KR102347561B1 - 우울증과 연관된 급성관상동맥증후군 장기예후 검사방법 및 진단키트 - Google Patents

우울증과 연관된 급성관상동맥증후군 장기예후 검사방법 및 진단키트 Download PDF

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Abstract

본 발명은 급성관상동맥증후군 후 흔히 발생하는 재발과 사망 등 예후를 검사하는 진단방법에 대한 것으로, 보다 구체적으로는 우울증와 이를 조절하는 세로토닌 수송체의 유전자다형성을 분석하여 급성관상동맥증후군후 재발 및/또는 사망 등을 포함하는 주요심장부작용사건의 발생위험을 검사할 수 있는 급성관상동맥증후군 장기예후 검사방법 및 진단키트에 대한 것이다.

Description

우울증과 연관된 급성관상동맥증후군 장기예후 검사방법 및 진단키트{ Assessment methods and diagnostic kit for predicting long-term prognosis of acute coronary syndrome associated with depression}
본 발명은 급성관상동맥증후군 후 흔히 발생하는 재발과 사망 등 장기예후를 검사하는 진단방법에 대한 것으로, 보다 구체적으로는 기준시점에서 우울증이 진단된 급성관상동맥증후군 환자의 재발 및/또는 사망 등 주요심장부작용사건의 발생위험을 포함하는 장기예후를 NR3C1 메틸화정도를 분석하여 검사할 수 있는 급성관상동맥증후군 장기예후 검사방법 및 진단키트에 대한 것이다.
급성관동맥증후군(심근경색과 우울증협심증을 포함; ACS) 환자에서 우울증은 흔하고, 우울증이 동반될 때, 나쁜 예후와 연관되어 높은 이환율과 사망률을 보일 수 있다. ACS(acute coronary syndrome)와 우울증에 대한 공통된 생물학적 기전이 이들의 연관성에 기여할 수 있다고 여겨진다. 이중 시상하부-뇌하수체-부신축 (HPA축)의 조절장애가 우울증의 주된 발병기전으로 여겨지고, 심장손상후 회복장애와 연관되기 때문에, ACS와 우울증의 연관성에 대한 하나의 후보기전으로 생각해 볼 수 있다.
HPA축의 주된 내인성 글루코코르티코이드 호르몬인 코티솔의 효과는 주로 글루코코르코이드 수용체 (GRs)에 의해 매개되며, 글루코코르티코이드 수용체의 발현과 민감도는 후생유전학적 변화에 의해 조절된다. 후생유전학적 변화중 가장 널리 연구된 DNA 메틸화는 사이토신 다음에 구아닌이 따라오는 CpG dinucleotide의 사이토신 염기의 5번째 탄소에 메틸기가 공유결합 하는 과정을 의미한다. 글루코코르티코이드 수용체 유전자 (nuclear receptor subfamily 3, group C, member 1; NR3C1)의 과메틸화는 동물연구뿐 아니라 우울증, 외상후 스트레스 장애, 자살행동이 있는 사람대상 연구에서 감소된 GR 발현과 연관된다고 보고되어왔다. ACS와 관련된 측면에서 NR3C1 과메틸화는 죽상경화증과 증가된 심혈관 반응성과 연관되는 것으로 보고되었다. 하지만 NR3C1 메틸화의 ACS의 예후에 대한 영향은, 우울증과 ACS의 공존이환의 임상적 중요성에도 불구하고, 조사된 바 없다.
한편, 급성 관상동맥 증후군의 재발은 항혈전제 및 콜레스테롤-저하제(스타틴) 등을 사용한 치료를 통해 어느 정도 예방될 수 있지만, 대규모 임상 시험은 스탄틴이 약 30%의 환자의 재발을 감소시키는 반면, 상기 종류의 약제를 사용한 치료에 의해서는 나머지 70%의 환자의 재발은 예방할 수 없음을 나타낸다. 결과적으로, 급성 관상동맥 증후군의 재발을 완전히 예방하는 신규한 치료 프로토콜이 요구되지만, 현재 그러한 치료법은 존재하지 않는다. 이러한 상황하 에, 고위험 사례의 정확한 식별 및 집중적 관리를 통한 발증의 예방, 또는 이것이 안 된다면, 급작스러운 병원외 발증의 예방이 구명 및 예후의 개선에 유용할 것으로 여겨진다.
급성 관상동맥 증후군의 재발 예후는 기계적인 검사, 예컨대 관상동맥 조영술 또는 좌심실 조영술을 비롯한 심장 카테터 검사, 또는 바이오마커를 사용하여 임상적으로 행해진다. 그러나, 전자는 시간 및 비용면에서 실행하기에 용이하지 않고, 결과적으로 환자에게 무거운 부담을 안긴다. 또한, 이들은 재발 예측의 관점에서 완전한 정보를 제공하지 않는다.
따라서, 급성 관상동맥 증후군의 장기예후를 예측할 수 있는 표지자로서 충분히 효과적인 새로운 바이오마커가 개발될 필요가 있다.
1. Dante Cicchetti et al, Methylation of the glucocorticoid receptor gene (NR3C1) in maltreated and nonmaltreated children: Associations with behavioral undercontrol, emotional lability/negativity, and externalizing and internalizing symptoms; Dev Psychopathol. 2017 December ; 29(5): 1795-1806. 2. Watkeys OJ et al, Glucocorticoid receptor gene (NR3C1) DNA methylation in association with trauma, psychopathology, transcript expression, or genotypic variation: A systematic review ; Neurosci Biobehav Rev. 2018 Dec;95:85-122
본 발명자들은 다수의 연구결과 NR3C1 메틸화의 증가가 우울증이 있는 급성관상동맥증후군 환자의 장기예후 특히 주요 심장부작용사건 발명 위험과 유의한 연관성이 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 NR3C1 유전자의 특정부위의 메틸화가 급성관상동맥증후군 장기예후 예측을 위한 바이오마커가 될 수 있음을 확인함으로써 급성관상동맥증후군 재발 및/또는 사망 등을 포함하는 주요심장부작용사건의 발생가능성에 대한 장기예후 예측이 가능하여 치료약물 또는 치료방법에 대한 의사 결정 과정에 기여할 수 있는 급성관상동맥증후군 장기예후 검사방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 기준시점에서 우울증이 있는 급성관상동맥증후군 환자의 생체시료 중 NR3C1의 특정부위의 메틸화 정도를 측정하는 것을 통해 기준시점으로부터 5년 이후 급성관상동맥증후군 환자의 급성관상동맥증후군 재발 및/또는 사망 등을 포함하는 주요심장부작용사건의 발생가능성을 예측할 수 있으므로 환자의 급성관상동맥증후군 재발 및/또는 사망 등을 선제적으로 예방할 수 있어 임상적 유용성을 갖는 급성관상동맥증후군 장기예후 진단키트를 제공하는 것이다.
