KR102401077B1 - Pharmaceutical Composition for preventing or treating cancer comprising Squirrel fibroma virus and Reovirus - Google Patents
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Abstract
본 발명은 다람쥐 섬유종 바이러스(Squirrel fibroma virus) 및 리오바이러스(Reovirus)의 암 예방 또는 치료 용도에 관한 것이다. 본 발명의 다람쥐 섬유종 바이러스 및 리오바이러스, 또는 상기 두 바이러스로 처리된 생물학적 샘플을 포함하는 약학적 조성물은 인간의 정상세포에는 아무런 영향을 미치지 않으면서 암세포에 특이적으로 감염하여 종양용해 활성을 나타내 암세포의 성장을 억제하는 효능이 있다.The present invention relates to the use of Squirrel fibroma virus and reovirus for preventing or treating cancer. The pharmaceutical composition comprising the squirrel fibroma virus and reovirus of the present invention, or a biological sample treated with the two viruses, exhibits oncolytic activity by specifically infecting cancer cells without affecting normal human cells. has the effect of inhibiting the growth of
Description
본 발명은 다람쥐 섬유종 바이러스(Squirrel fibroma virus) 및 리오바이러스(Reovirus)의 암 예방 또는 치료 용도에 관한 것이다.The present invention relates to the use of Squirrel fibroma virus and reovirus for preventing or treating cancer.
산업의 발달, 지구 생태계 및 식생활의 변화 등으로 과거에 비하여 암 발생률은 계속해서 증가하고 있어, 항암제에 대한 연구는 계속해서 성장하고 있다.The incidence of cancer continues to increase compared to the past due to industrial development, changes in the global ecosystem and diet, etc., and research on anticancer drugs continues to grow.
현재 사용되고 있는 의약품은 화학요법제와 생물학적 제제로 나뉠 수 있으며, 유전자, 효소, 백신 및 바이러스 등을 이용한 생물학적 항암제는 실용화 단계에서는 아직 미흡한 상태이고, 화학제제는 약리작용 및 독성에 의한 부작용이 다양하게 나타나는 문제점이 지적되고 있다.Pharmaceuticals currently used can be divided into chemotherapeutic agents and biological agents, and biological anticancer drugs using genes, enzymes, vaccines, and viruses are still insufficient at the commercialization stage, and chemical agents have various side effects due to pharmacological action and toxicity. Problems appearing are pointed out.
이에 암을 치료하기 위하여 외과적 요법, 방사선 요법 및 화학적 요법 등과 같은 다양한 치료방법이 연구되고 있으나, 아직까지 암의 완전 치료에는 이르지 못하고 있는 실정이다. 이중에서, 외과적 요법과 방사선 요법은 암 발생의 초기 단계에서 유용한 방법이기 때문에 초기에 감지하기가 힘든 암의 경우에는 화학적 요법에 대한 의존도가 점차 증가되고 있으며, 화학적 요법은 50년 이상의 역사를 가지고 있고, 현재까지 수백여 종의 항암제가 개발되어 임상에서 사용되어 왔으나, 임상적으로 만족할만한 효과를 얻는 경우는 아직 많지 않은 실정이다.Accordingly, various treatment methods such as surgical therapy, radiation therapy, and chemotherapy have been researched to treat cancer, but the complete treatment of cancer has not yet been achieved. Of these, since surgical therapy and radiation therapy are useful methods in the early stages of cancer development, the dependence on chemotherapy is gradually increasing for cancers that are difficult to detect in the early stages, and chemotherapy has a history of more than 50 years. Hundreds of anticancer drugs have been developed and used in clinical practice so far, but there are still few cases in which clinically satisfactory effects are obtained.
바이러스는 생물요법제 중의 하나로서, 종양 세포 내 유전적 변이를 이용하여 공격하는 표적 치료제의 개념을 가진다. 항암 바이러스는 암세포에서 선택적으로 증식되며, 종양괴사와 사멸을 유도한다.Viruses are one of the biotherapeutic agents and have the concept of targeted therapeutics that attack using genetic mutations in tumor cells. Anticancer virus selectively proliferates in cancer cells and induces tumor necrosis and death.
항암 바이러스(oncolytic virus)는 암의 치료에 이용되는 바이러스로, 이를 이용한 항암용법을 OV요법(oncolytic viral therapy)라고 한다. 야생형 종양 파괴 바이러스(Wild type oncolytic virus)를 이용한 암 치료 연구는 기존의 치료 유전자(Therapeutic gene)를 바이러스에 삽입하여 치료 유전자의 발현에 의한 종양 살상효과를 주로 보고자 하는 유전자 치료(Gene therapy)와는 구별되는 것으로, 야생형 종양 파괴 바이러스에 대한 연구는 일부 야생형 바이러스가 내재적으로 강력한 종양 파괴 능력을 가진다는 사실이 알려지면서 시작되었다.An oncolytic virus is a virus used for the treatment of cancer. Cancer treatment research using wild type oncolytic virus is distinguished from gene therapy, which mainly aims to see the oncolytic effect of the expression of a therapeutic gene by inserting an existing therapeutic gene into the virus. As a result, research on wild-type tumor-destroying viruses began as it became known that some wild-type viruses have inherently powerful tumor-destroying abilities.
여러 종류의 바이러스에 의한 자연감염으로 인하여 암이 자연적으로 치료된다는 보고는 오래 전부터 있어 왔으며, 본격적으로 야생형 바이러스에 의한 종양특이적 살상 기작에 관한 연구가 시작된 이래, 야생형 리오바이러스(Reovirus)를 이용한 암 치료 연구는 임상 3상 적용에까지 이르렀다. 그 외 아데노바이러스, 폴리오바이러스, 단순포진바이러스, 수포성구내염바이러스 등이 개발되었으며, 바이러스의 효능 및 안정성을 높이기 위한 방법이 연구 중에 있다.There have been reports for a long time that cancer is treated naturally due to natural infection by various types of viruses. Therapeutic studies have even reached phase 3 clinical application. In addition, adenovirus, poliovirus, herpes simplex virus, vesicular stomatitis virus, etc. have been developed, and methods to increase the efficacy and stability of the virus are being studied.
이에 본 발명자들은 효과적인 종양 파괴 바이러스를 찾기 위한 연구를 계속하던 중, 다람쥐 섬유종 바이러스(Squirrel fibroma virus) 및 리오바이러스(Reovirus)를 병용 사용하는 경우, 숙주 특이성으로 인해 인간의 정상세포에는 감염하지 않고 암세포에만 감염하는 높은 안정성과 종양 파괴력을 나타냄을 확인하였을 뿐 아니라, 다람쥐 섬유종 바이러스가 리오바이러스와 병용하였을 때 바이러스 단독요법보다 매우 우수한 시너지 효과를 나타낼 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.Therefore, while the present inventors were continuing their research to find an effective tumor-destroying virus, when squirrel fibroma virus and reovirus are used in combination, due to host specificity, normal human cells are not infected and cancer cells are not infected. The present invention was completed by confirming that it exhibits high stability and tumor destructive power for infecting only the squirrel fibroid virus when used in combination with reovirus and can exhibit a very superior synergistic effect than virus monotherapy.
따라서, 본 발명의 목적은 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer.
그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당해 기술 분야의 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, the technical problem to be achieved by the present invention is not limited to the above-mentioned problems, and other problems not mentioned will be clearly understood by those skilled in the art from the following description.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (a) 다람쥐 섬유종 바이러스(Squirrel fibroma virus) 및 리오바이러스(Reovirus); 또는 (b) (a)로 처리된 생물학적 샘플을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.In order to achieve the object of the present invention, the present invention is (a) squirrel fibroma virus (Squirrel fibroma virus) and reovirus (Reovirus); Or (b) provides a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer comprising the biological sample treated in (a) as an active ingredient.
또한, 본 발명은 (a) 다람쥐 섬유종 바이러스 및 리오바이러스; 또는 (b) (a)로 처리된 생물학적 샘플을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 암의 치료방법을 제공한다.The present invention also relates to (a) squirrel fibroma virus and reovirus; or (b) administering to the subject the biological sample treated in (a).
뿐만 아니라, 본 발명은 (a) 다람쥐 섬유종 바이러스 및 리오바이러스; 또는 (b) (a)로 처리된 생물학적 샘플의 암의 예방, 개선 또는 치료 용도를 제공한다.In addition, the present invention relates to (a) squirrel fibroma virus and reovirus; or (b) the use of the biological sample treated with (a) for preventing, ameliorating or treating cancer.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 암은 위암, 신경교종, 폐암, 간암, 흑색종, 전립선암, 혈액암, 유방암, 대장암, 췌장암, 뇌암, 난소암 및 이들의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In one embodiment of the present invention, the cancer is selected from the group consisting of gastric cancer, glioma, lung cancer, liver cancer, melanoma, prostate cancer, blood cancer, breast cancer, colorectal cancer, pancreatic cancer, brain cancer, ovarian cancer, and combinations thereof. may be, but is not limited thereto.
본 발명의 다른 구현예에 있어서, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스 또는 리오바이러스는 암 치료용 외래 유전자를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the squirrel fibroid virus or reovirus may include a foreign gene for cancer treatment, but is not limited thereto.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 암 치료용 외래 유전자는 다람쥐 섬유종 바이러스 유전자 또는 리오바이러스 유전자 내 복제필요 유전자부위(essential region) 또는 복제불필요 유전자부위(non-essential region)에 삽입되어 항암 활성을 증가시킬 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the foreign gene for cancer treatment is inserted into an essential region or a non-essential region in the squirrel fibroma virus gene or reovirus gene to have anticancer activity can be increased, but is not limited thereto.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스 또는 리오바이러스는 바이러스 운반용 세포(virus carrier cells)에 탑재되어 생체 내로 투여될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the squirrel fibroid virus or reovirus may be loaded in virus carrier cells and administered in vivo, but is not limited thereto.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스는 102 내지 1013 PFU로 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the squirrel fibroid virus may be included in an amount of 10 2 to 10 13 PFU, but is not limited thereto.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 리오바이러스는 102 내지 1015 PFU로 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the reovirus may be included in 10 2 to 10 15 PFU, but is not limited thereto.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스 및 리오바이러스의 역가비는 1:1 내지 1000:1 (리오바이러스:다람쥐 섬유종 바이러스)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the titer ratio of the squirrel fibroid virus and the reovirus may be 1:1 to 1000:1 (reovirus: squirrel fibroma virus), but is not limited thereto.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스 및 리오바이러스의 역가비는 1:1 내지 1:1000 (리오바이러스:다람쥐 섬유종 바이러스)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the titer ratio of the squirrel fibroid virus and the reovirus may be 1:1 to 1:1000 (reovirus: squirrel fibroma virus), but is not limited thereto.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 생물학적 샘플은 엑스 비보(ex vivo) 생물학적 샘플에 대해 다람쥐 섬유종 바이러스 및 리오바이러스의 유효량을 적용하여 복수개의 암세포를 사멸시키고자 제조된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the biological sample may be prepared to kill a plurality of cancer cells by applying effective amounts of squirrel fibroma virus and reovirus to an ex vivo biological sample, but is limited thereto it is not going to be
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 생물학적 샘플은 골수 샘플, 지방 유래 줄기세포 샘플 또는 혈액 샘플일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the biological sample may be a bone marrow sample, an adipose-derived stem cell sample, or a blood sample, but is not limited thereto.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스는 리오바이러스와 동시에(simultaneous), 별도로(separate) 또는 순차적(sequential)으로 투여될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the squirrel fibroid virus may be administered simultaneously (simultaneous), separately (separate) or sequentially (sequential) with the reovirus, but is not limited thereto.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스 또는 리오바이러스는 BHK(baby hamster kidney) 세포를 이용하여 수득한 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the squirrel fibroid virus or reovirus may be obtained using baby hamster kidney (BHK) cells, but is not limited thereto.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 약학적 조성물은 화학요법제 또는 면역요법제를 추가로 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the pharmaceutical composition may further include a chemotherapeutic agent or an immunotherapeutic agent, but is not limited thereto.
