KR102259326B1 - Formulation including Bacillus mesonae and antioxidant material of plant or plant production promoting method using thereof - Google Patents

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Abstract

본 발명의 일 실시예에 따르면, 바실러스 메소나에(Bacillus mesonae) H20-5 균주(기탁번호 : KACC 81041BP)를 포함하는 토마토 또는 딸기에 처리 가능한 항산화 물질 증진용 액상 제제가 제공된다.According to an embodiment of the present invention, there is provided a liquid formulation for enhancing antioxidant substances that can be treated in tomatoes or strawberries including Bacillus mesonae H20-5 strain (Accession No.: KACC 81041BP).

Description

바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제 및 이를 이용한 식물의 항산화 물질 또는 생산량 증진 방법 {Formulation including Bacillus mesonae and antioxidant material of plant or plant production promoting method using thereof}Liquid formulation containing Bacillus mesonae strain and method of promoting antioxidant material or production of plants using the same {Formulation including Bacillus mesonae and antioxidant material of plant or plant production promoting method using thereof}

본 발명은 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제 및 이를 이용한 식물의 항산화 물질 또는 생산량 증진 방법에 관한 것으로, 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제, 및 상기 액상 제제를 이용하여 식물의 항산화 물질의 함량과 수확량을 증진시키는 방법에 관한 것이다. The present invention relates to a liquid formulation containing a Bacillus mesonae strain and a method for increasing the antioxidant material or production of plants using the same, and a liquid formulation containing the Bacillus mesonae strain, and an antioxidant material of a plant using the liquid formulation It relates to a method of enhancing the content and yield of

화학 비료를 대체하여 작물의 생산량을 증진시키기 위하여 식물 생장 촉진용 미생물 제제에 대한 연구가 활발히 진행되어 왔다. 예를 들어, 콩과에 공생하는 근류균, 슈도모나스 속, 아조토박터 속, 바실러스 속, 아조스퍼릴럼 등의 미생물이 식물의 생장을 도와 생산량을 증가시키는 것으로 알려져 있다. In order to replace chemical fertilizers and increase the production of crops, research on microbial agents for promoting plant growth has been actively conducted. For example, it is known that microorganisms such as rhizomes symbiotic in the legume family, Pseudomonas genus, Azotobacter genus, Bacillus genus, Azosperylum, etc. help plants grow and increase production.

현재는 농업인과 소비자는 모두 일반적인 채소 또는 과일 등의 작물과 차별성 있는 상품을 선호하면서 기능성 물질이 다량 함유된 채소 또는 과일에 대한 관심이 증대되고 있다. 이에 따라, 작물의 기능성 물질을 증진시키기 위한 연구도 점차 증가하고 있는 추세이다. 그러므로, 작물의 단순 생산량 증가뿐만 아니라 부가가치를 창출하기 위해 기능성 성분 증진 활성을 갖는 미생물제 개발이 필요한 실정이다. Currently, both farmers and consumers prefer products that are differentiated from crops such as general vegetables or fruits, and interest in vegetables or fruits containing a large amount of functional substances is increasing. Accordingly, research for enhancing functional substances in crops is also gradually increasing. Therefore, there is a need to develop a microbial agent having a functional ingredient enhancing activity in order to create added value as well as a simple increase in crop production.

1. 대한민국 특허 공개 제10-2013-0032100호 (2013.04.01)1. Korean Patent Publication No. 10-2013-0032100 (2013.04.01)

본 발명이 해결하려는 기술적 과제는 식물의 항산화 기능성 성분을 증진시키는 효과가 우수한 균주의 액상제제를 제공하는 것이다.The technical problem to be solved by the present invention is to provide a liquid formulation of a strain excellent in the effect of enhancing the antioxidant functional components of plants.

또한, 본 발명이 해결하려는 기술적 과제는 상기 균주를 이용해 식물의 항산화 기능성 성분의 함량을 증진시키는 액상 제제, 및 이를 이용한 식물의 기능성 증진 방법을 제공하는 것이다.In addition, the technical problem to be solved by the present invention is to provide a liquid formulation for enhancing the content of antioxidant functional components of plants using the strain, and a method for enhancing the functionality of plants using the same.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 바실러스 메소나에(Bacillus mesonae) H20-5 균주(기탁번호 : KACC 81041BP)를 포함하는 토마토 또는 딸기에 처리 가능한 항산화 물질 증진용 액상 제제가 제공된다.According to an embodiment of the present invention, there is provided a liquid formulation for enhancing antioxidant substances that can be treated in tomatoes or strawberries including Bacillus mesonae H20-5 strain (Accession No.: KACC 81041BP).

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 토마토는 대추방울토마토 또는 완숙 토마토일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the tomato may be a jujube cherry tomato or a ripe tomato.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 항산화 물질은 폴리페놀, 라이코펜, 베타카로틴 중 적어도 어느 하나일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the antioxidant material may be at least one of polyphenol, lycopene, and beta-carotene.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 항산화 물질은 항산화 효소일 수도 있다. 상기 항산화 효소는 카탈레이스, 수퍼옥사이드 디스뮤테이스, 및 글루타티온 퍼옥시데이스 중 적어도 하나일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the antioxidant material may be an antioxidant enzyme. The antioxidant enzyme may be at least one of catalase, superoxide dismutase, and glutathione peroxidase.

본 발명의 일 실시예는 바실러스 메소나에(Bacillus mesonae) H20-5 균주(기탁번호 : KACC 81041BP)를 포함하는 토마토, 딸기, 오이에 처리 가능한 생산량 증진용 액상 제제를 제공한다.One embodiment of the present invention provides a liquid formulation for improving production that can be processed on tomatoes, strawberries, and cucumbers, including Bacillus mesonae H20-5 strain (Accession No.: KACC 81041BP).

본 발명의 일 실시예는 토마토 또는 딸기의 항산화 물질 증진 방법을 포함하며, 토마토 또는 딸기의 항산화 물질은 바실러스 메소나에(Bacillus mesonae) H20-5 균주(기탁번호 : KACC 81041BP)를 포함하는 액제를 준비하고, 토마토 또는 딸기에 상기 액제를 처리함으로써 그 함량이 증진될 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 액제는 해당 식물에 관주처리될 수 있다.An embodiment of the present invention includes a method for enhancing antioxidant substances of tomatoes or strawberries, wherein the antioxidant substances of tomatoes or strawberries are Bacillus mesonae (Bacillus mesonae) H20-5 strain (Accession No.: KACC 81041BP) containing a liquid formulation The content can be enhanced by preparing and treating the liquid preparation on tomatoes or strawberries. In one embodiment of the present invention, the liquid agent may be irrigated on the plant.

본 발명의 일 실시예는 토마토, 딸기, 오이 중 적어도 하나의 생산량 증진 방법을 포함하며, 생산량은 바실러스 메소나에(Bacillus mesonae) H20-5 균주(기탁번호 : KACC 81041BP)를 포함하는 액제를 준비하고, 토마토, 딸기, 오이 중 적어도 하나에 상기 액제를 처리함으로써 증진될 수 있다.One embodiment of the present invention includes a method of increasing the production of at least one of tomatoes, strawberries, and cucumbers, and the production is Bacillus mesonae H20-5 strain (Accession No.: KACC 81041BP) Prepare a liquid containing And it can be enhanced by treating at least one of tomatoes, strawberries, and cucumbers with the liquid agent.

본 발명의 바실러스 메소나에의 액상 제제는 대추방울토마토, 완숙토마토, 딸기와 오이 식물에서 상품성 있는 수확량을 증가시키는 효과가 현저하게 우수하다. 따라서, 본 발명의 바실러스 메소나에 액상 제제를 식물에 처리함으로써, 식물의 가치와 상품성을 현저하게 향상시킬 수 있다. The liquid formulation of Bacillus mesonae of the present invention is remarkably excellent in the effect of increasing the commercial yield of cherry tomatoes, ripe tomatoes, strawberries and cucumber plants. Therefore, by treating the plant with the liquid formulation of Bacillus mesonae of the present invention, it is possible to remarkably improve the value and marketability of the plant.

