KR102247493B1 - 암 환자 하위집단을 위한 복합 용도 및 치료에서 펩티드 및 펩티드모방체 - Google Patents

암 환자 하위집단을 위한 복합 용도 및 치료에서 펩티드 및 펩티드모방체 Download PDF

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Abstract

본 발명은 양성 및 악성 종양 세포들과 연합된 장애들을 치료하는데 이용될 수 있는 펩티드 및 펩티드모방체가 포함된 화합물들을 제공한다. 본 발명은 임의의 특정 기전에 제한되지 않지만, 본 발명의 화합물들은 G2 세포 주기 체크포인트를 저해함으로써 최소한 부분적으로 기능을 하는 것으로 보인다. 따라서, 본 발명의 화합물들은 세포 성장만을 저해시키는데 이용될 수 있거나 또는 세포 성장을 저해시키기 위한 핵산 손상 치료와 복합되어 이용될 수 있다.

Description

암 환자 하위집단을 위한 복합 용도 및 치료에서 펩티드 및 펩티드모방체{ PEPTIDES AND PEPTIDOMIMETICS IN COMBINATION USES AND TREATMENTS FOR CANCER PATIENT SUBPOPULATIONS}
관련 출원들에 대한 교차-참조
본 출원은 2013년 6월 24일자로 제출된 미국 가출원 번호 61/838,777을 우선권으로 주장하며, 이의 전문이 본 명세서의 참고자료에 편입된다.
기술 분야
본 발명은 항-세포 증식성 활성을 보유하는 펩티드 및 펩티드모방체 만을 포함하는, 그리고 핵산 (가령, DNA)을 직접 또는 간접적으로 손상시키는 치료와 복합된 펩티드 및 펩티드모방체를 포함하는 화합물에 관계한다. 따라서, 본 발명 화합물들은 세포 증식을 억제하는데 유용하며, 이와 같이, 암을 포함하는 세포 증식성 장애들의 치료에 유용하다.
개요
세포 주기는 S 단계(phase) (DNA 복제), M 단계 (유사분열), 그리고 S와 M 단계 사이의 2개 틈새 단계(G1 및 G2 기)를 포함한다. 세포 주기에서 체크포인트는 정확한 진행을 보장하는, 이를 테면, DNA 통합성(integrity)의 상태, DNA 복제, 세포 크기, 그리고 주변 환경의 모니터다(Maller, J.L. Curr. Opin. Cell Biol., 3:26 (1991)). 다중-세포 유기체는 게놈의 통합성을 유지하는 것이 기본적으로 중요하고, 게놈의 상태를 모니터하는 다중 체크포인트가 있다. 이들 중에, DNA 복제 및 유사분열에 앞서 각각 존재하는 G1 및 G2 체크포인트가 있다. S 단계 진입에 앞서 DNA 손상을 교정하는 것이 중요한데, 그 이유는 손상된 DNA가 복제될 때 대개 돌연변이를 일으키기 때문이다(Hartwell, L. Cell, 71:543 (1992)). 상당한 DNA 손상의 복구 없이 G1과 G2 체크포인트를 통과한 진행은 자가사멸(apoptosis) 및/또는 파국(catastrophe)을 유도한다.
대부분의 암 세포들은 G1 체크포인트-관련된 단백질들, 이를 테면 p53, Rb, MDM-2, p16INK4 및 p19ARF에 비정상을 가지고 있다 (Levine, A.J. Cell, 88:323 (1997)). 대안으로, 돌연변이는 종양유전자 산물, 가령, Ras, MDM-2 및 씨클린 D의 과다-발현 및/또는 과다 활성화를 야기할 수 있고, 이는 G1 체크포인트의 엄중성(stringency)을 감소시킨다. 이들 돌연변이에 추가하여, 성장 인자들의 과다 발현에 의해 과도한 성장 인자 신호생성(signaling)이 야기될 수 있으며, G1 체크포인트의 엄중성이 감소될 수 있다. 기능 돌연변이의 상실 및 획득과 함께, 성장 인자 수용체들 또는 하류 신호-변환 분자들의 지속적 활성화는 G1 체크포인트의 중단으로 인하여 세포 형질변환을 야기할 수 있다. 실효된 G1 체크포인트는 더 높은 돌연변이 비율 및 암 세포에서 관찰되는 많은 돌연변이에 기여한다. 그 결과, 대부분 암 세포들은 과도한 DNA 손상에 대항하여 생존을 위하여 G2 체크포인트에 의존한다 (O'Connor and Fan, Prog. Cell Cycle Res., 2:165 (1996)).
DNA 손상 후 세포 주기 G2 정지를 촉진시키는 기전은 효모에서부터 인간에 이르는 종간에 보존된 것으로 보고 있다. 손상된 DNA 존재하에서, Cdc2/Cyclin B 키나제는 Cdc2 키나제에서 트레오닌-14 및 티로신-15 잔기의 저해성 인산화로 인하여 비활성인 상태로 유지되거나, 또는 Cyclin B의 단백질 수준이 감소된다. 유사분열의 개시때, 이중 인산분해효소 Cdc25는 이들 저해성 인산염을 제거하고, 이로 인하여 Cdc2/Cyclin B 키나제가 활성화된다. Cdc2/Cyclin B의 활성화는 M 단계의 개시와 대등하다.
분열 효모(fission yeast)에서 상기 단백질 키나제 Chk1은 손상된 DNA에 반응한 세포 주기 정지에 필요하다. Chk1 키나제는 하류의 몇 가지 rad 유전자 산물에 작용하며, DNA 손상 시 인산화에 의해 변형된다. 출아 효모(budding yeast)의 키나제 Rad53와 분열 효모의 Cds1은 복제안된 DNA로부터 신호를 전도하는 것으로 알려져 있다. Chk1 및 Cds1 모두의 제거로 손상된 DNA에 의해 유도된 G2 정지의 붕괴에 이르게 되기 때문에 Chk1과 Cds1 사이에 약간의 중복성이 있는 것으로 보인다. 흥미로운 것은, Chk1과 Cds1 둘다 Cdc25를 인산화시키고, Cdc25에 Rad24 결합을 촉진시키며, 이로 인하여 Cdc25는 세포질에 격리되며, Cdc2/Cyclin B 활성화가 저지된다. 따라서, Cdc25는 이들 키나제의 공통된 표적인 것으로 보이며, 이 분자가 G2 체크포인트에서 없어서는 안되는 인자임을 암시한다.
인간의 경우, 분열 효모 Chk1의 인간 상동체(homologue)인 hChk1과 발아 효모 Rad53와 분열 효모 Cds1의 인간 상동체 Chk2/HuCds1은 둘다 DNA 손상에 반응하여 주요한 조절 부위가 되는 세린-216에서 Cdc25C를 인산화시킨다. 이 인산화로 인하여 분열 효모 Rad24 및 Rad25의 인산 상동체들인 작은 산성 단백질들 14-3-3s에 대한 결합 부위가 만들어진다. 이러한 인산화의 조절 역할은 인간 세포들에서 Cdc25C 분열된 세포 주기 G2 정지에서 세린-216을 알라닌으로 치환시킴으로써 분명하게 나타났었다. 그러나, G2 체크포인트의 기전이 완전하게 이해되지는 않았다.
종양 미세환경은 암 세포 성장, 침입, 전이 그리고 항-종양 면역의 방해 또는 촉진에 또한 역할을 하며, 환자의 예후에 영향을 끼친다. 한때 암 세포들에 대항하는 작업을 하는 것으로 예상되었던 대식세포들은 종양 발달에 저해 및 촉진 역할을 모두 하는 것으로 드러났다. 고전적 항-종양 표현형을 가진 대식세포(M1로 지칭됨)는 전-염증성(pro-inflammatory)이며, 전-종양 및 항-염증성 유형들은 이 범주 안에 최소한 3가지 주요 아형(subtype)을 가진 M2로 지칭된다(Martinez and Gordon, F1000Prime Reports 6:13 (2014)).
호중구 세포외 트랩 (NETs)은 백혈구들과 함께 종양 미세환경의 또다른 요소를 나타낸다. NETs의 형성은 호중구가 침입 미생물에 대항하여 싸우는데 유용하지만, 심부정맥혈전증 (DVT)(Martinnod and Wanger, Blood (2013)) 및 암 환자에서 종양 세포 전이 (Cools-Lartigue, J., et al. J. Clin. Invest. (2013))의 원인이 될 수 있다 따라서, NETs는 환자 생존에 악영향을 줄 수 있다. DVT는 암 환자들에서 공통적이고 잠재적으로 치명적이며, 백혈구증가증 (높은 WBC로 이어지는)은 주요 위험 인자다(Pabinger, I., et al. Blood 122:12 (2013); Blix, K., et al. PLOS One 4:8 (2013); Wang, T.F., et al. Thromb. Res. 133(1):25 (2014)).
요약
본 발명에 따르면, 세포 증식을 저해하고, 자가사멸 또는 파국을 촉진시키고, 세포의 세포 주기 G2 체크포인트를 파기하고; 또는 이를 테면 세포 증식성 장애를 특징으로 하는 바람직하지 못한 세포 증식 또는 생존 치료를 위한 하나 또는 그 이상의 활성을 보유한 펩티드 화합물의 방법 및 용도가 제공된다. 예를 들면, 본 발명은 세포 증식을 저해하고; 세포의 세포 주기 G2 체크포인트를 파기하고; 핵산 손상 물질 또는 처리에 대한 세포의 민감성을 증가시키고; 세포에게 핵산 손상을 증가시키는 방법 및 용도를 제공한다.
한 구체예에서, 과다증식성 세포의 핵산 손상을 증가시키거나 또는 정상 범위 안에 있는 백혈구 세포 수를 보유한 포유류(가령, 인간)에서 세포 증식성 장애의 예방 또는 치료를 위한 방법 또는 용도는 펩티드 화합물 또는 이의 프로드럭 또는 이의 약제학적으로 수용가능한 염을 포유류에게 투여하는 것을 포함하며, 이때 상기 펩티드 화합물은 다음 서열들중 임의의 것을 포함한다: A) 구조 P1, P2, P3, P4, P5, P6 또는 P6, P5, P4, P3, P2, P1의 P1-P6으로 표시된 잔기가 포함된 펩티드, 이때 P1은 Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Phe-4CF3), 유사한 측쇄 공간을 차지하는 아미노산, 또는 측쇄에 하나 또는 두개의 방향족, 피페리딘, 피라진, 피리미딘, 피페라진, 몰포린 또는 피리미딘 기(들)을 가진 임의의 아미노산, 또는 한개의 인돌, 펜탈렌, 인덴, 나프탈렌, 벤조퓨란, 벤조티오펜, 퀴놀린, 인돌린, 크로만, 퀴노옥살린, 퀴나졸린 기를 가진 임의의 아미노산이며; 이때 P2는 Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Phe-4CF3), Bpa, Phe4NO2, 유사한 측쇄 공간을 차지하는 아미노산, 또는 측쇄에 하나 또는 두개의 방향족, 피페리딘, 피라진, 피리미딘, 피페라진, 몰포린 또는 피리미딘 기(들)을 가진 임의의 아미노산, 또는 한개의 인돌, 펜탈렌, 인덴, 나프탈렌, 벤조퓨란, 벤조티오펜, 퀴놀린, 인돌린, 크로만, 퀴노옥살린, 또는 퀴나졸린 기를 가진 임의의 아미노산이며; 이때 P3, P4, P5는 임의의 아미노산이거나, 또는 이때 각각의 P3, P4, P5가 아미노산일 때 P3, P4, P5중 하나 또는 그 이상은 P2와 P6 사이의 거리가 거의 동일한 간단한 탄소쇄이며; 이때 P6은 Bpa, Phe4NO2, 임의의 하나의 아미노산과 Tyr, 임의의 하나의 아미노산과 Phe, 임의의 아미노산이거나, 또는 아무것도 없거나; B) 또는 A)의 상기 펩티드, 이때 상기 간단한 탄소 탄소 쇄를 보유한 아미노산은 11-아미노운데카논산(aminoundecanoic acid), 10-아미노데카논산(aminodecanoic acid), 9-아미노노나논산(aminononanoic acid), 8-아미노카프릴산, 7-아미노헵타논산, 6-아미노카프론산, 또는 하나 또는 그 이상의 불포화 탄소 결합들을 가진 유사한 구조이거나, 및/또는 이때 상기 임의의 하나의 아미노산은 Ser이며, 및/또는 이때 P4는 Trp이며, 및/또는 이때 상기 유사한 측쇄 공간을 차지하는 아미노산은 Tyr 또는 Phe이며; 또는 다음의 임의의 구조를 가지며, P1-P12로 표시된 잔기를 포함하는 펩티드:
P1, P2, P3, P4, P5, P6 ; P6, P5, P4, P3, P2, P1; P1, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, P10, P11, P12; P1, P2, P3, P4, P5, P6, P12, P11, P10, P9, P8, P7; P6, P5, P4, P3, P2, P1, P7, P8, P9, P10, P11, P12; P6, P5, P4, P3, P2, P1, P12, P11, P10, P9, P8, P7; P7, P8, P9, P10, P11, P12, P1, P2, P3, P4, P5, P6; P7, P8, P9, P10, P11, P12, P6, P5, P4, P3, P2, P1; P12, P11, P10, P9, P8, P7, P1, P2, P3, P4, P5, P6; P12, P11, P10, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, P1; P12, P11, P6, P9, P8, P7, P2, P1; P12, P11, P10, P6, P9, P4, P7, P2, P1; P1, P2, P7, P8, P9, P6, P11, P12; 또는 P1, P2, P7, P4, P9, P6, P10, P11, P12; 이때 P1은 Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Phe-4CF3), Bpa, Phe4NO2, 유사한 측쇄 공간을 차지하는 아미노산 (가령 d-또는 l-Tyr, d-또는 l-Phe), 또는 측쇄에 하나 또는 두개의 방향족, 피페리딘, 피라진, 피리미딘, 피페라진, 몰포린 또는 피리미딘 기(들)을 가진 임의의 아미노산, 또는 하나의 인돌, 펜탈렌, 인덴, 나프탈렌, 벤조퓨란, 벤조티오펜, 퀴놀린, 인돌린, 크로만, 퀴노옥살린, 또는 퀴나졸린 기를 가진 아미노산이며; 이때 P2는 Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Phe-4CF3), 또는 유사한 측쇄 공간을 차지하는 아미노산, 또는 측쇄에 하나 또는 두개의 방향족, 피페리딘, 피라진, 피리미딘, 피페라진, 몰포린 또는 피리미딘 기(들)을 가진 임의의 아미노산, 또는 하나의 인돌, 펜탈렌, 인덴, 나프탈렌, 벤조퓨란, 벤조티오펜, 퀴놀린, 인돌린, 크로만, 퀴노옥살린, 퀴나졸린 기를 가진 아미노산이며; 이때 P3, P4, P5가 임의의 아미노산이거나, 또는 이때 각각의 P3, P4, P5가 아미노산일 때 P3, P4, P5중 하나 또는 그 이상은 P2와 P6 사이의 거리가 거의 동일한 간단한 탄소쇄이며; 이때 P6은 Bpa, Phe4NO2, 임의의 하나의 아미노산과 Tyr, 임의의 하나의 아미노산과 Phe이며; 그리고 이때 P7, P8, P9, P10, P11, P12중 최소한 3개는 염기성 아미노산이며, 나머지는 임의의 아미노산이거나 또는 없거나; 또는 C)의 상기 펩티드, 이때 간단한 탄소 쇄를 보유한 아미노산은 11-아미노운데카논산, 10-아미노데카논산, 9-아미노노나논산, 8-아미노카프릴산, 7-아미노헵타논산, 6-아미노카프론산, 또는 하나 또는 그 이상의 불포화 탄소 결합들을 가진 유사한 구조이며, 및/또는, 이때 상기 임의의 하나의 아미노산은 Ser이며, 및/또는, 이때 P4는 Trp,이며 및/또는, 이때 사한 측쇄 공간을 차지하는 아미노산은 Tyr 또는 Phe이며; 또는 다음의 임의의 구조를 가지며, P1-P12로 표시된 잔기를 포함하는 펩티드:
P1, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, P10, P11, P12; P12, P11, P10, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, P1; P12, P11, P10, P6, P9, P4, P7, P2, P1; 또는 P1, P2, P7, P4, P9, P6, P10, P11, P12; 이때 P1은 Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Phe-4CF3), Bpa, Phe4NO2, 유사한 측쇄 공간을 차지하는 아미노산, 또는 측쇄에 하나 또는 두개의 방향족, 피페리딘, 피라진, 피리미딘, 피페라진, 몰포린 또는 피리미딘 기(들)을 가진 임의의 아미노산, 또는 한개의 인돌, 펜탈렌, 인덴, 나프탈렌, 벤조퓨란, 벤조티오펜, 퀴놀린, 인돌린, 크로만, 퀴노옥살린, 퀴나졸린 기를 가진 임의의 아미노산이며; 이때 P2는 Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Phe-4CF3), 유사한 측쇄 공간을 차지하는 아미노산, 또는 측쇄에 하나 또는 두개의 방향족, 피페리딘, 피라진, 피리미딘, 피페라진, 몰포린 또는 피리미딘 기(들)을 가진 임의의 아미노산, 또는 한개의 인돌, 펜탈렌, 인덴, 나프탈렌, 벤조퓨란, 벤조티오펜, 퀴놀린, 인돌린, 크로만, 퀴노옥살린, 퀴나졸린 기를 가진 임의의 아미노산이며; 이때 P3, P4, P5는 임의의 아미노산이거나, 또는 이때 각각의 P3, P4, P5가 아미노산일 때 P3, P4, P5중 하나 또는 그 이상은 P2와 P6 사이의 거리가 거의 동일한 간단한 탄소쇄이며; 이때 P6은 Bpa, Phe4NO2, 임의의 하나의 아미노산과 Tyr, 임의의 하나의 아미노산과 Phe, 임의의 아미노산이거나, 또는 없거나; 그리고 이때 P7, P8, P9, P10, P11, P12중 최소한 3개는 염기성 아미노산이며, 나머지는 임의의 아미노산이거나 또는 없거나; 또는 E)의 펩티드, 이때 간단한 탄소 쇄를 보유한 아미노산은 아미노운데카논산 또는 8-아미노카프릴산이며, 및/또는, 이때 상기 임의의 하나의 아미노산은 Ser이며, 및/또는, 이때 유사한 측쇄 공간을 차지하는 아미노산은 Tyr 또는 Phe이며; 또는 다음의 임의의 구조를 가지며, P1-P12로 표시된 잔기를 포함하는 펩티드: P1, P2, P3, P4, P5, P6 또는 P6, P5, P4, P3, P2, P1, 이때 P1은 Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Phe-4CF3), Bpa, Phe4NO2, Tyr, 또는 Phe이며; 이때 P2는 Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Phe-4CF3), Bpa, Phe4NO2, Tyr, 또는 Phe이며; 이때 P3은 Ser, Arg, Cys, Pro, 또는 Asn이며; 이때 P4는 Trp이며; 이때 P5는 Ser, Arg, 또는 Asn이며; 또는 이때 P3, P4, P5는 단일 아미노운데카논산 또는 단일 8-아미노카프릴산이며; 그리고 이때 P6은 Bpa, Phe4NO2, (Ser-Tyr), 또는 (Ser-Phe)이며; 또는
다음의 임의의 구조를 가지며, P1-P12로 표시된 잔기를 포함하는 펩티드:
P1, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, P10, P11, P12; P1, P2, P3, P4, P5, P6, P12, P11, P10, P9, P8, P7; P6, P5, P4, P3, P2, P1, P7, P8, P9, P10, P11, P12; P6, P5, P4, P3, P2, P1, P12, P11, P10, P9, P8, P7; P7, P8, P9, P10, P11, P12, P1, P2, P3, P4, P5, P6; P7, P8, P9, P10, P11, P12, P6, P5, P4, P3, P2, P1; P12, P11, P10, P9, P8, P7, P1, P2, P3, P4, P5, P6; P12, P11, P10, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, P1; P12, P11, P6, P9, P8, P7, P2, P1; P12, P11, P10, P6, P9, P4, P7, P2, P1; P1, P2, P7, P8, P9, P6, P11, P12; 또는 P1, P2, P7, P4, P9, P6, P10, P11, P12; 이때 P1은 Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Phe-4CF3), Bpa, Phe4NO2, Tyr, 또는 Phe이며; 이때 P2는 Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Phe-4CF3), Bpa, Phe4NO2, Tyr, 또는 Phe이며; 이때 P3은 Ser, Arg, Cys, Pro, 또는 Asn이며; 이때 P4는 Trp이며; 이때 P5는 Ser, Arg, 또는 Asn이며; 또는 이때 P3, P4, P5는 단일 아미노운데카논산 또는 단일 8-아미노카프릴산이며; 이때 P6은 Bpa, Phe4NO2, (d-Ser-d-Tyr), 또는 (d-Ser-d-Phe)이며; 그리고 이때 P7, P8, P9, P10, P11, P12중 최소한 3개는 Arg 또는 Lys이며, 나머지는 임의의 아미노산이거나 또는 없거나; 또는
다음의 임의의 구조를 가지며, P1-P12로 표시된 잔기를 포함하는 펩티드:
P1, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, P10, P11, P12; P12, P11, P10, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, P1; P12, P11, P10, P6, P9, P4, P7, P2, P1; 또는 P1, P2, P7, P4, P9, P6, P10, P11, P12; 이때 P1은 Cha, 또는 Nal(2)이며; 이때 P2는 (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Phe-4CF3)이며; 이때 P3은 Ser이며; 이때 P4는 Trp이며; 이때 P5는 Ser 또는 Asn이며; 이때 P6은 Bpa, Phe4NO2, (Ser-Tyr), 또는 (Ser-Phe)이며; 그리고 이때 P7, P8, P9, P10, P11, P12중 최소한 3개는 Arg이며, 나머지는 임의의 아미노산이거나 또는 없거나; 또는 다음의 임의의 구조를 가지며, P1-P12로 표시된 잔기를 포함하는 펩티드: P1, P2, P3, P4, P5, P6 또는 P6, P5, P4, P3, P2, P1; 이때 P1은 Cha, 또는 Nal(2)이며; 이때 P2는 (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F) 또는 (Phe-4CF3)이며; 이때 P3은 Ser이며; 이때 P4는 Trp이며; 이때 P5는 Ser이며; 그리고 이때 P6은 Bpa, 또는 (Ser-Tyr)이며; 또는
다음의 임의의 구조를 가지며, P1-P12로 표시된 잔기를 포함하는 펩티드:
P1, P2, P3, P4, P5, P6; P6, P5, P4, P3, P2, P1; P1, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, P10, P11, P12; P1, P2, P3, P4, P5, P6, P12, P11, P10, P9, P8, P7; P6, P5, P4, P3, P2, P1, P7, P8, P9, P10, P11, P12; P6, P5, P4, P3, P2, P1, P12, P11, P10, P9, P8, P7; P7, P8, P9, P10, P11, P12, P1, P2, P3, P4, P5, P6; P7, P8, P9, P10, P11, P12, P6, P5, P4, P3, P2, P1; P12, P11, P10, P9, P8, P7, P1, P2, P3, P4, P5, P6; P12, P11, P10, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, P1; P12, P11, P6, P9, P8, P7, P2, P1; P12, P11, P10, P6, P9, P4, P7, P2, P1; P1, P2, P7, P8, P9, P6, P11, P12; 또는 P1, P2, P7, P4, P9, P6, P10, P11, P12; 이때 P1은 Cha, 또는 Nal(2)이며; 이때 P2는 (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F) 또는 (Phe-4CF3)이며; 이때 P3은 임의의 아미노산이며; 이때 P4는 d-또는 l-Trp이며; 이때 P5는 임의의 아미노산이며; 이때 P6은 Bpa 또는 (Ser-Tyr)이며; 이때 P7은 Arg이며; 이때 P8은 Arg이며; 이때 P9는 Arg이며; 이때 P10은 Gln 또는 Arg이며; 이때 P11은 Arg이며; 그리고 이때 P12는 d-또는 l-Arg이며, 또는
K)의 상기 펩티드, 이때 상기 임의의 아미노산은 Ser, 또는 Pro이며; 또는
다음의 임의의 구조를 가지며, P1-P12로 표시된 잔기를 포함하는 펩티드:
P1, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, P10, P11, P12; P12, P11, P10, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, P1; P12, P11, P10, P6, P9, P4, P7, P2, P1; 또는 P1, P2, P7, P4, P9, P6, P10, P11, P12; 이때 P1은 Cha 또는 Nal(2)이며; 이때 P2는 (Phe-2,3,4,5,6-F)이며; 이때 P3은 Ser이며; 이때 P4는 Trp이며; 이때 P5는 Ser이며; 이때 P6은 Bpa 또는 (Ser-Tyr)이며; 이때 P7은 Arg이며; 이때 P8은 Arg이며; 이때 P9는 Arg이며; 이때 P10은 Gln 또는 Arg이며; 이때 P11은 Arg이며; 그리고 이때 P12는 Arg이며; 또는
이로 인하여 과다증식성 세포의 핵산 손상을 증가시키고 또는 세포 증식성 장애가 예방 또는 치료된다.
특정 구체예에서, 방법 또는 용도는 다음의 서열중 임의의 것이 포함된 펩티드 화합물을 이용한다: (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln)(d-Arg) (d-Arg);
(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha);
(d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg);
(d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha);
(d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln)(d-Arg) (d-Arg);
(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa);
(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg);
(d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Bpa);
(d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Ser) (d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa);
(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Ser) (d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg);
(d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha);
(d-Bpa) (d-Ser) (d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg);
(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha);
(d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg)(d-Arg);
(d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha);
(d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg); (d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa) (d-Arg)(d-Trp)(d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha); (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Arg) (d-Trp)(d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg);
(d-Arg) (d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha); 또는 (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg).
추가 특정 구체예들에서, 방법 또는 용도는 다음의 서열중 임의의 것이 포함된 펩티드 화합물을 이용한다: : (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(서열 번호:1); (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg), 또는 (d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha).
추가적인 특정 구체예들에서, 방법 또는 용도는 백색 혈액 세포 수가 혈액 마이크로리터당 약 11,000개(wbc/μl) 미만의 백색 혈액 세포를 가진 포유류; 백색 혈액 세포 수가 혈액 마이크로리터당 약 4,000 내지 약 11,000의 백색 혈액 세포를 가진 포유류(wbc/μl); 백색 혈액 세포 수가 혈액 마이크로리터당 약 10,000개(wbc/μl) 미만의 백색 혈액 세포를 가진 포유류; 백색 혈액 세포 수가 혈액 마이크로리터당 약 9,000개(wbc/μl) 미만의 백색 혈액 세포를 가진 포유류; 백색 혈액 세포 수가 혈액 마이크로리터당 백색 혈액 세포 수가 약 4,000 내지 약 9,000개(wbc/μl)의 백색 혈액 세포를 가진 포유류; 백색 혈액 세포 수가 혈액 마이크로리터당 약 8,000개(wbc/μl) 미만의 백색 혈액 세포를 가진 포유류; 백색 혈액 세포 수가 혈액 마이크로리터당 백색 혈액 세포 수가 약 7,000개 (wbc/μl) 미만의 백색 혈액 세포를 가진 포유류; 또는 백색 혈액 세포 수가 혈액 마이크로리터당 백색 혈액 세포 수가 각 임상 실험실에서 제시한 정상 한계치 미만(wbc/μl)을 가진 포유류에서 실행된다.
방법 및 용도는 약학 제형 안에 펩티드 화합물을 포함한다. 본 발명의 방법 및 용도는 또한 임의의 경로에 의한 투여를 포함한다. 특정 구체예에서, 펩티드 화합물은 국소, 지역적으로 또는 전신으로 투여된다.
방법 및 용도는 펩티드 화합물의 약제학적으로 수용가능한 염을 포함한다. 특정 측면들에 있어서, 이의 약제학적으로 수용가능한 염은 다음중 임의의 하나 또는 이들의 조합이다: 아세테이트, 술포네이트, 황산염, 피로황산염, 중황산염, 아황산염, 중아황산염, 인산염, 일수소-인산염, 이수소인산염, 메타인산염, 피로인산염, 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포름산염, 이소부틸레이트, 카프로에이트, 헵타노에이트, 프로피오레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 숙시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말레이트, 부티네-1,4-디오에이트, 헥시네-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 염화벤조에이트, 메틸 벤조에이트, 디니트로벤조에이트, 히드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, , 크실렌술포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, γ-히드록시부티레이트, 글리콜레이트, 타르트레이트, 메탄-술포네이트, 프로판술포네이트, 나프탈렌-1-술포네이트, 나프탈렌-2-술포네이트, 그리고 만델레이트.
방법 및 용도는 6 내지 10개, 10 내지 15개, 15 내지 20개, 20 내지 25개, 25 내지 30개, 30 내지 40개, 40 내지 50개, 50 내지 75개, 75 내지 100개, 100 내지 150개, 150 내지 200개, 또는 200 내지 300개 길이의 아미노산 잔기를 포함하는 또는 구성된 펩티드 화합물을 포함한다.
방법 및 용도는 부착된 또는 접합된 세포 침투 분자가 포함된 또는 구성된 펩티드 화합물을 포함한다. 특정 비-제한적인 측면들에 있어서, 세포 침투 분자는 공유 결합, 또는 펩티드 또는 비-펩티드 링커에 의해 상기 펩티드 화합물에 연결된다. 추가 특정 비-제한적인 측면들에 있어서, 세포 침투 펩티드는 극성/하전된 아미노산과 비-극성, 소수성 아미노산의 교대 패턴을 포함한다. 여전히 추가 특정 비-제한적인 측면들에 있어서, 세포 침투 펩티드는 다중양이온 또는 양친매성 알파-나선 구조를 포함한다. 여전히 추가적인 특정 비-제한적인 측면들에 있어서, 세포 침투 펩티드는 폴리-아르기닌 (Arg) 서열 (가령, (d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)을 포함하는 또는 구성된 펩티드)을 포함한다.
여전히 특정 측면들에 있어서, 펩티드 화합물 및/또는 세포 침투 펩티드는 L-또는 D-이성체 아미노산, 또는 L-및 D-이성체 아미노산의 혼합물을 포함하거나 또는 구성된다.
추가적인 특정 구체예들에서, 방법 또는 용도는 핵산 손상 물질의 투여, 핵산 손상 치료, 항-증식성 물질, 또는 항-증식성 치료를 더 포함한다. 비-제한적인 핵산 손상 물질, 핵산 손상 치료, 항-증식성 물질, 또는 항-증식성 치료는 외과적 절제술, 방사선치료, 이온화 또는 화학적 방사선 치료요법, 화학요법, 면역요법, 국소 또는 지역적 열 (고열) 요법, 예방접종, 알킬화 물질, 항-대사산물, 식물 추출물, 식물 알칼로이드, 니트로소우레아, 호르몬, 또는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 유사체를 포함하거나 또는 구성된다.