본 발명의 다람쥐 섬유종 바이러스 및 리오바이러스, 또는 상기 두 바이러스로 처리된 생물학적 샘플을 포함하는 약학적 조성물은 인간의 정상세포에는 아무런 영향을 미치지 않으면서 암세포에 특이적으로 감염하여 종양용해 활성(oncolytic activity)을 나타내 암세포의 성장을 억제하는 효능이 있다.The pharmaceutical composition comprising the squirrel fibroid virus and reovirus of the present invention, or a biological sample treated with the two viruses, specifically infects cancer cells without affecting normal human cells and has oncolytic activity (oncolytic activity) ) to inhibit the growth of cancer cells.
또한, 다람쥐 섬유종 바이러스와 리오바이러스의 병용 시 바이러스 단독요법보다 매우 우수한 시너지 효과를 나타내기 때문에, 본 발명은 암의 예방 및 치료에 유용하게 이용될 수 있다.In addition, since the combination of squirrel fibroid virus and reovirus exhibits a very superior synergistic effect than virus monotherapy, the present invention can be usefully used for the prevention and treatment of cancer.
도 1은 위암 세포에서의 다람쥐 섬유종 바이러스와 리오바이러스 병용의 상승적 종양용해성 효과를 나타낸 것으로, 위암 세포(MKN28, AGS, SNU668)에 무처리(Mock), 리오바이러스 단독(REO), 다람쥐 섬유종 바이러스 단독(SFV) 및 리오바이러스와 다람쥐 섬유종 바이러스의 병용(REO+SFV)으로 감염 시 암세포의 사멸을 CPE assay로 확인하고, WST assay를 통해 그래프로 나타낸 도이다.
도 2는 신경교종 세포에서의 다람쥐 섬유종 바이러스와 리오바이러스 병용의 상승적 종양용해성 효과를 나타낸 것으로, 신경교종 세포(U87MG, SNU489)에 무처리(Mock), 리오바이러스 단독(REO), 다람쥐 섬유종 바이러스 단독(SFV) 및 리오바이러스와 다람쥐 섬유종 바이러스의 병용(REO+SFV)으로 감염 시 암세포의 사멸을 CPE assay로 확인하고, WST assay를 통해 그래프로 나타낸 도이다.
도 3은 폐암 세포에서의 다람쥐 섬유종 바이러스와 리오바이러스 병용의 상승적 종양용해성 효과를 나타낸 것으로, 폐암 세포(A549)에 무처리(Mock), 리오바이러스 단독(REO), 다람쥐 섬유종 바이러스 단독(SFV) 및 리오바이러스와 다람쥐 섬유종 바이러스의 병용(REO+SFV)으로 감염 시 암세포의 사멸을 CPE assay로 확인하고, WST assay를 통해 그래프로 나타낸 도이다.
도 4는 간암 세포에서의 다람쥐 섬유종 바이러스와 리오바이러스 병용의 상승적 종양용해성 효과를 나타낸 것으로, 간암 세포(Hep3B)에 무처리(Mock), 리오바이러스 단독(REO), 다람쥐 섬유종 바이러스 단독(SFV) 및 리오바이러스와 다람쥐 섬유종 바이러스의 병용(REO+SFV)으로 감염 시 암세포의 사멸을 CPE assay로 확인하고, WST assay를 통해 그래프로 나타낸 도이다.
도 5는 흑색종에서의 다람쥐 섬유종 바이러스와 리오바이러스 병용의 상승적 종양용해성 효과를 인 비보 상에서 보여주는 것으로, B16F10 흑색종 동종이식으로 유도된 C57BL/6 암컷 마우스에 리오바이러스 단독(REO), 다람쥐 섬유종 바이러스 단독(SFV) 및 리오바이러스와 다람쥐 섬유종 바이러스의 병용(REO+SFV)으로 감염시킨 후 종양의 크기 변화를 측정하여 그래프로 나타낸 도이다.1 shows the synergistic oncolytic effect of the combination of squirrel fibroma virus and reovirus in gastric cancer cells, and untreated (Mock), reovirus alone (REO), and squirrel fibroma virus alone on gastric cancer cells (MKN28, AGS, SNU668). (SFV) and the combination of reovirus and squirrel fibroma virus (REO + SFV) confirmed the death of cancer cells by CPE assay, and is a graph showing the WST assay.
Figure 2 shows the synergistic oncolytic effect of the combination of squirrel fibroma virus and reovirus in glioma cells, untreated (Mock), reovirus alone (REO), and squirrel fibroma virus alone on glioma cells (U87MG, SNU489). (SFV) and the combination of reovirus and squirrel fibroma virus (REO + SFV) confirmed the death of cancer cells by CPE assay, and is a graph showing the WST assay.
3 shows the synergistic oncolytic effect of the combination of squirrel fibroma virus and reovirus in lung cancer cells, and untreated (Mock), reovirus alone (REO), squirrel fibroma virus alone (SFV) and lung cancer cells (A549). It is a diagram showing cancer cell death by CPE assay and graphically through WST assay when infected with a combination of reovirus and squirrel fibroma virus (REO+SFV).
Figure 4 shows the synergistic oncolytic effect of the combination of squirrel fibroma virus and reovirus in liver cancer cells, untreated (Mock), reovirus alone (REO), squirrel fibroma virus alone (SFV) and liver cancer cells (Hep3B). It is a diagram showing cancer cell death by CPE assay and graphically through WST assay when infected with a combination of reovirus and squirrel fibroma virus (REO+SFV).
Figure 5 shows in vivo the synergistic oncolytic effect of the combination of squirrel fibroma virus and reovirus in melanoma. Reovirus alone (REO) and squirrel fibroma virus in C57BL/6 female mice induced with B16F10 melanoma allograft. It is a diagram showing the change in tumor size after infection alone (SFV) or in combination with reovirus and squirrel fibroma virus (REO+SFV).
본 발명은 (a) 다람쥐 섬유종 바이러스(Squirrel fibroma virus) 및 리오바이러스(Reovirus); 또는 (b) (a)로 처리된 생물학적 샘플을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.The present invention relates to (a) squirrel fibroma virus (Squirrel fibroma virus) and reovirus (Reovirus); Or (b) provides a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer comprising the biological sample treated in (a) as an active ingredient.
본 발명자들은 효과적인 종양 파괴(종양용해 활성) 바이러스를 찾기 위한 연구를 계속하던 중, 다람쥐 섬유종 바이러스 및 리오바이러스를 병용 사용하는 경우, 숙주 특이성으로 인해 인간의 정상세포에는 감염하지 않고 암세포에만 감염하는 높은 안정성과 종양 파괴력을 나타냄을 확인하였을 뿐 아니라, 다람쥐 섬유종 바이러스가 리오바이러스와 병용하였을 때 바이러스 단독요법보다 매우 우수한 시너지 효과가 나타남을 확인하였다(실시예 1 내지 5 참조).While the present inventors were continuing their research to find an effective tumor-destroying (oncolytic activity) virus, when the squirrel fibroma virus and reovirus were used in combination, due to host specificity, the high rate of infecting only cancer cells without infecting normal human cells It was confirmed that not only stability and tumor destructive power were shown, but it was also confirmed that when the squirrel fibroma virus was used in combination with the reovirus, a very superior synergistic effect was exhibited than that of the virus monotherapy (see Examples 1 to 5).
본 명세서에서 사용된 용어, “다람쥐 섬유종 바이러스”는 숙주로서 미국산 회색 다람쥐에서 분리된 것으로서, 폭스바이러스과(Poxviridae)의 콘드로폭스아과(Chordopoxvirinae)에 포함되고, 파라폭스바이러스(Parapoxvirus) 속으로 분류된다. 본 발명의 다람쥐 섬유종 바이러스는 상기에서 언급된 숙주를 통하여 분리할 수 있으며, 세포배양을 통해서도 분리할 수 있다.As used herein, the term “squirrel fibroma virus” is isolated from American gray squirrel as a host, and is included in the Chordopoxvirinae of the Poxviridae, and is classified into the genus Parapoxvirus. . The squirrel fibroid virus of the present invention can be isolated through the above-mentioned host, and can also be isolated through cell culture.
본 발명의 다람쥐 섬유종 바이러스는 다람쥐/우드척(squirrel/woodchuck)을 이용한 인 비보 계대(in vivo passage), 1차(primary) 다람쥐 신장세포 또는 양 맥락총 (choroid plexus) 세포 등 공지된 기술을 이용하여 수득할 수 있다.The squirrel fibroid virus of the present invention can be prepared using known techniques such as in vivo passage using squirrel/woodchuck, primary squirrel kidney cells or sheep choroid plexus cells. can be obtained.
본 발명에 있어서, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스는 야생형 다람쥐 섬유종 바이러스이거나 약독화된 다람쥐 섬유종 바이러스일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the squirrel fibroma virus may be a wild-type squirrel fibroma virus or an attenuated squirrel fibroma virus, but is not limited thereto.
본 명세서에서 사용된 용어, “리오바이러스”는 이중가닥의 세그먼트화된 RNA 게놈을 가지는 바이러스로서, 리오바이러스 과(Reoviridae)로 분류되는 임의의 바이러스를 의미한다. 상기 리오바이러스의 비리온(virion)은 직경이 60~80 nm이며, 2개의 동심성 캡시드 껍질을 보유하고 있다. 이 게놈은 10~12개의 불연속의 세그먼트(segment)인 이중가닥 RNA로 구성되고, 16~27 kbp의 총 게놈 사이즈를 가지며, 각각의 RNA 세그먼트는 크기가 다르다.As used herein, the term “reovirus” refers to a virus having a double-stranded segmented RNA genome, and refers to any virus classified in the family Reoviridae. The virion of the reovirus has a diameter of 60-80 nm, and has two concentric capsid shells. This genome consists of double-stranded RNA, which is 10 to 12 discontinuous segments, and has a total genome size of 16 to 27 kbp, and each RNA segment has a different size.
본 발명에 있어서, 상기 리오바이러스는 자연 발생적(naturally occurring)리오바이러스뿐만 아니라, 변형되거나 또는 재조합체인 리오바이러스도 포함한다. 상기 리오바이러스는 자연으로부터 분리될 수 있고, 인간에 의해 인위적인 변경이 행해지지 않은 경우에 “자연 발생적”이라고 한다. 예를 들어, 상기 리오바이러스는 “필드 공급원(field source)”, 즉 이 리오바이러스에 감염된 사람으로부터 유래할 수 있다.In the present invention, the reovirus includes not only a naturally occurring reovirus, but also a modified or recombinant reovirus. The reovirus is said to be “naturally occurring” when it can be isolated from nature and has not been artificially altered by humans. For example, the reovirus may be from a “field source,” ie a person infected with the reovirus.
상기 리오바이러스는 변형될 수 있지만, 활성된 ras 경로를 가지는 포유동물 세포를 용해적(lytically)으로 감염시킬 수 있다. 또한, 상기 리오바이러스는 증식하는 세포에 투여하기 전에 화학적 또는 생화학적으로(예를 들면, 키모트립신 또는 트립신과 같은 프로테아제를 이용하여 처리함으로써) 전처리 될 수 있다. 프로테아제를 이용하는 전처리에 의해 바이러스의 외막 또는 캡시드가 제거되어 상기 바이러스의 감염성을 증대시킬 수 있다. 상기 리오바이러스는 리포좀 또는 마이셀로 피복될 수 있으며, 예를 들어, 새로운 전염성 서브 바이러스 입자를 생성하기 위하여 마이셀 형성 농도의 알킬 황산 세제(alkyl sulfate detergent)의 존재 하에서 비리온을 키모트립신으로 처리할 수 있다.The reovirus can be modified, but can lytically infect mammalian cells with an active ras pathway. In addition, the reovirus may be pretreated chemically or biochemically (eg, by treatment with a protease such as chymotrypsin or trypsin) before administration to the proliferating cells. Pretreatment with a protease removes the virus' outer membrane or capsid, thereby increasing the infectivity of the virus. The reovirus can be coated with liposomes or micelles, for example, the virions can be treated with chymotrypsin in the presence of an alkyl sulfate detergent at a micelle-forming concentration to generate new infectious subviral particles. have.