도 1은 본 발명의 균주의 16s rRNA 염기서열을 분석하여 다른 바실러스 균주와 비교한 계통분석도이다.
도 2 내지 도 4은 바실러스 메소나에 균주 및 바실러스 발리스모티스의 항산화 효소 활성을 측정하여 비교한 그래프로서, 도 2는 CAT 활성화 정도를, 도 3은 SOD 활성화 정도를, 도 4는 GPx 활성화 정도를 도시한 것이다.
도 5 내지 도 7는 각각 바실러스 메소나에 균주 및 바실러스 발리스모티스 균주를 포함하는 액상 제제를 토마토에 처리하였을 때 라이코펜, 베타카로틴, 및 폴리페놀의 함량을 측정하여 비교한 그래프이다
도 8은 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제로 처리한 대추방울토마토와 대조군의 대추방울토마토에 있어서의 폴리페놀의 함량을 도시한 그래프이다.
도 9는 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제로 처리한 딸기와 대조군의 딸기에 있어서의 폴리페놀의 함량을 도시한 그래프이다.
도 10은 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제로 처리한 대추방울토마토와 대조군의 대추방울토마토에 있어서의 라이코펜의 함량을 도시한 그래프이다.
도 11은 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제로 처리한 딸기와 대조군의 딸기에 있어서의 라이코펜의 함량을 도시한 그래프이다.
1 is a phylogenetic analysis diagram comparing the 16s rRNA base sequence of the strain of the present invention with other Bacillus strains.
2 to 4 are graphs comparing by measuring the antioxidant enzyme activity of Bacillus mesonae strain and Bacillus balismotis, Figure 2 is the degree of CAT activation, Figure 3 is the degree of SOD activation, Figure 4 is the degree of GPx activation will show
5 to 7 are graphs comparing the contents of lycopene, beta-carotene, and polyphenols measured when a liquid formulation containing a Bacillus mesonae strain and a Bacillus balismotis strain, respectively, is treated on a tomato.
8 is a graph showing the content of polyphenols in the cherry tomatoes of the control group and the cherry tomatoes treated with a liquid formulation containing the Bacillus mesonae strain.
9 is a graph showing the content of polyphenols in strawberries treated with a liquid formulation containing a Bacillus mesonae strain and strawberries in a control group.
10 is a graph showing the content of lycopene in the cherry tomatoes of the control group and the cherry tomatoes treated with a liquid formulation containing the Bacillus mesonae strain.
11 is a graph showing the content of lycopene in strawberries treated with a liquid formulation containing a Bacillus mesonae strain and a control strawberry.

본 발명은 다양한 변경을 가할 수 있고 여러 가지 형태를 가질 수 있는 바, 특정 실시예들을 도면에 예시하고 본문에 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 개시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변경, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.In the present invention, various modifications may be made and various forms may be applied, and specific embodiments will be illustrated in the drawings and described in detail in the text. However, this is not intended to limit the present invention to a specific form disclosed, it should be understood to include all changes, equivalents, and substitutes included in the spirit and scope of the present invention.

본 발명은 바실러스 메소나에(Bacillus mesonae) H20-5 균주(기탁번호 : KACC 81041BP)를 포함하는 액체 제재 및 이를 이용하여 식물의 항산화 물질 함량 및 수확량을 증진하는 방법에 관한 것이다. The present invention relates to a liquid preparation containing Bacillus mesonae H20-5 strain (Accession No.: KACC 81041BP) and a method for enhancing the antioxidant content and yield of plants using the same.

본 발명의 일 실시예에 따른 바실러스 메소나에 H20-5 균주는 서열번호 1로 표시되는 염기서열의 16S rRNA를 갖는 것을 특징으로 한다.Bacillus mesonae H20-5 strain according to an embodiment of the present invention is characterized in that it has 16S rRNA of the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 1.

도 1은 본 발명의 균주의 16s rRNA 염기서열을 분석하여 다른 바실러스 균주와 비교한 계통분석도이다.1 is a phylogenetic analysis diagram comparing the 16s rRNA base sequence of the strain of the present invention with other Bacillus strains.

본 명세서에서 "식물"은 식물계에 속하는 임의의 살아있는 유기체 (즉, 식물계 내의 임의의 속/종)를 지칭하여, 나무, 허브, 관목, 목초, 덩굴, 양치식물, 이끼 및 녹조류와 같으나 이에 제한되지는 않는다. 일예로, 본 발명의 일 실시예에 따른 바실러스 메소나에 균주 또는 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 조성물에 의해 항산화 물질이나 수확량이 증진되는 식물은 토마토, 딸기, 오이 등을 포함할 수 있다. 여기서, 토마토는 예를 들어, 대추방울토마토, 완숙토마토 등을 포함할 수 있다. As used herein, "plant" refers to any living organism belonging to the plant kingdom (i.e., any genus/species within the plant kingdom), such as, but not limited to, trees, herbs, shrubs, grasses, vines, ferns, mosses and green algae. does not For example, plants in which antioxidant substances or yields are enhanced by a composition comprising a Bacillus mesonae strain or a Bacillus mesonae strain according to an embodiment of the present invention may include tomatoes, strawberries, cucumbers, and the like. Here, the tomatoes may include, for example, jujube cherry tomatoes, ripe tomatoes, and the like.

이하에서는, 설명의 편의를 위해 본 발명의 일 실시예에 따른 바실러스 메소나에 균주 또는 이를 포함하는 조성물이 토마토, 딸기, 오이에 적용된 것을 일 예로서 설명한다. Hereinafter, for convenience of description, the Bacillus mesonae strain or composition comprising the same according to an embodiment of the present invention will be described as an example applied to tomatoes, strawberries, and cucumbers.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 식물의 항산와 물질은 라이코펜, 폴리페놀, 베타카로틴 등을 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the antioxidant substances of plants may include lycopene, polyphenols, beta-carotene, and the like.

라이코펜은 일종의 카로티노이드 색소로, 토마토와 딸기 등 붉은색 식물에서 찾을 수 있는 파이토케미컬 중 하나이다. 라이코펜은 사람의 몸에서 가장 흔한 카로티노이드인 동시에 가장 효능이 좋은 카로티노이드 항산화물질 중에 하나이다. 라이코펜은 세포의 대사에서 생기는 활성산소를 몸 밖으로 배출하는 작용을 하며, 항산화작용은 베타키로틴의 2배, 비타민 E의 100배 이상으로 현재 식품에서 발견된 것 중 강력한 항산화 작용을 갖는다. 또한 라이코펜은 호르몬 대사에 문제가 있을 때 발생하는 전립선암과 유방암에 대한 예방효과가 큰 것으로 알려져 있다. Lycopene is a kind of carotenoid pigment and is one of the phytochemicals found in red plants such as tomatoes and strawberries. Lycopene is the most common carotenoid in the human body and one of the most potent carotenoid antioxidants. Lycopene has the effect of discharging free radicals generated in cell metabolism out of the body, and its antioxidant action is twice that of beta-kiritin and 100 times that of vitamin E. It has the strongest antioxidant action among those found in food. In addition, lycopene is known to have a great preventive effect on prostate and breast cancer, which occurs when there is a problem with hormone metabolism.

폴리페놀은 대표적인 항산화물질 중 하나로 인체내에 있는 활성산소를 제거해 세포나 조직의 산화, 노화를 방지하는 역할을 한다. 폴리페놀의 종류는 수천가지가 넘으며, 과일에 많은 플라보노이드, 콩에 많은 이소플라본, 녹차의 카테킨 등이 폴리페놀의 종류이다. 또한, 폴리페놀은 몸속 염증을 예방하며 체내 세포를 보호하는 효과를 가지는 것으로 알려져 있으며, 대부분 음식으로 섭취하고 있다. Polyphenols are one of the representative antioxidants, and they play a role in preventing oxidation and aging of cells or tissues by removing free radicals in the human body. There are thousands of types of polyphenols, and many flavonoids in fruits, isoflavones in soybeans, and catechins in green tea are types of polyphenols. In addition, polyphenols are known to have an effect of preventing inflammation in the body and protecting cells in the body, and most of them are consumed as food.

베타 카로틴은 식물 생체 내에 존재하는 카로틴(carotene)으로서, 비타민A의 전구 물질로서 베타카로틴 한 분자가 생체 내에서 필요에 따라 비타민A 두 분자로 변함으로써 사람의 영양분 섭취에 도움을 준다. 베타카로틴은 항산화물질 중 하나로 인체 내 세포의 산화나 노화를 방지하며, 베타카로틴이 함유된 식물의 섭취시 폐암 발생이 현저하게 감소하는 것으로 알려져 있다.Beta-carotene is a carotene present in a plant living body, and as a precursor of vitamin A, one beta-carotene molecule is converted into two vitamin A molecules as needed in the living body, thereby helping human intake of nutrients. Beta-carotene is one of the antioxidants that prevents the oxidation or aging of cells in the human body, and it is known that the intake of plants containing beta-carotene significantly reduces the incidence of lung cancer.

본 발명은 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상제제는 식물의 기능성 성분 증진용 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 바실러스 메소나에 균주 자체, 이의 배양액, 제형, 또는 이들 모두를 유효성분으로 포함할 수 있다. 상기 기능성 성분은 라이코펜, 베타 카로틴, 폴리페놀 등의 항산화 성분일 수 있다. The present invention provides a composition for enhancing the functional component of a plant liquid formulation containing the Bacillus mesonae strain. The composition may include the Bacillus mesonae strain itself, its culture medium, formulation, or both as an active ingredient. The functional component may be an antioxidant component such as lycopene, beta-carotene, and polyphenol.

