KR102162323B1 - 면역계 조절제 - Google Patents

Abstract

본원에 기재된 본 발명은 면역계를 억제하는 분자와 상호작용하는 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본원에 기재된 실시양태는 면역 세포 상의 수용체와 상호작용하는 면역조절 펩티드에 결합함으로써 면역계의 면역억제를 제거하는 조성물, 면역 세포를 자극할 수 있는 조성물, 및 종양 세포에 대해 세포독성인 조성물의 발견, 제조 및 용도에 관한 것이다.

Description

면역계 조절제 {IMMUNE SYSTEM MODULATORS}

관련 출원

본원은 2013년 9월 9일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 61/875598을 우선권 주장하며, 이 가출원은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

전자 포맷의 서열

본원은 전자 포맷의 서열 목록과 함께 출원된다. 서열 목록은 2014년 9월 8일에 생성 및 최종 저장되었고 크기가 162,189 바이트인 파일 명칭 CANIG005WO.TXT로서 제공된다. 전자 포맷의 서열 목록 내 정보는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

발명의 분야

본 발명의 측면은 일반적으로 면역계를 억제하는 분자와 상호작용하는 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본원에 기재된 실시양태는 면역계를 조절하는 조성물의 발견, 제조 및 용도에 관한 것이다.

면역계는 외래 분자를 검출하여 근절하고, 동시에 정상 조직의 파괴를 유발하여 자가면역 또는 만성 염증성 질환을 초래할 수 있는 과다 반응성을 피하도록 정교하게 조정된다. 특이적 면역 반응의 개시는 이펙터 기능의 활성화, 예컨대 시토카인의 방출, 특이적 항체의 생산 및/또는 세포의 세포독성 활성에 이르는 사건들의 잘-조율된 연쇄작용이다.

인간 암에서의 면역계의 역할은 여러 해 동안 토론 하에 있었다. 예를 들어, 악성 종양의 발생률 증가가 면역손상 동물, 예컨대 누드 마우스에서 관찰되지 않는다는 것은 수수께끼였다. 이들 동물은 유의한 항종양 면역 반응성을 탑재할 수 있기 때문에 예상되는 정도로 극심하게 면역손상되지는 않는다. Stat 1 -/-, IFNγR -/- 또는 RAG2 -/- 유전자형의 심하게 면역손상된 트랜스제닉 마우스가 연구되었을 때, 이들 동물에서 성장하는 암의 면역원성 및 종양 발생률은 암 발생을 제어하는 능력을 갖는 면역 매개 항암 반응성의 존재를 강하게 지지했다. 이들 결과에 기반하여, 면역편집 모델이 개발되었다 (Dunn and Schreiber, Immunity, 21:137-148 (2004)).

유사하게, 치료상 면역억제된 동종-기관 이식된 환자에서의 암 발생률의 보통의 증가는 상피암에서의 면역억제의 조기 출현에 의해 설명될 것처럼 보인다 (Schuele J, et al., Breast Cancer Res Treat. 2002; 74:33-40; Wolfram RM, et al., Int J Cancer. 2000; 88:239-44., Petersen RP, et al., Cancer. 2006; 107:2866-72). 자발적 면역-매개 종양 퇴행의 발생, 종양-침윤 림프구와 예후 사이의 상관관계, 종양 특이적 세포독성 T-림프구 및 항체의 발생, 및 면역자극 치료의 효능은 모두 암 진행의 제어 또는 조절에 있어서 면역계의 유의한 역할을 지지한다.

이들 관찰은 또한, IL-6을 생산하는 능력이 증진되는, 암에서의 면역계의 조절이상이, 철저히 절제된 결장직장암 환자에서의 불량한 예후와 상관관계가 있다는 것을 제시하는 클린키 등(Clinchy et al.) (Clinchy B, et al., Cancer. 2007; 109:1742-9)의 결과와 일치한다. 심지어 국부 진행성 종양 T3N1-2를 가진 고위험 환자 군에서도, 환자의 면역 세포가 IL-6의 정상 생산을 나타낸 경우에 환자는 암으로 사망하지 않았다. 유사하게, 갈론 등(Galon et al.) (Galon J, et al., Science. 2006; 313:1960-4, Mlecnik B, et al., J Clin Oncol. 2011, 29:610-8)은 T-세포 면역 파라미터가 이들 환자에서의 예후와 강하게 상관관계가 있다는 것을 제시하였다.

상이한 기원의 인간 암의 대부분은 면역 매개 항종양 반응성을 유도하지만, 종종 초기 단계에 나타나는 면역억제 메카니즘이 면역계를 손상시킨다. 전신 억제의 부재 하의 국부 면역억제 (수반 면역)의 존재는 국부, 전신 구배의 면역억제를 나타낸다 (Gorelik E., et al., Adv Cancer Res. 1983;39:71-120). 예를 들어, 면역 세포의 기능은 말초 혈액에서보다 종양 근처에서 더 손상될 수 있다 (Vose BM, et al., Int J Cancer 1977 20:895-902). 여러 인자가 이 억제를 매개할 수 있지만 (Menetrier-Caux C, et al., Br J Cancer 1999 79: 119-130., Heimdal JH, et al., Scand J Immunol 2000 51: 271-278., Heimdal JH, et al., Scand J Immunol 2001 53: 162-170), 근본적인 메카니즘은 확인되지 않았다 (Kim R, et al., Cancer Res. 2006 Jun 1;66(11):5527-36, Mocellin S, et al., J Immunother 2001 24:392-407). 적대적 종양내 환경의 영향은 여러 그룹에 의해 기재되었다 (Perdrizet GA, et al., J Exp Med. 1990;171:1205-20, Yu P, et al., J Exp Med. 2005 201:779-91). 암에 대한 면역 반응성은 다양한 수준, 예를 들어 개시, 종양으로의 이펙터 세포의 동원 및 종양 내에서의 이들 세포의 이동 및 이들의 세포독성 활성에 있어서 억제될 수 있다. 종양 부위에 존재하는 이펙터 메카니즘은 또한 면역 매개 암 제어를 제공할 수 있다.

데이터는 면역계가 암 제어에 매우 중요하다는 것을 나타내지만 (Dunn GP, et al., Immunity. 2004 21:137-48., Galon J, et al., Science. 2006 313:1960-4., Koebel CM, et al., Nature. 2007 450:903-7, Clinchy B, et al., Cancer. 2007 109:1742-9, Teng MW, et al., J Leukoc Biol. 2008 84:988-93), 악성 종양은 계속 성장하고, 면역요법의 효능은 10-20%의 객관적 완화율로 다소 불량하다. 이 분명한 역설에 대한 여러 이유가 존재할 수 있는데, 예를 들어 종양은 종양 항원이 약한 자기-항원이라는 것으로 인해, TAP 및 MHC I 및 II의 하향조절로 인한 불량한 항원 제시로 인해, 또는 관용 또는 암 관련 면역억제의 유도로 인해 면역계에 의한 인식을 피한다. 적대적 종양내 환경의 영향은 동물 실험 (Perdrizet GA, et al., J Exp Med. 1990;171:1205-20., Yu P, et al., J Exp Med. 2005 201:779-91) 및 인간 종양 (Gajewski TF, et al., J Immunother. 2006 29:233-40, Whiteside TL, Oncogene. 2008 27:5904-12)으로부터 결과에 의해 입증된다.

상이한 유형의 면역억제 세포, 조절 T-세포, 미성숙 수지상 세포 (iDC), 종양 연관 대식세포 (TAM) 및 골수 유래 억제 세포 (MDSC)가 암 관련 면역억제에서 실질적으로 기능할 수 있다. 면역 균형은 시토카인, 예컨대 IL-4, IL-10 및 PGE2를 특징으로 하는 Th2 우성으로 일반적으로 치우친다. 추가로, 다른 면역억제 메카니즘, 예컨대 혈청 차단 인자, 순환하는 면역 복합체, 증진된 IL-1Ra 생산 및 증진된 종양내 단백질분해 활성이 암 관련 면역억제에서 기능할 수 있다.

암 환자에서 인터류킨-6 (IL-6)의 유도를 위한 메카니즘을 조사하는 동안에, 혈청 알부민으로부터 유래된 면역조절 펩티드 서열이 밝혀졌다 (예를 들어, 미국 특허 번호 7,960,126; 8,110,347; 및 8,110,347; 뿐만 아니라 미국 공개 번호 2010/0323370 (이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)). 인터류킨-2 (IL-2)는 면역 반응의 개시 및 활성화, 및 림포카인 활성화 킬러 세포 (LAK-세포), T-세포 증식 및 세포독성을 유도하는 그의 능력에 있어서 주요 역할을 한다. 여러 보고는 암 환자로부터의 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)가 IL-2를 합성하는 능력의 감소 (Wanebo HJ, et al., Cancer. 1986 57:656-62, Mantovani, G., et al., Diagn. Clin. Immunol. 1987 5: 104-111, Lauerova L, et al., Neoplasma 1999 46: 141-149) 및 IL-2에 반응하는 능력의 감소 (Tsubono M, et al., J Clin Lab Immunol 1990 33:107-115, Pellegrini P, et al., Cancer Immunol Immunother 1996 42:1-8) 둘 다를 갖는 것으로 제시하였다. 암 환자로부터의 혈청 또는 종양 외식편으로부터의 가용성 산물은 시토카인 생산을 억제할 수 있고/거나, IL-2 수용체 발현을 억제할 수 있고/거나 (Botti C, et al., Intl J Biol Markers 1998 13:51-69, Lauerova L, et al., Neoplasma 1999 46:141-149), 정상 T 림프구의 증식 능력을 감소시킬 수 있다 (Botti C, et al., Intl J Biol Markers 1998 13:51-69).

인테그린은 세포-세포 및 세포 기층 상호작용을 매개하는, 백혈구 상에서 우세하게 발견되는 막횡단 당단백질의 슈퍼패밀리이다. 인테그린은 또한 면역 조절에서 중요한 역할을 하는데, 특히 αLβ2 (백혈구 기능 연관 분자-1, LFA-1)는 면역 반응의 개시 및 조절, 염증 세포의 조직 동원 및 이동, 및 림프구의 세포독성 활성에서 매우 중요하다 (Hogg N, et al., J Cell Sci. 2003 116:4695-705, Giblin PA, et al., Curr Pharm Des. 2006 12:2771-95, Evans R, et al., Cell Sci. 2009 122:215-25). 추가로, LFA-1은 인터류킨-2에 대한 증식 반응에 수반되고 (Vyth-Dreese FA, Eur J Immunol. 1993 12:3292-9), 일부 알부민 단편은 LFA-1 및/또는 IL-2 수용체에 결합하여, 면역 세포 증식을 비롯한, 이들 수용체를 통해 매개되는 기능적 특성을 조절한다 (미국 공개 번호 2011/0262470 (이는 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨) 참조). 이들 진전에도 불구하고, 특히 손상된 면역계 및/또는 암을 갖는 개체에서 면역계를 조절하기 위한 보다 많은 조성물이 필요하다는 것이 분명하다.

면역계를 조절하는 여러 분자가 발견되었다. 본원에 기재된 바와 같이, 많은 펩티드 (예를 들어, 효소적으로 절단 또는 변성된 알부민 및/또는 알부민 단편으로부터 수득된 펩티드)는 인간 면역 세포 상의 수용체 (예를 들어, IL-2 및/또는 LFA-1 수용체)에 결합하여, 건강한 면역계를 유지하는데 중요한 여러 면역 세포 기능 또는 특성 (예를 들어, 림프구 증식, 백혈구 확산/이동, 자연 킬러 세포 (NK-세포) 세포독성)을 억제한다. 흥미롭게도, 알부민의 유의하게 증진된 분해는 마우스 모델에서 치료에 대한 내성이 발생했을 때 일어나는 것으로 밝혀졌다 (Culp WD, et al., J ProteomeRes. 2006; 5:1332-43). 따라서, 일부 실시양태는 인간 면역 세포 상의 수용체에 결합하고/거나 그와 상호작용하여 면역계를 억제 또는 저하시키는 (예를 들어, 림프구 증식, 백혈구 확산/이동 및/또는 NK-세포 세포독성을 감소시키는), 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물이거나 또는 그와 구조적으로 닮거나 그를 모방하는 분자 (예를 들어, 합성적으로 유래된 모방체 또는 유사체, 또는 펩티드모방체)를 포함한다. 추가로, 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물에 결합하고/거나 그와 상호작용하여 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물과 인간 면역 세포 상의 수용체와의 상호작용을 억제하는 여러 분자가 개발되었다. 예를 들어, 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물에 결합하는 항체 및 펩티드가 제조되었고, 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 이들 억제제는 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물이 면역 세포 기능을 억제 또는 저하시키는 능력을 방해하는 것으로 밝혀졌다.

