KR102203483B1 - 방사성 금속 및 유로피움을 포함하는 광역동 요법용 조성물 - Google Patents

방사성 금속 및 유로피움을 포함하는 광역동 요법용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명의 조성물은 생체 내 높은 안정도와, 우수한 활성산소 발생능력을 가지고 있어, 광역동 요법에 사용시 우수한 순환능과 표적능을 발휘할 수 있다.

Description

방사성 금속 및 유로피움을 포함하는 광역동 요법용 조성물{Composition for photodynamic therapy comprising Europium and Radioactive metal}
본 발명은 생체 내 높은 안정도와, 우수한 활성산소 발생능력을 갖는 광역동 요법용 조성물에 관한 것이다.
광역동 치료(Photodynamic therapy, PDT)는 광화학 치료 라고도 불리우며, 광감작제(photosensitizer)라는 화학물질에 상응하는 특정 파장 대의 빛에너지를 조사하여 이를 매개로 광감작제와 산소 분자 간의 결합을 통하여 세포 사멸을 유도하는 치료법이다. 빛에너지를 흡수한 광감작제는 병변 조직이나 세포 주변의 물 분자 또는 산소 분자 구조 내에 있는 전자를 이동 또는 이탈시켜 활성 산소(Reactive oxygen species, ROS)를 생산하고, 이를 통해 세포 사멸을 유도한다. 광역동 치료는 이미 박테리아, 바이러스, 곰팡이와 같은 미생물을 제거하는 능력이 있다고 증명되었고, 특히 여드름을 치료하는데 많이 사용되고 있다. 하지만, 보통 광역동 치료에 사용되는 빛에너지의 경우, 비침습적이고 높은 투과율을 위해 600~900 nm 파장대의 근적외선을 조사해주지만, 그 투과율이 피부로부터 1 cm 정도 밖에 되지 않아 이보다 더 깊이 있는 심부의 병변 조직에 대해서는 치료가 어렵다는 것이 한계점이라고 할 수 있다. 이러한 문제점을 개선하기 위해 X선을 이용한 광역동 치료 연구가 진행되고 있으나, X선 자체로 광감작제가 활성산소를 생산할 수 있도록 직접적인 영향을 주지 못하기 때문에, 그 중간 매개체 역할로 유로피움이라는 란탄족 금속 이온을 광역동 치료를 유도하는 용도로 사용하였다. 이 연구에서 유로피움이 X선으로부터 받은 에너지를 광감작제가 활성산소를 만들어 낼 수 있는 에너지로 전환하여 전달할 수 있다는 것이 증명되었고, 이와 유사한 맥락으로 감마선에 의해서 유로피움이 빨간색 파장 영역의 방사성 발광을 한다는 특성을 이용하여 형광 분자 이미징이 가능하다는 연구가 보고되었다. 이 두 연구에서 사용된 나노입자의 경우 유로피움을 첨가하거나 산화물의 형태로 그 크기가 생체 내 이미징을 하기에 너무 크거나 생체 내 조건에서 분해된다는 문제와, 더불어 생체 내에서의 나노 입자 안정도 또는 병변 부위에 대한 표적능을 보여주지 않았다는 한계점을 가지고 있다.
한국공개특허 2013-0013136호
본 발명은 생체 내 높은 안정도와, 우수한 활성산소 발생능력을 갖는 광역동 요법용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
1. Eu-DTPA 복합체 및 Victoria-blue BO 를 담지한 방사성 표지 리포좀; 및 방사성 금속을 포함하는 광역동 요법용 조성물.
2. 위 1에 있어서, 상기 리포좀은 NOTA, DOTA, DTPA, EDTA, Cyclen, Cyclam 및 NTA로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나로 방사성 표지된 것인 조성물.
3. 위 1에 있어서, 상기 리포좀은 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디스테아로일-sn―글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메틸(폴리에틸렌글리콜)-5000], 1,2-디스테아로일-sn―글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메틸(폴리에틸렌글리콜)-5000] 암모늄염, 콜레스테롤, 디올레오일 포스파티딜콜린, 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 디팔미토일포스파티딜콜린 및 콜레스테릴 헤미숙시네이트로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나의 인지질을 포함하는 것인 조성물.
