KR102283096B1

KR102283096B1 - 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 미세먼지에 의한 피부 염증 예방 또는 개선용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102283096B1
Application number: KR1020200040330A
Authority: KR
Inventors: 임병우
Original assignee: 주식회사 휴먼피부임상시험센터
Priority date: 2020-04-02
Filing date: 2020-04-02
Publication date: 2021-07-29

Abstract

본 발명은 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 미세먼지에 의한 피부 염증 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 화장료 조성물은 미세먼지에 의해 과발현된 NO 생성을 억제하고, 염증성 사이토카인인 IL-6, IL-8, IL-1β 및 TNF-α의 생성을 효과적으로 억제하여 피부 염증 예방 또는 개선용 화장료 조성물 및 식품 조성물로 유용할 수 있다.

Description

블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 미세먼지에 의한 피부 염증 예방 또는 개선용 화장료 조성물{Composition for prevention or improvement skin inflammation induced by particlulate matter containing fermented blueberry and black rice extracts}

본 발명은 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 미세먼지에 의한 피부 염증 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 외부 환경에 직접적으로 노출되는 신체 부위로서, 우리 몸의 중요한 기관들을 보호하는 보호막 역할을 할 뿐만 아니라 수분 증발을 조절하고 외부 감염으로부터 몸을 보호하는 역할을 한다. 하지만, 아무리 외부로부터의 바이러스 침투를 막아내는 피부일지라도 과도한 자외선, 오염된 환경 등 외부로부터 받는 스트레스는 피부 자극을 유발하게 되고, 결국에는 피부 노화로 이어지게 된다.

그런데 인구증가, 도시화, 산업화 및 자동차 증가 등의 영향으로 대기오염이 심화되고 있으며, 이에 따라 오염물질의 종류가 다양해지고 있다. 특히 우리나라의 위치적인 요인으로 중국에서 배출되는 대기오염 물질의 이동으로 인한 황사와 미세먼지 등의 피해에 직면하고 그 심각성도 높아지고 있다. 미세먼지(particulate matter)는 입자의 크기에 따라 지름이 10㎛이하인 미세먼지(PM10), 2.5㎛이하인 초미세먼지(PM2.5)로 분류된다. 우리나라 환경부는 PM10을 대기오염물질로 규제하고 있다. 이런 미세먼지 등 대기오염물질은 호흡기질환과 심장질환을 유발한다고 알려져 있으며 이와 함께 신체에 넓은 면적을 차지하고 있는 피부에 미치는 영향 또한 그 관심이 점차 확대되고 있다.

특히 대기오염물질 중 미세먼지는 표피장벽기능을 손상시키고 아토피피부염을 악화시킨다는 보고가 있다. 또한 민감성 피부는 외부의 자극이나 환경의 변화에 대하여 일반적인 피부보다 민감하게 반응하여 자극이나 피부염 증상을 보인다. 이러한 민감성 피부를 가진 사람은 정상적인 사람에 비해 미세먼지에 자극을 느끼는 정도도 더 민감하여 3배 이상의 자극감을 느낀 연구가 있었다. 따라서 미세먼지 등의 공해 물질은 특히 민감성 피부를 가진 사람들에게 피부 문제를 일으킬 가능성이 높다. 이는 피부노화에도 영향을 미치는데 최근 역학적 연구에서 미세먼지에 노출된 피부가 주름과 색소반점이 증가되어 노화와 직접적인 관련이 있다고 밝혔다. 미세먼지는 활성산소를 생산하여 콜라겐 합성을 저해하고 분해를 활성화시킬 수 있고 미세먼지 표면에 흡착된 PAH(polycyclic aromatic hydrocarbon) 가 AhR을 통하여 생체 이물 대사를 활성화하여 콜라겐 분해를 증가하여 피부노화가 발생한다. 이에 따라 미세먼지와 피부의 직접적인 접촉을 줄이는 방법과 분자학적 기전에 대한 연구를 통한 새로운 치료법을 모색해야한다.