본 발명에 있어서, 상기 리오바이러스는 야생형 리오바이러스이거나 약독화된 리오바이러스일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the reovirus may be a wild-type reovirus or an attenuated reovirus, but is not limited thereto.
상기 약독화된 리오바이러스는 야생형 리오바이러스의 S1 유전자가 결핍된 리오바이러스의 게놈에 의해 검출 가능한 리오바이러스 시그마 1 캡시드 단백질이 결핍된 감염성의 복제 가능한 리오바이러스 비리온을 포함한다. 이와 같이, 약독화된 리오바이러스는 검출 가능한 리오바이러스 시그마 1 캡시드 단백질이 결핍된 돌연변이화된 리오바이러스가 표적 종양 세포를 생산적으로 감염시키는 능력을 예기치 않게 유지하면서 비악성 세포에 대한 세포변성 효과(cytopathic effect)를 바람직하게 피하는 놀라운 관찰에서 유래된 것이다. 전술한 바와 같이, 본 개시 이전에, 시그마 1이 결핍된 리오바이러스의 입자는 비감염성인 것으로 이해되었다.The attenuated reovirus comprises an infectious replicable reovirus virion lacking a reovirus sigma 1 capsid protein detectable by the genome of a reovirus lacking the S1 gene of a wild-type reovirus. As such, attenuated reoviruses exhibit cytopathic effects on non-malignant cells while unexpectedly maintaining the ability of a mutated reovirus lacking a detectable reovirus sigma 1 capsid protein to infect target tumor cells productively. effect) is desirably avoided. As mentioned above, prior to the present disclosure, particles of a reovirus lacking sigma 1 were understood to be non-infectious.
특정 구현예에서, 상기 약독화된 리오바이러스는 돌연변이화된 리오바이러스의 S4 유전자를 포함할 수 있다. 리오바이러스 야생형 S4 유전자는 숙주 세포의 리오바이러스의 복제 감염 동안 비리온 프로세싱에 관여하는 리오바이러스 캡시드 시그마 3 폴리펩티드를 암호화한다.In certain embodiments, the attenuated reovirus may comprise the S4 gene of a mutated reovirus. The reovirus wild-type S4 gene encodes a reovirus capsid sigma 3 polypeptide involved in virion processing during replicative infection of a reovirus of a host cell.
특정 구현예에에서, 상기 약독화된 리오바이러스는 야생형 S4 유전자 서열에 비해 리오바이러스의 시그마 3 폴리펩티드를 암호화하는 게놈 서열에서 하나 또는 복수개의 돌연변이를 포함하는 돌연변이화된 리오바이러스 S4 유전자를 포함할 수 있다.In certain embodiments, the attenuated reovirus may comprise a mutated reovirus S4 gene comprising one or more mutations in the genomic sequence encoding the sigma 3 polypeptide of the reovirus relative to the wild-type S4 gene sequence. have.
약독화된 리오바이러스는 검출 가능한 시그마 1 캡시드 단백질이 결핍되어 있지만 예기치 않게 감염성이 있다. 전술한 바와 같이, 시그마 1이 바이러스의 복제 감염의 초기 단계에서 세포 표면 시알산 잔기를 통해 세포에 리오바이러스의 결합 및 부착과 관련되어 있음을 보여준다. 검출 가능한 시그마 1이 결핍되어 있음에도 불구하고, 본 명세서에 기술된 약독화된 리오바이러스는 숙주 세포 진입 및 세포용해성 바이러스의 복제가 가능하다. 또한, 약독화된 리오바이러스는 자연적으로 발생하는 비약독화된 리오바이러스에 의해 비악성 세포에 대해 보이는 세포변성 효과의 수준에 비해, 비악성 세포에 대해 하나 이상의 세포변성 효과의 감소된(즉, 통계적 유의성이 감소된) 수준을 유도하는 놀라운 특성을 보인다.The attenuated reovirus lacks a detectable sigma 1 capsid protein but is unexpectedly infectious. As described above, we show that sigma 1 is involved in the binding and attachment of reoviruses to cells through cell surface sialic acid residues in the early stages of viral replication infection. Despite lacking detectable sigma 1, the attenuated reovirus described herein is capable of host cell entry and replication of cytolytic viruses. In addition, an attenuated reovirus has a reduced (i.e., statistical It exhibits surprising properties inducing levels of reduced significance).
약독화된 리오바이러스는 리오바이러스과의 구성원을 의미하는 임의의 리오바이러스로부터 유래될 수 있고, 다양한 친화성을 갖는 리오바이러스를 포함하며, 이는 다양한 공급원으로부터 수득될 수 있다.Attenuated reoviruses may be derived from any reovirus meaning a member of the reoviridae, and include reoviruses with varying affinities, which may be obtained from a variety of sources.
특정 구현예에서, 포유동물 리오바이러스일 수 있고, 다른 구현예에서는 인간 리오바이러스일 수 있다. 다른 구현예(예를 들어, 인간 질환과 관련성을 갖는 동물 모델에서 사용하기 위한 또는 수의학 관련의 적용을 위한)에서는 약독화된 리오바이러스가 비인간 영장류(예컨대, 침팬지, 고릴라, 마카크, 원숭이 등), 설치류(예컨대, 마우스, 랫트, 게르빌루스쥐, 햄스터, 래빗, 기니아 피그 등), 개, 고양이, 일반 가축(예컨대, 소, 말, 돼지, 염소) 등을 포함한, 다른 포유동물 종의 세포에 대한 친화성을 나타내는 하나 이상의 리오바이러스로부터 유래 될 수 있으며, 또는 대안적으로, 뚜렷이 구별되는 친화성을 갖는 리오바이러스(예컨대, 조류 레오바이러스)가 사용될 수 있다.In certain embodiments, it may be a mammalian reovirus, and in other embodiments it may be a human reovirus. In other embodiments (eg, for use in animal models of relevance to human disease or for veterinary applications), the attenuated reovirus is administered to a non-human primate (eg, chimpanzee, gorilla, macaque, monkey, etc.). , cells of other mammalian species, including rodents (eg, mice, rats, gerbils, hamsters, rabbits, guinea pigs, etc.), dogs, cats, common domestic animals (eg, cattle, horses, pigs, goats), and the like. may be derived from one or more reoviruses exhibiting affinity for
약독화된 리오바이러스는 분자 생물학적 접근법에 의한 시그마 1-결핍 및/또는 시그마 1-결함 돌연변이체의 생성 및 동정을 포함하고(그리고 특정 구현예에서, 추가적으로 또는 대안적으로, 시그마 3-결핍 및/또는 시그마 3-결함 돌연변이체의 생성 및 동정 또한 포함함), 또한 자연적으로 발생하는 시그마 1-결핍 및/또는 시그마 1-결함 돌연변이체 및/또는 시그마 3 돌연변이체의 분리, 및/또는 화학적, 물리적 및/또는 유전적 기술(예컨대, 생산적으로 감염된 숙주 세포에서의 리오바이러스 유전자의 선택적 재조합)에 의한 그러한 시그마 1(및/또는 시그마 3) 돌연변이체의 인공적 유도를 포함하는 다른 방법론에 따라 유래될 수 있다.Attenuated reoviruses involve the generation and identification of sigma 1-deficient and/or sigma 1-deficient mutants by molecular biological approaches (and in certain embodiments, additionally or alternatively, sigma 3-deficient and/or sigma 3-deficient and/or or generation and identification of sigma 3-deficient mutants), also isolation of naturally occurring sigma 1-deficient and/or sigma 1-deficient mutants and/or sigma 3 mutants, and/or chemical, physical and/or artificial induction of such sigma 1 (and/or sigma 3) mutants by genetic techniques (eg, selective recombination of reovirus genes in productively infected host cells). have.
약독화된 리오바이러스는 야생형 리오바이러스 S1 유전자가 결핍되고 결과적으로 검출 가능한 리오바이러스 시그마 1 캡시드 단백질이 결핍된 감염성의 복제 가능한 리오바이러스 비리온(즉, 바이러스의 게놈, 코어 단백질 및 단백질 외피를 포함하는 바이러스 입자)을 포함한다.The attenuated reovirus is an infectious, replicable reovirus virion that lacks the wild-type reovirus S1 gene and consequently the detectable reovirus sigma 1 capsid protein (i.e., contains the genome, core protein and protein envelope of the virus). virus particles).
특정 구현예에서, 약독화된 리오바이러스는 야생형 리오바이러스 S4 유전자가 결핍되고 돌연변이화된 리오바이러스 시그마 3 캡시드 단백질을 발현한다. 관련 기술에서 알려진 바와 같이, 감염성의 복제 가능한 리오바이러스는 적절한 조건하에 충분한 시간 동안 적합한 숙주 세포에 도입 시 숙주 세포에 결합하여 내재화 될 수 있는 하나이며, 그 뒤에 숙주 세포로부터 방출될 시 바이러스의 복제 주기를 영속시키고자 다른 숙주 세포를 생산적으로 감염시킬 수 있는 완전한 자손 리오바이러스의 어셈블리를 허용하는 방식으로 리오바이러스의 게놈의 복제 및 리오바이러스 구조 단백질의 생합성을 지시한다.In certain embodiments, the attenuated reovirus lacks the wild-type reovirus S4 gene and expresses a mutated reovirus sigma 3 capsid protein. As is known in the related art, an infectious, replicable reovirus is one capable of internalization by binding to a host cell upon introduction into a suitable host cell under appropriate conditions and for a sufficient time, followed by the replication cycle of the virus upon release from the host cell. It directs the replication of the genome of a reovirus and the biosynthesis of the reovirus structural proteins in a manner that allows the assembly of complete progeny reoviruses capable of productively infecting other host cells to perpetuate the reovirus.
암 치료를 위한 약독화된 리오바이러스는 예를 들어, 미국출원공개 US2009/0214479호 및 US2009/0104162호에 기술되어 있으며, 이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참조로서 포함된다.Attenuated reoviruses for the treatment of cancer are described, for example, in US Patent Application Publication Nos. US2009/0214479 and US2009/0104162, each of which is incorporated herein by reference in its entirety.
상기 인간 리오바이러스는 다음과 같이 3개의 혈청형으로 구성될 수 있다: 1형(Lang 주 또는 T1L), 2형(Jones 주, T2J) 및 3형(Dearing 주, T3D 또는 Abney 주, T3A). 상기 3종의 혈청형은 중화반응 및 혈구 응집소 저해 어세이(assay)에 기반하여 용이하게 동정할 수 있다.The human reovirus can be composed of three serotypes: type 1 (Lang strain or T1L), type 2 (Jones strain, T2J) and type 3 (Dearing strain, T3D or Abney strain, T3A). The three serotypes can be easily identified based on a neutralization reaction and hemagglutinin inhibition assay.
본 발명에 있어서, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스 또는 리오바이러스는 BHK(baby hamster kidney) 세포(예컨대, BHK-21 세포)를 이용하여 수득할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the squirrel fibroid virus or reovirus may be obtained using baby hamster kidney (BHK) cells (eg, BHK-21 cells), but is not limited thereto.