4. 위 1에 있어서, 상기 방사성 금속은 99mTc, 64Cu, 18F, 89Zr, 68Ga, 198Au, 199Au, 105Rh, 177Lu, 153Sm, 166Ho, 149Tb, 161Tb, 149Pm, 186Re, 188Re, 44Sc, 47Sc, 67Cu, 71As, 72As, 74As, 77As, 212Pb, 212Bi, 213Bi, 117mSn, 67Ga, 111In, 82Rb, 90Y, 86Y, 52gMn, 54Mn, 및 51Mn 로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나인 조성물.
5. 위 1에 있어서, 상기 담지는 리포좀의 표면, 내부 또는 인지질 이중층에 이루어진 것인 조성물.
6. 위 1 내지 5 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 암의 진단 또는 치료용 약학적 조성물.
본 발명의 광역동 요법용 조성물은 생체 내 높은 안정도와, 우수한 활성산소 발생능력을 갖는다.
도 1은 Eu/PS lipo를 이용한 생체 외 및 생체 내 실험 진행 모식도이다.
도 2, 3은 4종류의 리포좀(Eu lipo, Eu/RB lipo, Eu/Ce6 lipo, Eu/VBBO lipo) 모두 3가지 조건의 환경 (PBS, human serum, cell media(RPMI))에서의 분산 안정도를 확인한 것이다.
도 4는 99mTc의 활성도와 유로피움의 양에 의존적으로 감마선에 의한 유로피움의 방사성 발광 세기가 증가함을 보여주는 결과이다.
도 5는 Eu/VBBO lipo가 유로피움만 내제된 리포좀 (Eu lipo) 보다 약 8배 정도의 더 많은 ROS가 발생함을 보여주는 결과이다.
도 6 내지 8은 본 발명 Eu lipo, Eu/VBBO lipo의 blood pool 에서의 순환능 및 표적능(passive targeting)과 tumor 부위로의 섭취를 보여주는 결과이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 Eu-DTPA 복합체 및 Victoria-blue BO 를 담지한 방사성 표지 리포좀; 및 방사성 금속을 포함하는 광역동 요법용 조성물을 제공한다.
상기 Eu-DTPA 복합체는 란탄족 금속인 유로피움(Europium)과 DTPA(Diethylenetriamine pentaacetic acid) 간 형성된 복합체로서, 유로피움을 안정화시키는 역할을 한다. 상기 안정화는 Eu가 DTPA의 질소원자 또는 산소원자와 결합을 이루어 안정화된 구조일 수 있으나, 반드시 이에 제한되지 않는다.
상기 Victoria-blue BO는 VBBO로 약칭되는 광감작제(Photosensitizer)의 한 종류로서, 특정 파장의 빛에 의해 자극되면, 특정 환경 내 산소 라디칼과 반응하여 활성산소를 만들어 낸다. 상기 특정 환경이 암세포인 경우, 생성된 활성산소는 암세포의 사멸을 이끌게 되어, VBBO 및 이를 포함하는 조성물은 암의 진단 또는 치료에 널리 사용될 수 있다.
상기 리포좀은 인지질로 구성된 이중층 막 구조를 말하는 것으로, 바람직하게는 마이쉘(micelle) 구조를 의미하는 것일 수 있다.
상기 리포좀을 구성하는 인지질은 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디스테아로일-sn―글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메틸(폴리에틸렌글리콜)-5000], 1,2-디스테아로일-sn―글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메틸(폴리에틸렌글리콜)-5000] 암모늄염, 콜레스테롤, 디올레오일 포스파티딜콜린, 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 디팔미토일포스파티딜콜린 및 콜레스테릴 헤미숙시네이트로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나일 수 있으나, 반드시 이에 제한되지 않는다.
상기 리포좀을 구성하는 인지질의 함량비에 대한 특별한 제한은 없고, 제조하고자 하는 리포좀의 크기를 고려하여 자유로이 그 비율을 설정할 수 있다.
상기 리포좀은 NOTA(1,4,7-Triazacyclononane-1,4,7-triacetic acid), DOTA(1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid), DTPA(Diethylenetriamine pentaacetic acid), EDTA(Ethylenediaminetetraacetic acid), Cyclen, Cyclam 및 NTA(Nitrilotriacetic acid)로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나로 방사성 표지된 것일 수 있는데, 이는 후술할 조성물 내 포함되는 방사성 금속의 안정성을 상승시키고, 광역동 요법에 있어서 생체 추적 효과 상승시키는 역할을 한다.