피부에서의 염증반응(inflammatory response)은 물리적 자극이나 화학물질, 세균 등에 의해 피부손상이 유발될 때 이를 방어하기 위한 작용으로서 시작되며 다양한 면역세포와 염증성 사이토카인이 관여한다. IL-6(interleukin-6), IL-8(interleukin-8), IL-1β(interleukin-β) 등이 대표적인 염증 유도 사이토카인이다. IL-1β는 활성화된 단핵식균세포, 상피세포, 혈관내피세포에 의해 만들어져 염증 반응을 매개하는 전형적인 사이토카인이고, IL-6는 T 세포 및 대식세포에 의해 분비되어 면역 반응을 자극하며 염증 반응을 조절하는 사이토카인이다. 또한 활성화된 대식세포(macrophage)는 염증성 사이토카인뿐만 아니라 일산화질소(nitric oxide: NO)나 프로스타글란딘(prostagladin) E2 (PGE2)를 과도하게 생성하여 염증 과정을 더욱 활성화시킨다. 미세먼지 입자는 사람 각질형성세포에서 이러한 염증성 사이토카인의 발현을 증가시킨다는 보고가 있다.

이에 본 발명자들은 락토바실러스 카제이로 발효시킨 흑미 및 블루베리 추출물의 미세먼지에 의한 피부염증 완화 효능을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

한국등록특허 10-1867308호

본 발명의 목적은 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 미세먼지에 의한 피부염증 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 미세먼지에 의한 피부염증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 미세먼지에 의한 피부염증 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 해결하기 위하여,

본 발명은 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 미세먼지에 의한 피부염증 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 미세먼지에 의한 피부염증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

나아가 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 미세먼지에 의한 피부염증 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 화장료 조성물은 미세먼지에 의해 과발현된 NO 생성을 억제하고, 염증성 사이토카인인 IL-6, IL-8, IL-1β 및 TNF-α의 생성을 효과적으로 억제하여 피부 염증 예방 또는 개선용 화장료 조성물 및 식품 조성물로 유용할 수 있다.

도 1은 농도별 미세먼지 처리에 따른 (a) 세포독성 및 (b) NO 생성량을 확인한 결과이다.
도 2는 본 발명에 따른 실시예 1의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물의 세포독성을 확인한 결과이다.
도 3은 본 발명에 따른 실시예 1의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물의 NO 생성 억제를 확인한 결과이다.
도 4는 본 발명에 따른 실시예 1의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물의 IL-6 생성 억제를 확인한 결과이다.
도 5는 본 발명에 따른 실시예 1의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물의 IL-8 생성 억제를 확인한 결과이다.
도 6은 본 발명에 따른 실시예 1의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물의 IL-1β 생성 억제를 확인한 결과이다.
도 7은 본 발명에 따른 실시예 1의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물의 TNF-α 생성 억제를 확인한 결과이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

미세먼지에 의한 피부염증 예방 또는 개선용 화장료 조성물

본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 유산균은 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei)일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물은

블루베리 추출물을 제조하는 단계(단계 1);

흑미 추출물을 제조하는 단계(단계 2);

상기 단계 1의 블루베리 추출물 및 상기 단계 2의 흑미 추출물을 8 : 2 내지 6: 4의 중량비로 혼합하는 단계(단계 3); 및

상기 단계 3의 혼합물에 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei)를 0.5 내지 5%(v/v)로 첨가하고, 35 내지 40℃, pH 5.0 내지 6.0에서 12 내지 48시간 발효하는 단계(단계 4);를 포함하는 제조방법에 의해 제조된 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 추출물은 물, 탄소수 2 내지 탄소수 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 추출물을 제조할 수 있으며, 바람직하게 50% 에탄올 수용액을 이용하여 추출한 뒤 농축하여 추출물을 제조하였다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 블루베리 추출물은 50 내지 70°Brix가 되도록 농축하여 사용하였으며, 상기 흑미 추출물은 10 내지 30°Brix가 되도록 농축하여 사용하였다.