알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 바람직한 억제제, 예컨대 P28R (서열 2) 또는 P28 코어 (서열 62)가 본원에 기재된 방법 및 접근법을 사용하여 확인되었다. P28R 및 P28 코어 억제제는, 예를 들어 탈차단시키거나 (예를 들어, 면역 세포 수용체, 예컨대 LFA-1로부터 결합된 면역조절 펩티드 또는 3028 구조물을 이탈시킴), 면역 세포 수용체 (예를 들어, LFA-1)에 결합되거나 그와 회합된 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물을 제거 또는 이탈시켜, 정상 면역 세포 기능 (예를 들어, 유도인자, 예컨대 IL-2에 반응하는 면역 세포 증식, CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 또는 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극, 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식)을 회복시키는 것으로 밝혀졌다. 이에 따라, 본원의 일부 실시양태에 따라, P28R 및 P28 코어는 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식을 유도할 수 있는 것으로 고려된다. P28R은 또한 면역 세포를 직접적으로 자극하고 종양 세포에서 세포독성을 유도하는 것으로 밝혀졌다. 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 여러 다른 억제제가 본원에 기재된 교시를 사용하여 개발될 수 있는 것으로 고려된다. 따라서, 본 발명의 측면은 면역조절 구조물, 예컨대 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물에 결합하는 펩티드, 변형된 펩티드, 펩티드모방체, 압타머, 항체 및 그의 단편, 뿐만 아니라 그의 제조 방법 및 사용 방법, 특히 면역억제 (예를 들어, 암으로부터 유발되거나 또는 예를 들어 항생제 내성으로 인한 병원성 바이러스 또는 박테리아의 지속성 또는 만성 감염으로부터 유발되는 면역억제)의 감소를 필요로 하는 대상체에서 상기 면역억제를 감소시키는 방법을 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 화학식 VII을 포함하는 단리된 펩티드를 포함하는 조성물에 관한 것이며, 여기서 화학식 VII은 다음과 같다:

X₇₀₀KX₇₀₁X₇₀₂X₇₀₃X₇₀₄X₇₀₅X₇₀₆KX₇₀₇X₇₀₈X₇₀₉X₇₁₀X₇₁₁EX₇₁₂ (서열 394)

여기서 X₇₀₀은 K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K이거나 부재하고;

여기서 X₇₀₁은 L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T 또는 V이거나 부재하고;

여기서 X₇₀₂는 D, A, E, I, V, W 또는 Y이거나 부재하고;

여기서 X₇₀₃은 T, C, M, N, P, Q, R, S, W 또는 Y이거나 부재하고;

여기서 X₇₀₄는 F, A, I, M, N, P, T 또는 V이거나 부재하고;

여기서 X₇₀₅는 F, L, M, Q, S, T 또는 V이거나 부재하고;

여기서 X₇₀₆은 V, F, G, L, P 또는 R이거나 부재하고;

여기서 X₇₀₇은 L, A, F, G, I, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 Y이거나 부재하고;

여기서 X₇₀₈은 S, H, M, N, Q 또는 T이거나 부재하고;

여기서 X₇₀₉는 L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V 또는 W이거나 부재하고;

여기서 X₇₁₀은 F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 W이거나 부재하고;

여기서 X₇₁₁은 T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V 또는 W이거나 부재하고;

여기서 X₇₁₂는 R, F, K, N, R, T 또는 Y이거나 부재한다.

상기 화학식 VII은 서열 1-101, 167-172, 174-177, 179-393, 396-581 또는 582 중 하나일 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는 화학식 VIII을 포함하는 단리된 펩티드를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 화학식 VIII은 다음과 같다:

X₈₀₀K X₈₀₁K X₈₀₂E X₈₀₃ (서열 395)

여기서 X₈₀₀은 K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K이거나 부재하고;

여기서 X₈₀₁은 LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV 또는 L이거나 부재하고;

여기서 X₈₀₂는 LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT 또는 T이거나 부재하고;

여기서 X₈₀₃은 R, F, K, N, R, T 또는 Y이거나 부재한다.

상기 화학식 VIII은 서열 1-34, 64-68, 70-72, 74-77, 80, 83, 86, 89, 92-96, 99-100, 264, 268-269, 270-386, 388-393, 396-401, 403, 404, 406, 408-411, 413-416, 419-420, 422-438, 442-444, 446-449, 451-453, 455-458, 460, 462-466, 470, 472-477, 479-480, 482-484, 486, 487, 489, 491-493, 495-498, 500-508, 512-517, 519-522, 528-530, 532, 533, 535-538, 540, 542-551, 553, 557-559, 567, 570, 572-581 또는 582 중 하나일 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는 화학식 I을 포함하는 단리된 펩티드를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 화학식 I은 다음과 같다:

XX₁VKX₂X₃X₄ (서열 166)

여기서 X는 KKLDT (서열 167), RKLDT (서열 168), KKGDT (서열 169), KKEDT (서열 170), KKLDQ (서열 171), KKGDQ (서열 252), KKEDQ (서열 253), RKLDQ (서열 254), RKGDQ (서열 255), RKEDQ (서열 256), RKGTD (서열 257), RKEDT (서열 258), KLDT (서열 172), KGDT (서열 259), KEDT (서열 260), KLDQ (서열 261), KGDQ (서열 262), KEDQ (서열 263), LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T 또는 Q이거나 부재하고;

여기서 X₁은 FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT 또는 VL이거나 부재하고;

여기서 X₂는 LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT 또는 VH이거나 부재하고;

여기서 X₃은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR이고;

여기서 X₄는 ER 또는 E이거나 부재한다.

상기 화학식 I은 서열 2-40, 46-52, 58-65, 67-71, 74-77, 80-83, 86-88, 92-96, 99-101, 166, 173, 178, 182, 268-325, 332-392-393, 396-415, 417-444, 446-468, 470-487, 489-494, 497-508, 510, 512, 514-517, 520-522, 524-525, 528-533, 535-536, 538-539, 542-544, 546, 548, 551, 553, 556-559, 561, 563-568, 571-573, 575-581 또는 582 중 하나일 수 있고, 예컨대 상기 화학식 I은 서열 2 내지 33 중 하나일 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는 화학식 II를 포함하는 단리된 펩티드를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 화학식 II는 XTFFVKLSX₁X₂ (서열 173)이고,

여기서 X는 KKLD (서열 174), RKLD (서열 175), KKGD (서열 176), KKED (서열 177), KLD, LD 또는 D이거나 부재하고;

여기서 X₁은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR이거나 부재하고;

여기서 X₂는 ER 또는 E이거나 부재하고, 예컨대 상기 화학식 II는 서열 2-5, 19-38, 46-49, 58-61, 64, 68-70, 75, 81, 87, 93, 94, 100, 101, 173, 268-303, 350-393, 396, 398, 399, 400, 402, 403, 405, 406-408, 412-414, 417, 418, 421-423, 426-428, 430, 431, 435, 436, 438, 439, 440-442, 448-455, 458, 459, 461, 465, 467, 468, 471, 475, 476, 478-481, 483, 485, 487, 489-491, 493, 494, 497-499, 503, 507, 510, 512, 514-517, 520, 521, 524, 525, 528, 529, 531, 533, 538, 539, 542-, 544, 546, 551, 556-559, 561, 563-568, 571-573, 575-577, 579, 580 또는 581 중 하나일 수 있다. 다른 예는 X가 KKLD (서열 174)이거나 또는 X₂가 ER이거나 또는 상기 화학식이 TFFVKLSLFTER (서열 49) 또는 TFFVKLSLFTE (서열 250)이거나 또는 상기 화학식이 KKLDTFFVKLSLFTER (서열 2) 또는 KKLDTFFVKLSLFTE (서열 34)인 단리된 펩티드를 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 화학식 III을 포함하는 단리된 펩티드를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 화학식 III은 다음과 같다:

XX₁VKLX₂LX₃TEX₄ (서열 178)

여기서 X는 KKLDTF (서열 179), KLDTF (서열 180), LDTF (서열 181), DTF, TF 또는 F이거나 부재하고;

여기서 X₁은 F, M, S, V, T 또는 L이거나 부재하고;

여기서 X₂는 S, Q, M, T 또는 H이거나 부재하고;

여기서 X₃은 F, M, Q, H, N, P, S, G, A 또는 R이거나 부재하고;

여기서 X₄는 R이거나 부재한다.

상기 화학식 III은 서열 2-13, 15-18, 22-30, 34, 46-52, 58, 64, 65, 70, 71, 76, 77, 82, 83, 88, 93-96, 99, 100, 178, 268-325 중 하나일 수 있다. 예는 X가 KKLDTF (서열 178)이거나 또는 X₄가 R이거나 또는 상기 화학식이 VKLSLFTER (서열 52) 또는 VKLSLFTE (서열 251)이거나 또는 상기 화학식이 KKLDTFFVKLSLFTER (서열 2) 또는 KKLDTFFVKLSLFTE (서열 34)인 것을 포함한다.

다른 예는 서열 1-101, 167-172, 174-177, 179-393, 396-581 및 582 중 적어도 하나 또는 서열 1-32, 34, 64-66, 68, 76, 94-96, 98 및 264-393 중 적어도 하나 또는 표 5.1의 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단리된 펩티드를 포함한다.

상기 언급된 단리된 펩티드는 적어도 하나의 아미노산이 D 아미노산, 인공 아미노산 또는 화학적으로 변형된 아미노산인 것일 수 있고/거나 N-말단 아세틸 기를 포함할 수 있고/거나 C-말단 아미드 기를 포함할 수 있고/거나 글리코실화 또는 니트로실화될 수 있다.

상기 언급된 단리된 펩티드는 폴리에틸렌 글리콜, 지방산 또는 약동학적 조절제 중 적어도 하나에 연결될 수 있고/거나 시클릭 펩티드를 포함할 수 있다.

상기 언급된 단리된 펩티드는 적어도 하나의 변형, 예를 들어 D 아미노산 및/또는 N-말단 아세틸 기 및/또는 C-말단 아미드 기 및/또는 글리코실화 및/또는 니트로실화 및/또는 카르보닐화 및/또는 산화 및/또는 연결된 약동학적 조절제 및/또는 연결된 폴리에틸렌 글리콜 또는 이들의 임의의 조합 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.

상기 언급된 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산의 길이, 예컨대 7개 아미노산 내지 20개 아미노산의 길이일 수 있다.

상기 언급된 단리된 펩티드는 지지체, 담체 및/또는 융합 단백질 중 적어도 하나에 연결될 수 있다.

상기 언급된 단리된 펩티드는 다량체화될 수 있다.

상기 언급된 펩티드는 그에 연결된 검출가능한 표지, 예컨대 비오티닐화 표지, 방사성 표지, 형광 표지 또는 콜로이드성 금 표지를 포함할 수 있고/거나 그에 연결된 세포독성제, 예컨대 방사화학물질 또는 독소를 포함할 수 있다.

상기 정의된 펩티드는 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34 , 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6 또는 5개 이하의 아미노산의 길이 또는 임의의 이들 숫자 사이의 임의의 길이일 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는 상기 개시된 임의의 펩티드, 예컨대 서열 2, 62, 102-165, 583-586 또는 589를 코딩하는 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터에 관한 것이다. 벡터에 존재할 수 있는 단리된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산의 길이, 예컨대 7개 아미노산 내지 20개 아미노산의 길이이다.

본 발명의 일부 실시양태는 알부민, 알부민 단편, 지지체, 담체 또는 융합 단백질 중 적어도 하나에 결합된 상기 언급된 임의의 단리된 펩티드를 포함하는 단백질 복합체에 관한 것이다. 본 발명은 또한

임의의 상기 정의된 펩티드를 인간 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플과 접촉시키고;

상기 단백질 복합체의 존재를 검출하는 것

을 포함하며, 여기서 상기 생물학적 샘플은 알부민 또는 그의 단편을 포함하는 것인, 단백질 복합체를 제조하는 방법에 관한 것이다.

상기 펩티드는 예를 들어 지지체에 부착될 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는

임의의 상기 정의된 펩티드를 알부민 또는 그의 단편을 포함하는 생물학적 샘플과 접촉시키고; 상기 알부민 또는 상기 알부민 단편에 대한 상기 펩티드의 결합을 검출하는 것

을 포함하는, 생물학적 샘플에서 알부민 또는 알부민 단편의 존재를 검출하는 방법에 관한 것이다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 상기 정의된 펩티드에 특이적인 결합 수단에 관한 것이며, 여기서 결합 수단은 항체, 폴리클로날 또는 모노클로날 또는 그의 결합 단편, 예컨대 기능적 단편, 예컨대 단일 도메인 항체이고, 예컨대 항체는 모노클로날 항체일 수 있고 결합 단편은 모노클로날 항체 결합 단편일 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 표 1-4의 서열 (서열 183-184 및 188-246) 중 적어도 하나를 포함하는 펩티드에 특이적인 압타머에 관한 것이며, 예컨대 압타머는 서열 VFDEFKPLVEEPQNLIK (서열 185)의 펩티드에 특이적이다. 압타머는 예를 들어 DNA 또는 펩티드 압타머일 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명은

면역억제와 연관된 병태를 갖는 환자를 확인하고;

환자에게 임의의 상기 정의된 펩티드를 투여하고;

환자에서 백혈구 확산의 증가를 검출하는 것

을 포함하는, 면역억제의 억제를 필요로 하는 환자에서 면역억제를 억제하는 방법에 관한 것이다. 펩티드는 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37,36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6 또는 5개 이하의 아미노산의 길이 또는 임의의 이들 숫자 사이의 임의의 길이일 수 있고, 펩티드는 합성일 수 있다. 상기 펩티드를 투여하는 것은 적어도 0.1 중량%의 펩티드, 예를 들어 적어도 0.1 중량%, 0.2 중량%, 0.5 중량%, 1 중량%, 2 중량%, 3 중량%, 4 중량%, 5 중량%, 6 중량%, 7 중량%, 8 중량%, 9 중량%, 10 중량%, 20 중량% 또는 30 중량%의 펩티드 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)로 이루어진 조성물을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 상기 환자는 암, 바이러스 감염 또는 박테리아 감염을 앓고 있을 수 있고, 예컨대 상기 암은 결장직장암, 신암, 유방암, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장, 폐 또는 조혈 세포 암일 수 있다. 방법은 림프구 이동의 증가를 검출하는 것을 추가로 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명은

면역억제를 앓고 있는 인간을 확인하고;

면역 세포를 임의의 상기 정의된 펩티드와 접촉시키고;

상기 펩티드와의 접촉 후에 면역 세포의 증식의 증가를 검출하는 것

을 포함하는, 수용체에 대한 알부민 단편의 결합을 억제하는 방법에 관한 것이다. 면역 세포는 예를 들어 림프구 또는 PBMC일 수 있다. 인간은 암, 바이러스 감염 또는 박테리아 감염을 앓고 있을 수 있고, 예컨대 상기 암은 결장직장암, 신암, 유방암, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장, 폐 또는 조혈 세포 암일 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명은