상기 담지는 리포좀의 표면, 내부 또는 인지질 이중층에 이루어진 것일 수 있고, 상기 복합체와 광감작제의 안정성 유지를 위해 바람직하게는 리포좀의 내부에 담지된 것일 수 있으나, 반드시 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 방사성 금속은 99mTc, 64Cu, 18F, 89Zr, 68Ga, 198Au, 199Au, 105Rh, 177Lu, 153Sm, 166Ho, 149Tb, 161Tb, 149Pm, 186Re, 188Re, 44Sc, 47Sc, 67Cu, 71As, 72As, 74As, 77As, 212Pb, 212Bi, 213Bi, 117mSn, 67Ga, 111In, 82Rb, 90Y, 86Y, 52gMn, 54Mn, 및 51Mn 로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나일 수 있는데, 이는 외부에서 광을 별도로 쬐어주지 않아도 유로피움을 자극할 수 있어 인체에 보다 안전하고 그 편의성이 뛰어나며, 비용적 절감효과도 뛰어나다.
상기 조성물은 광역동 요법(Photodynamic Therapy)용으로서, 질병을 가진 세포에만 선택적으로 활성산소가 축적되어　치료적 효과를 나타내는　치료요법을 말한다.　광역동　요법은　암의　진단과　치료, 자가골수이식, 항생제, AIDS　치료, 피부이식 수술 또는 관절염에 적용될 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명은 상기 광역법 요법용 조성물을 포함하는 암의 진단 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 '진단'은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 말하며, 구체적으로 상기 약학적 조성물을 통해　암의 발병 여부를 확인하는 것일 수 있다.
상기 '진단'은 상기 약학적 조성물을 개체에 도입한 결과, 암세포가 존재하는 부위에서 강한 형광을 나타내고, 이를 이용하여 암세포를 이미징 함으로써 암을 진단할 수 있으며, 구체적인 진단예는 하기 실시예에 설명될 수 있다.
상기 '치료'는 본 발명의 약학적 조성물을 투여하여 증세가 호전되거나,　암세포가 괴사 및/또는 사멸되도록 하는 행위를 포함하며, 다른 항암제, 방사선 요법, 수술 등과 병행하여 사용될 수 있다.
상기 '암'은 형질전환된 세포의 억제되지 않는 분열 또는 증식, 무질서한 성장 결과로 빚어지는 복합적인 질환을 일컬으며, '종양세포'와 혼용되어 사용될 수 있다. 구체적으로, 본 발명에서는　광역동　요법을 적용하기 위한 고형암을 대상으로 할 수 있다. 상기 고형암으로는 뇌종양(Brain Tumor), 양성성상세포종(Low- grade astrocytoma), 악성성상세포종(High-grade astrocytoma), 뇌하수체 선종(Pituitary adenoma), 뇌수막종(Meningioma), 뇌림프종(CNS lymphoma), 핍지교종(Oligodendroglioma), 두개내인종 (Craniopharyngioma), 상의세포종(Ependymoma), 뇌간종양(Brain stem tumor), 두경부 종양(Head & Neck Tumor), 후두암(Larygeal cancer), 구인두암(Oropgaryngeal cancer), 비강/부비동암(Nasal cavity/PNS tumor), 비인두암(Nasopharyngeal tumor), 침샘암(Salivary gland tumor), 하인두암(Hypopharyngeal cancer), 갑상선암(thyroid cancer), 구강암(Oral cavity tumor), 흉부종양(Chest Tumor), 소세포성 폐암(Small cell lung cancer), 비소세포성 폐암(NSCLC), 흉선암(Thymoma), 종격동 종양(Mediastinal tumor), 식도암　(Esophageal cancer), 유방암(Breast cancer), 남성유방암(Male breast cancer), 복부종양(Abdomen-pelvis Tumor), 위암(Stomach cancer), 간암(Hepatoma), 담낭암　(Gall bladder cancer), 담도암(Billiary tract tumor), 췌장암(pancreatic cancer), 소장암　(Small intestinal tumor), 대장암(Large intestinal tumor), 항문암(Anal cancer), 방광암　(Bladder cancer), 신장암(Renal cell carcinoma), 전립선암(Prostatic cancer), 자궁경부암(Cervix cancer), 자궁내막암(Endometrial cancer), 난소암(Ovarian cancer), 자궁육종(Uterine sarcoma), 피부암(Skin Cancer) 등을 포함할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있으며, 담체와 함께 제제화될 수 있다. 