본 발명에서 사용되는 용어 "추출물(extract)"은 추출 대상을 적절한 침출액으로 짜내고 침출액을 증발시켜 농축한 제제를 의미하는 것으로, 이에 제한되지는 않으나, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물일 수 있다. 상기 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물은 통상의 기술분야에 공지된 일반적인 추출방법, 분리 및 정제방법을 이용하여 제조할 수 있다. 상기 추출방법으로는, 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게 열탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 방법을 사용할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 상술한 본 발명의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물의 화장품학적 유효량(cosmetically effective amount) 및 화장품학적으로 허용되는 담체를 포함하여 제조할 수 있다.

화장료 조성물의 외형은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는, 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 또한 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다.

본 발명의 일실시예에 따른 상기 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저로 구성된 제형에서 선택된 하나 이상의 제형일 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물에는 상기 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물 이외에 기능성 첨가물 및 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분이 추가로 포함될 수 있다. 상기 기능성 첨가물로는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에는 또한, 상기 기능성 첨가물과 더불어 필요에 따라 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분을 배합해도 된다. 이외에 포함되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

건강기능식품 또는 건강식품 조성물

본 발명은 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 미세먼지에 의한 피부염증 예방 또는 개선용 건강기능식품 또는 건강식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물에 있어서, 상기 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물은

블루베리 추출물을 제조하는 단계(단계 1);

흑미 추출물을 제조하는 단계(단계 2);

본 발명의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 건강기능식품 및 건강식품 조성물로 사용하는 경우, 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 본 발명의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 첨가할 수 있는 건강기능식품의 예로는 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 형태일 수 있으며, 건강식품의 예로는 각종 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 캔디류, 스넥류, 면류, 아이스크림, 유제품, 스프, 이온음료, 음료수, 알코올 음료, 껌, 차 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품 및 건강식품 조성물을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 함유하는 건강기능식품 및 건강식품 조성물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 및 건강식품 조성물 중의 상기 조성물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 유지를 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

본 발명의 건강기능식품 및 건강식품 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 본 발명 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 함유하는 것 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트라이톨 등의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강기능식품 및 건강식품 조성물 100 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

상기 외에 본 발명의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 함유하는 건강기능식품 및 건강식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강기능식품 및 건강식품 조성물은 천연 과일쥬스 및 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 함유하는 건강기능식품 및 건강식품 조성물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물의 제조

<1-1> 블루베리 추출물의 제조

블루베리(미국산) 중량 대비 30배(wt/v%)의 50% 에탄올을 첨가하여 실온에서 24시간동안 추출하였으며, 추출과정을 3회 반복하였다. 상기 블루베리 추출액을 농축하여 최종 당도가 50 내지 70°Brix가 되도록 농축하였다. 농축액을 여과한 뒤, 물을 이용하여 1/14로 희석하였다.

<1-2> 흑미 추출물의 제조

흑미(국내산) 중량 대비 30배(wt/v%)의 50% 에탄올을 첨가하여 실온에서 24시간동안 추출하였으며, 추출과정을 3회 반복하였다. 상기 흑미 추출액을 농축하여 최종 당도가 10 내지 30°Brix가 되도록 농축하였다. 농축액을 여과한 뒤, 물을 이용하여 1/4로 희석하였다.

<1-3> 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물의 제조

상기 실시예 1-1의 블루베리 추출물 및 상기 실시예 1-2의 흑미 추출물을 하기 7 : 3의 중량비로 혼합한 뒤, pH를 6.0으로 조절하였다. 이후 상기 혼합된 농축액에 유산균 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei:KCTC 3109)를 2%(v/v)로 접종하여 37℃, pH 6.0 으로 24시간 동안 배양하여 발효한다. 최종 동결건조를 하여 분말화함으로써 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 분말 형태로 획득하였다.