면역억제를 앓고 있는 인간을 확인하고;

NK-세포를 임의의 상기 정의된 펩티드와 접촉시키고;

대조군 샘플, 예컨대 상기 펩티드의 부재 하의 NK-세포의 세포독성 또는 비관련 펩티드 하의 NK-세포의 세포독성과 비교하여, 상기 펩티드와의 접촉 후의 상기 NK-세포의 세포독성의 증가를 검출하는 것

을 포함하는, NK-세포 세포독성을 증가시키는 방법에 관한 것이다. 인간은 암, 바이러스 감염 또는 박테리아 감염을 앓고 있을 수 있고, 예컨대 상기 암은 결장직장암, 신암, 유방암, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장, 폐 또는 조혈 세포 암일 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명은

면역억제를 앓고 있는 인간을 확인하고;

인간 림프구를 임의의 상기 정의된 펩티드와 접촉시키고;

대조군 샘플, 예컨대 상기 펩티드의 부재 하의 인간 림프구의 이동 또는 비관련 펩티드의 하의 인간 림프구의 이동과 비교하여, 상기 펩티드와의 접촉 후의 상기 인간 림프구의 이동의 증가를 검출하는 것

을 포함하는, 인간 림프구 이동을 증가시키는 방법에 관한 것이다. 인간은 암, 바이러스 감염 또는 박테리아 감염을 앓고 있을 수 있고, 예컨대 상기 암은 결장직장암, 신암, 유방암, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장, 폐 또는 조혈 세포 암일 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명은

인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 존재 하에 인간 림프구를 임의의 상기 정의된 펩티드와 접촉시키고;

대조군 샘플, 예컨대 상기 펩티드의 부재 하의 인간 림프구 상의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합, 또는 비관련 펩티드의 존재 하의 인간 림프구 상의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합과 비교하여, 인간 림프구 상의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합의 억제를 검출하는 것

을 포함하는, 인간 림프구 상의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합을 억제하는 방법에 관한 것이다. 인간 알부민 단편은 서열 185에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하고, 예컨대 인간 알부민 단편은 서열 185의 서열을 포함한다.

일부 실시양태에서, 본 발명은

인간 림프구를 제공하며, 여기서 LFA-1 수용체 및 IL-2 수용체 중 적어도 하나는 인간 알부민 또는 알부민 단편에 결합하고;

인간 알부민 또는 알부민 단편에 분자를 특이적으로 결합시키고;

LFA-1 수용체, IL-2 수용체를 통한 인간 림프구의 자극의 억제의 감소를 검출하는 것

을 포함하는, 인간 림프구 상의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합을 억제하는 방법에 관한 것이다. 인간 알부민 단편은 서열 185에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하고, 예컨대 인간 알부민 단편은 서열 185의 서열을 포함한다.

일부 실시양태에서, 본 발명은

암 세포를 임의의 상기 정의된 펩티드와 접촉시키고;

상기 암 세포에 대한 상기 펩티드의 결합을 검출하는 것

을 포함하는, 암 세포를 펩티드와 결합시키는 방법에 관한 것이다. 상기 암은 결장직장암 세포, 신암 세포, 유방암 세포, 피부암 세포, 난소암 세포, 전립선암 세포, 췌장암 세포, 폐암 세포, 신암 세포, 악성 흑색종 세포 또는 조혈암 세포일 수 있다. 상기 펩티드는 그에 연결된 검출가능한 표지, 예컨대 비오티닐화 표지, 방사성 표지, 형광 표지 또는 콜로이드성 금 표지를 포함할 수 있고/거나 그에 연결된 세포독성제, 예컨대 방사화학물질 또는 독소 및/또는 항체 또는 항체 단편 또는 그의 기능적 단편을 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명은

인간 암 환자를 확인하고;

인간 암 환자의 면역 세포를 임의의 상기 정의된 펩티드와 접촉시키고;

환자의 암 세포의 증식의 억제 또는 환자의 암 세포의 세포 사멸의 유도를 검출하는 것

을 포함하는, 인간 암 세포의 증식을 억제하는 방법에 관한 것이다. 예를 들어 환자의 암 세포의 증식의 억제가 검출될 수 있고/거나 환자의 암 세포의 세포 사멸의 유도가 검출될 수 있다. 암은, 예를 들어 결장직장암 세포, 신암 세포, 유방암 세포, 피부암 세포, 난소암 세포, 전립선암 세포, 췌장암 세포, 폐암 세포, 신암 세포, 악성 흑색종 세포 또는 조혈암 세포일 수 있다. 예를 들어 인간의 면역 세포의 증식의 증가가 검출될 수 있다. 면역 세포는 림프구 또는 PBMC일 수 있다. 방법에 사용되는 펩티드는 합성일 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명은

인간 림프구를 임의의 상기 정의된 펩티드와 접촉시키고;

LFA-1 수용체에 대한 리간드의 감소된 결합을 검출하는 것

을 포함하는, 인간 림프구의 LFA-1 수용체에 결합된 리간드를 제거하는 방법에 관한 것이다. 상기 인간 림프구는 암, 박테리아 감염 또는 바이러스 감염을 가진 환자, 예컨대 유방암, 신세포 암종, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장, 폐 또는 조혈 세포 암을 앓고 있는 환자로부터의 것일 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명은

인간 림프구를 임의의 상기 정의된 펩티드와 접촉시키고;

IL-2 수용체에 대한 리간드의 감소된 결합을 검출하는 것

을 포함하는, 인간 림프구의 IL-2 수용체에 결합된 리간드를 제거하는 방법에 관한 것이다. 상기 인간 림프구는 암, 박테리아 감염 또는 바이러스 감염을 가진 환자, 예컨대 유방암, 신세포 암종, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장, 폐 또는 조혈 세포 암을 앓고 있는 환자로부터의 것일 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명은

면역억제된 인간에게 상기 정의된 바와 같은 펩티드를 제공하고;

CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 또는 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극, 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식을 검출하는 것과 같이, 상기 인간에서 면역억제의 감소를 검출하는 것

을 포함하는, 면역억제된 인간에서 면역억제를 감소시키는 방법에 관한 것이다. 상기 인간은 암, 박테리아 감염 또는 바이러스 감염을 가지고 있을 수 있고, 예컨대 상기 암은 유방암, 신세포 암종, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장, 폐 또는 조혈 세포 암이다. 상기 펩티드는 적어도 0.1 중량%의 펩티드, 예를 들어 적어도 0.1 중량%, 0.2 중량%, 0.5 중량%, 1 중량%, 2 중량%, 3 중량%, 4 중량%, 5 중량%, 6 중량%, 7 중량%, 8 중량%, 9 중량%, 10 중량%, 20 중량% 또는 30 중량%의 펩티드 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)로 이루어진 조성물로서 상기 인간에게 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역억제의 검출은 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식 중 하나 이상을 검출하는 것을 포함한다.

일부 실시양태에서, 본 발명은

인간에게 상기 정의된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 제공하고;

LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합의 억제를 검출하는 것

을 포함하는, 인간 림프구 상의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합을 억제하는 방법에 관한 것이다.

일부 실시양태에서, 본 발명은

암 세포를 갖는 인간에게 상기 정의된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 제공하고;

상기 암 세포의 증식의 억제를 검출하는 것

을 포함하는, 인간 암 세포의 증식을 억제하는 방법에 관한 것이다.

일부 실시양태에서, 본 발명은

인간 림프구를 상기 정의된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 벡터와 접촉시키고;

LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 리간드의 감소된 결합을 검출하는 것

을 포함하는, 인간 림프구의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 결합된 리간드를 제거하는 방법에 관한 것이다.

일부 실시양태에서, 본 발명은

면역억제된 인간에게 상기 정의된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 제공하고;

CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 또는 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극을 검출하는 것과 같이, 상기 인간에서 면역억제의 감소를 검출하는 것

을 포함하는, 면역억제된 인간에서 면역억제를 감소시키는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 면역억제의 감소를 검출하는 것은 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식 중 하나 이상을 검출하는 것을 포함한다.

일부 실시양태에서, 본 발명은

임의의 상기 정의된 펩티드; 및

제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제

를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 펩티드는 서열 1-33, 34, 46-53, 62, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 583-586 또는 589 중 적어도 하나를 포함한다.

일부 실시양태에서, 본 발명은

시험관내에서 환자의 면역 세포를 임의의 상기 정의된 펩티드와 접촉시키고;

상기 면역 세포의 증식의 억제를 검출하고;

상기 펩티드가 상기 면역 세포의 증식을 억제하는 경우에, 환자를 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있는 것으로 분류하는 것

을 포함하는, 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제를 사용한 치료를 필요로 하는 환자를 확인하는 방법에 관한 것이다. 방법은 예를 들어, 면역억제의 감소를 필요로 하는 환자에게 상기 정의된 바와 같은 펩티드를 제공하는 것을 포함하는, 상기 환자에서 면역억제를 감소시키는 것을 추가로 포함할 수 있고/거나, 상기 인간에서 면역억제의 감소를 검출하는 것을 추가로 포함할 수 있고/거나, 면역억제의 감소를 필요로 하는 환자에게 상기 정의된 바와 같은 벡터 또는 폴리뉴클레오티드를 제공하는 것을 포함하는, 상기 환자에서 면역억제를 감소시키는 것을 추가로 포함할 수 있고/거나, 상기 인간에서 면역억제의 감소를 검출하는 것을 추가로 포함할 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 서열 2의 아미노산 잔기 K2에 상동인 아미노산 잔기를 포함하고/거나 서열 2의 아미노산 잔기 K9에 상동인 아미노산 잔기를 포함하고/거나 서열 2의 아미노산 잔기 E15에 상동인 아미노산 잔기를 포함하는 단리된 펩티드에 관한 것이다.

상기 정의된 펩티드는 적어도 하나의 변형, 예를 들어 적어도 하나의 비-자연 발생 아미노산을 포함할 수 있고/거나 적어도 하나의 D 아미노산, N-말단 아세틸 기, C-말단 아미드 기, 글리코실화, 니트로실화, 연결된 약동학적 조절제 또는 연결된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 임의의 상기 정의된 펩티드는 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6 또는 5개 이하의 아미노산의 길이 또는 이들 숫자 중 임의의 2개 사이의 길이, 예컨대 6개 아미노산 내지 20개 아미노산의 길이, 7개 아미노산 내지 20개 아미노산의 길이, 바람직하게는 8-16개 아미노산의 길이, 가장 바람직하게는 9 내지 15개 아미노산의 길이를 가질 수 있다. 임의의 상기 정의된 펩티드는 지지체에 연결될 수 있을 뿐만 아니라 다량체화될 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 임의의 상기 정의된 펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드, 뿐만 아니라 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 뿐만 아니라 임의의 상기 정의된 펩티드에 결합된 알부민 또는 알부민 단편을 포함하는 단백질 복합체에 관한 것이다. 단백질 복합체는 지지체에 결합될 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는 화학식 I XX₁VKX₂X₃X₄ (서열 166)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 단리된 펩티드를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 이 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값의 임의의 2개 사이의 범위를 포함)인 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, X는 임의적인 서열이고, KKLDT (서열 167), RKLDT (서열 168), KKGDT (서열 169), KKEDT (서열 170), KKLDQ (서열 171), KKGDQ (서열 252), KKEDQ (서열 253), RKLDQ (서열 254), RKGDQ (서열 255), RKEDQ (서열 256), RKGTD (서열 257), RKEDT (서열 258), KLDT (서열 172), KGDT (서열 259), KEDT (서열 260), KLDQ (서열 261), KGDQ (서열 262), KEDQ (서열 263), LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T 또는 Q일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₁은 FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT 또는 VL 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₂는 LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT 또는 VH 중 하나일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR 중 하나일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₄는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X가 부재하는 경우에, X₁은 FF이고, X₂는 LS이다. 일부 실시양태에서, 펩티드는 서열 2-33 중 하나를 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 화학식 II X₂₀TFFVKLSX₂₁X₂₂ (서열 173)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 단리된 펩티드를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값의 임의의 2개 사이의 범위를 포함)인 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, X₂₀은 임의적인 서열이고, KKLD (서열 174), RKLD (서열 175), KKGD (서열 176), KKED (서열 177), KLD, LD 또는 D일 수 있거나 부재할 수 있다. X₂₁은 임의적인 서열이고, LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₂는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는 화학식 III X₃₀X₃₁VKLX₃₂LX₃₃TEX₃₄ (서열 178)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 단리된 펩티드를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값의 임의의 2개 사이의 범위를 포함)인 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, X₃₀은 임의적인 서열이고, KKLDTF (서열 179), KLDTF (서열 180), LDTF (서열 181), DTF, TF 또는 F일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 임의적인 서열이고, F, S, M, V, T 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 F이다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S, Q, M, T 또는 H일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S이다. X₃₃은 F, M, Q, H, N, P, S, G, A 또는 R일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₄는 F이다. X₃₄는 임의적인 서열이고, R일 수 있거나 부재할 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는 화학식 VII X₇₀₀K X₇₀₁X₇₀₂X₇₀₃ X₇₀₄X₇₀₅X₇₀₆K X₇₀₇ X₇₀₈ X₇₀₉ X₇₁₀ X₇₁₁E X₇₁₂ (서열 394)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 단리된 펩티드를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값의 임의의 2개 사이의 범위를 포함)인 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, X₇₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₁은 임의적인 서열이고, L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₂는 임의적인 서열이고, D, A, E, I, V, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₃은 임의적인 서열이고, T, C, M, N, P, Q, R, S, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₄는 임의적인 서열이고, F, A, I, M, N, P, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₅는 임의적인 서열이고, F, L, M, Q, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₆은 임의적인 서열이고, V, F, G, L, P 또는 R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₇은 임의적인 서열이고, L, A, F, G, I, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₈은 임의적인 서열이고, S, H, M, N, Q 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₉는 임의적인 서열이고, L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₀은 임의적인 서열이고, F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₁은 임의적인 서열이고, T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₂는 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는, 화학식 VIII X₈₀₀K X₈₀₁K X₈₀₂E X₈₀₃ (서열 395)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 단리된 펩티드를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값의 임의의 2개 사이의 범위를 포함)인 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, X₈₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₁은 임의적인 서열이고, LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₂는 임의적인 서열이고, LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₃은 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는 표 5.1에 기재된 펩티드 중 어느 1종 이상을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 단리된 펩티드를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값의 임의의 2개 사이의 범위를 포함)인 길이를 갖는다.