일 실시예에 있어서, 상기 식물의 항산화 기능성 성분 증진용 조성물이 처리될 수 있는 식물은 토마토(대추방울토마토, 완숙 토마토 등)와 딸기, 오이 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 일 실시예에 있어서, 상기 식물의 항산화 기능성 성분 증진용 조성물은 토마토 또는 딸기에 처리될 수 있으며, 토마토 또는 딸기의 라이코펜, 폴리페놀, 베타카로틴 등의 항산화 물질의 함량을 현저하게 증진시킬 수 있다. 다만, 본 발명의 일 실시예에 따른 바실러스 메소나에 균주 또는 이를 포함하는 조성물이 적용되는 식물은 토마토, 딸기, 오이 이외에도 그 종류가 다양하게 변경될 수 있다. 다만, 종에 따라 바실러스 메소나에 균주 또는 이를 포함하는 조성물로부터 얻을 수 있는 항산화 물질 및 수확량의 증진 정도 등은 차이가 있음이 이해되어야 할 것이다. In one embodiment, the plant that can be treated with the composition for enhancing the antioxidant functional component of the plant may be a tomato (jujube cherry tomatoes, ripe tomatoes, etc.), strawberries, cucumbers, etc., but is not limited thereto. In one embodiment, the composition for enhancing the antioxidant functional component of the plant may be treated on tomatoes or strawberries, and the content of antioxidants such as lycopene, polyphenols, and beta-carotene in tomatoes or strawberries may be remarkably enhanced. However, the plant to which the Bacillus mesonae strain or composition comprising the same according to an embodiment of the present invention is applied may be variously changed in addition to tomatoes, strawberries, and cucumbers. However, it will be understood that there is a difference in the degree of enhancement of antioxidant substances and yields that can be obtained from a Bacillus mesonae strain or a composition comprising the same depending on the species.

실시예에서, 본 발명에 따른 식물의 기능성 성분 증진용 액상 제제또는 식물 생장 촉진용 조성물은 식물 성장 조절제, 식물 성장 자극제 및 식물 영양제 등으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다.In an embodiment, the liquid formulation or composition for promoting plant growth according to the present invention may further include any one or more selected from the group consisting of a plant growth regulator, a plant growth stimulator, and a plant nutrient.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.Hereinafter, examples and the like will be described in detail to help the understanding of the present invention. However, the embodiments according to the present invention may be modified in various other forms, and the scope of the present invention should not be construed as being limited to the following examples. The embodiments of the present invention are provided to more completely explain the present invention to those of ordinary skill in the art.

실시예 1. 바실러스 메소나에 균주의 액상 제제 제조 방법Example 1. Method for preparing a liquid formulation of Bacillus mesonae strain

본 발명의 균주를 트립틱 소이 아가에서 28℃, 24시간 동안 배양한 후 단일 콜로니를 100㎖ 트립틱 소이 브로스에 28℃, 150rpm으로 48시간 동안 진탕배양하고, 배양액의 농도를 대조구 대비 OD600=0.2으로 맞추어 액상제제(TP-H20-5)로 사용하였다. After culturing the strain of the present invention in tryptic soy agar at 28° C. for 24 hours, a single colony was cultured in 100 ml tryptic soy broth at 28° C., 150 rpm for 48 hours with shaking, and the concentration of the culture medium compared to the control was OD 600 = It was adjusted to 0.2 and used as a liquid formulation (TP-H20-5).

실시예 2. 바실러스 메소나에 균주를 포함한 액상 제제 처리에 의한 토마토 식물 내 항산화효소 활성 증가Example 2. Increase in antioxidant enzyme activity in tomato plants by treatment with liquid formulations containing Bacillus mesonae strains

본 실시예는 바실러스 메소나에 균주가 토마토의 항산화 효소를 활성화하는지 여부와, 바실러스 속의 균주가 동일한 효과를 내는지 확인하기 위한 것이다. 식물은 자라면서 각종 스트레스를 받을 시 활성화산소에 의한 산화 스트레스를 동반하게 되는데, 이때 항산화 효소가 그 반응 기작에 관여하여 활성화 산소를 감소시키는 역할을 수행한다. This example is to confirm whether the Bacillus mesonae strain activates the antioxidant enzyme of tomato, and whether the strain of Bacillus genus has the same effect. When plants receive various stresses while growing, they are accompanied by oxidative stress caused by active oxygen. At this time, antioxidant enzymes are involved in the reaction mechanism to reduce active oxygen.

본 실시예에서 실험한 균주는 바실러스 메소나에 H20-5와 바실러스 발리스모티스 BS07M(Bacillus vallismortis)였다. The strains tested in this example were Bacillus mesonae H20-5 and Bacillus vallismortis BS07M (Bacillus vallismortis).

바실러스 발리스모티스는 식물 생장을 촉진하는 균주로 알려져 있으며, 이러한 내용은 대한민국 특허 공개 제10-2013-0032100호 (2013.04.01)에 개시되어 있다. 본 실험에서는 상기 특허 문서에 공지된 바실러스 발리스모티스(기탁기관명 : 한국생명공학연구원; 수탁번호 : KCTC11991BP; 수탁일자 : 20110728)에 해당하는 균주를 이용하여 실험을 수행하였다. 바실러스 발리스모티스 균주를 포함하는 액상 제제는 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제와 실질적으로 동일한 방식으로 제조되었다. Bacillus ballismotis is known as a strain that promotes plant growth, and this content is disclosed in Korean Patent Publication No. 10-2013-0032100 (2013.04.01). In this experiment, an experiment was performed using a strain corresponding to the Bacillus ballismotis (name of deposit institution: Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology; accession number: KCTC11991BP; accession date: 20110728) known in the above patent document. The liquid formulation containing the strain of Bacillus balismotis was prepared in substantially the same manner as the liquid formulation containing the strain of Bacillus mesonae.

본 실험에 있어서, 생육된 성체 토마토에 바실러스 발리스모티스 균주 BS07M 액상 제제, 및 바실러스 메소나에 H20-5 균주 액상제제를 처리하였다.In this experiment, grown adult tomatoes were treated with a liquid formulation of Bacillus balismotis strain BS07M, and a liquid formulation of Bacillus mesonae H20-5 strain.

균주 처리시, 바실러스 메소나에 균주 및 바실러스발리스모티스 균주의 액상 제제를 사용하여 토마토에 관주 처리하였다. 토마토 모종을 시설재배 토양에 정식 한 후 200평 당 1리터의 액상제제를 500배 희석하여 2주 간격으로 2회 점적관수로 처리하였다.At the time of strain treatment, tomatoes were drenched using liquid preparations of Bacillus mesonae strain and Bacillus vallismottis strain. After the tomato seedlings were planted in the soil for plant cultivation, 1 liter of liquid formulation per 200 pyeong was diluted 500 times and treated with drip irrigation twice at intervals of 2 weeks.

대조군은 바실러스 메소나에 균주 및 바실러스 발리스모티스 균주 없이 물을 처리한 관행 재배 건으로서, 나머지 조건은 BS07M 및 H20-5와 동일하게 유지한 토마토의 실험 결과이다.The control group is a conventional cultivation case treated with water without Bacillus mesonae strain and Bacillus ballismotis strain, and the remaining conditions are experimental results of tomatoes maintained the same as BS07M and H20-5.

본 실험예는 카탈레이스 (catalase; CAT), 수퍼옥사이드 디스뮤테이스(superoxide dismutase; SOD)와 글루타티온 퍼옥시데이스 (glutathione peroxidase; GPx) 효소 활성을 측정하기 위하여, 토마토로부터 식물 조직(1g)을 샘플링하여 액체질소에 급냉한 후 사용하였다. CAT 활성 검정을 위하여, 차가운 50 mM 포타슘 포스페이트(potassium phosphate) 완충액(buffer) (pH=7.0)에 1mM EDTA를 혼합한 용액 5ml에 샘플링한 식물체를 갈은 후, 4oC에서 12000rpm로 15분 동안 원심 분리 하였다. In this experimental example, in order to measure the enzyme activity of catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx), plant tissue (1 g) from tomato It was sampled and used after quenching in liquid nitrogen. For the CAT activity assay, after grinding the sampled plants in 5 ml of a solution of 1 mM EDTA in cold 50 mM potassium phosphate buffer (pH = 7.0), 4 o C for 15 minutes at 12000 rpm centrifuged.

CAT 효소 활성은 원심 분리 후 상청액을 사용하여 카탈레이스 에세이 키트(catalase assay kit; itemNo.707002, Cayman Chemical Company, USA)로 측정하였다. CAT enzyme activity was measured with a catalase assay kit (item No. 707002, Cayman Chemical Company, USA) using the supernatant after centrifugation.

