KR102167388B1 - 신규 로도스포리디움 토룰로이데스 균주 및 그 균주 배양액을 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents
신규 로도스포리디움 토룰로이데스 균주 및 그 균주 배양액을 포함하는 화장료 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
신규한 로도스포리디움 토룰로이데스 속 균주 및 이의 발효액, 파쇄액, 추출액 또는 배양액을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 일 양상에 따른 로도스포리디움 토룰로이데스 속 균주 또는 이의 발효액, 파쇄액, 추출액 또는 배양액을 포함하는 조성물에 의하면, MMP-1의 발현양을 유의하게 감소시키고, 염증 사이토카인인 IL-6의 발현을 억제시키면서 NO의 생성도 억제시킬 수 있고 동시에 필라그린의 발현을 증가시킬 수 있어 피부 염증 개선, 주름 개선 효과 및 피부자극완화 효과 및 피부 장벽 강화 기능이 나타나므로 피부 개선용 화장료 조성물, 피부외용제용 조성물, 약학적 조성물, 및 건강기능식품 등에 유용하게 사용할 수 있다.
Description
신규한 로도스포리디움 토룰로이데스 속 균주 및 이의 발효액, 파쇄액, 추출액 또는 배양액을 포함하는 화장료 조성물, 피부외용제용 조성물, 피부 질환의 치료 또는 예방용 약학적 조성물, 및 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
피부 노화는 유전적, 환경적 노출(UV, 열), 호르몬 변화, 대사적 과정(활성산소종, 당, 알데하이드와 같은 반응성이 큰 화합물)에 의해 영향을 받는다. 이러한 요인들은 피부의 구조, 기능, 겉모습의 축적된 변화를 초래한다. 인간의 피부 노화는 크게 생물학적 과정에 따라 시간이 지나면서 나타나는 내적 노화와 지속적인 빛 노출, 스트레스, 흡연 등과 같은 환경에 의한 외적 노화(광노화)로 구분된다.
진피 세포 외 조직 중 콜라겐 단백질들은 피부에 강도와 장력을 부여하며 이로 인해 외부의 자극이나 힘으로부터 피부를 보호하는 역할을 하며 진피층의 90%를 차지하고 있어 콜라겐의 감소는 피부 노화와 주름형성에 밀접한 관련이 있다. 콜라겐의 분해는 노화가 진행되면서 분해되기도 하나 자외선 같은 자극에 노출되게 되면 콜라겐 분해효소들(MMPs)의 생합성이 증가하면서 콜라겐 합성이 감소하게 되어 주름이 형성된다. 따라서 생체에 안전하고 기존의 물질보다 콜라겐분해효소(MMP-1)의 억제 및 콜라겐 합성능이 좋은 새로운 주름개선 물질 개발이 요구되고 있다.
피부 표피의 기저층(stratum basal)을 주로 이루고 있는 각질형성세포(keratinocytes)의 주요 기능은 피부 외부로부터 오는 손상을 막아주는 장벽을 형성하는 것이다. 정상 피부에서 각질형성세포는 분화과정을 통해 각질(keratin) 또는 필라그린(filaggrin)과 같은 피부 장벽 기능을 유지하는데 중요한 구조 단백질을 발현시켜 수분 손실 및 여러 환경적 침해로부터 피부를 보호한다. 보습과 피부장벽은 외부환경의 변화와 생활패턴의 변화의 따라 온도의 급격한 변화, 환경오염으로 인한 자극, 각종 스트레스, 무리한 세안 및 연령증가에 의한 자연스러운 노화를 원인으로 달라질 수 있다. 이러한 손상된 피부장벽을 개선하기 위한 노력으로 화장품 조성물을 통해 피부장벽을 개선하고 보습감을 줄 수 있다. 현재까지 피부장벽을 개선하는 화장료에 대한 연구가 활발하지만, 피부에 도포 시 즉각적이고 직접적인 피부장벽개선과 보습에 영향을 주는 화장료에 대한 개발이 여전히 필요한 실정이다.
이에, 현재 미생물을 이용한 발효물 및 바이오 전환 기술이 화장품 소재 분야에서 적극적으로 활용되고 있으므로 이를 활용하여 콜라겐분해효소(MMP-1)의 억제 및 콜라겐 합성능이 좋으며, 피부에 도포 시 즉각적이고 직접적인 피부장벽개선과 보습에 영향을 주는 화장료 조성물로 활용하기 위한 새로운 미생물 균주를 찾아내기 위한 필요성이 대두되고 있다.
일 양상은 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) KCCM12644P 균주를 제공하는 것이다.
다른 양상은 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) KCCM12644P 균주에 의하여 발효된 발효액으로부터 유래된 오일을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) KCCM12644P 균주, 이의 발효액, 파쇄액, 추출액 또는 배양액을 포함하는 화장료 조성물, 피부외용제용 조성물, 피부 질환의 치료 또는 예방용 약학적 조성물, 및 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) KCCM12644P 균주로부터 오일을 수득하는 방법을 제공하는 것이다.
일 양상은 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodotorula toruloides) KCCM12644P 균주를 제공한다.
상기 "로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides)"는 효모의 일종으로서, 강원도 홍천 토양으로부터 분리한 것일 수 있다. 상기 균주는 식품, 토양, 바다 등에서 분리한 것일 수 있다. 또한, 상기 균주를 첨가하여 발효시켜 수득한 발효물로부터 유래한 추출물은 UV와 열 조사에 의한 콜라겐 분해효소인 MMP-1의 발현량을 현저하게 낮추며, 콜라겐 전구물질의 합성을 증가시킬 수 있다. 또한 일 양상에 따른 상기 발효 추출물은 피부 각질세포 또는 섬유아세포에서 보습인자 발현수준을 높이고, 항염인자를 낮추므로, 열에 의한 또는 자외선으로 인한 광노화를 억제시키고 피부장벽을 개선시킬 수 있으며 피부 보습력 증진 및 진정용도로 이용될 수 있다.