본 발명의 일부 실시양태는 본원에 기재된 바와 같은 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 펩티드 억제제 (예를 들어 상기 기재된 펩티드 중 어느 1종 이상)을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태는 이러한 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함한다. 일부 실시양태는 또한 본원에 기재된 바와 같은 1종 이상의 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제에 결합된 알부민 또는 알부민 단편을 포함하는 단백질 복합체를 포함한다.

일부 실시양태에서, 상기 기재된 임의의 조성물은 트리즈마(Trizma), 비신(Bicine), 트리신(Tricine), MOPS, MOPSO, MOBS, 트리스(Tris), 헤페스(Hepes), HEPBS, MES, 포스페이트, 카르보네이트, 아세테이트, 시트레이트, 글리콜레이트, 락테이트, 보레이트, ACES, ADA, 타르트레이트, AMP, AMPD, AMPSO, BES, CABS, 카코딜레이트, CHES, DIPSO, EPPS, 에탄올아민, 글리신, HEPPSO, 이미다졸, 이미다졸락트산, PIPES, SSC, SSPE, POPSO, TAPS, TABS, TAPSO 및 TES로 이루어진 군으로부터 선택된 완충제를 포함한다.

일부 실시양태는 본원에 기재된 바와 같은 단백질 복합체를 제조하는 방법을 포함한다. 방법은 본원에 기재된 바와 같은 펩티드를 인간으로부터의 생물학적 샘플과 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 알부민 또는 알부민 단편을 포함한다. 방법은 단백질 복합체의 존재를 검출하는 것을 포함할 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는 생물학적 샘플에서 알부민 또는 알부민 단편의 존재를 검출하는 방법을 포함한다. 방법은 펩티드 억제제 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 1종 이상의 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제)를, 알부민 또는 알부민 단편을 포함하는 생물학적 샘플과 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 방법은 본원에 기재된 바와 같은 1종 이상의 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제에 대한 알부민 또는 알부민 단편의 결합을 검출하는 것을 포함할 수 있다. 본 발명의 일부 실시양태는 본원에 기재된 바와 같은 1종 이상의 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물에 특이적인 항체 또는 그의 결합 단편을 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 서열 VFDEFKPLVEEPQNLIK (서열 185)를 갖는 펩티드 또는 그의 단편에 특이적이며 그에 결합하는 압타머를 포함한다. 본 발명의 일부 실시양태는 본원에 기재된 임의의 면역조절 펩티드 (예를 들어, 본원에 제공된 표에 기재된 펩티드 중 어느 1종)에 특이적이며 그에 결합하는 압타머를 포함한다. 일부 실시양태에서, 압타머는 올리고뉴클레오티드 압타머이다. 일부 실시양태에서, 압타머는 펩티드 압타머이다.

본 발명의 일부 실시양태는 면역억제, 예컨대 암으로부터 유발되거나 또는 예를 들어 항생제 내성으로 인한 병원성 바이러스 또는 박테리아의 지속성 또는 만성 감염에 의한 감염으로부터 유발되는 면역억제를 앓고 있는 환자를 다루는 방법을 포함한다. 이러한 접근법은 면역억제를 치료하는 방법 또는 면역억제의 측면 또는 면역억제에 대한 마커, 예컨대 감소된 면역 세포 증식, 감소된 NK-세포 세포독성 또는 감소된 백혈구 이동을 억제하는 방법 또는 바이러스성 또는 박테리아성 질환을 치료하는 또는 방법 (예를 들어, 만성 바이러스 감염, 예컨대 간염 또는 박테리아 감염, 예컨대 스타필로코쿠스(Staphylococcus), 스트렙토코쿠스(Streptococcus), 슈도모나스(Pseudomonas) 또는 다른 병원성 박테리아에 의해 야기되는 것을 치료 또는 억제하는 방법)을 포함한다. 방법은 면역억제와 연관된 병태, 예컨대 암 또는 박테리아 또는 바이러스 감염 또는 지속성 또는 만성 박테리아 또는 바이러스 감염을 갖는 환자를 확인하는 것을 포함할 수 있다. 방법은 확인된 환자에게 본원에 기재된 바와 같은 펩티드 억제제 중 1종 이상 (예를 들어, 1종 이상의 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제)을 투여하고, 임의로 CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극, 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식을 검출하는 것을 포함할 수 있다. 방법은 또한 환자에서 백혈구 확산의 증가를 검출하는 것을 포함할 수 있다. 이들 방법 중 일부는, 예를 들어 표 5.1 또는 5.4에 기재된 펩티드 중 어느 1종 이상을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 단리된 펩티드, 또는 서열 2, 62, 584 또는 589를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드를 포함하는 조성물을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 표 5.1 또는 5.4로부터의 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값의 임의의 2개 사이의 범위를 포함)인 길이를 갖는다.

본 발명의 일부 실시양태는 수용체에 대한 알부민 단편의 결합을 억제하는 방법을 포함한다. 방법은 면역억제를 갖는 인간을 확인하는 것을 포함할 수 있다. 방법은 면역 세포를 본원에 기재된 바와 같은 펩티드 (예를 들어, 1종 이상의 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제)와 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 인간의 혈청은 면역 세포가 억제제와 접촉할 때 존재할 수 있다. 방법은 본원에 기재된 바와 같이, 1종 이상의 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제와의 접촉 후에, 면역 세포의 증식의 증가, 또는 CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극을 검출하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식 중 하나 이상을 검출하는 것을 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 자가 인간 혈청의 존재 하에 NK-세포 또는 림프구 세포독성을 증가시키는 방법을 포함한다. 방법은 면역억제를 갖는 인간을 확인하는 것을 포함할 수 있다. 방법은 인간의 혈청의 존재 하에 NK-세포를 본원에 기재된 바와 같은 펩티드 (예를 들어, 1종 이상의 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제)와 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 방법은 대조군 샘플과 비교하여, 억제제와의 접촉 후의 상기 NK-세포의 세포독성의 증가를 검출하는 것을 포함할 수 있다. 대조군 샘플은 상기 억제제의 부재 하의 자가 인간 혈청의 존재 하의 NK-세포의 세포독성, 또는 자가 인간 혈청 및 비관련 펩티드의 존재 하의 NK-세포의 세포독성을 포함할 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는 인간 림프구 기능, 예컨대 자가 인간 혈청의 존재 하의 이동, 또는 CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극, 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식을 증가시키는 방법을 포함한다. 방법은 면역억제를 앓고 있는 인간을 확인하는 것을 포함할 수 있다. 방법은 인간의 혈청의 존재 하에 인간 림프구를 본원에 기재된 바와 같은 펩티드 (예를 들어, 1종 이상의 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제)와 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 방법은 대조군 샘플과 비교하여, 억제제와의 접촉 후의 상기 인간 림프구의 이동, 또는 CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극, 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식의 증가를 검출하는 것을 포함할 수 있다. 대조군 샘플은 억제제의 부재 하의 자가 인간 혈청의 존재 하의 인간 림프구의 이동, 또는 자가 인간 혈청 및 비관련 펩티드의 존재 하의 인간 림프구의 이동을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식을 검출하는 것을 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 인간 림프구 상의 세포 수용체, 예컨대 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합을 억제하는 방법을 포함한다. 방법은 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 존재 하에 인간 림프구를 본원에 기재된 바와 같은 펩티드 (예를 들어, 1종 이상의 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제)와 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 방법은 대조군 샘플과 비교하여, 인간 림프구 상의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합의 억제를 검출하는 것을 포함할 수 있다. 대조군 샘플은 상기 억제제의 부재 하의 인간 림프구 상의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합, 또는 비관련 펩티드의 존재 하의 인간 림프구 상의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합을 포함할 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는 인간 림프구 상의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합을 억제하는 방법을 포함한다. 방법은 인간 림프구를 제공하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 중 적어도 하나는 인간 알부민 또는 알부민 단편과 결합한다. 방법은 인간 알부민 또는 알부민 단편에 억제제 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 1종 이상의 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제)를 특이적을 결합시키는 것을 포함할 수 있다. 방법은 LFA-1 수용체, IL-2 수용체를 통한 인간 림프구의 자극의 억제의 감소, 또는 CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극을 검출하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식을 검출하는 것을 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 암 세포를 상기 암 세포와 특이적으로 상호작용하는 분자 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 1종 이상의 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제)와 결합시키는 방법을 포함한다. 방법은 암 세포를 본원에 기재된 바와 같은 억제제 중 1종 이상과 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 생체외 또는 시험관내 방법을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 생체내 방법을 포함한다. 일부 실시양태에서, 억제제는 종양주위로, 또는 환자의 종양 근처에, 예를 들어 종양의 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 또는 0.5 cm 이내에 투여된다. 일부 실시양태에서, 억제제는 전신으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 억제제는 제2 치료제, 예를 들어 면역 세포의 LFA-1 수용체가 탈차단된 후에 면역 세포를 자극하기 위해 선택된 치료제, 또는 면역 세포의 IL-2 수용체가 탈차단된 후에 면역 세포를 자극하기 위해 선택된 치료제와 함께 투여된다. 방법은 상기 암 세포에 대한 상기 억제제의 결합을 검출하는 것을 포함할 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는 인간 암 세포의 증식을 억제하는 방법을 포함한다. 방법은 인간 암 환자를 확인하는 것을 포함할 수 있다. 방법은 인간 암 환자의 면역 세포를 억제제 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 1종 이상의 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제)와 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 억제제는 종양주위로, 또는 환자의 종양 근처에, 예를 들어 종양의 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 또는 0.5 cm 이내에 투여된다. 일부 실시양태에서, 억제제는 전신으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 억제제는 제2 치료제, 예를 들어 면역 세포의 LFA-1 수용체가 탈차단된 후에 면역 세포를 자극하기 위해 선택된 치료제와 함께 투여된다. 방법은 환자의 암 세포의 증식의 억제 또는 환자의 암 세포의 아폽토시스 또는 세포 사멸의 유도를 검출하는 것을 포함할 수 있다. 임의로, 방법은 적어도 1종의 추가의 치료제, 예를 들어 LFA-1 수용체를 통해 직접적으로 또는 간접적으로 면역 세포의 활성화 (예를 들어 CD69 및/또는 CD71의 증진된 발현, IL-12 또는 IFNγ의 분비, 또는 퍼포린 또는 그랜자임 B의 분비, 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식)를 자극하는 치료제를 공-투여하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식 중 하나 이상을 자극한다.

본 발명의 일부 실시양태는 인간 림프구의 LFA-1 수용체에 결합된 리간드를 제거하는 방법을 포함한다. 방법은 인간 림프구를 억제제 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 1종 이상의 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제)와 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 방법은 LFA-1 수용체에 대한 리간드의 감소된 결합을 검출하는 것을 포함할 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는 인간 림프구의 IL-2 수용체에 결합된 리간드를 제거하는 방법을 포함한다. 방법은 인간 림프구를 억제제 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 1종 이상의 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제)와 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 방법은 IL-2 수용체에 대한 리간드의 감소된 결합을 검출하는 것, 또는 CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 또는 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극을 검출하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식 중 하나 이상을 검출하는 것을 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 면역억제된 인간에서 면역억제를 감소시키는 방법을 포함한다. 방법은 인간에게 본원에 기재된 바와 같은 억제제 (예를 들어, 1종 이상의 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제)를 제공하는 것을 포함할 수 있다. 방법은 인간에서의 면역억제의 감소를 검출하는 것, 또는 CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 또는 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극을 검출하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식 중 하나 이상을 검출하는 것을 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 인간 림프구 상의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합을 억제하는 방법을 포함한다. 방법은 인간에게 본원에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 및/또는 벡터 중 1종 이상 (예를 들어, 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제 중 1종 이상을 코딩하는 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터)을 제공하는 것을 포함할 수 있다. 방법은 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합의 억제를 검출하는 것, 또는 CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 또는 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극을 검출하는 것을 포함할 수 있다. 임의로, 방법은 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식 중 하나 이상을 검출하는 것을 포함할 수 있다. 임의로, 방법은 적어도 1종의 추가의 치료제, 예를 들어 LFA-1 수용체를 통해 직접적으로 또는 간접적으로 면역 세포의 활성화 (예를 들어 CD69 및/또는 CD71의 증진된 발현, IL-12 또는 IFNγ의 분비, 또는 퍼포린 또는 그랜자임 B의 분비, 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식)를 자극하는 치료제를 공-투여하는 것을 포함할 수 있다. 추가의 치료제는 억제제와 공동으로 또는 억제제 후에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제2 치료제는 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식 중 하나 이상을 자극한다.

