KR102263851B1 - 꾸지뽕에서 추출한 당단백질을 유효성분으로 포함하는 대장상피세포 증식 및 세포주기 촉진용 조성물 - Google Patents
꾸지뽕에서 추출한 당단백질을 유효성분으로 포함하는 대장상피세포 증식 및 세포주기 촉진용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 꾸지뽕에서 추출한 당단백질을 유효성분으로 포함하는 대장상피세포 증식 및 세포주기 촉진용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 꾸지뽕에서 추출한 당단백질은 장 상피세포의 세포 주기 촉진, 증식, 그리고 활력을 유도하는 효과가 있어 대장질환 예방 또는 치료를 위한 조성물로 유용하게 사용할 수 있는 효과가 있다.
Description
본 발명은 꾸지뽕에서 추출한 당단백질을 유효성분으로 포함하는 대장상피세포 증식 및 세포주기 촉진용 조성물에 관한 것이다.
세포 증식은 위장관에서 기능적으로 중요한 역할을 하며, 특히 대장 내 세포들의 세포골격형성, 세포의 이동, 상처의 회복, 장내 미생물의 건강기능 유지 등 장내의 항상성 유지를 위해 필수적인 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 최근 많은 전통의학이나 기능성 식물들이 이러한 장내 상피세포 증식을 유도하는데 이용되어 왔다. 특히 이러한 물질들은 대장 상피세포 내 다양한 신호전달인자와 세포주기 단백질들의 발현을 유도함으로써 세포 증식을 촉진하는 것으로 알려졌다. 따라서 이러한 신호인자들을 조절할 수 있는 생리활성물질은 대장 상피세포의 증식을 촉진하여 장내의 항상성 유지에 중요한 기능을 발휘할 것이라고 생각된다.
식물 및 버섯등에서 많은 당단백질이 다양하게 추출되어왔고, 세포 증식을 촉진하는데 사용되어 왔으나, 아직까지 꾸지뽕에서 추출한 당단백질에 대한 연구가 미미한 실정이며, 대장질환 치료 효과가 있다는 내용에 대해서는 알려진 바가 없다.
이에, 본 발명자들은 꾸지뽕에서 추출한 당단백질의 유익한 효능을 찾기 위해 예의 노력한 결과, 꾸지뽕에서 추출한 당단백질에 대장상피세포 증식 및 세포주기 촉진 효과가 있어 대장질환의 치료에 유용하다는 점을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 꾸지뽕에서 추출한 당단백질을 유효성분으로 포함하는 대장상피세포 증식 및 세포주기 촉진용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 꾸지뽕에서 추출한 당단백질을 유효성분으로 포함하는 대장질환 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
나아가 본 발명의 다른 목적은 꾸지뽕에서 추출한 당단백질을 유효성분으로 포함하는 대장질환 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 꾸지뽕에서 추출한 당단백질을 유효성분으로 포함하는 대장상피세포 증식 및 세포주기 촉진용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 꾸지뽕에서 추출한 당단백질은 0.1 ~ 200㎍/ml의 농도로 1 ~ 48시간 처리할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 대장상피세포 증식 및 세포주기 촉진은 ROS, PKC, JNK 또는 NF-ĸB의 활성화가 진행되어 일어날 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 대장상피세포 증식 및 세포주기 촉진은 세포주기 단백질이 유도되어 일어날 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 세포주기 단백질은 Cyclin D1, Cyclin E, CDK2 또는 CDK4일 수 있다.
또한, 본 발명은 꾸지뽕에서 추출한 당단백질을 유효성분으로 포함하는 대장질환 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 ROS, PKC, JNK 또는 NF-ĸB의 활성을 유도시켜 대장상피세포의 세포주기를 조절할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 대장질환은 대장암, 크론병, 궤양성 대장염 및 과민성 대장증후군에서 선택되는 1종이상일 수 있다.