다른 양상은 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) KCCM12644P 균주로부터 유래된 오일을 제공하는 것이다.
상기 균주로부터 유래된 오일은 예를 들면 상기 균주를 통해 발효시켜 수득한 발효액, 상기 균주의 파쇄액, 상기 균주로부터 추출된 추출액 또는 상기 균주를 배양시켜 수득한 배양액으로부터 유래된 오일을 의미하며, 본 명세서 내에서 기재되어 있는 로도스포리디움 토룰로이데스 유래 오일은 본 명세서 내에서 핑크오일(pink oil)과 혼용하여 사용될 수 있다. 본 명세서 내 용어, "발효물 또는 발효액"이란 상기 효모를 첨가하여 발효시킴으로써 제조된 것을 의미한다. 상기 균주로부터 유래된 오일은 상기 로도스포리디움 토룰로이데스 효모에 의해서 생산된 지방산을 포함할 수 있다. 상기 지방산은 인체 각질세포에 자연적으로 존재하는 지방산 조성과 유사하여 피부에 도포하는 경우 즉각적인 장벽개선 효과를 가질 수 있다.
또 다른 양상은 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) KCCM12644P 균주, 이의 발효액, 파쇄액, 추출액 또는 배양액을 포함하는 화장료 조성물, 피부외용제용 조성물, 피부 질환의 치료 또는 예방용 약학적 조성물, 및 건강기능식품 조성물을 제공한다.
상기 배양액은 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) KCCM12644P 균주를 배양하여 수득된 배양액 자체, 또는 이로부터 균주를 제거하여 수득된 배양 상층액, 그의 농축물 또는 동결건조물일 수 있다.
상기 배양액은 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) KCCM12644P 균주를 글루코오스, 프룩토오스, 만노오스, 갈락토오스, 자일로스, 리보오스, 말토오스, 수크로오스, 덱스트린, 글리세린, 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 탄소원; 및 질산칼륨, 질산암모늄, 황산암모늄, 옥살산암모늄, 및 인산이암모늄 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 질소원을 포함하는 배지에 상기 효모를 배양시켜 수득한 것일 수 있다. 상기 배양 배지에서 사용되는 탄소원 또는 질소원은 예를 들면, 약 0.1 내지 30 w/v%, 1 내지 25 w/v%, 1 내지 20 w/v%, 1 내지 10 w/v%, 1 내지 5w/v%, 또는 1 내지 1.5 w/v%로 포함될 수 있다. 상기 배양배지는 균주의 배양배지에서 통상적으로 사용되는 염을 포함할 수 있으며, 상기 염은 예를 들면 질산칼륨, 황산칼륨, 탄산마그네슘, 황산마그네슘, 및 질산마그네슘으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 염을 포함할 수 있으며, 상기 염은 예를 들면, 약 0.01 내지 10 w/v%, 0.1 내지 7 w/v%, 또는 0.5 내지 5 w/v%로 포함될 수 있다.
또한 상기 배지는 예를 들면, 약 0.01 내지 10w/v%, 0.05 내지 5 w/v%, 또는 0.1 내지 2w/v%의 효모 자가용해물을 포함할 수 있으며, 상기 배양 배지는 약 2.0 내지 7.0의 pH일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
또한 상기 배양액은 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides)을 예를 들면, 약 20 내지 42℃, 약 25 내지 35 ℃, 또는 약 27 내지 30 ℃ 의 온도 조건 하에 예를 들면 약 24내지 144시간, 48 내지 120시간, 또는 15 내지 35시간 동안 배양하여 수득된 것일 수 있다. 또한 상기 균주의 배양 조건은 배지에서 상기 로도스포리디움 토룰로이데스를 첨가하여 발효시키는 단계를 포함할 수 있으며, 발효시키는 단계는 통상적으로 사용하는 발효 방법을 사용할 수 있으며, 예를 들면 상기 방법은 유가식(fed batch) 발효를 사용할 수 있다.
상기 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) KCCM12644P 균주, 이의 발효액, 파쇄액, 추출액 또는 배양액은 조성물 총 중량에 대하여 예를 들면 1 내지 99.99 중량%, 예를 들어, 1.5 내지 99.99 중량%, 2 내지 99.99 중량%으로 포함될 수 있다. 상기 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) KCCM12644P 균주, 이의 발효액, 파쇄액, 추출액 또는 배양액은 MMP-1의 발현양을 유의하게 감소시키고, 염증 사이토카인인 IL-6의 발현을 억제시키면서 NO의 생성도 억제시킬 수 있고 동시에 필라그린의 발현을 증가시켜 피부 염증 개선, 주름 개선 효과 및 피부자극완화 효과 및 피부 장벽 강화 기능을 나타낼 수 있다는 측면에서 조성물 총 중량에 대하여 2%이상으로 포함될 수 있다.
일 구체예에 따른 조성물은 상기 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodotorula toruloides) KCCM12644P 균주, 이의 발효액, 파쇄액, 추출액 또는 배양액를 유효한 양, 또는 유효 성분으로서 포함할 수 있다. 상기 유효한 양은 개체에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 질환 내지 상태의 중증도, 개체의 연령, 체중, 건강, 성별, 개체의 효소제에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 투여 기간, 상기 조성물과 배합 또는 동시에 사용 되는 다른 조성물을 포함한 요소 및 기타 생리 내지 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
일 구체예에 따른 조성물은 상기 조성물은 화장료, 피부외용제용, 피부 질환의 예방 또는 치료용, 또는 건강기능 식품일 수 있다. 상기 화장료 조성물은 구체적으로 피부 보습용, 피부 장벽 강화용, 피부 손상 예방 또는 개선용, 또는 피부장벽 강화용, 노화 예방 또는 개선용, 또는 피부 상태 개선용일 수 있다. 상기 노화는 자외선에 의하거나 열에 의한 노화일 수 있다.
