KR102186292B1 - 혼합 생약 추출물 및 설파살라진을 유효성분으로 포함하는 대장염 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 복합생약추출물 및 설파살라진(Sulfasalazine)을 유효성분으로 포함하는 대장염 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 황금 및 시호의 혼합 추출물; 및 설파살라진(Sulfasalazine) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 대장염 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 대장염, 특히 염증성 대장 질환(Inflammatory bowel disease; IBD) 또는 과민성 대장염 증후군(irritabel bowel syndrome, IBS) 등을 효과적으로 예방, 지연, 개선 또는 치료할 수 있을 뿐만 아니라, 고용량의 설파살라진(sulfasalazine) 장기 투여에 따른 부작용의 발생 염려가 현저히 낮아 대장염 예방 또는 치료제 개발에 매우 유용하게 활용될 수 있다.

Description

혼합 생약 추출물 및 설파살라진을 유효성분으로 포함하는 대장염 예방 또는 치료용 조성물{A composition comprising mixture of the herb extract and sulfasalazine for preventing or treating colitis}

본 발명은 혼합 생약 추출물 및 설파살라진(Sulfasalazine)을 유효성분으로 포함하는 대장염 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 황금 및 시호의 혼합 추출물; 및 설파살라진(Sulfasalazine) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 대장염 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

대장염은 대장에 염증이 발생하는 질환으로, 염증성 대장 질환(Inflammatory bowel disease; IBD), 과민성 대장염 증후군((irritable bowel syndrome, IBS)등을 포함한다. 염증성 대장 질환(Inflammatory bowel disease; IBD) 중 대표적인 질환인 궤양성 대장염(ulcerative colitis; UC)과 크론병(Crohn's disease; CD)은 아직 원인이 명확히 밝혀져 있지 않고 있으며, 복통과 더불어 심한 만성 설사와 혈성 설사를 일으킬 수 있으며, 완치가 힘들고 호전과 악화를 반복하는 특성이 있다. 궤양성 대장염은 대장의 점막에 진무름(미란)이나 궤양이 연속적으로 형성되는 질환으로, 혈변, 점혈변, 설사, 복통이 일어나고, 중증인 경우에는 발열, 체중감소, 빈혈 등의 전신성의 증상이 나타난다. 또한, 궤양성 대장염은 위장관 어느 부위에서도 발생할 수 있다. 크론병은 입에서 항문에 이르는 소화관의 임의의 부위에 궤양 등의 병변이 비연속적으로 발생하는 질환으로서, 복통, 설사, 혈변과 더불어, 중증의 경우에는 발열, 하혈, 체중감소, 전신권태감, 빈혈 등의 증상이 나타난다. 궤양성 대장염과 크론병은 병변과 염증 증상에 있어서 차이가 있지만 여러 면에서 유사한 양상을 보이기 때문에 두 질환의 구분이 서로 명확하지 않은 경우가 흔하다.

종래, 궤양성 대장염 및 크론병의 발생율은 서양인에게 높다고 알려져 있었지만, 최근, 식습관 등의 생활습관의 변화로 인해 우리나라 등 동양에서도 환자수가 급증하고 있다. 그렇지만, 원인이 불분명한 이유도 있어 근본적 치료법은 확립되어 있지 않다. 이 때문에 완전한 치료를 목표로 하는 것이 아니라, 증상을 완해시키고, 이러한 상태를 가능한 한 장기간 유지하는 약제가 사용되고 있는 실정이다. 이러한 대증요법을 위한 약제로서, 주로 아미노살리실산제제, 부신피질 스테로이드제, 면역억제제 등이 사용되지만, 다양한 부작용이 보고되고 있다. 예를 들어, 아미노살리실산제제로서 자주 사용되는 살라조설파피리딘은 구역질, 구토, 식욕부진, 발진, 두통, 간장해, 백혈구 감소, 이상 적혈구, 단백뇨, 설사 등의 부작용이 보고되고 있다. 또한 부신피질스테로이드제는 일반적으로는 프레드니솔론의 경구투여, 관장, 좌약, 정맥 주사 등으로 사용되지만, 위궤양이나 장기사용에 의한 대퇴골두 괴사 등 부작용이 강하다. 그러나 투약의 중단은 증상을 재발시키기 때문에, 이들 약제는 계속적으로 사용하지 않을 수 없다. 따라서, 효과가 우수하면서도, 안전하고 부작용을 일으키지 않는 궤양성 대장염, 크론병 등의 장질환 치료제의 개발이 요구되고 있다. 과민성 대장염 증후군((irritable bowel syndrome, IBS)도 마찬가지로 그 원인이 명확하지 않은 만성 복부 질환이다. 현재, IBS의 근본적인 치료제는 존재하지 않으며, 각 타입의 증상 경감을 목적으로 한 대증요법이 행해지고 있다. 예를 들어, 하리형 IBS에 대해서는 평활근의 수축을 억제하는 진경작용을 갖는 항콜린제가 사용되며, 변비형 IBS에는 염류 하제, 대체형 IBS에는 약제로 조절하기 곤란하고, 기본적으로 소화관 운동기능 개선제가 사용되고 있다.

이러한 대장염을 치료하기 위하여, 부작용이 적은 천연물로부터 대장염을 치료할 수 있는 조성물을 개발하기 위한 연구가 활발하게 진행되고 있다. 예를 들어, 한국등록특허 제1466308호에는 지모 추출물을 유효성분으로 포함하는 대장염 치료용 조성물이 개시되어 있고, 한국등록특허 1526467호에는 산수유 추출물을 유효성분으로 포함하는 대장염 치료용 조성물이 개시되어 있다.