본 발명의 일부 실시양태는 인간 암 세포의 증식을 억제하는 방법을 포함한다. 방법은 인간에게 본원에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 벡터 중 1종 이상 (예를 들어, 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제 중 1종 이상을 코딩하는 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터)을 제공하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 억제제는 종양주위로, 또는 환자의 종양 근처에, 예를 들어 종양의 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 또는 0.5 cm 이내에 투여된다. 일부 실시양태에서, 억제제는 전신으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 억제제는 제2 치료제, 예를 들어 면역 세포의 LFA-1 수용체가 탈차단된 후에 면역 세포를 자극하기 위해 선택된 치료제와 함께 투여된다. 방법은 상기 암 세포의 증식의 억제를 검출하는 것, 또는 CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극, 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식을 검출하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식 중 하나 이상을 검출하는 것을 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 면역 세포에 의한 암의 침윤을 유도하는 것을 포함한다. 방법은 본원에 기재된 바와 같은 펩티드 억제제를 종양주위로, 또는 환자의 종양 근처에, 예를 들어 종양의 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 또는 0.5 cm 이내에 투여하는 것을 포함할 수 있다. 방법은 면역 세포에 의한 암의 침윤을 검출하는 것을 포함할 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는 인간 림프구의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 결합된 리간드를 제거하는 방법을 포함한다. 방법은 인간에게 본원에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 벡터 중 1종 이상 (예를 들어, 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제 중 1종 이상을 코딩하는 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터)을 제공하는 것을 포함할 수 있다. 방법은 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 리간드의 감소된 결합을 검출하는 것을 포함할 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는 면역억제된 인간에서 면역억제를 감소시키는 방법을 포함한다. 방법은 인간에게 본원에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 벡터 중 1종 이상 (예를 들어, 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제 중 1종 이상을 코딩하는 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터)을 제공하는 것을 포함할 수 있다. 방법은 인간에서의 면역억제의 감소를 검출하는 것, 예컨대 CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극, 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식을 검출하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식 중 하나 이상을 검출하는 것을 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 제약 조성물을 포함한다. 제약 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 벡터 중 1종 이상 (예를 들어, 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제 중 1종 이상을 코딩하는 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터) 및/또는 본원에 기재된 바와 같은 억제제 중 1종 이상 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 1종 이상의 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 펩티드 억제제)을 포함할 수 있다. 제약 조성물은 제약상 허용되는 담체 또는 희석제를 포함할 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는 면역조절 펩티드의 억제를 필요로 하는 환자를 확인하는 방법을 포함한다. 환자는 그 또는 그녀의 면역 세포에 결합된 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물을 가질 수 있고/거나, 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있을 수 있다. 진단 방법은 시험관내에서 환자의 면역 세포를 면역조절 펩티드 또는 구조물의 적어도 1종의 억제제와 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 진단 방법은, 면역조절 펩티드 또는 구조물의 블록이 면역 파라미터의 회복을 증가시키거나 면역 반응, 예를 들어 대상체의 PBMC에 의한 증식 또는 반응을 개선하는 경우에, 환자가 면역조절 펩티드 또는 구조물을 갖는 것 및/또는 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있는 것으로 분류하는 것을 포함할 수 있다. 방법은 면역조절 펩티드의 억제제 또는 억제제들이 환자에서 면역조절 활성을 갖는지를 결정하는 것을 포함할 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는 아미노산 서열 FFVKLS (서열 62)를 포함하는 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 단리된 펩티드는 30개 이하의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단리된 펩티드는 29개 이하의 아미노산 잔기, 예를 들어 28개 이하의 아미노산 잔기, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7 또는 6개의 아미노산 잔기 또는 이들 숫자 중 임의의 2개에 의해 한정된 범위를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단리된 펩티드는 16개 이하의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단리된 펩티드는 8개 이하의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단리된 펩티드는 아미노산 서열 FFVKLS (서열 62)로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진다.

본 발명의 일부 실시양태는 아미노산 서열 KKLDTFFVKLSLFTER (서열 2)을 포함하는 단리된 펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단리된 펩티드는 100개 이하의 아미노산 잔기, 예를 들어 99, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30 또는 20개 이하의 아미노산 잔기 또는 이들 숫자 중 임의의 2개에 의해 한정된 범위를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단리된 펩티드는 30개 이하의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단리된 펩티드는 서열 2의 아미노산 서열로 이루어진다.

본 발명의 일부 실시양태는 아미노산 서열 RKLDTFFVKLSLFTERRR (서열 586)을 포함하는 단리된 펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단리된 펩티드는 100개 이하의 아미노산 잔기, 예를 들어 99, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30 또는 20개 이하의 아미노산 잔기 또는 이들 숫자 중 임의의 2개에 의해 한정된 범위를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단리된 펩티드는 30개 이하의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단리된 펩티드는 서열 586의 아미노산 서열로 이루어진다.

본 발명의 일부 실시양태는 화학식 X₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇X₈X₉X₁₀X₁₁X₁₂X₁₃X₁₄X₁₅X₁₆X₁₇을 포함하는 단리된 펩티드를 포함하며; 여기서 X₁은 임의의 아미노산이거나 부재하고; X₂는 양으로 하전된 아미노산, F 또는 N 이고; X₃은 임의의 아미노산이고; X₄는 임의의 아미노산이고; X₅는 극성 비하전된 아미노산, R, Y 또는 W 이고; X₆은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₇은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₈은 M 또는 F가 아닌 소수성 비-방향족 탄소 쇄 아미노산이고; X₉는 양으로 하전된 아미노산, T, Q 또는 Y 이고; X₁₀은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₁₁은 극성 비하전된 아미노산 또는 H 이고; X₁₂는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₁₃은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₁₄는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₁₅는 음으로 하전된 아미노산, Y 또는 Q 이고; X₁₆은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₁₇은 하나 이상의 양으로 하전된 아미노산이거나 부재한다. 임의로, X₁은 양으로 하전된 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, X₁은 R 또는 K이다. 일부 실시양태에서, X₁₇은 RR이다. 일부 실시양태에서, X₁은 R이고, X₁₇은 RR이다. 일부 실시양태에서, X₁은 R을 포함하고, X₁₇은 RR을 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드는 수용액 중에 가용성이다. 일부 실시양태에서, 펩티드는 수용액 중에 가용성이다. 일부 실시양태에서, 적어도 다음 중 하나이다: X₁은 K임; X₂는 K임; X₃은 L임; X₄는 D임; X₅는 T임; X₆은 F임; X₇은 F임; X₈은 V임; X₉는 K임; X₁₀은 L임; X₁₁은 S임; X₁₂는 L임; X₁₃은 F임; X₁₄는 T임; X₁₅는 E임; 또는 X₁₆은 R임. 일부 실시양태에서, 단리된 펩티드는 아미노산 서열 KKLDTFFVKLSLFTER (서열 2)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 단리된 펩티드는 아미노산 서열 RKLDTFFVKLSLFTERRR (서열 586)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 단리된 펩티드는 30개 이하의 아미노산 잔기의 길이, 예를 들어 약 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7 또는 6개 이하의 아미노산 잔기 또는 이들 숫자 중 임의의 2개에 의해 한정된 범위를 갖는다. 일부 실시양태에서, 단리된 펩티드는 화학식 X₀X₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇X₈X₉X₁₀X₁₁X₁₂X₁₃X₁₄X₁₅X₁₆X₁₇로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 단리된 펩티드는 아미노산 서열 KKLDTFFVKLSLFTER (서열 2)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 단리된 펩티드는 아미노산 서열 RKLDTFFVKLSLFTERRR (서열 586)을 포함한다.

일부 실시양태에서, 임의의 상기 단리된 펩티드는 합성 펩티드를 포함한다.

일부 실시양태에서, 임의의 상기 단리된 펩티드는 적어도 하나의 변형, 예를 들어 D 아미노산, N-말단 아세틸 기, C-말단 아미드 기, 글리코실화, 니트로실화, 카르보닐화, 산화, 연결된 약동학적 조절제 및 연결된 폴리에틸렌 글리콜 또는 이들의 임의의 조합 중 적어도 하나를 포함한다.

일부 실시양태에서, 임의의 상기 단리된 펩티드는 면역 세포를 활성화시킨다. 예로서, 면역 세포의 활성화는 면역 세포의 증식, CD69 또는 CD71의 증가된 발현, 신호 물질, 예컨대 IFNγ 또는 IL-12의 분비, 세포용해 분자, 예컨대 퍼포린 또는 그랜자임 B의 분비, 증진된 세포독성, 시토카인 생산 및/또는 세포 이동을 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 임의의 상기 단리된 펩티드는, 면역 세포를 포함하는 용액이 서열 VFDEFKPLVEEPQNLIK (서열 185)를 갖는 제2 펩티드를 포함하는 경우에, 또는 면역 세포의 LFA-1 수용체가 제2 펩티드에 결합하는 경우에, 면역 세포를 활성화시킨다.

일부 실시양태에서, 임의의 상기 단리된 펩티드가 아미노산 서열 VFDEFKPLVEEPQNLIK (서열 185)로 이루어진 제2 펩티드와 접촉하는 경우에, 단리된 펩티드는 제2 펩티드에 특이적으로 결합한다.

일부 실시양태에서, 임의의 상기 단리된 펩티드가 LFA-1 수용체 및 아미노산 서열 VFDEFKPLVEEPQNLIK (서열 185)로 이루어진 제2 펩티드를 포함하는 면역 세포와 접촉하는 경우에, 단리된 펩티드는 LFA-1 수용체에 대한 제2 펩티드의 결합을 억제한다.

본 발명의 일부 실시양태는 상기 기재된 임의의 단리된 펩티드 및 제약상 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약상 허용되는 담체 또는 희석제는 분해성 입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 적어도 약 1ng의 펩티드, 예를 들어 적어도 약 1ng, 2ng, 3ng, 4ng, 5ng, 10ng, 20ng, 50ng, 60ng, 70ng, 80ng, 90ng, 100ng, 200ng, 300ng, 400ng, 500ng, 600ng, 700ng, 800ng, 900ng, 약 1μg, 2μg, 3μg, 4μg, 5μg, 6μg, 7μg, 8μg, 9μg, 10μg, 20μg, 30μg, 40μg, 50μg, 60μg, 70μg, 80μg, 90μg, 100μg 또는 200μg, 또는 이들 숫자 중 임의의 2개에 의해 한정된 범위인 양의 펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 트리즈마, 비신, 트리신, MOPS, MOPSO, MOBS, 트리스, 헤페스, HEPBS, MES, 포스페이트, 카르보네이트, 아세테이트, 시트레이트, 글리콜레이트, 락테이트, 보레이트, ACES, ADA, 타르트레이트, AMP, AMPD, AMPSO, BES, CABS, 카코딜레이트, CHES, DIPSO, EPPS, 에탄올아민, 글리신, HEPPSO, 이미다졸, 이미다졸락트산, PIPES, SSC, SSPE, POPSO, TAPS, TABS, TAPSO 및 TES로 이루어진 군으로부터 선택된 완충제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암 세포와 접촉하는 경우에, 조성물은 암 세포의 세포독성을 유도한다. 일부 실시양태에서, 암 세포는 전립선암 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 겔을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 생리학적 조건 하에 적어도 72시간 동안 겔 포맷으로 남아 있을 것이다.

본 발명의 일부 실시양태는 암을 가지며 그의 치료를 필요로 하는 개체에게 유효량의 상기 기재된 임의의 조성물을 투여하여, (a) 면역 세포의 활성화 (예를 들어 CD69 및/또는 CD71의 증진된 발현, IL-12 또는 IFNγ의 분비, 또는 퍼포린 또는 그랜자임 B의 분비, 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식); (b) LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체에 대한 손상된 알부민, 알부민 응집체, 알부민 단편 또는 제2 펩티드의 결합의 억제; 또는 (c) 종양 세포에 대한 세포독성 중 적어도 하나를 유도하는 것을 포함하며, 여기서 제2 펩티드 또는 알부민 단편은 존재하는 경우에 서열 183-246 중 적어도 하나를 포함하는 것인 방법을 포함한다. 일부 실시양태에서, (a) 및 (b)가 유도된다. 일부 실시양태에서, (a), (b) 및 (c)가 유도된다. 일부 실시양태에서, 수용체는 LFA-1 수용체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 수용체는 IL-2 수용체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 알부민 단편 또는 제2 펩티드는 100개 이하의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 알부민 단편 또는 제2 펩티드는 서열 185를 포함한다. 일부 실시양태에서, 알부민 단편 또는 제2 펩티드는 서열 185로 이루어진다. 일부 실시양태에서, LFA-1 수용체는 알부민, 알부민 단편 또는 제2 펩티드의 결합의 억제 후에 자극에 이용가능하다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 알부민, 알부민 단편 또는 제2 펩티드의 결합의 억제 후에 자극된다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 제2 치료제에 의해 자극된다. 일부 실시양태에서, 제2 치료제는 조성물과 공동으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 제2 치료제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 치료제는 조성물을 투여하기 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 치료제는 조성물을 투여한 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물의 펩티드는 개체에게 적어도 약 0.1 mg/kg, 예를 들어 적어도 약 0.2 mg/kg, 0.3 mg/kg, 0.4 mg/kg, 0.5 mg/kg, 0.9 mg/kg, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg 또는 10 mg/kg 또는 이들 값 중 임의의 2개에 의해 한정된 범위의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물의 펩티드는 적어도 제1 투여, 및 제1 투여로부터 적어도 5일 후의 제2 투여로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펩티드는 암의 종양의 약 10cm 이내의 조직에 투여된다. 일부 실시양태에서, 펩티드는 암의 종양에 종양주위로 투여된다. 일부 실시양태에서, 암은 결장직장암, 신암, 유방암, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 악성 흑색종, 소세포 폐암, 비소세포 폐암 (선암종), 편평 세포 암종, 방광암, 골육종, 기관지암 또는 조혈 세포 암 중 적어도 하나를 포함한다. 일부 실시양태에서, 개체는 손상된 알부민, 알부민 응집체, 알부민 단편 또는 제2 펩티드를 포함하는 혈청을 포함하며, 여기서 알부민 단편 또는 제2 펩티드는 서열 183-246 중 적어도 하나를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 펩티드 또는 알부민 단편은 아미노산 서열 VFDEFKPLVEEPQNLIK (서열 185)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 펩티드 또는 알부민 단편은 100개 이하의 아미노산 잔기를 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 암 환자에서의 면역 세포를 아미노산 서열 FFVKLS (서열 62)를 포함하는 단리된 펩티드와 접촉시키는 것을 포함하며, 여기서 펩티드는 약 6개 내지 30개의 아미노산으로 이루어진 것인, 암 환자에서 면역 세포를 활성화 (예를 들어 CD69 및/또는 CD71의 증진된 발현, IL-12 또는 IFNγ의 분비, 또는 퍼포린 또는 그랜자임 B의 분비, 증진된 세포독성, 시토카인 생산 및/또는 세포 이동)시키는 방법을 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역 세포를 단리된 펩티드와 접촉시키는 것은 LFA-1 수용체에 대한 손상된 알부민, 알부민 응집체, 알부민 단편 또는 제2 펩티드의 결합을 억제하며, 여기서 알부민 단편 또는 제2 펩티드는 서열 183-246 중 적어도 하나를 포함한다. 일부 실시양태에서, 알부민 단편 또는 제2 펩티드는 100개 이하의 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 알부민 단편 또는 제2 펩티드는 서열 185를 포함한다. 일부 실시양태에서, 알부민 단편 또는 제2 펩티드는 서열 185로 이루어진다. 일부 실시양태에서, LFA-1 수용체는 알부민, 알부민 단편 또는 제2 펩티드의 결합의 억제 후에 자극에 이용가능하다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 알부민, 알부민 단편 또는 제2 펩티드의 결합의 억제 후에 자극된다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 제2 치료제에 의해 자극된다. 일부 실시양태에서, 제2 치료제는 조성물과 공동으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 제2 치료제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 치료제는 조성물의 투여 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 치료제는 조성물의 투여 후에 투여된다.