따라서 상기 조성물은 화장품학적으로, 식품학적으로, 또는 약학적으로 허용가능한 부형제 또는 담체를 더 포함할 수 있다. 상기 조성물은 조성물의 제형에 따라 각종 공지의 첨가제를 추가로 포함할 수 있으며, 일 구체예에 따르면 담체, 유화제, 보습제, 계면활성제, 킬레이팅제, 산화방지제, 살균제, 안정화제, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 첨가제를 추가로 포함할 수 있다.
상기 담체로는 예를 들면 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연, 락토오스, 실리카, 알루미늄 하이드록사이드, 칼슘 실리케이트, 폴리아미드 파우더, 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜, 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미세결정 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록사이드, 벤토나이트, 아가 또는 트라가칸트, 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세라이드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 오일, 리놀린 유도체, 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등을 포함할 수 있다.
상기 유화제로는 예를 들면 유동 파라핀, 세틸올타노에이트, 스테아린산 등을 포함할 수 있다.
상기 보습제로는 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 펜틸렌글리콜, 헥실렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 솔비톨, 및 로 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 폴리올을 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 폴리올은 조성물 총 중량에 대하여 5 내지 50 중량%, 5 내지 30 중량%, 10 내지 30 중량%, 또는 5 내지 10 중량%로 함유될 수 있다. 이때, 폴리올은 보습 지속력 유지의 측면에서 5 중량%이상으로 포함될 수 있고, 끈적임 및 눅눅함이 증가로 인한 사용감 저하를 억제한다는 측면에서 50중량% 이하로 포함될 수 있다.
상기 킬레이팅제로는 에틸렌디아민테트라아세트산나트륨(EDTA), α-하이드록시 지방산, 락토페린, α-하이드록시산, 시트르산, 락트산, 말산, 빌리루빈, 빌리버딘(biliverdin) 등을 포함할 수 있다.
상기 산화 방지제로는 부틸히드록시아니솔, 디부틸히드록시톨루엔 또는 프로필 갈레이트 등을 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물에 있어서, 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) KCCM12644P 균주, 이의 발효액, 파쇄액, 추출액 또는 배양액은 화장수(스킨로션), 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양 로션, 마사지크림, 영양 크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양 에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 현탁액, 겔, 분말, 페이스트, 마스크팩 또는 시트 또는 에어로졸 조성물을 포함하는 제형으로 제조될 수 있다. 이러한 제형의 조성물은 당해 분야에서 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 상기 보습제 등의 추가 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 내지 5 중량%, 구체적으로 0.01 내지 3 중량%일 수 있다.
당업자는 본 명세서에 따른 조성물의 유리한 특성이 예상된 첨가에 의해 악영향을 받지 않거나 실질적으로 받지 않도록, 임의의 추가 성분 및/또는 이의 양을 선택할 수 있다. 상기 추가 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 전체 중량을 기준으로 약 0.001 내지 약 30 중량%, 구체적으로 약 0.01 내지 약 25 중량%일 수 있다.
또한, 각 제형의 화장료 조성물에 있어서 화장료의 제형 또는 사용 목적에 따라 적절한 성분들을 선정하여 배합할 수 있다. 배합 성분 및 방법은 통상의 기술에 따를 수 있으므로 그 구체적인 설명은 본 명세서에서 생략한다.
용어 "치료 또는 개선"은 질환, 장애, 상태 또는 병태, 또는 그의 하나 이상의 증상의 경감, 진행 억제 또는 예방을 지칭하거나, 그를 포함하며, "유효성분" 또는 "약제학적 유효량"은 질환, 장애, 상태 또는 병태, 또는 그의 하나 이상의 증상의 경감, 진행 억제 또는 예방에 충분한 본원에서 제공되는 발명을 실시하는 과정에서 이용되는 조성물의 임의의 양을 의미할 수 있다. 상기 유효량(또는 투여량)은 0.0001mg 내지 10,000mg, 0.001mg 내지 1000mg, 1.0mg 내지 100mg, 0.01mg 내지 1000mg, 0.01mg 내지 100mg, 0.01mg 내지 10mg, 또는 0.01mg 내지 1mg일 수 있다.
상기 피부 상태 또는 피부와 관련된 상태의 예는, 피부 노화, 피부 광노화, 상처, 피부염, 아토피 피부염, 소양증, 습진성 피부질환, 건성 습진, 홍반, 두드러기, 건선, 약발진, 또는 여드름, 구진인설질환, 곤충 및 기생충 매개 질환, 표재성 피부 진균증, 세균 감염 질환, 바이러스 질환, 성인성 질환, 자가면역 수포성 질환, 결체조직 질환, 색소이상증, 색소성 건피증 등을 포함할 수 있다.
상기 피부 손상은 외부의 물리적 손상, 화학 물질, 세균, 곰팡이, 바이러스 등의 침투, 자외선에 대한 노출, 피부의 수분 손실, 노화 등에 의한 주름, 자유라디칼(활성산소) 등에 의한 산화, 피부 색소 침착, 피부 염증, 지루성 피부염, 붉어짐(발적, 홍반), 부종, 태선화, 습진, 소양감(가려움), 및 아토피 피부염 등을 포함하는 피부 조직 또는 세포의 임상적 및 미용적 관점에서의 손상을 포함할 수 있다.