나아가, 본 발명은 꾸지뽕에서 추출한 당단백질을 유효성분으로 포함하는 대장질환 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 꾸지뽕에서 추출한 당단백질은 장 상피세포의 세포 주기 촉진, 증식, 그리고 활력을 유도하는 효과가 있어 대장질환 예방 또는 치료를 위한 조성물로 유용하게 사용할 수 있는 효과가 있다.
도 1은 꾸지뽕 당단백질이 유도한 장 상피세포 증식 및 활력에 관한 것이다.
도 2는 장 상피세포에서 꾸지뽕 당단백질의 세포증식 신호전달자인 활성산소(ROS) 발생 유도 효과를 보여주는 도이다.
도 3은 장 상피세포에서 꾸지뽕 당단백질의 세포증식 신호전달자인 PKC 활성 촉진 효과를 나타내는 도이다.
도 4는 장 상피세포에서 꾸지뽕 당단백질의 세포증식 신호전달자인 JNK 활성 촉진 효과를 나타내는 도이다.
도 5는 장 상피세포에서 꾸지뽕 당단백질의 세포증식 전사인자인 NF-ĸB 활성 촉진 효과를 나타내는 도이다.
도 6은 장 상피세포에서 꾸지뽕 당단백질의 세포주기 단백질 발현 유도 효과를 나타내는 도이다.
도 2는 장 상피세포에서 꾸지뽕 당단백질의 세포증식 신호전달자인 활성산소(ROS) 발생 유도 효과를 보여주는 도이다.
도 3은 장 상피세포에서 꾸지뽕 당단백질의 세포증식 신호전달자인 PKC 활성 촉진 효과를 나타내는 도이다.
도 4는 장 상피세포에서 꾸지뽕 당단백질의 세포증식 신호전달자인 JNK 활성 촉진 효과를 나타내는 도이다.
도 5는 장 상피세포에서 꾸지뽕 당단백질의 세포증식 전사인자인 NF-ĸB 활성 촉진 효과를 나타내는 도이다.
도 6은 장 상피세포에서 꾸지뽕 당단백질의 세포주기 단백질 발현 유도 효과를 나타내는 도이다.
본 발명은 꾸지뽕에서 추출한 당단백질을 유효성분으로 포함하는 대장상피세포 증식 및 세포주기 촉진용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 본 발명의 꾸지뽕 열매에서 추출한 꾸지뽕 당단백질을 HT-29 장 상피세포(gastrointestinal epithelial cell)에 다양한 농도 및 다양한 시간으로 처리한 후, hemocytometer를 이용하여 cell counting 분석을 한 결과, 꾸지뽕 당단백질의 장 상피세포 증식효과는 100㎍/ml의 농도이상 및 12시간 이상부터 관찰됨을 알 수 있었다(도 1 참조).
본 발명의 다른 일실시예에 따르면, 본 발명의 꾸지뽕 열매에서 추출한 꾸지뽕 당단백질이 ROS, PKC, JNK, 그리고 NF-κB 신호전달기전을 통하여 세포주기를 조절할 수 있음을 알 수 있었다(도 2 내지 4 참조).
상기와 같은 결과는 꾸지뽕 열매에서 추출한 꾸지뽕 당단백질은 대장세포의 증식 및 활력을 촉진한다는 것을 의미하며, 따라서 본 발명의 꾸지뽕 당단백질은 대장질환의 예방 또는 치료용 조성물로 사용될 수 있다.
본 발명에 의하면 상기 대장질환은 대장암, 크론병, 궤양성 대장염 및 과민성 대장증후군에서 선택되는 1종이상일 수 있다.
본 발명의 꾸지뽕에서 추출한 당단백질을 유효성분으로 함유하는 대장질환 개선용 건강기능식품은 식품보조첨가제를 포함할 수 있다. 각종 식품류로는 예를 들어, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있으며, 캡슐, 정제, 분말, 과립, 액상, 환, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 음료, 젤리 또는 바인 형태로 사용할 수 있다.
꾸지뽕에서 추출한 당단백질의 함량은 건강기능식품 총 중량을 기준으로 0.01 내지 15 중량%로 함유할 수 있으며, 건강음료조성물의 경우에는 총 100 g을 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g으로 함유할 수 있다.