추가적인 특정 구체예들에서, 방법 또는 용도는 핵산 손상 물질, 핵산 손상 치료, 항-증식성 물질, 또는 항-증식성 치료가 투여되기 전, 이들과 함께, 또는 이들이 투여된 후, 투여되는 펩티드 화합물을 포함하거나 또는 구성된다. 특정 측면들에 있어서, 펩티드 화합물은 핵산 손상 물질, 핵산 손상 치료, 항-증식성 물질, 또는 항-증식성 치료가 투여되기 전후 48시간 미만 시점에 투여되며; 펩티드 화합물은 핵산 손상 물질, 핵산 손상 치료, 항-증식성 물질, 또는 항-증식성 치료가 투여되기 전후 24시간 미만 시점에 투여되며; 펩티드 화합물은 핵산 손상 물질, 핵산 손상 치료, 항-증식성 물질, 또는 항-증식성 치료가 투여되기 전후 12시간 미만 시점에 투여되며; 펩티드 화합물은 핵산 손상 물질, 핵산 손상 치료, 항-증식성 물질, 또는 항-증식성 치료가 투여되기 전후 6시간 미만 시점에 투여되며; 상기 펩티드 화합물은 핵산 손상 물질, 핵산 손상 치료, 항-증식성 물질, 또는 항-증식성 치료가 투여되기 전후 4시간 미만 시점에 투여되며; 펩티드 화합물은 핵산 손상 물질, 핵산 손상 치료, 항-증식성 물질, 또는 항-증식성 치료가 투여되기 전후 2시간 미만 시점에 투여되며; 펩티드 화합물은 핵산 손상 물질, 핵산 손상 치료, 항-증식성 물질, 또는 항-증식성 치료가 투여되기 전후 1시간 미만 시점에 투여된다.
핵산 손상 물질 또는 항-증식성 물질의 비-제한적인 예로는 약물을 포함한다. 핵산 손상 물질 또는 항-증식성 물질의 비-제한적 예로는 백금 함유 약물, 이를 테면 시스-플라틴, 카르보플라틴, 네다플라틴, 미타플라틴, 사트라플라틴, 피코플라틴, 트리플라틴, 미리플라틴, 또는 옥살리플라틴을 포함한다.
더욱 구체적으로, 방법 및 용도는 백금 함유 약물, 시스-플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 페메트렉세드, 겜시타빈, 5-플루오르우라실 (5-FU), 레베카마이신, 아드리아마이신 (ADR), 블레오마이신 (Bleo), 페플레오마이신, 시스플라틴, 시스플라티늄, 또는 시스-디아민디클로로플라티늄(II) (CDDP), 옥살리플라틴, 또는 캄포테신 (CPT), 사이클로포스파미드, 아자티오프린, 시클로스포린 A, 프레디니졸론, 멜파란, 클로람부칠, 메클로에타민, 부술판, 메토트렉세이트, 6-멀캅토퓨린, 티오구아닌, 5-플로오르우라실, 시토신 아라비노시드, AZT, 5-아자시티딘 (5-AZC) 또는 5-아자시티딘 관련된 화합물, 악티노마이신 D, 미트라마이신, 미토마이신 C, 카르무스틴, 로무스틴, 세무스틴, 스트렙토조토신, 히드록시우레아, 시스플라틴, 미토탄, 프로카르바진, 다카르바진, 탁산, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 독소루비친, 디브로모만니톨, 방사선 또는 방사선동위원소의 투여를 포함하거나 또는 구성된다. 방사선의 특정 비-제한적 예로는 UV방사선, IR 방사선, X레이, 또는 알파-, 베타-또는 감마-방사선을 포함한다. 방사선동위원소의 비-제한적 예로는 I131, I125, Sr89, Sm153, Y90, 또는 Lu177을 포함한다.
본 발명의 방법 및 용도는 세포 증식성 또는 과다증식성 장애 또는 바람직하지 못한 세포 증식에 적용가능하다. 특정 구체예에서, 세포 증식성 장애는 종양 또는 암을 포함한다. 더욱 특정 구체예들에서, 세포 증식성 장애는 전이성 종양 또는 암을 포함한다.
종양 또는 암의 특정 비-제한적인 예로는 폐 종양 또는 암, 이를 테면 소세포(small cell) 또는 비-소세포 폐 암, 또는 선암종, 편평 세포 암종 또는 거대 세포 암종을 포함한다. 종양 또는 암의 추가 특정 비-제한적 예로는 암종, 육종, 림프종, 백혈병, 선종, 선암종, 흑색종, 교종, 교아세포종, 수막종, 신경모세포종, 망막모세포종, 별아교세포종, 핍돌기교세포종, 중피종, 망상내피, 림프관 또는 조혈 신생물, 종양, 암 또는 악성을 포함한다. 종양 또는 암의 추가적인 특정 비-제한적인 예로는 폐, 갑상선, 두경부, 비인두, 인두, 코 또는 부비강, 뇌, 척추, 유방, 부신, 뇌하수체, 갑상선, 림프, 위장관 (입, 식도, 위, 십이지장, 회장, 공장 (소장), 결장, 직장), 비뇨생식관 (자궁, 난소, 자궁목, 자궁내막, 방광, 고환, 음경, 전립선), 신장, 췌장, 간, 뼈, 골수, 림프, 혈액, 근육, 또는 피부 신생물, 종양, 또는 암이다. 종양 또는 암의 여전히 비-제한적인 예로는 유방 암, 전립선 암, 췌장 암, 위암, 늑막 중피종, 결장 암, 직장 암, 대장 암, 소장 암, 식도 암, 십이지장 암, 설암, 인두 암, 침샘 암, 뇌 종양, 신경초종, 간 암, 신장 암, 담관 암, 자궁내막 암, 자궁경부 암, 자궁체(uterine body) 암, 난소 암, 방광 암, 요도 암, 피부 암, 혈관종, 악성 림프종, 악성 흑색종, 갑상선 암, 부갑상선 암, 비(nasal) 암, 부비(paranasal)암, 청각기관 암, 입안바닥(oral floor)의 암종, 후두암, 귀밑샘 암, 아래턱밑 암, 뼈 종양, 혈관섬유종, 신장 육종, 음경 암, 고환 종양, 소아 고형암, 카포시(Kaposi's) 육종, 상악동의 종양, 섬유조직구종, 평활근육종, 횡문근육종, 림프종, 다발 골수종 또는 백혈병을 포함한다.
육종의 특정 비-제한적인 예로는 림프육종, 지방육종, 골육종, 연골육종, 평활근육종, 횡문근육종 또는 섬유육종을 포함한다. 조혈 종양, 암 또는 악성의 특정 비-제한적인 예로는 골수종, 림프종 또는 백혈병을 포함한다.
발명의 방법 및 용도는 상기 종양 또는 암을 치료하는데 효과적인 펩티드 화합물의 양을 투여하는 것을 포함한다. 특정 측면들에 있어서, 방법 또는 용도는 종양 또는 암의 재발, 성장, 진행, 악화 또는 전이를 저해 또는 감소시켜, 신형성, 종양, 암 또는 악성 세포 덩어리, 세포들의 용적, 크기 또는 수의 부분적 또는 완전한 파괴를 초래하고, 신형성, 종양, 암 또는 악성 세포 괴사, 용해 또는 자가사멸을 촉진, 유도 또는 증가시키고, 신생물, 종양, 암 또는 악성 용적 크기, 세포 덩어리를 줄이고, 신생물, 종양, 암 또는 악성 용적, 덩어리, 크기 또는 세포 수의 진행 또는 증가를 저해 또는 방지하고, 또는 수명을 연장시키는 결과를 초래하며; 신생물, 종양, 암 또는 악성과 연합된 또는 이로 인하여 야기된 불리한 증상 또는 합병증의 심각성, 기간 또는 빈도를 감소 또는 줄이게 되며; 또는 통증, 불편함, 매스꺼움, 허약 또는 기면을 줄이거나 또는 감소시키게 되며, 또는 에너지, 식욕의 증가, 개선된 운동성 또는 정신적 행복이 증가되게 된다.
더욱이, 핵산 손상 치료 (가령, 핵산 손상 물질), 또는 항-증식성 물질과 임의선택적으로 복합된, 펩티드 화합물이 포함된 키트가 제공된다. 한 구체예에서, 키트는 펩티드 화합물과 본 발명의 방법의 실행을 위한 지침 (가령, 정상 범위의 백색 혈액 세포 수를 가진 포유류, 가령 혈액 마이크로리터당 약 11,000개(wbc/μl) 미만의 백색 혈액 세포를 가진 포유류; 혈액 마이크로리터당 약 4,000 내지 약 11,000개(wbc/μl)의 백색 혈액 세포를 가진 포유류; 혈액 마이크로리터당 약 10,000개(wbc/μl) 미만의 백색 혈액 세포를 가진 포유류; 혈액 마이크로리터당 약 9,000개(wbc/μl) 미만의 백색 혈액 세포를 가진 포유류; 혈액 마이크로리터당 약 4,000 내지 약 9,000개(wbc/μl)의 백색 혈액 세포를 가진 포유류; 혈액 마이크로리터당 약 8,000개(wbc/μl) 미만의 백색 혈액 세포를 가진 포유류; 혈액 마이크로리터당 약 7,000개(wbc/μl) 미만의 백색 혈액 세포를 가진 포유류; 또는 각 임상 실험에서 혈액 마이크로리터당 백색 혈액 세포의 정상적인 한계 미만의 백색 혈액 세포 수(wbc/μl)를 가진 포유류에게 투여)을 포함한다.
도 1은 블레오마이신 처리된 Jurkat 세포들에 대하여 이용될 경우 각 화합물들의 약량 반응 곡선을 나타낸다. X-축은 투여 분량을 그리고 Y-축은 치료 후 G2/M 세포 %을 나타낸다.
도 2는 콜히친 처리된 Jurkat 세포들에 대하여 이용될 경우 각 화합물들의 약량 반응 곡선을 나타낸다. X-축은 투여 분량을 그리고 Y-축은 치료 후 G2/M 세포 %을 나타낸다.
도 3a 및 3b는 (a) 블레오마이신 (Bleo) 또는 (b) 아드리아마이신 (ADR)로 처리된 인간 췌장 암 유도된 세포계통 MIAPaCa2를 다양한 투여 분량의 화합물들로 처리한 것이다. 회수된 세포들은 이들의 DNA에 대하여 착색되었고, 유동 세포측정에 의해 분석되었다. 하위-G1 세포 집단 %은 사멸 세포들로 나타낸다.
도 4a 내지 4c는 G2 체크포인트 실효물질 (l-Gly)(l-Arg)(l-Lys)(l-Lys)(l-Arg)(l-Arg)(l-Gln) (l-Arg) (l-Arg)(l-Cha)(l-Phe-2,3,4,5,6-F)(l-Arg)(l-Ser)(l-Pro)(l-Ser)(l-Tyr)(l-Tyr) (서열 번호:78)의 구조 활성 상관관계의 도식이다: (a) 블레오마이신 처리된 Jurkat 세포에서 l-Cha에 대한 아미노산 치환의 G2 체크포인트 실효 활성을 순서내로 나타낸다, [l-Cha=l-Nal(2)] > [l-Ala(3-Bzt)=l-Nal(1)=l-Trp=l-Dph] > [l-Ala(tBu)=Cys(tBu)=Leu]; (b) M 단계 체크포인트 실효 활성 및/또는 콜히친 처리된 Jurkat 세포들에서 l-Cha에 대한 아미노산 치환의 비 특이적 독성을 순서대로 나타낸다, [Ala(3-Bzt)=l-Nal(1)=l-Dph] > [l-Cha=l-Nal(2)]; (c) l-Phe-2,3,4,5,6-F에 대한 아미노산 치환의 G2 체크포인트 실효 활성을 순서대로 나타낸다, l-(Phe-2,3,4,5,6-F)=l-(Phe-3,4,5-F)=l-(Phe-4CF3)] > [l-(Phe-3Br,4Cl,5Br) =l-(Phe-4Cl)=l-Tyr].
도 5는 아르기닌이 많은 다양한 서열의 G2 실효 활성을 보여준다. 표시된 펩티드가 블레오마이신으로 처리된 또는 처리안된 Jurkat 세포에 추가되었다. Y-축에는 G2/M 세포 %을 나타낸다. X-축은 다음과 같다: 1, 블레오마이신 단독; 2, 0.2μg/ml; 3, 0.39μg/ml; 4, 0.78μg/ml; 5, 1.56μg/ml; 6, 3.125μg/ml; 7, 6.25μg/ml; 8, 12.5μg/ml; 9, 25μg/ml; 그리고 10, 50μg/ml. 펩티드 서열은 다음과 같다: rrrqrrkkr, (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg) (d-Arg)(d-Gln) (d-Arg) (d-Arg)(d-Lys)(d-Lys)(d-Arg) (서열 번호:79); CBP501, (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln) (d-Arg) (d-Arg)(서열 번호:80); TAT 없음, (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha) (서열 번호:81); rqrr, (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg)(d-Gln)(d-Arg) (d-Arg)(서열 번호:82); rrqrr, (d-Bpa)(d-Ser) (d-Trp) (d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln) (d-Arg)(d-Arg)(서열 번호:83); rrrq, (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(서열 번호:84); 그리고 rrrqr, (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln) (d-Arg)(서열 번호:85).
도 6은 (d-Bpa) 없는 다양한 펩티드의 G2 실효 활성을 보여준다. 표시된 펩티드가 블레오마이신으로 처리된 또는 처리안된 Jurkat 세포에 추가되었다. Y-축에는 G2/M 세포 %을 나타낸다. X-축은 다음과 같다: 1, 블레오마이신 단독; 2, 0.2μg/ml; 3, 0.39μg/ml; 4, 0.78μg/ml; 5, 1.56μg/ml; 6, 3.125μg/ml; 7, 6.25μg/ml; 8, 12.5μg/ml; 9, 25μg/ml; 그리고 10, 50μg/ml. 펩티드 서열은 다음과 같다: CBP0, (d-Arg)(d-Arg) (d-Arg)(d-Gln)(d-Arg) (d-Arg)(서열 번호:86); CBP451, (d-Tyr)(d-Ser)(d-Pro) (l-Trp)(l-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln) (d-Arg) (d-Arg)(서열 번호:87); CBP452, (d-Tyr)(d-Ser)(l-Pro)(l-Trp)(l-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha)(d-Arg)(d-Arg) (d-Arg)(d-Gln) (d-Arg) (d-Arg)(서열 번호:88); 그리고 CBP501, (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln) (d-Arg)(d-Arg) (서열 번호:80).
도 7은 아르기닌이 많은 다양한 펩티드 서열과 리신이 많은 다양한 서열의 G2 실효 활성을 보여준다. 표시된 펩티드는 상기와 같이 Jurkat 세포에 추가되었고, G2/M 세포 %이 산출되었다 (Y-축). 펩티드 서열은 다음과 같다: CBP603, (d-Bpa)(d-Ser) (d-Trp) (d-Ser)(d-Phe4NO2)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln) (d-Arg) (d-Arg)(서열 번호:89); CBP607, (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg)(서열 번호:90); CBP608, (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d -Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg)(서열 번호91:); 그리고 CBP609, (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp) (d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d -Cha) (d-Lys) (d-Lys) (d-Lys) (d-Lys) (d-Lys) (d-Lys) (서열 번호:92).
도 8은 상기 서열의 아르기닌 많은 부분의 위치가 변화될 수 있음을 보여준다. 표시된 펩티드는 상기와 같이 Jurkat 세포에 추가되었고, G2/M 세포 %이 산출되었다 (Y-축). 펩티드 서열은 다음과 같다: CBP501, (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (서열 번호:80); CBP510, (d-Arg)(d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg)(d-Arg) (d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Ser)(d-Trp) (d-Ser) (d-Bpa) (서열 번호:93); CBP511, (d-Arg)(d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg)(d-Arg) (d-Bpa)(d-Ser) (d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (서열 번호:94); 그리고 CBP512, (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Bpa) (서열 번호:95).
도 9는 몇 가지 연구된 치환된 펩티드 서열들의 구조를 보여준다. G2 실효 활성은 옅게 음영된 치환 (*)에 의해 증가되었으며, M 단계 체크포인트 실효 활성 및/또는 비특이적 독성은 짙게 음영된 치환 (**)에 의해 증가되었으며, 나머지 치환의 경우는 거의 동일하게 유지되었다.
도 10은 CBP501 및 시스플라틴으로 치료후 복합면역부전(scid) 마우스에서 종양 성장 (인간 췌장암종)의 저해를 나타낸다. 0일차는 치료 시작을 나타낸다. 각 치료 집단에서 표준 편차와 함께 평균 종양 크기는 Y-축에 나타내며, 치료 개시 후 일수는 X-축에 나타낸다.
도 11은 상기와 같이, 키나제 저해 서열과 HIV-TAT 형질도입 서열에 근거한 서열 영역을 가진 펩티드의 G2 실효 활성을 보여준다. Y-축에는 G2/M 세포 %을 나타낸다. X-축은 다음과 같다: 1, 블레오마이신 단독; 2, 0.2μg/ml; 3, 0.39μg/ml; 4, 0.78μg/ml; 5, 1.56μg/ml; 6, 3.125μg/ml; 7, 6.25μg/ml; 8, 12.5μg/ml; 9, 25μg/ml; 그리고 10, 50μg/ml. 펩티드 서열은 다음과 같다: CBP501, (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (서열 번호:80); CBP700, (d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha) (서열 번호:96); CBP701, (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (서열 번호:97); CBP702, (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (서열 번호:98); CBP703, (d-Arg) (d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (서열 번호:99).
도 12는 G2 실효 분석에 대하여 블레오마이신으로 처리된 펩티드의 G2 실효 활성 및 M 실효 활성 및/또는 비특이적 독성과 콜리친으로 처리된 펩티드의 M 실효 활성 및/또는 비특이적 독성에 한 비교를 나타낸다. 표시된 펩티드가 블레오마이신 또는 콜히친 처리된 Jurkat 세포에 추가되었다. Y-축에는 G2/M 세포 %을 나타낸다. X-축은 다음과 같다: 1, 블레오마이신 또는 콜히친 단독; 2, 0.2μg/ml; 3, 0.39μg/ml; 4, 0.78μg/ml; 5, 1.56μg/ml; 6, 3.125μg/ml; 7, 6.25μg/ml; 8, 12.5μg/ml; 9, 25μg/ml; 그리고 10, 50μg/ml. 펩티드 서열은 다음과 같다: CBP501, (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln) (d-Arg) (d-Arg).
도 13은 CBP501, (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln) (d-Arg) (d-Arg)의 분자 구조를 나타낸다.
도 14는 기선 WBC와 비교하여 모든 처리된 환자에서 전반적인 생존에 대한 Kaplan-Meyer 분석을 나타낸다: 모든 처리된 환자들에서 기선 WBC와 비교하여 Kaplan-Meyer 생존 곡선, 정중(Median) OS 및 위해율(Hazard Ratio). 상기 위해율은 컷 오프 수준이 감소될 때 개선되며, 컷오프 수준으로 WBC 8000/μl에서 정점이다.
도 15는 기선 WBC와 비교하여 ICON 등록된 환자에서 전반적인 생존에 대한 Kaplan-Meyer 분석을 나타낸다: ICON 등록된 환자들에서 Kaplan-Meyer 생존 곡선, 정중 OS 및 위해율. 상기 위해율은 컷 오프 수준이 감소될 때 개선되며, 컷오프 수준으로 WBC 8000/μl에서 정점이며, A 부분과 B 부분 간의 차이는 정점에서 통계학적으로 유의적이었다.
도 16은 부분(arm)으로 표시된 모든 처리 집단의 선별에서 WBC, >8000 또는 <8000에 대한 Log-rank(Mantel-Cox) 테스트에 의한 Kaplan-Meyer 생존 곡선, 정중 OS, 환자 수, 위해율 및 p 값을 나타낸다.
도 17은 CBP501 치료로 활성화된 호중구에 의해 증가된 NET 형성을 나타낸다.
도 18은 생체내에서 CBP501에 의한 트롬빈/항-트롬빈 복합체의 증가를 나타낸다.
도 19는 시험관내에서 CBP501은 M1 및 M2 대식세포 모두의 식작용이 저해되었음을 나타낸다.
도 20은 마우스 대식세포 세포 계통 (RAW264.7)으로부터 TNF 방출 억제를 나타낸다.
본 발명은 세포 증식을 저해시키는 펩티드 및 펩티드모방체가 포함된 화합물들을 제공한다. 따라서, 본 발명 화합물들은 바람직하지 못한 또는 원하지 않는 세포 증식, 이를 테면 양성 및 악성 종양 세포들을 특징으로 하는 세포 증식성 장애들 또는 생리학적 상태의 치료에 유용하다. 세포증식을 저해시키는 본 발명의 펩티드 및 펩티드모방체의 능력은 최소한 부분적으로 세포 주기 G2 체크포인트의 실효에 의한 것으로 보인다. DNA 복제 및 세포 분할이 일어나기 전 세포가 손상을 복구할 수 있도록 허용하기 위하여 핵산 손상에 대한 반응으로 G2 체크포인트를 저해시킴으로써, 세포 주기 G2 체크포인트에 세포들이 진입되도록 유도될 수 있기 때문에, 본 발명의 펩티드 및 펩티드모방체는 핵산 손상 물질 및 치료 프로토콜에 세포를 민감하게 한다. 충분한 핵산 손상이 누적된 세포들은 G2 체크포인트가 분열되었기 때문에 손상된 핵산의 복구를 완료할 수 없을 것이다. 이러한 세포들은 감소된 증식 (가령, 복구되지 않은 생존에 중요한 유전자의 돌연변이로 인하여)을 나타내고, 결국 자가사멸을 겪는다.
정상적인 G1을 보유한 세포들은 G1 동안 핵산 복구가 또한 일어날 수 있기 때문에 누적된 손상된 핵산에 덜 민감하다. 따라서, 정상 세포들은 본 발명 화합물들의 효과에 덜 민감하다. 그러나, 손상된 또는 분열된 세포 주기 G1 체크포인트를 보유한 세포는 손상된 또는 분열된 G1 체크포인트로 인하여 상기 세포들이 손상된 핵산을 완벽하게 복구할 수 있는 가능성을 적게 만들기 때문에 손생된 핵산의 축적이 더 많을 것이다. 따라서, G2 체크포인트를 분열시키는 본 발명의 펩티드 또는 펩티드모방체로 G1 손상된 또는 분열된 세포를 처리하면 이들 세포들은 상기 손상된 핵산의 복구를 완료할 수 있는 능력이 더 적도록 만들것이다. 따라서, G1 손상된 또는 분열된 세포들은 이러한 본 발명의 펩티드 및 펩티드모방체에 특별히 민감하다. 따라서, 펩티드 및 펩티드모방체가 포함된 본 발명의 화합물들은 일반적으로 세포 증식을 저해 또는 저지시키는데 이용될 수 있고, 구체적으로 손상된 또는 분열된 G1 체크포인트를 보유한 세포의 증식을 저해시키는데 이용될 수 있다.
손상된 또는 분열된 G1 세포 주기 체크포인트를 보유한 세포들은 신속하게 증식하는 세포들이 포함되나, 이에 국한되지 않는다. 빠르게 성장하는 세포들, 바람직하지 못하게 성장하는 세포들 또는 자가사멸을 겪는 대신 생존하는 세포들을 특징으로 하는 세포 증식성 장애 및 생리학적 상태는 흔히 손상된 또는 분열된 G1 세포 주기 체크포인트를 갖는다. 따라서, 증식을 억제하거나 또는 자가사멸을 촉진시키는 본 발명의 펩티드 및 펩티드모방체의 능력은 최소한 부분적으로 G2 세포 주기 체크포인트의 분열로 인한 것으로 보이기 때문에, 손상된 또는 분열된 G1 체크포인트로 인하여 신속한 또는 바람직하지 못하게 증식되는 세포들이 특별히 매력적인 표적이 된다.
CBP501은 세포 주기 G2 체크포인트를 저해시키는 펩티드 TAT-S216A이다 (Suganuma, M., et al. Cancer Res. 59:5887 (1999)). 세포 주기 표현형-기반 선별 방법을 이용하여 정상 세포들의 세포 주기 표현형에 영향을 주지 않으면서 DNA 손상 물질에 반응하여 세포 주기 G2에서 암 세포의 축적을 감소시키도록 TAT-S216A를 최적화시켰다 (Sha, S., et al. Mol. Cancer Ther. 6:147 (2007)). CBP501은 CBP501-민감 종양 세포들에서 백금 농도 및 백금-DNA 부가물 형성을 증가시키는 것으로 밝혀졌으며, 그리고 대안으로, 또는 G2 체크포인트 저해/분열에 추가하여 칼모둘린 저해를 통하여 작용할 수 있다(Mine, N., et al. Mol. Cancer Ther. 10:1929 (2011)).
본 발명의 펩티드 및 펩티드모방체가 포함된 화합물들은 핵산을 손상시키는 또는 항-증식성 활성을 보유한 핵산의 추가 치료 없이 자체에 의해 세포 증식을 억제시킬 수 있는데, 그 이유는 G2 체크포인트의 분열은 세포가 분할될 때 핵산 손상 축적으로 이어질 가능성이 있기 때문이다. 따라서, 비정상적으로 또는 바람직하지 못하게 증식하는 또는 생존하는 세포들의 증식을 저해 또는 저지시키거나 또는 세포 자가사멸/파국을 촉진시키기 위하여, 본 발명의 화합물 단독으로 또는 핵산 손상 치료 (가령, 화학 물질 또는 치료 프로토콜)와 복합하여 처리될 수 있다.
세포들이 정상 또는 비정상 (가령, 암 세포)인지에 상관없이, 신속하게 증식하는 세포들을 표적으로 하는 통상의 항-세포 증식 물질과 달리, 본 발명의 화합물들은 손상된 또는 분열된 세포 주기 G1 체크포인트를 갖는 세포를 선호적으로 표적으로 삼는다. 예를 들면, CBP501은 시스플라틴과 달리 HUVEC 세포들의 성장에 영향을 주지 않는다 (가령, 표 3 참고). CBP501은 또한 콜히친에 의해 유도된 M 단계 세포 주기 정지 및/또는 비특이적 독성에 영향을 주지 않는다(가령, 도 12 참고). 결과적으로, 본 발명의 화합물들은 통상의 항-세포 증식성 치료 물질들과 연합된 과도한 바람직하지 못한 부작용, 이를 테면 골수 억제, 매스꺼움, 식욕 상실, 설사, 및 탈모를 일으킬 가능성은 적다. 또한, 대부분의 암 세포들은 손상된 또는 분열된 세포 주기 G1 체크포인트를 갖고 있기 때문에, 암 세포들은 세포 주기 G2 체크포인트를 실효시키는 본 발명의 화합물들에 대하여 증가된 민감성을 나타낼 것이다. 정상 세포들이 덜 민감하다는 의미는 본 발명의 펩티드 및 펩티드모방체가 포함된 화합물들이 더 많은 양으로 이용될 수 있다는 것을 의미한다.
본 발명에 따르면, 항-세포 증식성 활성을 보유하는 및/또는 G2 세포 주기 체크포인트를 실효시키는 펩티드 및 펩티드모방체가 포함된 화합물들이 제공된다. 상기 펩티드 또는 펩티드모방체는 세포의 증식을 저해시키는 또는 세포의 자가사멸을 촉진시키는 서열을 포함한다. 상기 펩티드 또는 펩티드모방체는 세포 주기 G2 체크포인트를 실효시키는 서열을 또한 포함한다. 한 구체예에서, 연속 펩티드 또는 펩티도모방체 서열은 다음 구조를 포함한다: P1, P2, P3, P4, P5, P6 (서열 번호:1) 또는 P6, P5, P4, P3, P2, P1 (서열 번호:2); 이때 P1은 d-또는 l-Cha, d-또는 l-Nal(2), d-또는 l-(Phe-2,3,4,5,6-F), d-또는 l-(Phe-3,4,5F), d-또는 l-(Phe-4CF3), 유사한 측쇄 공간을 차지하는 아미노산 (가령, d-또는 l-Tyr, d-또는 l-Phe), 또는 측쇄에 하나 또는 두개의 방향족, 피페리딘, 피라진, 피리미딘, 피페라진, 몰포린 또는 피리미딘 기(들)을 가진 임의의 아미노산, 또는 하나의 인돌, 펜탈렌, 인덴, 나프탈렌기, 벤조퓨란, 벤조티오펜, 퀴놀린, 인돌린, 크로만, 퀴노옥살린, 퀴나졸린 기를 가진 아미노산이며; P2는 d-또는 l-Cha, d-또는 l-Nal(2), d-또는 l-(Phe-2,3,4,5,6-F), d-또는 l-(Phe-3,4,5F), d-또는 l-(Phe-4CF3), d-또는 l-Bpa, d-또는 l-Phe4NO2, 유사한 측쇄 공간을 차지하는 아미노산 (가령 d-또는 l-Tyr, d-또는 l-Phe), 또는 측쇄에 하나 또는 두개의 방향족, 피페리딘, 피라진, 피리미딘, 피페라진, 몰포린 또는 피리미딘 기(들)을 가진 임의의 아미노산, 또는 한개의 인돌, 펜탈렌, 인덴, 나프탈렌, 벤조퓨란, 벤조티오펜, 퀴놀린, 인돌린, 크로만, 퀴노옥살린, 퀴나졸린 기를 가진 임의의 아미노산이며; P3, P4, P5는 임의의 아미노산이거나 또는 각각의 P3, P4, P5가 아미노산일 때 P3, P4, P5중 하나 또는 그 이상은 P2와 P6 사이의 거리가 거의 동일한 간단한 탄소쇄이며 (d-또는 l-Trp는 P4의 예가 되며; P6은 d-또는 l-Bpa, d-또는 l-Phe4NO2, 임의의 아미노산이며, 그리고 d-또는 l-Tyr (가령, d-Ser-d-Tyr), 임의의 아미노산과 d-또는 l-Phe (가령, d-Ser-d-Phe), 임의의 아미노산이거나, 또는 없다. 다양한 측면에 있어서, 간단한 탄소 쇄를 보유한 아미노산은 d-또는 l-11-아미노운데카논산, d-또는 l-10-아미노데카논산, d-또는 l-9-아미노노나논산, d-또는 l-8-아미노카프릴산, d-또는 l-7-아미노헵타논산, d-또는 l-6-아미노카프론산, 또는 하나 또는 그 이상의 불포화 탄소 결합들을 가진 유사한 구조다.