본 명세서에서 사용된 용어, “BHK-21 세포”에서 BHK란 베이비 햄스터 키드니(Baby Hamster Kidney)의 약자로, BHK 세포는 원래 햄스터 세포의 폴리오마 변환(polyoma transformation)에 의해 분리되었으며, 백신에 대한 바이러스 전파 및 바이러스 매개된 발현을 위한 기질로서 사용될 수 있다. 또한, BHK 세포는 다양한 재조합 단백질의 안정된 발현을 위한 숙주 세포주로서 유용하다. BHK-21(BHK Strain 21) 세포주는 IA Macpherson과 MGP Stoker에 의해 1961년 3월에 5마리의 unsexed, 1일된 햄스터의 아기 햄스터 신장으로부터 유래되었다. 상기 햄스터는 BHK-21 세포를 생성하는데 사용되었으며, 일반적으로 시리아 황금 햄스터(Mesocricetus auratus)로 알려져 있다.As used herein, in the term “BHK-21 cells”, BHK is an abbreviation of Baby Hamster Kidney. BHK cells were originally isolated by polyoma transformation of hamster cells, and were added to the vaccine. It can be used as a substrate for viral propagation and virus-mediated expression. In addition, BHK cells are useful as host cell lines for stable expression of various recombinant proteins. The BHK-21 (BHK Strain 21) cell line was derived from baby hamster kidneys of five unsexed, 1-day-old hamsters in March 1961 by IA Macpherson and MGP Stoker. The hamster was used to generate BHK-21 cells and is commonly known as the Syrian golden hamster (Mesocricetus auratus).
본 명세서에서 사용된 용어, “(a)로 처리된 생물학적 샘플”에서 “생물학적 샘플”은 개체, 세포주, 조직 배양물 또는 기타 세포의 공급원에서 수득한 임의의 생물학적 샘플, 예컨대, 성체 줄기 세포(지방 유래 줄기 세포, 골수 줄기 세포) 또는 제대혈 줄기 세포를 대상으로 한다. 포유동물로부터 조직 생검 및 체액을 수득하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 지방 유래 줄기 세포는 종양용해성 바이러스로 전처리되어 암 환자에게 투여될 수 있다.As used herein, the term “biological sample” in “biological sample treated with (a)” means any biological sample obtained from an individual, cell line, tissue culture or other source of cells, such as adult stem cells (adipose derived stem cells, bone marrow stem cells) or cord blood stem cells. Methods for obtaining tissue biopsies and body fluids from mammals are well known in the art. For example, adipose-derived stem cells may be pretreated with an oncolytic virus and administered to a cancer patient.
본 발명에 있어서, 상기 생물학적 샘플은 엑스 비보(ex vivo) 생물학적 샘플에 대해 다람쥐 섬유종 바이러스 및 리오바이러스의 유효량을 적용하여 복수 개의 암세포를 사멸시키고자 제조된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the biological sample may be prepared to kill a plurality of cancer cells by applying effective amounts of squirrel fibroma virus and reovirus to an ex vivo biological sample, but is not limited thereto.
본 발명에 있어서, 상기 생물학적 샘플은 골수 샘플, 지방 유래 줄기세포 샘플 또는 혈액 샘플일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the biological sample may be a bone marrow sample, an adipose-derived stem cell sample, or a blood sample, but is not limited thereto.
본 발명에 있어서, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스 또는 리오바이러스는 암 치료용 외래 유전자(heterologous gene)를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the squirrel fibroid virus or reovirus may include a heterologous gene for cancer treatment, but is not limited thereto.
상기 “외래 유전자(heterologous gene)”라는 용어는 바이러스 게놈(viral genome)에서 발견되지 않는 어떤 유전자를 받아들인다는 의미로사 사용된다. 외래유전자는 야생형 유전자의 대립형질 변이체(allelic variant)이거나 돌연변이 유전자일 수 있다.The term “heterologous gene” is used to mean accepting any gene that is not found in the viral genome. The foreign gene may be an allelic variant of the wild-type gene or a mutant gene.
상기 암 치료용 외래 유전자는 다람쥐 섬유종 바이러스 유전자 또는 리오바이러스 유전자 내 복제필요 유전자부위(essential region) 또는 복제불필요 유전자부위(non-essential region)에 삽입되어 항암 활성을 증가시킬 수 있다.The foreign gene for cancer treatment may be inserted into an essential region or a non-essential region within the squirrel fibroma virus gene or reovirus gene to increase anticancer activity.
외래 유전자는 생체 내 조건의 세포에서 전기 외래 유전자를 발현하게 하는 조절서열(control sequence)에 작동 가능하도록 연결될 수 있다. 따라서, 본 발명의 바이러스는 외래 유전자가 발현될 수 있는 생체 내 조건의 세포에 외래 유전자/유전자들을 전달하도록 사용될 수 있다. 상기 유전자는 통상적으로 바이러스의 종양 파괴 특성을 증진할 수 있는 단백질을 암호화한다. 상기 유전자는, 그 자체가 세포독소(cytotoxin)이거나 항종양 면역반응을 촉진/향상시킬 수 있는 단백질을 암호화할 수 있다.The foreign gene may be operably linked to a control sequence that allows expression of the electric foreign gene in a cell under in vivo conditions. Accordingly, the virus of the present invention can be used to deliver a foreign gene/genes to a cell in an in vivo condition in which the foreign gene can be expressed. The gene usually encodes a protein capable of enhancing the tumor-destructive properties of the virus. The gene itself may be a cytotoxin or may encode a protein capable of promoting/enhancing an anti-tumor immune response.
외래 유전자는 복제 가능한 종양 파괴 바이러스나 기존의 복제불능 바이러스 벡터에 삽입하여 암을 치료하는 모든 유전자를 포함한다.The foreign gene includes any gene for treating cancer by inserting it into a replication-competent tumor-destroying virus or an existing replication-defective virus vector.
본 명세서에서 사용된 용어, “치료용 유전자”는 이 유전자의 발현이 바람직한 결과, 예를 들어 항암 효과에 영향을 주는 모든 광범위한 유전자를 설명하는 것으로 간주된다. 본 발명의 다람쥐 섬유종 바이러스 또는 리오바이러스는 치료 유전자를 코딩하는 1종 이상의 목적하는 서열을 포함할 수 있다. 치료 유전자는 환자, 특히 질환 또는 질병 상태를 앓고 있는 환자 또는 이러한 질환 또는 상태로부터 보호되어야 할 환자에게 적절히 투여 시 약리학적 또는 예방적 활성을 가질 수 있다.As used herein, the term “therapeutic gene” is intended to describe all broad-spectrum genes whose expression influences desirable outcomes, for example, anticancer effects. The squirrel fibroid virus or reovirus of the present invention may comprise one or more desired sequences encoding a therapeutic gene. A therapeutic gene may have pharmacological or prophylactic activity when properly administered to a patient, particularly a patient suffering from a disease or condition or to be protected from such a disease or condition.
이러한 약리학적 또는 예방적 활성은 상기 질환 또는 상기 상태의 과정 또는 증상에의 유익한 효과와 관련된 것으로 예상되는 것을 의미한다. 상기 목적하는 서열은 이것이 도입되는 표적 세포와 동종 또는 이종일 수 있으며, 폴리펩티드, 특히 치료적 또는 예방적 특성을 주는 치료적 또는 예방적 폴리펩티드의 전체 또는 부분을 코딩한다. 폴리펩티드는 크기, 및 글리코실화되었는지 여부에 무관하게 폴리뉴클레오티드의 임의의 번역(translational) 생성물로 이해되고 펩티드 및 단백질을 포함한다. 치료적 폴리펩티드는 동물 또는 인간 유기체 내 결손 또는 결핍 단백질을 보상할 수 있는 폴리펩티드 또는 독성 효과를 통하여 작용하여 신체로부터 유해한 세포들을 제한 또는 제거하는 것들을 포함한다. 이들은 또한 체액성 또는 세포성 반응, 또는 양자를 유발하기 위하여 내인성 항원으로 작용하는 면역 부여 폴리펩티드일 수 있으며, 예를 들면, 약제감수성 유전자(drug-sensitizing gene), 세포사멸 유전자(proapoptotic gene), 세포증식 억제 유전자(cytostatic gene), 세포독성 유전자(cytotoxic gene), 종양 억제인자 유전자(tumor suppressor gene), 항원성 유전자(antigenic gene), 항신생 혈관 생성 유전자, 사이토카인 유전자 등이 포함되며, 이에 한정되는 것은 아니다.Such pharmacological or prophylactic activity is meant to be expected to be associated with a beneficial effect on the course or symptom of the disease or condition. Said sequence of interest may be homologous or heterologous to the target cell into which it is introduced, and encodes all or part of a polypeptide, in particular a therapeutic or prophylactic polypeptide that imparts therapeutic or prophylactic properties. Polypeptide is understood to be any translational product of a polynucleotide, regardless of size and glycosylated, and includes peptides and proteins. Therapeutic polypeptides include polypeptides capable of compensating for deficient or deficient proteins in an animal or human organism or those that act through toxic effects to limit or eliminate harmful cells from the body. They may also be immune conferring polypeptides that act as endogenous antigens to induce humoral or cellular responses, or both, for example, drug-sensitizing genes, proapoptotic genes, cells It includes, but is not limited to, a cytostatic gene, a cytotoxic gene, a tumor suppressor gene, an antigenic gene, an anti-angiogenic gene, a cytokine gene, etc. it is not going to be
상기 약제감수성 유전자는 독성이 없는 전구체(prodrug)를 독성물질로 전환시키는 효소에 대한 유전자로 유전자가 이입된 세포가 사멸하게 되므로 자살 유전자(suicide gene)로도 불린다. 즉, 정상세포에는 독성이 없는 전구체를 전신적으로 투여했을 때 암세포에만 전구체가 독성 대사체(toxic metabolite)로 전환되어 약제에 대한 감수성을 변화시킴으로써 암세포를 파괴시키는 방법이다. 대표적으로 HSVtk(Herpes simplex virus-thymidine kinase) 유전자와 갠시클로비르(ganciclovir), 대장균의 사이토신 탈아미노효소(cytosine deaminase, CD) 유전자와 5-플루오로시토신(5-fluorocytosine, 5-FC)이 가능하다.The drug susceptibility gene is a gene for an enzyme that converts a non-toxic precursor (prodrug) into a toxic substance, and is also called a suicide gene because the transfected cells die. That is, when a precursor that is not toxic to normal cells is systemically administered, the precursor is converted into a toxic metabolite only in cancer cells, thereby destroying cancer cells by changing the sensitivity to drugs. Representatively, HSVtk (Herpes simplex virus-thymidine kinase) gene, ganciclovir, E. coli cytosine deaminase (CD) gene and 5-fluorocytosine (5-FC) are It is possible.
상기 세포사멸 유전자는 발현되어 프로그램된 세포 소멸을 유도하는 뉴클레오타이드 서열을 말한다. 당업자에게 공지된 세포사멸 유전자로, p53, 아데노바이러스 E3-11.6K (Ad2 및 Ad5에서 유래) 또는 아데노바이러스 E3-10.5K (Ad에서 유래), 아데노바이러스 E4 유전자, p53 경로 유전자 및 카스파제를 코딩하는 유전자가 포함된다.The apoptosis gene refers to a nucleotide sequence that is expressed and induces programmed cell death. Apoptosis genes known to those skilled in the art, encoding p53, adenovirus E3-11.6K (derived from Ad2 and Ad5) or adenovirus E3-10.5K (derived from Ad), adenovirus E4 gene, p53 pathway gene and caspase genes are included.
상기 세포증식 억제 유전자는 세포 내에서 발현되어 세포 주기 도중에 세포 주기를 정지시키는 뉴클레오타이드 서열을 의미한다. 대표적으로 p21, 망막아세포종 유전자, E2F-Rb 융합 단백질 유전자, 사이클린-종속성 카이네이즈 억제인자를 코딩하는 유전자(예를 들면, p16, p15, p18 및 p19), 성장 중지 특이성 호메오박스(growth arrest specific homeobox, GAX) 유전자 등이 있다.The cell proliferation inhibitory gene refers to a nucleotide sequence that is expressed in a cell and stops the cell cycle during the cell cycle. Representatively, p21, a retinoblastoma gene, an E2F-Rb fusion protein gene, a gene encoding a cyclin-dependent kinase repressor (eg, p16, p15, p18 and p19), a growth arrest specific homeobox (growth arrest specific homeobox) , GAX) gene and the like.