상기 식품보조첨가제는 당업계에 통상적인 식품첨가제, 예를 들어 향미제, 풍미제, 착색제, 충진제, 안정화제 등을 포함한다. 또한, 상기 건강음료조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서, 상기 꾸지뽕에서 추출한 당단백질 외에 첨가되는 성분에 특별한 제한은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 예로는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린; 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 꾸지뽕에서 추출한 당단백질 100 g당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 5 내지 12 g이다.
상기 외에 본 발명의 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 꾸지뽕에서 추출한 당단백질은 과일주스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 꾸지뽕에서 추출한 당단백질 100 중량부에 대하여 0.01 내지 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명의 꾸지뽕에서 추출한 당단백질을 유효성분으로 함유하는 대장질환 치료 또는 예방용 약학 조성물은 꾸지뽕에서 추출한 당단백질을 약학 조성물 총 중량을 기준으로 0.001 내지 50 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 30 중량%로 포함된다. 본 발명의 꾸지뽕에서 추출한 당단백질을 포함하는 조성물은 통상의 방법에 따른 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 다양한 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화할 수 있다. 경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경질, 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/ 또는 폴리에틸렌 글리콜)를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제를 함유할 수 있다. 상기 제형은 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.
또한, 비경구 투여용 제형의 대표적인 것은 주사용 제제이며, 주사용 제제의 용매로서 물, 링거액, 등장성 생리식염수 또는 현탁액을 들 수 있다. 상기 주사용 제제의 멸균 고정 오일은 용매 또는 현탁 매질로서 사용할 수 있으며 모노-, 디-글리세라이드를 포함하여 어떠한 무자극성 고정오일도 이러한 목적으로 사용될 수 있다.
또한, 상기 주사용 제제는 올레산과 같은 지방산을 사용할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 투여량은 환자의 연령, 성별, 체중, 질환의 중증도에 따라 달라지나, 본 발명의 약학 조성물은 환자의 무게 1 kg 당 300 mg 이하, 바람직하게는 0.1 내지 200 mg을 1일 1-4회 투여하나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 랫트, 마우스, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식이 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌실내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 꾸지뽕에서 추출한 당단백질은 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.
이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기의 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기의 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1>
꾸지뽕 당단백질 추출
꾸지뽕 열매를 작은 조각으로 분쇄하고, 상기 꾸지뽕 열매의 분쇄 조각을 증류수에 여러 달 동안 암실에서 침지시켰다. 이어서, 여과 종이(filter paper)를 이용하여 상기 꾸지뽕 열매의 분쇄 조각과 이 침지물을 거른 후, 회전 농축기(Rotary evaporator)를 이용하여 농축하였다.
이어서, 상기 농축된 용액을 동결 건조기(freeze-dryer)를 이용하여 동결 건조하였으며, 상기 동결 건조시켜 얻은 조 추출물(crude extract)을 증류수에 용해시켰다. 또한, 상기 조 추출 용해액을 80% 암모늄 설페이트 (ammonium sulfate)를 이용하여 단백질을 침지시키고, 투석막(dialysis membrane)을 이용하여 4℃의 20mM 트리스 버퍼(Tris buffer)(pH 7.2)에서 하루 동안 투석하였다.
상기 투석 후, 상기 용액을 원심 분리기를 이용하여 25℃에서 15분 동안 원심 분리하였다. 이어서, 상기 원심 분리 후의 상등액(supernatant)을 버리고 침전물 (pellet)을 동결 건조 후 -70℃의 온도에서 보존하여 꾸지뽕 당단백질로 사용하였다.
<실시예 2>
꾸지뽕 당단백질의 대장 상피 세포 증식 및 세포주기 촉진 효과
<2-1> 분석 방법
상기 추출 방법으로 추출된 꾸지뽕 당단백질을 SDS-PAGE 분석법으로 검증하였다.