상기 피부는 얼굴, 손, 팔, 다리, 발, 가슴, 배, 등, 엉덩이, 및 두피를 포함하는 신체의 모든 피부 부위를 포함한다.
상기 조성물은 비경구 투여 제형으로 제형화될 수 있다. 비경구 투여 제형은 주사제, 또는 피부외용제일 수 있다. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제등을 필요에 따라서 적절하게 배합할 수 있다.
상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류등도 적절하게 배합할 수 있다.
본 명세서에서, 상기 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 피부외용제는 연고제, 로션제, 스프레이제, 패취제, 크림제, 산제, 현탁제, 겔제 또는 젤의 형태로 제조되어 사용될 수 있다. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. 상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류등도 적절하게 배합할 수 있다.
또한, 상기 조성물은 의약외품 조성물일 수 있다.
용어 "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 섬유, 고무제품 또는 이와 유사한 것, 인체에 대한 작용이 약하거나 인체에 직접 작용하지 아니며, 기구 또는 기계가 아닌 것과 이와 유사한 것, 감염 예방을 위하여 살균, 살충 및 이와 유사한 용도로 사용되는 제제 중 하나에 해당하는 물품으로서, 사람이나 동물의 상태 또는 질병을 진단, 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것 및 사람이나 동물의 구조와 기능에 약리학적 영향을 줄 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것을 제외한 물품을 의미하며, 피부 외용제 및 개인위생용품도 포함할 수 있다.
상기 피부 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 있어서, 피부 질환은 예를 들면 피부 손상을 포함하며, 구체적으로 예를 들면 피부 노화, 피부 광노화, 상처, 피부염, 아토피 피부염, 소양증, 습진성 피부질환, 건성 습진, 홍반, 두드러기, 건선, 약발진, 또는 여드름, 구진인설질환, 곤충 및 기생충 매개 질환, 표재성 피부 진균증, 세균 감염 질환, 바이러스 질환, 성인성 질환, 자가면역 수포성 질환, 결체조직 질환, 색소이상증, 색소성 건피증을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 희석제는 유당, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 또는 만니톨, 활택제로는 스테아린산 마그네슘, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 담체는 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 부형제는 미결정 셀룰로오즈, 유당, 저치환도 히드록시셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 붕해제는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산 나트륨, 무수인산일수소 칼슘, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 결합제는 폴리비닐피롤리돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 활택제는 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여 제형으로 제형화될 수 있다. 경구 투여 제형은 과립제, 산제, 액제, 정제, 캅셀제, 건조시럽제, 또는 그 조합일 수 있다. 비경구 투여 제형은 주사제일 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물은 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) KCCM12644P 균주, 이의 발효액, 파쇄액, 추출액 또는 배양액 단독 또는 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 명세서의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 건강기능식품의 종류 중 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 건강식품 조성물은 또한 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제, 또는 그 조합을 함유할 수 있다. 상기 건강기능식품 조성물은 또한, 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육, 또는 그 조합을 함유할 수 있다.
또 다른 양상은 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) KCCM12644P 로부터 발효물을 수득하는 단계; 및 상기 수득된 발효물로부터 오일을 추출하는 단계를 포함하는, 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) KCCM12644P 균주로부터 오일을 수득하는 방법을 제공하는 것이다.
상기 발효물을 수득하는 단계는 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) KCCM12644P 균주를 글루코오스, 프룩토오스, 만노오스, 갈락토오스, 자일로스, 리보오스, 말토오스, 수크로오스, 덱스트린, 글리세린, 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 탄소원; 및 질산칼륨, 질산암모늄, 황산암모늄, 옥살산암모늄, 및 인산이암모늄 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 질소원을 포함하는 배지에서 배양하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 배양 배지에서 사용되는 탄소원 또는 질소원은 예를 들면, 약 0.1 내지 30 w/v%, 1 내지 25 w/v%, 1 내지 20 w/v%, 1 내지 10 w/v%, 1 내지 5w/v%, 또는 1 내지 1.5 w/v%로 포함될 수 있다. 상기 배양배지는 균주의 배양배지에서 통상적으로 사용되는 염을 포함할 수 있으며, 상기 염은 예를 들면 질산칼륨, 황산칼륨, 탄산마그네슘, 황산마그네슘, 및 질산마그네슘으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 염을 포함할 수 있으며, 상기 염은 예를 들면, 약 0.01 내지 10 w/v%, 0.1 내지 7 w/v%, 또는 0.5 내지 5 w/v%로 포함될 수 있다.
또한 상기 배지는 예를 들면, 약 0.01 내지 10w/v%, 0.05 내지 5 w/v%, 또는 0.1 내지 2w/v%의 효모 자가용해물을 포함할 수 있으며, 상기 배양 배지는 약 2.0 내지 7.0의 pH일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
또한 상기 배양액은 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides)을 예를 들면, 약 20 내지 42℃, 약 25 내지 35 ℃, 또는 약 27 내지 30 ℃ 의 온도 조건 하에 예를 들면 약 24내지 144시간, 48 내지 120시간, 또는 15 내지 35시간 동안 배양하여 수득된 것일 수 있다. 또한 상기 효모를 배양하는 단계는 통상적으로 사용하는 발효 방법이 포함될 수 있으며, 예를 들면 상기 방법은 유가식(fed batch) 발효일 수 있다.
상기 수득된 발효물로부터 오일을 추출하는 단계에서 사용하는 추출용매는 예를 들면 헥산, 에틸아세테이트, 도데칸, 데칸, 디젤, 알코올, 및 이들의 조합물일 수 있으며, 추출방법은 예를 들면 초음파추출, 마이크로파추출, 교반추출, 가온추출 중 하나일 수 있으며, 상기 추출용매의 사용량은 전체 발효로 수득될 수 있는 추출오일의 약 5 내지 30 배의 무게비율로 사용하여 오일 성분을 추출할 수 있다.