SOD의 활성측정을 위하여 샘플링한 식물 조직을 20mM HEPES 완충액 (pH=7.2)와 1mM EGTA, 210mM 만니톨(mannitol), 70mM 수크로스(sucrose)가 혼합된 차가운 용액 5ml에 갈아서 4oC에서 2000rpm으로 15분 동안 원심 분리 하였다. SOD 효소활성은 원심 분리 후 상청액을 사용하여 수퍼옥사이드 디스뮤테이스 에세이 키트 (item No.706002, Cayman Chemical Company, USA)로 측정하였다. GPx 활성은 글루타티온 퍼옥시데이트 에세이 키트 (item No.703102, Cayman Chemical Company, USA)로 측정하였다. 이러한 실험은 2회에 걸쳐 각각 5번 반복 수행되었다.To measure the activity of SOD, the sampled plant tissue was ground in 5 ml of a cold solution of 20 mM HEPES buffer (pH = 7.2), 1 mM EGTA, 210 mM mannitol, and 70 mM sucrose mixed at 2000 rpm at 4 ° C. centrifuged for min. The SOD enzyme activity was measured with a superoxide dismutase assay kit (item No. 706002, Cayman Chemical Company, USA) using the supernatant after centrifugation. GPx activity was measured with a glutathione peroxidate assay kit (item No. 703102, Cayman Chemical Company, USA). This experiment was repeated 5 times each over 2 times.

표 1은 바실러스 메소나에 균주 및 바실러스 발리스모티스의 항산화 효소 활성을 측정하여 비교한 것이다. 도 2 내지 도 4은 바실러스 메소나에 균주 및 바실러스 발리스모티스의 항산화 효소 활성을 측정하여 비교한 그래프로서, 도 2는 CAT 활성화 정도를, 도 3은 SOD 활성화 정도를, 도 4는 GPx 활성화 정도를 도시한 것이다. 도 1 내지 3에 있어서, 막대 그래프에 표시된 별표(asterisk)는 유의미한 차이 (P<0.05)를 의미하며, 막대로 표시된 부분은 표준 오차를 나타낸다.Table 1 is a comparison by measuring the antioxidant enzyme activity of Bacillus mesonae strains and Bacillus balismotis. 2 to 4 are graphs comparing by measuring the antioxidant enzyme activity of Bacillus mesonae strain and Bacillus balismotis, Figure 2 is the degree of CAT activation, Figure 3 is the degree of SOD activation, Figure 4 is the degree of GPx activation will show 1 to 3 , an asterisk indicated on the bar graph indicates a significant difference (P<0.05), and a portion indicated with a bar indicates the standard error.

표 1에 있어서, BS07M는 바실러스 발리스모티스 균주 액상 제제를 처리한 토마토의 실험 결과이며, H20-5는 바실러스 메소나에 균주를 처리한 토마토의 실험 결과이며, 대조군은 바실러스 메소나에 균주 및 바실러스 발리스모티스 균주 없이 물을 처리한 관행 재배 건으로서, 나머지 조건은 BS07M 및 H20-5와 동일하게 유지한 토마토의 실험 결과이다.In Table 1, BS07M is an experimental result of a tomato treated with a Bacillus ballismotis strain liquid formulation, H20-5 is an experimental result of a tomato treated with a Bacillus mesonae strain, and the control group is a Bacillus mesonae strain and Bacillus It is a conventional cultivation case treated with water without a ballismotis strain, and the remaining conditions are the experimental results of tomatoes maintained the same as BS07M and H20-5.

TreatmentTreatment CAT activity
(nmol/min/mg protein)
CAT activity
(nmol/min/mg protein)
SOD activity
(U/mg protein)
SOD activity
(U/mg protein)
GPx activity
(nmol/min/mg protein)
GPx activity
(nmol/min/mg protein)
ControlControl 4.39 ± 0.74a4.39 ± 0.74a 0.83 ± 0.020.83 ± 0.02 15.48 ± 1.1615.48 ± 1.16 BS07MBS07M 4.61 ± 1.504.61 ± 1.50 0.92 ± 0.030.92 ± 0.03 15.56 ± 2.1815.56 ± 2.18 TP-H20-5TP-H20-5 6.15 ± 0.68*6.15 ± 0.68* 1.16 ± 0.11*1.16 ± 0.11* 19.73 ± 3.31*19.73 ± 3.31*

표 1을 살펴보면, 실험 결과, 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제를 처리한 토마토에서 SOD, CAT, GPx의 활성이 현저하게 증가되는 것이 확인되었다. 이를 통해 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제는 토마토에 처리되었을 때 항산화효소의 활성을 증가시켜 체내 활성화산소의 함량을 직접 및/또는 간접적으로 조절하는 것으로 예상된다. 이에 비해, 바실러스 발리스모티스 균주를 포함하는 액상 제제를 처리한 토마토의 경우, 미량이나마 SOD, CAT, GPx의 활성이 증가하는 것이 관찰되기는 하였으나, 대조군 대비 그 차이는 크지 않았다. 이를 통해 바살러스 속의 균주일지라도 서로 다른 항산화 활성 정도를 보인다는 점을 확인할 수 있다.Referring to Table 1, it was confirmed that the activity of SOD, CAT, GPx was remarkably increased in the tomato treated with the liquid formulation containing the Bacillus mesonae strain as a result of the experiment. Through this, the liquid formulation containing the Bacillus mesonae strain is expected to directly and/or indirectly control the content of active oxygen in the body by increasing the activity of antioxidant enzymes when treated with tomatoes. In contrast, in the case of tomatoes treated with a liquid formulation containing a Bacillus balismotis strain, although it was observed that the activity of SOD, CAT, and GPx increased even in trace amounts, the difference was not significant compared to the control group. Through this, it can be confirmed that even the strains of the genus Basalus show different degrees of antioxidant activity.

실시예 3. 바실러스 메소나에 균주 처리에 의한 토마토 라이코펜, 베타카로틴, 폴리페놀 함량 증가효과Example 3. Effect of increasing the content of tomato lycopene, beta-carotene, and polyphenols by treatment with Bacillus mesonae strain

본 실시예는 바실러스 메소나에 균주의 액상 제제를 토마토에 처리하였을 때 토마토 내 항산화 물질인 라이코펜, 베타카로틴, 및 폴리페놀의 함량이 증가하는 지 확인하기 위한 것이다. This example is to confirm whether the content of antioxidants lycopene, beta-carotene, and polyphenols in tomatoes increases when the liquid formulation of the Bacillus mesonae strain is treated on the tomato.

본 실시예에서 실험한 균주는 실시예 2와 동일한 바실러스 메소나에 H20-5와 바실러스 발리스모티스 BS07M(Bacillus vallismortis)였다. 바실러스 발리스모티스 균주를 포함하는 액상 제제는 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제와 실질적으로 동일한 방식으로 제조되었다. The strains tested in this example were Bacillus mesonae H20-5 and Bacillus vallismortis BS07M (Bacillus vallismortis) the same as in Example 2. The liquid formulation containing the strain of Bacillus balismotis was prepared in substantially the same manner as the liquid formulation containing the strain of Bacillus mesonae.

본 실험은 비닐하우스 검정 방법으로 수행된 바, 이는 농가검정과 동일하다. 본 실험에 있어서, 생육된 성체 토마토에 바실러스 발리스모티스 균주 BS07M 액상 제제, 및 바실러스 메소나에 균주를 처리하였다. This experiment was performed by the greenhouse test method, which is the same as the farmhouse test. In this experiment, grown adult tomatoes were treated with Bacillus balismotis strain BS07M liquid formulation, and Bacillus mesonae strain.

균주 처리시, 바실러스 메소나에 균주 및 바실러스 발리스모티스 균주의 액상 제제를 사용하여 토마토에 관주 처리하였다. 토마토 모종을 시설재배 토양에 정식 한 후 200평 당 1리터의 액상제제를 500배 희석하여 2주 간격으로 2회 점적관수로 처리하였다. At the time of strain treatment, tomatoes were drenched using liquid preparations of Bacillus mesonae strain and Bacillus balismotis strain. After the tomato seedlings were planted in the soil for plant cultivation, 1 liter of liquid formulation per 200 pyeong was diluted 500 times and treated with drip irrigation twice at intervals of 2 weeks.

라이코펜 함량을 평가하기 위해, 동결건조한 샘플 0.2g은 10ml의 아세톤-헥산(4:6)용액으로 추출하였으며, 추출한 샘플은 3000rpm에서 5분 동안 4℃에서 원심분리하여 상청액을 수거하였다. 모은 상청액은 분광광도계를 사용하여 663nm, 645nm, 505nm, 453nm에서 흡광도를 측정하여 Nagata and Yamashita (1992)방법으로 정량하였다.To evaluate the lycopene content, 0.2 g of the freeze-dried sample was extracted with 10 ml of acetone-hexane (4:6) solution, and the extracted sample was centrifuged at 3000 rpm for 5 minutes at 4° C. to collect the supernatant. The collected supernatant was quantified by the Nagata and Yamashita (1992) method by measuring absorbance at 663 nm, 645 nm, 505 nm, and 453 nm using a spectrophotometer.