이때, 상기 SDS-PAGE 분석법은 0.1% SDS가 포함된 꾸지뽕 당단백질을 10% 폴리아크릴아미드 미니-겔(polyacrylamide mini-gel)과 Mini-PROTEIN Ⅱ 전기영동 셀을 이용하여 110V 및 30mA으로 2.5시간동안 전기영동 하였다. 또한, 전기영동 후 상기 겔들은 쉬프 시약(Schiff reagent)을 이용하여 당단백질을 염색하였다.
<2-2> 꾸지뽕 당단백질이 유도한 장 상피세포 증식 및 활력
꾸지뽕 열매에서 추출한 꾸지뽕 당단백질을 HT-29 장 상피세포(gastrointestinal epithelial cell)에 처리한 후, 혈구 계산기(hemocytometer)를 이용하여 cell counting 분석을 하였으며, 미토콘드리아 활성을 확인하는 MTT 시약을 이용해 세포 생존율 분석을 실시하였다.
그 결과를 도 1에서 도시하고 있는데, Cell counting 분석 결과, 꾸지뽕 당단백질을 50, 100 및 200㎍/ml의 농도로 24시간동안 처리하였을 때, 농도에 따른 장 상피세포의 증식의 정도가 각각 130%, 221% 및 170%로 증가하였음을 알 수 있었다(도 1a 참조).
또한, 꾸지뽕 당단백질을 100㎍/ml의 농도로 12, 24 및 48시간 처리하였을 때, 시간에 따른 장 상피세포의 증식의 정도가 159%, 207% 및 117%로 증가하였음을 알 수 있었다(도 1b 참조).
그리고, MTT를 이용한 세포 생존율 분석 결과, 꾸지뽕 당단백질을 100㎍/ml의 농도로 12, 24 및 48시간으로 처리하였을 때, 그 시간이 증가할 수 록 장 상피세포의 생존 능력 값은 각각 155%, 179% 및 135%로 증가하였음을 알 수 있었다(도 1c 참조).
따라서 꾸지뽕 당단백질의 장 상피세포 증식효과는 100㎍/ml의 농도이상 및 12시간 이상부터 관찰됨을 알 수 있다.
<2-3> 장 상피세포에서 꾸지뽕 당단백질의 세포증식 신호전달자인 활성산소(ROS) 발생 유도 효과
다음으로 세포증식과 관련 있는 세포내 신호전달자인 활성산소(reactive oxygen spices)에 꾸지뽕 당단백질의 효과를 살펴보았다.
장 상피세포에 꾸지뽕 당단백질을 처리했을 때, 형광 염색제, 2′, 7′-dichlorofluorescein diacetate(CM-H2DCFDA)를 이용해 분석한 결과 세포가 생산하는 활성산소(ROS)가 15분과 30분에서 유의적으로 증가하는 것을 도 2의 a에서 보여 주고 있다.
도 2의 b는 꾸지뽕 당단백질의 활성산소 유도효과를 형광현미경으로 관찰한 결과이다.
또한, 장 상피세포의 증식 기전이 활성산소 발생에 매개되어 유도되는지 알아보기 위해 10μM의 항산화제 [N-acetylcysteine(NAC)]를 전처리한 후 꾸지뽕 당단백질을 처리했을 때, Cell counting으로 분석한 결과 꾸지뽕 당단백질이 유도한 세포 증식이 항산화제(NAC)에 의해 억제되는 것을 보여 주었다. 이것은 꾸지뽕 당단백질이 활성산소(ROS)의 생산을 통해 세포 증식을 유도하는 것으로 미루어 짐작할 수 있다(도 2의 c 참조).
따라서 꾸지뽕 당단백질에 의한 장 상피세포의 증식은 활성산소(ROS)의 생산을 증가시킴으로써 장 상피세포의 증식을 유도하는 물질이라는 것을 알 수 있다.