일 양상에 따른 로도스포리디움 토룰로이데스 속 균주 또는 이의 발효액, 파쇄액, 추출액 또는 배양액을 포함하는 조성물에 의하면, MMP-1의 발현양을 유의하게 감소시키고, 염증 사이토카인인 IL-6의 발현을 억제시키면서 NO의 생성도 억제시킬 수 있고 동시에 필라그린의 발현을 증가시킬 수 있어 피부 염증 개선, 주름 개선 효과 및 피부자극완화 효과 및 피부 장벽 강화 기능이 나타나므로 피부 개선용 화장료 조성물, 피부외용제용 조성물, 약학적 조성물, 및 건강기능식품 등에 유용하게 사용할 수 있다.
도 1은 로도스포리디움 토룰로이데스 효모 유래 추출 오일 내 지방산 조성을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 섬유아세포 세포주에 UV를 조사한 이후 로도스포리디움 토룰로이데스 효모 유래 추출 오일을 세포에 접촉시킨 경우, 섬유아세포 세포 내 MMP-1의 발현양을 확인한 도이다.
도 3은 HaCaT 각질세포 세포주에 열을 조사한 이후 로도스포리디움 토룰로이데스 효모 유래 추출 오일을 세포에 접촉시킨 경우, 각질세포에서 MMP-1의 발현양을 확인한 도이다.
도 4는 HaCaT 각질세포 세포주에 열을 조사한 이후 로도스포리디움 토룰로이데스 효모 유래 추출 오일을 세포에 접촉시킨 경우, 각질세포에서 IL-6의 발현양을 확인한 도이다.
도 5는 RAW264.7 세포에 염증 유발물질을 처리한 후 로도스포리디움 토룰로이데스 효모 유래 추출 오일을 세포에 접촉시킨 경우, Nitric oxide의 발현양을 확인한 도이다.
도 6은 HaCaT 각질세포 세포주에 로도스포리디움 토룰로이데스 효모 유래 추출 오일을 세포에 접촉시킨 경우, 필라그린의 발현량을 확인한 도이다.
도 2는 섬유아세포 세포주에 UV를 조사한 이후 로도스포리디움 토룰로이데스 효모 유래 추출 오일을 세포에 접촉시킨 경우, 섬유아세포 세포 내 MMP-1의 발현양을 확인한 도이다.
도 3은 HaCaT 각질세포 세포주에 열을 조사한 이후 로도스포리디움 토룰로이데스 효모 유래 추출 오일을 세포에 접촉시킨 경우, 각질세포에서 MMP-1의 발현양을 확인한 도이다.
도 4는 HaCaT 각질세포 세포주에 열을 조사한 이후 로도스포리디움 토룰로이데스 효모 유래 추출 오일을 세포에 접촉시킨 경우, 각질세포에서 IL-6의 발현양을 확인한 도이다.
도 5는 RAW264.7 세포에 염증 유발물질을 처리한 후 로도스포리디움 토룰로이데스 효모 유래 추출 오일을 세포에 접촉시킨 경우, Nitric oxide의 발현양을 확인한 도이다.
도 6은 HaCaT 각질세포 세포주에 로도스포리디움 토룰로이데스 효모 유래 추출 오일을 세포에 접촉시킨 경우, 필라그린의 발현량을 확인한 도이다.
이하, 본 발명을 구체적으로 설명하기 위해 실시예 및 실험예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예 및 실험예는 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 아래에서 상술하는 실시예 및 실험예에 한정되는 것으로 해석 되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예 및 실험예는 당 업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해서 제공되는 것이다.
실시예 1. 효모의 분리, 동정 및 배양
강원도 홍천에서 유래한 토양을 파쇄하고 균질화시킨 후 이 중 1.0g을 취하여 멸균한 생리식염수(0.9% NaCl) 9.0ml에 현탁하고 단계적으로 희석하여 YM 증식배지에 각각 도말하였다. 30 ℃에서 24 내지 48시간 배양한 다음 집락의 형태가 서로 다른 균주들을 선별하여 여러 번의 순수 배양(pure culture) 과정을 통하여 순수 분리하였다. 순수 분리한 균주를 YM 고체배지에 도말하여 30℃에서 24시간 배양하였으며, 순수 분리된 집락을 YM 액체배지에 배양하여 40%(v/v) 글리세롤(glycerol)과 1:1의 비율로 혼합하여 -80℃ 초저온냉동고에 보관하였다.
분리된 균주를 동정하기 위해 Internal Transcribed Spacer(ITS) 염기서열과 26S rRNA의 염기서열을 분석한 후, NCBI blast를 검색하여 균주 동정을 하였다. 염기서열 분석결과, 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides)인 것으로 동정되었다. 이에 상기에서 분리된 동정균을 로도스포리디움 토룰로이데스 LAB-07 로 명명하였고, 이를 한국미생물보존센터에 2019년 12월 19일자로 기탁하고, 기탁번호 KCCM12644P 를 부여받았다.
상기 새로이 동정된 효모의 적정배양조건은 30℃에서 200rpm으로 24시간 배양한 것임을 확인하였다. 아울러, 상기 효모를 통해 추출될 수 있는 오일의 최적생산 조건을 탐색하기 위해 배지 내 탄소원, 질소원 및 무기염류의 비율을 달리하여 배양하였으며, 최적 배양조건에서 효모로부터 유래되는 오일 내 포함된 지방산 함량은 최대 34.5%로 측정되었다.