그러나, 이러한 천연물 유래의 추출물들은 대장염의 예방 또는 치료효과가 만족할 만한 수준은 아니라는 점에서 한계가 있다. 따라서, 부작용이 적으면서도 대장염 예방 또는 치료 효과가 매우 우수한 새로운 형태의 조성물 개발이 시급한 실정이다.

이에, 본 발명자는 매우 우수한 대장염 예방 또는 치료효과를 나타내면서도 부작용이 적은 새로운 형태의 양·한방 복합 조성물을 개발하기 위하여 예의 연구를 거듭한 결과, 황금와 시호의 혼합 추출물 및 설파살라진(sulfasalazine)을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물이 각각의 물질을 단독으로 투여한 것과 비교해 현저히 우수한 대장염 예방 또는 치료효과를 나타낸다는 것을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 황금 및 시호의 혼합 추출물; 및 설파살라진(Sulfasalazine) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 대장염 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

상기한 본 발명의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 황금 및 시호의 혼합 추출물; 및 설파살라진(Sulfasalazine) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 대장염 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명에 대해 보다 상세히 설명한다.

본 발명은 황금 및 시호의 혼합 추출물; 및 설파살라진(Sulfasalazine) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 대장염 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 따르면, 본 발명의 상기 조성물은 궤양성 대장염 동물모델의 대장 조직에서 산화적 스트레스 관련 단백질, 염증관련 단백질 및 괴사 관련 단백질의 발현을 억제하는 효과를 나타내었고, 항산화 관련 단백질의 발현을 증가시키는 효과를 나타내는 것으로 확인되었다. 한편, 본 발명의 상기 조성물의 이러한 효과는 동일한 용량의 설파살라진 단독 투여군과 비교해 우수한 것으로 나타나 생약 혼합 추출물과 설파살라진의 복합 투여에 의한 상승효과가 나타난 것을 확인할 수 있었다.

본 발명에서 상기 황금(Skullcap, Scutellaria baicalensis)은 다년생 초본식물인 속썩은풀 꿀풀과의 뿌리로서, 그대로 또는 주피를 제거한 것이다. 황금에는 바이칼린, 바이칼레인, 위고닌 등의 플라보노이드 성분이 35% 이상 함유되어 있다. 이 성분은 항염작용은 물론 항암, 항바이러스, 항산화 효과가 있으며(Kim, E.N. et al., 2008), 생약제로서 황금은 한방에서 청열, 해독 등의 다양한 약리적 효능을 나타내는 것으로 알려져 있다(Yang, J.H. et al., 2006).

본 발명에서 상기 시호 (Bupleurumfalcatum (BF))는 미나리과의 여러해살이풀로 산지나 들에서 자라며, 특이한 냄새가 있으며, 맛은 약간 쓰다. 예로부터 뿌리는 오한, 해열, 제암, 늑막염, 해수, 모세혈염, 강심, 사기, 상한, 익기, 열로, 진통, 지해 및 말라리아 등의 약으로 사용하여 왔으며, 성분은 지방유가 약 2%(stearic acid, oleic acid, linolic acid, linolenic acid 등) 함유되어 있고, 당으로서 아도니티올(adonitiol)이 함유되어 있다. 또한 사포닌(saponin)배당체로서 세이코사포닌(saikosaponin) a, 세이코사포닌 b, 세이코사포닌 c, 세이코사포닌 d, 세이코사포닌 e, 세이코사포닌 f(이 중에서 saikosaponin b는 saikosaponin d에서 2차적 생성물이다), 및 그것에 대응하는 사포게닌(sapogenin) E, 사포게닌 F, 사포게닌 G가 알려져 있다. 스테롤(sterol)성분으로서는 α-스피나스테롤(α-spinasterol; 약 70%), 스티그마스테롤(stigmasterol), Δ7-스티그마스테놀(Δ7-stigmastenol),Δ22-스티그마스테놀(Δ22-stigmastenol)이 함유되어 있고 알려져 있다(박종희, 한약백과도감(상), 도서출판 신일상사, pp.497-499, 2002).

상기 황금와 시호의 혼합 추출물을 포함하는 조성물은 황금와 시호 단독 추출물을 혼합한 것일 수도 있고, 또는 황금와 시호를 혼합한 다음 추출한 복합 추출물일 수도 있다. 본 명세서에서 상기 단독 추출물의 혼합물 또는 복합 추출물을 모두 혼합 추출물로 통칭할 수 있다. 본 발명의 조성물은 유효성분으로 포함하는 황금와 시호 추출물의 혼합 방식에 제한받지 아니한다. 상기 추출물의 형태나 성상에는 제한이 없으며, 용액, 농축물일 수도 있고, 추출물 제조에 사용된 용매를 제거한 고형분 또는 분말일 수도 있다.

본 발명에서 상기 혼합 추출물은 시호와 황금의 단독 추출물을 1: 1~10의 중량비로 혼합한 것일 수 있다. 본 발명에서 상기 혼합 추출물이 황금와 시호의 단독 추출물을 혼합하여 포함하는 경우, 각각에 대하여 시호와 황금의 추출물을 1 : 1 ~ 10의 중량비로 혼합할 수 있다. 또한 본 발명에서 상기 혼합 추출물은 건조 중량 기준으로 시호와 황금를 1 : 1~10의 중량비로 혼합한 다음 동시에 추출한 것일 수도 있다. 즉, 본 발명에서 상기 혼합 추출물이 황금와 시호의 복합 추출물을 포함하는 경우에는 시호와 황금를 1: 1~10의 중량비로 혼합한 다음 추출한 것일 수 있다. 더 바람직하게는 상기 시호와 황금의 중량비는 1: 2~8, 보다 바람직하게는 1: 3~7, 가장 바람직하게는 1: 4~6 일 수 있다.