<2-4> 장 상피세포에서 꾸지뽕 당단백질의 세포증식 신호전달자인 PKC(Protein kinase C) 활성 촉진 효과
활성산소종 (ROS)의 하위 신호전달기전을 알아보기 위해 추가적 실험을 진행했다. 도 3의 a에서는 꾸지뽕 당단백질이 15-30분 사이에 장 상피세포에서 PKC의 활성을 유의적으로 유도하는 것을 보여주고 있다. 그러나 10μM의 항산화제(NAC)와 꾸지뽕 당단백질을 함께 처리했을 때, 꾸지뽕 당단백질에 의해 유도된 PKC의 활성이 유의적으로 억제되었다 (도 3b 참조).
이러한 결과는 꾸지뽕 당단백질이 활성산소종 생산 촉진을 통해 PKC를 활성을 유도하는 것을 의미한다. 특히, PKC 억제제(Bisindolylmaleimide I)를 처리하여 PKC 활성을 막았을 때, 세포의 증식율이 유의적으로 감소되는 것을 알 수 있었다.
따라서 꾸지뽕 당단백질은 ROS생산에 매개된 PKC의 활성을 통해 세포 증식을 유도할 수 있다는 것을 미루어 짐작할 수 있다.
<2-5> 장 상피세포에서 꾸지뽕 당단백질의 세포증식 신호전달자인 JNK 활성 촉진 효과
PKC 의 하위 신호전달기전을 알아보기 위해 추가적 실험을 진행했다.
도 4의 a에서는 꾸지뽕 당단백질이 15-30분 사이에 장 상피세포에서 MAPKs(mitogen-activated protein kinases)종류 중 JNK 활성을 유의적으로 유도하는 것을 보여주고 있다. 그러나 PKC 억제제(Bisindolylmaleimide I))와 꾸지뽕 당단백질을 함께 처리했을 때, 꾸지뽕 당단백질에 의해 유도된 JNK의 활성이 유의적으로 억제되었다(도 4b 참조).
이러한 결과는 꾸지뽕 당단백질이 PKC활성을 매개하여 JNK를 활성을 유도하는 것을 의미한다. 특히, JNK 억제자(SP600125)를 처리하여 JNK 활성을 막았을 때, 세포의 증식율이 유의적으로 감소되는 것을 알 수 있었다 (도 4c 참조).
따라서 꾸지뽕 당단백질은 JNK 활성을 매개하여 세포 증식을 유도할 수 있다는 것을 미루어 짐작할 수 있다.
<2-6> 장 상피세포에서 꾸지뽕 당단백질의 세포증식 전사인자인 NF-ĸB 활성 촉진 효과
JNK 의 하위 신호전달기전을 알아보기 위해 추가적 실험을 진행했다. 도 5의 a에서는 꾸지뽕 당단백질이 30-60분 사이에 장 상피세포에서 전사인자인 NF-ĸB 활성을 유의적으로 유도하는 것을 보여주고 있다. 그러나 JNK 억제자(SP600125)와 꾸지뽕 당단백질을 함께 처리했을 때, 꾸지뽕 당단백질에 의해 유도된 NF-ĸB의 활성이 유의적으로 억제되었다(도 5b 참조).
이러한 결과는 꾸지뽕 당단백질이 JNK활성을 매개하여 NF-ĸB의 활성을 유도하는 것을 의미한다. 특히, NF-κB 억제자(Bay 11-7082)를 처리하여 NF-ĸB 활성을 막았을 때, 세포의 증식율이 유의적으로 감소되는 것을 알 수 있었다(도 5c 참조).
따라서 꾸지뽕 당단백질은 NF-ĸB 활성을 매개하여 세포 증식을 유도할 수 있다는 것을 미루어 짐작할 수 있다.
<2-7> 장 상피세포에서 꾸지뽕 당단백질의 세포주기 단백질 발현 유도 효과
전사인자 NF-ĸB의 활성이 세포주기 단백질들(Cyclin D1, Cyclin E, CDK2, CDK4)발현에 미치는 영향을 알아보기 위해 추가적 실험을 진행했다.