상기 세포독성 유전자는 세포 내에서 발현되어 독성 효과를 나타내는 뉴클레오타이드 서열을 말한다. 일예로, 슈도모나스 외독소(exotoxin), 리신 독소, 디프테리아 독소 등을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 등이 있다.The cytotoxic gene refers to a nucleotide sequence that is expressed in a cell and exhibits a toxic effect. As an example, there is a nucleotide sequence encoding Pseudomonas exotoxin, ricin toxin, diphtheria toxin, and the like.
상기 종양 억제인자 유전자는 표적 세포 내에서 발현되어 종양 표현형을 억제할 수 있거나 세포사멸을 유도할 수 있는 뉴클레오타이드 서열을 의미한다. 대표적으로 종양 괴사 인자(tumor necrosis factor-α, TNF-α), p53 유전자, APC 유전자, DPC-4/Smad4 유전자, BRCA-1 유전자, BRCA-2 유전자, WT-1 유전자, 망막아세포종 유전자(Lee et al., Nature, 329,642, 1987), MMAC-1 유전자, 선종양 폴립증 코일 단백질(adenomatous polyposis coil protein), 결손된 결장 종양(DCC) 유전자, MMSC-2 유전자, NF-1 유전자, 염색체 3p21.3에 위치한 비인후 종양 억제인자 유전자, MTS1 유전자, CDK4 유전자, NF-1 유전자, NF-2 유전자 및 VHL 유전자가 포함된다.The tumor suppressor gene refers to a nucleotide sequence capable of suppressing a tumor phenotype or inducing apoptosis by being expressed in a target cell. Representatively, tumor necrosis factor-α, TNF-α, p53 gene, APC gene, DPC-4/Smad4 gene, BRCA-1 gene, BRCA-2 gene, WT-1 gene, retinoblastoma gene (Lee et al., Nature, 329,642, 1987), MMAC-1 gene, adenomatous polyposis coil protein, defective colon tumor (DCC) gene, MMSC-2 gene, NF-1 gene, chromosome 3p21 .3 located in the nasopharyngeal tumor suppressor gene, the MTS1 gene, the CDK4 gene, the NF-1 gene, the NF-2 gene and the VHL gene.
상기 항원성 유전자는 표적 세포 내에서 발현되어 면역 시스템에서 인식할 수 있는 세포 표면 항원성 단백질을 생산하는 뉴클레오타이드 서열을 말한다. 당업자에게 공지된 항원성 유전자의 예에는 암태아성 항원(carcinoembryonic antigen, CEA) 및 p53(Levine, A., 국제특허출원공개 WO 94/02167호)이 포함된다.The antigenic gene refers to a nucleotide sequence that is expressed in a target cell to produce a cell surface antigenic protein that can be recognized by the immune system. Examples of antigenic genes known to those skilled in the art include carcinoembryonic antigen (CEA) and p53 (Levine, A., International Patent Application Publication No. WO 94/02167).
보다 구체적인 치료적 유전자에 의해 코딩되는 폴리펩티드의 예는, 사이토킨 (알파, 베타 또는 감마 인터페론, 인터루킨, 특히 IL-2, IL-6, IL-10 또는 IL-12, 종양 괴사 인자(TNF), 케모카인, 콜로니 자극 인자 GM-CSF, C-CSF, M-CSF), 면역자극 폴리펩티드(B7.1, B7.2, 등), 응고 인자(FVIII, FIX), 성장 인자(형질전환 성장인자 TGF, 섬유아세포 성장 인자 FGF, 등), 효소(우레아제, 레닌, 트롬빈, 메탈로프로테이나제(metalloproteinase), 산화질소 신타제(NOS, SOD, 카탈라제), 효소 억제제(알파1-안티트립신, 안티트롬빈 III, 바이러스 프로테아제 억제제, 플라스미노겐 활성자 억제제 PAI-1), CFTR(낭포성 섬유증 막횡단 전도도 조절자) 단백질, 인슐린, 디스트로핀, MHC클래스 I 또는 II 항원, 세포 유전자의 발현을 조정/조절할 수 있는 폴리펩티드, 박테리아성, 기생충성 또는 바이러스성 감염 또는 이의 발생을 억제할 수 있는 폴리펩티드(항원성 폴리펩티드, 항원성 에피토프, 경쟁으로 천연 단백질의 작용을 억제하는 트랜스도미넌트(transdominant) 변이체), 아폽토시스 유도인자 또는 억제제(Bax, Bcl2, BclX...), 세포정지제(p21, p 16, Rb), 아포리포단백질(apolipoprotein, ApoAI, ApoAIV, ApoE...), 혈관형성의 억제제(안지오스타틴, 엔도스타틴), 혈관형성 폴리펩티드(혈관 내피 성장 인자 VEGF 족, FGF 족, CTGF, Cyr61 및 Nov를 포함한 CCN 족), 산소 라디칼 스캐빈저(scaveyer), 항종양 효과를 가진 폴리펩티드, 항체, 독소, 면역독소 및 마커(베타-갈락토시다아제, 루시페라아제)를 코딩하는 유전자 또는 임상 상태의 치료 또는 예방에 유용하다고 당업계에서 인식되는 임의의 다른 관심 유전자를 포함한다. 적합한 항종양 유전자는 종양 억제 유전자(예를 들어, Rb, p53, DCC, NF-1, 윌름스 종양(Wilm's tumor), NM23, BRUSH-1, p16, p21, p56, p73 및 이들의 각 돌연변이체), 자살 유전자 생성물, 항체, 세포 분열 또는 형질도입 신호를 억제하는 폴리펩티드를 코딩하는 것들을 포함하나, 이로 제한되지는 않는다. 상기 자살 유전자는 시토신 데아미나제 활성, 티미딘 키나제 활성, 우라실 포스포리보실 트랜스퍼라제 활성, 퓨린뉴클레오시드 포스포릴라아제 활성 및/또는 티미딜레이트 키나제 활성을 갖는 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하나, 이로 제한되지는 않는다. 상기 치료 유전자는 다람쥐 섬유종 바이러스 또는 리오바이러스 유전자 내 복제필요 유전자부위(essential region) 혹은 복제불필요 유전자부위(non-essential region)에 삽입되어 이의 항암 활성을 증가시킬 수 있다.Examples of polypeptides encoded by more specific therapeutic genes include cytokines (alpha, beta or gamma interferon, interleukins, in particular IL-2, IL-6, IL-10 or IL-12, tumor necrosis factor (TNF), chemokines , Colony Stimulating Factor GM-CSF, C-CSF, M-CSF), Immunostimulatory Polypeptide (B7.1, B7.2, etc.), Coagulation Factor (FVIII, FIX), Growth Factor (Transforming Growth Factor TGF, Fiber blast growth factor FGF, etc.), enzymes (urease, renin, thrombin, metalloproteinase), nitric oxide synthase (NOS, SOD, catalase), enzyme inhibitors (alpha1-antitrypsin, antithrombin III, Viral protease inhibitors, plasminogen activator inhibitor PAI-1), CFTR (cystic fibrosis transmembrane conductance regulator) protein, insulin, dystrophin, MHC class I or II antigen, polypeptide capable of modulating/regulating the expression of cellular genes , a polypeptide capable of inhibiting bacterial, parasitic or viral infection or its occurrence (antigenic polypeptide, antigenic epitope, transdominant variant that competitively inhibits the action of a native protein), apoptosis inducers or inhibitors (Bax, Bcl2, BclX...), cytostatic agents (p21, p 16, Rb), apolipoprotein (ApoAI, ApoAIV, ApoE...), inhibitors of angiogenesis (angiostatin, endostatin), blood vessels Forming polypeptides (vascular endothelial growth factor VEGF family, FGF family, CCN family including CTGF, Cyr61 and Nov), oxygen radical scavengers, polypeptides with anti-tumor effects, antibodies, toxins, immunotoxins and markers (beta - comprises gene encoding galactosidase, luciferase) or any other gene of interest recognized in the art to be useful for treatment or prevention of clinical condition.Suitable anti-tumor gene includes tumor suppressor gene (e.g., Rb , p53, DCC, NF-1, Will Wilm's tumor, NM23, BRUSH-1, p16, p21, p56, p73 and their respective mutants), suicide gene products, antibodies, including those encoding polypeptides that inhibit cell division or transduction signals. , but not limited thereto. The suicide gene includes a gene encoding a protein having cytosine deaminase activity, thymidine kinase activity, uracil phosphoribosyl transferase activity, purinenucleoside phosphorylase activity and/or thymidylate kinase activity. , but not limited thereto. The therapeutic gene may be inserted into an essential region or a non-essential region in the squirrel fibroma virus or reovirus gene to increase its anticancer activity.
본 발명에 있어서, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스 또는 리오바이러스는 바이러스 운반용 세포(virus carrier cells, 예를 들어 Molecular Therapy. 2009 Vol 17 :1667-1676)에 탑재되어 생체 내로 투여될 수 있으며, 이를 통해 생체 내에서의 치료 효과가 더욱 상승될 수 있다.In the present invention, the squirrel fibroid virus or reovirus may be loaded in virus carrier cells (for example, Molecular Therapy. 2009 Vol 17 : 1667-1676) and administered in vivo, through this The therapeutic effect may be further increased.
한편, 본 발명은 암의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물 및 암의 치료방법에 관한 것이다.Meanwhile, the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer and a method for treating cancer.
본 명세서에서 사용된 용어, “예방”은 본 발명의 조성물의 투여로 암을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.As used herein, the term “prevention” refers to any action that inhibits cancer or delays the progression of cancer by administration of the composition of the present invention.
본 명세서에서 사용된 용어, “치료”는 본 발명의 조성물의 투여로 암이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미하며, 임상적 결과를 포함하는 유용한 결과 또는 바람직한 결과를 얻기 위한 시도를 의미한다. 유용한 또는 바람직한 임상적 결과는 검출 가능하거나 가능하지 않더라도, 하나 이상의 증상 또는 상태의 완화 또는 개선, 질병 범위의 축소, 질병 상태의 안정화, 질병 발생의 억제, 질병 확산의 억제, 질병 진행의 지연 또는 늦춤, 질병 발병의 지연 또는 늦춤, 질병 상태의 개선 또는 경감, 및 감퇴(부분 또는 전체)를 포함할 수 있으며, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, “치료”는 치료의 부재에서 예측되는 것 이상으로 환자의 생존이 연장되는 것을 의미할 수 있다. 또한, “치료”는 질병 진행의 억제, 일시적으로 질병 진행의 늦춤을 의미할 수 있으며, 질병의 진행을 영원히 정지시키는 것과 관련될 수 있다.As used herein, the term “treatment” refers to any action in which cancer is improved or changed beneficially by administration of the composition of the present invention, and refers to an attempt to obtain useful or desirable results, including clinical results. A useful or desirable clinical outcome, if not detectable or undetectable, may result in alleviation or amelioration of one or more symptoms or conditions, narrowing the scope of the disease, stabilizing the disease state, inhibiting the occurrence of the disease, inhibiting the spread of the disease, delaying or slowing the progression of the disease. , delay or delay onset of disease, amelioration or alleviation of disease state, and attenuation (in part or all). In addition, “treatment” may mean prolonging the survival of a patient beyond what would be expected in the absence of treatment. In addition, “treatment” may mean inhibiting disease progression, temporarily slowing the disease progression, and may refer to stopping the disease progression permanently.