본 발명에서 상기 혼합 추출물은 당업계에 공지된 통상의 추출방법, 예를 들어 용매 추출법을 사용하여 제조될 수 있다. 용매 추출법을 이용한 혼합 추출물 제조시 사용되는 추출 용매는 물, 탄소 수가 1 내지 4인 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올) 또는 이들의 혼합물인 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고, 이중 물, 알코올 또는 이들의 혼합물에서 선택되는 것이 바람직하다. 추출 용매로 물을 사용하는 경우 물은 열수인 것이 바람직하다. 또한, 추출 용매로 알코올을 사용하는 경우 알코올은 탄소 수가 1 내지 4인 저급알코올인 것이 바람직하고, 저급 알코올은 메탄올 또는 에탄올에서 선택되는 것이 더 바람직하다. 또한, 추출 용매로 함수 알코올을 사용하는 경우 알코올 함량은 40~90%인 것이 바람직하고, 40~70%인 것이 더 바람직하다.

한편, 본 발명에서 상기 혼합 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다. 또한, 본 발명에서 상기 혼합 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 다른 추출 방법을 통해 얻어진 추출물 내지 정제 및 발효 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계 추출법에 의한 추출, 초음파를 이용한 추출법에 의한 추출, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의해 분리하거나 자연상태나 각종 미생물을 이용한 발효산물에 의한 추출물 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 및 추출방법을 통해 얻어진 활성 분획도 본 발명의 추출물에 포함된다.

상기 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계 추출법에 의한 추출법은 초임계 유체 추출법(supercritical fluid extraction)을 의미하는 것으로, 일반적으로 초임계 유체는 기체가 고온 고압 조건에서 임계점에 도달하였을 때 갖는 액체 및 기체의 성질을 지니고 있으며, 화학적으로 비극성 용매와 유사한 극성을 지니고 있으며 이러한 특성으로 인해 초임계 유체는 지용성 물질의 추출에 사용되고 있다(J. Chromatogr. A. 1998;479:200-205). 이산화탄소는 초임계 유체기기의 작동으로 압력 및 온도가 임계점까지 이르는 과정을 거치면서 액체 및 기체 성질을 동시에 지닌 초임계 유체가 되고 그 결과 지용성 용질에 대한 용해도가 증가한다. 초임계 이산화탄소가 일정량의 시료를 함유한 추출 용기를 통과하게 되면 시료에 함유된 지용성 물질은 초임계 이산화탄소에 추출되어 나온다. 지용성 물질을 추출한 후 추출 용기에 남아있는 시료에 다시 소량의 공용매가 함유된 초임계 이산화탄소를 흘려 통과시키면 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 성분들이 추출되어 나오게 할 수 있다. 본 발명의 초임계추출법에 사용되는 초임계 유체는 초임계 이산화탄소 또는 이산화탄소에 추가적으로 공용매를 혼합한 혼합유체를 사용함으로써 효과적으로 유효 성분을 추출할 수 있다. 이러한 공용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다.

또한, 상기 초음파 추출법은 초음파 진동에 의해 발생되는 에너지를 이용하는 추출방법으로, 초음파가 수용성 용매 속에서 시료에 포함된 불용성인 용매를 파괴시킬 수 있으며, 이때 발생되는 높은 국부온도로 인하여 주위에 위치하는 반응물 입자들의 운동에너지를 크게 하기 때문에 반응에 필요한 충분한 에너지를 얻게 되고, 초음파 에너지의 충격효과로 높은 압력을 유도하여 시료에 함유된 물질과 용매의 혼합 효과를 높여주어 추출효율을 증가시키게 된다. 초음파 추출법에 사용할 수 있는 추출용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸 에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출된 시료는 진공 여과하여 여과액을 회수한 후 감압증발기로 제거하고, 동결 건조하는 통상의 추출물 제조방법을 통해 추출물을 얻을 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 상기 혼합 추출물은 발효과정을 거친 추출물도 포함될 수 있다.

본 발명에서 상기 설파살라진(Sulfasalazine)은 하기 화학식 1의 구조를 갖는 2-하이드록시-5-[[4-(2-피리디닐아미노)설포닐]아조]벤조산을 나타낸다. 상기 설파살라진은 아미노살리실산 제제로서 궤양성 대장염 등에 자주 사용되는 약물이다.

[화학식 1]

한편, 상기 설파살라진은 고용량으로 장기간 투여시 구역질, 구토, 식욕부진, 발진, 두통, 간장해, 백혈구 감소, 이상 적혈구, 단백뇨, 설사 등의 부작용이 나타난다고 보고되고 있다. 이에, 본 발명자들은 상기 설파살라진의 우수한 약리학적 효과는 유지하면서도 상기한 부작용들이 저감된 새로운 형태의 약학적 조성물을 개발하고자 한 것이며, 본 발명의 일실시예에 따르면 상기 설파살라진에 황금 및 시호의 혼합 생약 추출물을 배합하는 경우 설파살라진을 저용량으로 투여하더라도 고용량으로 투여한 것과 동등 또는 그 이상의 대장염 예방 또는 치료효과가 나타난다는 것을 확인하였다.