본 발명의 일부 실시양태는 암 세포를 펩티드와 결합시키는 방법을 포함한다. 방법은 암 세포를 상기 기재된 임의의 펩티드와 접촉시키고, 상기 암 세포에 대한 상기 펩티드의 결합을 검출하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 펩티드는 검출가능한 모이어티를 포함한다. 일부 실시양태에서, 검출가능한 모이어티는 비오티닐화 표지, 방사성 표지, 형광 표지, 효소 또는 콜로이드성 금 표지를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암 세포는 결장직장암 세포, 신암 세포, 유방암 세포, 피부암 세포, 난소암 세포, 전립선암 세포, 췌장암 세포, 폐암 세포, 악성 흑색종 세포, 소세포 폐암 세포, 비소세포 폐암 (선암종) 세포, 편평 세포 암종 세포, 방광암 세포, 골육종 세포, 기관지암 세포 또는 조혈 세포 암 세포이다. 일부 실시양태에서, 상기 펩티드는 항체 또는 항체 단편을 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 면역억제의 개선을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 제29항 내지 제36항 중 어느 한 항의 조성물을 투여하여, (a) 면역 세포의 활성화 (예를 들어 CD69 및/또는 CD71의 증진된 발현, IL-12 또는 IFNγ의 분비, 또는 퍼포린 또는 그랜자임 B의 분비, 증진된 세포독성, 시토카인 생산 및/또는 세포 이동); 또는 (b) LFA-1 수용체에 대한 손상된 알부민, 알부민 응집체, 알부민 단편 또는 제2 펩티드의 결합의 억제 중 적어도 하나를 유도하는 것을 포함하며, 여기서 제2 펩티드 또는 알부민 단편은 존재하는 경우에 서열 183-246 중 적어도 하나를 포함하는 것인, 상기 대상체에서 면역억제를 개선하는 방법을 포함한다. 일부 실시양태에서, 알부민 단편 또는 제2 펩티드는 100개 이하의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 알부민 단편 또는 제2 펩티드는 서열 185를 포함한다. 일부 실시양태에서, 알부민 단편 또는 제2 펩티드는 서열 185로 이루어진다. 일부 실시양태에서, LFA-1 수용체는 알부민, 알부민 단편 또는 제2 펩티드의 결합의 억제 후에 자극에 이용가능하다.

일부 실시양태는 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 단리된 펩티드; 및 검출가능한 표지를 포함하는 키트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 표지는 비오티닐화 표지, 방사성 표지, 형광 표지, 효소 또는 콜로이드성 금 표지를 포함한다.

일부 실시양태는 상기 기재된 임의의 단리된 펩티드를 코딩하는 단리된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태는 이 핵산을 포함하는 단리된 벡터를 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 암의 치료를 위한 의약의 제조를 위한, 상기 기재된 임의의 단리된 펩티드의 용도를 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 암 환자에서의 면역 세포를 자극하기 위한 의약의 제조를 위한, 상기 기재된 임의의 단리된 펩티드의 용도를 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 암의 치료를 위한 의약의 제조를 위한, 상기 기재된 임의의 조성물의 용도를 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 암 환자에서의 면역 세포를 자극하기 위한 의약의 제조를 위한, 상기 기재된 임의의 조성물의 용도를 포함한다.

일부 실시양태에서, 상기 기재된 임의의 용도에 대해, 암은 결장직장암, 신암, 유방암, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 악성 흑색종, 소세포 폐암, 비소세포 폐암 (선암종), 편평 세포 암종, 방광암, 골육종, 기관지암 또는 조혈 세포 암 중 적어도 하나를 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 면역억제의 치료를 위한 의약의 제조를 위한, 상기 기재된 임의의 단리된 펩티드의 용도를 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태는 면역억제의 치료를 위한 의약의 제조를 위한, 상기 기재된 임의의 조성물의 용도를 포함한다.

수많은 대안이 또한 본원에 제공된다:

대안 1은 화학식 VII을 포함하는 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 화학식 VII은 X₇₀₀K X₇₀₁X₇₀₂X₇₀₃X₇₀₄X₇₀₅X₇₀₆KX₇₀₇X₇₀₈X₇₀₉X₇₁₀X₇₁₁EX₇₁₂ (서열 394)이며, 여기서 X₇₀₀은 K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T,V 또는 K이거나 부재하고; 여기서 X₇₀₁은 L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T 또는 V이거나 부재하고; 여기서 X₇₀₂는 D, A, E, I, V, W 또는 Y이거나 부재하고; 여기서 X₇₀₃은 T, C, M, N, P, Q, R, S, W 또는 Y이거나 부재하고; 여기서 X₇₀₄는 F, A, I, M, N, P, T 또는 V이거나 부재하고; 여기서 X₇₀₅는 F, L, M, Q, S, T 또는 V이거나 부재하고; 여기서 X₇₀₆은 V, F, G, L, P 또는 R이거나 부재하고; 여기서 X₇₀₇은 L, A, F, G, I, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 Y이거나 부재하고; 여기서 X₇₀₈은 S, H, M, N, Q 또는 T이거나 부재하고; 여기서 X₇₀₉는 L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V 또는 W이거나 부재하고; 여기서 X₇₁₀은 F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 W이거나 부재하고; 여기서 X₇₁₁은 T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V 또는 W이거나 부재하고; 여기서 X₇₁₂는 R, F, K, N, R, T 또는 Y이거나 부재한다.

대안 2는 대안 1의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 화학식 VII은 서열 1-101, 167-172, 174-177, 179-393, 396-581 또는 582 중 하나이다.

대안 3은 화학식 VIII을 포함하는 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 화학식 VIII은 X₈₀₀K X₈₀₁K X₈₀₂E X₈₀₃ (서열 395)이며, 여기서 X₈₀₀은 K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K이거나 부재하고; 여기서 X₈₀₁은 LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV 또는 L이거나 부재하고; 여기서 X₈₀₂는 LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT 또는 T이거나 부재하고; 여기서 X₈₀₃은 R, F, K, N, R, T 또는 Y이거나 부재한다

대안 4는 대안 3의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 화학식 VIII은 서열 1-34, 64-68, 70-72, 74-77, 80, 83, 86, 89, 92-96, 99-100, 264, 268-269, 270-386, 388-393, 396-401, 403, 404, 406, 408-411, 413-416, 419-420, 422-438, 442-444, 446-449, 451-453, 455-458, 460, 462-466, 470, 472-477, 479-480, 482-484, 486, 487, 489, 491-493, 495-498, 500-508, 512-517, 519-522, 528-530, 532, 533, 535-538, 540, 542-551, 553, 557-559, 567, 570, 572-581 또는 582 중 하나이다.

대안 5는 화학식 I을 포함하는 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 화학식 I은 XX₁VKX₂X₃X₄ (서열 166)이며, 여기서 X는 KKLDT (서열 167), RKLDT (서열 168), KKGDT (서열 169), KKEDT (서열 170), KKLDQ (서열 171), KKGDQ (서열 252), KKEDQ (서열 253), RKLDQ (서열 254), RKGDQ (서열 255), RKEDQ (서열 256), RKGTD (서열 257), RKEDT (서열 258), KLDT (서열 172), KGDT (서열 259), KEDT (서열 260), KLDQ (서열 261), KGDQ (서열 262), KEDQ (서열 263), LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T 또는 Q이거나 부재하고, 여기서 X₁은 FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT 또는 VL이거나 부재하고, 여기서 X₂는 LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT 또는 VH이거나 부재하고, 여기서 X₃은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR이고; 여기서 X₄는 ER 또는 E이거나 부재한다.

대안 6은 대안 5의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 화학식 I은 서열 2-40, 46-52, 58-65, 67-71, 74-77, 80-83, 86-88, 92-96, 99-101, 166, 173, 178, 182, 268-325, 332-392-393, 396-415, 417-444, 446-468, 470-487, 489-494, 497-508, 510, 512, 514-517, 520-522, 524-525, 528-533, 535-536, 538-539, 542-544, 546, 548, 551, 553, 556-559, 561, 563-568, 571-573, 575-581 또는 582 중 하나이다.

대안 7은 대안 5의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 화학식 I은 서열 2 내지 33 중 하나이다.

대안 8 화학식 II를 포함하는 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 화학식 II는 XTFFVKLSX₁X₂ (서열 173)이며, 여기서 X는 KKLD (서열 174), RKLD (서열 175), KKGD (서열 176), KKED (서열 177), KLD, LD 또는 D이거나 부재하고, 여기서 X₁은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR이거나 부재하고, 여기서 X₂는 ER 또는 E이거나 부재한다.

대안 9는 대안 8의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 화학식 II는 서열 2-5, 19-38, 46-49, 58-61, 64, 68-70, 75, 81, 87, 93, 94, 100, 101, 173, 268-303, 350-393, 396, 398, 399, 400, 402, 403, 405, 406-408, 412-414, 417, 418, 421-423, 426-428, 430, 431, 435, 436, 438, 439, 440-442, 448-455, 458, 459, 461, 465, 467, 468, 471, 475, 476, 478-481, 483, 485, 487, 489-491, 493, 494, 497-499, 503, 507, 510, 512, 514-517, 520, 521, 524, 525, 528, 529, 531, 533, 538, 539, 542-, 544, 546, 551, 556-559, 561, 563-568, 571-573, 575-577, 579, 580 또는 581 중 하나이다.

대안 10은 대안 8의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 X는 KKLD (서열 174)이다.

대안 11은 대안 8의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 X₂는 ER이다.

대안 12는 대안 8의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 화학식은 TFFVKLSLFTER (서열 49) 또는 TFFVKLSLFTE (서열 250)이다.

대안 13은 대안 8의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 화학식은 KKLDTFFVKLSLFTER (서열 2) 또는 KKLDTFFVKLSLFTE (서열 34)이다.

대안 14는 화학식 III을 포함하는 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 화학식 III은 XX₁VKLX₂LX₃TEX₄ (서열 178)이며, 여기서 X는 KKLDTF (서열 179), KLDTF (서열 180), LDTF (서열 181), DTF, TF 또는 F이거나 부재하고, 여기서 X₁은 F, M, S, V, T 또는 L이거나 부재하고, 여기서 X₂는 S, Q, M, T 또는 H이거나 부재하고, 여기서 X₃은 F, M, Q, H, N, P, S, G, A 또는 R이거나 부재하고, 여기서 X₄는 R 또는 부재한다.

대안 15는 대안 14의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 화학식 III은 서열 2-13, 15-18, 22-30, 34, 46-52, 58, 64, 65, 70, 71, 76, 77, 82, 83, 88, 93-96, 99, 100, 178, 268-325 중 하나이다.

대안 16은 대안 14의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 X는 KKLDTF (서열 178)이다.

대안 17은 대안 14의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 X₄는 R이다.

대안 18은 대안 14의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 화학식은 VKLSLFTER (서열 52) 또는 VKLSLFTE (서열 251)이다.

대안 19는 대안 14의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 화학식은 KKLDTFFVKLSLFTER (서열 2) 또는 KKLDTFFVKLSLFTE (서열 34)이다.

대안 20은 서열 1-101, 167-172, 174-177, 179-393, 396-581 및 582 중 적어도 하나를 포함하는 단리된 펩티드를 포함한다.

대안 21은 서열 1-32, 34, 64-66, 68, 76, 94-96, 98 및 264-393 중 적어도 하나를 포함하는 대안 20의 단리된 펩티드를 포함한다.

대안 22는 대안 1 내지 21 중 어느 하나의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 단리된 펩티드는 표 5.1의 서열 중 적어도 하나를 포함한다.

대안 23은 대안 1 내지 22 중 어느 하나의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 적어도 하나의 아미노산은 D 아미노산, 인공 아미노산 및 화학적으로 변형된 아미노산이다.