본 발명에서 용어, "약학적으로 허용가능한 담체"란 생물체를 자극하지 않고 투여 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 말한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용되는 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로오스 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 본 발명의 광역동 요법용 조성물을 유효성분으로 포함하는 어떠한 제형으로도 적용가능하며, 경구용 또는 비경구용 제형으로 제조할 수 있다. 본 발명의 약학적 제형은 구강(oral), 직장(rectal), 비강(nasal), 국소(topical; 볼 및 혀 밑을 포함), 피하, 질(vaginal) 또는 비경구(parenteral; 근육내, 피하 및 정맥내를 포함) 투여에 적당한 것 또는 흡입(inhalation) 또는 주입(insufflation)에 의한 투여에 적당한 형태를 포함한다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 매우 다양하며, 적정한 투여량은 예를 들면 환자의 체내에 축적된 약물의 양 및/또는 사용되는 본 발명의 광역동 요법용 조성물의 구체적 효능정도에 따라 달라질 수 있다. 일반적으로 인비보 동물모델 및 인비트로에서 효과적인 것으로 측정된 EC50을 기초로 계산될 수 있으며, 예를 들면 체중 1kg당 0.01 μg 내지 1 g 일 수 있으며, 일별, 주별, 월별 또는 연별의 단위 기간으로, 단위 기간 당 일회 내지 수회 나누어 투여될 수 있으며, 또는 인퓨전 펌프를 이용하여 장기간 연속적으로 투여될 수 있다. 반복투여 횟수는 약물이 체내 머무는 시간, 체내 약물 농도 등을 고려하여 결정된다. 질환 치료 경과에 따라 치료가 된 후라도, 재발을 위해 조성물이 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 암의 치료와 관련하여 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 또는 유효성분의 용해성 및/또는 흡수성을 유지/증가시키는 화합물을 추가로 함유할 수 있다. 또한 선택적으로, 화학치료제, 항염증제, 항바이러스제 및/또는 면역조절제 등을 추가로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 제형은 분말, 과립, 정제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 멸균 주사용액, 멸균 분말의 형태일 수 있다.
이하, 본 발명을 구체적으로 설명하기 위해 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다.
실시예 1. 실험방법
1. Eu-DTPA 복합체와 광감작제를 담지한 리포좀(Eu/PS lipo)의 제조 및 방사성 표지
EuCl3·6H2O의 투명한 백색 분말을 증류수에, DTPA(Diethylenetriamine pentaacetic acid)의 백색 분말을 0.1M NaOH 용액에 각각 용해시켰다. 동일한 몰 비율로 혼합하여 만든 Eu-DTPA 복합체 용액을 중성 pH로 조정하였다.
이후, 1,4,7-Triazacyclononane-1,4,7-triacetic acid (NOTA)를 방사선 표지를 위한 킬레이터로 사용하여, 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[amino(polyethyleneglycol)-2000] (ammonium salt) (DSPE-PEG (2000)-amine)을 2-(p-Isothiocyanatobenzyl)-1,4,7-triazacyclononane-N,N',N,''-triacetic acid trihydrochloride ((p-SCN-Bn)-NOTA)와 섞고 12시간동안 상온 조건에서 반응시켰다. 투명한 지방층이 제조되기 전에 NOTA가 결합된 DSPE-PEG (2000)를 PC 유도체 혼합물(1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC), 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methyl(polyethyleneglycol)-5000] (ammonium salt) (DSPE-PEG (5000)-CH3), 콜레스테롤을 6.3: 3.9: 1의 몰 비율로 클로로포름에 용해시킨 용액)과 함께 첨가하였다.
광감작제(Rose bangal(RB), Chlorin e6(Ce6), Victoria-blue BO(VBBO))는 지질 구성 성분들과 함께 첨가하였다. 지질상의 용매로 쓰인 클로로포름은 투명한 지질 박막이 바이알 바닥에 코팅 될 때까지 질소 가스처리 또는 회전식 증발기를 이용하여 증발시켰다. 증발시킨 지질층을 12시간동안 진공 건조시켜 층 내부의 나머지 클로로포름까지 제거되도록 하였다.
이후, Eu-DTPA 복합체 용액을 지질층이 담긴 바이알에 첨가하고 초음파를 통해 다중 층 소포 (MAVs)를 형성시켰다. MAVs 용액은 20 % 출력으로 9 초 반응, 1 초 휴지 간격으로 10 분 동안 부가적인 초음파 처리를 실시하였다. 그 다음, 투명한 리포좀 용액을 0.2 μm 필터로 여과하고, PD-10 칼럼, 크기 배제 크로마토 그래피 칼럼으로 용출시켜 과량의 Eu-DTPA 복합체 및 PS 분자를 분리하였다.