도 6의 a에서는 꾸지뽕 당단백질이 12시간 이후부터 장 상피세포에서 세포주기 단백질들(Cyclin D1, Cyclin E, CDK2, CDK4)의 발현을 유의적으로 유도하는 것을 보여주고 있다. 그러나 NF-κB 억제자(Bay 11-7082)와 꾸지뽕 당단백질을 함께 처리했을 때, 꾸지뽕 당단백질에 의해 유도된 세포주기 단백질들의 발현이 유의적으로 억제되었다(도 6b 참조).
이러한 결과는 꾸지뽕 당단백질이 NF-ĸB활성을 매개하여 세포주기를 조절하여 세포증식을 유도하는것을 의미한다. 마지막으로, 위에서 살펴본 꾸지뽕 당단백질의 장 상피 증식 신호전달기전과 관련된 모든 신호전달 억제자와 꾸지뽕 당단백질을 함께 처리하였을 때, 꾸지뽕 당단백질에 의해 유도된 세포의 활력이 유의적으로 제어됨을 알 수 있었다(도 6c 참조).
이와 같은 결과는 꾸지뽕 당단백질이 ROS, PKC, JNK, 그리고 NF-κB 신호전달기전을 통하여 세포주기를 조절하고, 이것은 세포의 증식 및 활력을 촉진한다는 것을 의미한다. 따라서 꾸지뽕 열매에서 추출한 꾸지뽕 당단백질은 HT-29 세포, 즉, 장 상피세포의 세포주기 조절기전을 촉진시킴으로서 세포증식 뿐만 아니라 세포 활력을 유도한다고 할 수 있으므로 상기 꾸지뽕 당단백질을 함유하는 약학 조성물을 제조하여 대장 세포 활력증진 약학 제제로 이용할 수 있다.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.
Claims (9)
- 꾸지뽕에서 추출한 당단백질을 대장상피세포에 처리하는 단계를 포함하는 인비트로에서 대장상피세포 증식 및 세포주기 촉진 방법에서,
상기 꾸지뽕에서 추출한 당단백질은 꾸지뽕 열매의 분쇄 조각을 증류수에 암실에서 침지시킨 후, 꾸지뽕 열매의 분쇄 조각과 침지물을 걸러 농축시키고, 농축된 용액을 동결건조 시켜 조추출물을 제조하고, 제조된 조추출물을 증류수에 용해시킨 후, 80% 암모늄 설페이트 (ammonium sulfate)를 이용하여 단백질을 침지시키고, 투석막(dialysis membrane)을 이용하여 4℃의 20mM 트리스 버퍼(Tris buffer)에서 하루 동안 투석하고, 투석된 용액을 원심 분리기로 원심 분리하여 얻은 침전물을 동결건조시켜 제조된 것을 특징으로 하는, 인비트로에서 대장상피세포 증식 및 세포주기 촉진 방법. - 제1항에 있어서,
상기 꾸지뽕에서 추출한 당단백질은 0.1 ~ 200㎍/ml의 농도로 1 ~ 48시간 처리하는 것을 특징으로 하는, 인비트로에서 대장상피세포 증식 및 세포주기 촉진 방법. - 제1항에 있어서,
상기 대장상피세포 증식 및 세포주기 촉진은 ROS, PKC, JNK 또는 NF-ĸB의 활성화가 진행되어 일어나는 것을 특징으로 하는, 인비트로에서 대장상피세포 증식 및 세포주기 촉진 방법. - 제1항에 있어서,
상기 대장상피세포 증식 및 세포주기 촉진은 세포주기 단백질이 유도되어 일어나는 것을 특징으로 하는, 인비트로에서 대장상피세포 증식 및 세포주기 촉진 방법. - 제4항에 있어서,
상기 세포주기 단백질은 Cyclin D1, Cyclin E, CDK2 또는 CDK4인 것을 특징으로 하는, 인비트로에서 대장상피세포 증식 및 세포주기 촉진 방법. - 삭제
- 삭제
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- 삭제
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Journal of Applied Toxicology, 2009, 29(6), pp. 496-504* |
| Korean Journal of Medicinal Crop Science, 2012, 20(3), pp.153-158 |
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