본 발명의 목적들은 이상에서 언급한 목적들로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 목적들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상술된 본 발명의 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 급성관상동맥증후군(acute coronary syndrome: ACS)이 발병된 환자의 우울증유무를 기준시점에서 확인하는 조사단계; 상기 조사단계에서 우울증이 있는 것으로 확인된 환자의 생물학적 시료에 포함된 우울증 연관 ACS 장기예후 검사용 바이오마커의 레벨 또는 양을 측정하는 측정단계; 및 상기 측정단계에서 측정된 상기 우울증 연관 ACS 장기예후 검사용 바이오마커의 레벨 또는 양을 기준으로 ACS의 재발 또는 사망을 포함하는 주요심장부작용사건의 발병 위험을 결정하는 결정단계;를 포함하는 우울증 연관 급성관상동맥증후군 장기예후 검사방법을 제공한다.
바람직한 실시예에 있어서, 상기 우울증 연관 ACS 장기예후 검사용 바이오마커는 NR3C1 유전자의 5′말단 -3166에서 -3147위치 뉴클레오티드 영역에 포함된 CpG 영역의 메틸화이다.
바람직한 실시예에 있어서, 상기 결정단계는 상기 측정단계에서 측정된 상기 NR3C1 유전자의 5′말단 -3166에서 -3147위치 뉴클레오티드 영역에 포함된 CpG 영역의 메틸화 정도를 기 설정된 기준 레벨과 비교하여 수행되는데, 상기 기준 레벨은 상기 기준시점에서 급성관상동맥증후군이 발병된 환자 집단으로부터 얻어진 NR3C1 유전자의 5′말단 -3166에서 -3147 위치의 뉴클레오티드 영역에 포함된 3개 CpG 영역의 메틸화 정도에 따라 결정되는 것이다.
바람직한 실시예에 있어서, 상기 3개 CpG 영역은 CpG1, CpG2 및 CpG3이고, 상기 기준 레벨은 상기 CpG1, CpG2 및 CpG3의 메틸화 백분율 평균의 중앙값과 평균값을 고려하여 결정된 21%이다.
바람직한 실시예에 있어서, 상기 결정단계에서 상기 측정된 CpG1, CpG2 및 CpG3의 메틸화 평균값이 상기 기준 레벨 이상이면 상기 기준시점으로부터 5년 이후 상기 주요심장부작용사건의 발병 위험이 있는 것으로 결정된다.
바람직한 실시예에 있어서, 상기 CpG 영역의 메틸화 정도가 증가되면 상기 주요심장부작용사건의 발병 위험이 증가된다.
바람직한 실시예에 있어서, 상기 CpG 영역 중 CpG1, CpG2 및 CpG3의 메틸화 평균값이 기준레벨보다 10% 증가하면 상기 주요심장부작용사건의 발병 위험이 11%증가한다.
바람직한 실시예에 있어서, 상기 생물학적 시료는 혈액을 포함하는 체액 또는 조직으로부터 선택된다.
또한, 본 발명은 기준시점에서 우울증이 있는 것으로 조사된 급성관상동맥증후군 환자의 NR3C1 유전자의 5′말단 -3166에서 -3147 위치 뉴클레오티드 영역에 포함된 CpG 영역의 메틸화를 측정하는 우울증 연관 ACS 장기예후 검사용 바이오마커 측정수단;을 포함하는 급성관상동맥증후군 장기예후 검사용 진단키트를 제공한다.
바람직한 실시예에 있어서, 상기 측정수단이 아황산수소나트륨(sodium bisulfite)과 중합효소연쇄반응(polymerase chain reaction; PCR)을 이용하거나, 5-methylcytosine에 대한 단일클론항체(monoclonal antibody)를 이용하는 것이다.
바람직한 실시예에 있어서, 상기 CpG 영역은 CpG1, CpG2 및 CpG3를 포함한다.
바람직한 실시예에 있어서, 상기 진단키트는 마이크로어레이이다.
먼저, 본 발명에 의하면 NR3C1 유전자의 특정부위의 메틸화가 급성관상동맥증후군 장기예후 예측을 위한 바이오마커가 될 수 있음을 확인함으로써 기준시점에서 5년 이후에 벌어지는 급성관상동맥증후군 장기예후를 비교적 정확하게 판단할 수 있는 바이오마커를 제공할 수 있다.
또한, 본 발명의 급성관상동맥증후군 장기예후 검사방법에 의하면 기준시점에서 5년 이후 주요심장부작용사건의 발병가능성에 대한 예측 및/또는 진단이 가능하여 치료약물 또는 치료방법에 대한 의사 결정 과정에 기여할 수 있다.
또한, 본 발명의 기준시점에서 우울증이 확인된 급성관상동맥증후군 환자의 시료 중 NR3C1 유전자의 특정부위의 메틸화 정도를 측정하는 것을 통해 급성관상동맥증후군 환자의 급성관상동맥증후군 재발 및/또는 사망 등을 포함하는 주요심장부작용사건의 발생가능성을 예측할 수 있으므로 환자의 급성관상동맥증후군 재발 및/또는 사망 등을 선제적으로 예방할 수 있어 임상적 유용성을 갖는다.
본 발명의 효과는 이상에서 언급한 효과로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 효과들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
도 1a는 환자 모집 과정의 개요를 도시한 흐름도이고, 도 1b는 NR3C1 유전자의 메틸화정도 분석을 위한 모식도 및 서열을 도시한 것이다.
도 2a 내지 도 2c는 기준시점(baseline)에서의 NR3C1 평균 메틸화 및 우울 장애에 의한 복합 주요 이상 반응 (MACE)의 누적 발생률 (%)을 나타낸 그래프이다.
본 발명에서 사용하는 용어는 단지 특정한 실시예들을 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 출원에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 발명의 설명에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성 요소, 부분품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성 요소, 부분품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
제1, 제2 등의 용어는 다양한 구성 요소들을 설명하는데 사용될 수 있지만, 상기 구성 요소들은 상기 용어들에 의해 한정되어서는 안된다. 상기 용어들은 하나의 구성 요소를 다른 구성 요소로부터 구별하는 목적으로만 사용된다. 예를 들어, 본 발명의 권리 범위를 벗어나지 않으면서 제1 구성 요소는 제2 구성 요소로 명명될 수 있고, 유사하게 제2 구성 요소도 제1 구성 요소로 명명될 수 있다.
다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 갖는 것으로 해석되어야 하며, 본 발명에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.
구성 요소를 해석함에 있어서, 별도의 명시적 기재가 없더라도 오차 범위를 포함하는 것으로 해석한다.