실시예 2. 동정된 효모 유래 추출 오일의 제조
상기 새로이 동정된 효모는 발효를 통해 세포 내 오일을 생성할 수 있으므로, 상기 효모를 배양하고 이로부터 추출된 지방산을 포함하는 오일을 수득하였다. 이후 추출물의 효능을 분석하기 위해 상기 효모를 실시예 1에서 확인한 배지 조성물로 배양시켜, 생산한 발효물을 에틸알코올의 20 용적비(20ml의 용매 혼합물 중에 1g)로 균질화시켰다. 분산 후, 전체 혼합물을 초음파추출(sonication)을 통해 3시간 동안 추출을 진행하였다. 추출물은 4000rpm(10분)에서 원심 분리하여 상등액만 회수하였다. 상등액을 이후 0.2 ㎛ 필터를 사용하여 여과 후, 지질을 함유하는 상등액을 진공하에 회전 증발기에서 증발시킨 후, DMSO에 적정 농도로 녹여 최종적인 발효 추출물을 제조하고, 제조된 추출물의 구체적인 지방산 조성을 확인하기 위한 분석을 수행하고 이를 표 1 및 도 1에 나타내었다. 이후, 상기 최종적인 발효 추출물을 이후 실시예에서 활용하였다.
| 지방산 조성(%) | 발효 추출물 유래 오일 |
| C12:0 Lauric acid | 5.1 |
| C14:0 Myristic acid | 2.1 |
| C16:0 Palmitic acid | 25.6 |
| C16:1 Palmitoleic acid | 1.9 |
| C18:0 Stearic acid | 7.4 |
| C18:1 Oleic acid | 46.1 |
| C18:2 Linoleic acid | 11.0 |
| C18:3n3 Linolenic acid | 0.7 |
실시예 3. 로도스포리디움 토룰로이데스 유래 오일의 광노화억제 세포평가
상기 실시예 2의 발효 추출물로부터 HaCat cell line을 10% FBS (fetal bovine serum)와 1X 페니실린/ 스트렙토마이신(P/S)이 함유된 DMEM 배지에 배양하고 세포를 카운팅한 뒤 6 cm2 플래이트에 2 x 105 cell/well이 되도록 희석하여 시딩하고 5% CO2, 37℃ 배양기에서 24시간 배양하였다.
또 다른 세포인 섬유아세포 cell line을 10% FBS 와 1X 페니실린/ 스트렙토마이신 (P/S)이 함유된 FBM 배지에 배양하고 세포를 카운팅한 뒤 24 well plate에 3 x 104 cell/well이 되도록 희석하여 시딩하고 5% CO2, 37℃ 배양기에서 24시간 배양하였다.
배양한 HaCaT 세포의 상등액을 제거 하고, PBS 워싱한 후 PBS를 1 ml 넣고 UV를 15 mJ/cm2조사 하였다. PBS를 제거하고, starvation 단계를 위해 1% FBS를 포함하는 DMEM 배양액을 교체 후 5% CO2 37℃ 배양기에서 24시간 배양하였다. UV조사를 한 HaCaT 세포의 상등액과 조사하지 않은 HaCaT 세포의 상등액을 각각 50ml 튜브에 옮기고 독성이 없는 농도 범위 기준으로 설정 후, HaCat 세포의 상등액을 이용하여 희석하였다.
배양한 세포 섬유아세포의 상등액을 제거하였다. HaCaT 상등액을 이용하여 만든 시료들을 배양한 세포 섬유아세포에 농도별로 처리 후 5% CO2 37℃ 배양기에서 24시간 배양 하였다. 배양한 세포 섬유아세포의 상등액을 96 well plate에 150 ㎕씩 넣었다. Human Total MMP-1 ELISA kit (DY901)를 활용하여 섬유아세포 상등액 내에 존재하는 MMP-1의 양을 정량하였다.
발효 추출물 유래 오일의 주름개선 효능을 확인하기 위하여 시료를 농도별로 처리하여 콜라겐 분해 효소인 MMP-1 발현량이 감소하는지 여부를 확인하였고, 이를 도 2에 나타내었다.
도 2에서 나타난 바와 같이, MMP-1 활성을 측정한 결과, 로도스포리디움 토룰로이데스 유래 오일을 세포에 첨가한 경우 처리 농도에 비례하여 MMP-1 활성이 저해되는 것을 확인할 수 있었다. 75 ppm 농도 이상에서부터 음성 대조군 대비 MMP-1 활성을 유의하게 저해시킬 수 있음을 확인하였으며, 특히 150 ppm 농도에서는 약 85% MMP-1 활성을 저해가 확인하여 로도스포리디움 토룰로이데스 유래 오일이 광노화를 효과적으로 억제할 수 있음을 확인할 수 있었다.
실시예 4. 로도스포리디움 토룰로이데스 유래 오일의 열노화 억제 세포평가
상기 실시예 2의 발효 추출물 유래 오일을 1, 10, 및 100 ㎍/ml의 농도로 배양 배지에 희석시켜 하기 실험에 사용하였다.
구체적으로, 사람의 각질형성세포주(HaCaT keratinocytes (p 19))에서 다음과 같은 조건으로 실험하였다. 먼저 각질형성세포를 6 웰 플레이트에 3x105로 분주한 후, 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후 배지를 제거하고 DPBS로 워싱 후 대조군을 제외한 나머지 세포군에 15분 동안 열적외선을 조사한 뒤 발효 추출물 유래 오일을 농도별로 첨가하여 24시간 동안 추가로 배양하였다.