본 발명에서 치료 대상이 될 수 있는 암 질환은, 혈액암, 대장암, 뇌암, 신경교종, 신경교육종, 역형성성상세포종, 수모세포종, 위암, 폐암, 소세포 폐 암종, 자궁경부 암종, 결장암, 직장암, 척삭종, 인후암, 카포시육종, 림프관 육종, 림프관 내피 육종, 결직장암, 자궁내막암, 난소암, 유방암, 췌장암, 전립선암, 신장 세포암종, 간암종, 담관 암종, 융모막 암종, 정상피종, 고환 종양, 윌름 종양, 유잉 종양, 방광 암종, 혈관육종, 내피육종, 선암종, 한선 암종, 피지선 암종, 유두 암종, 유두선육종, 낭선육종, 기관지 암종, 수질 암종, 비만 세포종, 중피종, 활막종, 흑색종, 평활근종, 횡문근종, 신경모세포종, 망막모세포종, 핍지교종, 청신경종, 혈관모세포종, 수막종, 송과체종, 상의세포종, 두개인두종, 상피 암종, 배아 암종, 편평 세포 암종, 기저 세포암종, 섬유육종, 점액종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골원성 육종 또는 백혈병 등이 있다.Cancer diseases that can be treated in the present invention include blood cancer, colorectal cancer, brain cancer, glioma, neuroedema, anaplastic astrocytoma, medulloblastoma, gastric cancer, lung cancer, small cell lung carcinoma, cervical carcinoma, colon cancer, Rectal cancer, chordoma, throat cancer, Kaposi's sarcoma, lymphangiosarcoma, lymphangioendothelial sarcoma, colorectal cancer, endometrial cancer, ovarian cancer, breast cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, renal cell carcinoma, liver carcinoma, cholangiocarcinoma, choriocarcinoma, seminothelioma, Testicular tumor, Wilms tumor, Ewing tumor, bladder carcinoma, angiosarcoma, endothelial sarcoma, adenocarcinoma, sweat gland carcinoma, sebaceous adenocarcinoma, papillary carcinoma, papillary adenosarcoma, cystadenosarcoma, bronchial carcinoma, medullary carcinoma, mastocytoma, mesothelioma, synovoma, melanoma tumor, leiomyoma, rhabdomyofibroma, neuroblastoma, retinoblastoma, oligodendroglioma, acoustic neuroma, hemangioblastoma, meningioma, pineal celloma, ependymoma, craniopharyngioma, epithelial carcinoma, embryonic carcinoma, squamous cell carcinoma, basal cell carcinoma, fibrosarcoma, myxoma , myxosarcoma, liposarcoma, chondrosarcoma, osteogenic sarcoma, or leukemia.
본 발명에 있어서, 상기 암은 위암, 신경교종, 폐암, 간암, 흑색종, 전립선암, 혈액암, 유방암, 대장암, 췌장암, 뇌암, 난소암 및 이들의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the cancer may be selected from the group consisting of gastric cancer, glioma, lung cancer, liver cancer, melanoma, prostate cancer, blood cancer, breast cancer, colorectal cancer, pancreatic cancer, brain cancer, ovarian cancer, and combinations thereof, However, the present invention is not limited thereto.
본 발명의 바이러스는 병용 투여되거나 화학요법, 방사선 요법 또는 다른 항-바이러스 치료법을 포함하는 다른 치료법과 혼합하여 투여될 수 있다. 예를 들어, 바이러스는 수술을 통한 일차 종양의 제거 이전 또는 이후에 투여되거나 방사선요법 또는 통상적인 화학요법 약물 등의 치료 이전, 동시 또는 이후에 투여될 수 있다. 상기 바이러스는 다양한 종양 세포 타입에 대해 특이성을 나타내는 다른 종양살상 바이러스와 함께, 또는 순차적 방법으로 투여될 수 있다.The virus of the present invention may be administered in combination or in combination with other therapies including chemotherapy, radiation therapy or other anti-viral therapies. For example, the virus can be administered before or after surgical removal of the primary tumor or before, concurrently with, or after treatment, such as radiotherapy or conventional chemotherapy drugs. The virus may be administered in a sequential manner or in conjunction with other oncolytic viruses that are specific for various tumor cell types.
암을 치료, 예방 또는 처리하는데 통상적으로 사용되어온 치료법은 외과수술, 화학요법, 방사선 요법, 호르몬 요법, 생물학적 요법 및 면역요법을 포함하며, 이에 한정되지는 않는다.Treatments commonly used to treat, prevent or treat cancer include, but are not limited to, surgery, chemotherapy, radiation therapy, hormone therapy, biological therapy, and immunotherapy.
본 발명에 있어서, 상기 약학적 조성물은 화학요법제 또는 면역요법제를 추가적으로 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the pharmaceutical composition may additionally include a chemotherapeutic agent or an immunotherapeutic agent, but is not limited thereto.
본 명세서에서 사용된 용어, “투여”는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.As used herein, the term “administration” means providing a given composition of the present invention to a subject by any suitable method.
본 명세서에서 사용된 용어, “개체”는 본 발명의 조성물을 투여하여 암이 호전될 수 있는 질환을 가진 인간, 원숭이, 개, 염소, 돼지 또는 쥐 등 모든 동물을 의미한다.As used herein, the term “individual” refers to all animals, such as humans, monkeys, dogs, goats, pigs, or mice, having a disease that can be improved by administering the composition of the present invention.
본 발명의 유효성분은 개체에게 약학적으로 유효한 양으로 투여된다.The active ingredient of the present invention is administered to an individual in a pharmaceutically effective amount.
본 명세서에서 사용된 용어, “약학적으로 유효한 양”은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜 또는 위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 이는 개체의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.As used herein, the term “pharmaceutically effective amount” means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit or risk ratio applicable to medical treatment, which includes the type, severity, and activity of the drug in the subject; Sensitivity to the drug, administration time, administration route and excretion rate, treatment period, factors including concurrently used drugs and other factors well known in the medical field may be determined.
바이러스의 유효량은 질병을 완화(alleviate), 향상(improve), 경감(mitigate), 개선(ameliorate), 안정화, 질병의 확산 억제, 질병의 진행을 늦추거나 지연, 질병을 치유하기 위해 충분한 시간 동안 요구되는 용량이다. 예를 들어, 유효량은 암세포의 수를 감소시키거나 파괴 또는 바이러스로 만성적으로 감염된 세포의 수를 감소시키거나 파괴, 또는 이러한 세포의 성장 및/또는 증식을 억제시키는 효과를 달성하기에 충분한 양이 될 수 있다.An effective amount of the virus is required for a sufficient time to alleviate, improve, mitigate, ameliorate, stabilize, inhibit the spread of the disease, slow or delay the disease progression, or cure the disease. is the capacity to be For example, an effective amount may be an amount sufficient to achieve the effect of reducing or destroying cancer cells or reducing or destroying cells chronically infected with a virus, or inhibiting the growth and/or proliferation of such cells. can
상기 유효량은 바이러스의 약동학적 특성, 투여 방법, 연령, 환자의 건강상태 및 체중, 질병 상태의 특성 및 범위, 치료 횟수 및 최근의 치료 형태와 같은 수많은 인자에 의해 달라질 수 있으며, 가령 바이러스의 병독성 및 역가에 따라서도 달라질 수 있다. 당업자라면 상기 인자에 기초하여 적정량을 조절할 수 있다. 바이러스는 처음에 환자의 임상적 반응에 의존해 필요에 따라 적정량으로 투여될 수 있다. 바이러스의 유효량은 경험적으로 결정할 수 있으며 안전하게 투여될 수 있는 바이러스의 최대량 및 바람직한 결과를 유발하는 바이러스의 최소량에 따라 결정할 수 있다.The effective amount may vary depending on a number of factors such as pharmacokinetic properties of the virus, administration method, age, health and weight of the patient, the nature and range of the disease state, the number of treatments and the latest type of treatment, for example, the virulence of the virus and It may also vary depending on the potency. A person skilled in the art can adjust the appropriate amount based on the above factors. The virus can initially be administered in appropriate doses as needed, depending on the patient's clinical response. The effective amount of virus can be determined empirically and can depend on the maximum amount of virus that can be safely administered and the minimum amount of virus that produces the desired result.
바이러스를 전신에 투여할 때, 질병 부위에 바이러스를 주입함으로써 실현되는 것과 유사한 임상적 효과를 유발하기 위해, 상당히 높은 용량의 바이러스 투여가 요구될 수 있다. 그러나, 적당한 용량 레벨은 바람직한 결과를 실현할 수 있는 최소량이 되어야 한다.When the virus is administered systemically, administration of a significantly higher dose of the virus may be required to induce a clinical effect similar to that achieved by injecting the virus into the diseased site. However, the appropriate dose level should be the minimum amount to achieve the desired results.
투여되는 바이러스의 농도는 투여되어야 하는 다람쥐 섬유종 바이러스 또는 리오바이러스 균주의 병독성 및 표적이 되는 세포의 특징에 따라 달라질 수 있다.The concentration of the administered virus may vary depending on the virulence of the squirrel fibroid virus or reovirus strain to be administered and the characteristics of the cells being targeted.
본 발명에 있어서, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스는 102 내지 1013 PFU(플라크 형성 단위)로 포함될 수 있다. 예를 들어, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스는 102 내지 1012, 102 내지 1011, 102 내지 1010, 102 내지 109, 102 내지 108 또는 102 내지 107 PFU; 103 내지 1013, 103 내지 1012, 103 내지 1011, 103 내지 1010, 103 내지 109, 103 내지 108 또는 103 내지 107 PFU; 104 내지 1013, 104 내지 1012, 104 내지 1011, 104 내지 1010, 104 내지 109, 104 내지 108 또는 104 내지 107 PFU; 또는 105 내지 1013, 105 내지 1012, 105 내지 1011, 105 내지 1010, 105 내지 109, 105 내지 108 또는 105 내지 107 PFU로 포함될 수 있다.In the present invention, the squirrel fibroid virus may be included in 10 2 to 10 13 PFU (plaque forming units). For example, the squirrel fibroid virus is 10 2 to 10 12 , 10 2 to 10 11 , 10 2 to 10 10 , 10 2 to 10 9 , 10 2 to 10 8 or 10 2 to 10 7 PFU; 10 3 to 10 13 , 10 3 to 10 12 , 10 3 to 10 11 , 10 3 to 10 10 , 10 3 to 10 9 , 10 3 to 10 8 or 10 3 to 10 7 PFU; 10 4 to 10 13 , 10 4 to 10 12 , 10 4 to 10 11 , 10 4 to 10 10 , 10 4 to 10 9 , 10 4 to 10 8 or 10 4 to 10 7 PFU; or 10 5 to 10 13 , 10 5 to 10 12 , 10 5 to 10 11 , 10 5 to 10 10 , 10 5 to 10 9 , 10 5 to 10 8 or 10 5 to 10 7 PFU may be included.
또한, 본 발명에 있어서, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스는 0.01 내지 10 MOI(multiplicity of infection)로 포함될 수 있다. 예를 들어, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스는 0.01 내지 9, 0.01 내지 8, 0.01 내지 7, 0.01 내지 6 또는 0.01 내지 5 MOI; 0.05 내지 10, 0.05 내지 9, 0.05 내지 8, 0.05 내지 7, 0.05 내지 6 또는 0.05 내지 5 MOI; 또는 0.1 내지 10, 0.1 내지 9, 0.1 내지 8, 0.1 내지 7, 0.1 내지 6 또는 0.1 내지 5 MOI로 포함될 수 있다.Also, in the present invention, the squirrel fibroid virus may be included in an amount of 0.01 to 10 MOI (multiplicity of infection). For example, the squirrel fibroid virus may have an MOI of 0.01 to 9, 0.01 to 8, 0.01 to 7, 0.01 to 6, or 0.01 to 5; 0.05 to 10, 0.05 to 9, 0.05 to 8, 0.05 to 7, 0.05 to 6 or 0.05 to 5 MOI; or 0.1 to 10, 0.1 to 9, 0.1 to 8, 0.1 to 7, 0.1 to 6, or 0.1 to 5 MOI.