시간 관계에 대한 설명일 경우, 예를 들어, '~후에', '~에 이어서', '~다음에', '~전에' 등으로 시간 적 선후관계가 설명되는 경우, '바로' 또는 '직접'이 사용되지 않는 이상 연속적이지 않은 경우도 포함한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "진단"은 병리학적 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적과 관련하여, "진단"은 체액의 생체외 분석에 기초하여 급성관상동맥증후군 장기예후 즉 기준시점 5년 이후의 주요심장부작용사건이 발생할 가능성을 결정하는 것을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "바이오마커"는 질환 상태를 나타낼 수 있는 물질을 의미한다. 급성관상동맥증후군 장기예후 진단에 관한 본 발명의 문맥에서, "바이오마커"는 NR3C1유전자의 특정부위의 메틸화정도를 나타내는 것을 의미한다.기준시점에서 우울증이 확인된 급성관상동맥증후군 환자 중 "바이오마커"의 레벨 또는 양이 기준레벨 이상인 환자는 기준시점 5년 후 주요 심장부작용사건을 경험할 가능성이 높아진다.
본 발명에서 사용되는 용어 "혈액"은 전혈, 혈청 및 혈장을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 용어 "기준 레벨"은 기준시점에서 우울증이 있는 급성관상동맥증후군 환자 중 기준시점 5년 후 주요 심장부작용사건의 발병 위험이 있는 개체들을 구별할 수 있도록 결정된 상대 레벨 또는 절대 레벨을 의미한다. 기준 레벨은 상대 레벨의 경우에 배수 차이(fold difference)로서 또는 절대 값의 경우에 예를 들어 %로서 표시되는 특성 값으로 주어질 수 있다. 본 명세서에서 지적된 바와 같이, 기준 레벨 이상인 값은 기준시점 5년 후 주요 심장부작용사건의 발병 위험의 결정을 가능하게 하는 것으로 간주된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "예측하는"은 개체가 생물학적 질환을 발병할 가능성이 현저하게 높다고 발견하는 것을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "생물학적 시료"는 개체로부터 얻어진 다양한 시료 유형을 포함하며 또한 진단 또는 모니터링 분석에서 사용될 수 있다. 생물학적 유체 시료는 혈액, 뇌척수액(CSF), 뇨 및 생물 유래의 다른 액체 시료를 포함한다. 필요에 따라, 시료는 예를 들면 농축 및 분리를 위해 미리 처리할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "개체"는 포유동물, 바람직하게는 인간이고, 용어 개체 또는 대상체는 본 발명에서 서로 교환적으로 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "기준시점"은 급성관상동맥증후군이 발병되어 최초 진료행위가 이루어진 시점으로, 바람직하게는 급성관상동맥증후군 발병하여 입원치료가 이루어진 발병 후 2주내 (평균 7일) 시점을 의미한다.
이하, 첨부한 도면 및 바람직한 실시예들을 참조하여 본 발명의 기술적 구성을 상세하게 설명한다.
그러나, 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화 될 수도 있다. 발명 전체에 걸쳐 본 발명을 설명하기 위해 사용되는 동일한 참조번호는 동일한 구성요소를 나타낸다.
본 발명의 기술적 특징은 NR3C1 유전자의 특정부위의 메틸화가 급성관상동맥증후군 장기예후 예측을 위한 바이오마커가 될 수 있음을 확인하고, 이에 착안하여 급성관상동맥증후군 재발 및/또는 사망 등을 포함하는 주요심장부작용사건의 발생가능성에 대한 예측 및/또는 진단을 위해 NR3C1 유전자의 특정부위의 메틸화 정도를 측정하는 구성을 포함하는 급성관상동맥증후군 장기예후 검사방법 및 진단키트를 제공하는 것에 있다.
후술하는 바와 같이 본 발명은 급성관동맥증후군이 발병된 기준시점에서 우울증이 있는 환자의 NR3C1 유전자의 특정부위의 메틸화 정도와 기준시점에서 5년 후 발병하는 주요심장부작용사건 간의 상관관계에 미치는 효과를 명확히 확인하였기 때문이다.
따라서, 본 발명의 급성관상동맥증후군 장기예후 검사방법은 급성관상동맥증후군(acute coronary syndrome: ACS)이 발병된 환자의 우울증유무를 기준시점에서 확인하는 조사단계; 상기 조사단계에서 우울증이 있는 것으로 확인된 환자의 생물학적 시료에 포함된 우울증 연관 ACS 장기예후 검사용 바이오마커의 레벨 또는 양을 측정하는 측정단계; 및 상기 측정단계에서 측정된 상기 우울증 연관 ACS 장기예후 검사용 바이오마커의 레벨 또는 양을 기준으로 ACS의 재발 또는 사망을 포함하는 주요심장부작용사건의 발병 위험을 결정하는 결정단계;를 포함한다.
보다 구체적으로 살펴보면, 측정단계에서 분석되는 우울증 연관 급성관상동맥증후군 장기예후 검사용 바이오마커는 NR3C1 유전자의 5′말단 -3166에서 -3147 위치 뉴클레오티드 영역에 포함된 CpG 영역의 메틸화이고, 상기 CpG 영역의 메틸화 정도의 증가가 주요심장부작용사건의 발병 위험을 나타낼 수 있다. 여기서, CpG 영역은 CpG1, CpG2 및 CpG3를 포함하는데, 도 1에 도시된 바와 같이 NR3C1 유전자의 5′말단 1F 엑손 영역 중 5′말단 -3166에서 -3147 위치 뉴클레오티드 영역으로서 CpG1은 NR3C1 유전자의 5′말단 -3166 및 -3165 위치의 뉴클레오티드 영역이고, CpG2는 NR3C1 유전자의 5′말단 -3151 및 -3150 위치의 뉴클레오티드 영역이며, CpG3은 NR3C1 유전자의 5′말단 -3148 및 -3147 위치의 뉴클레레오티드 영역일 수 있다. 측정단계에서 사용되는 측정방법은 우울증 연관 급성관상동맥증후군 장기예후검사용 바이오마커의 레벨 또는 양을 측정하고 상기 측정 레벨 또는 양을 이용하여 결정하거나 진단하는데 유용한 공지 방법일 수 있다. 본 발명에서 검출방법은 시험관내 및/또는 생체내에서 모두 수행될 수 있지만, 바람직하게는 본 발명의 검출방법은 개체로부터 얻어지고 시험관내에서 제공된 시료를 기반으로 하는 시험관내 방법일 수 있다.