또다른 구체예에서, 연속 펩티드 또는 펩티도모방체 서열은 다음의 구조를 포함한다: P1, P2, P3, P4, P5, P6 (서열 번호:3); P6, P5, P4, P3, P2, P1 (서열 번호:4); P1, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, P10, P11, P12 (서열 번호:5); P1, P2, P3, P4, P5, P6, P12, P11, P10, P9, P8, P7 (서열 번호:6); P6, P5, P4, P3, P2, P1, P7, P8, P9, P10, P11, P12 (서열 번호:7); P6, P5, P4, P3, P2, P1, P12, P11, P10, P9, P8, P7 (서열 번호:8); P7, P8, P9, P10, P11, P12, P1, P2, P3, P4, P5, P6 (서열 번호:9); P7, P8, P9, P10, P11, P12, P6, P5, P4, P3, P2, P1 (서열 번호:10); P12, P11, P10, P9, P8, P7, P1, P2, P3, P4, P5, P6 (서열 번호:11); P12, P11, P10, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, P1 (서열 번호:12); P12, P11, P6, P9, P8, P7, P2, P1 (서열 번호:13); P12, P11, P10, P6, P9, P4, P7, P2, P1 (서열 번호:14); P1, P2, P7, P8, P9, P6, P11, P12 (서열 번호:15); 또는 P1, P2, P7, P4, P9, P6, P10, P11, P12 (서열 번호:16); 이때 P1은 d-또는 l-Cha, d-또는 l-Nal(2), d-또는 l-(Phe-2,3,4,5,6-F), d-또는 l-(Phe-3,4,5F), d-또는 l-(Phe-4CF3), d-또는 l-Bpa, d-또는 l-Phe4NO2, 유사한 측쇄 공간을 차지하는 아미노산 (가령 d-또는 l-Tyr, d-또는 l-Phe), 또는 측쇄에 하나 또는 두개의 방향족, 피페리딘, 피라진, 피리미딘, 피페라진, 몰포린 또는 피리미딘 기(들)을 가진 임의의 아미노산, 또는 한개의 인돌, 펜탈렌, 인덴, 나프탈렌, 벤조퓨란, 벤조티오펜, 퀴놀린, 인돌린, 크로만, 퀴노옥살린, 퀴나졸린 기를 가진 임의의 아미노산이며; P2는 d-또는 l-Cha, d-또는 l-Nal(2), d-또는 l-(Phe-2,3,4,5,6-F), d-또는 l-(Phe-3,4,5F), d-또는 l-(Phe-4CF3), 또는 유사한 측쇄 공간을 차지하는 아미노산 (가령 d-또는 l-Tyr, d-또는 l-Phe), 또는 측쇄에 하나 또는 두개의 방향족, 피페리딘, 피라진, 피리미딘, 피페라진, 몰포린 또는 피리미딘 기(들)을 가진 임의의 아미노산, 또는 하나의 인돌, 펜탈렌, 인덴, 나프탈렌기, 벤조퓨란, 벤조티오펜, 퀴놀린, 인돌린, 크로만, 퀴노옥살린, 퀴나졸린 기(들)을 가진 아미노산이며; P3, P4, P5는 임의의 아미노산이거나 또는 각각의 P3, P4, P5가 아미노산일 때 P3, P4, P5중 하나 또는 그 이상은 P2와 P6 사이의 거리가 거의 동일한 간단한 탄소쇄이며 (d-또는 l-Trp은 P4의 예가 되며); P6은 d-또는 l-Bpa, d-또는 l-Phe4NO2, 임의의 아미노산과 d-또는 l-Tyr (가령, d-Ser-d-Tyr), 임의의 아미노산과 d-또는 l-Phe (가령, d-Ser-d-Phe), 그리고 P7, P8, P9, P10, P11, P12중 최소한 3개는 염기성 아미노산이며, 나머지는 임의의 아미노산이거나 또는 없다. 다양한 측면에 있어서, 간단한 탄소 쇄를 보유한 아미노산은 d-또는 l-11-아미노운데카논산, d-또는 l-10-아미노데카논산, d-또는 l-9-아미노노나논산, d-또는 l-8-아미노카프릴산, d-또는 l-7-아미노헵타논산, d-또는 l-6-아미노카프론산, 또는 하나 또는 그 이상의 불포화 탄소 결합들을 가진 유사한 구조다.
추가 구체예에서, 연속 펩티드 또는 펩티도모방체 서열은 다음의 구조를 포함한다: P1, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, P10, P11, P12 (서열 번호:17); P12, P11, P10, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, P1 (서열 번호:18); P12, P11, P10, P6, P9, P4, P7, P2, P1 (서열 번호:19); 또는 P1, P2, P7, P4, P9, P6, P10, P11, P12 (서열 번호:20); 이때 P1은 d-또는 l-Cha, d-또는 l-Nal(2), d-또는 l-(Phe-2,3,4,5,6-F), d-또는 l-(Phe-3,4,5F), d-또는 l-(Phe-4CF3), d-또는 l-Bpa, d-또는 l-Phe4NO2, 유사한 측쇄 공간을 차지하는 아미노산 (가령 d-또는 l-Tyr, d-또는 l-Phe), 또는 측쇄에 하나 또는 두개의 방향족, 피페리딘, 피라진, 피리미딘, 피페라진, 몰포린 또는 피리미딘 기(들)을 가진 임의의 아미노산, 또는 한개의 인돌, 펜탈렌, 인덴, 나프탈렌, 벤조퓨란, 벤조티오펜, 퀴놀린, 인돌린, 크로만, 퀴노옥살린, 퀴나졸린 기를 가진 임의의 아미노산이며; P2는 d-또는 l-Cha, d-또는 l-Nal(2), d-또는 l-(Phe-2,3,4,5,6-F), d-또는 l-(Phe-3,4,5F), d-또는 l-(Phe-4CF3), 유사한 측쇄 공간을 차지하는 아미노산 (가령 d-또는 l-Tyr, d-또는 l-Phe), 또는 측쇄에 하나 또는 두개의 방향족, 피페리딘, 피라진, 피리미딘, 피페라진, 몰포린 또는 피리미딘 기(들)을 가진 임의의 아미노산, 또는 하나의 인돌, 펜탈렌, 인덴, 나프탈렌, 벤조퓨란, 벤조티오펜, 퀴놀린, 인돌린, 크로만, 퀴노옥살린, 퀴나졸린 기를 가진 임의의 아미노산이며; P3, P4, P5는 임의의 아미노산이거나 또는 각각의 P3, P4, P5가 아미노산일 때 P3, P4, P5중 하나 또는 그 이상은 P2와 P6 사이의 거리가 거의 동일한 간단한 탄소쇄이며 (d-또는 l-Trp는 P4의 예가 되며); P6은 d-또는 l-Bpa, d-또는 l-Phe4NO2, 임의의 아미노산과 d-또는 l-Tyr (가령, d-Ser-d-Tyr), 임의의 아미노산과 d-또는 l-Phe (가령, d-Ser-d-Phe), 임의의 아미노산, 또는 없거나; 그리고 P7, P8, P9, P10, P11, P12중 최소한 3개는 염기성 아미노산이며, 나머지는 임의의 아미노산이거나 또는 없다. 다양한 측면들에 있어서, 간단한 탄소 쇄를 보유한 아미노산은 d-또는 l-아미노운데카논산 또는 d-또는 l-8-아미노카프릴산이다.
여전히 또다른 구체예에서, 연속 펩티드 또는 펩티도모방체 서열은 다음의 구조를 포함한다: P1, P2, P3, P4, P5, P6 (서열 번호:21) 또는 P6, P5, P4, P3, P2, P1 (서열 번호:22); 이때 P1은 d-또는 l-Cha, d-또는 l-Nal(2), d-또는 l-(Phe-2,3,4,5,6-F), d-또는 l-(Phe-3,4,5F), d-또는 l-(Phe-4CF3), d-또는 l-Bpa, d-또는 l-Phe4NO2, d-또는 l-Tyr, 또는 d-또는 l-Phe; P2는 d-또는 l-Cha, d-또는 l-Nal(2), d-또는 l-(Phe-2,3,4,5,6-F), d-또는 l-(Phe-3,4,5F), d-또는 l-(Phe-4CF3), d-또는 l-Bpa, d-또는 l-Phe4NO2, d-또는 l-Tyr, 또는 d-또는 l-Phe이며; P3은 d-또는 l-세린, d-또는 l-아르기닌, d-또는 l-시스테인, d-또는 l-프롤린, 또는 d-또는 l-아스파라긴이며; P4는 d-또는 l-트립토판; 그리고 P5는 d-또는 l-세린, d-또는 l-아르기닌, 또는 d-또는 l-아스파라긴이며; 또는 P3, P4, P5는 단일 d-또는 l-아미노운데카논산 또는 단일 d-또는 l-8-아미노카프릴산; P6은 d-또는 l-Bpa, d-또는 l-Phe4NO2, (d-Ser-d-Tyr), 또는 (d-Ser-d-Phe)이다.
여전히 또다른 구체예에서, 연속 펩티드 또는 펩티도모방체 서열은 다음의 구조를 포함한다: P1, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, P10, P11, P12 (서열 번호:23); P1, P2, P3, P4, P5, P6, P12, P11, P10, P9, P8, P7 (서열 번호:24); P6, P5, P4, P3, P2, P1, P7, P8, P9, P10, P11, P12 (서열 번호:25); P6, P5, P4, P3, P2, P1, P12, P11, P10, P9, P8, P7 (서열 번호:26); P7, P8, P9, P10, P11, P12, P1, P2, P3, P4, P5, P6 (서열 번호:27); P7, P8, P9, P10, P11, P12, P6, P5, P4, P3, P2, P1 (서열 번호:28); P12, P11, P10, P9, P8, P7, P1, P2, P3, P4, P5, P6 (서열 번호:29); P12, P11, P10, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, P1 (서열 번호:30); P12, P11, P6, P9, P8, P7, P2, P1 (서열 번호:31); P12, P11, P10, P6, P9, P4, P7, P2, P1 (서열 번호:32); P1, P2, P7, P8, P9, P6, P11, P12 (서열 번호:33); 또는 P1, P2, P7, P4, P9, P6, P10, P11, P12 (서열 번호:34); 이때 P1은 d-또는 l-Cha, Nal(2), d-또는 l-(Phe-2,3,4,5,6-F), d-또는 l-(Phe-3,4,5F), d-또는 l-(Phe-4CF3), d-또는 l-Bpa, d-또는 l-Phe4NO2, d-또는 l-Tyr, 또는 d-또는 l-Phe이며; P2는 d-또는 l-Cha, d-또는 l-Nal(2), d-또는 l-(Phe-2,3,4,5,6-F), d-또는 l-(Phe-3,4,5F), d-또는 l-(Phe-4CF3), d-또는 l-Bpa, d-또는 l-Phe4NO2, d-또는 l-Tyr, 또는 d-또는 l-Phe이며; P3은 d-또는 l-세린, d-또는 l-아르기닌, d-또는 l-시스테인, d-또는 l-프롤린, 또는 d-또는 l-아스파라긴이며; P4는 d-또는 l-트립토판이며; P5는 d-또는 l-세린, d-또는 l-아르기닌, 또는 d-또는 l-아스파라긴이며; 또는 P3, P4, P5는 단일 d-또는 l-아미노운데카논산 또는 단일 d-또는 l-8-아미노카프릴산이며; P6은 d-또는 l-Bpa, d-또는 l-Phe4NO2, (d-Ser-d-Tyr), 또는 (d-Ser-d-Phe)이며; 그리고 P7, P8, P9, P10, P11, P12중 최소한 3개는 d-또는 l-Arg 또는 d-또는 l-Lys이며, 나머지는 임의의 아미노산이거나 또는 없다.
추가적인 구체예에서, 연속 펩티드 또는 펩티도모방체 서열은 다음의 구조를 포함한다: P1, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, P10, P11, P12 (서열 번호:35); P12, P11, P10, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, P1 (서열 번호:36); P12, P11, P10, P6, P9, P4, P7, P2, P1(서열 번호:37); 또는 P1, P2, P7, P4, P9, P6, P10, P11, P12 (서열 번호:38); 이때 P1은 d-또는 l-Cha, 또는 d-또는 l-Nal(2); P2는 d-또는 l-(Phe-2,3,4,5,6-F), d-또는 l-(Phe-3,4,5F), d-또는 l-(Phe-4CF3)이며; 그리고 P7, P8, P9, P10, P11, P12중 최소한 3개는 d-또는 l-Arg이며, 나머지는 임의의 아미노산이거나 또는 없거나; P3은 d-또는 l-세린; P4는 d-또는 l-트립토판이며; P5는 d-또는 l-세린 또는 d-또는 l-아스파라긴이며; P6은 d-또는 l-Bpa, d-또는 l-Phe4NO2, (d-또는 l-Ser-d-또는 l-Tyr), 또는 (d-또는 l-Ser-d-또는 l-Phe)이다.
여전히 추가적인 구체예에서, 연속 펩티드 또는 펩티도모방체 서열은 다음의 구조를 포함한다: P1, P2, P3, P4, P5, P6 (서열 번호:39) 또는 P6, P5, P4, P3, P2, P1 (서열 번호:40); 이때 P1은 d-또는 l-Cha, 또는 d-또는 l-Nal(2)이며; P2는 (d-또는 l-Phe-2,3,4,5,6-F), (d-또는 l-Phe-3,4,5F) 또는 (d-또는 l-Phe-4CF3)이며; P3은 d-또는 l-Ser이며; P4는 d-또는 l-Trp이며; P5는 d-또는 l-Ser이며; P6은 d-또는 l-Bpa, 또는 (d-또는 l-Ser-d-또는 l-Tyr)이다.
추가 구체예에서, 연속 펩티드 또는 펩티도모방체 서열은 다음의 구조를 포함한다: P1, P2, P3, P4, P5, P6 (서열 번호:41); P6, P5, P4, P3, P2, P1 (서열 번호:42); P1, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, P10, P11, P12 (서열 번호:43); P1, P2, P3, P4, P5, P6, P12, P11, P10, P9, P8, P7 (서열 번호:44); P6, P5, P4, P3, P2, P1, P7, P8, P9, P10, P11, P12 (서열 번호:45); P6, P5, P4, P3, P2, P1, P12, P11, P10, P9, P8, P7 (서열 번호:46); P7, P8, P9, P10, P11, P12, P1, P2, P3, P4, P5, P6 (서열 번호:47); P7, P8, P9, P10, P11, P12, P6, P5, P4, P3, P2, P1 (서열 번호:48); P12, P11, P10, P9, P8, P7, P1, P2, P3, P4, P5, P6 (서열 번호:49); P12, P11, P10, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, P1 (서열 번호:50); P12, P11, P6, P9, P8, P7, P2, P1 (서열 번호:51); P12, P11, P10, P6, P9, P4, P7, P2, P1 (서열 번호:52); P1, P2, P7, P8, P9, P6, P11, P12 (서열 번호:53); 또는 P1, P2, P7, P4, P9, P6, P10, P11, P12 (서열 번호:54); 이때 P1은 d-또는 l-Cha, 또는 d-또는 l-Nal(2)이며; P2는 (d-또는 l-Phe-2,3,4,5,6-F), (d-또는 l-Phe-3,4,5F) 또는 (d-또는 l-Phe-4CF3)이며; P3은 임의의 아미노산 (가령, d-또는 l-Ser, 또는 d-또는 l-Pro)이며; P4는 d-또는 l-Trp이며; P5는 임의의 아미노산 (가령, d-또는 l-Ser)이며; P7은 d-또는 l-Arg이며; P8은 d-또는 l-Arg이며; P9는 d-또는 l-Arg이며; P10은 d-또는 l-Gln 또는 d-또는 l-Arg이며; P11은 d-또는 l-Arg이며; P12는 d-또는 l-Arg이며; P6은 d-또는 l-Bpa 또는 (d-또는 l-Ser-d-또는 l-Tyr)이다.
여전히 또다른 구체예에서, 연속 펩티드 또는 펩티도모방체 서열은 다음의 구조를 포함한다: P1, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, P10, P11, P12 (서열 번호:55); P12, P11, P10, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, P1 (서열 번호:56); P12, P11, P10, P6, P9, P4, P7, P2, P1 (서열 번호:57); 또는 P1, P2, P7, P4, P9, P6, P10, P11, P12 (서열 번호:58); 이때 P1은 d-또는 l-Cha 또는 d-또는 l-Nal(2)이며; P2는 (d-또는 l-Phe-2,3,4,5,6-F)이며; P3은 d-또는 l-Ser이며; P4는 d-또는 l-Trp이며; P5는 d-또는 l-Ser이며; P7은 d-또는 l-Arg이며; P8은 d-또는 l-Arg이며; P9는 d-또는 l-Arg이며; P10은 d-또는 l-Gln 또는 d-또는 l-Arg이며; P11은 d-또는 l-Arg이며; P12는 d-또는 l-Arg이며; P6은 d-또는 l-Bpa 또는 (d-또는 l-Ser-d-또는 l-Tyr)이다.
여전히 추가 구체예들에서, 연속 펩티드 또는 펩티도모방체 서열은 다음의 구조를 포함한다: (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha)(d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln)(d-Arg) (d-Arg) (서열 번호:99); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln)(d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha) (서열 번호:100); (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (서열 번호:59); (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha) (서열 번호:60); (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln)(d-Arg) (d-Arg) (서열 번호:61); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln)(d-Arg) (d-Arg) (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Bpa) (서열 번호:62); (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Ser) (d-Trp) (d-Ser) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (서열 번호:63); (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Bpa) (서열 번호:64); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Ser) (d-Trp)(d-Ser) (d-Bpa) (서열 번호:65); (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (서열 번호:66); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (서열 번호:67); (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (서열 번호:68); (d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (서열 번호:69); (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg)(d-Arg) (서열 번호:70); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (서열 번호:71); (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (서열 번호:72); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (서열 번호:73); (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (서열 번호:74); (d-Arg) (d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (서열 번호:75); 또는 (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg)(d-Arg)(d-Arg) (서열 번호:76).
여전히 추가 구체예들에서, 연속 펩티드 또는 펩티도모방체 서열은 다음의 구조를 포함한다: (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg) (서열 번호:77).
본 발명의 펩티드 및 펩티드모방체는 임의선택적으로 세포 막 횡단을 지원하기 위하여 폴리-lys 및/또는 arg 서열을 포함한다. 다른 아미노산 서열 (가령, HIV tat, 세포 표면 수용체들/단백질들에 대한 리간드, 등등)은 막을 횡단할 수 있는 능력이 있고, 다른 분자들을 이용하여(가령, 리포좀, 미셀 및 기타 지질 분자, 바이러스 및 기타 벡터, 전기천공 등등) G2 실효 펩티드 및 펩티드모방체의 세포 진입을 용이하게 할 수 있기 때문에 폴리-lys 및/또는 폴리-arg 서열을 포함시키는 것은 임의선택적이다. 따라서, 추가 구체예들에서, 상기 펩티드 및 펩티드모방체는 세포 진입을 지원하는 폴리-lys 및/또는 arg 서열을 보유하지 않는다. 예를 들면, 2개의 특정 구체예들에서, 세포 막 횡단을 지원하는 폴리-lys/arg 서열없는 최소 서열은 P6, P5, P4, P3, P2, P1 가령, d-Bpa, d-Ser, d-Trp, d-Ser, d-Phe-2,3,4,5,6F, d-Cha (서열 번호:101); 그리고 d-Tyr, d-Ser, d-Pro, d-Trp, d-Ser, d-Phe-2,3,4,5,6F, d-Cha (서열 번호:102)을 포함한다. 2개의 추가 특정 구체예들에서, 세포 막 횡단을 지원하는 폴리-lys/arg 서열없는 최소 서열은 예를 들면, d-Bpa, d-Cys, d-Trp, d-Ser, d-Phe-2,3,4,5,6F, d-Cha, d-Cys (서열 번호:103); 그리고 d-Tyr, d-Cys, d-Pro, d-Trp, d-Ser, d-Phe-2,3,4,5,6F, d-Cha, d-Cys (서열 번호:104)를 포함하며; 상기 Cys 잔기는 임의선택적으로 고리화된다.
논의된 바와 같이, 본 발명의 화합물들은 단독으로 항-세포 증식성 활성 또는 G2 실효 활성을 갖는다. 항-세포 증식성 활성은 핵산 손상을 직접 또는 간접적으로 야기시키는 치료와 본 발명의 화합물들을 복합시킴으로써 증가될 수 있다. 항-세포 증식성 활성은 치료가 핵산을 손상시키거나 시키지 않거나, 세포 증식을 저해시키는 치료와 본 발명의 화합물들을 복합시킴으로써 증가될 수 있다. 본 발명은 따라서 본 발명의 화합물 (가령, 펩티드 또는 펩티도모방체 서열) 및 핵산 손상 물질이 포함된 조성물을 더 제공하며, 본 발명의 화합물 (가령, 펩티드 또는 펩티도모방체 서열) 및 항-증식성 물질을 포함하는 조성물을 더 제공한다.
본 명세서에서 이용된 바와 같이, 용어 "세포 주기 G2 체크포인트를 실효시키는", "세포 주기 G2 체크포인트를 분열시키는", "세포 주기 G2 체크포인트를 손상시키는" 그리고 이의 문법적 변형은 G2 체크포인트에서 세포 주기를 정지시키기 위하여 세포를 저해시키는 것을 의미한다. 세포 주기 G2 체크포인트가 실효된 세포는 이 세포가 G2 체크포인트에 있는 시간이 감소되며, 적절한 조건하에 G2 체크포인트가 부재한 경우에서부터 G2 체크포인트가 몇 분, 몇 시간, 몇 일, 몇 주 또는 그 이상으로 감소되는 범위가 될 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물에 접촉된 세포는 이 화합물이 없을 때 정상적으로 보유하는 길이보다 더 짧은 G2 체크포인트 시간을 갖는다. 예를 들면, G2 체크포인트 시간 길이의 감소는 특정 시간, 가령, 4 시간 동안 G2에 있는 세포가 본 발명의 화합물과 접촉되었을 때, 4 시간 미만, 가령, 3.5, 3, 2.5, 2, 1시간 또는 더 짧은 시간 동안 G2에 있음을 의미할 것이다.
본 명세서에서 이용된 바와 같이, 용어 "자가사멸"이란 당분야에서 인지되는 바와 같이 예정된 세포 사멸, 그리고 세포 생리에서 연합된 변화, 가령, 핵산 분절화, 카스파제 활성화, 등등을 의미한다. 용어 "파국(catastrophe)"은 유사분열 과정에서 오류로 인한 세포 사멸을 의미한다. 파국에서, 특징적인 자가사멸 가령, 카스파제 활성화, 염색체 축합, 등등이 존재하는 몇 가지 특징이 있다.
본 명세서에서 이용된 바와 같이, 용어 "펩티드", "폴리펩티드" 및 "단백질"은 호환되며, 아미드 결합 또는 등가의 비-아미드 결합에 의해 공유적으로 링키지된 2개 또는 그 이상의 아미노산을 지칭한다. 본 발명의 펩티드는 임의의 길이일 수 있다. 예를 들면, 상기 펩티드는 약 5 내지 100개 또는 그 이상의 잔기, 이를 테면, 5 내지 12개, 12 내지 15개, 15 내지 18개, 18 내지 25개, 25 내지 50개, 50 내지 75개, 75 내지 100개, 또는 그 이상의 길이를 보유할 수 있다. 본 발명의 펩티드는 l-및 d-이성체, 그리고 l-및 d-이성체의 조합을 포함한다. 상기 펩티드는 단백질들의 해독 후 프로세싱, 예를 들면, 고리화 (가령, 이황화물 또는 아미드 결합), 인산화, 당화, 카르복실화, 유비퀴틴화, 미리스틸화, 또는 지질화와 전형적으로 연합된 변형을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 공개된 펩티드는 아미노산의 구조적 및 기능적 유사체를 보유하는 화합물들을 더 포함하는데, 예를 들면, 펩티드모방체가 하나 또는 그 이상의 기능 또는 활성을 보유하는 한, 합성 또는 비-자연적 아미노산 또는 아미노산 유사체를 보유하는 펩티드모방체를 더 포함한다. 따라서, 본 발명의 화합물들은 "모방체(mimetic)" 및 "펩티도모방체(peptidomimetic)" 형태를 포함한다.
본 명세서에서 이용된 바와 같이, 용어 "모방체" 및 "펩티도모방체"는 본 발명의 펩티드와 동일한 구조적 및/또는 기능적 특징들을 실질적으로 보유한 합성 화학 화합물을 지칭한다. 상기 모방체는 전적으로 합성, 비-자연적 아미노산 유사체만으로 구성될 수 있거나, 또는 하나 또는 그 이상의 자연적 펩티드 아미노산와 하나 또는 그 이상의 비-자연적 아미노산 유사체가 포함된 키메라(chimeric) 분자일 수 있다. 상기 모방체는 임의의 수의 자연적 아미노산 보존적 치환을 또한 포함할 수 있는데, 단, 이러한 치환은 상기 모방체의 활성을 파괴하지 않는다. 보존적 변이체들인 본 발명의 폴리펩티드와 함께, 통상적인 테스트를 이용하여 모방체가 필수 활성, 가령, 탐지가능한 세포 주기 G2 체크포인트 실효 활성을 보유하는 지를 판단할 수 있다. 모방체가 대상에게 투여되거나 또는 세포에 접촉될 때 G2 세포 주기 체크포인트를 탐지가능하도록 분열시키는 모방체는 따라서 G2 체크포인트 실효 활성을 보유할 것이다.
펩티드 모방체 조성물은 비-자연적 구조적 성분들의 임의의 조합을 포함할 수 있는데, 이들 성분은 일반적으로 3가지 구조적 집단으로부터 유래된다: a) 자연적 아미드 결합 ("펩티드 결합") 링키지이외의 잔기 링키지 집단; b) 자연적 생성 아미노산 잔기를 대신한 비-자연적 잔기; 또는 c) 이차적 구조적 모방, 가령, 이차적 구조를 유도 또는 안정화시키는 잔기, 가령, 베타 턴(turn), 감마 턴, 베타 쉬트, 알파 나선 형태, 그리고 이와 유사한 것들. 예를 들면, 하나 또는 그 이상의 잔기가 아미드 결합 이외의 화학적 수단에 의해 연결될 때 폴리펩티드는 모방체로 묘사될 수 있다. 개별 펩티도모방체 잔기는 아미드 결합, 화학결합이 아닌 비-자연적 그리고 비-아미드 화학 결합 또는 결합 수단, 예를 들면, 글루타알데히드, N-히드록시숙시니미드 에스테르, 이중기능의 말레이미드, N,N'-디시클로헥실카르보디이미드 (DCC) 또는 N,N'-디이소프로필카르보디이미드 (DIC)에 의해 연결될 수 있다. 아미드 결합을 대체하는 연결기는 예를 들면, 케토메틸렌 (가령, -C(=O)-NH-의 경우 -C(=O)-CH2-), 아미노메틸렌 (CH2-NH), 에틸렌, 올레핀 (CH=CH), 에테르 (CH2-O), 티오에테르 (CH2-S), 테트라졸 (CN4-), 티아졸, 레트로아미드, 티오아미드, 또는 에스테르를 포함한다 (가령, Spatola (1983) in Chemistry and Biochemistry of Amino Acids, Peptides and Proteins, Vol. 7, pp 267-357, "Peptide and Backbone Modifications," Marcel Decker, NY).
논의된 바와 같이, 펩티드는 자연적 생성 아미노산 잔기 위치에 하나 또는 그 이상의 비-자연적 잔기를 포함함으로써 모방체로 묘사될 수 있다. 비-자연적 잔기는 당업계에 공지되어 있다. 자연적 아미노산 잔기의 모방체로 유용한 비-자연적 잔기의 특정 비-제한적 예로는 예를 들면, D-또는 L-나필알라닌; D-또는 L-페닐글리신; D-또는 L-2 티에닐알라닌; D-또는 L-1, -2, 3-, 또는 4-피레닐알라닌; D-또는 L-3 티에닐알라닌; D-또는 L-(2-피리디닐)-알라닌; D-또는 L-(3-피리디닐)-알라닌; D-또는 L-(2-피라지닐)-알라닌; D-또는 L-(4-이소프로필)-페닐글리신; D-(트리플루오르메틸)-페닐글리신; D-(트리플루오르메틸)-페닐알라닌; D-p-플루오르-페닐알라닌; D-또는 L-p-바이페닐페닐알라닌; K-또는 L-p-메톡시-바이페닐페닐알라닌; D-또는 L-2-인돌(알킬)알라닌; 그리고 D-또는 L-알킬아이닌이 포함된 방향족 아미노산의 모방체이며, 이때 알킬은 치환된 또는 치환안된 메틸, 에틸, 프로필, 헥실, 부틸, 펜틸, 이소프로필, 이소-부틸, sec-이소틸, 이소-펜틸, 또는 비-산성 아미노산일 수 있다. 자연적 방향족 링을 대신하여 이용될 수 있는 비-자연적 아미노산의 방향족 링은 예를 들면, 티아졸일, 티오페닐, 피라졸일, 벤즈이미다졸일, 나프틸, 푸라닐, 피롤일, 그리고 피리딜 방향족 링을 포함한다.
산성 아미노산의 모방체는 음전하를 유지하면서 비-카르복실레이트 아미노산; (포스포노)알라닌; 그리고 황산염화된 트레오닌으로 치환에 의해 생성될 수 있다. 카르복실 측쇄 군 (가령, 아스파르틸 또는 글루타밀)은 예를 들면, 1-시클로헥실-3(2-몰포닐-(4-에틸) 카르보디이미드 또는 1-에틸-3(4-아조니아-4,4-디메톨펜틸) 카르보디이미드이 포함된 카르보디이미드 (R'-N-C-N-R')와 반응에 의해 선택적으로 또한 변형될 수 있다. 아스파르틸 또는 글루타밀 기는 암모늄 이온과 반응함으로써 아스파라기닐 및 글루타미닐 기로 또한 전환될 수 있다.
염기 아미노산의 모방체는 예를 들면, 리신 및 아르기닌을 추가하여, 아미노산 오르니틴, 시트룰린, 또는 (구아니디노)-아세트산, 또는 (구아니디노)알킬-아세트산으로 치환에 의해 생성될 수 있는데, 이때 알킬은 치환된 또는 치환안된 메틸, 에틸, 프로필, 헥실, 부틸, 펜틸, 이소프로필, 이소-부틸, sec-이소틸, 이소-펜틸, 또는 비-산성 아미노산일 수 있다. 니트릴 유도체 (가령, COOH를 대신하여 CN-모이어티가 포함된)는 아스파라긴 또는 글루타민을 대신하여 치환될 수 있다. 아스파라기닐 및 글루타미닐 잔기는 탈아민화되어 대응하는 아스파르틸 또는 글루타밀 잔기로 될 수 있다.
아르기닌 모방체는 임의선택적으로 알칼리 조건하에서 예를 들면, 페닐글리옥살, 2,3-부탄디온, 1,2-시클로헥산디온, 또는 닌히드린이 포함된 하나 또는 그 이상의 시약과 아르기닐이 반응함으로써 생성될 수 있다. 티로신 잔기 모방체는 티로실이 방향족 디아조니움 화합물들 또는 테트라니트로메탄과 반응함으로써 생성될 수 있다. N-아세틸이미다졸 및 테트라니트로메탄은 각각 O-아세틸 티로실 종 및 3-니트로 유도체들을 형성하는데 이용된다.
