (S500) is
It comprises heat-treating the black ginseng lactic acid bacteria fermentation composition prepared in the culturing step (S400) at 75 to 85° C. for 0.1 to 1 hour,
The preliminary drying step (S20) is
It includes internal drying of the ginseng washed in the washing step (S10) at 30 to 40 ° C. for 3 to 10 hours, and external drying in the sun for 1 to 2 days,
The primary drying step (S40) and the secondary drying step (S60) are
It includes drying the steamed ginseng at 20 to 40° C. for 15 to 24 hours,
The third drying step (S80) is
Anticancer immunity, characterized in that the ginseng steamed in the third steaming step (S70) is dried at 50 to 60° C. for 15 to 24 hours, and dried for 48 to 55 hours so that the final moisture content is 15% or less in a dryer or in a dry field A method for producing fermented black ginseng with activity.
삭제delete 제 1항에 따른 제조방법으로 제조된 항암면역 활성을 가지는 흑삼 발효물.A fermented black ginseng product having anticancer immune activity prepared by the method according to claim 1 .
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