또한, 결정단계는 측정단계에서 측정된 상기 NR3C1 유전자의 5′말단 -3166에서 -3147위치 뉴클레오티드 영역에 포함된 CpG 영역의 메틸화 정도를 기 설정된 기준 레벨과 비교하여 수행된다. 여기서, 기준 레벨은 상기 기준시점에서 급성관상동맥증후군이 발병된 환자 집단으로부터 얻어진 NR3C1 유전자의 5′말단 -3166에서 -3147 위치의 뉴클레오티드 영역에 포함된 3개 CpG 영역의 메틸화 정도에 따라 결정된다. 이 때 3개 CpG 영역은 CpG1, CpG2 및 CpG3이고, 기준 레벨은 CpG1, CpG2 및 CpG3의 메틸화 백분율 평균의 중앙값과 평균값을 고려하여 21%로 결정하였다. 따라서, 일 구현예로서 결정단계에서 측정된 CpG1, CpG2 및 CpG3의 메틸화 평균값이 기준 레벨 이상이면 기준시점으로부터 5년 이후 주요심장부작용사건의 발병 위험이 있는 것으로 결정될 수 있다. 또한, 측정단계에서 측정된 CpG 영역의 메틸화 정도가 증가되면 기준시점에서 5년 이후 주요심장부작용사건의 발병 위험이 증가되는 것으로 예측되는데, 특히 CpG 영역 중 CpG1, CpG2 및 CpG3의 메틸화 평균값이 기준레벨보다 10% 증가하면 주요심장부작용사건의 발병 위험이 11% 증가하는 것으로 예측할 수 있다. 여기서, 주요심장부작용사건의 발병 위험을 개별적인 예후로 분류해보면 모든 사망률은 8%, 심장사는 11%, 심근경색의 재발은 7%, 경피관상동맥중재술 재시행위험은 12% 증가하였다.
다음으로, 본 발명의 급성관상동맥증후군 장기예후 검사용 진단키트는 기준시점에서 우울증이 있는 것으로 확인된 급성관상동맥증후군 환자가 기준시점에서 5년 이후 주요심장부작용사건을 경험할 발병위험을 결정하는데 사용하기 위한 것으로, 기준시점에서 우울증이 있는 것으로 조사된 급성관상동맥증후군 환자의 혈액을 포함하는 체액 또는 조직으로부터 선택되는 생물학적 시료 중 NR3C1 유전자의 5′말단 -3166에서 -3147 위치 뉴클레오티드 영역에 포함된 CpG 영역의 메틸화를 측정하는 우울증 연관 ACS 장기예후 검사용 바이오마커 측정수단을 포함한다. 여기서, 측정수단이 아황산수소나트륨(sodium bisulfite)과 중합효소연쇄반응(polymerase chain reaction; PCR)을 이용하거나, 5-methylcytosine에 대한 단일클론항체(monoclonal antibody)를 이용할 수 있을 것이다. 여기서, 측정수단에 의해 CpG1, CpG2 및 CpG3를 포함하는 CpG 영역의 메틸화가 기준레벨인 21% 이상으로 확인된 환자가, 기준레벨 미만으로 확인된 환자보다 주요심장부작용사건을 경험할 가능성이 높은 것으로 판단될 수 있다. 보다 구체적으로는 후술하는 바와 같이, 기준레벨 이상으로 확인된 환자는 기준레벨 미만으로 확인된 환자보다 주요심장부작용사건의 발생가능성이 1.98배 높아졌다. 주요심장부작용사건 중 개별적인 예후로는 모든 사망률은 1.9배, 심장사는 2.24배, 심근경색의 재발은 1.78배, 경피관상동맥중재술 재시행위험은 1.9배 증가하였다. 또한, 진단키트는 마이크로어레이로 구현될 수도 있음을 물론이다.
실시예
1. 연구대상
우울증과 ACS사이의 상호관계에 대해 연구하기 위해 고안된 the DEPression in ACS (DEPACS)라는 대규모의 조작이 최소화된 전향적 코호트 연구 자료를 이용하여 분석되었다.
DEPACS 연구 항목의 포함 기준은 다음과 같다. i) 18 ~ 85 세; ii) 조사에 의해 ACS를 확인 함 (ST- 분절 상승 MI의 존재는> 30 분 이상의 연속 흉통, 적어도 2 개의 인접한 심전도 리드에서 2mm 이상의 새로운 ST- 분절 상승, 및 크레아틴 키나제 -MB에 의해 결정됨) 3 회 정상; ST가 아닌 부분 상승 MI의 존재는 가슴 통증으로 진단되었고 새로운 ST- 분절 상승이없는 양성 심장 생화학 적 마커로 진단되었으며 불안정한 협심증의 존재는 이전 72 시간 이내에 흉통에 의해 결정되었다. ST-T 파동 변화 또는 양성 심장 생화학 적 마커가 없는 경우); iii) 연구 설문지를 완성하는 능력; iv) 연구 목표를 이해하고 사전 동의에 서명하는 능력. 배제 기준은 다음과 같았다 : i) 다른 이유로 입원 중 ACS 발생; ii) 관상 동맥 우회 이식 절차 후 3 개월 미만에 발생하는 ACS; iii) 조절되지 않은 고혈압 (수축기 혈압 (BP)> 180mmHg 또는 이완기 혈압> 100mmHg); iv) 휴식하는 심박수 <40 / 분; v) 생명을 위협하거나 ACS로부터의 회복을 방해하는 심각한 신체 질환; vi) 완전한 혈액 세포 수, 갑상선 검사, 신장 기능 검사 및 간 기능 검사에서 임상 적으로 유의 한 실험실 이상이 지속됨.
본 분석을 위한 환자 모집 과정의 개요는 도 1a와 같다. 2006년부터 2012년까지 전남대학교병원 순환기내과에 최근 발생한 ACS에 대하여 입원한 환자 4809명에 대해 대면하여 순차적으로 등록하였다. 전남대학교병원 순환기내과는 대한심장학회의 승인을 받아 한국인 심근경색증 등록연구(KAMIR)의 총괄책임센터역할을 수행하고 있다. KAMIR는 급성심근경색증 환자의 적정진료와 예후에 대한 전국적인 다기관 정보를 수집하기 위한 웹기반의 등록플랫폼 (http://kamir5.kamir.or.kr/)으로 다양한 위험인자에의 노출 또는 중재효과와 장기 심장예후와 전향적 연구를 가능하게 하였다. ACS 환자는 국제 ACS 중재 가이드라인에 따라 연구에 참여하는 심장내과 전문의에 의해 치료받았다. 등록기준에 부합하면서, 연구참여에 동의한 1152명의 ACS 환자들이 발병 2주 이내 (mean 6.3 ㅁ SD 2.4 days) 에 입원기간 내에 기준시점 평가를 받았다. 이들 중 84.1%인 969명이 혈액검사에 동의하여 본 연구대상 참여군으로 구성되었다. 모든 참여대상자들에게 ACS 발생 5-12년 사이에 해당하는, 2017년도 추적평가가 진행되었다. 모든 참가자들에 대하여 서면 동의서를 받았으며, 이 연구는 1963 헬싱키선언과 기관의 가이드라인에 따라 진행되었으며, 전남 대학교 병원 기관 심사위원회의 승인을 받았다.