<비교예 1>

상기 실시예 1과 동일한 방법으로 제조하되, 흑미 추출물은 혼합하지 않고, 블루베리 추출물에 락토바실러스 카제이를 사용하여 블루베리 유산균 발효물을 제조하였다.

<비교예 2>

상기 실시예 1과 동일한 방법으로 제조하되, 블루베리 추출물은 혼합하지 않고, 흑미 추출물에 락토바실러스 카제이를 사용하여 흑미 유산균 발효물을 제조하였다.

<준비예> 세포 배양

각질형성세포(Human Keratinocyte Cell Lines, HaCaT)는 한국세포주은행 (Seoul National University, Seoul, Korea)에서 구입하였다. HacaT 세포는 37℃, 5% CO₂ 조건하에 10% FBS (fetal bovine serum) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신 (PS)을 포함하는 고글루코스 DMEM (WELGENE, KOREA) 배양액에서 배양하였다.

<실험예 1> 미세먼지 처리 조건 확인

LPS(1㎍/㎖)와 유사한 수준으로 NO 생성량을 나타내는 최적농도를 설정하고자, HaCaT 세포에 미세먼지를 0.1, 1, 10, 25, 50, 100, 250 및 500㎍/㎖로 처리하고 세포독성 및 NO 생성량을 측정하였다.

그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 미세먼지를 250 및 500㎍/㎖의 농도로 처리할 경우 LPS와 유사한 NO 생성을 보이는 것을 확인하였다. 이후 실험에서 미세먼지를 250㎍/㎖ 농도로 처리하여 실험하였다.

<실험예 2> 세포독성 평가

HaCaT 세포를 96well plate (Corning, USA)에 2×10⁴cells/well의 세포 수가 되도록 100ul씩 분주하여 37℃, 5% CO₂incubator에서 24시간 배양한 후 실시예 1의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 100, 200, 500㎍/㎖의 농도 또는 미세먼지를 250㎍/㎖로 처리하여 24시간동안 배양하였다. 이후 0.2 ㎎/㎖ 농도의 MTT solution을 각 well에 100㎕ 씩 넣고 2시간 동안 배양한 후 상층액을 제거하고 DMSO를 100㎕씩 분주하여 formazan을 잘 녹인 후 570nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 실시예 1의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 세포독성을 나타내지 않았다.

<실험예 3> NO 생성 억제 확인

본 발명에 따른 실시예 1의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물의 NO 생성 억제를 확인하기 위해, HaCaT 세포를 6well plate (Corning, USA)에 1×10⁶cells/well의 세포 수가 되도록 분주하여 37℃, 5% CO₂incubator에서 24시간 배양한 후, 미세먼지를 250㎍/㎖농도로 처리하고, 비교예 1, 2 및 실시예 1을 각각 200㎍/㎖ 농도로 처리하여 18시간 동안 배양하였다. 이후 상등액 100㎕와 Griess reagent 100㎕을 혼합하여 상온에서 10분간 반응시킨 뒤, 540nm에서 흡광도를 측정하였다. Nitrite standard로 표준곡선을 작성하여 NO의 생성량을 측정하였다.

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 비교예 1 내지 비교예 2 대비 본 발명의 실시예 1의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 처리할 경우, 미세먼지에 의해 유도된 NO 생성을 현저하게 감소시키는 것을 확인하였다.

<실험예 3> 사이토카인 생성 억제 확인

본 발명에 따른 실시예 1의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물의 염증성 사이토카인 생성 억제를 확인하기 위해 HaCaT 세포를 6well plate (Corning, USA)에 1×10⁶cells/well의 세포 수가 되도록 분주하여 37℃, 5% CO₂incubator에서 24시간 배양하였다. 그 후, 미세먼지를 250㎍/㎖ 농도로 처리하고, 비교예 1, 2 및 실시예 1을 각각 200㎍/㎖ 농도로 처리하여 18시간 동안 CO₂incubator에 배양한 후 배양 상층액을 희석하여 제조사의 지시에 따라 ELISA를 수행하였으며, 450nm 파장에서 마이크로스펙트로포토미터로 측정하였다. 최종 사이토카인의 양은 일정 단백질당 사이토카인 양으로 환산하여 음성대조군(Control)과 비교하였다.