본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 설파살라진 뿐만 아니라, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물, 수화물, 라세미체, 또는 입체이성질체를 모두 포함한다.

특히, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 설파살라진은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, 하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.

본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, 화학식 1로 표시되는 설파살라진을 과량의 산 수용액 중에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 또한, 이 혼합물에서 용매나 과량의 산을 증발시켜서 건조하거나 또는 석출 된 염을 흡입 여과시켜 제조할 수도 있다.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.

본 발명의 상기 약학적 조성물에 포함되는 생약 혼합 추출물 : 상기 설파살라진 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 중량비는 1: 0.5~3 일 수 있으며, 바람직하게는 1: 0.5~2, 보다 더 바람직하게는 1: 0.5~1.5, 가장 바람직하게는 1: 0.5~1 일 수 있다.

본 발명에서 상기 대장염은 세균 감염이나 장 내용물의 병적 발효 등으로 인해 대장에 염증이 발생한 상태를 말하며, 감염성 대장염과 비감염성 대장염을 포함하는 개념이다. 본 발명에 따른 약학적 조성물을 통해 예방 또는 치료가 가능한 구체적인 대장염의 종류는 염증성 대장 질환 또는 과민성 대장염 증후군 등이 있으나, 여기에 제한되는 것은 아니다. 상기 염증성 대장 질환은 예를 들어 궤양성 대장염(ulcerative colitis), 또는 크론병(Crohn's disease) 등이 있다. 또한, 본 발명에 따른 약학적 조성물을 통해 예방 또는 치료가 가능한 대장염은 급성 대장염과 만성 대장염 모두를 포함한다. 상기 급성 대장염은 급성으로 오는 대장 또는 결장에의 염증을 말하는데, 염증으로 인해 점막이 손상되어 점액성 설사나 선혈 증상을 주로 보인다. 본 발명에서 급성 대장염은 일반적인 급성 감염성 대장염뿐만 아니라 급성 위막성 대장염 및 급성 궤양성 대장염을 포함한다.

상기 조성물이 약학적 조성물의 형태로 제공이 되는 경우에는, 본 발명의 상기 혼합물 이외에 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 함유할 수 있다. 상기에서 "약학적으로 허용되는" 이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 활성성분의 작용을 저해하지 않으며 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 비독성의 조성물을 말한다.

약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여용 담체는 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다. 아울러, 펩티드 제제에 대한 경구투여용으로 사용되는 다양한 약물전달물질을 포함할 수 있다. 또한, 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코오스 및 글리콜 등을 포함할 수 있으며, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현택제 등을 추가로 포함할 수 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체 및 제제는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).

본 발명의 조성물은 인간을 비롯한 포유동물에 어떠한 방법으로도 투여할 수 있다. 예를 들면, 경구 또는 비경구적으로 투여할 수 있다. 비경구적인 투여방법으로는 이에 한정되지는 않으나, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장내 투여일 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 경구 투여용 또는 비경구 투여용 제제로 제형화 할 수 있다.

경구 투여용 제제의 경우에 본 발명의 조성물은 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 현탁액 등으로 당업계에 공지된 방법을 이용하여 제형화될 수 있다. 예를 들어, 경구용 제제는 활성성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다. 적합한 부형제의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 및 말티톨 등을 포함하는 당류와 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분 및 감자 전분 등을 포함하는 전분류, 셀룰로즈,메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 등을 포함하는 셀룰로즈류, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈 등과 같은 충전제가 포함될 수 있다. 또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있다. 나아가, 본 발명의 약학적 조성물은 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.

비경구 투여용 제제의 경우에는 주사제, 크림제, 로션제, 외용연고제, 오일제, 보습제, 겔제, 에어로졸 및 비강 흡입제의 형태로 당업계에 공지된 방법으로 제형화할 수 있다. 이들 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA,1995)에 기재되어 있다.

본 발명의 조성물의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있다. 바람직하게 본 발명의 약학적 조성물의 바람직한 전체 용량은 1일당 환자 체중 1㎏ 당 약 0.01㎍ 내지 10,000mg, 가장 바람직하게는 0.1㎍ 내지 1,000mg일 수 있다. 그러나 상기 약학적 조성물의 용량은 제제화 방법, 투여 경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환자의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 질환의 중증도, 식이 및 배설율등 다양한 요인들을 고려하여 환자에 대한 유효 투여량이 결정되는 것이므로, 이러한 점을 고려할 때 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 본 발명의 조성물의 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다.

한편, 본 발명에서 사용되는 용어 "예방"은, 본 발명의 혼합물을 포함하는 조성물의 투여로 질환을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 또한, 본 발명에서 사용되는 용어 "치료"는, 본 발명의 혼합물을 포함하는 조성물의 투여로 질환의 증세가 호전되거나 완치되는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에 따른 조성물의 효과는 하기 실시예에 잘 나타나 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 대장염, 특히 염증성 대장 질환(Inflammatory bowel disease; IBD) 또는 과민성 대장염 증후군(irritabel bowel syndrome, IBS) 등을 효과적으로 예방, 지연, 개선 또는 치료할 수 있을 뿐만 아니라, 설파살라진(sulfasalazine)의 장기간 투여에 따른 부작용의 발생 염려가 현저히 낮아 대장염 예방 또는 치료제 개발에 매우 유용하게 활용될 수 있다.