대안 24는 N-말단 아세틸 기를 추가로 포함하는, 대안 1 내지 23 중 어느 하나의 단리된 펩티드를 포함한다.

대안 25는 C-말단 아미드 기를 추가로 포함하는, 대안 1 내지 24 중 어느 하나의 단리된 펩티드를 포함한다.

대안 26은 대안 1 내지 25 중 어느 하나의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 단리된 펩티드는 화학적으로 변형된다.

대안 27은 대안 1 내지 26 중 어느 하나의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 적어도 하나의 변형을 포함하고, 예를 들어 여기서 펩티드는 글리코실화, 니트로실화, 카르보닐화, 산화되거나, 또는 폴리에틸렌 글리콜, 지방산 또는 약동학적 조절제 중 적어도 하나에 연결된다.

대안 28은 대안 1 내지 23 중 어느 하나의 단리된 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 폴리펩티드는 시클릭 펩티드를 포함한다.

대안 29는 대안 1 내지 28 중 어느 하나의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 적어도 하나의 변형, 예를 들어 D 아미노산, N-말단 아세틸 기, C-말단 아미드 기, 글리코실화, 니트로실화, 카르보닐화, 산화, 연결된 약동학적 조절제 및 연결된 폴리에틸렌 글리콜 또는 이들의 임의의 조합 중 적어도 하나를 포함한다.

대안 30은 대안 1 내지 29 중 어느 하나의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 1100개 이하의 아미노산의 길이이다.

대안 31은 대안 1 내지 29 중 어느 하나의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 6개 아미노산 내지 20개 아미노산의 길이이다.

대안 32는 대안 1 내지 31 중 어느 하나의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 단리된 펩티드는 N-말단 아세틸 기를 갖지 않는다.

대안 33은 대안 1 내지 31 중 어느 하나의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 단리된 펩티드는 C-말단 아미드 기를 갖지 않는다.

대안 34는 대안 1 내지 33 중 어느 하나의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 지지체, 담체 및 융합 단백질 중 적어도 하나에 연결된다.

대안 35는 대안 1 내지 34 중 어느 하나의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 다량체화된다.

대안 36은 대안 1 내지 22 중 어느 하나의 펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함한다.

대안 37은 서열 102 내지 165 중 하나를 포함하는 대안 36의 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함한다.

대안 38은 대안 36의 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함한다.

대안 39는 대안 37의 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함한다.

대안 40은 대안 36 또는 37의 단리된 폴리뉴클레오티드 또는 대안 38 또는 39의 벡터를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 1100개 이하의 아미노산의 길이이다.

대안 41은 대안 36 또는 37의 단리된 폴리뉴클레오티드 또는 대안 38 또는 39의 벡터를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 6개 아미노산 내지 20개 아미노산의 길이이다.

대안 42는 알부민, 알부민 단편, 이뮤노글로불린, 지지체, 담체 및 융합 단백질 중 적어도 하나에 결합된 대안 1 내지 35 중 어느 하나의 펩티드를 포함하는 단백질 복합체를 포함한다.

대안 43은 대안 1 내지 35 중 어느 하나의 펩티드를 인간 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플과 접촉시키고, 대안 42에 따른 단백질 복합체의 존재를 검출하는 것을 포함하며, 여기서 상기 생물학적 샘플은 이뮤노글로불린, 알부민 또는 그의 단편을 포함하는 것인, 상기 단백질 복합체를 제조하는 방법을 포함한다.

대안 44는 대안 43의 방법을 포함하며, 여기서 대안 1 내지 35 중 어느 하나의 상기 펩티드는 지지체에 부착된다.

대안 45는 대안 1 내지 35 중 어느 하나의 펩티드를 알부민 또는 그의 단편을 포함하는 생물학적 샘플과 접촉시키고, 상기 알부민 또는 상기 알부민 단편에 대한 상기 펩티드의 결합을 검출하는 것을 포함하는, 생물학적 샘플에서 알부민 또는 알부민 단편의 존재를 검출하는 방법을 포함한다.

대안 46은 대안 1 내지 35 중 어느 하나의 펩티드에 특이적인 결합 수단을 포함하며, 여기서 결합 수단은 항체 또는 그의 결합 단편이다.

대안 47은 대안 46의 결합 수단을 포함하며, 여기서 항체는 모노클로날 항체이고, 결합 단편은 모노클로날 항체 결합 단편이다.

대안 48은 표 1-4의 서열 (서열 183-184 및 188-246) 중 적어도 하나를 포함하는 펩티드에 특이적인 압타머를 포함한다.

대안 49는 대안 48의 압타머를 포함하며, 여기서 압타머는 서열 VFDEFKPLVEEPQNLIK (서열 185)의 펩티드에 특이적이다.

대안 50은 대안 48 또는 49의 압타머를 포함하며, 여기서 상기 압타머는 DNA 압타머이다.

대안 51은 대안 48 또는 49의 압타머를 포함하며, 여기서 상기 압타머는 펩티드 압타머이다.

대안 52는 면역억제와 연관된 병태를 갖는 환자를 확인하고; 환자에게 대안 1 내지 35의 펩티드를 투여하고; 환자에서 백혈구 확산의 증가를 검출하거나 또는 CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 또는 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극을 검출하는 것을 포함하는, 면역억제의 억제를 필요로 하는 환자에서 면역억제를 억제하는 방법을 포함한다. 임의로, 방법은 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식 중 하나 이상을 검출하는 것을 포함한다.

대안 53은 대안 52의 방법을 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7 또는 6개 이하의 아미노산의 길이 또는 이들 숫자 중 임의의 2개 사이인 길이이다.

대안 54는 대안 52의 방법을 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 합성 펩티드이다.

대안 55는 대안 52의 방법을 포함하며, 여기서 상기 펩티드를 투여하는 것은 적어도 0.1 중량%의 펩티드, 예를 들어 적어도 0.1 중량%, 0.2 중량%, 0.5 중량%, 1 중량%, 2 중량%, 3 중량%, 4 중량%, 5 중량%, 6 중량%, 7 중량%, 8 중량%, 9 중량%, 10 중량%, 20 중량% 또는 30 중량%의 펩티드 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)로 이루어진 조성물을 투여하는 것을 포함한다.

대안 56은 대안 52의 방법을 포함하며, 여기서 상기 환자는 암, 바이러스 감염 또는 박테리아 감염을 갖는다.

대안 57은 대안 56의 방법을 포함하며, 여기서 암은 결장직장암, 신암, 유방암, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 악성 흑색종, 소세포 폐암, 비소세포 폐암 (선암종), 편평 세포 암종, 방광암, 골육종, 기관지암 또는 조혈 세포 암이다.

대안 58은 림프구 이동의 증가를 검출하는 것을 추가로 포함하는, 대안 52의 방법을 포함한다.

대안 59는 면역억제를 앓고 있는 인간을 확인하고; 면역 세포를 대안 1 내지 35 중 어느 것의 펩티드와 접촉시키고; 상기 펩티드와의 접촉 후의 면역 세포의 증식의 증가를 검출하거나 또는 CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 또는 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극을 검출하는 것을 포함하는, 수용체에 대한 알부민 단편의 결합을 억제하는 방법을 포함한다. 임의로, 방법은 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식 중 하나 이상을 포함한다.

대안 60은 대안 59의 방법을 포함하며, 여기서 면역 세포는 림프구, 단핵구, 대식세포 또는 NK-세포이다.

대안 61은 대안 59의 방법을 포함하며, 여기서 면역 세포는 PBMC, 단핵구, 대식세포 또는 NK-세포이다.

대안 62는 대안 59의 방법을 포함하며, 여기서 인간은 암, 바이러스 감염 또는 박테리아 감염을 갖는다.

대안 63은 대안 62의 방법을 포함하며, 여기서 상기 인간은 결장직장암, 신암, 유방암, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 악성 흑색종, 소세포 폐암, 비소세포 폐암 (선암종), 편평 세포 암종, 방광암, 골육종, 기관지암 또는 조혈 세포 암을 갖는다.

대안 64는 면역억제를 앓고 있는 인간을 확인하고; NK-세포를 대안 1 내지 35 중 어느 것의 서열을 포함하는 펩티드와 접촉시키고; 대조군 샘플, 예컨대 상기 펩티드의 부재 하의 NK-세포의 세포독성 또는 비관련 펩티드 하의 NK-세포의 세포독성과 비교하여, 상기 펩티드와의 접촉 후의 상기 NK-세포의 세포독성의 증가를 검출하는 것을 포함하는, NK-세포 세포독성을 증가시키는 방법을 포함한다.

대안 65는 대안 64의 방법을 포함하며, 여기서 상기 인간은 암, 박테리아 감염 또는 바이러스 감염을 갖는 환자이다.

대안 66은 대안 64의 방법을 포함하며, 여기서 암을 가진 상기 환자는 결장직장암, 신암, 유방암, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 악성 흑색종, 소세포 폐암, 비소세포 폐암 (선암종), 편평 세포 암종, 방광암, 골육종, 기관지암 또는 조혈 세포 암을 갖는다.

대안 67은 면역억제를 앓고 있는 인간을 확인하고; 인간 림프구를 대안 1 내지 35 중 어느 것의 펩티드와 접촉시키고; 대조군 샘플, 예컨대 상기 펩티드의 부재 하의 인간 림프구의 이동 또는 비관련 펩티드 하의 인간 림프구의 이동과 비교하여, 상기 펩티드와의 접촉 후의 상기 인간 림프구의 이동의 증가를 검출하는 것을 포함하는, 인간 림프구 이동을 증가시키는 방법을 포함한다.

대안 68은 대안 67의 방법을 포함하며, 여기서 상기 인간은 암, 박테리아 감염 또는 바이러스 감염을 갖는다.

대안 69는 대안 68의 방법을 포함하며, 여기서 상기 인간은 결장직장암, 신암, 유방암, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 악성 흑색종, 소세포 폐암, 비소세포 폐암 (선암종), 편평 세포 암종, 방광암, 골육종, 기관지암 및 조혈 세포 암 중 적어도 하나를 갖는다.

대안 70은 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 존재 하에 인간 림프구를 대안 1 내지 35 중 어느 것의 펩티드와 접촉시키고; 대조군 샘플과 비교하여, 인간 림프구 상의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합의 억제를 검출하는 것을 포함하며, 여기서 대조군 샘플은 상기 펩티드의 부재 하의 인간 림프구 상의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합, 또는 비관련 펩티드 존재 하의 인간 림프구 상의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합을 포함하는 것인, 인간 림프구 상의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합을 억제하는 방법을 포함한다.

대안 71은 대안 70의 방법을 포함하며, 여기서 인간 알부민 단편은 서열 185에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함한다.

대안 72는 대안 71의 방법을 포함하며, 여기서 인간 알부민 단편은 서열 185의 서열을 포함한다.

대안 73은 인간 림프구를 제공하며, 여기서 LFA-1 수용체 및 IL-2 수용체 중 적어도 하나는 인간 알부민 또는 알부민 단편에 결합하고; 인간 알부민 또는 알부민 단편에 분자를 특이적으로 결합시키고; LFA-1 수용체, IL-2 수용체를 통한 인간 림프구의 자극의 억제의 감소를 검출하는 것을 포함하는, 인간 림프구 상의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합을 억제하는 방법을 포함한다.

대안 74는 대안 73의 방법을 포함하며, 여기서 인간 알부민 단편은 서열 185에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함한다.

대안 75는 대안 74의 방법을 포함하며, 여기서 인간 알부민 단편은 서열 185의 서열을 포함한다.

대안 76은 암 세포를 대안 1 내지 35 중 어느 것의 펩티드와 접촉시키고; 상기 암 세포에 대한 상기 펩티드의 결합을 검출하는 것을 포함하는, 암 세포를 펩티드와 결합시키는 방법을 포함한다.

대안 77은 대안 76의 방법을 포함하며, 여기서 암 세포는 결장직장암 세포, 신암 세포, 유방암 세포, 피부암 세포, 난소암 세포, 전립선암 세포, 췌장암 세포, 폐암 세포, 악성 흑색종 세포, 소세포 폐암 세포, 비소세포 폐암 (선암종) 세포, 편평 세포 암종 세포, 방광암 세포, 골육종 세포, 기관지암 세포 또는 조혈 세포 암 세포이다.

대안 78은 대안 76의 방법을 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 그에 연결된 검출가능한 표지, 예컨대 비오티닐화 표지, 방사성 표지, 형광 표지 또는 콜로이드성 금 표지를 포함한다.

대안 79는 대안 76의 방법을 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 그에 연결된 세포독성제, 예컨대 방사화학물질 또는 독소를 포함한다.

대안 80은 대안 76의 방법을 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 항체 또는 항체 단편을 포함한다.

대안 81은 그에 연결된 검출가능한 표지, 예컨대 비오티닐화 표지, 방사성 표지, 형광 표지 또는 콜로이드성 금 표지를 추가로 포함하는, 대안 1 내지 35 중 어느 하나의 펩티드를 포함한다.

대안 82는 그에 연결된 세포독성제, 예컨대 방사화학물질 또는 독소를 추가로 포함하는, 대안 1 내지 36 중 어느 하나의 펩티드를 포함한다.

대안 83은 인간 암 환자를 확인하고; 인간 암 환자의 면역 세포를 대안 1 내지 35 중 어느 것의 펩티드와 접촉시키고; 환자의 암 세포의 증식의 억제 또는 환자의 암 세포의 세포 사멸의 유도를 검출하는 것을 포함하는, 인간 암 세포의 증식을 억제하는 방법을 포함한다.

대안 84는 대안 83의 방법을 포함하며, 여기서 환자의 암 세포의 증식의 억제가 검출된다.

대안 85는 대안 83의 방법을 포함하며, 여기서 암 세포의 세포 사멸의 유도 또는 종양 퇴행성 변화 중 적어도 하나가 검출된다.