리신 모방체는 리시닐이 숙신 또는 다른 카르복실산 무수물과 반응함으로써 생성될 수 있고, (그리고 아미노 말단 잔기가 변경될 수 있다). 리신 및 다른 알파-아미노-포함 잔기 모방체는 이미도에스테르들, 예를 들면 메틸 피콜린이미데이트, 피리독살 포스페이트, 피리독살, 클로로보로하이드라이드, 트리니트로벤젠술폰산, O-메틸이소우레아, 2,4-펜탄디온과의 반응, 그리고 글리옥실레이트와 함께 트란스아미다제-촉매된 반응트란스아미나제-촉매된 반응에 의해 또한 생성될 수 있다.
메티오닌 모방체는 메티오닌 술폭시드와의 반응에 의해 생성될 수 있다. 프롤린 모방체는 예를 들면, 피페콜산, 티아졸리딘 카르복실산, 3-또는 4-히드록시 프롤린, 데히드로프롤린, 3-또는 4-메틸프롤린, 그리고 3,3,-디메틸프롤린을 포함한다. 히스티딘 모방체는 히스티딜과 디에틸프로카르보네이트 또는 파라-브로모페나실브롬화물의 반응에 의해 생성될 수 있다. 다른 모방체들은 예를 들면, 프롤린 및 리신의 히드록실화; 세릴 또는 트레오닐 잔기들의 히드록실기의 포스포릴화; 리신, 아르기닌, 그리고 히스티딘 측쇄의 알파-아미노기의 메틸화; N-말단 아민의 아세틸화; 주요 쇄 아미드 잔기의 메틸화 또는 N-메틸 아미노산으로의 치환; 또는 C-말단 카르복실기의 아미드화에 의해 생성된 것들을 포함한다.
하나 또는 그 이상의 잔기는 반대 키랄성의 아미노산 (또는 펩티도모방체 잔기)에 의해 또한 대체될 수 있다. 따라서, L-형상(화학 엔터티의 구조에 따라 R 또는 S로 또한 지칭될 수 있음)의 임의의 아미노산 자연적 생성은 동일한 아미노산 또는 모방체이지만, 반대 키랄성을 가진 것으로 대체될 수 있고, 이는 D-아미노산으로 지칭될 수 있지만, R-또는 S-형으로 추가적으로 지칭될 수 있다.
본 발명의 펩티드 및 펩티드모방체는 본 명세서에서 제시된 서열의 변형된 형태를 더 포함하는데, 이때 변형된 병태는 변형안된 또는 기준 펩티드 또는 펩티도모방체 기능의 최소한 일부를 유지해야 한다. 예를 들면, 변형된 펩티드 또는 펩티도모방체는 세포 증식성 저해 또는 G2 실효 활성의 최소한 일부를 유지할 것이지만, 기준 펩티드 또는 펩티도모방체와 비교하여 증가된 또는 감소된 세포 증식성 저해 또는 G2 실효 활성을 보유할 수 있다.
변형된 펩티드 및 펩티드모방체는 또다른 잔기로 치환된, 서열에 추가된 또는 서열로부터 삭제된 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기를 보유할 수 있다. 한 구체예에서, 상기 변형된 펩티드 또는 펩티도모방체는 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환, 추가 또는 결손 (가령, 1-3, 3-5, 5-10개 또는 그 이상의)을 보유한다. 한 측면에서, 상기 치환은 이들의 측쇄가 기준 아미노산 또는 모방체(치환되는 아미노산 또는 모방체)와 유사한 공간을 점령하는 아미노산 또는 모방체로 치환이다. 여전히 또다른 측면에서, 상기 치환은 인간 잔기와 구조적으로 유사한 비-인간 아미노산로의 치환이다. 특정 측면에서, 상기 치환은 보존적 아미노산 치환이다.
본 명세서에서 이용된 바와 같이, 용어 "유사한 공간"이란 기준 모이어티와 유사한 크기의 3-차원 공간을 점령하는 화학 모이어티를 의미한다. 전형적으로, 유사한 공간을 점령하는 모이어티는 기준 모이어티와 유사한 크기일 것이다. "유사한 측쇄 공간을 점령하는" 아미노산 또는 모방체는 기준 아미노산 또는 모방체와 유사한 크기의 3-차원 공간을 점령하는 측쇄를 보유한다. d-(Phe-2,3,4,5,6-F), l-(Phe-2,3,4,5,6-F), d-(Phe-3,4,5F), l-(Phe-3,4,5F), d-(Phe-4CF3) 또는 l-(Phe-4CF3)의 특정 예로는 (l 또는 d-Phe-2R1,3R2,4R3,5R4,6R5)이 되며, 이때 R1,R2,R3,R4,R5는 염화물, 브롬화물, 불화물, 요오드화물, 수소, 수소 산화물일 수 있거나 또는 존재하지 않는다. 작은 분자들, 가령, 약 1 옹스트롬(Angstrom) 크기를 보유하는 불화물의 경우, 유사한 공간은 모이어티의 부재일 수 있다.
용어 "보존적 치환"이란 하나의 아미노산이 생물학적으로, 화학적으로 또는 구조적으로 유사한 잔기로의 치환을 말한다. 생물학적으로 유사하다는 것은 상기 치환이 생물학적 활성, 가령, 항-세포 증식성 또는 G2 실효 활성과 양립할 수 있다는 것을 의미한다. 구조적으로 유사하다는 것은 상기 아미노산이 유사한 길이의 측쇄, 이를 테면 알라닌, 글리신 및 세린, 또는 유사한 크기를 가진다는 것을 의미한다. 화학적 유사성이란 상기 잔기가 동일한 전하를 보유하거나 또는 모두 친수청 또는 소수성임을 의미한다. 특정 실시예는 또다른 아미노산에 대한 하나의 소수성 잔기의 치환을 포함하는데, 이를 테면 이소류신, 발린, 류신 또는 메티오닌, 또는 또다른 아미노산에 대한 하나의 극성 잔기의 치환, 이를 테면 리신을 아르기닌으로, 아스파르트산을 글루탐산으로, 또는 아스파라긴을 글루타민으로, 트레오닌을 세린으로 치환, 그리고 이와 유사한 것들을 포함한다.
따라서, 본 발명의 펩티드 및 펩티드모방체는 표 1에서 제시된 펩티드 및 펩티드모방체 서열에 동일하지 않는 서열을 보유하는 펩티드 및 펩티드 모방체를 포함한다. 한 구체예에서, 펩티드 또는 펩티도모방체는 표 1에서 제시된 서열에 대하여 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 그 이상 동일성을 가진 서열을 보유한다. 한 측면에서, 상기 동일성은 서열의 한정된 부위에 걸쳐 있는데, 가령, 아미노 또는 카르복시 말단 3-5 잔기에 걸쳐 있다.
펩티드 및 펩티드모방체가 포함된 본 발명의 화합물들은 당분야에 공지된 임의의 방법을 이용하여 생산 및 단리될 수 있다. 펩티드들은 당분야에 공지된 화학적 방법을 이용하여 전체적으로 또는 부분적으로 합성될 수 있다 (가령, Caruthers (1980) Nucleic Acids Res. Symp. Ser. 215-223; Horn (1980) Nucleic Acids Res. Symp. Ser. 225-232; and Banga, A.K., Therapeutic Peptides and Proteins, Formulation, Processing and Delivery Systems (1995) Technomic Publishing Co., Lancaster, PA 참고) 펩티드 합성은 다양한 고형-상 기술을 이용하여 실행될 수 있고 (가령, Roberge (1995) Science 269:202; Merrifield (1997) Methods Enzymol. 289:3-13) 가령, ABI 431A 펩티드 합성기 (Perkin Elmer)를 이용하여 제조업자의 지시에 따라 자동화된 합성이 이루어질 수 있다.
개별 합성 잔기들과 폴리펩티드 편입 모방체는 당분야에 공지된 다양한 과정 및 방법을 이용하여 합성될 수 있다 (가령, Organic Syntheses Collective Volumes, Gilman, et al. (Eds) John Wiley & Sons, Inc., NY). 펩티드 및 펩티드 모방체들 또한 복합 방법을 이용하여 합성될 수 있다. 펩티드 및 펩티도모방체 라이브러리를 생성하는 기술은 공지되어 있으며, 예를 들면, 멀티핀(multipin), 차 주머니, 그리고 스필트-커플-믹스 기술(split-couple-mix techniques)을 포함한다 (예를 들면, al-Obeidi (1998) Mol. Biotechnol. 9:205-223; Hruby (1997) Curr. Opin. Chem. Biol. 1:114-119; Ostergaard (1997) Mol. Divers. 3:17-27; 그리고 Ostresh (1996) Methods Enzymol. 267:220-234 참고). 변형된 펩티드는 화학적 변형 방법에 의해 더 만들어질 수 있다 (예를 들면, Belousov (1997) Nucleic Acids Res. 25:3440-3444; Frenkel (1995) Free Radic. Biol. Med. 19:373-380; 그리고 Blommers (1994) Biochemistry 33:7886-7896 참고).
재조합에 의해 합성된 펩티드를 더 용이하게 단리시키기 위하여, 또는 항체 또는 항체-발현 B 세포들을 확인하고 단리시키기 위하여 더 면역원성이 큰 펩티드를 생산하기 위하여, 펩티드들은 또한 펩티드에 연계된 하나 또는 그 이상의 추가 도메인을 가진 융합 단백질로 합성되고 발현될 수 있다. 탐지와 정제를 용이하게 하는 도메인은 예를 들면, 금속 킬레이팅 펩티드, 이를 테면 고정된 금속 상에서 정제를 허용하는 폴리히스티딘 트랙 및 히스티딘-트립토판 모듈; 고정된 면역글로블린 상에서 정제를 허용하는 단백질 A 도메인; 그리고 FLAGS 연장/친화력 정제 시스템에서 이용되는 도메인(Immunex Corp, Seattle WA)을 포함한다. 정제 도메인과 상기 펩티드 사이에 절단가능한 링커 서열, 이를 테면 Xa 인자 또는 엔테로키나제 (Invitrogen, San Diego CA)를 포함시키면 펩티드 정제를 용이하게 할 수 있다. 예를 들면, 발현 벡터는 6개의 히스티딘 잔기에 이어서 티오레독신과 엔테로키나제 절단 부위가 연계된 펩티드-인코딩 핵산 서열을 포함할 수 있다(가령, Williams (1995) Biochemistry 34:1787-1797; Dobeli (1998) Protein Expr. Purif. 12:404-14 참고). 상기 히스티딘 잔기는 융합 단백질의 탐지 및 정제를 용이하게 하고, 한편 엔테로키나제 절단 부위는 융합 단백질의 나머지로부터 상기 펩티드를 정제하기 위한 수단을 제공한다. 융합 단백질들을 인코드하는 벡터 및 융합 단백질의 응용에 속하는 기술은 당분야에 공지되어 있다(가령, Kroll (1993) DNA Cell. Biol., 12:441-53).
본 발명은 본 발명의 펩티드를 인코드하는 핵산을 더 제공한다. 특정 구체예에서, 핵산은 약 8 내지 12개, 12 내지 15개, 15 내지 18개, 15 내지 20개, 18 내지 25개, 20 내지 25개, 25 내지 35개, 25 내지 50개 또는 50 내지 100개 아미노산 또는 그 이상 길이를 보유하는 본 발명의 펩티드 서열을 인코드한다.
용어 "핵산" 및 "폴리뉴클레오티드"는 본 명세서에서 호환되며, 데옥시리보핵산 (DNA) 및 리보핵산 (RNA)이 포함된 모든 형태의 핵산을 지칭한다. 상기 핵산은 이중, 단일 가닥, 또는 삼중, 직선 또는 원형일 수 있다. 핵산은 게놈 DNA, cDNA, 그리고 안티센스(antisense)를 포함한다. RNA 핵산은 접합된(spliced) 또는 접합안된(unspliced) mRNA, rRNA, tRNA 또는 안티센스 (가령, RNAi)일 수 있다. 본 발명의 핵산은 자연적 생성, 합성, 뿐만 아니라 뉴클레오티드 유사체 및 유도체를 포함한다. 이러한 변경된 또는 변형된 폴리뉴클레오티드는 예를 들면 뉴클레아제 저항성을 제공하는 유사체를 포함한다. 핵산 길이 또한 예시된 펩티드 서열 보다 짧을 수 있다. 예를 들면, 임의의 펩티드 서열의 하위 서열은 항-증식성 또는 G2 실효 활성을 보유하는 펩티드를 인코드할 수 있다.
핵산은 임의의 다양한 공지의 표준 클로닝 및 화학 합성 방법을 이용하여 생산될 수 있고, 부위-지향적 돌연변이생성 또는 당업자에 공지된 다른 재조합 기술을 이용하여 의도적으로 변경될 수 있다. 폴리뉴클레오티드의 순도는 서열화, 겔 전기영동 그리고 이와 유사한 것들을 통하여 결정될 수 있다.
본 발명의 핵산은 "발현 조절 요소"에 의해 핵산 발현이 영향을 받거나 또는 조절되는 핵산 구조체 안으로 삽입될 수 있고, 이러한 조합은 "발현 카세트"라고 지칭된다. 용어 "발현 조절 요소"는 작용가능하도록 연계된 핵산 서열의 발현을 조절 또는 영향을 주는 하나 또는 그 이상의 서열 요소를 말한다. 핵산 서열에 작용가능하도록 연계된 발현 조절 요소는 상기 핵산 서열의 전사 및 적절한 경우 해독을 조절한다.
"작용가능하도록 연계된(operatively linked)"이란 기능적 병치(juxtaposition)를 지칭하는데, 이때 설명된 성분들은 의도된 방식으로 기능을 발휘하는 것이 허용되는 관계에 있다. 전형적으로 발현 조절 요소들은 유전자의 5' 또는 3' 단부에 병치되지만, 인트론일 수도 있다. 프로모터는 일반적으로 코딩 서열의 5'에 일반적으로 위치한다. "프로모터(promoter)"는 전사를 지시하는데 충분한 최소 서열 요소를 의미한다.
발현 조절 요소들은 프로모터, 인헨서, 전자 종료물질, 유전자 침묵자, 단백질-인코딩 유전자 앞에 있는 출발 코돈(가령,　ATG)을 포함한다. 발현 조절 요소들은 구성적 전사, 유도성 전사(즉, 활성화를 위하여 외부 신호를 요하는)를 활성화시키거나, 또는 전사를 억제시킨다 (즉, 전사를 중단시키는 신호; 전사를 활성화시키는 신호 제거). 발현 카세트는 특이적 세포-유형 또는 조직 (가령, 조직-특이적 조절 요소)에 대한 조절가능한 유전자 발현을 제공하는데 충분한 조절 요소를 또한 포함할 수 있다.
본 발명의 핵산은 숙주 세포로 증식 및 후속적인 유전자 조작을 위하여 플라스미드 안으로 삽입될 수 있다. 플라스미드는 숙주 세포 안에서 안정적으로 증식될 수 있는 핵산이며; 플라스미드는 숙주 세포 안에서 펩티드를 인코드하는 핵산의 발현을 구동시키기 위하여 발현 조절 요소를 임의선택적으로 포함한다. 용어 "벡터"는 본 명세서에서 플라스미드와 동의어이며, 숙주 세포 안에서 발현을 위한 발현 조절 요소를 또한 포함할 수 있다. 플라스미드 및 벡터는 일반적으로 세포 안에서 증식을 위한 최소한의 복제 원점 및 프로모터를 포함한다. 따라서, 플라스미드와 벡터는 예를 들면, 펩티드 인코딩 핵산의 유전자 조작, 펩티드의 생산, 그리고 숙주 세포들 또는 전체 유기체 안에서 상기 펩티드의 발현에 유용하다.
따라서, 펩티드는 박테리아계에서 구성 프로모터 이를 테면 T7, 또는 유도성 프로모터, 이를 테면 박테리오파아지 λ의 pL, plac, ptrp, ptac (ptrp-lac 하이브리드 프로모터)를 이용하거나; 효모계에서 구성 프로모터, 이를 테면 ADH 또는 LEU2 또는 유도성 프로모터, 이를 테면 GAL (가령, Ausubel et al., In: Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 2, Ch. 13, ed., Greene Publish. Assoc. & Wiley Interscience, 1988; Grant et al. Methods in Enzymology, 153:516 (1987), eds. Wu & Grossman; Bitter Methods in Enzymology, 152:673 (1987), eds. Berger & Kimmel, Acad. Press, N.Y.; 그리고, Strathern et al., The Molecular Biology of the Yeast Saccharomyces (1982) eds. Cold Spring Harbor Press, Vols. I and II; R. Rothstein In: DNA Cloning, A Practical Approach, Vol.11, Ch. 3, ed. D.M. Glover, IRL Press, Wash., D.C., 1986); 곤충계에서 구성 또는 유도성 프로모터 이를 테면 엑디손(ecdysone); 그리고 포유류 세포계에서 구성 프로모터, 이를 테면 SV40, RSV, 또는 포유류 세포들의 게놈으로부터 유도된 유도성 프로모터, 이를 테면 메탈로티오닌 IIA 프로모터, 열 쇼크 프로모터, 또는 포유류 바이러스에서 유도된, 이를 테면 아데노바이러스 후기 프로모터 또는 유도성 마우스 유선 종양 바이러스 긴 말단 반복을 이용하여 발현될 수 있다. 펩티드 발현 시스템은 아데노바이러스 벡터 (U.S. 특허 번호 5,700,470 및 5,731,172), 아데노-연합된 벡터 (U.S. 특허 번호 5,604,090), 헤르페스 단순 바이러스 벡터 (U.S. 특허 번호 5,501,979) 그리고 레트로바이러스 벡터 (U.S. 특허 번호　5,624,820, 5,693,508 및 5,674,703 그리고 WIPO 공개 WO92/05266 및 WO92/14829)가 포함된 생체내 사용을 위하여 기획된 벡터를 더 포함한다. 소의 유두종 바이러스(BPV)가 또한 유전자 요법에 이용되었다 (U.S. 특허 번호 5,719,054). 이러한 유전자 요법 벡터들은 또한 CMV 계통 벡터를 포함한다 (U.S. 특허 번호 5,561,063).
본 발명은 따라서 숙주 세포들 안으로 삽입된 본 발명의 펩티드를 인코드하는 핵산을 제공한다. 한 구체예에서, 상기 숙주 세포는 원핵 세포다. 또다른 구체예에서, 상기 숙주 세포는 진핵 세포다. 다양한 측면들에 있어서, 상기 진핵 세포는 효모 또는 포유류 (가령, 인간, 영장류, 등등) 세포다.
본 명세서에서 이용된 바와 같이, "숙주 세포"는 핵산이 도입되는 세포로써, 이 안에서 핵산은 증식되고, 전사되어, 또는 인코드된 펩티드가 발현된다. 상기 용어는 또한 대상 숙주 세포의 임의의 후손을 포함한다.
숙주 세포들은 미생물, 이를 테면 박테리아 또는 효모; 그리고 식물, 곤충 및 포유류 세포들을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 예를 들면, 재조합 박테리오파아지 핵산, 플라스미드 핵산 또는 코스미드 핵산 발현 벡터에 의해 형질변환된 박테리아; 재조합 효모 발현 벡터에 의해 형질변환된 효모; 재조합 바이러스 발현 벡터 (가령, 콜리플라워 모자이크 바이러스, CaMV; 담배 모자이크 바이러스, TMV)에 감염된 식물 세포 계통 또는 재조합 플라스미드 발현 벡터 (가령, Ti 플라스미드)에 의해 형질변환된 식물 세포 계통; 재조합 바이러스 발현 벡터 (가령, 베큘로바이러스)에 의해 감염된 곤충 세포 계통; 또는 재조합 바이러스 발현 벡터 (가령, 레트로바이러스, 아데노바이러스, 백시니아 바이러스)에 의해 감염된 동물 세포 계통, 또는 안정적 발현을 위하여 공작된 형질변환된 동물 세포 계통이 제공된다.
상기 발현 벡터는 선택적 압력 또는 식별가능한 표지에 저항성을 부여하는 선택가능한 표지를 인코드하는 핵산(가령, β-갈락토시다제)을 포함할 수 있고, 이로 인하여 상기 벡터를 보유하는 세포가 식별되고, 성장되고, 확장이 허용된다. 대안으로, 선택가능한 표지는 제2벡터 상에 있고, 제2벡터는 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제1벡터와 함께 숙주 세포 안으로 함께 형질감염될 수 있다. 다수의 선별 시스템이 이용될 수 있는데, 헤르페스 단순 바이러스 티미딘 키나제 유전자 (Wigler et al., Cell 11:223 (1977)), 하이포산틴-구아닌 포스포리보실전달효소 유전자 (Szybalska et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48:2026 (1962)) 그리고 아데닌 포스포리보실전달효소 (Lowy et al., Cell 22:817 (1980)) 유전자들이 각각 tk-, hgprt_ 또는 aprt_ 세포들에서 이용될 수 있지만, 이에 국한되지 않는다. 메토트렉세이트에 저항성을 부여하는 dhfr (O'Hare et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1527 (1981)); 미코페놀산에 대한 저항성을 부여하는 gpt 유전자(Mulligan et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2072 (1981)); 아미노글리코시드 G-418에 저형성을 부여하는 neomycin 유전자(Colberre-Garapin et al., J.　Mol. Biol. 150:1(1981)); 그리고 하이그로마이신에 저항성을 부여하는 hygromycin 유전자(Santerre et al., Gene 30:147 (1984))에 근거하여 항대사산물 저항성이 이용될 수 있다. 추가적인 선택가능한 유전자는 트립토판을 대신하여 세포들이 인돌을 이용하도록 허용하는 trpB; 히스티딘 대신 세포들이 히스티놀을 이용하도록 허용하는 hisD(Hartman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:8047 (1988)); 그리고 ODC(오르니틴 데카르복실라제 저해해), 2-(디플루오르메틸)-DL-오르니틴, DFMO에 대한 저항성을 부여하는 ODC (오르니틴 데카르복실라제)(McConlogue (1987) In: Current Communications in Molecular Biology, Cold Spring Harbor Laboratory)을 포함한다.
본 명세서에서 이용된 바와 같이, 용어 "핵산 손상 치료" 및 "핵산 손상 물질"은 핵산 (가령, DNA, cDNA, genomic DNA, mRNA, tRNA 또는 rRNA)을 직접 또는 간접적으로 손상시키는 임의의 치료 섭생을 말한다. 이러한 물질의 특정 예로는 알킬화 물질, 니트로소우레아, 항-대사산물, 식물 알칼로이드, 식물 추출물 및 방사선동위원소를 포함한다. 특정 예시 물질로는 핵산 손상 약물, 예를 들면, 5-플로오르우라실 (5-FU), 카페시타빈, S-1 (Tegafur, 5-클로로-2,4-디히드록시피리딘 및 옥소닌산), 5-에티닐우라실, 아라비노실 시토신 (ara-C), 5-아자시티딘 (5-AC), 2',2'-디플루오르-2'-데옥시시티딘 (dFdC), 퓨린 항대사산물 (멀캅토퓨린, 아자티오퓨린, 티오구아닌), 겜시타빈 히드로클로라이드 (Gemzar), 펜토스타틴, 알로퓨리놀, 2-플루오르-아라비노실-아데닌(2F-ara-A), 히드록시우레아, 술퍼 무스타드 (비스클로로에틸술피드), 메클로에타민, 멜파란, 클로람부칠, 사이클로포스파미드, 이포스파미드, 티오테파, AZQ, 미토마이신 C, 디안히드로갈락티톨, 디브로모두시톨, 알킬 술포네이트 (부술판), 니트로소우레아 (BCNU, CCNU, 4-메틸 CCNU 또는 ACNU), 프로카르바진, 데카르바진, 레베카마이신, 안트라사이클린, 이를 테면 독소루비친 (아드리아마이신; ADR), 다우노루비친 (Cerubicine), 이다루비친 (Idamycin) 및 에피루비친 (Ellence), 안트라사이클린 유사체, 이를 테면 미토산트론, 악티노마이신 D, 비 삽입 토포이소메라제 저해제, 이를 테면 에피포도필로톡신 (에토포시드=VP16, 테니포시드=VM-26), 포도필로톡신, 블레오마이신 (Bleo), 페플레오마이신, 백금 유도체가 포함된 핵산과 부가물을 형성하는 화합물들 (가령, 시스플라틴 (CDDP), 시스플라틴의 트란스 유사체, 카르보플라틴, 이프로플라틴, 테트라플라틴 및 옥살리플라틴), 캄포테신, 토포테칸, 이리노테칸 (CPT-11), 및 SN-38을 포함한다. 핵산 손상 치료의 특정 예로는 방사선 (가령, 자외선 (UV), 적외선 (IR), 또는 알파-, 베타-또는 감마-방사선) 및 환경 쇼크 (가령, 고열)를 포함한다.
본 명세서에서 이용된 바와 같이, 용어 "항-증식성 치료" 및 "항-증식성 물질"이란 상기 치료 또는 물질이 핵산을 손상시키는지에 무관하게, 세포, 바이러스, 박테리아 또는 다른 단세포 또는 다세포 유기체의 증식을 직접 또는 간접적으로 저해시키는 임의의 치료 섭생을 의미한다. 항-증식성 물질의 특정 예로는 항-종양 및 항-바이러스 약물이며, 이들은 세포 증식 또는 바이러스 증식 또는 복제를 저해한다. 특정 예로는 그 중에서도, 사이클로포스파미드, 아자티오프린, 시클로스포린 A, 프레디니졸론, 멜파란, 클로람부칠, 메클로에타민, 부술판, 메토트렉세이트, 6-멀캅토퓨린, 티오구아닌, 시토신 아라비노시드, 탁솔, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 독소루비친, 악티노마이신 D, 미트라마이신, 카르무스틴, 로무스틴, 세무스틴, 스트렙토조토신, 히드록시우레아, 시스플라틴, 미토탄, 프로카르바진, 다카르바진 및 디브로모만니톨을 포함한다. 항 증식성 물질은 핵산 복제 오류를 야기시키거나 또는 이를 테면 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드 유사체 (가령, AZT 또는 5-AZC)와 같은 핵산 복제를 저해시킨다.
본 발명의 펩티드 및 펩티드모방체는 미세관 안정화 또는 탈안정화 물질, 이를 테면 빈카 알칼로이드 (빈블라스틴=VLB, 빈크리스틴=VCR, 비노렐빈=VRLB, 빈플루닌=VFL), 및 탁산 (파클리탁셀 및 도세탁셀=탁소타레)의 항-세포 증식성 활성을 또한 증가시킬 수 있다. 따라서, 이러한 물질들은 본 발명의 조성물이 더 포함되고, 본 발명의 방법에 이용될 수 있다.
본 발명의 화합물로 처리될 수 있는 세포는 시험관내, 생체외 또는 생체내에서 증식이 저해 또는 저지되는 것이 바람직한 임의의 세포를 포함한다. 특정 표적 세포들은 정상 세포 주기 G1 체크포인트 시간보다 더 짧거나 또는 손상된 세포 주기 G1 체크포인트를 보유하고, 따라서 상기 세포들는 핵산의 복구를 완료하기 위하여 지내는 충분한 시간 전에 G1 체크포인트를 나간다. 따라서, 후보 세포들은 세포들이 정상 또는 비정상이던 관계없이 무관하게 신속하게 증식하는 세포를 포함한다. 특정 예로는 양성 또는 종양성, 전이성 또는 비-전이성 세포들이다. 추가적인 후보 세포들은 세포의 증식율 또는 세포들이 G1 기에 유지되는 시간 길이를 측정함으로써 식별될 수 있다. 후보 세포들은 테스트 세포에 단독으로 본 발명의 화합물을 접촉시키거나, 또는 핵산 손상 치료와 함께 접촉시키고, 그리고 상기 접촉된 세포가 감소된 증식 또는 증가된 세포 사멸 또는 자가사멸/파국을 나타내는지를 측정함으로써 또한 식별될 수 있다.
따라서 본 발명의 화합물들은 시험관, 생체외 그리고 생체내 세포 증식을 저해하는데 유용하다. 이와 같이, 비정상적으로 또는 바람직하지 못한 또는 원하지 않는 세포 증식 또는 세포 생존, 또는 비정상적으로 또는 결함있는 세포 분화를 특징으로 하는 장애 또는 생리학적 상태를 가진 또는 가질 위험에 처한 대상은 본 발명의 화합물 단독으로 치료될 수 있거나 또는 핵산 손상 또는 항-증식성 치료를 직간접적으로 야기하는 치료와 복합하여 본 발명의 화합물로 치료될 수 있다.
따라서, 본 발명에 따르면, 세포 증식을 저해하는 방법, 핵산 손상 물질 또는 치료에 세포의 민감성을 증가시키는 방법 그리고 시험관, 생체외 및 생체내에서 세포에게 핵산 손상을 증가시키는 방법들이 제공된다. 한 구체예에서, 방법은 세포의 증식을 저해시키는데 충분한 양의 본 발명의 펩티드 또는 펩티도모방체를 세포(가령, 배양된 세포 또는 대상 안에 존재하는 세포)에 접촉시키는 것을 포함한다. 또다른 구체예에서, 방법은 핵산 손상 물질 또는 치료에 세포의 민감성을 증가시키는데 충분한 양의 본 발명의 펩티드 또는 펩티도모방체를 세포에 접촉시키는 것을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, 방법은 세포의 핵산 손상을 증가시키는데 충분한 양의 본 발명의 펩티드 또는 펩티도모방체를 세포에 접촉시키는 것을 포함한다. 다양한 측면들에 있어서, 방법은 상기 세포에 핵산 손상 물질을 접촉시키거나 또는 핵산 손상 치료에 상기 세포를 노출시키는 것을 더 포함한다.
바람직하지 못한 또는 원하지 않는 세포 증식 또는 세포 생존을 특징으로 하는 상태, 결함성 또는 일탈성 자가사멸을 특징으로 하는 상태, 일탈성 또는 결함성 세포 생존을 특징으로 하는 상태, 뿐만 아니라 일탈성 또는 결함성 세포 분화를 특징으로 하는 상태가 포함된 대상에서 세포 증식성 장애 또는 분화성 장애를 치료하는 방법을 더 제공한다. 한 구체예에서, 방법은 세포 증식성 장애를 가진 또는 가질 위험에 처한 대상에게 상기 세포 증식성 장애를 치료하는데 효과적인 본 발명의 펩티드 또는 펩티도모방체의 양을 투여하는 것을 포함한다. 한 측면에서, 상기 양은 대상 상태를 개선시키는데 충분하다. 특정 측면들에 있어서, 상기 개선은 표적 세포 (가령, 비정상적으로 증식하는 세포들)의 최소한 일부분에서, 감소된 세포 증식, 세포의 감소된 수, 세포수 증가의 저해, 증가된 자가사멸, 또는 감소된 생존을 포함한다. 여전히 또다른 측면에서, 상기 대상에게 세포 증식을 저해시키는 치료에 앞서, 동시에 또는 그 이후에 본 발명의 화합물이 투여된다. 추가적인 특정 측면들에서, 상기 세포 증식성 장애의 세포들의 최소 일부분은 혈액, 유방, 폐, 갑상선, 두경부, 뇌, 림프, 위장관, 비뇨생식관, 신장, 췌장, 간, 뼈, 근육, 또는 피부에 위치한다.