본 발명에 있어서, 상기 리오바이러스는 102 내지 1015 PFU로 포함될 수 있다. 예를 들어, 리오바이러스는 102 내지 1014, 102 내지 1013, 102 내지 1012, 102 내지 1011, 102 내지 1010, 102 내지 109, 102 내지 108 또는 102 내지 107 PFU; 103 내지 1015, 103 내지 1014, 103 내지 1013, 103 내지 1012, 103 내지 1011, 103 내지 1010, 103 내지 109, 103 내지 108 또는 103 내지 107 PFU; 104 내지 1015, 104 내지 1014, 104 내지 1013, 104 내지 1012, 104 내지 1011, 104 내지 1010, 104 내지 109, 104 내지 108 또는 104 내지 107 PFU; 또는 105 내지 1015, 105 내지 1014, 105 내지 1013, 105 내지 1012, 105 내지 1011, 105 내지 1010, 105 내지 109, 105 내지 108 또는 105 내지 107 PFU로 포함될 수 있다.In the present invention, the reovirus may be included in 10 2 to 10 15 PFU. For example, the reovirus is 10 2 to 10 14 , 10 2 to 10 13 , 10 2 to 10 12 , 10 2 to 10 11 , 10 2 to 10 10 , 10 2 to 10 9 , 10 2 to 10 8 or 10 2 to 10 7 PFU; 10 3 to 10 15 , 10 3 to 10 14 , 10 3 to 10 13 , 10 3 to 10 12 , 10 3 to 10 11 , 10 3 to 10 10 , 10 3 to 10 9 , 10 3 to 10 8 or 10 3 to 10 7 PFU; 10 4 to 10 15 , 10 4 to 10 14 , 10 4 to 10 13 , 10 4 to 10 12 , 10 4 to 10 11 , 10 4 to 10 10 , 10 4 to 10 9 , 10 4 to 10 8 or 10 4 to 10 7 PFU; or 10 5 to 10 15 , 10 5 to 10 14 , 10 5 to 10 13 , 10 5 to 10 12 , 10 5 to 10 11 , 10 5 to 10 10 , 10 5 to 10 9 , 10 5 to 10 8 or 10 5 to 10 7 PFU may be included.
또한, 본 발명에 있어서, 상기 리오바이러스는 0.1 내지 100 MOI로 포함될 수 있다. 예를 들어, 상기 리오바이러스는 0.2 내지 100, 0.3 내지 100, 0.4 내지 100, 0.5 내지 100, 0.6 내지 100, 0.7 내지 100, 0.8 내지 100, 0.9 내지 100 또는 1 내지 100 MOI로 포함될 수 있다.In addition, in the present invention, the reovirus may be included in an MOI of 0.1 to 100. For example, the reovirus may be included in an MOI of 0.2 to 100, 0.3 to 100, 0.4 to 100, 0.5 to 100, 0.6 to 100, 0.7 to 100, 0.8 to 100, 0.9 to 100, or 1 to 100 MOI.
본 발명에 있어서, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스 및 리오바이러스의 역가비는 1:1 내지 1000:1 (리오바이러스:다람쥐 섬유종 바이러스)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 예를 들어, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스 및 리오바이러스의 역가비는 1:1 내지 900:1, 1:1 내지 800:1, 1:1 내지 700:1, 1:1 내지 600:1, 1:1 내지 500:1, 1:1 내지 400:1, 1:1 내지 300:1, 1:1 내지 200:1, 1:1 내지 100:1, 1:1 내지 90:1, 1:1 내지 80:1, 1:1 내지 70:1, 1:1 내지 60:1, 1:1 내지 50:1, 1:1 내지 40:1, 1:1 내지 30:1, 1:1 내지 20:1 또는 1:1 내지 10:1 (리오바이러스:다람쥐 섬유종 바이러스)일 수 있다.In the present invention, the titer ratio of the squirrel fibroid virus and the reovirus may be 1:1 to 1000:1 (reovirus: squirrel fibroma virus), but is not limited thereto. For example, the titer ratios of the squirrel fibroid virus and reovirus are 1:1 to 900:1, 1:1 to 800:1, 1:1 to 700:1, 1:1 to 600:1, 1:1 to 500:1, 1:1 to 400:1, 1:1 to 300:1, 1:1 to 200:1, 1:1 to 100:1, 1:1 to 90:1, 1:1 to 80 :1, 1:1 to 70:1, 1:1 to 60:1, 1:1 to 50:1, 1:1 to 40:1, 1:1 to 30:1, 1:1 to 20:1 or 1:1 to 10:1 (reovirus: squirrel fibroma virus).
또한, 본 발명에 있어서, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스 및 리오바이러스의 역가비는 1:1 내지 1000:1 (다람쥐 섬유종 바이러스:리오바이러스)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 예를 들어, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스 및 리오바이러스의 역가비는 1:1 내지 900:1, 1:1 내지 800:1, 1:1 내지 700:1, 1:1 내지 600:1, 1:1 내지 500:1, 1:1 내지 400:1, 1:1 내지 300:1, 1:1 내지 200:1, 1:1 내지 100:1, 1:1 내지 90:1, 1:1 내지 80:1, 1:1 내지 70:1, 1:1 내지 60:1, 1:1 내지 50:1, 1:1 내지 40:1, 1:1 내지 30:1, 1:1 내지 20:1 또는 1:1 내지 10:1 (다람쥐 섬유종 바이러스:리오바이러스)일 수 있다.In addition, in the present invention, the titer ratio of the squirrel fibroma virus and reovirus may be 1:1 to 1000:1 (squirrel fibroma virus: reovirus), but is not limited thereto. For example, the titer ratios of the squirrel fibroid virus and reovirus are 1:1 to 900:1, 1:1 to 800:1, 1:1 to 700:1, 1:1 to 600:1, 1:1 to 500:1, 1:1 to 400:1, 1:1 to 300:1, 1:1 to 200:1, 1:1 to 100:1, 1:1 to 90:1, 1:1 to 80 :1, 1:1 to 70:1, 1:1 to 60:1, 1:1 to 50:1, 1:1 to 40:1, 1:1 to 30:1, 1:1 to 20:1 or 1:1 to 10:1 (squirrel fibroma virus: reovirus).
유효량의 바이러스는 최초 치료 요법의 효과에 따라 반복적으로 투여될 수 있다. 일반적으로 투여는 모든 반응을 모니터링하는 동안 주기적으로 투여된다. 당업자라면 투여 스케줄 및 선택된 경로에 따라 상기 표시된 것보다 낮거나 높은 용량이 투여될 수 있음을 용이하게 파악할 수 있다.An effective amount of virus may be administered repeatedly depending on the effectiveness of the initial treatment regimen. In general, dosing is administered periodically while monitoring for all responses. One of ordinary skill in the art will readily appreciate that, depending on the dosing schedule and route chosen, lower or higher doses than those indicated above may be administered.
본 발명에 있어서, 상기 다람쥐 섬유종 바이러스는 리오바이러스와 동시에(simultaneous), 별도로(separate) 또는 순차적(sequential)으로 투여될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the squirrel fibroid virus may be administered simultaneously with the reovirus (simultaneous), separately (separate) or sequentially (sequential), but is not limited thereto.
한편, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 유효성분 이외에 약학적 조성물로 제조하기 위하여 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및/또는 희석제를 더 포함할 수 있다. 또한, 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.On the other hand, the pharmaceutical composition according to the present invention may further include an appropriate carrier, excipient and/or diluent commonly used to prepare a pharmaceutical composition in addition to the active ingredient. In addition, according to a conventional method, it can be formulated in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., oral preparations, external preparations, suppositories, and sterile injection solutions.
상기 조성물을 제제화할 경우에는 보통 사용하는 담체, 안정화제, 항균제, 완충제, 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제할 수 있다.When formulating the composition, it can be prepared using a diluent or excipient such as a carrier, a stabilizer, an antibacterial agent, a buffer, a filler, an extender, a binder, a wetting agent, a disintegrant, and a surfactant.
본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 투여, 비강 내 투여, 종양 내 투여, 경기관지 투여, 동맥 주사, 정맥 주사, 피하 주사, 근육 주사 또는 복강 내 주사에 의해 투여될 수 있다. 일일 투여량은 하루 일회 내지 수회 나누어 투여할 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may be administered to an individual by various routes. Any mode of administration can be envisaged, for example, by oral administration, intranasal administration, intratumoral administration, transbronchial administration, arterial injection, intravenous injection, subcutaneous injection, intramuscular injection or intraperitoneal injection. . The daily dose may be administered once or divided into several times a day.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, preferred examples are presented to help the understanding of the present invention. However, the following examples are only provided for easier understanding of the present invention, and the contents of the present invention are not limited by the following examples.
[실시예][Example]
실시예 1. 위암 세포주 사멸 확인Example 1. Confirmation of apoptosis of gastric cancer cell lines
위암 세포주들(MKN28, AGS, SNU668)에 무처리(Mock), 야생형 리오바이러스 단독(REO, MKN28 1 MOI; AGS와 SNU668 100 MOI), 야생형 다람쥐 섬유종 바이러스 단독(SFV, MKN28 0.32 MOI; AGS와 SNU668 3.2 MOI) 및 리오바이러스와 다람쥐 섬유종 바이러스의 병용(REO+SFV)으로 감염시키고 암세포의 사멸을 CPE assay로 확인하였다. 구체적으로, 암세포를 96 웰 플레이트에 깐 후 바이러스로 감염시킨 4일 후에 WST assay를 통해 세포 생존율(cell viability)을 측정하여 그래프로 전환한 결과를 도 1에 나타내었다.Gastric cancer cell lines (MKN28, AGS, SNU668) untreated (Mock), wild-type reovirus alone (REO, MKN28 1 MOI; AGS and
항암 효과가 클수록 크리스털 바이올렛(crystal violet)으로 염색되는 세포의 수가 적어 보라색이 연하게 나오고, 결국 암세포가 항암 효과에 의해 생존율이 크게 떨어지면 항암 효과가 크다고 볼 수 있다. 도 1에 나타난 바와 같이, 리오바이러스 단독이나 다람쥐 섬유종 바이러스 단독으로 감염시킨 경우보다, 이들을 병용으로 감염시켰을 때 상대적 세포 생존율(relative cell viability)이 가장 낮았다(도 1의 가장 오른쪽 막대 그래프).As the anticancer effect increases, the number of cells stained with crystal violet is small, and the purple color comes out. As shown in FIG. 1 , the relative cell viability was the lowest when infected with the reovirus alone or the squirrel fibroma virus alone (the rightmost bar graph in FIG. 1 ).
이러한 결과는 리오바이러스와 다람쥐 섬유종 바이러스의 병용 사용이 상승적(synergistic)인 항암 효과를 나타냄으로써 가장 우수한 항암 효과를 나타냄을 보여준다.These results show that the combined use of reovirus and squirrel fibroma virus exhibits the best anticancer effect by showing a synergistic anticancer effect.
실시예 2. 신경교종 세포주 사멸 확인Example 2. Confirmation of death of glioma cell lines
신경교종 세포주들(U87MG, SNU489)에 무처리(Mock), 야생형 리오바이러스 단독(REO, 10 MOI), 야생형 다람쥐 섬유종 바이러스 단독(SFV, U87MG 0.16 MOI; SNU489, 1.6 MOI) 및 리오바이러스와 다람쥐 섬유종 바이러스의 병용(REO+SFV)으로 감염시키고 암세포의 사멸을 CPE assay로 확인하였다. 구체적으로, 암세포를 96 웰 플레이트에 깐 후 바이러스로 감염시킨 4일 후에 WST assay를 통해 세포 생존율을 측정하여 그래프로 전환한 결과를 도 2에 나타내었다Glioma cell lines (U87MG, SNU489) untreated (Mock), wild-type reovirus alone (REO, 10 MOI), wild-type squirrel fibroma virus alone (SFV, U87MG 0.16 MOI; SNU489, 1.6 MOI) and reovirus and squirrel fibroma It was infected with a combination of viruses (REO + SFV) and apoptosis of cancer cells was confirmed by CPE assay. Specifically, the results of cell viability were measured by WST assay 4 days after the cancer cells were spread on a 96-well plate and infected with the virus, and the result converted into a graph is shown in FIG. 2 .