베타카로틴은 열매를 동결건조한 후 아세톤-헥산의 4:6 혼합액(acetone-hexan; 4:6)으로 추출하여, 4oC에서 3000rpm으로 5분 동안 원심분리한 후, 흡광도 663 nm, 645nm, 505nm, 453nm에서 측정하여 β-카로틴(mg/100g Dry weight) = 0.216xA663-1.22xA645-0.304xA505+0.452xA453로 평가하였다.After freeze-drying the fruit, beta-carotene was extracted with a 4:6 mixture of acetone-hexane (acetone-hexan; 4:6), centrifuged at 4 o C at 3000 rpm for 5 minutes, and absorbance 663 nm, 645 nm, 505 nm , measured at 453 nm and evaluated as β-carotene (mg/100g dry weight) = 0.216xA663-1.22xA645-0.304xA505+0.452xA453.

폴리페놀 함량을 평가하기 위해, 추출은 Vasco et al.(2008)의 방법에 따라 0.5g의 동결건조한 샘플을 50% 메탄올 20ml로 추출 한 후 70% 아세톤 20ml로 1시간동안 교반하여 두 번째 추출하였다. 추출액은 4000rpm에서 15분동안 원심분리한 후 볼륨 플라스크(volumetric flask)에서 증류수로 50ml 맞추어 분석에 사용할 추출액을 준비하였다. 0.5ml의 추출액은 0.5ml의 Folin-Cioaltew 시약과 혼합하여 3분동안 교반하였고, 탄산 소듐 용액(sodium carbonate solution; pure 75g/L) 10ml을 첨가하였다. 최종 부피는 증류수로 25ml를 맞춘 후 상온에서 1시간 반응시켰다. 이 후 분광광도계를 사용하여 750nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다. 표준 곡선(standard curve)은 갈릭산(gallic acid)를 사용하였다. In order to evaluate the polyphenol content, extraction was performed by extracting 0.5 g of a freeze-dried sample with 20 ml of 50% methanol and stirring for 1 hour with 20 ml of 70% acetone according to the method of Vasco et al. (2008). A second extraction was performed. . After centrifuging the extract at 4000 rpm for 15 minutes, 50 ml of distilled water was added in a volumetric flask to prepare an extract to be used for analysis. 0.5 ml of the extract was mixed with 0.5 ml of Folin-Cioaltew reagent, stirred for 3 minutes, and 10 ml of sodium carbonate solution (pure 75 g/L) was added. The final volume was adjusted to 25 ml with distilled water and reacted at room temperature for 1 hour. Thereafter, the absorbance was measured at a wavelength of 750 nm using a spectrophotometer. As a standard curve, gallic acid was used.

표 2 내지 표 4는 각각 바실러스 메소나에 균주 및 바실러스 발리스모티스 균주를 포함하는 액상 제제를 토마토에 처리하였을 때 라이코펜, 베타카로틴, 및 폴리페놀의 함량을 측정하여 비교한 것이다. 도 5 내지 도 7은 각각 표 2 내지 표 4를 도시한 그래프이다. 도 5 내지 7에 있어서, 막대 그래프에 표시된 별표(asterisk)는 유의미한 차이 (P<0.05)를 의미하며, 막대로 표시된 부분은 표준 오차를 나타낸다.Tables 2 to 4 compare the contents of lycopene, beta-carotene, and polyphenols by measuring the contents of lycopene, beta-carotene, and polyphenols when a liquid formulation containing a Bacillus mesonae strain and a Bacillus balismotis strain, respectively, is treated on a tomato. 5 to 7 are graphs showing Tables 2 to 4, respectively. 5 to 7 , an asterisk indicated on the bar graph indicates a significant difference (P<0.05), and a portion indicated with a bar indicates the standard error.

표 2 내지 표 4에 있어서, BS07M는 바실러스 발리스모티스 균주 액상 제제를 처리한 토마토의 실험 결과이며, H20-5는 바실러스 메소나에 균주를 처리한 토마토의 실험 결과이며, 대조군은 바실러스 메소나에 균주 및 바실러스 발리스모티스 균주 없이 물을 처리한 관행 재배 건으로서, 나머지 조건은 BS07M 및 H20-5와 동일하게 유지한 토마토의 실험 결과이다.In Tables 2 to 4, BS07M is the experimental result of the tomato treated with the Bacillus balismotis strain liquid formulation, H20-5 is the experimental result of the tomato treated with the Bacillus mesonae strain, and the control group is Bacillus mesona. As a conventional cultivation case treated with water without strain and Bacillus ballismotis strain, the remaining conditions are the experimental results of tomatoes maintained the same as BS07M and H20-5.

표 2 내지 4, 및 도 5 내지 7을 참조하면, 실험 결과, 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제를 처리한 토마토의 경우, 라이코펜, 베타카로틴, 폴리페놀 모두 현저하게 그 함량이 증가하는 것이 확인되었다. 이를 통해 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제가 토마토에 처리되었을 때 항산화 물질, 특히, 라이코펜, 베타카로틴, 및 폴리페놀의 함량을 현저하게 증가시키는 것을 확인할 수 있다. Referring to Tables 2 to 4, and FIGS. 5 to 7, as a result of the experiment, in the case of tomatoes treated with a liquid formulation containing a Bacillus mesonae strain, lycopene, beta-carotene, and polyphenols all significantly increased in content Confirmed. Through this, it can be confirmed that the content of antioxidants, in particular, lycopene, beta-carotene, and polyphenols, is remarkably increased when the liquid formulation containing the Bacillus mesonae strain is treated on tomatoes.

이에 비해, 바실러스 발리스모티스 균주를 포함하는 액상 제제를 처리한 토마토에 있어서, 라이코펜의 경우 대조군 대비 유의미한 함량의 증가가 있기는 하나, 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제를 처리한 토마토 대비 그 증가폭은 크지 않았다. 이에 더해, 바실러스 발리스모티스 균주를 포함하는 액상 제제를 처리한 토마토에 있어서, 베타카로틴과 폴리페놀의 경우 대조군 대비 유의미한 함량의 증가는 관찰되지 않았다. 이를 통해 바살러스 속의 균주일지라도 서로 다른 항산화물질 증가 효과를 갖는다는 것을 확인할 수 있었다.In contrast, in the tomato treated with the liquid formulation containing the Bacillus balismotis strain, in the case of lycopene, although there is a significant increase in the content compared to the control, compared to the tomato treated with the liquid formulation containing the Bacillus mesonae strain The increase was not large. In addition, in the tomato treated with the liquid formulation containing the Bacillus balismotis strain, in the case of beta-carotene and polyphenol, a significant increase in content compared to the control was not observed. Through this, it was confirmed that even the strains of the genus Basalus had different antioxidant-increasing effects.

treatmenttreatment Mean±SEMean±SE LSDLSD ControlControl 145.38±3.78145.38±3.78 CC BS07MBS07M 168.09±3.62168.09±3.62 BB TP-H20-5TP-H20-5 185.13±1.91185.13±1.91 AA

treatmenttreatment Mean±SEMean±SE LSDLSD ControlControl 36.51±0.7336.51±0.73 BB BS07MBS07M 38.43±1.4738.43±1.47 BB TP-H20-5TP-H20-5 41.35±0.7041.35±0.70 AA

treatmenttreatment Mean±SEMean±SE LSDLSD ControlControl 22.1±0.1522.1±0.15 BB BS07MBS07M 22.9±0.3422.9±0.34 BB TP-H20-5TP-H20-5 23.2±0.323.2±0.3 AA

실시예 4: 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제에 의한 대추방울토마토와 딸기의 폴리페놀 함량 증가 효과 Example 4: Effect of increasing polyphenol content of cherry tomatoes and strawberries by liquid formulation containing Bacillus mesonae strain

본 실시예는 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제를 대추방울토마토와 딸기에 처리하였을 때, 대추방울토마토와 딸기 각각에 있어서의 항산화 물질 함량의 증진여부를 확인하기 위해 수행되었다.This example was carried out to confirm whether the antioxidant content in each cherry tomato and strawberry was enhanced when the liquid formulation containing the Bacillus mesonae strain was treated on the cherry tomatoes and strawberries.