2. 기준시점(baseline) 평가
우울증은 MINI라는, 주요 또는 경한 우울 장애를 정의하는 구조화된 DSM-IV정신과 진단 인터뷰를 이용하여 정신과의사에 의해 진단되었다. 하기와 같이 NR3C1 메틸화정도를 조사하기 위해, 정맥혈에서 DNA가 표준방법을 이용하여 채취되었다.
(1)NR3C1 1F 메틸화
본 발명에서는 NR3C1 (GeneBank #AY 436590) 엑손 1F 부위의 메틸화 패턴을 조사하였다. 특히, Perroud 등이 기술한 첫 번째 내지 세 번째 CpG 사이트(2011) 및 Oberlander et al.이 기술한 6 ~ 8 번째 CpG 사이트 (2008)에 해당하는 엑손 1F (도 1b)에서 3 개의 CpG 사이트를 조사하였다. 엑손 2의 시작부터 13개 뉴클레오타이드에 위치한 번역시작부위(1+)에서 -3166과 -3147사이에 위치한 NR3C1 엑손 1F 서열의 CpG풍부 영역을 분석하였으며, 이 부위에 포함된 3개 CpG가 분석되었다. 이 세부위는 경계성 인격장애, 우울증, 외상후스트레스 장애환자에서 조기인생사건이나 이들 질환과 관련하여 이부위의 메틸화 변화가 광범위하게 연구되었기 때문에 선택되었다. 또한 최근의 리뷰논문에서 이 부분은 메틸화와 조기인생역경과 연관성이 비교적 일관적이라고 보고되었다(Daskalakis and Yehuda, 2014).
혈액채취에 동의한 참가자로부터 얻은 혈액 샘플을 이용하여 다음과 같이 NR3C1 유전자의 DNA 메틸화정도를 조사하였다. 게놈 DNA (1 ㎍)를 전혈로부터 추출하고 혈액 응고제를 QIAamp DNA 혈액 미니 키트 (Qiagen, Valencia, CA, USA)를 사용하여 처리 하였다. 이어서, DNA를 EpiTech Bisulfite Kit(Qiagen)을 사용하여 제조업체의 프로토콜에 따라 bisulfite처리했다. NR3C1 유전자의 406-bp 단편의 증폭은 도 1b에 기술 된 정방향 및 역방향 프라이머로 바이설파이트 처리된 DNA로부터 중합효소연쇄반응(PCR)에 의해 수행되었다. PCR은 다음 조건으로 수행되었다; 94 ℃에서 15분, 이어서 30초 동안 94 ℃, 30초 동안 58 ℃, 및 40초 동안 72 ℃에서 45 사이클, 72 ℃에서 10 분의 최종 연장이었다. PSQ 96M 피로시퀀싱시스템(Biotage)을 사용하여 DNA 폴리머라제에 의해 도입된 뉴클레오티드를 식별함으로써 PCR 생성물을 서열 분석 하였다. 파이로 Q-CpG 소프트웨어, 버전 1.0.9(Biotage) 를 사용하여 각 CpG 부위에서 메틸화 백분율을 정량화 하였다. 이후 분석에서, 3개의 CpG 사이트인 CpG1, CpG2 및 CpG3에서의 개별적인 메틸화 백분율 및 그 평균값이 사용되었다.
(2) 다양한 특성들의 평가
심장예후에 잠재적으로 작용할 수 있는 다양한 특성들이 다음과 같이 평가되었다. 인구 통계학적 특성들로는 연령, 성별, 교육, 결혼상태, 독거여부, 주택(소유 또는 임대), 현재 직업(취업 여부)에 대해 평가하였다. 우울증에 대한 임상적 특성으로는 자가 평가된 Beck Depression Inventory (BDI) 점수, 과거 우울증 병력과 가족력에 대한 자료를 얻었다. 심혈관 특성들에 대하여서는 ACS 진단(MI or ACS), ACS과거 병력과 가족력, 고혈압과 당뇨병 진단, 보고된 현재 흡연상태에 대해 평가되었다. 다음의 심혈관위험마커들에 대한 평가도 진행되었다: 좌심실 박출률(left ventricular ejection fraction)과 벽운동(wall motion) 평가를 위한 심초음파, 심박수, PR간격, QRS간격, QTc간격을 평가하기 위한 심전도, 체질량 지수(BMI)와 혈압. 그리고 트로포닌 I, 크레아틴 키나아제-MB, 종양괴사인자 알파 (TNF-α), 인터루킨(IL)-1β, IL-6, IL-18, 고감도 C 반응단백 (hs-CRP), 호모시스테인, 총콜레스테롤, 저밀도지질단백질(LDL), 중성지방 (triglyceride)와 같은 진단검사의학과적 검사결과도 조사되었다
3. 장기예후
삭제
장기심장예후는, 입원, 사망, 재발성 MI, 경피적 관상동맥중재술에 대한 자세한 전자정보가 축적되어있는 KAMIR 데이터를 이용하여 종합적으로 평가되었다. 본 연구에 참여한 모든 참여자에 대하여 이러한 예후에 대하여 추적하였다. 생존분석 중에서 비위계적 종료점 분석(non-hierarchic endpoint analysis)을 가능하게 하기위해, 모든 환자를 관심평가지점 또는 사망까지 추적하였다. 1차 결과지표는 주요심장부작용사건(MACE)이었으며, 이는 모든 원인으로 인한 사망, 심근경색(MI) 및 경피적 관상동맥 중재술(PCI)을 포함한다. 2차 결과지표는 모든 원인으로 인한 사망, 심인성 사망(다른 설명이 불가능한 급사, 부정맥으로 인한 사망, 또는 심근경색(MI) 또는 심부전 후 사망, 또는 심장 수술 또는 심내막염으로 인한 사망으로 정의됨), 심근경색(MI) 및 경피적 관상동맥중재술(PCI)이었다. 모든 잠재적인 사건들은 참여자들의 우울증 공존발병상태에 대해 모르는 연구참여 심장내과전문의로 구성된 독립적인 종료점위원회에 의해 최종 결정되었다.