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 리오바이러스 단독이나 다람쥐 섬유종 바이러스 단독으로 감염시킨 경우보다, 이들을 병용으로 감염시켰을 때 상대적 세포 생존율이 가장 낮았다(도 2의 가장 오른쪽 막대 그래프).As a result, as shown in FIG. 2 , the relative cell viability was the lowest when infected with the reovirus alone or when infected with the squirrel fibroma virus alone (the rightmost bar graph in FIG. 2 ).
이러한 결과는 리오바이러스와 다람쥐 섬유종 바이러스의 병용 사용이 상승적인 항암 효과를 나타냄으로써 가장 우수한 항암 효과를 나타냄을 보여준다.These results show that the combined use of reovirus and squirrel fibroma virus exhibits the best anticancer effect by showing a synergistic anticancer effect.
실시예 3. 폐암 세포주 사멸 확인Example 3. Confirmation of death of lung cancer cell lines
폐암 세포주(A549)에 무처리(Mock), 야생형 리오바이러스 단독(REO, 10 MOI), 야생형 다람쥐 섬유종 바이러스 단독(SFV, 3.2 MOI) 및 리오바이러스와 다람쥐 섬유종 바이러스의 병용(REO+SFV)으로 감염시키고 암세포의 사멸을 CPE assay로 확인하였다. 구체적으로, 암세포를 96 웰 플레이트에 깐 후 바이러스로 감염시킨 4일 후에 WST assay를 통해 세포 생존율을 측정하여 그래프로 전환한 결과를 도 3에 나타내었다Infected lung cancer cell line (A549) with no treatment (Mock), wild-type reovirus alone (REO, 10 MOI), wild-type squirrel fibroma virus alone (SFV, 3.2 MOI), and a combination of reovirus and squirrel fibroma virus (REO+SFV) and apoptosis of cancer cells was confirmed by CPE assay. Specifically, the results of cell viability were measured through WST assay 4 days after the cancer cells were spread on a 96-well plate and infected with the virus, and the result converted into a graph is shown in FIG. 3 .
그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 리오바이러스 단독이나 다람쥐 섬유종 바이러스 단독으로 감염시킨 경우보다, 이들을 병용으로 감염시켰을 때 상대적 세포 생존율이 가장 낮았다(도 3의 가장 오른쪽 막대 그래프).As a result, as shown in FIG. 3 , the relative cell viability was the lowest when infected with the reovirus alone or the squirrel fibroma virus alone (the rightmost bar graph in FIG. 3) compared to the case of infection with the reovirus alone.
이러한 결과는 리오바이러스와 다람쥐 섬유종 바이러스의 병용 사용이 상승적인 항암 효과를 나타냄으로써 가장 우수한 항암 효과를 나타냄을 보여준다.These results show that the combined use of reovirus and squirrel fibroma virus exhibits the best anticancer effect by showing a synergistic anticancer effect.
실시예 4. 간암 세포주 사멸 확인Example 4. Confirmation of apoptosis of liver cancer cell lines
간암 세포주(Hep3B)에 무처리(Mock), 야생형 리오바이러스 단독(REO, 1 MOI), 야생형 다람쥐 섬유종 바이러스 단독(SFV, 0.32 MOI) 및 리오바이러스와 다람쥐 섬유종 바이러스의 병용(REO+SFV)으로 감염시키고 암세포의 사멸을 CPE assay로 확인하였다. 구체적으로, 암세포를 96 웰 플레이트에 깐 후 바이러스로 감염시킨 4일 후에 WST assay를 통해 세포 생존율을 측정하여 그래프로 전환한 결과를 도 4에 나타내었다.Hepatocellular carcinoma cell line (Hep3B) was infected with untreated (Mock), wild-type reovirus alone (REO, 1 MOI), wild-type squirrel fibroma virus alone (SFV, 0.32 MOI), and reovirus and squirrel fibroma virus in combination (REO+SFV). and apoptosis of cancer cells was confirmed by CPE assay. Specifically, 4 days after the cancer cells were spread on a 96-well plate and infected with the virus, the cell viability was measured through WST assay, and the result converted into a graph is shown in FIG. 4 .
그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 리오바이러스 단독이나 다람쥐 섬유종 바이러스 단독으로 감염시킨 경우보다, 이들을 병용으로 감염시켰을 때 상대적 세포 생존율이 가장 낮았다(도 4의 가장 오른쪽 막대 그래프).As a result, as shown in FIG. 4 , the relative cell viability was the lowest when infected with the reovirus alone or the squirrel fibroma virus alone, compared to the case of infection with the reovirus alone (the rightmost bar graph in FIG. 4 ).
이러한 결과는 리오바이러스와 다람쥐 섬유종 바이러스의 병용 사용이 상승적인 항암 효과를 나타냄으로써 가장 우수한 항암 효과를 나타냄을 보여준다.These results show that the combined use of reovirus and squirrel fibroma virus exhibits the best anticancer effect by showing a synergistic anticancer effect.
실시예Example 5. 흑색종( 5. Melanoma ( melanomamelanoma )에 대한 항암 효과) anticancer effect
C57BL/6 마우스(암컷, DOB: 2019-, 5주령)에 마우스 흑색종 세포(B16F10 cell)를 1 X 105 cells/mice로 주입하여 종양을 유도한 동종이식(allograft) 동물모델을 제작하였다. 이후, 상기 동물모델에 야생형 리오바이러스 단독(1 X 107 PFU/injection), 야생형 다람쥐 섬유종 바이러스 단독(1 X 104 PFU/injection) 및 리오바이러스와 다람쥐 섬유종 바이러스를 병용으로 감염시킨 후 암세포 사멸을 종양 크기의 감소로 확인하였다. 초기 종양의 크기가 130 mm3일 때 바이러스 감염을 실시하고, 그 다음날도 바이러스 감염을 실시하여 총 2번 바이러스를 주입한 후 종양의 크기를 측정하였다.C57BL/6 mice (female, DOB: 2019-, 5 weeks old) were injected with mouse melanoma cells (B16F10 cells) at 1
그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, 음성 대조군(Vehicle)인 CsCl에 비해 각각의 바이러스를 단독으로 주입하였을 때 종양의 크기가 감소하였으며, 특히 두 바이러스를 병용으로 주입하였을 때 종양의 크기 감소, 즉 항암 효과가 현저히 증가(상승적 항암 효과)하였다(도 5).As a result, as shown in FIG. 5 , the size of the tumor was reduced when each virus was injected alone compared to the negative control (Vehicle) CsCl, and in particular, when both viruses were injected in combination, the size of the tumor decreased, The anticancer effect was significantly increased (synergistic anticancer effect) (FIG. 5).
이상의 실시예 1 내지 5의 결과는, 리오바이러스 단독이나 다람쥐 섬유종 바이러스 단독으로 감염시킨 경우보다, 이들을 병용으로 감염시켰을 때 가장 높은 항암 효과가 나타남을 보여주며, 이러한 결과는 리오바이러스와 다람쥐 섬유종 바이러스의 병용 사용이 상승적인 항암 효과를 통하여 가장 우수한 항암 효과를 나타냄을 보여준다. 또한, 이러한 리오바이러스와 다람쥐 섬유종 바이러스의 병용 사용이 다양한 암종에 대하여 항암 효과를 나타낼 수 있음을 보여준다.The results of Examples 1 to 5 above show that the highest anticancer effect appears when the reovirus or the squirrel fibroma virus is infected alone, compared to the case of infection with the reovirus alone or the squirrel fibroma virus. It shows that the combined use shows the best anticancer effect through the synergistic anticancer effect. In addition, it shows that the combined use of such reovirus and squirrel fibroma virus can exhibit anticancer effects against various carcinomas.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가지는 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.The above description of the present invention is for illustration, and those of ordinary skill in the art to which the present invention pertains can understand that it can be easily modified into other specific forms without changing the technical spirit or essential features of the present invention. will be. Therefore, it should be understood that the embodiments described above are illustrative in all respects and not restrictive.
Claims (13)
MKN28 또는 AGS 위암 세포를 포함하는 위암 환자군, U87MG 또는 SNU489 신경교종 세포를 포함하는 신경교종 환자군, 또는 A549 폐암 세포를 포함하는 폐암 환자군을 조성물의 투여 대상 환자군으로 하는, 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
(a) containing wild-type squirrel fibroma virus (Squirrel fibroma virus) and reovirus (Reovirus) as an active ingredient,
A pharmaceutical composition for preventing or treating cancer, in which a gastric cancer patient group comprising MKN28 or AGS gastric cancer cells, a glioma patient group comprising U87MG or SNU489 glioma cells, or a lung cancer patient group comprising A549 lung cancer cells is a target patient group .
상기 다람쥐 섬유종 바이러스 또는 리오바이러스는 암 치료용 외래 유전자를 포함하는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
According to claim 1,
The squirrel fibroid virus or reovirus is characterized in that it comprises a foreign gene for the treatment of cancer, a pharmaceutical composition.
상기 암치료용 외래 유전자는 다람쥐 섬유종 바이러스 유전자 또는 리오바이러스 유전자 내 복제필요 유전자부위(essential region) 또는 복제불필요 유전자부위(non-essential region)에 삽입되어 항암 활성을 증가시키는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
4. The method of claim 3,
The foreign gene for cancer treatment is inserted into an essential region or a non-essential region within the squirrel fibroma virus gene or reovirus gene, characterized in that it increases anticancer activity, pharmaceutical composition.
상기 다람쥐 섬유종 바이러스 또는 리오바이러스는 바이러스 운반용 세포(virus carrier cells)에 탑재되어 생체 내로 투여되는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
According to claim 1,
The squirrel fibroid virus or reovirus is loaded on virus carrier cells and administered in vivo, a pharmaceutical composition.
상기 다람쥐 섬유종 바이러스는 102 내지 1013 PFU로 포함되어 있는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
According to claim 1,
The squirrel fibroid virus is characterized in that it contains 10 2 to 10 13 PFU, the pharmaceutical composition.
상기 리오바이러스는 102 내지 1015 PFU로 포함되어 있는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
7. The method of claim 1 or 6,
The reovirus is a pharmaceutical composition, characterized in that it contains 10 2 to 10 15 PFU.
상기 다람쥐 섬유종 바이러스 및 리오바이러스의 역가비는 1:1 내지 1000:1 (리오바이러스:다람쥐 섬유종 바이러스)인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
According to claim 1,
The titer ratio of the squirrel fibroid virus and the reovirus is 1:1 to 1000:1 (reovirus: squirrel fibroma virus), a pharmaceutical composition.
상기 다람쥐 섬유종 바이러스는 리오바이러스와 동시에(simultaneous), 별도로(separate) 또는 순차적(sequential)으로 투여되는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
According to claim 1,
The squirrel fibroid virus is a pharmaceutical composition, characterized in that administered simultaneously (simultaneous), separately (separate) or sequentially (sequential) with the reovirus.
상기 다람쥐 섬유종 바이러스 또는 리오바이러스는 BHK(baby hamster kidney) 세포를 이용하여 수득한 것임을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
According to claim 1,
The squirrel fibroid virus or reovirus is a pharmaceutical composition, characterized in that obtained using BHK (baby hamster kidney) cells.
상기 약학적 조성물은 화학요법제 또는 면역요법제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.According to claim 1,
The pharmaceutical composition, characterized in that it further comprises a chemotherapeutic agent or an immunotherapeutic agent.
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