또다른 구체예에서, 방법은 고형 종양을 치료하기 위하여 대상에게 화합물의 일정량을 투여하는 것을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, 액상 종양을 치료하기 위하여 대상에게 화합물의 일정량을 투여하는 것을 포함한다. 다양한 측면들에 있어서, 종양을 가진 대상에게 또다른 항-종양 요법에 앞서, 동시에 또는 그 이후에 본 발명의 화합물이 투여된다.
본 명세서에서 이용된 바와 같이, 용어 "증식성 장애" 및 "증식성 상태"는 일탈성 또는 바람직하지 못한 증식 (가령, 세포, 바이러스, 박테리아, 곰팡이, 등등의)을 특징으로 하는 임의의 병리학적 또는 비-병리학적 생리적 상태를 의미한다. 용어 "세포 증식성 장애" 및 "세포 증식성 상태"는 일탈성 또는 바람직하지 못한 세포 증식을 특징으로 하는 임의의 병리학적 또는 비-병리학적 생리학적 상태, 뿐만 아니라 바람직하지 못한 또는 원하지 않는 세포 증식 또는 세포 생존 (가령, 결함성 자가사멸로 인한)을 특징으로 하는 상태, 결함성 또는 일탈성 또는 결함성 자가사멸을 특징으로 하는 상태, 뿐만 아니라 일탈성 또는 바람직하지 못한 또는 원하지 않는 세포 생존을 특징으로 하는 상태를 포함한다. 용어 "분화성 장애"는 일탈성 또는 결함성 분화를 특징으로 하는 임의의 병리학적 또는 비-병리학적 생리학적 상태를 말한다.
치료될 수 있는 증식성 또는 분화성 장애들은 비정상적으로 또는 바람직하지 못한 세포 수, 세포 성장 또는 세포 생존을 특징으로 하는 양성 및 신형성인 질환 및 비-병리학적 상태를 포함한다. 따라서 이러한 장애들 또는 상태는병적 상태를 구성할 수 있으며, 모든 유형의 암적 성장 또는 발암성 과정, 전이성 조직 또는 악성으로 형질변환된 세포들, 조직, 또는 장기를 포함하며, 또는 일반적으로 질병과 연합되지는 않지만 정상은 아닌, 비-병리적인 것일 수 있다. 본 발명에 따라 치료될 수 있는 비-병리적 상태의 특이적 예는 상처 복구로부터 조직 재성장되어, 반흔이 형성되는 것이다.
증식성 또는 분화성 장애를 포함하는 세포는 세포 덩어리로 응집되거나, 또는 분산될 수 있다. 용어 "고형 종양"은 전형적으로 함께 응집되어, 덩어리를 형성하는 신생물 또는 전이를 말한다. 특정 예로는 내장(visceral) 종양, 이를 테면 위 또는 결장 암, 간암, 정맥 암종, 폐 및 뇌 종양/암을 포함한다. "액상 종양"이란 조혈계의 신생물, 이를 테면 림프종, 골수종 및 백혈병, 또는 전형적으로 고형 덩어리를 형성하지 않기 때문에 자연적으로 확산되는 신생물을 말한다. 백혈병의 특정 예로는 급성 및 만성 림프아구성, 골아구성(myeolblasitc) 및 다발 골수종을 포함한다.
이러한 장애들은 신생물 또는 암을 포함하는데, 이들은 임의의 세포 또는 조직 유형, 가령, 암종, 육종, 흑색종, 전이성 장애들 또는 조혈 신형성 장애들에 실질적으로 영향을 줄 수 있다. 전이성 종양은 유방, 폐, 갑상선, 두경부, 뇌, 림프, 위장관 (입, 식도, 위, 소장, 결장, 직장), 비뇨생식관 (자궁, 난소, 자궁목, 방광, 고환, 음경, 전립선), 신장, 췌장, 간, 뼈, 근육, 피부, 등등을 포함하나, 이에 국한되지 않는 다수의 일차 종양 유형으로부터 발생될 수 있다.
암종은 상피 또는 내분비 조직의 악성을 말하며, 그리고 호흡계 암종, 위장관계 암종, 비뇨생식계 암종, 고환 암종, 유방 암종, 전립선 암종, 내분비계 암종, 및 흑색종을 포함한다. 예시적인 암종은 자궁목, 폐, 전립선, 유방, 두경부, 결장, 간 및 난소로부터 형성된 것들을 포함한다. 용어는 또한 암육종, 가령, 암종성 그리고 육종성 조직으로 구성된 악성 종양을 포함한다. 선암종은 샘(glandular) 조직의 암종을 포함하는데, 또는 종양은 샘 유사 구조를 형성한다.
육종은 중간엽 세포 기원의 악성 종양을 말한다. 예시적인 육종은 예를 들면, 림프육종, 지방육종, 골육종, 및 섬유육종을 포함한다.
본 명세서에서 이용된 바와 같이, 용어 "조혈 증식성 장애"는 조혈 기원, 가령, 골수, 림프 또는 적혈구 계통, 또는 이의 선조 세포들로부터 발생되는 과형성/신형성 세포들과 관련된 질환을 말한다. 전형적으로, 상기 질환은 열악하게 분화된 급성 백혈병, 가령, 적혈모구 백혈병 및 급성 거대핵모세포 백혈병으로부터 발생된다. 추가적으로 예시적인 골수성 장애들은 급성 전골수성 백혈병 (APML), 급성 골수성 백혈병 (AML) 및 만성 골수성 백혈병 (CML)을 포함하나 이에 국한되지 않으며; 림프구성 악성은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL)을 포함하나 이에 국한되지 않으며, B-계통 ALL 및 T-계통 ALL, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 전림프구성 백혈병 (PLL), 모(hairy) 세포 백혈병 (HLL) 및 Waldenstrom의 고분자글로블린혈증 (WM)을 포함한다. 추가적인 악성 림프종은 비-Hodgkin 림프종 및 이의 변이체들, 주변 T 세포 림프종, 성인 T 세포 백혈병/림프종 (ATL), 피부 T-세포 림프종 (CTCL), 거대 과립 림프구성 백혈병 (LGF), Hodgkin 질환 및 Reed-Sternberg 질환을 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
본 발명 화합물들과 복합되어 이용가능한 치료는 본 명세서에서 논의된 또는 당업계에 공지된 임의의 항-증식성, 핵산 손상 또는 항-종양 치료를 포함한다. 예를 들면, 항-세포 증식성 또는 항-종양 치료는 임의선택적으로 약물 치료와 복합하여 방사선 치료 또는 외과적 절제술을 포함할 수 있다. 상기 치료는 화학 물질, 이를 테면 방사선동위원소, 약물, 이를 테면 화학요법적 물질, 또는 유전 요법, 이를 테면 항-종양유전자 (가령, Rb, DCC, p53, 등등), 우성 음성 종양유전자 또는 종양유전자에 대한 안티센스의 투여를 포함할 수 있다. 상기 화합물들은 다른 치료 프로토콜에 앞서, 동시에 또는 다음에 투여될 수 있다. 절제(술) 예를 들면, 항-세포 증식성 요법 (가령, 방사선 요법, 화학요법, 유전자 요법, 외과적 절제술, 등등)의 후보 대상에게 상기 항-세포 증식성 요법을 개시하기에 앞서, 본 발명의 화합물이 투여될 수 있다. 따라서, 예방 치료 방법들이 제시된다.
용어 "대상"은 동물, 전형적으로 포유류 동물, 이를 테면 영장류 (인간, 원숭이, 긴팔원숭이, 침팬지, 오랑우탄, 마카크(macaques)), 가축 (개와 고양이), 농장 동물(말, 소, 염소, 양, 돼지) 그리고 실험실 동물(마우스, 렛, 토끼, 기니아 피그)를 지칭한다. 대상은 동물 질환 모델 (가령, 종양을 가진 마우스)를 포함한다.
치료에 적절한 대상은 현재 치료를 받는 대상을 포함하거나 또는 증식성 또는 분화성 장애 또는 (가령, 항-종양 요법)의 치료 후보가 된다. 추가 후보 대상에는 예를 들면, 세포 증식성 장애 발생 위험에 처한 대상이 포함된다. 따라서 본 발명 방법은 세포 증식성 장애가 발생할 위험에 있지만, 아직 이 장애의 증상이 명백하게 나타나지 않은 대상의 치료에 적용될 수 있다. 위험에 처한 대상은 유전 질병소질을 가진 또는 세포 증식성 장애 발생에 대한 가족력으로 식별될 수 있다. 예를 들면, 활성화된 종양유전자를 보유하거나 또는 종양 억제 유전자의 돌연변이 또는 결손이 있는 대상이 후보가 된다. 위험에 처한 대상은 대상이 장애의 위험에 처해있는지를 확인하기 위하여 유전 병소의 존재에 대한 통상적인 유전적 스크리닝을 이용하여 식별될 수 있거나, 또는 대상의 가족력을 문진하여 식별될 수 있다. 위험에 처한 대상의 특정 예는 가족력을 가진 대상 또는 암에 대한 질병소질을 나타내는 다른 유전적 특징을 가진 대상이 될 수 있으며, 이‹š 신형성 또는 약물-저항성 신형성 세포들은 CD40를 발현시킨다. 유전 질환의 특이적 예는 망막모세포종이며, Rb 종양 억제 유전자의 결함에 의해 야기된다.
투여되는 양은 일반적으로 원하는 효과를 얻는데 충분한 양이 되는 "유효량(effective amount)" 또는 "충분한 양(sufficient amount)"이다. 따라서, 유효량은 세포 증식을 감소시키는, 세포의 수를 감소시키는, 증가된 증식을 저해시키는, 세포의 증가를 저해시키는, 자가사멸을 증가시키는, 또는 증식하는 세포을 포함하는 세포의 최소한 일부의(가령, 표적 세포의 최소한 일부) 생존을 감소시키는 것중 하나 또는 그 이상을 포함한다. 따라서, 예를 들면, 세포 증식을 억제시키는 것이 바람직할 때, 유효량은 세포 증식 또는 증식하는 세포의 수를 탐지가능하도록 감소시키는, 또는 세포 자가사멸을 탐지가능하도록 증가시키는 또는 세포 생존을 탐지가능하도록 감소시키는 양이 될 것이다. 따라서, 상기 양은 표적 세포 수를 감소시키고, 표적 세포 수를 안정화시키거나 또는 표적 세포수의 증가를 저해시키는데 충분할 것이다. 예를 들면, 상기 장애가 고형 종양을 포함할 때, 종양 크기를 감소시키고, 종양 크기를 안정화시키고, 또는 종양의 추가 성장을 방지하고, 종양의 최소한 일부분의 추가 성장을 방지하는 것은 (가령 종양 덩어리를 포함하는 상기 세포들의 5-10%, 또는 10-20% 또는 그 이상의 성장을 저해) 만족스러운 임상적 종점이다. 상기 장애가 액상 종양을 포함할 때, 종양 세포 수를 감소시키고, 종양 세포 수를 안정화시키고, 또는 종양 세포 수의 추가 증가를 저해하고, 종양 세포들의 최소한 하위 집단의 세포 수의 추가 증가를 방지하는 것은 (가령 상기 세포들의 5-10%, 또는 10-20% 또는 그 이상의 성장을 저해) 만족스러운 임상적 종점이다.
추가로, 효과적이라고 고려되는 양은 상태 또는 장애의 진행을 저지 또는 저해시킬 수 있다. 예를 들면, 진행될 때 특정 종양은 전이 형태로 진행되는 것을 포함하는, 점점더 공격적으로 된다. 따라서, 효과적이라고 또한 고려되는 양은 상기 종양이 공격적으로 저해되거나 또는 전이되는 것을 감소 또는 방지할 것이다. 따라서, 장애 또는 상태의 악화를 저해 또는 저지하는 것, 가령, 상태의 안정화는 추가적인 만족스러운 임상적 종점이다.
액상 종양(가령, 혈액 또는 조직 시료)이 포함된 생물학적 시료의 검사는 종양 세포 덩어리 또는 수가 감소되었는지, 또는 종양 세포 증식의 저해가 발생되었는지를 확인할 수 있다. 고형 종양의 경우, 침습성 및 비-침습성 영상촬영 방법은 종양 크기의 감소, 또는 종양 크기의 증가 저해를 확인할 수 있다. 수용체 양성 종양의 수용체의 수 감소를 이용하여 종양 세포 증식의 감소 또는 저해를 평가할 수 있다. 종양 가령, 유방, 고환, 또는 난소 암을 생산하는 호르몬의 양을 이용하여 종양의 감소 또는 증식의 저해를 평가할 수 있다.
유효량은 상기 장애 또는 상태와 연합된 증상의 심각성 또는 빈도를 또한 객관적으로 또는 주관적으로 줄이거나 또는 감소시킬 수 있다. 예를 들면, 통증, 매스꺼움 또는 기타 불편함을 감소시키거나, 또는 식욕 또는 주관적인 행복을 증가시키는 본 발명의 화합물의 양은 만족스러운 임상적 종점이다.
유효량은 상기 양 (가령, 투여량) 또는 또다른 프로토콜을 이용한 치료 빈도의 감소를 또한 포함하는데, 이는 만족스러운 임상적 종점으로 고려된다. 예를 들면, 본 발명의 화합물로 치료를 받은 암 환자는 암 세포 증식을 저해시키기 위한 핵산 손상 치료를 덜 필요로 할 수 있다. 이 예시에서, 유효량은 본 발명의 화합물의 치료를 받지 않았을 때 투여되는 투여량 빈도 또는 양과 비교하였을 때, 대상에게 투여되는 핵산 손상 물질의 투여량 빈도 또는 양을 감소시키는 양을 포함할 것이다.
대상의 상태 또는 치료요법적 잇점의 개선으로 이어지는 본 발명의 방법은 기간의 상대적인 짧음일 수 있는데, 가령, 개선은 몇 시간, 몇 일 또는 몇 주 또는 더 긴 시간, 가령 몇 달 또는 몇 년 이상으로 연장될 수 있다. 유효량은 상태 또는 장애의 임의의 또는 모든 중상을 완전하게 제거할 필요는 없다. 따라서, 단기 또는 장기적인 기간 동안 상기 장애 또는 상태의 상태를 판단하기 위하여 전술한 기준 또는 당업계 공지된 임의의 기준을 이용하여 판단하였을 때 대상의 상태가 주관적 또는 객관적 개선이 있을 때 유효량의 만족스러운 임상적인 종점은 획득된다. 본 명세서에서 설명된 또는 당분야에 공지된 바와 같이 하나 또는 그 이상의 유익한 효과를 제공하는 유효량은 대상의 상태의 "개선" 또는 대상에게 "치료요법적 잇점"으로 지칭된다.
본 발명의 화합물의 유효량은 동물 연구 또는 임의선택적으로 인간 임상 시험을 기반하여 결정될 수 있다. 당업자는 특정 대상을 치료하는데 요구되는 투여량 및 시기에 영향을 주는 다양한 인자들 예를 들면, 대상의 전반적인 건강, 연령, 또는 성별, 또는 상기 장애 또는 상태의 심각성 또는 단계, 기존 치료, 바람직하지 못한 부작용에 대한 민감성, 원하는 임상적 결과 및 다른 장애 또는 상태의 존재 유무가 포함된 다양한 인자들을 인지할 것이다. 이러한 인자들은 치료요법적 잇점을 위한 충분한 양을 제공하는데 요구되는 투여량 및 시기에 영향을 줄 수 있다. 투여량 섭생은 약물동력학, 가령, 약제학적 조성물의 흡수율, 생체이용성, 대사 및 제거를 또한 고려한다(가령, Egleton (1997) "Bioavailability and transport of peptides and peptide drugs into the brain" Peptides 18:1431-1439; and Langer (1990) Science 249:1527-1533). 또한, 투여분량 또는 치료 프로토콜은 대상에게 특별히 맞춤화되거나 또는 게놈약학(pharmacogenomic) 데이터에 근거하여 변형될 수 있다.
따라서, 본 발명의 화합물은 임의의 프로토콜 또는 원하는 효과를 획득하는 경로에 따라, 단독으로 또는 약제학적 조성물로, 전신으로, 또는 지역적으로 (가령, 간의 세포 증식성 장애를 치료하기 위하여 간문액으로 주사에 의해 장기 또는 조직을 지향하도록) 또는 국소적으로(종양 덩어리에 직접적으로) 투여될 수 있다. 상기 화합물들 및 약제학적 조성물은 매일 단일 또는 다중 투여분량 (가령, 낮은 투여분량에서), 또는 간헐적으로 (가령, 더 높은 투여분량으로 이틀에 한번, 일주일에 한번, 기타등등) 투여될 수 있다. 상기 화합물들 및 약제학적 조성물은 다중 투여, 지속적 방출(가령, 시간을 두고 점전직 관류) 또는 단일 볼루스를 통하여 흡입 (가령, 기관내), 경구, 정맥내, 동맥내, 맥관내, 척추강내, 복막내, 근육내, 피하내, 공동내, 경피(가령, 국소), 경점막 (가령, 볼, 방광, 질, 요도, 직장, 또는 바강)을 통하여 투여될 수 있다. 약물 투여를 위한 미세 직조된 장치가 포함된 이식가능한 장치는 공지되어 있으며, 대상에게 본 발명의 화합물을 전달하는데 또한 응용될 수 있다.
정맥(IV)으로 투여되는 화합물은 몇 시간에 걸쳐(전형적으로, 1, 3, 6 시간) 약 0.01 mg/hr 내지 약 1.0 mg/hr이 될 수 있고, 간절적 주기로 1 또는 그 이상의 주동안 반복될 수 있다. 혈류가 아닌 고립된 부위, 이를 테면 신체강 또는 장기의 내강, 가령, 뇌척수액(CSF)으로 투여될 때, 상당히 더 높은 투여분량 (가령, 최대 약 10 mg/ml까지)이 이용될 수 있다.
본 발명은 따라서 약제학적 조성물을 더 제공한다. 이러한 약제학적 조성물은 대상에게 생체내 또는 생체외 투여용으로 유용하며, 그리고 예를 들면, 본 발명 화합물들로 대상을 치료하는데 유용하다.
본 명세서에서 이용된 바와 같이 용어 "약제학적으로 수용가능한" 및 "생리학적으로 수용가능한"이란 약학적 투여와 필적되는 용매 (수성 또는 비-수성), 용액, 에멸젼, 분산 매질, 코팅, 등장성 또는 흡수 촉진 또는 지연 물질들을 포함한다. "약제학적 조성물" 또는 "약제학적 제형"은 따라서 대상에게서 약제학적으로 사용하기에 적합한 조성물을 지칭한다. 상기 약제학적 조성물 및 제형은 본 발명의 화합물의 양, 예를 들면, 펩티드 또는 펩티도모방체의 유효량, 이를 인코드하는 핵산, 벡터, 또는 본 발명의 세포, 그리고 약제학적으로 또는 생리학적으로 수용가능한 운반체를 포함한다.
약제학적 조성물은 특정 투여 경로, 전신 또는 국소에 양립가능하도록 제형화될 수 있다. 따라서, 약제학적 조성물은 다양한 경로에 의해 투여되기에 적합한 운반체, 희석제, 또는 부형제를 포함한다.
제형 또는 장내 (경구) 투여는 정제 (피복된 또는 피복안된), 캡슐 (경질 또는 연질), 미소구, 에멸젼, 분말, 과립, 결정, 현탁액, 시럽 또는 엘륵시르 안에 포함될 수 있다. 예를 들면, 약제학적 등급의 만니톨, 락토즈, 전분, 스테아레이트 마그네슘, 사카린 나트륨, 활석, 셀룰로오즈, 포도당, 슈크로즈, 탄산 마그네슘을 포함하는 통상적인 비독성 고형 운반체가 고형 제형을 만드는데 이용될 수 있다. 보조적인 활성 화합물들 (가령, 보존제, 항균, 항바이러스 및 항곰팡이 물질들)이 상기 제형에 또한 포함될 수 있다. 장내 투여용으로 액상 제형이 또한 이용될 수 있다. 상기 운반체는 석유, 동물 및 식물 또는 합성 오일이 포함된 다양한 오일, 예를 들면, 땅콩유, 콩기름, 미네랄 오일, 참기름으로부터 선택될 수 있다. 적합한 약제학적 부형제는 가령, 전분, 셀룰로오즈, 활석, 포도당, 락토즈, 슈크로즈, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 석회분말, 실리카 겔, 스테아레이트 마그네슘, 스테아레이트 나트륨 모노스테아레이트 글리세롤, 염화 나트륨, 건조 탈지우유, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 물, 에탄올을 포함한다.
장내, 장관외, 또는 경점막 운반용 약학 조성물은 예를 들면, 물, 염수, 인산염 완충된 염수, Hank 용액, Ringer 용액, 덱스트로즈/염수, 그리고 포도당 용액을 포함한다. 상기 제형은 생리학적 조건에 근겁하도록 보조 물질, 이를 테면 완충 물질, 등장성 조정 물질, 가습 물질, 세제 그리고 이와 유사한 것들을 포함할 수 있다. 첨가제는 추가 활성 성분들, 이를 테면 정균 물질, 또는 안정화제를 또한 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 용액은 아세테이트 나트륨, 락테이트 나트륨, 염화 나트륨, 염화 칼륨, 염화 칼륨, 모노라우레이트 소르비탄 또는 올레이트 트리에탄올아민을 포함할 수 있다. 추가 장관외 제형 및 방법들은 Bai (1997) J. Neuroimmunol. 80:65-75; Warren (1997) J. Neurol. Sci. 152:31-38; 그리고 Tonegawa (1997) J. Exp. Med. 186:507-515에서 설명된다. 장관외 제형은 엠플, 1회용 주사기 또는 유리 또는 플라스틱으로 만들어진 다중 투여분량의 바이알 안에 포함될 수 있다.
피내 또는 피하 투여용 약학 조성물은 멸균 희석액, 이를 테면 물, 염수 용액, 고정된 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 기타 합성 용매; 항균 물질, 이를 테면 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 이를 테면 아스코르브산, 글루타티온 또는 중아황산 나트륨염; 킬레이팅 물질 이를 테면 에틸렌디아민테트라아세트산; 완충액 이를 테면 아세테이트, 시트레이트 또는 인산염 및 등장성 조절 물질, 이를 테면 염화 나트륨 또는 덱스트로즈를 포함할 수 있다.
주사용 약학 조성물은 수성 용액(물 가용성) 또는 분산액과 멸균 주사용 용액 또는 분산의 임기 조제용 멸균 분말을 포함할 수 있다. 정맥내 투여용으로 적합한 운반체는 생리학적 염수, 세균발육저저용 물, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, NJ) 또는 인산염 완충된 염수 (PBS)를 포함한다. 상기 운반체는 예를 들면, 물, 에탄올, 폴리올 (가령, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 및 이와 유사한 것들), 그리고 이들의 적합한 혼합물들이 포함된 용매 또는 분산액 매질이 될 수 있다. 예를 들면, 피복제, 이를 테면 레시틴의 이용에 의해, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면활성제의 이용에 의해 유동성이 유지될 수 있다. 항균 및 항곰팡이 물질은 예를 들면, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산 및 티메라졸을 포함한다. 등상정 물질, 예를 들면, 슈가, 다가알코올, 이를 테면 만니톨, 소르비톨, 염화나트륨이 조성물에 포함되는 것이 바람직할 것이다. 생성 용액은 사용을 위하여 그대로 포장되거나, 또는 동결건조되고, 동결건조된 조제물은 추후 투여 전 멸균 용액과 복합될 수 있다.
약제학적으로 수용가능한 운반체는 흡수 또는 제거의 안정화, 증가 또는 지연시키는 화합물을 포함할 수 있다. 이러한 화합물들은 예를 들면, 탄수화물, 이를 테면 포도당, 슈크로즈, 또는 덱스트란; 저분자량 단백질들; 펩티드 제거 또는 가수분해를 감소시키는 조성물; 또는 부형제 또는 기타 안정화제 및/또는 완충액을 포함한다. 흡수를 지연시키는 물질은 예를 들면, 모노스테아레이트 알루미늄 및 젤라틴을 포함한다. 세제는 리포좀 운반체를 포함하는 약제학적 조성물의 흡수를 안정화, 또는 증가 또는 감소시키는데 또한 이용될 수 있다. 상기 화합물의 소화(digestion)으로부터 보호는 조성물이 산성, 효소적 가수분해에 대한 조성물을 제공하는 조성물과 복합될 수 있거나, 또는 상기 조성물은 적절한 저항성 운반체, 이를 테면 리포좀과 복합될 수 있다. 소화로부터 화합물을 보호하는 수단은 당분야에 공지되어 있다 (가령, Fix (1996) Pharm Res. 13:1760-1764; Samanen (1996) J. Pharm. Pharmacol. 48:119-135; 그리고 치료 물질의 경구 전달을 위한 액체 조성물을 설명하는 U.S. 특허 5,391,377 참고).
경점막 또는 경피 투여를 위하여, 침투되어야 하는 장벽에 적절한 침투제가 제형에 이용된다. 이러한 침투제들은 일반적으로 당업계에 잘 공지되어 있는데, 예를 들면, 경점막 투여를 위하여, 세제, 담즙염 및 푸시드산 유도체를 포함한다. 경점막 투여는 비강 스프레이 또는 좌약을 통하여 이루어질 수 있다(가령, Sayani (1996) "Systemic delivery of peptides and proteins across absorptive mucosae" Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 13:85-184). 경피 투여를 위하여, 활성 화합물은 당분야에 일반적으로 공지된 연고, 살베(salves), 겔 또는 크림으로 제형화될 수 있다. 경피 운반 시스템은 또한 패취를 이용하여 이루어질 수 있다.
흡입 운반의 경우, 상기 약제학적 제형은 에어로졸 또는 미스트의 형태로 투여될 수 있다. 에어로졸 투여의 경우, 상기 제형은 계면활성제 및 추진제와 함께 미세하게 분할된 형태로 공급될 수 있다. 또다른 구체예에서, 호흡 조직으로 제형을 전달하는 기구에는 상기 제형이 기화되어 있다. 당분야에 공지된 기타 전달 시스템에는 건조 분말 에어로졸, 액상 전달 시스템, 흡입기, 에어 제트 네블라이져 및 추진제 시스템을 포함한다(가령, Patton (1998) Biotechniques 16:141-143; Dura Pharmaceuticals, San Diego, CA; Aradigm, Hayward, CA; Aerogen, Santa Clara, CA; 그리고 Inhale Therapeutic Systems, San Carlos, CA 참고).
생분해가능한, 생체적합성 폴리머, 이를 테면 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리안하이드리드, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르소에스테르, 그리고 폴리락트산이 이용될 수 있다. 이러한 제형을 준비하는 방법들은 당업계 숙련자들에게 잘 알려져 있다. Alza Corporation 및 Nova Pharmaceuticals, Inc으로부터 재료들을 상업적으로 구입할 수 있다. 리포좀 현탁액(항체 또는 바이러스 피복 단백질들을 이용하여 세포 또는 조직으로 표적화된 리포좀 포함)은 또한 약제학적으로 수용가능한 운반체로 이용될 수 있다. 당분야에 공지된 방법, 예를 들면, U.S. 특허 번호 4,235,871; 4,501,728; 4,522,811; 4,837,028; 6,110,490; 6,096,716; 5,283,185; 5,279,833; Akimaru (1995) Cytokines Mol. Ther. 1:197-210; Alving (1995) Immunol. Rev. 145:5-31; 그리고 Szoka (1980) Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9:467)에서 설명된 바에 따라 이들을 만들 수 있다. 펩티드를 포함하는 작은 분자의 지속적인 운반을 할 수 있는 생분해가능한 미소구 또는 캡슐 또는 다른 생분해가능한 폴리머 형태는 당분야에 공지되어 있다(가령, Putney (1998) Nat. Biotechnol. 16:153-157 참고). 본 발명의 화합물은 미셀 안에 혼입될 수 있다 (가령, Suntres (1994) J. Pharm. Pharmacol. 46:23-28; Woodle (1992) Pharm. Res. 9:260-265). 펩티드는 지질 단층 또는 이중층의 표면에 부착될 수 있다. 예를 들면, 펩티드는 하이드라지드-PEG-(디스테로일포스파티딜) 에탄올아민-포함 리포좀에 부착될 수 있다 (가령, Zalipsky (1995) Bioconjug. Chem. 6:705-708 참고). 대안으로, 임의의 형태의 지질 막, 이를 테면 평면 지질 막 또는 고유 세포, 가령, 적혈구 세포의 세포 막이 이용될 수 있다. 리포좀 및 지질-함유 제형은 임의의 수단, 예를 들면, 정맥내, 경피(가령, Vutla (1996) J. Pharm. Sci. 85:5-8 참고), 경점막, 또는 경구 투여를 포함하는 임의의 수단에 의해 전달될 수 있다.
약제학적으로 수용가능한 제형은 약 1% 내지 99.9%의 활성 성분(가령, 펩티드 또는 펩티도모방체)을 혼입할 수 있다. 상기 약제학적 조성물은 통상적인, 잘 공지된 멸균 기술에 의해 살균될 수 있고, 또는 살균-여과될 수 있다.
추가적인 약제학적 제형 및 전달 시스템은 당분야에 공지되어 있으며, 본 발명의 방법 및 조성물에 응용가능하다 (가령, Remington' s Pharmaceutical Sciences (1990) 18th ed., Mack Publishing Co., Easton, PA; The Merck Index (1996) 12th ed., Merck Publishing Group, Whitehouse, NJ; Pharmaceutical Principles of Solid Dosage Forms, Technonic Publishing Co., Inc., Lancaster, Pa., (1993); 그리고 Poznansky et al., Drug De간y Systems, R. L. Juliano, ed., Oxford, N.Y. (1980), pp. 253-315 참고)
상기 약제학적 제형은 투여의 용이함 및 투여분량의 균일성을 위하여 단위 투여량 형태로 포장될 수 있다. 본 명세서에서 이용된 바와 같이 "단위 투여량 형태(Unit dosage form)"는 치료될 대상에게 투여하기 위한 물리적으로 별개의 단위 투여량을 말하며, 각 단위에는 약제학적 운반체 또는 부형제와 복합되어, 원하는 효과를 내는 화합물의 사전결정된 양을 포함한다.
다음은 본 명세서에서 이용된 약어들이다:
Cha: 시클로헥실-알라닌
Phe -2,3,4,5,6-F: 불화물은 페닐알라닌의 페닐 잔기 상 위치 2, 3, 4, 5, 6에 있다.
F: 불화물
Bpa: 벤조일-페닐알라닌
Nal (2): 2-나프틸-알라닐
Ala(3- Bzt ): (3-벤조티에닐)-알라닌
Nal (1): 1-나프틸-알라닐
Dph: 디페닐-알라닌
Ala( tBu ): t-부틸-알라닐
Cys ( tBu ): t-부틸-시스테인
Phe -3,4,5-F: 불화물은 페닐알라닌의 페닐 상에 위치 3, 4, 5에 있다.