도 1은 실험 시작시점과 종료시점에서 각 투여군의 체중 변화량을 나타낸 결과이다.
도 2는 실험 종료시점에서 동물의 대장길이를 측정하여 그래프(A)로 나타내거나 또는 육안 관찰(B)한 도면이다.
도 3은 대장 조직에서의 산화적 스트레스 관련 단백질(NOX4, Rac1 및 p47^phox)의 발현을 웨스턴으로 분석한 후 이를 정량화한 그래프를 나타낸 도면이다.
도 4는 대장 조직에서의 염증 관련 단백질(NF-kB)의 발현을 웨스턴으로 분석한 후 이를 정량화한 그래프를 나타낸 도면이다.
도 5는 대장 조직에서의 염증 관련 단백질(COX-2, iNOS, TNF-α 및 IL-1b)의 발현을 웨스턴으로 분석한 후 이를 정량화한 그래프를 나타낸 도면이다.
도 6은 대장 조직에서의 항산화 관련 단백질(SOD-1 및 Catalase)의 발현을 웨스턴으로 분석한 후 이를 정량화한 그래프를 나타낸 도면이다.
도 7은 대장 조직에서의 괴사 관련 단백질(Caspase 3)의 발현을 웨스턴으로 분석한 후 이를 정량화한 그래프를 나타낸 도면이다.

이하 바람직한 실시예를 통하여 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 이에 앞서, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여, 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다. 따라서, 본 명세서에 기재된 실시예의 구성은 본 발명의 가장 바람직한 일실시예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다. 또한, 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한, 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있음을 의미한다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

<실험방법>

1. 실험물질

본 실험에 사용한 Dextran Sulfate Sodium (DSS; 분자량; 36,000-50,000)는 MP 바이오메디컬에서, sulfasalazine와 phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)는 Sigma aldrich (St. Louis, MO) 에서 구입하였다. Nitrocellulose membranes는 Amersham GE Healthcare (Little. Chalfont, UK) 에서 구입하였고, NOX4, Bac1, p47^phox, nuclear factor-kappa B (NF-κBp65), superoxide dismutase (SOD), catalase, inducible nitric oxide synthase (iNOS), cyclooxygenase-2 (COX-2), tumor necrosis factor alpha (TNF-α), interleukin-1 beta (IL-1 beta), histone, β-actin 과 2차 항체는 Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA)로부터 구입하였다. Mono anti-caspase-3 (BioVision, Mountain View, CA, USA)에서 공급받았다. Protease inhibitor mixture DMSO, solutionethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)는 Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (Osaka. Japan)에서 구입하였다. 또한, 2′,7′-Dichlorofluorescein diacetate (DCF-DA)와 Dihydrorhodamine 123는 Molecular Probes (Eugene, OR, U.S.A.)에서 ECL Western Blotting Detection Reagents는 GE Healthcare로부터 구입하여 사용하였다. 단백질 정량을 위한 BCA protein assay kit는 Thermo Scientific (Rockford, IL, USA)에서 구입하였다.

2. 생약 추출물의 제조방법

실험에 사용된 황금은 50% 에탄올을 이용하여 추출하였고, 시호는 열수추출하였다.

구체적으로, 황금은 황금 중량대비 10배수의 50% 에탄올을 가하여 상온 추출하였다. 이후 50% 에탄올 추출물을 Whatman (No. 1) filter paper로 여과하고, 이를 rotary evaporator로 감압 농축하였으며, 실험시까지 냉동보관하였다.

시호는 시호무게의 10 배의 물을 가한 후 약탕기에서 가열하여 열수로 2시간 추출하였으며, 추출이 완료된 다음 Whatman (No. 1) filter paper로 여과하고, 이를 rotary evaporator로 감압 농축하고 그 후 동결 건조기(Eyela, model FDU-2000, Japan)에서 건조한 뒤 얻어진 분말을 실험에 사용하였다.

3. 대장염 동물모델의 확립 및 실험군 조성

(1) 대장염 동물모델

실험동물은 수컷 8주령 BALB/c mice 를 ㈜오리엔트바이오 (경기도, 성남)로부터 공급받아 1주일 동안 실험실 환경에 적응시킨 후 실험에 사용하였다. 동물 사육실의 조건은 conventional system으로 온도 22±2℃, 습도 50±5%, 명암주기(light : dark cycle)는 12시간 주기로 조절하였다. 사료는 고형사료 (조단백질 22.1% 이상, 조지방 8.0% 이하, 조섬유 5.0% 이하, 조회분 8.0% 이하, 칼슘 0.6% 이상, 인 0.4% 이상, 삼양사, 항생제 무첨가)와 물을 충분히 공급하였다.

정상군을 제외한 대장염유발군은 마우스에게 5% DSS를 녹인 물을 7일간 공급하여 궤양성 대장염을 유발하였다.

(2) 실험군 조성

상기 방법에 따라 확립된 대장염 동물모델 또는 정상 동물을 하기와 같이 구분하여 실험을 진행하였다. 각각의 실험군은 9마리의 동물이 포함되도록 하였다.

1) 정상군(Normal): 대장염을 유발하지 않은 정상동물에 용매만을 투여한 군.

2) 용매투여군(vehicle): 대장염을 유발한 동물에 용매만을 투여한 군.

3) 30 Sulfa군: 대장염을 유발한 동물에 설파살라진(Sulfasalazine)을 30 mg/kg으로 투여한 군.

4) 60 Sulfa군: 대장염을 유발한 동물에 설파살라진(Sulfasalazine)을 60 mg/kg으로 투여한 군.

5) 황시30 + 30 Sulfa 군: 대장염을 유발한 동물모델에 황금 및 시호의 5:1(중량비) 혼합 추출물 30 mg/kg + 설파살라진 30 mg/kg을 병용투여한 군.