바실러스 메소나에 균주의 액상 제제를 사용하여 대추방울토마토와 딸기에 각각 관주 처리하였다. 대추방울토마토 모종을 시설재배 토양에 정식 한 후 200평 당 1리터의 액상제제를 500배 희석하여 2주 간격으로 2회 점적관수로 처리하였다. Using a liquid formulation of the Bacillus mesonae strain, each of the cherry tomatoes and strawberries were drenched. After planting the jujube cherry tomato seedlings in the soil cultivated in facilities, 1 liter of liquid formulation per 200 pyeong was diluted 500 times and treated with drip irrigation twice at intervals of 2 weeks.

동일한 때 관행(대조구)재배에서는 물을 동량 처리하였다.At the same time, the same amount of water was treated in conventional (control) cultivation.

대추방울토마토와 딸기는 각각 액상제제를 처리한 2달 후부터 2018년 12월 23일~2019년 3월 30일, 2018년 12월 20일~2019년 2월 28일 동안 수확하였으며, 재배기간 중 대추방울토마토 열매를 4반복으로, 딸기는 5반복으로 임의(random) 샘플링하였다. Jujube cherry tomatoes and strawberries were harvested from December 23, 2018 to March 30, 2019, and from December 20, 2018 to February 28, 2019, from 2 months after the liquid formulation was processed, respectively. Cherry tomato fruit was randomly sampled in 4 replicates and strawberries in 5 replicates.

샘플링한 열매를 감압조건(0.100mbar)에서 -40도에서 7일 동안 동결건조하였고, 동결건조한 열매를 막자사발로 분쇄한 후 250μm (opening micrometer, tyler equivalent 60 mesh)에 걸러 분쇄한 입자를 동일한 크기로 준비하여 분석에 사용하였다. The sampled fruits were freeze-dried under reduced pressure (0.100mbar) at -40°C for 7 days, and the freeze-dried fruits were pulverized with a mortar and filtered through 250μm (opening micrometer, tyler equivalent 60 mesh) and the pulverized particles were the same size. was prepared and used for analysis.

폴리페놀 추출은 Vasco et al.(2008)의 방법에 따라 0.5g의 동결건조한 샘플을 50% 메탄올 20ml로 추출한 후 70% 아세톤 20ml로 1시간동안 교반하여 두 번째 추출하였다. 추출액은 4000rpm에서 15분동안 원심분리한 후 볼륨 플라스크(volumetric flask)에서 증류수로 50ml 맞추어 분석에 사용할 추출액을 준비하였다. 0.5ml의 추출액은 0.5ml의 Folin-Cioaltew 시약과 혼합하여 3분동안 교반하였고, 탄산 소듐 용액(sodium carbonate solution; pure 75g/L) 10ml을 첨가하였다. 최종 부피는 증류수로 25ml를 맞춘 후 상온에서 1시간 반응시켰다. 이 후 분광광도계를 사용하여 750nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다. 표준 곡선(standard curve)은 갈릭산(gallic acid)를 사용하였다. For polyphenol extraction, 0.5 g of a freeze-dried sample was extracted with 20 ml of 50% methanol according to the method of Vasco et al. (2008), followed by a second extraction by stirring with 20 ml of 70% acetone for 1 hour. After centrifuging the extract at 4000 rpm for 15 minutes, 50 ml of distilled water was added in a volumetric flask to prepare an extract to be used for analysis. 0.5 ml of the extract was mixed with 0.5 ml of Folin-Cioaltew reagent, stirred for 3 minutes, and 10 ml of sodium carbonate solution (pure 75 g/L) was added. The final volume was adjusted to 25 ml with distilled water and reacted at room temperature for 1 hour. Thereafter, the absorbance was measured at a wavelength of 750 nm using a spectrophotometer. As a standard curve, gallic acid was used.

도 8은 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제(TP-H20-5로 표시)로 처리한 대추방울토마토와 대조군의 대추방울토마토에 있어서의 폴리페놀의 함량을 도시한 그래프이고, 도 9는 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제(TP-H20-5로 표시)로 처리한 딸기와 대조군의 딸기에 있어서의 폴리페놀의 함량을 도시한 그래프이다.8 is a graph showing the content of polyphenols in cherry tomatoes treated with a liquid formulation (represented as TP-H20-5) containing Bacillus mesonae strains and the cherry tomatoes of the control, FIG. It is a graph showing the content of polyphenols in strawberries treated with a liquid formulation (represented by TP-H20-5) containing Bacillus mesonae strains and strawberries in the control group.

도 8 및 도 9를 참조하면, 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제(TP-H20-5로 표시)로 처리한 대추방울토마토 및 딸기는 대조군 대비 현저하게 높은 폴리페놀 함량을 나타냄을 확인할 수 있다. Referring to FIGS. 8 and 9 , it can be confirmed that cherry tomatoes and strawberries treated with a liquid formulation (represented by TP-H20-5) containing the Bacillus mesonae strain exhibit a significantly higher polyphenol content compared to the control group. have.

특히, 도 8을 참조하면, 대추방울토마토에서 폴리페놀함량을 측정한 결과, 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제를 처리한 대추방울토마토의 폴리페놀함량은 1.43±0.06mM/g(건조중량)인 반면, 관행 재배시(대조군) 대추방울토마토의 폴리페놀함량은 1.20±0.02mM/g(건조 중량)로서, 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제를 처리할 경우 폴리페놀함량이 관행대비 19.17% 증가하였다. In particular, referring to FIG. 8, as a result of measuring the polyphenol content in the date cherry tomatoes, the polyphenol content of the date cherry tomatoes treated with the liquid formulation containing the Bacillus mesonae strain was 1.43±0.06 mM/g (dry weight). ), on the other hand, the polyphenol content of Jujube cherry tomatoes during conventional cultivation (control) is 1.20±0.02mM/g (dry weight), and when a liquid formulation containing Bacillus mesonae strain is treated, the polyphenol content is higher than that of conventional culture. It increased by 19.17%.

도 9를 참조하면, 딸기에서 폴리페놀함량은 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제를 처리할 경우 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제를 처리한 딸기의 폴리페놀함량은 2.14±0.08mM/g (건조 중량)인 반면, 관행 재배(대조군) 딸기의 폴리페놀 함량은 1.88±0.03mM/g (건조 중량)으로서, 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제를 처리할 경우 관행대비 13.83% 폴리페놀 함량이 증가하였다.Referring to FIG. 9 , the polyphenol content of the strawberry treated with the liquid formulation containing the Bacillus mesonae strain is 2.14±0.08mM/ g (dry weight), whereas the polyphenol content of conventionally grown (control) strawberries was 1.88±0.03mM/g (dry weight), and 13.83% polyphenol compared to conventional when treated with a liquid formulation containing Bacillus mesonae strain The phenol content increased.

실시예 5: 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제에 의한 대추방울토마토와 딸기의 라이코펜 함량 증가 효과 Example 5: Effect of increasing lycopene content of cherry tomatoes and strawberries by liquid formulation containing Bacillus mesonae strain

실시예 4에서 설명한 것과 동일하게 샘플링하여 동결건조하여 라이코펜 함량 측정에 사용하였다. 동결건조한 샘플 0.2g은 10ml의 아세톤-헥산(4:6)용액으로 추출하였으며, 추출한 샘플은 3000rpm에서 5분 동안 4℃에서 원심분리하여 상청액을 수거하였다. 모은 상청액은 분광광도계를 사용하여 663nm, 645nm, 505nm, 453nm에서 흡광도를 측정하여 Nagata and Yamashita (1992)방법으로 정량하였다. It was sampled and freeze-dried in the same manner as described in Example 4, and used to measure the lycopene content. 0.2 g of the freeze-dried sample was extracted with 10 ml of acetone-hexane (4:6) solution, and the extracted sample was centrifuged at 3000 rpm for 5 minutes at 4° C. to collect the supernatant. The collected supernatant was quantified by the Nagata and Yamashita (1992) method by measuring absorbance at 663 nm, 645 nm, 505 nm, and 453 nm using a spectrophotometer.

도 10은 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제(TP-H20-5로 표시)로 처리한 대추방울토마토와 대조군의 대추방울토마토에 있어서의 라이코펜의 함량을 도시한 그래프이고, 도 11은 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제(TP-H20-5로 표시)로 처리한 딸기와 대조군의 딸기에 있어서의 라이코펜의 함량을 도시한 그래프이다.Figure 10 is a graph showing the content of lycopene in the date cherry tomatoes treated with a liquid formulation (represented by TP-H20-5) containing the Bacillus mesonae strain and the control date cherry tomatoes, Figure 11 is Bacillus It is a graph showing the content of lycopene in strawberries treated with a liquid formulation (represented by TP-H20-5) containing the Mesonae strain and strawberries in the control group.

도 10 및 도 11을 참조하면, 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제(TP-H20-5로 표시)로 처리한 대추방울토마토 및 딸기는 대조군 대비 현저하게 높은 라이코펜 함량을 나타냄을 확인할 수 있다. 10 and 11 , it can be seen that cherry tomatoes and strawberries treated with a liquid formulation (represented by TP-H20-5) containing the Bacillus mesonae strain exhibit a significantly higher lycopene content compared to the control group. .