4. 통계분석
참여자들의 중앙값을 이용하여 NR3C1 메틸화 퍼센트가 이진변수(낮은 그룹과 높은 그룹)으로 분류되었다. t-검정 또는 χ2 검정을 적절히 사용하여 낮은 그리고 높은 메틸화정도를 갖는 ACS 환자들의 인구사회학적, 임상적 특성들이 비교되었다. 메틸화 퍼센트와 심혈관계 위험마커들과의 연관성을 BDI 점수로 보정한 스피어만 상관계수로 산정하였다. 잠재적으로 메틸화정도와 연관되는 인자(P<0.05)들과 MACE에 잠재적 영향을 미지는 것으로 알려진 다른 변수들이 이후 분석에서 공변인으로 사용되었다. Kaplan-Meier 곡선이 계산되었고, 낮은 그리고 높은 메틸화정도를 갖는 ACS 환자들의 MACE의 누적분포가 로그순위법을 통해 비교되었고 추가적으로 기저선의 우울증 상태에 따라 층화되었다. 첫 번째 복합 및 개별 MACE까지의 시간이 콕스비례위험모델(Cox proportional hazards model)을 사용하여, 상기 설명된 두 군 사이에서 잠재적 공변인을 보정한 후, 비교되었다. 이진 범주형 접근 방식을 넘어서 그 효과를 재검토하기 위하여, 연속 노출 변수(10% 단위 증가)로서 메틸화 값과 삼진구분(낮은, 중간, 높은 그룹) 방법을 사용하여 추가 감도 분석(additional sensitivity analyses)를 수행하였다. Schoenfeld 잔차검증이 모든 모델에서 비례위험가정을 검증하기 위해 사용되었다. 모든 통계 검정을 유의 수준 0.05로 양면 처리되었다. SPSS 21.0 및 STATA 12.0 소프트웨어를 사용하여 통계 분석을 수행하였다.
5. 결과
(1) NR3C1 메틸화정도와 기준시점 특성
969참여자중, 378 (39%) ACS 환자에서 기준시점에서 우울증을 경험하였다. CpG1, CpG2, 및 CpG3 부위의 개별 메틸화정도와 3부위의 평균값의 중앙값(사분범위)와 평균(표준편차)가 하기 표 1에 요약되어있다.
Median (interquartile range) Mean (standard deviation)
CpG average 20.4 (12.4-28.4) 21.7 (12.0)
CpG1 15.9 (9.9-23.7) 17.3 (9.9)
CpG2 24.3 (14.0-34.0) 25.2 (15.1)
CpG3 23.0 (11.0-30.0) 22.7 (13.5)
상기 표 1에 나타난 바와 같이, 3부위의 NR3C1 methylation percentages 값이 서로 밀접하게 연관되어 있기 때문에(all Spearman's rho > 0.7, p-value < 0.001), 평균값이 개별 값에 비해 정확하고 개별 값과 유사하기 때문에 3부위의 평균값을 이후 분석에서 단일 값으로 사용하였다.
또한, 낮은 또는 높은 NR3C1 메틸화정도를 갖는 ACS 환자들의 기준시점 특성이 표 2에서 비교되었다
Figure 112020059788632-pat00001
표 2에 나타난 바와 같이, 낮은 메틸화를 가진 그룹의 평균값(표준편차)과 범위는 12.2 (5.2)와 0-20.4%였고 높은 메틸화를 가진 그룹은 31.2 (9.1) 와 20.4-66.0%였다. 높은 메틸화정도는 높은 BDI 점수와만 유의한 연관성이 있었고, 기준시점의 특성이라는 관점에서 혈액샘플제공에 동의한 참여자와 그렇지 않은 환자들 간의 임상적 특성에는 차이가 없었다 (all p-values > 0.15).
표 1에 나타난 기준시점에서 969명의 환자에 대한 NR3C1 유전자의 3개 CPG 부위 메틸화 백분율 평균의 중앙값(Median) 및 평균값(Mean) 및 표 2의 결과를 고려하여 기준레벨을 21%로 결정하였다.
(2) NR3C1 메틸화정도와 심혈관위험마커와 연관성
평균 NR3C1 메틸화 값은 BDI 점수로 보정한 이후에도 QTc 간격 연장, 높은 BMI, 높은 troponin I 과 CK-MB 농도와 연관이 있었다. afer partial for BDI scores (표 3). 이러한 특성들은 이후 분석에서 공변인으로 사용되었다. 또한 나이, ACS 진단, ACS 과거력, 고혈압, 당뇨, 흡연, LVEF, 우울장애 등 또한 이전연구에서 보고된 심장예후와 연관성을 고려하여 공변인으로 분석에서 사용되었다.
Figure 112020059788632-pat00002
(3) NR3C1 메틸화정도가 ACS예후에 미치는 효과
모든 참여자들의 심장예후가 2017년도 또는 그들의 사망시점까지 [추적기간 median; mean (standard deviation)=8.4; 8.7 (1.5) years] 추적되었다. 383 (39.5%) 참여자가 1차 결과지표인 복합 MACE를 경험하였다. 2차 결과지표를 경험한 수는 다음과 같았다: 모든 원인으로 인한 사망을 178 (18.4%)에서, 심장으로 인한 사망이 98 (10.1%)에서, 심근경색이 101 (10.4%)에서, PCI 가 139 (14.3%)명에서 보고되었다. 도 2a 내지 도 2c에 낮은 그리고 높은 NR3C1 메틸화정도를 갖는 ACS 환자들의 복합 MACE에 대한 누적위험도가 기술되어 있다. 유의한 차이가 전체참여자에서 발견되었고, 우울증상태에 대해 층화했을 경우는 우울증이 있는 군에서만 유의한 차이가 발견되고 우울증이 없는 군에서는 차이가 발견되지 않았다.
낮은 그리고 높은 NR3C1 메틸화정도에 따른 첫 번째 MACE 비율에 대한 비교가 잠재적 공변인에 대한 순차적 보정 후에 표 4에 기술되었다.
Figure 112020059788632-pat00003
표 4로부터 보정되지 않은 분석에서는 높은 메틸화정도가 복합 MACE, 모든 원인에 의한 사망률, MI, PCI의 높은 비율과 연관이 있었고, 나이 ACS진단, ACS 과거력, 고혈압, 당뇨, 흡연, LVEF, QTc 간격, BMI, serum levels of troponin I 와 creatine kinase-MB의 혈중농도 등이 보정된 이후에는 이러한 연관성이 약해져 복합 MACE와 MI과 연관성만 유의함이 남아있었다. 우울상태를 추가적으로 보정한 이후 연관성은 더욱 약해졌고 복합 MACE라는 예후와만 유의한 연관성이 관찰되었다.
낮은 그리고 높은 NR3C1 메틸화정도에 따른 첫 번째 MACE 비율에 대한 비교를 기저선의 우울증 상태에 대해 층화되고, 잠재적 공변인에 대해 보정하여 표5에 나타내었다.
Figure 112020059788632-pat00004
표 5에 나타난 바와 같이, 나이 ACS진단, ACS 과거력, 고혈압, 당뇨, 흡연, LVEF, QTc 간격, BMI, serum levels of troponin I 와 creatine kinase-MB의 혈중농도 등이 보정된 이후에 우울장애가 있는 경우에서만 높은 메틸화정도가 높은 비율의 복합 MACE, 모든 원인에 의한 사망, 심장으로 인한 사망, PCI와 유의하게 연관 있었다. NR3C1 메틸화와 우울장애와 곱셈의 상호작용 측면에서는 복합 MACE, 모든 원인에 의한 사망, 심장으로 인한 사망과만 유의하게 연관이 있었다.