6) 황시60 군: 대장염을 유발한 동물모델에 황금 및 시호의 5:1(중량비) 혼합 추출물 60 mg/kg을 투여한 군.

상기 실험군에 따라 구분된 동물에 각각의 실험물질을 매일 1회 경구투여하였다. 약물 투여는 총7일간 진행하였으며, 실험이 종료된 이후에 각각의 동물을 마취하여 희생시키고 장기 및 혈액을 적출하여 이하 실험을 진행하였다.

4. 혈액 산화적 스트레스 분석

투여 최종일에 심장천자법을 사용하여 혈액을 채취하여 얻은 혈액을 4,000 rpm 10분 원심분리하여 얻은 혈청에서 ROS의 생성량의 변화를 Ali et al. 의 방법에 따라 25mM DCFH-DA를 혼합한 후, 형광 광도계를 이용하여 0분부터 매 5분씩 530nm 방출 파장(emission wavelength)과 485nm 여기 파장(excitation wavelength)을 이용해 30분간 측정한 산출값을 계산하였다. S. F. Ali, C. P. LeBel, and S. C. Bondy, “Reactive oxygen species formation as a biomarker of methylmercury and trimethyltin neurotoxicity,” Neurotoxicology, vol. 13, no. 3, pp. 637-648, 1992.

5. 조직학적 분석

현미경 평가를 위해 지방조직을 절단하여 중간 구획을 분리하였다. 이 구획을 파라핀에 매립한 다음 10% 중성-완충 포르말린에 고정하고, 2mm 단면으로 절단하고 현미경 평가를 위해 H/E로 염색하였다. 염색 슬라이스를 광학 현미경으로 관찰하고 소프트웨어(i-Solution Lite software program, Innerview Co.)를 이용하여 분석하였다.

6. 웨스턴블로팅

대장조직의 세포질 단백질을 얻기 위해 버퍼 A(buffer A; 100mM Tris-HCl(pH 7.4), 5mM Tris-HCl(pH 7.5), 2mM MgCl₂,15mMCaCl₂,1.5Msucrose및 0.1M DTT, protease inhibitor cocktail을 첨가)를 넣고 티슈 그라인더(tissue grinder, Bio Spec Product, USA)로 분쇄한 후 10% NP-40 용액을 첨가하였다. 아이스 위에서 20분간 정치시킨 후 12,000rpm으로 2분간 원심 분리하여 세포질을 포함하고 있는 상층액을 분리하였다. 핵 단백질을 얻기 위해 10% NP-40가 더해진 버퍼 A에 두 번 헹구고 100㎕의 버퍼 C(buffer C; 50mM HEPES, 50mM KCl, 0.3mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.1mM PMSF 및 10% glycerol)를 첨가해 재부유 시킨 뒤 10분마다 볼텍스(voltex)를 3번 시행하였다. 4℃에서 12,000rpm으로 10분간 원심 분리한 후 핵을 포함하고 있는 상층액을 얻어 -80℃에서 각각 냉동 보관하였다. 세포질 단백질 phosphor-inhibitor of nuclear factor kappa B α ((p-IκB α), Kelch-like ECH-associated protein 1(Keap1), heme oxygenase-1 (HO-1), superoxide dismutase (SOD), catalase, Gpx1/2, phosphor-extracellular signal-regulated kinase 1/2 (p-ERK1/2), phosphor-p38 (p-p38), inducible nitric oxide synthase (iNOS), cyclooxygenase-2 (COX-2), monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1), intracellular adhesion molecule-1 (ICAM-1), tumor necrosis factor alpha (TNF-α), interleukin-1 beta (IL-1 beta), Bax, Bcl2, caspase 3, β-actin 및 핵 단백질 nuclear factor-kappa B (NF-κBp65), c-fos, nuclear factor-erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) 및 histone을 전기영동(8-13% sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel; SDS-PAGE)하였다., 아크릴아미드 겔(acrylamide gel)을 니트로셀룰로오스 멤브레인(nitrocellulose membrane)으로 이동시켰다. 준비된 멤브레인에 각각의 1차 항체(antibody)를 처리하여 4℃에서 오버나잇(overnight)시킨 다음 PBS-T로 6분마다 5회 세척하고, 각각 처리된 1차 항체에 사용되는 2차 항체(PBS-T로 1:3000로 희석해서 사용)를 사용하여 상온에서 1시간 반응시킨 후, PBS-T로 6분마다 5회 세척하였다. 그리고 ECL(enhanced chemiluminescence) 용액을 GE Healthcare(Arlington Heights, IL, USA)에 노출시킨 후, Sensi-Q2000 Chemidoc(Lugen Sci Co., Ltd., Seoul, Korea)에 감광시켜 단백질 발현을 확인한 후, 해당 밴드(band)를 ATTO Densitograph Software(ATTO Corporation, Tokyo, Japan) 프로그램을 사용하여 정량하였다.

7. 통계처리

모든 결과는 평균±표준오차(mean±S.E)로 나타내었다. 유의성 검정을 위해 Dunnett의 다중 비교 테스트(Dunnett's multiple comparison test, SPSS 18.0 for Windows, SPSS Inc., U.S.A.)에 따르는 일원분산분석(one-way analysis of variance(ANOVA))을 실시하였다. P<0.05인 경우 통계적인 유의성이 있는 것으로 판정하였다.