그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 비교예 1의 블루베리 추출물의 유산균 발효물, 비교예 2의 흑미 추출물의 유산균 발효물 및 실시예 1의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 처리하는 경우, 미세먼지에 의해 증가된 IL-6 생성량 대비 각각 157.6%, 143.8%, 102.6%로 감소하였다. 또한, 미세먼지에 의해 증가한 IL-6의 양을 100%라 하였을 때, 비교예 1은 32.94%, 비교예 2는 49.01%의 억제능을 보였으며, 특히 실시예 1에서 96.97%의 IL-6 생성 억제능을 보였으며, 비교예 1(블루베리 추출물의 유산균 발효물) 보다 64.03%, 비교예 2(흑미 추출물의 유산균 발효물) 보다 47.96% 더 우수한 IL-6 억제능을 보이는 것을 확인하였다.

도 5에 나타낸 바와 같이, 비교예 1의 블루베리 추출물의 유산균 발효물, 비교예 2의 흑미 추출물의 유산균 발효물 및 실시예 1의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 처리하는 경우, 미세먼지에 의해 증가된 IL-8 생성량 대비 각각 131.8%, 135.5%, 105.6%로 감소하였다. 또한, 미세먼지에 의해 증가한 IL-8의 양을 100%라 하였을 때, 비교예 1은 34.7%, 비교예 2는 27.1%의 억제능을 보였으며, 특히 실시예 1에서 88.5%의 IL-8 생성 억제능을 보였으며, 비교예 1(블루베리 추출물의 유산균 발효물) 보다 53.8%, 비교예 2(흑미 추출물의 유산균 발효물) 보다 61.4% 더 우수한 IL-8 억제능을 보이는 것을 확인하였다.

또한, 도 6에 나타낸 바와 같이, 비교예 1의 블루베리 추출물의 유산균 발효물, 비교예 2의 흑미 추출물의 유산균 발효물 및 실시예 1의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 처리하는 경우, 미세먼지에 의해 증가된 IL-1β 생성량 대비 각각 155.5%, 147.3%, 120.5%로 감소하였다. 또한, 미세먼지에 의해 증가한 IL-1β의 양을 100%라 하였을 때, 비교예 1은 31.9%, 비교예 2는 41.96%의 억제능을 보였으며, 특히 실시예 1에서 74.85%의 IL-1β 생성 억제능을 보였으며, 비교예 1(블루베리 추출물의 유산균 발효물) 보다 42.95%, 비교예 2(흑미 추출물의 유산균 발효물) 보다 32.89% 더 우수한 IL-1β 억제능을 보이는 것을 확인하였다.

도 7에 나타낸 바와 같이, 비교예 1의 블루베리 추출물의 유산균 발효물, 비교예 2의 흑미 추출물의 유산균 발효물 및 실시예 1의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 처리하는 경우, 미세먼지에 의해 증가된 TNF-α 생성량 대비 각각 200.1%, 165.8%, 116.5%로 감소하였다. 또한, 미세먼지에 의해 증가한 TNF-α의 양을 100%라 하였을 때, 비교예 1은 17.54%, 비교예 2는 45.8%의 억제능을 보였으며, 특히 실시예 1에서 86.41%의 TNF-α 생성 억제능을 보였으며, 비교예 1(블루베리 추출물의 유산균 발효물) 보다 68.87%, 비교예 2(흑미 추출물의 유산균 발효물) 보다 40.61% 더 우수한 TNF-α 억제능을 보이는 것을 확인하였다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허 청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

화장료의 제조예

본 발명에 따른 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물은 목적에 따라 여러 형태의 화장료로 제조 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 화장료의 제조방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