그 후 각 시료의 세포에서 트리졸(RNA iso, DAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 nanodrop으로 260㎚에서 RNA를 정량한 후, 각각 2㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA에 타겟 단백질인 MMP-1 프라이머와 시아닌 염료인 사이버그린 (SYBR Green supermis, Applied Biosystems, 미국)을 첨가한 혼합물을 이용하여 실시간(real-time) PCR 기계에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 실시함으로써 최종적으로 MMP-1 유전자의 발현 정도를 확인하였다. 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하고 상기 분석 결과를 도 3에 나타내었다. 아울러, 유전자 발현을 확인하기 위하여 사용한 프라이머를 표 2에 나타내었다.
| primer | 서열(5'-3') |
| MMP-1 | F: CGAATTTGCCGACAGAGATGA(서열번호 1) R: GTCCCTGAACAGCCCAGTACTT(서열번호 2) |
| β-actin | F: GGCCATCTCTTGCTCGAAGT(서열번호 3) R: GACACCTTCAACACCCCAGC(서열번호 4) |
도 3에 나타난 바와 같이, 음성 대조군에서 열적외선 조사군에서 MMP-1 발현량이 증가한 것에 반해, 발효 추출물 유래 오일 처리 군은 1, 10, 및 100 ㎍/ml 의 처리 농도 모두에서 MMP-1 유전자 발현량을 유의적으로 감소시키는 것을 확인하였다.
따라서, 발효 추출물 유래 오일은 열에 의하여 증가된 MMP-1의 발현을 감소시킴으로써 주름 개선 효과 및 노화 방지 효과를 나타냄을 알 수 있다.
실시예 5. 로도스포리디움 토룰로이데스발효 추출물 유래 오일의 IL-6 저해효과 평가
발효 추출물 유래 오일의 IL-6 저해 효과를 확인하고자 상기 실시예 4에 기재한 것과 동일한 세포를 사용하여 동일 조건으로 실험을 진행하였다. 다만 최종적으로 실시간 중합효소 연쇄반응을 진행하는 과정에서 MMP-1 프라이머 대신 IL-6프라이머를 사용하였다. 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하고 분석 결과를 도 4에 나타내었다. 아울러, 유전자 발현을 확인하기 위하여 사용한 프라이머를 표 3에 나타내었다.
| Primer | 서열(5'-3') |
| IL-6 | F: TACCCCCAGGAGAAGATTCC(서열번호 5) R: TTTTCTGCCAGTGCCTCTTT(서열번호 6) |
| β-actin | F: GGCCATCTCTTGCTCGAAGT(서열번호 3) R: GACACCTTCAACACCCCAGC(서열번호 4) |
도 4에 나타난 바와 같이, 발효 추출물 유래 오일 처리군은 1, 10, 및 100 ㎍/ml 의 처리 농도 모두에서 MMP-1 유전자 발현량을 유의적으로 감소시키는 것을 확인하였다. 종합적으로 발효 추출물 유래 오일 처리군은 농도 의존적으로, 그리고 유의적으로 IL-6 유전자 발현량을 유효하게 감소시키는 것을 확인하였다. 따라서, 발효 추출물 유래 오일은 염증성 사이토카인인 IL-6의 발현을 감소시킴으로써 피부 염증 개선, 주름 개선 효과 및 피부자극완화 효과를 나타냄을 알 수 있다.
실시예 6. 로도스포리디움 토룰로이데스 발효 추출물 유래 오일의 항염효과 세포평가
RAW264.7 세포를 카운팅한 뒤 2.5 x 105 cell/well이 되도록 희석 후, 48 웰 플레이트 에 2.5 x 105 세포/웰 세포를 시딩하고 5% CO2, 37℃ 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 세럼 프리 배지로 교체 후 starvation 시키고, 로도스포리디움 토룰로이데스 유래 오일 시료를 농도별로 각각 희석하여 처리하였다. 양성 대조군으로 사용하는 덱사메타손은 1 ppm로 처리 후 5% CO2, 37℃ 배양기에서 1시간 배양하고 LPS가 1 μg/ml이 되도록 처리 후 5% CO2, 37℃ 배양기에서 24시간 배양하였다. 합성된 NO를 포함하는 배지 100 μl를 96 웰 플레이트로 옮기고 500 μM NaNO2를 기준으로 사용하여 각각의 농도별로 96 웰 플레이트에 처리 후 20분 동안 실온에서 반응시켰다. 흡광도 측정을 위해 multiskan GO 프로그램을 실행 후 흡광도를 540 nm로 설정하고, 플레이트에 측정 영역을 선택하고 흡광도를 측정하였다. 각각의 합성된 Nitric Oxide의 값을 표준 곡선을 이용하여 계산하고, 그 값의 평균으로 결과 값을 도출하여, NO 의 생성량 측정을 통한 항염 효과를 확인하고 이를 도 5에 나타내었다.
도 5에서 나타난 바와 같이, 로도스포리디움 토룰로이데스 유래 오일을 처리한 경우 농도 의존적으로 NO의 생성량이 감소하는 것을 확인하였으며, 음성 대조군 대비 처리된 모든 농도에서 유의적으로 NO 생성량을 감소시켜 직접적인 항염 효과를 확인할 수 있었다. 특히 추출물이 150 ppm 인 경우, 음성 대조군 대비 약 58%의 NO 발현 억제가 나타나며, 이는 양성대조군과 비슷한 수준으로 효율적으로 NO의 생성량을 감소시키는 것을 확인하였다. 따라서, 발효 추출물 유래 오일은 NO 발현을 효과적으로 감소시킴으로써 피부 염증 개선, 주름 개선 효과 및 피부자극완화 효과를 나타냄을 알 수 있다.