메틸화정도를 연속변수로 사용하거나 삼진 구분법(lower, middle, and higher) 으로 구분하여 분석한 추가 감도 분석 결과를 각각 표 6 및 표 7에 나타내었다.
Absent depressive disorder (N=591) Present depressive disorder (N=378)
Major adverse cardiac events 0.97 (0.92-1.02) 1.11 (1.08-1.17)‡
All-cause mortality 0.98 (0.91-1.06) 1.08 (1.02-1.16)*
Cardiac death 0.98 (0.88-1.01) 1.11 (1.02-1.20)†
Myocardial infarction 0.94 (0.84-1.05) 1.07 (1.00-1.14)*
Percutaneous coronary intervention 0.96 (0.88-1.05) 1.12 (1.02-1.22)*
데이터는 연령, 벡 우울증 인벤토리 점수, ACS 진단, 이전 ACS, 고혈압, 당뇨병, 흡연, QTc 지속 기간, 좌심실 배출 분획, 체질량 지수 및 트로포닌 I 및 크레아틴 키나아제-MB의 혈청 수준에 대해 기준선에서 조정 된 것으로 추정되었다. *p-value<0.05; †p-value<0.01; ‡p-value<0.001.
Outcomes NR3C1 average methylation Absent depressive disorder (N=591) Present depressive disorder (N=378)
Major adverse
cardiac events		 Lower Ref Ref
Middle 1.00 (0.71-1.39) 0.88 (0.55-1.41)
Higher 0.73 (0.48-1.11) 1.48 (1.02-2.13)*
All-cause mortality Lower Ref Ref
Middle 0.97(0.59-1.60) 1.11 (0.55-2.26)
Higher 0.86 (0.47-1.55) 1.58 (0.91-2.76)
Cardiac death Lower Ref Ref
Middle 1.45 (0.73-2.88) 1.24 (0.46-3.35)
Higher 0.74 (0.30-1.85) 1.75 (0.81-3.78)
Myocardial infarction Lower Ref Ref
Middle 1.04(0.54-1.97) 1.39 (0.55-3.51)
Higher 0.50 (0.20-1.25) 1.78 (0.84-3.79)
Percutaneous coronary intervention Lower Ref Ref
Middle 0.90 (0.52-1.58) 0.71 (0.33-1.53)
Higher 0.61 (0.30-1.27) 1.53 (0.84-2.78)
데이터는 연령, 벡 우울증 인벤토리 점수, ACS 진단, 이전 ACS, 고혈압, 당뇨병, 흡연, QTc 지속 기간, 좌심실 배출 분획, 체질량 지수 및 트로포 닌 I 및 크레아틴 키나아제 -MB의 혈청 수준에 대해 기준선에서 조정 된 것으로 추정되었다.
*p-value<0.05; †p-value<0.01; ‡p-value<0.001.
표 6 및 표 7의 결과를 요약하면, 연관성의 강도는 연속변수로 사용한 분석에서는 변하지 않았으나, 삼진구분법으로 구분하여 사용한 분석에서는 우울장애가 있는 환자에서만 공변인 보정이후 복합 MACE에 대한 연관성만 유의했고 나머지 유의성은 모두 소실되었다. 모든 콕스 위험분석에서 모형 가정은 적절하였다(Schoenfeld pvalues > 030).
(4) 결 론
상술된 결과는 기준시점에서 측정된 기준레벨보다 높은 메틸화정도가 ACS 급성기의 다양한 심혈관위험마커와 연관되며, 나쁜 장기예후와 연관이 된다는 것을 보여준다. 이러한 전향적 연관성은 기준시점에서 우울증이 존재하는 경우에서만 유의했고, 유의한 상승적 상호작용이 확인되었으며, 이러한 연관성은 다양한 잠재적 공변인과 독립적이었다. 또한, ACS환자에서 NR3C1 과메틸화는 QTc 간격, BMI, 혈중 troponin I 와 CK-MB 농도등과 같은 심혈관위험마커들과 유의하게 연관되었다. 이러한 결과는 최근 NR3C1 과메틸화와 죽상경화증과의 연관성 그리고 과각성된 심혈관반응성과의 연관성을 보고한 결과들과 일치한다.
기준레벨 이상인 NR3C1 과메틸화의 ASC 장기예후에 대한 연관성은 우울증에 의해 더 강하게 설명되었다. 메틸화와 장기예후와 유의한 연관성은 우울증이 있는 경우에서만 심혈관위험인자에 독립적으로 연관되었다. 이러한 상승효과는 다음의 기전으로 설명될 수 있다. 생물학적 측면으로는 NR3C1 과메틸화가 심혈관위험마커의 부정적 특성과 연관되고, 여기에 더해 우울증 자체가 호염기성 사이토카인의 변화, 자율신경계 및 혈소판의 기능부전등과 연관되어 이러한 변화로 인해 심장예후에 부정적인 영향을 미쳤을 수 있다. 이러한 상승작용은 아마도 다양한 위험기전들이 관여한다는 것을 반영한다. 행동학적 측면을 고려할 때는 NR3C1 과메틸화는 GR 발현에 기능적 영향을 미치고, HPA축을 통한 스트레스 반응에 조절이상을 최종적으로 야기함으로써 예상치 못하게 발생한 ACS로 인한 괴로움, 금전적, 직업적 문제, 일상생활수행의 장애, 이외의 ACS 환자들이 마주하게 되는 다양한 스트레스상황에 대해 대처할 수 있는 능력을 감소시킬 수 있다. 또한 우울증은 누워서 지내는 생활방식, 비정기적인 병원방문과 불규칙한 약물 복용등과 같은 비건강적인 생활과 연관되어 있어 이러한 것들이 나쁜 심장예후에 영향을 미칠 수 있다.
결과적으로, ACS 환자에서 기준시점의 NR3C1 과메틸화는 우울증이 존재하였을 때 심혈관계 위험마커 등을 포함한 잠재적 공변인들과는 독립적으로 나쁜 장기예후를 예측할 수 있다. 유사하게 우울증과 나쁜 장기예후와의 연관성은 NR3C1 과메틸화를 가진 ACS 환자에서 더 강해진다. 기준시점에서 NR3C1 메틸화 검사는 나쁜 ACS 예후를 가진 고위험군을 구분하기 위한 후생유전학적 위험도를 선별하는 임상적 의의가 있다.
따라서, 본 발명은 특히 NR3C1 메틸화정도는 ACS 환자가 기준시점에서 우울증 진단을 받은 경우, 급성관상동맥증후군 장기예후 검사를 위한 유망한 예후예측바이오마커로서의 용도를 제공할 수 있다. 즉 기준시점에서 우울증이 있는 ACS 환자의 NR3C1 메틸화정도를 측정함으로써 기준시점 5년 이후의 장기 심장 예후에 대한 임상적 예측을 개선할 수 있을 것이기 때문이다.