이후, 0.1M HCl의 방사성 동위 원소 (RI) 용액에 0.5 M sodium acetate 완충 용액을 첨가하여 pH 5가 될 때까지 적정하였다. pH 5로 적정한 RI 용액과 NOTA이 결합된 Eu/PS lipo를 혼합하여 37℃에서 30분간 반응시켰다. 반응 후, RI 표지된 Eu/PS lipo를 PD-10 컬럼으로 용출시켜 킬레이션이 되지 않은 RI로부터 분리하였다.
상기의 제조과정으로, ① Eu lipo (광감작제를 넣지 않은 리포좀), ② Eu/RB lipo (광감작제로 RB를 넣은 리포좀), ③ Eu/Ce6 lipo (광감작제로 Ce6를 넣은 리포좀), ④ Eu/VBBO lipo (광감작제로 VBBO를 넣은 리포좀) 4종류의 리포좀을 제조하였다.
2. 유로피움 형광을 통한 리포좀의 분산 안정도 확인
실시예 1-1에 의해 합성한 4 종류의 리포좀(Eu lipo, Eu/RB lipo, Eu/Ce6 lipo, Eu/VBBO lipo)에 4W UV lamp를 통해 UV선(365 nm)을 조사하여 빨간 형광이 나오는지 확인하였다.
PBS 버퍼용액, Human serum 용액, 세포 배양액 (RPMI)에 4 종류의 리포좀을 각각 1:10 (리포좀: PBS, Human serum 또는 RPMI)의 부피 비로 섞어 0일, 1일, 7일에서의 DLS(Dynamic Light Scattering) 측정을 통한 리포좀의 크기를 비교하였다.
3. 99m Tc에 의해 유도된 방사성 발광 확인
99mTc에서 방출되는 감마선에 의한 방사성 발광 정도를 보기 위해 Eu lipo (104 μg of Eu)에 99mTc을 활성도 별(1 mCi, 0.5 mCi, 0.1 mCi)로 혼합하여 실험을 진행하였고, PBS 버퍼 용액과 99mTc (1 mCi) 혼합물을 비교군을 설정하였다. 그리고 99mTc (1 mCi)과 Eu lipo (104 μg, 52 μg, 26 μg)을 각각 농도별로 혼합하여 IVIS 영상을 통해 방사성 발광을 측정하였다 (Excitation filter: none, emission filter: open). 영상 이미지의 발광 세기를 측정하여 각각의 실험군에 대한 수치 그래프를 작성하였다.
4. 99m Tc에 의해 유도된 활성산소 발생 확인
99mTc에서 방출된 감마선에 의한 유로피움의 방사성 발광 에너지에 의해 광감작제가 ROS를 생성하는지 확인하기 위해 Eu lipo, Eu/RB lipo, Eu/Ce6 lipo, Eu/VBBO lipo에 대해서 실험을 실시하였다. 96-well microplate에 각각의 리포좀 용액 100 μL 에 99mTc (0.5 mCi)을 함께 섞은 용액과 비교군으로 PBS 버퍼를 넣은 용액을 37℃에서 30분동안 반응 후 촉매 50 μL를 넣고 5분 동안 상온에서 반응시켜주었다. 그리고 DCFH 용액 100 μL을 넣고 상온에서 30분동안 반응시킨 용액의 형광 세기를 측정하였다 (excitation: 485 nm). 99mTc을 넣지 않은 비교군의 형광 세기와 99mTc을 넣어준 실험군의 형광 세기 간의 비율로 감마선의 영향으로 인한 ROS 발생이 어느정도 증가하였는지 비교하였다(하기 수학식 1).
[수학식 1]
Figure 112018132044816-pat00001
5. 마우스 종양 모델에서의 In vivo 이미징
Eu lipo가 생체 내 이미징으로 적합한 프로브인지 확인하기 위해, Balb/c nude 마우스에 head and neck cancer 세포주의 한 종류인 FaDu 세포주를 이용하여 피하 종양 모델을 제작하였다. 64Cu를 표지한 Eu lipo와 Eu/VBBO lipo을 피하 종양 모델에 각각 80 μCi씩 정맥 주사로 주입하고 0, 1, 4, 24, 48시간대의 PET 영상 촬영을 실시하여 리포좀의 순환능 및 표적능을 확인하였다.