<화장료 제조예 1> 유연 화장수의 제조

블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물 10.0 중량부

1,3-부틸렌글리콜 1.00 중량부

디소듐이디티에이 0.05 중량부

알란토인 0.10 중량부

디포타슘글리시리제이트 0.05 중량부

시트르산 0.01 중량부

소듐시트레이트 0.02 중량부

글리세레스-26 1.00 중량부

알부틴 2.00 중량부

하이드로제네이티드캐스터오일 1.00 중량부

에탄올 30.0 중량부

보존제 미량

착색제 미량

착향제 미량

정제수 잔량

<화장료 제조예 2> 영양 크림의 제조

블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물 10.0 중량부

1,3-부틸렌글리콜 7.00 중량부

글리세린 1.00 중량부

D-판테놀 0.10 중량부

식물 추출물 3.20 중량부

마그네슘알루미늄실리케이트 0.30 중량부

PEG-40 스테아레이트 1.20 중량부

스테아르산 2.00 중량부

폴리소르베이트 60 1.50 중량부

친유형글리세릴스테아레이트 2.00 중량부

소르비탄세스퀴올리에이트 1.50 중량부

세테아릴알코올 3.00 중량부

미네랄오일 4.00 중량부

스쿠알란 3.80 중량부

카르릴릭/카프릭트리글리세라이드 2.80 중량부

식물성오일 1.80 중량부

디메치콘 0.40 중량부

디포슘글리시리제이트 미량

알란토인 미량

소듐 히아루로네이트 미량

토코페릴아세테이트 적량

트리에탄올아민 적량

보존제 적량

착향제 적량

정제수 잔량

건강식품의 제조예

본 발명에 따른 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물은 목적에 따라 여러 형태의 건강식품으로 제조 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 건강식품의 제조방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

<건강식품 제조예 1> 유제품(dairy products)의 제조

본 발명의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물 0.01-1 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

<건강식품 제조예 2> 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다. 검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다. 본 발명의 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 진공 농축기에서 감압농축하고 건조분말을 얻었다. 상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.

곡물류(현미 34 중량부, 율무 19 중량부, 보리 20 중량부),

종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),

블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물 (2 중량부),

영지(1.5 중량부), 및

지황(1.5 중량부).

건강기능식품의 제조예

본 발명에 따른 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물은 목적에 따라 여러 형태의 건강기능식품으로 제조 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 건강기능식품의 제조방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

<건강기능식품 제조예 1> 건강기능식품의 제조

블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물 100 mg

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 μg

비타민 E 1.0 mg

비타민 B1 0.13 mg

비타민 B2 0.15 mg

비타민 B6 0.5 mg

비타민 B12 0.2 μg

비타민 C 10 mg

비오틴 10 μg

니코틴산아미드 1.7 mg

엽산 50 μg

판토텐산 칼슘 0.5 mg

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 mg

산화아연 0.82 mg

탄산마그네슘 25.3 mg

제1인산칼륨 15 mg

제2인산칼슘 55 mg

구연산칼륨 90 mg

탄산칼슘 100 mg

염화마그네슘 24.8 mg

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강기능성 식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강기능성 식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능성 식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

<건강기능식품 제조예 2> 건강 기능 음료의 제조

블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물 100 mg

구연산 100 mg

올리고당 100 mg

매실농축액 2 mg

타우린 100 mg

정제수를 가하여 전체 500 mL

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 1 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다. 상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims

블루베리 추출물을 제조하는 단계(단계 1);
흑미 추출물을 제조하는 단계(단계 2);
상기 단계 1의 블루베리 추출물 및 상기 단계 2의 흑미 추출물을 8 : 2 내지 6: 4의 중량비로 혼합하는 단계(단계 3); 및
상기 단계 3의 혼합물에 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei)를 0.5 내지 5%(v/v)로 첨가하고, 35 내지 40℃, pH 5.0 내지 6.0에서 12 내지 48시간 발효하는 단계(단계 4);를 포함하여 제조되는 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 미세먼지에 의한 피부염증 예방용 화장료 조성물.
블루베리 추출물을 제조하는 단계(단계 1);
흑미 추출물을 제조하는 단계(단계 2);
상기 단계 1의 블루베리 추출물 및 상기 단계 2의 흑미 추출물을 8 : 2 내지 6: 4의 중량비로 혼합하는 단계(단계 3); 및
상기 단계 3의 혼합물에 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei)를 0.5 내지 5%(v/v)로 첨가하고, 35 내지 40℃, pH 5.0 내지 6.0에서 12 내지 48시간 발효하는 단계(단계 4);를 포함하여 제조되는 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 미세먼지에 의한 피부염증 개선용 화장료 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저로 구성된 제형에서 선택된 하나 이상의 제형인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
삭제
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 추출물은 물, 탄소수 2 내지 탄소수 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
블루베리 추출물을 제조하는 단계(단계 1);
흑미 추출물을 제조하는 단계(단계 2);
상기 단계 1의 블루베리 추출물 및 상기 단계 2의 흑미 추출물을 8 : 2 내지 6: 4의 중량비로 혼합하는 단계(단계 3); 및
상기 단계 3의 혼합물에 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei)를 0.5 내지 5%(v/v)로 첨가하고, 35 내지 40℃, pH 5.0 내지 6.0에서 12 내지 48시간 발효하는 단계(단계 4);를 포함하여 제조되는 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 미세먼지에 의한 피부염증 예방용 건강기능식품 조성물.
블루베리 추출물을 제조하는 단계(단계 1);
흑미 추출물을 제조하는 단계(단계 2);
상기 단계 1의 블루베리 추출물 및 상기 단계 2의 흑미 추출물을 8 : 2 내지 6: 4의 중량비로 혼합하는 단계(단계 3); 및
상기 단계 3의 혼합물에 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei)를 0.5 내지 5%(v/v)로 첨가하고, 35 내지 40℃, pH 5.0 내지 6.0에서 12 내지 48시간 발효하는 단계(단계 4);를 포함하여 제조되는 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 미세먼지에 의한 피부염증 개선용 건강기능식품 조성물.
제6항 또는 제7항에 있어서,
상기 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 형태의 식품인 것을 특징으로 하는 건강기능식품 조성물.
블루베리 추출물을 제조하는 단계(단계 1);
흑미 추출물을 제조하는 단계(단계 2);
상기 단계 1의 블루베리 추출물 및 상기 단계 2의 흑미 추출물을 8 : 2 내지 6: 4의 중량비로 혼합하는 단계(단계 3); 및
상기 단계 3의 혼합물에 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei)를 0.5 내지 5%(v/v)로 첨가하고, 35 내지 40℃, pH 5.0 내지 6.0에서 12 내지 48시간 발효하는 단계(단계 4);를 포함하여 제조되는 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 미세먼지에 의한 피부염증 예방용 건강식품 조성물.
블루베리 추출물을 제조하는 단계(단계 1);
흑미 추출물을 제조하는 단계(단계 2);
상기 단계 1의 블루베리 추출물 및 상기 단계 2의 흑미 추출물을 8 : 2 내지 6: 4의 중량비로 혼합하는 단계(단계 3); 및
상기 단계 3의 혼합물에 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei)를 0.5 내지 5%(v/v)로 첨가하고, 35 내지 40℃, pH 5.0 내지 6.0에서 12 내지 48시간 발효하는 단계(단계 4);를 포함하여 제조되는 블루베리 및 흑미 추출물의 유산균 발효물을 포함하는 미세먼지에 의한 피부염증 개선용 건강식품 조성물.
제9항 또는 제10항에 있어서,
상기 건강식품은 각종 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 캔디류, 스넥류, 면류, 아이스크림, 유제품, 스프, 이온음료, 음료수, 알코올 음료, 껌, 차 및 비타민 복합제에서 선택되는 것을 특징으로 하는 건강식품 조성물.