Phe - 4CF3: CF3은 페닐알라닌의 페닐 잔기의 위치 4에 있다.
Phe - 3Br,4Cl,5Br: 브롬화물은 페닐알라닌의 페닐의 위치 3에 있고, 염화물은 페닐알라닌의 페닐의 위치 4에 있고, 그리고 브롬화물은 페닐알라닌의 페닐의 위치 5에 있다.
Phe - 4Cl: 염화물은 페닐알라닌의 페닐의 위치 4에 있다.
P1, P2, P3, P4, P5, P6, 등등, 및 (P1, P2, P3, P4, P5, P6, 등등); 그리고 P7, P8, P9, P10, P11, P12, 등등, 및 (P7, P8, P9, P10, P11, P12, 등등): 차례로 P1, P2, P3, P4, P5, P6, 등등; 그리고 P7, P8, P9, P10, P11, P12의 연속 서열.
다른 언급이 없는 한, 본 명세서에서 이용된 모든 기술적 그리고 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 분야의 통상적 숙련자에 의해 흔히 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에서 설명된 것과 유사한 또는 대등한 임의의 방법들 및 재료들이 본 발명의 실행 또는 테스트에 이용될 수 있지만, 적절한 방법들 및 재료들은 본 명세서에서 설명된다.
또한 본 명세서에서 언급된 모든 특허 및 참고자료는 이들의 전문이 참고자료에 편입된다. 충돌이 있는 경우 정의를 포함하는 본 명세서가 조정할 것이다.
본 명세서에서 이용된 바와 같이, 단수("a", "그리고" 및 "the")는 다른 명시적인 언급이 없는 한 복수 개념을 포함한다. 따라서, 예를 들면, "화합물"에 대한 언급은 다수의 화합물을 포함하며, "잔기" 또는 "아미노산"에 대한 언급은 하나 또는 그 이상의 잔기 및 아미노산에 대한 언급을 포함한다.
본 발명의 다수의 구체예들이 설명되었다. 그럼에도 불구하고, 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 다양한 변형이 있을 수 있음을 인지할 것이다. 따라서, 다음의 예들은 청구범위에서 설명된 본 발명의 범위를 설명하고자 하는 의도이나 이에 한정되지 않는다.
실시예들
실시예 1
본 실시예는 재료 및 몇 가지 방법들을 설명한다. 본 실시예는 분석된 펩티드/펩티드모방체의 서열을 또한 설명한다.
화학물질 및 시약 블레오마이신은 Wako Pure Chemical Co. (Osaka, Japan)에서 구입하였고, 증류된 H2O에 10 mg/ml로 용해시켰다. 프로피디움 요오드화물 (PI)과 아드리아마이신은 Sigma (St. Louis, MO)로부터 구입하였다.
세포 배양 인간 T-세포 백혈병-유도된 세포 계통, Jurkat은 37℃/5% CO2에서 10% 태아 송아지 혈청(IBL: Immuno-Biological Laboratories, Gunma, Japan)이 보충된 RPMI 1640에서 배양되었다. 인간 췌장암 유도된 세포 계통, MIAPaCa2는 37℃/5% CO2에서 10% 태아 송아지 혈청과 함께 DMEM에서 배양되었다.
세포-주기 분석 블레오마이신 또는 아드리아마이신으로 처리된 세포들의 세포 주기 상태는 Kawabe (1997) Nature 385:454-458에서 설명된 바와 같이 유동 세포측정에 의해 분석되었다. 간략하게 설명하자면, 2백만개 세포를 200 μl Krishan 용액 (0.1% 시트레이트 나트륨, 50 μg/ml PI, 20 μg/ml RNase A 및 0.5% NP-40)에 재현탁시키고, 1 시간 동안 4℃에서 배양한 후, 프로그램 CELLQuest™ (Beckton Dickinson)을 이용하여 유동 세포측정기 FACScan™ (Beckton Dickinson, Mountain View, CA)에 의해 분석되었다.
Figure 112015127587684-pct00001
Figure 112015127587684-pct00002
실시예 2
본 실시예는 다양한 펩티드의 G2 실효 활성을 나타내는 데이터, 그리고 서열 길이의 감소 효과가 포함된 다양한 서열의 순열치환(permutations)의 효과를 나타낸다.
G2 체크포인트 실효의 유동 세포측정 분석은 인간 백혈병 유도된 Jurkat 세포 계통을 이용하여 실행되었다. 간략하게 설명하자면, 배양된 세포들은 다양한 투여분량의 펩티드/펩티도모방체와 40μg/ml 블레오마이신으로 24 시간 동안 처리되었다. 세포들의 DNA는 프로피디움 요오드화물로 착색되었고, 유동 세포측정에 의해 분석되었다. 이들 결과는 표 2에 요약되었다.
블레오마이신 처리된 Jurkat 세포들에 대하여 이용된 각 펩티드/펩티도모방체의 투여분량 반응 곡선은 도 1, 5, 6, 7, 8, 11 및 12에 나타내며; Y-축은 치료 후 24시간 시점에서 G2/M Jurkat 세포 %을 나타낸다.
이들 화합물에 의한 M 단계 체크포인트 실효의 유동 세포측정 분석은 콜히친 (5μg/ml 또는 0.5μg/ml) 및 다양한 투여 분량의 펩티드/펩티드모방체로 24 시간 동안 처리된 인간 T 세포 백혈병 Jurkat 세포 계통 (도 12)에서 실행되었다. 세포들의 DNA는 상기에서 설명된 바와 같이 착색되었고, 유동 세포측정에 의해 분석되었다. 이들 결과는 표 2에 또한 요약되었다.
콜히친 처리된 Jurkat 세포들에 대하여 이용된 각 펩티드/펩티도모방체의 투여분량 반응 곡선은 도 2 및 14에 나타내며; Y-축은 치료 후 24시간 시점에서 G2/M Jurkat 세포 %을 나타낸다.
Figure 112015127587684-pct00003
"단독으로 사용될 때 부작용의 출현"이란 Jurkat 세포 주기 교란, 가령, SubG1 세포들 (죽은 세포들) 또는 각각의 DNA 함량이 평상시보다 더 많이 변화되는 세포들의 상당한 양이 출현하는 상기 펩티드/펩티도모방체 투여분량을 나타낸다. 예를 들면, G1 세포들은 FACS 분석에서 예리한 피크를 보통 나타내지만, 치료후 세포 주기가 교란된 경우 상기 피크는 더 넓어지고 더 낮아지며, 이는 세포 주기 진행이 부적절하거나 또는 세포 사멸이 시작되었음을 나타내는 것이다. "G2 실효 투여분량"은 24시간 치료 후 탐지가능한 G2 체크포인트 실효 활성을 나타내는 40μg/ml 블레오마이신과 상기 펩티드/펩티도모방체의 투여분량을 나타낸다. "콜히친과 함께 이용될 때 부작용의 출현"은 24 시간 동안 치료 후 Jurkat 세포 주기 교란을 만드는 5μg/ml 콜히친과 상기 펩티드/펩티도모방체의 투여분량을 나타낸다.
시스-플라틴과 복합되었을 때 CBP501의 G2 체크포인트 실효 활성이 다양한 세포 계통에서 연구되었다. 간략하게 설명하자면, 시스-플라틴 (3μg/ml) 및 CBP501 (0.4, 2 및 10μM)는 5% CO2와 함께 37도씨에서 3시간 동안 배양된 세포 배양물에 동시에 첨가되었다. 상기 배지는 흡출되었고, 이들 화합물이 없는 새로운 배지가 추가되었고, 상기 세포들은 추가 45시간 동안 배양되었다. 부유하는 세포들이 포함된 세포들은 트립신-EDTA 용액을 이용하여 회수하였고, Krishan 용액으로 항온처리하고, 앞서 설명된 바와 같이 유동 세포측정에 의한 DNA 함량에 대하여 분석되었다. 이들 결과는 표 3에 요약되었다. HUVEC이외에 음영된 강조부분은 G2 집단이 상당히 손실되고, 하위G1 집단이 증가된 세포 계통을 나타내며, G2 체크포인트 실효 및 CBP501에 의한 민감화를 나타낸다. 정상 G1 체크포인트를 가진 세포인 HUVEC 세포들은 최소한 최대 50μM CBP501에 민감화되지 않았다는 관찰에서 CBP501은 비특이적이라기 보다는 G2 체크포인트에 특이적임을 나타낸다.
Figure 112015127587684-pct00004
블레오마이신 (Bleo) 또는 아드리아마이신 (ADR)로 처리된 인간 췌장암 유도된 세포 계통 MIAPaCa2에서 상이한 투여분량의 다양한 화합물의 G2 체크포인트 실효 활성이 연구되었다. 간략하게 설명하자면, 세포들은 3시간 동안 화합물들과 블레오마이신 (10μg/ml) 또는 아드리아마이신 (1μg/ml)으로 항온처리되었다. 배지는 교환되었고, 추가 21 시간 동안 항온처리되었다. 회수된 세포들은 프로피움 요오드화물에 의해 DNA 착색되었고, 앞서 설명된 바와 같이 유동 세포측정으로 분석되었다. 하위-G1 세포 집단의 %는 도 3에서 죽은 세포로 표시된다. 결과에서, 투여분량 의존적 방식으로 CBP501은 MIAPaCa2 세포를 블레오마이신과 아드리아마이신 모두에 대해 민감화시켰음을 나타낸다.
도 4a와 4c는 하나의 아미노산 잔기가 서로 상이한 펩티드 쌍으로 실행된 G2 체크포인트 실효 활성의 요약이다. 이들 펩티드의 G2 체크포인트 실효 활성은 상기에서 설명된 바와 같이, 블레오마이신 처리된 Jurkat 세포들을 이용하여 분석되었다. 도 4b는 하나의 아미노산 잔기가 서로 상이한 펩티드 쌍으로 실행된 M 체크포인트 실효 활성 및/또는 비특이적 독성 분석의 요약이다. 이들 펩티드의 M 체크포인트 실효 활성 및/또는 비특이적 독성은 상기에서 설명된 바와 같이, 콜히친 처리된 Jurkat 세포들을 이용하여 분석되었다.
블레오마이신으로 처리된 세포들에서 상이한 투여분량의 다양한 아르기닌 많은 서열들의 G2 체크포인트 실효 활성이 연구되었다. 간략하게 설명하자면, 펩티드는 블레오마이신 (40μg/ml)과 함께 0.2μg/ml, 0.39μg/ml, 0.78μg/ml, 1.56μg/ml, 3.125μg/ml, 6.25μg/ml, 12.5μg/ml, 25μg/ml 및 50μg/ml으로 Jurkat 세포의 배양 배지에 추가되었다. 후속적으로 세포들은 24시간 후에 수거되었고, Krishan 용액으로 착색되었고, 앞서 설명된 바와 같이 유동 세포측정으로 분석되었다. 도 5에서 G2/M 세포 % (Y-축)는 상기 펩티드 투여분량 (X-축)에 대하여 플롯되었다. 데이터에서 "(d-Arg) (d-Arg) (d-Arg)(d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (서열 번호:137)" 염기성 잔기가 많은 서열은 잔기의 수가 더 적은 또는 더 많은 서열과 비교하여 최고의 서열임이 드러났다.
블레오마이신으로 처리된 세포들에서 상이한 투여분량에서 (D-Bpa)없는 펩티드의 G2 체크포인트 실효 활성이 연구되었다. 간략하게 설명하자면, 펩티드는 블레오마이신 (40μg/ml)과 함께 0.2μg/ml, 0.39μg/ml, 0.78μg/ml, 1.56μg/ml, 3.125μg/ml, 6.25μg/ml, 12.5μg/ml, 25μg/ml 및 50μg/ml으로 Jurkat 세포의 배양 배지에 추가되었다. 후속적으로 세포들은 수거되었고, 그리고 앞서 설명된 바와 같이 유동 세포측정으로 분석되었다. 도 6에서 G2/M 세포 % (Y-축)는 상기 펩티드 투여분량 (X-축)에 대하여 플롯되었다. 이 결과에서 서열 (Tyr)(Ser)(Pro)(Trp)(Ser) (Phe-2,3,4,5,6F)(Cha) (서열 번호:138)은 서열 (Bpa)(Ser)(Trp)(Ser)(Phe-2,3,4,5,6F)(Cha) (서열 번호:139)과 필적할 만한 G2 체크포인트 실효 활성을 보유하는 것으로 드러났다.
블레오마이신으로 처리된 세포들에서 상이한 투여분량의 아르기닌 많은 서열과 리신 많은 서열의 G2 체크포인트 실효 활성이 연구되었다. 간략하게 설명하자면, 펩티드는 블레오마이신 (40μg/ml)과 함께 표시된 투여분량(X-축)으로 Jurkat 세포의 배양 배지에 추가되었다. 후속적으로 세포들은 수거되었고, 그리고 앞서 설명된 바와 같이 유동 세포측정으로 분석되었다. 도 7에서 G2/M 세포 % (Y-축)는 상기 펩티드 투여분량에 대하여 플롯되었다. 이 결과에서 Arg 서열은 염기성 아미노산 많은 서열의 경우 Lys 서열보다는 더 나은 활성을 제공하며, 상기 서열의 기능에 Gln은 필수적인 것이 아닌 것으로 보인다.
아르기닌 많은 영역의 위치가 변화된 서열들의 G2 체크포인트 실효 활성이 연구되었다. 간략하게 설명하자면, 펩티드는 블레오마이신 (40μg/ml)과 함께 표시된 약량 (X-축)으로 24 시간 동안 Jurkat 세포의 배양 배지에 추가되었다. 후속적으로 세포들은 수거되었고, 그리고 앞서 설명된 바와 같이 유동 세포측정으로 분석되었다. 도 8에서 G2/M 세포 % (Y-축)는 상기 펩티드 투여분량에 대하여 플롯되었다.
데이터에서 상기 펩티드의 G2 실효 활성은 아르기닌 많은 영역의 위치 변형에 의해 유의적으로 변경되지 않음이 나타났다. 또한, CBP501은 물에 가용성이었지만, CBP511은 아니었다. 이 차이는 특정 약물 전달계에 유익할 수 있는데, 그 이유는 일부 시스템은 물 불용성 화합물들을 선호하기 때문이다.
도 9는 다양한 펩티드 쌍들 간에 단지 하나의 아미노산 잔기만이 상이한 다양한 펩티드 쌍에서 실행된 분석의 요약을 설명한다. 이들 펩티드의 G2 체크포인트 실효 활성은 설명된 바와 같이, 블레오마이신 처리된 Jurkat 세포들을 이용하여 분석되었다.
각 아미노산의 크기, 전하 및 소수성은 상기 서열에 표적 분자에 얼마나 효과적으로 맞춰지는지를 결정한다. 상기 펩티드 또는 펩티도모방체의 측쇄는 자유롭게 움직일 것이며, 하나 또는 두 개의 비우호적인 측쇄를 가지고 있더라도 상기 펩티드 또는 펩티도모방체는 표적 분자의 주머니 또는 홈에 맞을 것이다. 각 측쇄에 있어서 선호되는 크기가 있고, 이는 각 측쇄에 대한 표적 단백질의 결합 영역(주머니 또는 홈)의 크기가 제안된다는 것을 요약에서 나타낸다. 예를 들면, 링 구조, 이를 테면 벤젠, 인돌 및 시클로헥산을 가진 측쇄는 G2 실효 또는 M 실효 및/또는 비특이적 독성의 강도를 결정하며; 도 9 및 4 참고, 이때 5개 원 이상의 링 구조는 G2 실효 활성에 영향을 주며 (P1 및 P2에서 중간 크기는 G2 실효 활성을 증가시키고, 반면 너무 큰 구조 (P1, P5 및 P6)는 M 실효 및/또는 비특이적 독성을 증가시킨다.
링 구조가 없는 측쇄는 중립을 나타낸다. 따라서, 더 나은 활성을 얻기 위하여, P1, P2, P4 및 P6에서 적절한 크기의 링 구조, 또는 P3 및 P5에서 링 구조가 없거나 또는 6 원 미만의 링 구조가 바람직하다. P1, P2, 및 P6에 적절한 링은 5 또는 6원의 두 개 링의 융합을 통하여 1 내지 6원 링이다. P4의 경우, 적절한 크기 링은 두 개 링의 융합인데, 각각 5 또는 6 원 링이다. 따라서, P1의 경우, Cha 또는 Nal(2)가 가장 잘 맞는 것으로 보이며; P2의 경우, Phe-2,3,4,5,6F, Phe-3,4,5F 또는 Phe-CF3가 가장 잘 맞는 것으로 보인다. 이들 측쇄 크기는 표적 분자 안에 2개의 주머니 또는 하나의 더 큰 주머니가 있고, 이 영역이 상호작용함을 나타낸다. P3 및 P5의 경우, 작은 측쇄, 이를 테면 Ser 또는 Pro은 수용가능하며, 더 큰 측쇄, 이를 테면 Arg 또한 수용가능하고, 표적 분자의 이 영역에는 주머니가 없으며, 따라서 측쇄들은 단지 표적에 마주하게 놓여 있음을 나타낸다. 그러나, 링 구조는 상기 펩티드 또는 펩티도모방체가 또다른 분자 (가령, 표적 분자 이외의)와 상호작용하게 할 수 있고, 이로써 부작용이 증가될 가능성이 있다. P6의 경우, Bpa 또는 Ser-Tyr는 Tyr 단독 또는 더 작은 측쇄보다 우수한 것으로 보이며, 이는 표적에 수평으로 놓여있는 더 깊은 홈을 나태난다. P4에 대한 잔기의 크기에 근거하여 표적 안에 P4용 얕고 더 넓은 주머니가 또한 있을 수 있다.
다음 펩티드는 설명된 바와 같이 Jurkat 및 블레오마이신을 이용하여 분석되었다. 펩티드 서열은 다음과 같다: CBP501, (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (서열 번호:80); CBP700, (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa)(d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha) (서열 번호:96); CBP701, (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (서열 번호:97); CBP702, (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (서열 번호:98); 그리고 CBP703, (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg) (d-Arg) (d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha) (서열 번호:99). 기타 구체화된 펩티드보다 더 짧지만 CBP700, 701, 702, 703은 유의적인 G2 체크포인트 실효 활성을 갖는 다른 펩티드와 필적하는 G2 체크포인트 실효 활성을 유지한다는 것을 결과에서 나타낸다 (도 11).
CB501에 의해 G2 체크포인트 실효 활성과 비특이적 독성 (M 체크포인트 실효) 간의 비교가 실행되었다. 간략하게 설명하자면, G2 체크포인트 실효 활성 및 비특이적 독성에 대하여 각각 차례로 Jurkat 세포들은 40μg/ml 블레오마이신 또는 0.5μg/ml 콜히친으로 처리되었다. 각 처리된 세포들에서 DNA 양은 앞서 설명된 바와 같이 착색되었고, 유동 세포측정에 의해 분석되었다. 데이터에서 CBP501의 경우 투여분량 의존적 방식으로 G2 체크포인트는 실효되었으며, M 단계 정지된 세포들의 변화없는 백분율에 의해 결정되었을 때, 최대 50μM의 펩티드에서 비특이적 독성은 없었다(도 12).
실시예 3
본 실시예는 다양한 펩티드의 펩티드/펩티도모방체 키나제 저해 활성 및 혈청 안정성 분석을 설명한다.
2개의 키나제, Chk1 및 Chk2는 G2 체크포인트 기전에 중요하기 때문에, 두 가지 효소의 키나제 저해 분석이 실시되었다. 시험관 키나제 저해 분석은 회사의 프로토콜에 따라 "PepTag（R） Non-Radioactive Protein Kinase Assays", Promega을 이용하여 실행하였지만, 단 PKE를 대신하여 정제된 CHK2 키나제가 이용되었다. 정제된 PKE는 Upstate Biotechnology, Inc로부터 구입하였다. 이들 결과는 표　4A에 나타낸다.
Figure 112015127587684-pct00005
시험관내 키나제 저해 분석은 CycLex, Co Ltd., Nagano, Japan에 의해 실행되었다. 간략하게 설명하자면, 베큘로바이러스 유도된 재조합 인간 전장 Chk1와 히스티딘 테그(tag) 또는 GST와 융합된 대장균(E.Coli) 유도된 재조합 인간 전장 Chk2가 키나제로 이용되었다. E.Coli 유도된 재조합 GST-Cdc25C (아미노산 167-267)은 기질로 이용되었다. 반응 조건은 60분 동안 30℃에서 20mM Hepes-KOH (pH7.5), 1mM DTT, 80μg/ml BSA, 10mM MgCl2 및 50mM ATP이다. GST-Cdc25C에서 세린 216의 인산화는 효소 연계된 면역 분석에서 항-Cdc25C-인산화된 S216 항체에 의해 탐지되었다. 이들 결과는 표 4B에 나타낸다.
Figure 112015127587684-pct00006
상기 데이터에서 Chk1 및 Chk2 키나제 저해는 G2 실효 투여분량보다 더 높은 투여 분량에서 발생한다는 것을 나타낸다 (CBP500, 501, 505, 506, 603에 의한 G2 실효를 위한 IC50은 1μM미만이다). 이들 펩티드는 Chk1/2 분자의 저해에 추가하여 작용 기전을 갖는다는 것을 이들 결과는 암시한다. 대안으로, 상기 펩티드는 세포 안에 축적이 가능하고, 이들 농도는 주변 배지보다 세포 안에서 더 높다.
혈청 분석을 실시하여 마우스와 인간 혈청의 안정성을 결정하였다. 간략하게 설명하자면, 펩티드 (10mM 또는 2.5mM)는 새로 준비된 인간 혈청으로 1 시간 동안 37 ℃에서 배양되었다. CBP501 (10mM)는 새로 준비된 마우스 혈청으로 1 시간 동안 37 ℃에서 배양되었다. Jurkat 세포들은 처리된 혈청과 함께, 펩티드와 블레오마이신(40μg/ml) 하에서, 또는 펩티드와 블레오마이신 없이 처리되었고, 24 동안 항온처리되었다. G2 단계 세포 집단은 앞서 언급된 바와 같이 유동세포분석에 의해 측정되었다. 혈청 처리된 펩티드의 잔류 G2 체크포인트 실효 활성은 처리된 혈청의 G2 세포 비율과 배지 처리된 펩티드, 블레오마이신 및 Jurkat 세포들에 의해 생성된 표준 곡선과 비교함으로써 결정된다 (표 5A). CBP501 잔류량은 에탄올 처리로 단백질을 제거한 후 HPLC로 결정되었다 (표 5B). d-유형 아미노산을 가진 펩티드, 이를 테면 CBP501 및 CBP603은 l-유형 아미노산을 가진 펩티드, 이를 테면 CBP413보다 혈청에서 더욱 안정적이라는 것을 상기 데이터에서 나타낸다.
Figure 112015127587684-pct00007
Figure 112015127587684-pct00008
실시예 4
본 실시예는 배양된 세포 상에 CBP501의 항-세포 증식성 활성을 설명한다. 본 실시예는 또한 상기 펩티드/펩티드모방체의 생체내 활성을 설명하는 데이터를 제시한다.
상기 화합물들의 항-세포 증식성 활성을 설명하기 위하여, 배양된 MIAPaCa2 인간 췌장 암종세포들은 CBP501 (10μmM), 시스플라틴 (1, 3 또는 9　μg/ml) 및 옥살리플라틴 (1, 3 또는 9 μg/ml) 단독으로, 그리고 복합으로 처리되었다. 간략하게 설명하자면, 세포들은 6 웰 플레이트 상에서 웰당 300개 세포로 도말하고, 3시간 동안 상기 화합물들로 처리되었다. 상기 배지는 교환되었고, 추가 10시간 동안 배양되었다. 세포는 후속적으로 70% 메탄올로 고정되었고, 0.1% 크리스탈 바이올렛으로 착색되었고, 가시화되었다. 콜로니 형성 분석 결과에서 CBP501은 MIAPaCa2 세포들에 대해 시스플라틴과 옥살리플라틴의 세포-독성 활성을 모두 강화시킨 것으로 나타났다.
정상 인간 제대 내피 세포들 (HUVEC)을 이용하여 유사한 연구들이 실행되었다. 정상 세포들은 콜로니를 형성하지 않기 때문에, 웰당 300개 세포대신 웰당 3000개 세포로 도말되었다. 상기 결과에서 펩티드 자체는 정상 세포들의 성장을 교한시키지 않으며, 상기 펩티드가 이들 세포에 대하여 시스플라틴 및 옥살리플라틴의 세포 독성 활성을 증가시킨 것으로 나타나지 않는다. 상기 펩티드는 따라서 핵산 손상 치료에 민감화된 과다증식 세포들, 이를 테면 암 세포와는 대조적으로 핵산 손상 치료를 받은 정상 세포들에 대하여 유의적인 G2 실효 활성을 나타내지 않는 것으로 보인다. 상기 결과는 핵산 손상 치료에 있어서 정상 세포들이 아닌 증식 세포를 민감화시키는데 상기 펩티드의 특이성을 나타낸다.
Figure 112015127587684-pct00009
알라마르블루(AlamarBlue) 분석은 시스플라틴과 함께 그리고 시스플라틴 없이 CBP501의 성장 저해 활성을 분석하기 위하여 실행되었다. 간략하게 설명하자면, MIAPaCa2 세포들은 중복 방식으로 96 웰 플레이트 상에서 웰당 2500개 세포로 1, 3, 10, 30, 100μM의 시스플라틴 또는 0.22, 0.67, 2, 6, 및 18μM의 CBP501와 10μM 시스플라틴과 함께 또는 시스플라틴 없이 3시간 동안 노출되었다. 배지는 교환되었고, 추가 24, 48 또는 72 시간 동안 항온처리되었다. 항온처리 후, 형광 강도에 의해 세포 생존력을 탐지하기 위하여 추가 6시간 동안 20μl의 알라마르블루(alamarBlue) 90% 시약이 각 웰에 추가되었다. 형광 강도는 여기(exitation) 530nm 및 방출(emission) 590nm에서 Spectrafluor Plus 플레이트 판독기를 이용하여 측정되었다. IC50이 산출되었다(표　6).
본 연구에서 CBP501 단독은 몰 투여분량에서 시스플라틴보다 세포 성장을 더 잘 저해시킨다는 것을 나타내었다. CBP501은 암 치료에 이용된 대략적인 시스플라틴의 투여분량인 10μM의 시스플라틴과 복합될 때 훨씬 더 낮은 투여분량에서 세포 성장을 억제시켰다. 더욱이, CBP501의 성장 억제 활성은 시스플라틴보다 더 길었고; CBP501이 이용될 때 72시간째 IC50은 시스플라틴보다 더 우수하다.
CBP501의 생체내 반감기는 CBP501 (40mg/kg)의 복막내 주사 후 1, 3, 및 6시간 째 마우스 혈청내 CBP501를 정량화함으로써 측정되었다. CBP501 잔유량은 주사를 맞은 마우스에서 빼낸 마우스 혈청을 에탄올 처리에 의해 탄백질 제거한 후 HPLC로 결정되었다 (표 7).
Figure 112015127587684-pct00010
펩티드에 대한 내성을 결정하기 위하여, 10 마리의 마우스 집단에게 정맥으로 CBP501 (5, 8 또는 10mg/kg)를 1회 주사하거나 또는 복막으로 CBP501 (50, 80 또는 100mg/kg)을 1회 주사하였다. 주사를 맞은 마우스들은 이들의 생존에 대해 1주일간 관찰되었다 (표 8).
Figure 112015127587684-pct00011
상기 화합물들의 생체내 효과를 연구하기 위하여, MIAPaCa2 인간 췌장 암종세포들은 복합면역부전 마우스의 피하로 이식되었다. 주요 종양의 크기가 0.1cm3 (0일차) 또는 그 이상, 가령, 직경 7 또는 8 mm에 도달할 때 치료가 개시되었다. CDDP (3 mg/kg) 및 CBP 501 (10 또는 40 mg/kg)는 단독으로 또는 복합적으로 복막내 투여되었다. 종양 크기는 1주일에 3차례 칼리퍼를 이용하여 측정되었고, 용적은 다음 식을 이용하여 산출되었다: 체중(mg) = [폭 (mm)2x길이 (mm)]/2. 각 치료 집단의 평균 종양 크기는 치료 출발 부터 일자별로 플롯된다(n=4) (도 10).
상기 결과에서 CBP501 치료 단독은 생체내 인간 췌장암 세포의 성장을 억제시키는 것으로 나타났다. 상기 결과에서 CBP501은 시스플라틴의 항-종양 활성을 증가시키는 것으로 더 나타났다.
실시예 5
본 실시예는 폐 암의 설명과 CBP501을 이용한 연구를 설명한다.
폐암은 서방 국가들에서 성인 암 사망의 주요 원인이다. USA에서, 2009년 219,440명이 새로 진단을 받았으며, 이 질환으로 인하여 159,390명이 사망하였고, 모든 암 사망의 약 29%에 이르는 수다(가령, American cancer society, Cancer Facts & Figures 2009). 모든 새로운 폐암의 87%는 비-소세포 폐 암 (NSCLC) 조직학이며 이는 3가지 주요 유형이 있다: 선암종, 편평 세포 (표피모양) 암종 및 거대 세포 암종 (American cancer society, Cancer Facts & Figures 2009). 외과 기술및 복합 요법의 개선에도 불구하고, NSCLC로 진단받은 환자들의 예후는 좋지않다. 상기 질환이 여전히 국부화된 초기 단계에서 탐지된 경우 5년 생존율은 47%이지만, NSCLC 환자들의 대부분 (68%) (가령, AJCC Cancer Staging Manual. In: Fleming ID, editor. Philadelphia: Lippincott-Raven; 2002 참고)은 화학요법을 필요로 하는 진행된 단계 (단계 III) 또는 전이성 질환 (단계 IV)으로 진단받았다. 단계 III 질환 환자들의 5년 생존율은 8.4%이며, 단계 IV의 환자들은 1.6%이며, 환자들의 대부분은 진행된 NSCLC를 가지며, 2년 이내에 이 질환에 굴복하게 된다(가령, American cancer society, Cancer Facts & Figures 2009; AJCC Cancer Staging Manual. In: Fleming ID, editor. Philadelphia: Lippincott-Raven; 2002. 참고) 환자의 생존 및 삶의 질을 상당히 개선시킬 수 있는 새로운 요법의 도입은 미충족 욕구이다.