도 10을 참조하면, 대추방울토마토에서 라이코펜 함량을 측정한 결과, 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제를 처리한 대추방울토마토의 라이코펜 함량은 3.13±0.03μg/g (건조 중량) 인 반면, 관행 재배시(대조군)의 라이코펜 함량은 2.69±0.02μg/g (건조 중량)으로서, 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제를 처리할 경우 라이코펜 함량이 관행대비 16.36% 증가하였다. Referring to FIG. 10, as a result of measuring the lycopene content in the cherry tomatoes, the lycopene content of the cherry tomatoes treated with the liquid formulation containing the Bacillus mesonae strain was 3.13±0.03 μg/g (dry weight), whereas The lycopene content in conventional cultivation (control) was 2.69±0.02 μg/g (dry weight), and when the liquid formulation containing the Bacillus mesonae strain was treated, the lycopene content increased by 16.36% compared to the conventional one.

도 11을 참조하면, 딸기에서 라이코펜 함량은 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제를 처리할 경우 17.74±0.001ng/g (건조 중량)인 반면, 관행 재배(대조군)의 라이코펜 함량은 8.97±0.001ng/g (건조 중량)으로서 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제를 처리할 경우 관행대비 97.77% 라이코펜 함량이 증가하였다.Referring to FIG. 11 , the lycopene content in strawberries was 17.74±0.001 ng/g (dry weight) when the liquid formulation containing the Bacillus mesonae strain was treated, whereas the lycopene content in conventional cultivation (control) was 8.97±0.001 When the liquid formulation containing the Bacillus mesonae strain as ng/g (dry weight) was treated, the lycopene content was increased by 97.77% compared to conventional practice.

실시예 6: 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제에 의한 시설재배작물(대추방울토마토, 완숙토마토, 딸기, 오이)의 수확량 증가 효과 Example 6: Effect of increasing yield of facility-cultivated crops (jujube cherry tomatoes, ripe tomatoes, strawberries, cucumbers) by a liquid formulation containing a Bacillus mesonae strain

바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제를 실시예 4에서 기술한 것과 각각 대추방울토마토, 완숙토마토, 딸기, 오이 정식 후 2주 간격으로 관주 처리하였다. The liquid formulation containing the Bacillus mesonae strain was irrigated with those described in Example 4, respectively, at 2 week intervals after the jujube cherry tomatoes, ripe tomatoes, strawberries, and cucumbers were planted.

표 5는 대추방울토마토, 딸기, 완숙토마토, 오이 시설재배 포장의 수확량을 측정하여 대조군(관행재배, control)과 비교한 결과를 나타낸 것이다.Table 5 shows the results of comparison with the control group (conventional cultivation, control) by measuring the yields of jujube cherry tomatoes, strawberries, ripe tomatoes, and cucumbers in facility cultivation fields.

처리process 수확량(kg), (증가 %)Yield (kg), (increase %) 대추방울토마토Jujube Cherry Tomato 완숙토마토ripe tomatoes 딸기Strawberry 오이cucumber ControlControl 16951695 60506050 114.3114.3 15221522 TP-H20-5TP-H20-5 2058.5(21.4%)2058.5 (21.4%) 6610(9.3%)6610 (9.3%) 242.2(120.6%)242.2 (120.6%) 1742(14.5%)1742 (14.5%)

표 5를 참조하면, 대추방울토마토의 총 수확량을 수확기(2018년 12월 23일~3월 30일)동안 평가한 결과, 관행재배에서는 200평당 총 수확량이 1695 kg인 반면, 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 액상 제제를 처리한 경우 200평당 총 수확량이 2058.5 kg으로 관행대비 21.4%증가하였다. 완숙토마토의 총 수확량을 수확기(2019년 2월 15일~4월 29일)동안 평가한 결과, 관행재배에서는 200평당 총 수확량이 6050 kg인 반면, 를 처리한 경우 200평당 총 수확량이 6610 kg으로 관행대비 9.3% 증가하였다. Referring to Table 5, as a result of evaluating the total yield of Jujube cherry tomatoes during the harvest season (December 23 to March 30, 2018), the total yield per 200 pyeong in conventional cultivation was 1695 kg, whereas Bacillus mesonae strain In the case of treatment with liquid formulations containing , the total yield per 200 pyeong was 2058.5 kg, which increased by 21.4% compared to the conventional one. As a result of evaluating the total yield of ripe tomatoes during the harvest period (February 15-April 29, 2019), the total yield per 200 pyeong was 6050 kg in conventional cultivation, whereas the total yield per 200 pyeong was 6610 kg when treated. It increased by 9.3% compared to the conventional one.

딸기의 총 수확량을 수확기(2018년 12월 20일~2019년 2월 28일)동안 평가한 결과, 관행재배에서는 150평당 총 수확량이 114.3 kg인 반면, 를 처리한 경우 150평당 총 수확량이 252.2 kg으로 관행대비 120.6% 증가하였다. As a result of evaluating the total harvest of strawberries during the harvest period (December 20, 2018 - February 28, 2019), the total yield per 150 pyeong was 114.3 kg in conventional cultivation, whereas the total yield per 150 pyeong was 252.2 kg As a result, it increased by 120.6% compared to conventional practice.

오이의 총 수확량을 수확기(2018년 10월 21일~2018년 11월 28일)동안 평가한 결과, 관행재배에서는 200평당 총 수확량이 1522 kg인 반면, 를 처리한 경우 200평당 총 수확량이 1742 kg으로 관행대비 14.5% 증가하였다. As a result of evaluating the total yield of cucumbers during the harvesting period (October 21, 2018 - November 28, 2018), the total yield per 200 pyeong was 1522 kg in conventional cultivation, whereas the total yield per 200 pyeong was 1742 kg in the case of treatment. As a result, it increased by 14.5% compared to conventional practice.

결론적으로, 본 발명의 바실러스 메소나에 균주를 포함하는 미생물 액상제제는 대추방울토마토와 딸기와 같은 작물의 항산화 기능성 성분-라이코펜과 폴리페놀 함량을 현저하게 증진시키는 것에 영향을 주는 것을 확인하였으며, 또한 시설재배작물인 대추방울토마토, 완숙토마토, 딸기와 오이에서 관행대비 수확량이 현저히 증가하는 것을 확인하였다. In conclusion, it was confirmed that the microbial liquid formulation containing the Bacillus mesonae strain of the present invention significantly enhances the antioxidant functional ingredients-lycopene and polyphenol content of crops such as cherry tomatoes and strawberries, and also It was confirmed that harvest yields were significantly increased compared to conventional crops, such as jujube cherry tomatoes, ripe tomatoes, strawberries and cucumbers, which are planted crops.

상술한 모든 실험의 결과 데이터는 SAS software (SAS Institute, Cary, NC, USA)를 사용해 변이 분석하였다. 각 샘플의 처리 수단에 따른 상당한 차이는 P < 0.05 에서 Least Significance Difference (LSD) Test를 사용하여 결정하였다.Results data of all the above experiments were analyzed for variation using SAS software (SAS Institute, Cary, NC, USA). Significant differences according to the treatment means of each sample were determined using the Least Significance Difference (LSD) Test at P < 0.05.

이상에서는 본 발명의 바람직한 실시예를 참조하여 설명하였지만, 해당 기술 분야의 숙련된 당업자 또는 해당 기술 분야에 통상의 지식을 갖는 자라면, 후술될 특허청구범위에 기재된 본 발명의 사상 및 기술 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있음을 이해할 수 있을 것이다.Although the above has been described with reference to the preferred embodiment of the present invention, those skilled in the art or those having ordinary knowledge in the technical field will not depart from the spirit and technical scope of the present invention described in the claims to be described later. It will be understood that various modifications and variations of the present invention can be made without departing from the scope thereof.

따라서, 본 발명의 기술적 범위는 명세서의 상세한 설명에 기재된 내용으로 한정되는 것이 아니라 특허청구범위에 의해 정하여져야만 할 것이다.Accordingly, the technical scope of the present invention should not be limited to the contents described in the detailed description of the specification, but should be defined by the claims.