실시예 7. 로도스포리디움 토룰로이데스 발효 추출물 유래 오일의 보습효과 세포평가
상기 실시예 2의 발효 추출물 유래 오일의 피부 보습 효과를 평가하기 위해 다음과 같이 실험하였다. 사람 각질형성세포 HaCaT 세포 (한국 세포주 은행에서 구입)를 6 웰 세포 배양 접시에 3ⅹ105의 밀도로 접종한 후 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 배양하였다. 이후 실시예 1의 조성물을 1, 10, 및 100 ㎍/ml을 배지에 첨가한 다음 추가로 24시간 동안 배양하고, 세포를 회수하여 상기 발효 추출물 유래 오일의 상기 열노화 억제 세포평가의 방법과 같이 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA를 주형 필라그린(filaggrin)에 대하여 사이버그린 (SYBR Green supermix, Applied Biosystems, USA)을 첨가한 혼합물을 이하여 실시간(real-time) PCR 기계 (Step One Plus, Applied Biosystems, 미국)에서 실시 간 중합효소 연쇄반응을 수행하였다. 실시간 PCR 반응 조건은 94℃, 5분 동안 중합 효소 활성화 후, 95℃ 30초, 54℃ 1분, 72℃ 1분 조건에서 40 사이클의 조건으로 수행하였고, 프라이머 서열은 하기 표 4에 기재하였다. 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 필라그린(Filaggrin) 유전자의 발현량을 최종적으로 분석하고, 이의 결과를 도 6에 나타내었다.
| Primer | 서열(5'-3') |
| Filagrrin | F: AGTGCACTCAGGGGGCTCACA(서열번호 7) R: CCGGCTTGGCCGTAATGTGT (서열번호 8) |
| β-actin | F: GGCCATCTCTTGCTCGAAGT(서열번호 3) R: GACACCTTCAACACCCCAGC(서열번호 4) |
도 6에 나타난 바와 같이, 발효 추출물 유래 오일 처리군에서 농도 의존적으로 그리고 유의적으로 필라그린 유전자 발현량이 증가함을 확인하였다. 따라서, 발효 추출물 유래 오일은 필라그린의 발현을 증가시킴으로써 장벽 개선효과를 통한 보습 효과를 나타낼 수 있음을 구체적으로 확인하였다.
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<110> Cosmax, INC.
LABIO Co., Ltd.
<120> Novel strain of Rhodotorula toruloides, and cosmetic composition
comprising a culture solution of the strain
<130> PN130784
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<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> forward primer sequence of MMP-1
<400> 1
cgaatttgcc gacagagatg a 21
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> reverse primer sequence of MMP-1
<400> 2
gtccctgaac agcccagtac tt 22
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> forward primer sequence of beta-actin
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<213> Artificial Sequence
<220>
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<210> 5
<211> 20
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<223> forward primer sequence of Filagrrin
<400> 7
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<223> reverse primer sequence of Filagrrin
<400> 8
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Claims (14)
- 로도스포리디움 토룰로이데스 (Rhodosporidium toruloides) LAB-07 (수탁번호: KCCM12644P) 균주, 이의 발효액, 파쇄액, 추출액 또는 배양액을 포함하는 화장료 조성물.
- 삭제
- 삭제
- 청구항 1에 있어서, 상기 배양액은 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) LAB-07 (수탁번호: KCCM12644P) 균주를 배양하여 수득된 배양액 자체, 또는 이로부터 균주를 제거하여 수득된 배양 상층액, 또는 배양 상층액의 농축물 또는 동결건조물인 것인, 화장료 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 배양액은 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) LAB-07 (수탁번호: KCCM12644P) 균주를
글루코오스, 프룩토오스, 만노오스, 갈락토오스, 자일로스, 리보오스, 말토오스, 수크로오스, 덱스트린, 글리세린, 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 탄소원; 및
질산칼륨, 질산암모늄, 황산암모늄, 옥살산암모늄, 및 인산이암모늄 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 질소원을 포함하는 배지에서 20 내지 42℃의 온도 조건 하에 24 내지 144시간 동안 배양하여 수득된 것인, 화장료 조성물. - 청구항 1에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 보습용, 피부 손상 예방 또는 개선용, 피부장벽 강화용, 자외선 또는 열에 의한 노화 예방 또는 개선용, 또는 피부 상태 개선용인, 화장료 조성물.
- 삭제
- 청구항 1에 있어서, 상기 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) LAB-07 (수탁번호: KCCM12644P) 균주, 이의 발효액, 파쇄액, 추출액 또는 배양액을 조성물 총 중량에 대하여 1 중량% 내지 99.99 중량%로 포함되는 것인, 화장료 조성물.
- 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) LAB-07 (수탁번호: KCCM12644P) 균주, 이의 발효액, 파쇄액, 추출액 또는 배양액을 포함하는 피부외용제용 조성물.
- 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) LAB-07 (수탁번호: KCCM12644P) 균주, 이의 발효액, 파쇄액, 추출액 또는 배양액을 포함하는 피부 질환의 치료 또는 예방용 약학적 조성물로서,
상기 피부 질환은 피부염, 아토피 피부염, 소양증, 습진성 피부질환, 건성 습진, 홍반, 두드러기, 건선, 약발진, 여드름, 구진인설질환, 곤충 및 기생충 매개 질환, 표재성 피부 진균증, 세균 감염 질환, 바이러스 질환, 성인성 질환, 자가면역 수포성 질환, 결체조직 질환, 색소이상증, 및 색소성 건피증로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것인 조성물. - 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) LAB-07 (수탁번호: KCCM12644P) 균주, 이의 발효액, 파쇄액, 추출액 또는 배양액을 포함하는 건강기능식품 조성물.
- 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) LAB-07 (수탁번호: KCCM12644P) 균주로부터 이의 발효물을 수득하는 단계를 포함하는, 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides) LAB-07 (수탁번호: KCCM12644P) 균주로부터 유래된 발효물을 포함하는 화장료 조성물을 제조하는 방법.
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|---|---|---|---|---|
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