양호한 수행 상태를 갖는 진행된 단계 (IIIb 또는 IV) NSCLC 환자는 화학요법으로부터 이익을 얻을 수 있다 (가령, Souquet, PJ., et al., Lancet 342:19-21, 1993 ; Marino, P., et al., Chest 106:861-865, 1994 ; Marino, P., et al., Cancer 76:593-601, 1995 ; Helsing, M., et al., Eur J Cancer 34:1036-1044, 1998; Cullen, MH., et al., J Clin Oncol 17:3188-3194, 1999; Pfister, DG., et al., J Clin Oncol 22:330-353, 2004 참고). 화학요법 이항요소(doublets)는 단일 물질 또는 화학요법이 없는 경우와 비교하였을 때 생존을 개선시키는 것으로 나타났다 (가령, Bunn, PA., et al., J Clin Oncol 20:23S-33S, 2002 참고). 진행된 NSCLC에서 현재 권고되는 일선 화학요법 섭생은 기준 요법으로써 겜시타빈, 비노렐빈, 또는 탁산 (파클리탁셀 또는 도세탁셀), 이리노테칸, 에토포시드, 빈블라스틴, 및/또는 페메트렉세드와 복합된 백금 화합물들 (시스플라틴 [CDDP] 또는 카르보플라틴)을 포함한다 (Pfister, DG., et al., J Clin Oncol 22:330-353, 2004).
무작위화된 시도에서 다양한 백금-이중항 조합은 섭생들이 독성, 편의성, 및 비용 측면에서 약간씩 상이하지만, 모두 유사한 효과가 있다. 결과에서 17% 내지 32% 사이의 전반적인 반응율(ORRs), 7 내지 10 개월의 정중 생존기간, 그리고 30 내지 45%의 1-년 생존율이 드러났다 (가령, Scagliotti, G., et al., Semin Oncol 32:S5-S8, 2005; Schiller, JH., et al., N Engl J Med 346:92-98, 2002; Scagliotti, G., et al., J Clin Oncol 20:4285-4291, 2002; Kelly, K., et al., J Clin Oncol 19:3210-3218, 2001; Fossella, F., et al., J Clin Oncol 21:3016-3024, 2003 참고).
삼중항 화학요법(triplet chemotherapy)의 대부분은 현재까지 추가 증가된 생존을 야기하지는 못하였지만, 대신 독성은 증가되었다. 그러나 카르보플라틴 + 파클리탁셀 + 베바시주마브의 최근 연구에서는 일부 생존 잇점이 나타났고 (가령, Sandler, A., et al., N Engl J Med 355:2542-2550, 2006 참고), 이는 비-중첩 독성을 가진 표적화된 물질의 추가로 이중항 화학요법을 개선시킬 수 있음을 암시한다. 화학요법의 잇점을 최적화시키는 활발한 시도는 예측되는 항종양 활성 분자 표지의 사용을 통하여 추가해나가고 있다. NSCLC에서 화학치료요법적 효과의 유전자 예측이 출현하기 시작했다 (가령, Bepler, G., et al., ASCO Educational Book :350-352, 2008; Sommers, K., et al., Proc Am Soc Clin Oncol 26 2008 참고). 이들중 주목할 만한 것은 이를 테면 ERCC1, BRCA1/2, RRM1 및 TS 표지들이다 (표 9).
Figure 112015127587684-pct00012
실시예 6
본 실시예는 특정 인간 환자 하위집단은 펩티드와 화학치료요법적 (핵산 손상) 물질의 조합에 우호적으로 반응한다는 것을 나타내는 데이터의 설명을 포함한다. 예상외로, CBP501로 치료받기 전, 혈액 세제곱밀리리터당 10,000개 미만의 백색 혈액 세포 (WBC) 수를 갖는 비-편평 비-소세포 폐 암 NSCLC)의 임상 연구 환자의 하위 집단은 CBP501의 투여에 의해 이익을 얻었다는 것을 데이타에서 볼 수 있다.
CBP501은 전적으로 D-아미노산으로 구성된 합성 도데카펩티드다 (도 13). 이것은 TAT-S216A의 발전된 형태로써, DNA 함량 유동 세포측정-기반 분석에서 DNA-손상 물질을 이용한 치료에 반응하여 G2 (4N) 세포의 축적을 감소시키도록 이의 활성이 최적화되었다.
총 78명의 환자에서 CBP501을 조사하기 위하여 2단계 I 투여분량-범위 및 약동학 연구가 실행되었다: 1, 8, 및 15일차에 60-분간 i.v. 주입에 의해 투여된 CBP501의 단일 요법 연구는 매 4주 반복되었고, 3주마다 한번씩 시스플라틴 투여와 함께 복합 요법 연구(가령, Shapiro, GI., et al., Clin Cancer Res. May 15;17(10):3431-42, 2011 참고).
단계 I 단일-물질 연구 ( CBP04 -01): 이것은 인간에서는 첫번째로, 단일-물질 단계 I 투여분량 확대 시험, 진행된 고형 종양을 가진 환자 집단에서 매 28일 마다 3회 주사(1-8-15일차) 주사 섭생 연구다. 총 68 주기가 투여되었으며, 환자당 주기의 정중(median) 수는 2이다 (1-8 범위). 2명의 환자는 안정적인 질환, 한 명은 췌장 암으로, 그리고 다른 한 명은 난소 암으로 진단받아 7주기 치료를 받았다. 환자들의 대부분 (87%)은 질환 진행으로 인하여 연구를 중단하였다. 독성으로 인하여 중단한 환자는 없었다(가령, Shapiro, GI., et al., Clin Cancer Res. May 15;17(10):3431-42, 2011 참고).
시스플라틴 ( CBP06 -01)과 복합된 CBP501 의 단계 I 연구: 본 단계 I 연구의 주요 목적은 매 21일마다 한번씩 복합하여 CBP501과 시스플라틴을 투여하였을 때, 이들의 MTD 및 RD를 측정하는 것이었다. CBP501이 1-시간 주입으로 먼저 투여되었으며, 이어서 치료 시작 2시간 후 시스플라틴이 투여되었다. 환자들은 단계 I 단일-물질 연구동안 개발된 동일 섭생에 따른 알레르기 반응에 대한 예방 치료를 또한 제공받았다(로라타딘, 덱사메타손, 란티딘 및 디펜히드라민).
총 48명의 환자들은 세 군데 US 센테에서 치료받았고, 총 182 주기가 투여되었으며, 환자당 주기의 정중 수는 4이다 (1-13 범위). CBP501은 3.6 mg/m² 내지 36.4 mg/m² 투여분량 범위에서 조사되었다. 연구된 최대 투여분량 수준은 CBP501 36.4 mg/m² 및 시스플라틴 75 mg/m²이었다. 이 투여분량 수준에서, 6명의 환자중 2명은 연구자들의 판단에 의해 투여 제한(등급 3)으로 알레르기 반응을 경험하였다. MTD는 투여분량 수준 바로 아래로 간주되었으며, CBP501 24.3 mg/m² 및 시스플라틴 75 mg/m²이었다. 몇몇 환자들에서 활성 징후가 기록되었다 (가령, Shapiro, GI., et al., Clin Cancer Res. May 15;17(10):3431-42, 2011 참고).
무기 백금 배위 복합체인 시스플라틴 (시스-디아미노디클로로백금)은 DNA의 구아닌 및 아데닌 잔기의 N7 위치에 선호적으로 반응하여 다양한 단일기능 및 이중기능 부가물을 형성한다. 이들 부가물은 DNA 두 가닥의 분리를 요구하는 다양한 세포 과정, 이를 테면 복제 및 전사를 방해함으로써, 약물의 세포독성의 원인이 된다.
시스플라틴은 고환 및 난소 암에 대하여 이의 강한 항신형성 활성으로 인하여 다양한 종양에 대하여 임상적으로 평가되었다. 승인된 이후, 시스플라틴은 화학치료요법 물질이었으며, 단독으로 또는 다른 항신형성 물질과 복합하여 광범위하게 이용되었다. 시스플라틴은 다른 종양 유형, 가령 폐 암, 방광 암종 및 두경부 암종을 가진 환자들에서 실질적인 완화 효과를 부여하는 것으로 또한 알려져 있으며, 이들 질환에 이용되는 대부분 화학요법 섭생에 포함된다.
페메트렉세드 디쇼듐은 독특한 6-5 융합된 피롤로[2,3-d]피리미딘 핵을 보유한 구조적으로 새로운 엽산길항제로써, 세포 성장 및 분할에 필요한 기질 합성에 관련된 엽산-의존적 효소, 이를 테면 티미딜레이트 합성효소, 디히드로폴레이트 환원효소, 그리고 글리신아미드 리보뉴클레오티드 포밀전이효소의 기능을 저해한다 (가령, Taylor, EC., et al., J Med Chem 35:4450-4454, 1992; Schultz, RM., et al., Anticancer Res 19:437-443, 1999 참고).
페메트렉세드는 폐, 유방, 결장, 흉막, 췌장, 위, 방광, 두경부, 및 자궁목이 포함된 다양한 종양 유형의 임상 시도에서 활성을 나타내었다. 시스플라틴과 복합된 페메트렉세드는 절제불가능한 또는 근치 수술(curative surgery) 후보가 아닌 MPM 환자 치료용으로 2004년 2월 4일자로 FDA 승인을 받았다.
화학요법-경험이 없는 NSCLC 환자들의 단계 II 연구에서, 시스플라틴 또는 카르보플라틴과 복합된 페메트렉세드는 다른 백금 이중항과 필적할 수준의 효과 결과를 산출하였다 (가령, Scagliotti, G., et al., Clin Cancer Res 11:690-696, 2005　; Zinner R., et al., Cancer 104:2449-2456, 2005　; Manegold, C., et al., Ann Oncol 11:435-440, 2000; Shepherd, FA., et al., Cancer 92:595-600, 2001 참고). 또한, 페메트렉세드는 우수한 안전성 프로파일과 편리한 투여 일정을 갖는다.
비 열성 기획 시험에서 비교된 최근 무작위화된 단계 III 연구는 최대 5주 동안 매 3주마다 시스플라틴+ 겜시타빈 또는 시스플라틴+ 페메트렉세드로 처리된 단계 III 또는 IV NSCLC의 1725명의 화학요법-경험이 없는 환자들 간에 전반적인 생존(OS)가 비교되었다 (가령, Scagliotti, G., et al., J Clin Oncol 26:3543-3551, 2008　; Pimentel, F., et al., Proc Am Soc Clin Oncol 26 (Part I of II):448s, 2008, (Suppl. 15S)(abstr) #448s 참고). 시스플라틴 + 페메트렉세드의 OS는 시스플라틴 + 겜시타빈보다 나쁘지 않았다 (두 치료의 정중 생존, 10.3 개월). 시스플라틴/겜시타빈과 비교하여 시스플라틴 + 페메트렉세드에서 OS가 통계학적으로 우수하였다: 선암종 환자 (n= 847; 12.6 개월 및 10.9 개월, 차례로) 그리고 거대 세포 암종 조직학 환자 (n= 153; 10.4 개월 및 6.7 개월, 차례로). 시스플라틴 + 페메트렉세드의 경우, 등급 3 또는 4 중성구감소증, 빈혈, 그리고 혈소판감소증; 열성 중성구감소증; 그리고 탈모 비율은 시스플라틴/겜시타빈 치료 부분보다 유의적으로 더 낮았지만, 반면에 등급 3 또는 4 매스꺼움은 더 흔하였다.
환자 및 방법:
임상 연구 기획: 오픈-라벨, 다중심, 단계 II 무작위화된, 2개-부분, 비교 연구. 상기 프로토콜은 CBP501와 함께 또는 없이, 완전한-투여분량의 시스플라틴 및 페메트렉세드를 평가하였다. 환자들은 페메트렉세드, 시스플라틴 및 CBP501 (A 부분) 또는 페메트렉세드과 시스플라틴 (B 부분)에 1:1로 무작위로 분배되었다. 질환의 기준 단계 (IIIb vs IV), 뇌 전이 존재 및 환자들이 베바시주마브 요법에 적합한지에 따라 무작위화가 계층화되었다.
연구자 / 시험 장소: 미국, 러시아, 캐나다, 브라질, 아르헨티나 및 페루에 대략 40개 센터.
연구 목적:
일차: 국소적으로 진행된 (악성 늑막 삼출 또는 심장막 삼출이 있는 단계 IIIB) 또는 전이성 (단계 IV) 비-편평 NSCLC 환자들에서 CBP501과 함께 또는 없이 시스플라틴과 페메트렉세드의 효과, 진행없는 생존을 비교하기 위하여.
이차: 진행 없는 생존, 이를 테면 전반적인 생존이외에 연구 섭생 및 효과 매개변수들의 안전성 프로파일을 특징화시키기 위하여.
연구 집단:
포함 기준:
1. 임의의 연구-특이적 절차를 개시하기 전, 사전 동의서를 얻었다.
2. 조직학적으로 또는 세포학적으로 비-편평 비 소세포 폐 암 (NSCLC) 진단의 확인, 근치 절제(radical resection)를 수용할 수 없고, 늑막 또는 심낭 삼출이 있는 단계 IIIB 또는 단계 IV, 이전에 화학요법 또는 다른 전신 치료를 받은 적이 없다.
3. Response Evaluation Criteria in Solid Tumors (RECIST)에 따라 최소한 한개의 일차원적으로 측정가능한 병소.
4. 최소 18세 이상의 남성 또는 여성 환자
5. ECOG 수행도 (PS): 0-1
6. 기대여명 > 3 개월
7. 연구 약물의 첫 투여분량전 국소 방사선치료가 ≥ 3 주에 완성된다면 우선 국소 방사선치료가 허용된다.
8. 통증 조절을 위하여 기존 뼈 병소에 공동 수반되는 완화 방사선치료가 허용된다
9. 연구 약물의 첫 투여분량전 외과술이 최소 4주전에 실시되고, 환자가 완전하게 회복되면 우선 외과술이 어용된다.
10. 다음을 포함하는 적절한 장기 기능:
·골수: 백혈구 세포 (WBC) 수 ≥ 4 x 109/L, 절대 호중구 수 (ANC) ≥ 1.5 x 109/L, 혈소판 수 ≥ 100 x 109/L, 헤모글로빈 ≥ 9 g/dL
· 간: 빌리루빈 ≤ 1.5 x 정상의 상한치 (ULN), 아스파라테이트 트란스아미나제 (AST/SGOT) 및 알라닌 트란스아미나제 (ALT/SGPT) ≤ 2.5 x ULN (또는 만약 간 전이가 존재한다면, ≤ 5 x ULN ), INR ≤ 1.5 x ULN, 알부민 ≤ 3.0 g/dL
·신장: 혈청 크레아티닌 ≤ 1.5 mg/dL 또는 크레아티닌 청소율 ≥ 45 mL/min (Cockroft 및 Gault 공식에 따라 산출됨)
11. 임신 가능 연령대의 여성 환자들은 반드시 임신 음성 테스트를 해야하며, 연구 전 4주간 그리고 연구 약물의 최종 투여 후 4개월 간 연구자에 의해 승인된 최소한 한 가지 형태의 피임을 이용해야 한다. 본 연구의 목적을 위하여 임신가능성은 다음과 같이 정의된다: "폐경 후 최소 1년 또는 외과적으로 불임을 제외한 이상 모든 여성 환자"
12. 남성 환자들은 연구 동안 그리고 구 약물의 최종 투여 후 4개월 간 연구자에 의해 승인된 배리어 피임(barrier contraception)을 이용해야만 한다.
13. 치료 및 추적에 협력할 수 있는 능력
배제 기준:
1. 연구에 참여하기 전 골수의 30% 이상에 방사선 요법
2. 종양 시료에서 신경내분비 특징이 존재
3. 화학요법, 새로운 생물학적 요법 (작은 분자, 항체), 면역요법으로 기존에 치료
4. 측정가능한 병소의 부재
5. 진행중인 또는 활성 감염, 증상관련 울혈심장기능부전, 불안정협심증, 증상관련 또는 조절이 잘 안되는 심장부정맥, 조절불가능한 혈전증 또는 출혈 장애, 또는 연구자의 의견으로 임의의 다른 심각한 조절불가능한 의학적 장애들
6. 연구 참여 5년 이내 임의의 기존 또다른 악성 병력 (피부의 치유된 기저 세포 암종 또는 치유된 자궁목의 제자리(in-situ) 암종 )
7. 환자의 순응성을 방해할 수 있는 임의의 유의적인 중추신경계 (CNS) 또는 정신 장애(들)
8. 말초 신경병증의 증거 > NCI-CTCAE Version 3에 따른 등급 1
9. 연구 참여 전 28일 이내 또다른 임상 시험에서 임의의 다른 연구조사 물질에 의한 치료 또는 참여
10. 임신 또는 모유 수유 환자들 또는 적절한 피임을 사용하지 않은 임신 가능성이 있는 임의의 환자
11. 공지의 HIV, HBV, HCV 감염
12. 증상관련 뇌 전이의 존재. 뇌 전이 환자들은 반드시:
· 확정 요법이 완료된 후 최소 2주간 국소 요법(외과술 또는 방사선) 이후 신경학적으로 안정적인 상태이어야 하고, 연구 참여 전 1주일동안 코르티코스테로이드의 사용을 중단해야만 한다.
·신경학적 그리고 기타 AEs의 평가를 망칠 수 있는 신경학적 기능이상이 없어야 한다
13. 엽산, 비타민 B12 또는 코르티코스테로이드를 복용할 수 없거나 또는 복용 의사가 없음.
14. 5일 기간 동안(장기 작용 물질, 가령, 피록시캄의 경우 8일 기간 동안) 일일 ≤ 1.3 그램의 아스프린 투여분량 이외에 아스피린 또는 다른 비스테로이드성 항-염증성 물질을 중단할 수 없음
15. 심각한 체중 감소 (앞선 6주 동안 ≥ 10% 체중 감소)
16. 임상적으로 유의적인(신체 검서에 의해) 삼차 유체 수집, 가령, 연구 참여에 앞서 배출 또는 다른 과정에 의해 조절될 수 없는 복수 또는 늑막 삼출액이 있는 경우
환자들의 수:
총 195명의 환자가 치료를 받았는데, 이중 97명의 환자는 CBP501, 시스플라틴 및 페메트렉세드으로 치료받았으며 (A 부분), 그리고 98명의 환자는 페메트렉세드와 시스플라틴으로 치료받았다 (B 부분).
연구 약물:
제형: 주사용 CBP501은 CBP501 펩티드 아세테이트 염이 포함된 멸균 동결건조된 분말이 포함된 단일 투여분량 바이알 (펩티드 기본 단위)(20mg) 안에 제공된다. 투여를 위하여 바이알 내용물은 5% 주사용 덱스트로즈, USP에서 재구성되고, 5% 주사용 덱스트로즈, USP 100mL i.v. 주머니에 넣었다.
페메트렉세드 : 시판되는 페메트렉세드 제형이 이용되었고, 주사용 20 mL 0.9% 염화나트륨 용액에서 재구성되고, 그 다음 100 mL으로 희석되었다.
시스플라틴 : 시판되는 시스플라틴 제형이 이용되었고, 투여용 250 mL의 정상 염수에서 희석되었다.
투여분량 섭생 및 투여 경로:
CBP501, 페메트렉세드 및 시스플라틴은 최대 6주기로 매 3주마다 동일한 날(1 일차)에 투여되었다. 주기는 3 주(21 일)인 것으로 간주되었다.
A 부분
1. CBP501 25 mg/m²은 1 시간 동안 i.v. 주입으로 투여되었다.
2. 페메트렉세드 500 mg/m²는 CBP501 주입 직 후 10분에 걸쳐 i.v. 주입으로 투여되었다.
3. 시스플라틴 75 mg/m²은 페메트렉세드 주입 직후 1-시간 i.v. 주입으로 투여되었다.
B 부분
1. 페메트렉세드 500 mg/m²는 10분에 걸쳐 i.v. 주입으로 투여되었다.
2. 시스플라틴 75 mg/m²은 페메트렉세드 주입 직후 1-시간 i.v. 주입으로 투여되었다.
각 조합은 중추 또는 말초 정맥 통로를 통하여 투여되었다.
예방적 치료:
등록된 모든 환자들은 제공받았다:
1. 비타민 보충제: 모든 환자들은 매일 저용량 경구 엽산 제제 또는 매일 멀티비타민과 엽산 복용을 지시받았다. 엽산의 최소 5일 매일 투여 분량은 페메트렉세드의 첫 투여 분량에 앞서 7일 기간 동안 복용되어야 하고, 투약은 전 과정 요법 동안 그리고 페메트렉세드의 최종 투여 후 21일간 지속되어야 한다. 제안된 엽산 투여분량은 350-1000 μg 범위내에 있다. 환자들은 페메트렉세드의 첫 투여에 앞서 일주일간 그리고 그 다음 매 3 주기 동안 비타민 B12의 근육 주사를 1회 받아야 한다. 후속적으로 비타민 B12 주사는 페메트렉세드와 동일한 날짜에 제공될 수 있다. 비타민 B12의 투여분량은 1000 μg이었다.
2. 경구 덱사메타손 4 mg, 일일 2회, 치료 투여 일일전, 투여 당일, 그리고 그 다음날.
3. 예방적 항구토 치료: 표준 치료 센터 프로토콜에 따라 5HT3 길항제 + 스테로이드로 구성됨. 환자들은 필요한 경우 추가 경구 항구토제를 제공받았다.
·심혈관 손상이 없는 환자들은 다음의 수분공급 프로토콜을 제안받았다. 연구 센터에서 통상적으로 투여되는 유사한 프로토콜이 이행될 수 있다:
1. 환자들은 20 mEq KCl/리터 및 1 g MgSO4/리터와 함께 총 1.5-2.0 리터의 수분공급 (5% 덱스트로즈 또는 ½ 정상 염수)을 시간 당 500 mL로 제공받았다.
2. 상기 환자가 1-시간의 수분 공급 주입을 받은 후, 12.5 g의 만니톨을 IV 푸쉬(push)에 의해 투여받았다.
3. 시스플라틴 주입 (1 mg/mL 수준에서 정상 염수와 혼합됨)은 수분공급 주입이 지속되는 동안 1시간에 걸쳐 주입되었다.
4. 수분공급 기간에 걸쳐 시간당 250 mL으로 소변배출량을 유지시킬 필요가 있을 경우, 추가 만니톨이 투여되었다(12.5-50.0 g IV 푸쉬).
·CBP501로 치료를 받은 환자들의 경우 (A 부분), 히스타민 방출로 인하여 증상의 발생 및 심각성을 감소시키기 위하여 다음의 예방적 섭생을 받는 것이 권장되었다:
1. 각 CBP501 주입전, 디펜히드라민 (DPH) 50 mg IV 및 라니티딘 50 mg IV (또는 또다른 히스타민 H2 길항제).
2. CBP501 투여 하루전(-1일차), 투여 당일(0일차), 그리고 그 다음날(1일차) 로라타딘 (10 mg) PO.
환자당 연구 기간 지속기간:
환자들은 다음중 임의의 것들이 조기에 관찰되지 않는 한, 최대 6주기의 연구 치료를 받을 것이다.
· 질환 진행
· 수용불가능한 독성
· 동의 철회
· 심각한 프로토콜 위반
· > 2 주의 치료 지연 (잠재적 또는 인지된 환자 이익이 있는 경우를 제외)
치료 중단 후, 환자들은 질환 진행 또는 추가 전신 항암요법의 추가 개시까지 매 8주간 그리고 사망때까지 매 6개월간 추적을 받을 것이다.
사전 동의
연구자들은 임의의 연구 특이적 선별 과정이 실행되기 전, 환자에게 본 연구의 목적 및 방법, 뿐만 아니라 임의의 예상되는 효과 및 부작용을 상세하게 설명하였다. 상기 환자는 정보용지를 제공받았으며, 참여에 동의를 결정하기 전, 시험의 세부사항에 대한 문의를 할 수 있는 충분한 시간과 기회를 제공받았다. 상기 환자와 사전 동의를 논의한 사람은 동의서에 서명과 날짜를 기입하였다.
연주자들은 환자에게 전적인 자유의지로 연구에 참여를 거부하거나 또는 임의의 시점에서 임의의 이유에 의해 동의를 철회할 수 있다는 것을 설명하였다. 유사하게, 연구자들 및/또는 지원자들은 안전 또는 관리 이유로 임의의 시점에 상기 환자를 자유로이 탈퇴시킬 수 있었다. 현행 CFR (21, 312D, 50 및 56 부분) 그리고 ICH (ICH E6 1997) GCP 지침 및 헬싱키 선언(Declaration of Helsinki), 1964 (2004년 동경에서 명확하게 함)에 따라 환자의 인권을 보호하는데 필수적인 임의의 다른 요건들이 설명되었다.
환자 번호 부여
환자 무작위화(randomization) 및 치료 부분에 할당은 중추적으로 관리되었다.
통계학적 분석:
Cox 비례 위험 모형을 이용하여 2개 치료 부분 간의 PFS에 대한 위해율 (HR)이 평가되었다. 상기 모형에는 인자로써 치료 부분 뿐만 아니라 무작위 계층화 인자가 포함되었다. 다음의 공변량이 연구되었다: 연령, 성별, 인종 (백인(Caucasian)/비-백인), 기존 외과술/과정 (예/아니오), 기존 방사선치료 (예/아니오), x-레이 해석(정상/비정상적으로), ECG 해석 (정상/비정상적으로), 뼈 스캔 (정상/비정상적으로), 그리고 진단까지의 시간. 임의의 연속 변수들, 이를 테면 진단에서 연구 치료까지 연령 및 시간은 더 나은 모형이 결과된다면 2 또는 몇개의 분류로 명시함으로써 범주적 변수로 전환시킬 수 있다. 다음 기준을 이용하여 단계별 회귀 연산법을 이용하여 연구 변수들을 참여시켰다: 변수들은 모형에 참여되도록 0.25 수준에서 유의적이어야 하고, 모형에 남아있기 위해서 0.15 수준에서 유의적이어야 한다. 최종 모형의 경우, 위해율의 점 추정은 95% CIs와 함께 제공되었다.
선별시 WBC < 10000 μL 을 갖는 환자들에게는 하위집단 분석이 실행되었다. 각 환자들이 분석되는 미가공 데이터와 함께 소프트웨어 GraphPad Prism 5을 이용하여 추가 하위집단 분석이 실행되었다.
효과 결과:
진행 없는 생존 (PFS)에서 다른 공변량 조사 없이 Cox 비례 위험 모형 분석에서 A 부분 (CBP501을 이용한 부분)은 B 부분보다 더 높은 위험을 보유한 것으로 나타났지만 (HR = 1.20 [0.88, 1.65]), 그러나 통계학적으로 유의적인 것은 아니었다(P = 0.25). 다른 공변량을 연구하는 동일 모형에서 A 부분은 B 부분보다 더 높은 위험을 보유하였지만(HR = 1.21 [0.85, 1.73]), 그러나 통계학적으로 유의적인 것은 아니었다 (P = 0.30).
선별시 WBC<10000/μL을 갖는 환자들의 경우, 다른 공변량 조사 없이 Cox 비례 위험 모형 분석에서 A 부분은 B 부분보다 더 높은 위험을 보유한 것으로 나타났지만 (HR = 1.04 [0.73, 1.49]), 그러나 통계학적으로 유의적인 것은 아니었다 (P = 0.81). 다른 공변량을 연구하는 동일 모형에서 A 부분은 B 부분보다 더 높은 위험을 보유한 것으로 나타났지만 (HR = 1.06 [0.71, 1.59]), 그러나 통계학적으로 유의적인 것은 아니었다(P = 0.78).
두 분석 모두에서 선별시, 상기 분석을 WBC<10000/μL을 갖는 환자들로 한정하였을 때, PBS에 대한 위해율은 A 부분을 개선시켰음을 알 수 있다(표 A, B).
Figure 112015127587684-pct00013
치료된 모든 집단에서 전반적인 생존(OS)에 있어서 Cox 비례 위험 모형 분석
A 부분은 다른 공변령 조사와 함께, 그리고 조사없이 B 부분보다 더 낮은 위험을 갖는다 (HR=0.96 및 0.77). 상기 차이는 통계학적으로 유의성이 없다 (P=0.82 및 0.25).
선별시 WBC < 10000/ μL을 갖는 환자에서 OS에 있어서 Cox 비례 위험 모형 분석
처리된 집단에서 선별시 WBC < 10000/μL을 갖는 환자들의 OS의 경우, A 부분은 다른 공변령 조사와 함께, 그리고 조사없이 B 부분보다 더 낮은 위험을 갖고(HR=0.80 및 0.69); 상기 차이는 통계학적으로 유의성이 없다(P=0. 32 및 0.16).
모든 분석에서 선별시, 상기 분석을 WBC<10000/μL을 갖는 환자들로 한정하였을 때, OS에 대한 위해율은 A 부분을 개선시켰음을 알 수 있다 (표 C, D).
Figure 112015127587684-pct00014
도 14는 모든 처리된 환자들에서 선별(기선)시, WBC와 관련하여 Kaplan-Meyer 생존 곡선, 정중 OS 및 위해율을 보여준다. 상기 위해율은 컷 오프 수준이 감소될 때 개선되며, 컷오프 수준으로 WBC 8000/μl에서 정점이다.
도 17을 참고하면, 호중구는 적혈구 세포들을 Hetasep (Stemcell technol.)으로 제거한 후, 인간 말초 혈액으로부터 EasySep 호중구 농축 키트 (Stemcell technol.)로 정제되었다. 정제된 호중구 (1x106 세포/웰, 24 웰 플레이트는 1 μM의 CBP501와 함께, 또는 없이 15분간 배양되었고(EDTA 첨가에 의해 반응이 종료됨) 그리고 추가 4 시간 동안 1nM PMA, 3 또는 10μM A23187, 또는 100 또는 1000ng/ml LPS으로 배양되었다. 웰은 2회 세척되었고, 15분간 DNase와 함께 배양되고, 상청액은 수거되고, 2시간 동안 엘라스타제(Elastase) 기질과 함께 배양되었고, 그 다음 분석되어 엘라스타제 활성을 탐지하였다.
도 18을 참고하면, 8주령의 C57BL/6 마우스에게 디펜히드라민 투여 30분전, LPS 2.5, 5, 또는 10ug/ml와 함께 또는 없이 정맥으로 주사하였다. CBP501 (7.5mg/kg)는 디펜히드라민 주사 후 30분에 주사되었다. 트롬빈/항트롬빈 복합체는 CBP501 또는 모의 주사 후 3시간 시점에서 채혈된 혈액으로부터 분리된 혈장 안에서 ELISA에 의해 정량화되었다. 상기 데이터는 4마리 동물의 각 조건으로부터 수집되었다.
도 19를 참고하면, 0.32uM의 PMA에 의해 인간 말초 혈액 단핵 세포가 자극되고, 그리고 PMA 자극 후 48시간에 모든 현탁 세포를 제거함으로써 대식세포들이 획득되었다. 상기 세포들은 50ng/ml IFN-감마, 10ng/ml LPS와 더 배양되어 M1 표현형을 얻고, 그리고 20ng/ml IL-4와 더 배양되어 M2 대식세포를 얻었다. 두 가지 치료는 모두 CBP501와 함께 또는 없이 진행되었다. 형광 라벨된 비드 및 유동 세포측정을 이용하여 식작용 활성이 모니터되었다.
도 20을 참고하면, 대식세포 세포 계통 RAW264.7은 0.1 또는 1μM의 CBP501와 함께 또는 없이 3-6 시간 동안 배양되었고, 그 다음 10 또는 1000ng/ml LPS와 함께 또는 없이 4 시간 동안 배양되었다. 방출된 TNF는 ELISA에 의해 측정되었다.