기탁기관명 : 농업생명공학연구원Name of deposit institution: Agricultural Biotechnology Research Institute

수탁번호 : KACC81041Accession number: KACC81041

수탁일자 : 20170109Deposit date: 20170109

<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT : RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> Bacillus mesonae strain promoting tolerance of plants and use thereof <130> P18-104 <150> KR 10-2017-0046958 <151> 2017-04-11 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1519 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> 16S rRNA of Bacillus mesonae H20-5 <400> 1 ttttgagttt tagaatctgg tcaggacgaa cgctggcggc gtgcctaata catgcaagtc 60 gagcgaactt gcgggagctt gctcccaaaa gttagcggcg gacgggtgag taacacgtgg 120 gcaacctgcc tgtaagactg ggataacttc gggaaaccgg agctaatacc ggataattct 180 tatcaacaca tgttggtaag ctgaaagtcg gtttcggctg acacttacag atgggcccgc 240 ggcgcattag ctagttggtg aggtaacggc tcaccaaggc aacgatgcgt agccgacctg 300 agagggtgat cggccacact gggactgaga cacggcccag actcctacgg gaggcagcag 360 tagggaatct tccacaatgg acgaaagtct gatggagcaa cgccgcgtga gcgatgaagg 420 ccttcgggtc gtaaagctct gttgttaggg aagaacaagt atcggagtaa ctgccggtac 480 cttgacggta cctaaccaga aagccacggc taactacgtg ccagcagccg cggtaatacg 540 taggtggcaa gcgttgtccg gaattattgg gcgtaaagcg cgcgcaggcg gtcctttaag 600 tctgatgtga aagcccacgg ctcaaccgtg gagggtcatt ggaaactggg ggacttgagt 660 gcagaagagg aaagcggaat tccacgtgta gcggtgaaat gcgtagagat gtggaggaac 720 accagtggcg aaggcggctt tctggtctgt aactgacgct gaggcgcgaa agcgtgggga 780 gcaaacagga ttagataccc tggtagtcca cgccgtaaac gatgagtgct aagtgttaga 840 gggtttccgc cctttagtgc tgcagctaac gcattaagca ctccgcctgg ggagtacggc 900 cgcaaggctg aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt 960 taattcgaag caacgcgaag aaccttacca ggtcttgaca tcctctgaca ctcctagaga 1020 taggactttc cccttcgggg gacagagtga caggtggtgc atggttgtcg tcagctcgtg 1080 tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc ttgatcttag ttgccagcat 1140 tcagttgggc actctaaggt gactgccggt gacaaaccgg aggaaggtgg ggatgacgtc 1200 aaatcatcat gccccttatg acctgggcta cacacgtgct acaatggatg gtacaaaggg 1260 ctgcaaaacc gcaaggtcta gccaatccca taaaaccatt ctcagttcgg attgcaggct 1320 gcaactcgcc tgcatgaagc cggaatcgct agtaatcgcg gatcagcatg ccgcggtgaa 1380 tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccacg agagtttgta acacccgaag 1440 tcggtggggt aaccgtaagg agccagccgc ctaaggtggg acagatgatt ggggtgaagt 1500 cgtaacaggg tagccgtaa 1519 <110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT: RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> Bacillus mesonae strain promoting tolerance of plants and use thereof <130> P18-104 <150> KR 10-2017-0046958 <151> 2017-04-11 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1519 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> 16S rRNA of Bacillus mesonae H20-5 <400> 1 ttttgagttt tagaatctgg tcaggacgaa cgctggcggc gtgcctaata catgcaagtc 60 gagcgaactt gcgggagctt gctcccaaaa gttagcggcg gacgggtgag taacacgtgg 120 gcaacctgcc tgtaagactg ggataacttc gggaaaccgg agctaatacc ggataattct 180 tatcaacaca tgttggtaag ctgaaagtcg gtttcggctg acacttacag atgggcccgc 240 ggcgcattag ctagttggtg aggtaacggc tcaccaaggc aacgatgcgt agccgacctg 300 agagggtgat cggccacact gggactgaga cacggcccag actcctacgg gaggcagcag 360 tagggaatct tccacaatgg acgaaagtct gatggagcaa cgccgcgtga gcgatgaagg 420 ccttcgggtc gtaaagctct gttgttaggg aagaacaagt atcggagtaa ctgccggtac 480 cttgacggta cctaaccaga aagccacggc taactacgtg ccagcagccg cggtaatacg 540 taggtggcaa gcgttgtccg gaattattgg gcgtaaagcg cgcgcaggcg gtcctttaag 600 tctgatgtga aagcccacgg ctcaaccgtg gagggtcatt ggaaactggg ggacttgagt 660 gcagaagagg aaagcggaat tccacgtgta gcggtgaaat gcgtagagat gtggaggaac 720 accagtggcg aaggcggctt tctggtctgt aactgacgct gaggcgcgaa agcgtgggga 780 gcaaacagga tagataccc tggtagtcca cgccgtaaac gatgagtgct aagtgttaga 840 gggtttccgc cctttagtgc tgcagctaac gcattaagca ctccgcctgg ggagtacggc 900 cgcaaggctg aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt 960 taattcgaag caacgcgaag aaccttacca ggtcttgaca tcctctgaca ctcctagaga 1020 taggactttc cccttcgggg gacagagtga caggtggtgc atggttgtcg tcagctcgtg 1080 tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc ttgatcttag ttgccagcat 1140 tcagttgggc actctaaggt gactgccggt gacaaaccgg aggaaggtgg ggatgacgtc 1200 aaatcatcat gccccttatg acctgggcta cacacgtgct acaatggatg gtacaaaggg 1260 ctgcaaaacc gcaaggtcta gccaatccca taaaaccatt ctcagttcgg attgcaggct 1320 gcaactcgcc tgcatgaagc cggaatcgct agtaatcgcg gatcagcatg ccgcggtgaa 1380 tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccacg agagtttgta acacccgaag 1440 tcggtggggt aaccgtaagg agccagccgc ctaaggtggg acagatgatt ggggtgaagt 1500 cgtaacaggg tagccgtaa 1519

Claims (11)

바실러스 메소나에(Bacillus mesonae) H20-5 균주(기탁번호 : KACC 81041BP)를 포함하는 딸기에 처리 가능한 항산화 물질 증진용 액상 제제.A liquid formulation for enhancing antioxidant substances that can be treated in strawberries containing Bacillus mesonae H20-5 strain (Accession No.: KACC 81041BP). 삭제delete 제1 항에 있어서, 상기 항산화 물질은 폴리페놀, 라이코펜, 베타카로틴 중 적어도 어느 하나인 항산화 물질 증진용 액상 제제.According to claim 1, wherein the antioxidant is at least one of polyphenol, lycopene, beta-carotene liquid formulation for enhancing antioxidant substances. 제1 항에 있어서, 상기 항산화 물질은 항산화 효소인 항산화 물질 증진용 액상 제제.The liquid formulation for enhancing an antioxidant according to claim 1, wherein the antioxidant is an antioxidant enzyme. 제4 항에 있어서,
상기 항산화 효소는 카탈레이스, 수퍼옥사이드 디스뮤테이스, 및 글루타티온 퍼옥시데이스 중 적어도 하나인 항산화 물질 증진용 액상 제제.
The method of claim 4,
The antioxidant enzyme is at least one of catalase, superoxide dismutase, and glutathione peroxidase.
바실러스 메소나에(Bacillus mesonae) H20-5 균주(기탁번호 : KACC 81041BP)를 포함하는 딸기, 오이에 처리 가능한 생산량 증진용 액상 제제.Bacillus mesonae (Bacillus mesonae) containing H20-5 strain (Accession No.: KACC 81041BP), a liquid formulation for improving production that can be processed on strawberries and cucumbers. 바실러스 메소나에(Bacillus mesonae) H20-5 균주(기탁번호 : KACC 81041BP)를 포함하는 액제를 준비하는 단계; 및
딸기에 상기 액제를 처리하는 단계를 포함하는 딸기의 항산화 물질 증진 방법.
Preparing a solution containing Bacillus mesonae (Bacillus mesonae) H20-5 strain (Accession No.: KACC 81041BP); and
A method for enhancing antioxidant substances in strawberries, comprising the step of treating the liquid preparation on strawberries.
제7 항에 있어서,
상기 액제는 관주처리되는 항산화 물질 증진 방법.
The method of claim 7,
The liquid agent is an antioxidant enhancement method that is treated with irrigation.
제7 항에 있어서,
상기 항산화 물질은 폴리페놀, 라이코펜, 베타카로틴 중 적어도 어느 하나인 항산화 물질 증진 방법.
The method of claim 7,
The antioxidant is at least one of polyphenol, lycopene, and beta-carotene.
바실러스 메소나에(Bacillus mesonae) H20-5 균주(기탁번호 : KACC 81041BP)를 포함하는 액제를 준비하는 단계; 및
딸기, 오이 중 적어도 하나에 상기 액제를 처리하는 단계를 포함하는 딸기, 오이 중 적어도 하나의 생산량 증진 방법.
Preparing a solution containing Bacillus mesonae (Bacillus mesonae) H20-5 strain (Accession No.: KACC 81041BP); and
A method for increasing production of at least one of strawberries and cucumbers, comprising the step of treating the liquid agent on at least one of strawberries and cucumbers.
삭제delete
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