<실험결과>

1. 동물체중 및 대장길이

하기 도 1 및 도 2에 상기 실험 기간 동안의 체중 및 대장길이를 측정하였다. 디지털 체중계(Digital mass meter)를 이용하여, 절식후 DSS 급여 및 조성물 투여과정 동안 매일 일정한 시간에 체중을 측정하였다. 정상군, DSS 대조군, sulfa30군, sulfa60군 및 본 발명에 따른 조성물 투여군(생약 복합추출물+설파살라진) 사이에서의 몸무게를 비교한 결과, 5% DSS를 처리한 vehicle 대조군에서는 실험이 종료되었을 때의 체중이 실험전과의 체중변화를 살펴보았을 때 유의성있게 (p<0.001) 감소하였으나, 실험물질 투여군에서는 유의성은 나타내지는 않았으나 DSS 대조군보다 체중감소가 억제되었다(도 1).

DSS 급여 7일 후에 해부하여 맹장에서 직장까지의 길이를 재고 사진 촬영을 한 결과는 도 2A(대장길이)와 도 2B(육안적 사진)에 제시하였다. 5% DSS로 궤양성 대장염을 유발시킨 마우스의 대장(vehicle 대조군)은 정상군에 비하여 유의성 있게 짧아졌다 (p<0.001). 실험물질 투여군은 유의성은 나타나지 않았으나 vehicle 대조군에 비해서 대장의 손상을 개선시킴을 알 수 있었다.

한편, 설파살라진을 병용 투여하지 않고 황금 및 시호의 혼합 추출물(60 mg/kg)만을 단독 투여하였을 경우 대장길이 변화를 비교하고자 전술한 실험(도 2, A 및 B 참조)과 별도로 정상군(Normal), 용매투여군(Vehicle) 및 황시60 군에 대하여 전술한 실험과 동일한 조건으로 추가 실험을 실시하였고, DSS 급여 7일 후에 해부하여 맹장에서 직장까지의 길이를 재고 사진 촬영을 한 결과를 도 2C(대장길이)와 도 2D(육안적 사진)에 제시하였다. 설파살라진을 병용 투여하지 않고 황금 및 시호의 혼합 추출물만을 단독 투여한 군은 대조군에 비해 대장의 길이변화에 유의성은 나타나지 않았고, 대조군에 비해서 대장의 염증과 손상을 개선시키는 임상적 증후도 나타나지 않은 것을 알 수 있었다.

이상과 같이, 대장염 유발로 인해 체중감소가 나타났고 대장길이가 짧아졌으나, 실험물질의 투여는 대조군에 비해 체중감소를 억제시켰고, 대장의 손상으로 인한 대장길이 단축화를 개선시키는 효과를 나타내었다.

2. 대장 조직에서의 산화적 스트레스 관련 단백질의 분석

Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase (NADPH oxidase)는 Ab peptiedes에 의해 생성되는 ROS의 원인의 하나로 특히, 세포내 O^2-의 생성에 주요한 역할을 하고, 많은 양의 ROS를 생성하는 다양한 단백질 효소를 조절하는데, 대식 세포에서 잘 특성화 된다. 이의 주요한 병리학적인 역할은 염증세포, 상피세포, collagen, elastin 등에서의 급성과 만성 염증 부분에서 퇴화와 괴사이다. NADPH oxidase의 subunits에 NOX4, p47^phox , Rac1 등이 속한다. 이에, 본 발명자는 대장조직에서 NADPH oxidase의 subunit에 속하는 상기 단백질들의 발현량을 측정함으로써 본 발명에 따른 조성물의 산화적 스트레스 개선 효과를 평가하고자 하였다.

이에 대한 결과를 도 3에 나타내었다.

도 3에 나타낸 바와 같이, DSS 대조군(Vehicle)에서 NOX4, p47^phox 및 Rac1 단백질 발현이 정상군에 비해 유의성 있게 증가하였다(P <0.001). 한편, 본 발명에 따른 조성물을 투여한 군에서는 NOX4, p47^phox 및 Rac1 단백질 발현이 유의적으로 억제되었으며, 이러한 효과는 설파살라진 60 mg/kg 투여군보다도 현저한 것이었다.

이상과 같이, 본 발명에 따른 조성물은 궤양성 대장염 마우스에서 NOX4, p47^phox 및 Rac1 단백질 발현을 감소시킴으로써 산화적 스트레스를 개선 시켜주는 것을 알 수 있었다.

3. 대장조직에서의 NF -κB 및 관련 염증성 단백질의 분석

세포 분화 및 성장, 염증반응, 세포 부착을 포함한 유전자발현을 조절하는 가장 일반적인 핵 전사인자 중의 하나는 NF-kB이다. NF-kB는 정상적으로는 저해 단백질인 inhibitor kappa B (IkB)와 결합함으로써 불활성화 상태로 세포질에 존재하다가 ROS의 자극에 의하여 IkB를 빠르게 인산화되어 NF-kB를 IkB로부터 분리되고, 활성화된 자유 이합체로 존재하게 되면서 핵으로 전사 된다. 염증을 매개하는데 중심적인 역할을 하며 염증에 포함되는 다양한 초기 반응유전자의 발현 조절을 돕는 역할을 한다. NF-kB에 의하여 조절되는 유전자가 COX-2와 iNOS이며 TNF-a와 IL-1b 와 같은 사이토카인도 존재한다. 이에, 본 발명자는 본 발명에 따른 조성물의 처리에 의해, 상기 염증을 매개하는 단백질들의 발현이 어떻게 변화가 되는지 확인하고자 하였다.

이에 대한 결과를 도 4 및 도 5에 나타내었다.