실시예 2. 실험결과
1. 유로피움 형광을 통한 리포좀의 분산 안정도 확인
도 2 및 3을 참조하면, 4종류의 리포좀(Eu lipo, Eu/RB lipo, Eu/Ce6 lipo, Eu/VBBO lipo) 모두 3가지 조건의 환경 (PBS, human serum, cell media(RPMI))에서 7일 동안 침전물 없이 입자의 크기 변화가 거의 없는 것을 확인할 수 있는데, 이는 본 발명의 리포좀이 생체 내 환경에서 안정적으로 분산될 수 있음을 암시케 하는 결과로 판단된다.
2. 99m Tc에 의해 유도된 방사성 발광 확인
도 4를 참조하면, 99mTc의 활성도와 유로피움의 양에 의존적으로 감마선에 의한 유로피움의 방사성 발광 세기가 증가한다는 것을 확인할 수 있는데, 이는 99mTc에서 방출되는 감마선이 유로피움에 성공적으로 전달될 수 있고, 99mTc의 활성도와 유로피움의 양을 조절하여 방사성 발광 정도를 조절할 수 있음을 암시케 하는 결과로 판단된다.
3. 99m Tc에 의해 유도된 활성산소 발생 확인
도 5를 참조하면, 3가지 광감작제(RB, VBBO, Ce6) 각각의 최고 흡광도 파장 영역을 유로피움의 방출 스펙트럼 그래프의 빨간색 형광 영역인 590 내지 620 nm와 비교 했을 때, 두 파장 영역이 가장 많이 겹치는 VBBO를 내재시킨 Eu/VBBO lipo가 유로피움만 내제된 리포좀 (Eu lipo) 보다 약 8배 정도의 더 많은 ROS가 발생한다는 것을 확인할 수 있다. 이는 광역동 요법에 사용할 수 있는 타 입자 또는 조성물 대비 현저한 활성산소 생성능력 상승을 보이는 것으로서, 종래기술들로부터 도출할 수 없는 효과의 현저성이 존재하는 것으로 판단된다.
4. 마우스 종양 모델에서의 In vivo 이미징
도 6 내지 8을 참조하면, Eu lipo의 경우, 최소 4시간 동안 blood pool에 Eu lipo가 존재하고 있는 것으로 보였으며, 24시간 이후부터는 mouse tumor model (Subcutaneous model, FaDu cell line)에서 tumor 부위에 약 11%ID/g의 Eu lipo 섭취가 된다는 것을 확인할 수 있다. Eu/VBBO lipo 역시 Eu lipo와 유사한 blood pool 에서의 순환능과 tumor 부위로의 섭취를 보임을 확인할 수 있고, Tumor 섭취의 경우, 약 15%ID/g의 Eu/VBBO lipo 섭취를 보여준다.

Claims (7)

  1. Eu-DTPA 복합체 및 광감작제를 담지한 방사성 표지 리포좀; 및 상기 리포좀에 결합된 방사성 금속-킬레이터 복합체를 포함하고, 상기 방사성 금속은 99mTc, 64Cu, 18F, 89Zr, 68Ga, 198Au, 177Lu, 153Sm, 166Ho, 186Re, 188Re, 67Cu, 72As, 212Pb, 212Bi, 213Bi, 117mSn, 67Ga, 111In, 82Rb 및 54Mn로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나이고, 상기 광감작제는 Rose bangal(RB), Chlorin e6(Ce6), 및 Victoria-blue BO(VBBO)로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나인, 광역동 요법용 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 킬레이터는 NOTA, DOTA, DTPA, EDTA, Cyclen, Cyclam 및 NTA로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나인 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 리포좀은 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디스테아로일-sn―글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메틸(폴리에틸렌글리콜)-5000], 1,2-디스테아로일-sn―글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메틸(폴리에틸렌글리콜)-5000] 암모늄염, 콜레스테롤, 디올레오일 포스파티딜콜린, 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 디팔미토일포스파티딜콜린 및 콜레스테릴 헤미숙시네이트로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나의 인지질을 포함하는 것인 조성물.
  4. 삭제
  5. 청구항 1에 있어서, 상기 담지는 리포좀의 표면, 내부 또는 인지질 이중층에 이루어진 것인 조성물.
  6. 삭제
  7. 청구항 1 내지 3 및 5 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 암의 진단 또는 치료용 약학적 조성물.
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