이와 같이, 임상적 함의 측면에서 기준시점의 NR3C1 메틸화정도를 급성관상동맥증후군 장기예후 검사용 바이오마커로 사용하는 것은 비 침습성과 편리성의 이점을 제공하므로 본 발명은 급성관상동맥증후군 재발 및/또는 사망 등을 포함하는 주요심장부작용사건의 발생가능성을 보다 쉽게 확인할 수 있다.
결과적으로 본 발명은 치료약물 또는 치료방법에 대한 의사 결정 과정에 기여할 수 있을 뿐만 아니라 환자의 급성관상동맥증후군 재발 및/또는 사망 등을 선제적으로 예방할 수 있는 잠재적 도구로서 큰 도움이 될 수 있을 것이다.
본 발명은 이상에서 살펴본 바와 같이 바람직한 실시 예를 들어 도시하고 설명하였으나, 상기한 실시 예에 한정되지 아니하며 본 발명의 정신을 벗어나지 않는 범위 내에서 당해 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 다양한 변경과 수정이 가능할 것이다.

Claims (12)

  1. 급성관상동맥증후군(acute coronary syndrome: ACS)이 발병된 환자의 우울증유무를 기준시점에서 확인하는 조사단계;
    상기 조사단계에서 우울증이 있는 것으로 확인된 환자의 생물학적 시료에 포함된 우울증 연관 ACS 장기예후 검사용 바이오마커의 레벨 또는 양을 측정하는 측정단계; 및
    상기 측정단계에서 측정된 상기 우울증 연관 ACS 장기예후 검사용 바이오마커의 레벨 또는 양을 기준으로 ACS의 재발 또는 사망을 포함하는 주요심장부작용사건의 발병 위험을 결정하는 결정단계;를 포함하는데,
    상기 우울증 연관 ACS 장기예후 검사용 바이오마커는 NR3C1 유전자의 엑손 2의 시작부터 13개 뉴클레오티드에 위치한 번역시작부위(+1)에서 -3166과 -3147 사이에 위치한 NR3C1 엑손 1F 서열의 CpG 풍부 영역에 포함된 CpG 영역의 메틸화인 것을 특징으로 하는 우울증과 연관된 급성관상동맥증후군 장기예후 검사방법.
  2. 삭제
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 결정단계는 상기 측정단계에서 측정된 상기 NR3C1 유전자의 5′말단 -3166에서 -3147위치 뉴클레오티드 영역에 포함된 CpG 영역의 메틸화 정도를 기 설정된 기준 레벨과 비교하여 수행되는데,
    상기 기준 레벨은 상기 기준시점에서 급성관상동맥증후군이 발병된 환자 집단으로부터 얻어진 NR3C1 유전자의 5′말단 -3166에서 -3147 위치의 뉴클레오티드 영역에 포함된 3개 CpG 영역의 메틸화 정도에 따라 결정되는 것을 특징으로 하는 급성관상동맥증후군 장기예후 검사방법.
  4. 제 3 항에 있어서,
    상기 3개 CpG 영역은 NR3C1 유전자의 5′말단 -3166 및 -3165 위치의 뉴클레오티드 영역인 CpG1, NR3C1 유전자의 5′말단 -3151 및 -3150 위치의 뉴클레오티드 영역인 CpG2 및 NR3C1 유전자의 5′말단 -3148 및 -3147 위치의 뉴클레오티드 영역인 CpG3이고, 상기 기준 레벨은 상기 CpG1, CpG2 및 CpG3의 메틸화 백분율 평균의 중앙값과 평균값을 고려하여 결정된 21%인 것을 특징으로 하는 급성관상동맥증후군 장기예후 검사방법.
  5. 제 4 항에 있어서,
    상기 결정단계에서 상기 측정된 CpG1, CpG2 및 CpG3의 메틸화 평균값이 상기 기준 레벨 이상이면 상기 기준시점으로부터 5년 이후 상기 주요심장부작용사건의 발병 위험이 있는 것으로 결정되는 것을 특징으로 하는 급성관상동맥증후군 장기예후 검사방법.
  6. 제 1 항, 제 3 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CpG 영역의 메틸화 정도가 증가되면 상기 주요심장부작용사건의 발병 위험이 증가되는 것을 특징으로 하는 우울증과 연관된 급성관상동맥증후군 장기예후 검사방법.
  7. 제 6 항에 있어서,
    상기 CpG 영역 중 NR3C1 유전자의 5′말단 -3166 및 -3165 위치의 뉴클레오티드 영역인 CpG1, NR3C1 유전자의 5′말단 -3151 및 -3150 위치의 뉴클레오티드 영역인 CpG2 및 NR3C1 유전자의 5′말단 -3148 및 -3147 위치의 뉴클레오티드 영역인 CpG3의 메틸화 평균값이 기준레벨보다 10% 증가하면 상기 주요심장부작용사건의 발병 위험이 11%증가하는 것을 특징으로 하는 우울증과 연관된 급성관상동맥증후군 장기예후 검사방법.
  8. 제 1 항, 제 3 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 생물학적 시료는 혈액을 포함하는 체액 또는 조직으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 급성관상동맥증후군 장기예후 검사방법.
  9. 기준시점에서 우울증이 있는 것으로 조사된 급성관상동맥증후군 환자의 NR3C1 유전자의 엑손 2의 시작부터 13개 뉴클레오티드에 위치한 번역시작부위(+1)에서 -3166과 -3147 사이에 위치한 NR3C1 엑손 1F 서열의 CpG 풍부 영역에 포함된 CpG 영역의 메틸화를 측정하는 우울증 연관 ACS 장기예후 검사용 바이오마커 측정수단;을 포함하는 급성관상동맥증후군 장기예후 검사용 진단키트.
  10. 제 9 항에 있어서,
    상기 측정수단이 아황산수소나트륨(sodium bisulfite)과 중합효소연쇄반응(polymerase chain reaction; PCR)을 이용하거나, 5-methylcytosine에 대한 단일클론항체(monoclonal antibody)를 이용하는 것을 특징으로 하는 급성관상동맥증후군 장기예후 검사용 진단키트.
  11. 제 9 항에 있어서,
    상기 CpG 영역은 NR3C1 유전자의 5′말단 -3166 및 -3165 위치의 뉴클레오티드 영역인 CpG1, NR3C1 유전자의 5′말단 -3151 및 -3150 위치의 뉴클레오티드 영역인 CpG2 및 NR3C1 유전자의 5′말단 -3148 및 -3147 위치의 뉴클레오티드 영역인 CpG3를 포함하는 것을 특징으로 하는 급성관상동맥증후군 장기예후 검사용 진단키트.
  12. 제 9 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 진단키트는 마이크로어레이인 것을 특징으로 하는 급성관상동맥증후군 장기예후 검사용 진단키트.
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