도 4에 나타낸 바와 같이, Vehicle 대조군은 정상군에 비해 NF-kB의 발현이 유의성 있게 증가하였고 (p<0.05), 본 발명에 따른 조성물 투여군에서는 상기 단백질의 발현이 유의성 있게 감소된 것을 확인할 수 있었다. 하지만, 설파살라진을 처리한 군에서는 상기 단백질의 감소 경향이 전혀 확인되지 않았다.

도 5에 나타낸 바와 같이, Vehicle 대조군의 대장조직에서 COX-2, iNOS와 TNF-α 및 IL-1 b의 발현이 정상군에 비해 크게 증가하였으나 본 발명에 따른 조성물의 투여로 인해 상기 단백질들의 발현이 현저하게 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 한편, 본 발명에 따른 조성물의 효과는 설파살라진 60 mg/kg보다도 현저히 우수한 것으로 나타났다.

이러한 결과를 통해 본 발명에 따른 조성물은 대장조직에서 NF-κBp65의 활성 억제를 통해 염증억제 효과를 보인 것을 알 수 있었다. 또한, NF-κBp65의 활성 억제는 NF-κBp65의 핵 내 이동으로 인하여 야기되어지는 염증성 매개인자 (COX-2, iNOS) 와 염증성 싸이토카인 (TNF-α, IL-1 b) 의 발현을 조절한 것으로 판단되었다. 이러한 본 발명에 따른 조성물의 효과는 설파살라진 60 mg/kg보다 훨씬 더 우수한 것으로, 혼합생약추출물과 설파살라진이 상승작용을 나타냈음을 확인할 수 있었다.

4. 대장조직에서 항산화 단백질의 발현 분석

ROS에 의해 생성되는 O2-를 포함한 자유 라디칼의 증가는 세포내에서도 많은 양으로 축적된다. SOD는 슈퍼옥사이드 라디칼과 상호작용하여 과산화수소(H2O2)를 형성하고, 이는 Catalase에 의해 물로 대사된다. Catalase는 헴단백질(hemeprotein)로서 고반응성 히드록실 라디칼의 유해 효과로부터 조직을 보호한다. 이에, 본 발명자는 본 발명에 따른 조성물 처리에 의해 대장조직에서 상기 항산화 단백질들의 발현이 어떻게 변화하는지 확인하고자 하였다.

이에 대한 결과를 도 6에 나타내었다.

도 6에 나타낸 바와 같이, Vehicle 대조군은 정상군과 비교해 대장조직에서 항산화 단백질의 발현이 현저히 감소되어 있었고, 본 발명에 따른 조성물 처리군에서는 상기 단백질들의 발현이 정상군 수준까지 회복되는 양상을 나타내었다. 한편, 본 발명에 따른 조성물의 이러한 효과는 설파살라진 60 mg/kg과 비교해 동등 또는 그 이상인 것으로 나타났다.

5. 대장조직에서의 괴사 관련 단백질의 발현 분석

조직 괴사가 발생하면, 해당 조직에서 괴사인자인 Caspase 3 단백질 발현이 증가하는 것으로 알려져 있다. 이에, 본 발명자는 본 발명에 따른 조성물 처리에 의해 대장조직에서 괴사 관련 단백질의 발현이 어떻게 변화하는지 확인하고자 하였다.

이에 대한 결과를 도 7에 나타내었다.

도 7에 나타낸 바와 같이, Vehicla 대조군에서는 정상군과 비교해 괴사관련 단백질(Caspase 3)의 발현이 유의미하게 증가하는 것으로 나타났으나, 본 발명에 따른 조성물 처리에 의해 단백질의 발현이 감소되는 효과가 나타났다. 한편, 본 발명에 따른 조성물의 이러한 효과는 설파살라진 60 mg/kg 처리군과 비교해 그 이상인 것으로 확인되었다.

이상 살펴본 바와 같이, 본 발명에 따른 혼합생약추출물+설파살라진을 포함하는 조성물은 동일 용량의 설파살라진 단독 처리군과 비교해 대장염의 예방 또는 치료 효과가 현저히 우수하다는 것을 알 수 있었다. 즉, 양방과 한방의 복합 투여에 따라, 양방 제제의 고용량 투여에 따른 부작용 감소를 도모함과 동시에 대장염에 대한 우수한 치료 효과를 발휘할 수 있음을 확인하였으며, 이러한 형태의 조성물은 종래 보고된 바 없는 것으로 본 발명을 통해 최초로 공개하는 것이다.

이상에서 설명한 본 발명의 바람직한 실시예들은 기술적 과제를 해결하기 위해 개시된 것으로, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 사상 및 범위 안에서 다양한 수정, 변경, 부가 등이 가능할 것이며, 이러한 수정 변경 등은 이하의 특허청구범위에 속하는 것으로 보아야 할 것이다.

Claims (6)

1. 황금 및 시호의 혼합 추출물; 및 설파살라진(Sulfasalazine) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로 이루어지고, 상기 혼합 추출물에서 시호 : 황금의 중량비는 1:4~6 인 대장염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6인 알코올, 헥산, 에틸아세테이트 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 용매로 추출한 것임을 특징으로 하는 조성물.
3. 삭제
4. 제1항에 있어서, 상기 혼합 추출물 : 설파살라진 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 중량비는 1:0.5~3 인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
5. 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대장염은 염증성 대장 질환 또는 과민성 대장염 증후군인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
6. 제5항에 있어서, 상기 염증성 대장 질환은 궤양성 대장염 또는 크론씨병(Crohn’s Disease)인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.

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