CBP501은 전임상 (Sha, S., et al. Mol. Cancer Ther. 6:147 (2007)) 및 단계 I 임상 연구 (Shapiro, G.I., et al. Clin. Cancer Res. (2011))에서 효과적인 항-종양 물질로서의 가능성을 보여주었다. CBP501는 2가지 작용 기전, 가령 세포 주기를 통한 G2 체크포인트 실효 (Sha, S., et al. Mol. Cancer Ther. 6:147 (2007)) 그리고 종양 세포들안에서 또는 칼모둘린 저해를 통한 백금 농도를 조절할 수 있다 (Mine, N., et al. Mol. Cancer Ther. 10:1929 (2011)).
본 명세서에서 설명된 바와 같이, 비-편평 비-소세포 폐 암 환자들에서 단계 II 임상 연구 환자 집단의 하위-집단 분석에 의해 선별시 높은 백혈구 세포 수 (WBC) 을 가진 환자 집단과 정상 또는 낮은 WBC를 갖는 환자 집단 간의 생존에 있어서 통계학적으로 유의적인(p<0.0001) 차이가 있었다는 예상치못한 발견을 하였다.
본 명세서의 결과에 의해 더욱 나타난 바와 같이, CBP501은 종양 세포들에 직접적인 작용에 추가하여, 대식세포에 의해 NETs의 제거/식작용의 감소에 의해 환자들에서 염증이 일어날 때, 칼모둘린 저해에 의한 그리고 호중구 세포외 트랩 (NETs)을 증가시킴으로써, 종양 미세 환경, 이를 테면 대식세포에 또한 작용할 수 있다. 이로써 심부정맥혈전증 (DVT) 및 전이를 가질 기회가 증가될 수 있고, 따라서 환자 생존이 불리하게 영향을 줄 가능성이 있다. 반대로, 환자에게서 M2 유형 대식세포의 저해는 종양 성장, 혈관신생, 전이 및 종양 면역 회피에서 대식세포의 양성 작용을 막을 수 있는데, 이들 모두 종양 전이를 촉진시켜, 환자의 생존을 단축시킬 수 있다.
이러한 관찰과 일관되게, 시험관에서 CBP501 치료에 의해 활성화된 호중구의 NETs 형성 증가 및 LPS 자극받은 마우스에서 트롬빈/항-트롬빈 복합체 형성이 증가되었음이 설명되었다. CBP501에 의한 대식세포의 M1 및 M2 유형 모두에서 사이토킨 분비의 억제 및 식작용이 또한 나타났다.
임상 연구에서 CBP501은 종양 세포들에 대항하는 시스플라틴의 세포독성을 강화시킴으로써 작용한다는 것을 나타내지만, 본 명세서의 결과는 비-편평 NSCLC 환자들의 단계 II 연구에서 실행된 하위-집단 분석에 의한 예상치못한 발견을 설명하는데, 임상 연구의 선별시 백혈구 세포 수 (WBC)가 높은 환자들은 생존기간이 더 짧았고, 정상 또는 낮은 WBC를 가진 다른 환자 집단은 CBP501의 섭생에 반응하여 더 오래 생존한 것으로 나타났으며, 그리고 그 차이는 통계학적으로 매우 유의적이었으며, Log-rank (Mantel-Cox) 테스트에 의한 전반적인 생존에서 Kaplan-Meyer 곡선에서 산출된 p 값은 0.0001 미만이었다.
치료 전 정상 또는 낮은 WBC를 갖는 환자들은 CBP501 치료에서 이익을 얻었지만, 높은 WBC를 갖는 환자들은 동일한 치료에 의해 불리한 효과를 가질 수 있다는 예상치않은 결과를 얻었다. 칼모둘린에서 CBP501의 저해성 활성은 다양한 미세-환경 세포들, 이를 테면 대식세포, 백혈구 및 림프구는 이들의 활성을 저해 또는 조절시킬 수 있고, 이는 양방향 결과를 초래할 수 있는데, 그 이유는 예를 들면, 단지 대식세포를 저해시킴으로써, M1 유형 대식세포를 저해한다면, 환자 생존에 불리한 영향을 주고, M2 대식세포를 저해한다면, 환자 생존은 연장될 것이다.
칼모둘린 저해제들은 대식세포 (Horwitz, S.B., et al. J. Cell Biol. 91:798 (1981); Takenawa, T., et al. Biochem J. 15:208 (1982); Westra, J., et al. BMC Musculoskelet. Disord. 30:11 (2010)), 백혈구 (Naccache, P.H., et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 97(1):62 (1980); Takeshige, K., et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 99(2):484 (1981); Jones, H.P., et al. Biochem Biophys. Acta. 714(1):152 (1982); Jones, H.P., et al. Methods Enzymol. 015:389 (1984); Verploegen, S., et al. Eur. J. Biochem. 269(18) 4625 (2002)) 그리고 림프구 (Salisbury, J.L., et al. Nature 12:294 (1981); Boubali, S., et al. Mol. Immunol. 52(2):51 (2012))의 다중 기능을 저해하는 것으로 보고되었다. 높은 WBC를 갖는 환자들은 이들이 사전-염증성 유형이므로, M1 대식세포를 보유하는 경향이 있을 것이며, 종양과 함께 정상 또는 낮은 WBC를 갖는 환자들은 M2 대식세포를 갖는 경향이 있을 것이다 (Hao, N., et al. Clin. Dev. Immunol. (2012)). 또한, 높은 WBC를 갖는 환자들은 심부정맥혈전증 (DVT)를 나타내는 경향이 더 많은 것으로 알려져 있으며 (Pabinger, I., et al. Blood 122:12 (2013); Blix, K., et al. PLOS One 4:8 (2013); Wang, T.F., et al. Thromb. Res. 133(1):25 (2014)), 이는 상당수 암 환자의 사망 원인이다. 이들 환자는 더 많은 NETs를 가지며, NETs는 종양 전이를 촉진시키고 (Cools-Lartigue, J., et al. J. Clin. Invest. (2013)) 이는 폐암 환자를 포함하는 많은 암 환자의 짧은 예후의 한 가지 원인이다.
본 실시예에서 모든 치료를 받은 집단에서 분석하였을 때, 표준 섭생, 페메트렉세드 + 시스플라틴에 CBP501을 추가함으로써 탐지되는 통계학적으로 유의적인 생존 잇점은 없었다. 그러나, CBP501의 추가로 임상 시험의 선별시 정상 또는 낮은 백혈구 세포 (WBC)를 나타내는 사람 집단에 잇점을 제공하였다는 사실에 하위-집단 분석에서 예상치못하게 확인되었다. WBC의 정상 값은 위치와 나라에 따라 변화되었다. 상위 정상 WBC 한계는 8000/μl 내지 11000/μl일 수 있다.
실행된 시점에서 정상 범위의 WBC를 갖는 환자들은 CBP501로부터 이익을 얻고, 높은 WBC를 갖는 환자들은 시스플라틴과 페메트렉세드로 치료를 받은 환자들보다 더 악화되었다는 사실은 놀랍고, 다만 이들 모두의 차이는 대조 부분, 시스플라틴 및 페메트렉세드 처리된 집단과 비교하였을 때 통계학적으로 유의적이지 않았다.
CBP501의 이러한 잠재적인 양방향 작용의 정확한 원인은 명확하지 않지만, 칼모둘린의 CBP501의 칼모둘린 저해 작용으로 다양한 미세환경 세포들, 이를 테면 대식세포, 백혈구 및 림프구에서 칼모둘린 저해는 이들의 활성을 저해 또는 조절하는데, 이는 양방향 결과를 초래하는데, 그 이유는 예를 들면, M1 유형 대식세포를 저해한다면, 대식세포의 항-종양 활성의 저해 및/또는 NET의 청소를 저해함으로써 환자의 생존에 불리하게 작용할 수 있는데, NET는 혈전-생성 및 전이를 촉진시키기 때문이며, 전-종양 M2 대식세포를 저해한다면, 환자 생존을 연장시킬 것이다. 또한, 시스플라틴은 M1에서 M2 유형으로 대식 세포를 왜곡시키는 것으로 알려져있고(Dijkgraaf, E.M., et al. Cancer Res. 15:73(8):2480 (2013)), 이 자체의 화학요법은 종양 전이를 촉진시키는 것으로 알려져 있고 (Haas, M.J. SciBX 1-3 (2011)), 따라서 화학요법중 CBP501이 존재하면 종양 전이에 상당한 영향을 줄 수 있을 것이다. 칼모둘린 저해제들은 대식세포 (Horwitz, S.B., et al. J. Cell Biol. 91:798 (1981); Takenawa, T., et al. Biochem J. 15:208 (1982); Westra, J., et al. BMC Musculoskelet. Disord. 30:11 (2010)), 백혈구 (Naccache, P.H., et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 97(1):62 (1980); Takeshige, K., et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 99(2):484 (1981); Jones, H.P., et al. Biochem Biophys. Acta. 714(1):152 (1982); Jones, H.P., et al. Methods Enzymol. 015:389 (1984); Verploegen, S., et al. Eur. J. Biochem. 269(18) 4625 (2002)) 그리고 림프구 (Salisbury, J.L., et al. Nature 12:294 (1981); Boubali, S., et al. Mol. Immunol. 52(2):51 (2012))의 다중 기능을 저해하는 것으로 알려져 있다. 높은 WBC를 갖는 환자들은 이들이 사전-염증성 유형이므로, M1 대식세포를 더 보유하는 경향이 있을 것이며, 종양과 함께 정상 또는 낮은 WBC를 갖는 환자들은 M2 대식세포를 갖는 경향이 있을 것이다 (Hao, N., et al. Clin. Dev. Immunol. (2012)). 또한, 높은 WBC 환자들은 더 많은 NETs를 보유하는 경향이 있을 것이다. NETs의 식작용이 CBP501에 의해 방해된다면, 환자들은 DVT와 전이를 가질 위험이 더 많을 것이며, 이둘 모두다 생존 시간을 감소시킬 것이다.
대안으로, 칼로둘린은 백혈구 세포들의 정상 기능에 관여하기 때이다 (Horwitz, S.B., et al. J. Cell Biol. 91:798 (1981); Takenawa, T., et al. Biochem J. 15:208 (1982); Westra, J., et al. BMC Musculoskelet. Disord. 30:11 (2010); Naccache, P.H., et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 97(1):62 (1980); Takeshige, K., et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 99(2):484 (1981); Jones, H.P., et al. Biochem Biophys. Acta. 714(1):152 (1982); Jones, H.P., et al. Methods Enzymol. 015:389 (1984); Verploegen, S., et al. Eur. J. Biochem. 269(18) 4625 (2002); Salisbury, J.L., et al. Nature 12:294 (1981); Boubali, S., et al. Mol. Immunol. 52(2):51 (2012); Hao, N., et al. Clin. Dev. Immunol. (2012)). CBP501은 백혈구가 과도하게 요구될 때, 가령 백혈구 세포 수가 증가되는 활성 감염으로 환자들이 고통을 받는 상황에 있을 때, WBC 기능에 잠재적 해를 가함으로써 전반적인 생존에 유익한 활성을 간섭하고, 시작할 수 있다.
칼모둘린 저해는 칼모둘린이 T 세포 무력증을 유도하는 것으로 제안되었기 때문에, 림프구에 작용함으로써 항-암 면역에 또한 영향을 줄 수 있다 (Boubali, S., et al. Mol. Immunol. 52(2):51 (2012)).
사전-치료 또는 기선 WBC 수는 백금 기반 요법으로 치료를 받은 NSCLC 환자들에게 예후 인자로 나타났다 (Teramukai, S., et al. Eur. J. Cancer (45(11:1950 (2009); Kim, J.W., et al. Cancer Res. Trest. 45:4):325 (2013)) CBP501은 시스플라틴의 활성을 조절함으로써 이러한 효과를 강화시킬 수 있다. 모든 환자가 치료전 보편적으로 승인된 표준 절차로써 WBC의 실험실 분석을 받기 때문에, 환자들은 WBC 수에 근거하여 선별될 수 있다.
CBP501에 의한 칼모둘린 저해는 백금 농도와는 무관하에 종양 이동 및 전이를 직접적으로 저해할 수 있는데, 칼모둘린은 이동에 중요한 역할을 하는 것으로 나타났기 때문이다 (Wang, H., et al. Nat. Commun. 4:1354 (2013)).
SEQUENCE LISTING <110> CanBas Co., Ltd. KAWABE, TAKUMI MINE, NAOKI SAITO, NAOYA SAKAKIBARA, KEIICHI SATO, TAKUJI <120> PEPTIDES AND PEPTIDOMIMETICS IN COMBINATION USES AND TREATMENTS FOR CANCER PATIENT SUBPOPULATIONS <130> 087533-0432881 <140> 14/313,264 <141> 2014-06-24 <150> 61/838,777 <151> 2013-06-24 <160> 139 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <400> 1 000 <210> 2 <400> 2 000 <210> 3 <400> 3 000 <210> 4 <400> 4 000 <210> 5 <400> 5 000 <210> 6 <400> 6 000 <210> 7 <400> 7 000 <210> 8 <400> 8 000 <210> 9 <400> 9 000 <210> 10 <400> 10 000 <210> 11 <400> 11 000 <210> 12 <400> 12 000 <210> 13 <400> 13 000 <210> 14 <400> 14 000 <210> 15 <400> 15 000 <210> 16 <400> 16 000 <210> 17 <400> 17 000 <210> 18 <400> 18 000 <210> 19 <400> 19 000 <210> 20 <400> 20 000 <210> 21 <400> 21 000 <210> 22 <400> 22 000 <210> 23 <400> 23 000 <210> 24 <400> 24 000 <210> 25 <400> 25 000 <210> 26 <400> 26 000 <210> 27 <400> 27 000 <210> 28 <400> 28 000 <210> 29 <400> 29 000 <210> 30 <400> 30 000 <210> 31 <400> 31 000 <210> 32 <400> 32 000 <210> 33 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<222> (11)..(11) <223> Xaa is (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F) or (Phe-4CF3) <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> Xaa is Cha, or Nal(2) <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> Xaa is Cha, or Nal(2) <400> 48 Arg Arg Arg Arg Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 49 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is d- or l-Arg <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Xaa is Cha, or Nal(2) <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Xaa is Cha, or Nal(2) <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> Xaa is (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F) or (Phe-4CF3) <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> Xaa is any amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Xaa is d- or l-Trp <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Xaa is any amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> Xaa is Bpa or (Ser-Tyr) <400> 49 Xaa Arg Arg Arg Arg Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 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MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Bpa or (Ser-Tyr) <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Xaa is (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F) or (Phe-4CF3) <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> Xaa is Cha, or Nal(2) <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> Xaa is Cha, or Nal(2) <400> 51 Xaa Arg Xaa Arg Arg Arg Xaa Xaa 1 5 <210> 52 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Cha, or Nal(2) <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Cha, or Nal(2) <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Xaa is Bpa or (Ser-Tyr) <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> Xaa is d- or l-Trp <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> Xaa is (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F) or (Phe-4CF3) <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> Xaa is Cha, or Nal(2) <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> Xaa is Cha, or Nal(2) <400> 52 Xaa Arg Arg Xaa Arg Xaa Arg Xaa Xaa 1 5 <210> 53 <211> 8 <212> PRT <213> 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Synthetic peptide sequence <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Gln or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Xaa is Bpa or (Ser-Tyr) <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> Xaa is Phe-2,3,4,5,6-F <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> Xaa is Cha or Nal(2) <400> 57 Arg Arg Xaa Xaa Arg Trp Arg Xaa Xaa 1 5 <210> 58 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Cha or Nal(2) <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Phe-2,3,4,5,6-F <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> Xaa is Bpa or (Ser-Tyr) <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Xaa is Gln or Arg <400> 58 Xaa Xaa Arg Trp Arg Xaa Xaa Arg Arg 1 5 <210> 59 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) 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peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <400> 93 Arg Arg Arg Gln Arg Arg Xaa Phe Ser Trp Ser Xaa 1 5 10 <210> 94 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 94 Arg Arg Arg Gln Arg Arg Xaa Ser Trp Ser Phe Xaa 1 5 10 <210> 95 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <400> 95 Arg Arg Arg Arg Arg Arg Xaa Phe Ser Trp Ser Xaa 1 5 10 <210> 96 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 96 Arg Arg Xaa Arg Arg Arg Phe Xaa 1 5 <210> 97 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 97 Arg Arg Arg Xaa Arg Trp Arg Phe Xaa 1 5 <210> 98 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 98 Arg Arg Arg Arg Xaa Arg Trp Arg Phe Xaa 1 5 10 <210> 99 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 99 Arg Arg Arg Xaa Arg Arg Arg Phe Xaa 1 5 <210> 100 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 100 Arg Arg Arg Gln Arg Arg Xaa Ser Trp Ser Phe Xaa 1 5 10 <210> 101 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 101 Xaa Ser Trp Ser Phe Xaa 1 5 <210> 102 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 102 Tyr Ser Pro Trp Ser Phe Xaa 1 5 <210> 103 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 103 Xaa Cys Trp Ser Phe Xaa Cys 1 5 <210> 104 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 104 Tyr Cys Pro Trp Ser Phe Xaa Cys 1 5 <210> 105 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 105 Tyr Gln Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Xaa Phe Arg Ser Pro 1 5 10 15 Ser Tyr Tyr <210> 106 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Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 117 Xaa Phe Xaa Arg Arg Arg Gln Arg Arg Lys Lys Arg Gly Tyr 1 5 10 <210> 118 <400> 118 000 <210> 119 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 119 Xaa Phe Xaa Arg Arg Arg Gln Arg Arg 1 5 <210> 120 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 120 Xaa Xaa 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of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 125 Xaa Xaa Xaa Phe Arg Arg Arg Gln Arg Arg 1 5 10 <210> 126 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 126 Xaa Xaa Phe Arg Arg Arg Gln Arg Arg 1 5 <210> 127 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 127 Asp Xaa Ser Trp Ser 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Cyclohexyl-alanine <400> 130 Xaa Ser Trp Ser Xaa Xaa Arg Arg Arg Gln Arg Arg 1 5 10 <210> 131 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 131 Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Arg Arg Gln Arg Arg 1 5 10 <210> 132 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 132 Xaa Pro Trp Pro Phe Xaa Arg Arg Arg Gln Arg Arg 1 5 10 <210> 133 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is 2-Naphthyl-alanyl <400> 133 Xaa Pro Trp Pro Phe Xaa Arg Arg Arg Gln Arg Arg 1 5 10 <210> 134 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 134 Phe Pro Trp Pro Phe Xaa Arg Arg Arg Gln Arg Arg 1 5 10 <210> 135 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is Benzoyl-phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is Cyclohexyl-alanine <400> 135 Xaa Cys Trp Arg Phe Xaa Cys 1 5 <210> 136 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of artificial sequence: Synthetic peptide sequence <220> <221> 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Claims (54)

  1. 혈액 마이크로리터당 11,000개 미만의 백혈구 세포 수(wbc/μl)를 갖는 포유류에서 세포 증식성 장애의 예방 또는 치료를 위한 약제학적 조성물로서, 상기 약제학적 조성물은 펩티드 화합물 또는 이의 약제학적으로 수용가능한 염을 포함하며, 상기 펩티드 화합물은 (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (서열 번호:1)을 포함하고,
    상기 세포 증식성 장애는 종양 또는 암을 포함하는, 약제학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 포유류는 혈액 마이크로리터당 4,000 내지 11,000개 미만의 백혈구 세포 수(wbc/μl)를 갖는, 약제학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 포유류는 혈액 마이크로리터당 10,000개 미만의 백혈구 세포 수(wbc/μl)를 갖는, 약제학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 포유류는 혈액 마이크로리터당 9,000개 미만의 백혈구 세포 수(wbc/μl)를 갖는, 약제학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 포유류는 혈액 마이크로리터당 4,000 내지 9,000개의 백혈구 세포 수(wbc/μl)를 갖는, 약제학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 포유류는 혈액 마이크로리터당 8,000개 미만의 백혈구 세포 수(wbc/μl)를 갖는, 약제학적 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 포유류는 혈액 마이크로리터당 7,000개 미만의 백혈구 세포 수(wbc/μl)를 갖는, 약제학적 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 약제학적으로 수용가능한 염은 아세테이트, 술포네이트, 황산염, 피로황산염, 중황산염, 아황산염, 중아황산염, 인산염, 일수소-인산염, 이수소인산염, 메타인산염, 피로인산염, 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포름산염, 이소부틸레이트, 카프로에이트, 헵타노에이트, 프로피오레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 숙시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말레이트, 부티네-1,4-디오에이트, 헥시네-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 염화벤조에이트, 메틸 벤조에이트, 디니트로벤조에이트, 히드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 크실렌술포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, 히드록시부티레이트, 글리콜레이트, 타르트레이트, 메탄-술포네이트, 프로판술포네이트, 나프탈렌-1-술포네이트, 나프탈렌-2-술포네이트, 및 만델레이트로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 상기 펩티드 화합물은 6 내지 10개, 10 내지 15개, 15 내지 20개, 20 내지 25개, 25 내지 30개, 30 내지 40개, 40 내지 50개, 50 내지 75개, 75 내지 100개, 100 내지 150개, 150 내지 200개, 또는 200 내지 300개 길이의 아미노산 잔기를 보유하는, 약제학적 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 상기 펩티드 화합물은 이들에 부착 또는 접합된 세포 침투 펩티드를 더 포함하는, 약제학적 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 상기 세포 침투 펩티드는 공유 결합, 또는 펩티드 또는 비-펩티드 링커에 의해 상기 펩티드 화합물에 연결된, 약제학적 조성물.
  12. 제10항에 있어서, 상기 세포 침투 펩티드는 극성/하전된 아미노산과 비-극성, 소수성 아미노산의 교대 패턴을 포함하는, 약제학적 조성물.
  13. 제10항에 있어서, 상기 세포 침투 펩티드는 다중양이온 또는 양친매성 알파-나선 구조를 포함하는, 약제학적 조성물.
  14. 제1항에 있어서, 상기 펩티드 화합물은 L-또는 D-이성체 아미노산, 또는 L-및 D-이성체 아미노산의 혼합물을 포함하는, 약제학적 조성물.
  15. 제10항에 있어서, 상기 세포 침투 펩티드는 폴리-아르기닌 (Arg) 서열을 포함하는, 약제학적 조성물.
  16. 제10항에 있어서, 상기 세포 침투 펩티드는 (d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)를 포함하거나 이들로 구성되는, 약제학적 조성물.
  17. 제1항에 있어서, 치료는 백금 함유 약물, 페메트렉세드, 겜시타빈, 5-플루오르우라실 (5-FU), 레베카마이신, 아드리아마이신 (ADR), 블레오마이신 (Bleo), 페플레오마이신, 시스-디아민디클로로플라티늄(II) (CDDP), 옥살리플라틴, 캄포테신 (CPT), 사이클로포스파미드, 아자티오프린, 시클로스포린 A, 프레디니졸론, 멜파란, 클로람부칠, 메클로에타민, 부술판, 메토트렉세이트, 6-멀캅토퓨린, 티오구아닌, 시토신 아라비노시드, AZT, 5-아자시티딘 (5-AZC) 또는 5-아자시티딘 관련된 화합물, 악티노마이신 D, 미트라마이신, 미토마이신 C, 카르무스틴, 로무스틴, 세무스틴, 스트렙토조토신, 히드록시우레아, 시스플라틴, 미토탄, 프로카르바진, 다카르바진, 탁산, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 독소루비친, 및 디브로모만니톨로부터 선택되는 핵산 손상 물질, 또는 항-증식성 물질의 투여를 포함하는, 약제학적 조성물.
  18. 제1항에 있어서, 치료는 외과적 절제술, 방사선치료, 이온화 또는 화학적 방사선 치료요법, 화학요법, 면역요법, 국소 또는 지역적 열 (고열) 요법, 및 예방접종으로부터 선택되는 핵산 손상 치료, 또는 항-증식성 치료를 포함하는, 약제학적 조성물.
  19. 제17항에 있어서, 상기 펩티드 화합물은 핵산 손상 물질, 또는 항-증식성 물질이 투여되기 전, 이들의 투여와 함께, 이들이 투여된 후 투여되는, 약제학적 조성물.
  20. 제17항에 있어서, 상기 펩티드 화합물은 핵산 손상 물질 또는 항-증식성 물질이 투여되기 전 또는 후 48시간 이내 투여되는, 약제학적 조성물.
  21. 제17항에 있어서, 상기 펩티드 화합물은 핵산 손상 물질 또는 항-증식성 물질이 투여되기 전 또는 후 24시간 이내 투여되는, 약제학적 조성물.
  22. 제17항에 있어서, 상기 펩티드 화합물은 핵산 손상 물질 또는 항-증식성 물질이 투여되기 전 또는 후 12시간 이내 투여되는, 약제학적 조성물.
  23. 제17항에 있어서, 상기 펩티드 화합물은 핵산 손상 물질 또는 항-증식성 물질이 투여되기 전 또는 후 6시간 이내 투여되는, 약제학적 조성물.
  24. 제17항에 있어서, 상기 펩티드 화합물은 핵산 손상 물질 또는 항-증식성 물질이 투여되기 전 또는 후 4시간 이내 투여되는, 약제학적 조성물.
  25. 제17항에 있어서, 상기 펩티드 화합물은 핵산 손상 물질 또는 항-증식성 물질이 투여되기 전 또는 후 2시간 이내 투여되는, 약제학적 조성물.
  26. 제17항에 있어서, 상기 펩티드 화합물은 핵산 손상 물질 또는 항-증식성 물질이 투여되기 전 또는 후 1시간 이내 투여되는, 약제학적 조성물.
  27. 제17항에 있어서, 백금 함유 약물은 시스-플라틴, 카르보플라틴, 네다플라틴, 미타플라틴, 사트라플라틴, 피코플라틴, 트리플라틴, 미리플라틴, 및 옥살리플라틴으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
  28. 제27항에 있어서, 백금 함유 약물은 시스-플라틴 또는 카르보플라틴을 포함하는, 약제학적 조성물.
  29. 제18항에 있어서, 상기 방사선 치료요법은 UV방사선, IR 방사선, X레이, 또는 알파-, 베타-또는 감마-방사선을 포함하는, 약제학적 조성물.
  30. 제29항에 있어서, 상기 방사선 치료요법은 방사성동위원소의 조사를 포함하며, 상기 방사성동위원소는 I131, I125, Sr89, Sm153, Y90, 또는 Lu177을 포함하는, 약제학적 조성물.
  31. 제1항에 있어서, 상기 종양 또는 암은 전이성 종양 또는 암을 포함하는, 약제학적 조성물.
  32. 제1항에 있어서, 상기 종양 또는 암은 폐 종양 또는 암을 포함하는, 약제학적 조성물.
  33. 제32항에 있어서, 상기 폐 종양 또는 암은 소세포 또는 비-소세포 폐 암을 포함하는, 약제학적 조성물.
  34. 제32항에 있어서, 상기 폐 종양 또는 암은 선암종, 편평 세포 암종 또는 거대 세포 암종을 포함하는, 약제학적 조성물.
  35. 제1항에 있어서, 상기 종양 또는 암은 암종, 육종, 림프종, 백혈병, 선종, 선암종, 흑색종, 교종, 교아세포종, 수막종, 신경모세포종, 망막모세포종, 별아교세포종, 핍돌기교세포종, 중피종, 망상내피, 림프관 또는 조혈의 신생물, 종양, 암 또는 악성을 포함하는, 약제학적 조성물.
  36. 제35항에 있어서, 상기 육종은 림프육종, 지방육종, 골육종, 연골육종, 평활근육종, 횡문근육종 또는 섬유육종을 포함하는, 약제학적 조성물.
  37. 제35항에 있어서, 상기 조혈의 신생물, 종양, 암 또는 악성은 골수종을 포함하는, 약제학적 조성물.
  38. 제1항에 있어서, 상기 종양 또는 암은 폐, 갑상선, 두경부, 비인두, 인두, 코 또는 부비강, 뇌, 척추, 유방, 부신, 뇌하수체, 갑상선, 림프, 위장관 (입, 식도, 위, 십이지장, 회장, 공장 (소장), 결장, 직장), 비뇨생식관 (자궁, 난소, 자궁목, 자궁내막, 방광, 고환, 음경, 전립선), 신장, 췌장, 간, 뼈, 골수, 림프, 혈액, 근육, 또는 피부의 신생물, 종양, 또는 암을 포함하는, 약제학적 조성물.
  39. 제1항에 있어서, 상기 종양 또는 암은 유방 암, 전립선 암, 췌장 암, 위암, 늑막 중피종, 결장 암, 직장 암, 대장 암, 소장 암, 식도 암, 십이지장 암, 설암, 인두 암, 침샘 암, 뇌 종양, 신경초종, 간 암, 신장 암, 담관 암, 자궁내막 암, 자궁경부 암, 자궁체 암, 난소 암, 방광 암, 요도 암, 피부 암, 혈관종, 악성 림프종, 악성 흑색종, 갑상선 암, 부갑상선 암, 비(nasal) 암, 부비암 암, 청각기관 암, 입안바닥의 암종, 후두암, 귀밑샘 암, 아래턱밑 암, 뼈 종양, 혈관섬유종, 신장 육종, 음경 암, 고환 종양, 소아 고형암, 카포시 육종, 상악동의 종양, 섬유조직구종, 평활근육종, 횡문근육종, 또는 다발 골수종을 포함하는, 약제학적 조성물.
  40. 제1항에 있어서, 상기 포유류는 인간인, 약제학적 조성물.
  41. 제1항에 있어서, 상기 펩티드 화합물은 다음을 포함하는 약제학적 조성물:
    (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg), 또는
    (d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha).
  42. 제1항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 상기 종양 또는 암의 재발, 성장, 진행, 악화 또는 전이를 저해 또는 감소시키는, 약제학적 조성물.
  43. 제1항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 신형성, 종양, 암 또는 악성 세포 덩어리, 세포의 용적, 크기 또는 수를 부분적으로 또는 완전하게 파괴시키고, 신형성, 종양, 암 또는 악성 세포 괴사, 용해 또는 자가사멸을 촉진, 유도 또는 증가시키고, 신생물, 종양, 암 또는 악성 용적 크기, 세포 덩어리를 감소시키고, 저해 또는 신생물, 종양, 암 또는 악성 용적, 덩어리, 크기 또는 세포 수의 진행 또는 증가를 저지시키고, 또는 수명을 연장시키는, 약제학적 조성물.
  44. 제1항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 신생물, 종양, 암 또는 악성과 연합된 또는 원인이 되는 불리한 증상 또는 여병의 심각성, 기간 또는 빈도를 감소시키거나 또는 줄이는, 약제학적 조성물.
  45. 제1항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 통증, 불편함, 매스꺼움, 허약 또는 기면을 감소 또는 줄이며, 또는 에너지 및 식욕을 증가시키고, 이동성을 개선시키거나 또는 심리적 안녕을 개선시키는, 약제학적 조성물.
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