대안 86은 대안 83의 방법을 포함하며, 여기서 암 세포는 적어도 하나의 결장직장암, 신암, 유방암, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 악성 흑색종, 소세포 폐암, 비소세포 폐암 (선암종), 편평 세포 암종, 방광암, 골육종, 기관지암 및 조혈 세포 암이다.

대안 87은 인간의 면역 세포의 증식, 이동, 내피 이행 및 세포독성 중 적어도 하나의 증가를 검출하는 것을 추가로 포함하는, 대안 83의 방법을 포함한다.

대안 88은 대안 83의 방법을 포함하며, 여기서 면역 세포는 PBMC이다.

대안 89는 대안 88의 방법을 포함하며, 여기서 면역 세포는 림프구이다.

대안 90은 대안 83의 방법을 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 합성이다.

대안 91은 인간 림프구를 대안 1 내지 31 중 어느 것의 펩티드와 접촉시키고; LFA-1 수용체에 대한 리간드의 감소된 결합을 검출하는 것을 포함하는, 인간 림프구의 LFA-1 수용체에 결합된 리간드를 제거하는 방법을 포함한다.

대안 92는 대안 91의 방법을 포함하며, 여기서 상기 인간 림프구는 암, 박테리아 감염 또는 바이러스 감염을 가진 환자로부터의 것이다.

대안 93은 대안 92의 방법을 포함하며, 여기서 상기 환자는 결장직장암, 신암, 유방암, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 악성 흑색종, 소세포 폐암, 비소세포 폐암 (선암종), 편평 세포 암종, 방광암, 골육종, 기관지암 및 조혈 세포 암 중 적어도 하나를 갖는다.

대안 94는 인간 림프구를 대안 1 내지 35 중 어느 것의 펩티드와 접촉시키고; IL-2 수용체에 대한 리간드의 감소된 결합을 검출하는 것을 포함하는, 인간 림프구의 IL-2 수용체에 결합된 리간드를 제거하는 방법을 포함한다.

대안 95는 대안 94의 방법을 포함하며, 여기서 상기 인간 림프구는 암, 박테리아 감염 또는 바이러스 감염을 가진 환자로부터의 것이다.

대안 96은 대안 95의 방법을 포함하며, 여기서 상기 환자는 결장직장암, 신암, 유방암, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 악성 흑색종, 소세포 폐암, 비소세포 폐암 (선암종), 편평 세포 암종, 방광암, 골육종, 기관지암 및 조혈 세포 암 중 적어도 하나를 갖는다.

대안 97은 면역억제된 인간에게 대안 1 내지 35 중 어느 것의 펩티드를 제공하고; 상기 인간에서의 면역억제의 감소를 검출하거나 또는 CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 또는 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극을 검출하는 것을 포함하는, 면역억제된 인간에서 면역억제를 감소시키는 방법을 포함한다. 임의로, 방법은 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식 중 하나 이상을 검출하는 것을 포함한다.

대안 98은 대안 97의 방법을 포함하며, 여기서 상기 인간은 암, 박테리아 감염 또는 바이러스 감염을 갖는다.

대안 99는 대안 98의 방법을 포함하며, 여기서 상기 암은 결장직장암, 신암, 유방암, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 악성 흑색종, 소세포 폐암, 비소세포 폐암 (선암종), 편평 세포 암종, 방광암, 골육종, 기관지암 또는 조혈 세포 암이다.

대안 100은 대안 99의 방법을 포함하며, 여기서 상기 펩티드를 제공하는 것은 상기 인간에게 적어도 0.1 중량%의 펩티드, 예를 들어 적어도 0.1 중량%, 0.2 중량%, 0.5 중량%, 1 중량%, 2 중량%, 3 중량%, 4 중량%, 5 중량%, 6 중량%, 7 중량%, 8 중량%, 9 중량%, 10 중량%, 20 중량% 또는 30 중량%의 펩티드 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)로 이루어진 조성물을 투여하는 것을 포함한다.

대안 101은 인간에게 대안 36 내지 41 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 제공하고; LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합의 억제를 검출하는 것을 포함하는, 인간 림프구 상의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 인간 알부민 또는 인간 알부민 단편의 결합을 억제하는 방법을 포함한다.

대안 102는 암 세포를 갖는 인간에게 대안 36 내지 41 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 제공하고; 상기 암 세포의 증식의 억제를 검출하는 것을 포함하는, 인간 암 세포의 증식을 억제하는 방법을 포함한다.

대안 103은 인간 림프구를 대안 36 내지 41 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드 또는 벡터와 접촉시키고; LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 대한 리간드의 감소된 결합을 검출하는 것을 포함하는, 인간 림프구의 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체 또는 둘 다에 결합된 리간드를 제거하는 방법을 포함한다.

대안 104는 면역억제된 인간에게 대안 36 내지 41 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 제공하고; 상기 인간에서 면역억제의 감소를 검출하거나 또는 CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 또는 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극을 검출하는 것을 포함하는, 면역억제된 인간에서 면역억제를 감소시키는 방법을 포함한다. 임의로 방법은 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식 중 하나 이상을 검출하는 것을 포함한다.

대안 105는 대안 1 내지 35의 변형된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 적어도 하나의 변형, 예를 들어 D 아미노산, N-말단 아세틸 기, C-말단 아미드 기, 글리코실화 아미노산, 니트로실화 아미노산, 카르보닐레이티드 아미노산, 산화된 아미노산, 또는 상기 펩티드가 폴리에틸렌 글리콜, 지방산 또는 약동학적 조절제에 연결되는 것 중 적어도 하나를 포함한다.

대안 106은 대안 103의 변형된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7 또는 6개 이하의 아미노산의 길이이다.

대안 107은 대안 1 내지 35 또는 대안 103 내지 104 중 어느 것의 펩티드; 및 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 제약 조성물을 포함한다.

대안 108은 대안 107의 제약 조성물을 포함하며, 여기서 펩티드는 서열 1-33, 34, 46-53, 62, 64-66, 68, 76, 94-96, 98 및 586 중 적어도 하나를 포함한다.

대안 109는 시험관내에서 환자의 면역 세포를 대안 1 내지 35 중 어느 것의 펩티드와 접촉시키고; 상기 면역 세포의 반응성의 회복을 검출하고; 상기 펩티드가 상기 면역 세포의 증식을 억제하는 경우에, 환자를 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제를 사용한 치료에 반응할 가능성이 있는 것으로 분류하는 것을 포함하는, 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제를 사용한 치료를 필요로 하는 환자를 확인하는 방법을 포함한다.

대안 110은 면역억제의 감소를 필요로 하는 환자에서 면역억제를 감소시키는 것을 추가로 포함하는, 대안 109의 방법을 포함하며, 여기서 면역억제를 감소시키는 것은 그를 필요로 하는 환자에게 대안 1 내지 35 중 어느 것의 펩티드를 제공하는 것을 포함한다.

대안 111은 상기 인간에서 면역억제의 감소를 검출하는 것을 추가로 포함하는, 대안 110의 방법을 포함한다.

대안 112는 면역억제의 감소를 필요로 하는 환자에서 면역억제를 감소시키는 것을 추가로 포함하는, 대안 109의 방법을 포함하며, 여기서 면역억제를 감소시키는 것은 그를 필요로 하는 환자에게 대안 36 내지 41 중 어느 것의 벡터 또는 폴리뉴클레오티드를 제공하는 것을 포함한다.

대안 113은 상기 인간에서 면역억제의 감소를 검출하거나 또는 CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 또는 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극을 검출하는 것을 추가로 포함하는, 대안 112의 방법을 포함한다. 임의로, 방법은 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식 중 하나 이상을 검출하는 것을 포함한다.

대안 114는 대안 1 내지 23 중 어느 것의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 서열 2의 아미노산 잔기 K2에 상동인 아미노산 잔기를 포함한다.

대안 115는 대안 1 내지 23 중 어느 것의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 서열 2의 아미노산 잔기 K9에 상동인 아미노산 잔기를 포함한다.

대안 116은 대안 1 내지 23 중 어느 것의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 서열 2의 아미노산 잔기 E15에 상동인 아미노산 잔기를 포함한다.

대안 117은 대안 114의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 서열 2의 아미노산 잔기 K9에 상동인 아미노산 잔기를 포함한다.

대안 118은 대안 114의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 서열 2의 아미노산 잔기 E15에 상동인 아미노산 잔기를 포함한다.

대안 119는 대안 115의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 서열 2의 아미노산 잔기 E15에 상동인 아미노산 잔기를 포함한다.

대안 120은 대안 114의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 서열 2의 아미노산 잔기 K9에 상동인 아미노산 잔기를 포함하고, 여기서 상기 펩티드는 서열 2의 아미노산 잔기 E15에 상동인 아미노산 잔기를 포함한다.

대안 121은 대안 1 내지 23 또는 대안 114 내지 120 중 어느 것의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 적어도 하나의 비-자연 발생 아미노산을 포함한다.

대안 122는 대안 114 내지 120 중 어느 것의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 적어도 하나의 변형, 예를 들어 D 아미노산, N-말단 아세틸 기, C-말단 아미드 기, 글리코실화 아미노산, 니트로실화 아미노산, 카르보닐레이티드 아미노산, 산화된 아미노산, 또는 상기 펩티드가 폴리에틸렌 글리콜, 지방산 또는 약동학적 조절제에 연결되는 것 중 적어도 하나를 포함한다.

대안 123은 대안 114 내지 120 중 어느 것의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7 또는 6개 이하의 아미노산의 길이 또는 이들 숫자 중 임의의 2개 사이인 범위에 의해 한정된 길이이다.

대안 124는 대안 114 내지 120 중 어느 하나의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 6개 아미노산 내지 20개 아미노산의 길이, 바람직하게는 8-16개 아미노산의 길이, 가장 바람직하게는 9 내지 15개 아미노산의 길이이다.

대안 125는 대안 114 내지 120 중 어느 하나의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 지지체에 연결된다.

대안 126은 대안 114 내지 120 중 어느 하나의 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 다량체화된다.

대안 127은 대안 114 내지 120 중 어느 하나의 펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함한다.

대안 128은 대안 127의 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함한다.

대안 129는 대안 128의 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함한다.

대안 130은 대안 127의 단리된 폴리뉴클레오티드 또는 대안 128의 벡터를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7 또는 6개 이하의 아미노산의 길이 또는 이들 숫자 중 임의의 2개 사이인 범위에 의해 한정된 길이이다.

대안 131은 대안 127의 단리된 폴리뉴클레오티드 또는 대안 128의 벡터를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 6개 아미노산 내지 20개 아미노산의 길이, 바람직하게는 8-16개 아미노산의 길이, 가장 바람직하게는 9 내지 15개 아미노산의 길이이다.

대안 132는 대안 114 내지 127 중 어느 하나의 펩티드에 결합된 알부민 또는 알부민 단편을 포함하는 단백질 복합체를 포함한다.

대안 133은 대안 132의 단백질 복합체를 포함하며, 여기서 상기 단백질 복합체는 지지체에 결합된다.

대안 134는 X₁ X₂X₃-X₈ X₉ X₁₀-X₁₄ X₁₅ X₁₆을 포함하는 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 X₁ 및 X₁₆은 임의의 아미노산이거나 부재하고; X₂는 M, N, P, G, E, R, K로 이루어진 군으로부터 선택되고, X₉는 T, R, K로 이루어진 군으로부터 선택되고; X₁₅는 P, D, E, Y, N, Q로 이루어진 군으로부터 선택되고; X₃-X₈ 및 X₁₀-X₁₄는 임의의 아미노산이다.

대안 135는 대안 134에 따른 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 X₂는 K, N, P로 이루어진 군으로부터 선택되고, X₁₅는 P, D, E로 이루어진 군으로부터 선택된다.

대안 136은 대안 135에 따른 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 X₂ 및 X₉는 K이고, X₁₅는 E이다.

대안 137은 대안 136에 따른 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 X₅-X₈은 F, F, V, K이고, X₁₀-X₁₁은 L, S이다.

대안 138은 대안 137에 따른 단리된 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 KLDTFFVKLSLFTE이다.

대안 139는 대안 134 내지 138 중 어느 것에 따른 단리된 펩티드 및 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 포함한다.

대안 140은 대안 134 내지 138 중 어느 것에 따른 단리된 펩티드를 포함하는, 항체, 모노클로날 항체 또는 그의 기능적 단편을 포함한다.

대안 141은 단일 도메인 항체 (SdAb)인, 대안 140에 따른 항체, 모노클로날 항체 또는 그의 기능적 단편을 포함한다.

대안 142는 대안 134 내지 138 중 어느 것에 따른 단리된 펩티드 및/또는 대안 140 내지 141 중 어느 것에 따른 항체, 모노클로날 항체 또는 그의 기능적 단편을 포함하는 키트 및 상기 키트를 사용하는 방법의 지침서를 포함한다.

대안 143은 (a) 면역 세포를 제공하는 단계; (b) 상기 면역 세포를 대안 134 내지 138 중 어느 것에 따른 단리된 펩티드 또는 대안 140 내지 141 중 어느 것에 따른 항체, 모노클로날 항체 또는 그의 기능적 단편과 접촉시키는 단계; 및 (c) CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 또는 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극을 검출하는 것에 의해서와 같이, 상기 면역 세포의 조절 효과를 결정하는 단계를 포함하는 시험관내 방법을 포함한다. 임의로, 방법은 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식 중 하나 이상을 검출하는 것을 포함한다.

도 1은 P3028 에피토프에 대해 지시된 친화도 정제된 토끼 항체를 사용한, 악성 흑색종 전이의 면역조직화학적 염색을 보여준다.
도 2는 3028-구조물에 대해 지시된 항체를 사용하여 종양 추출물에 대해 수행된 웨스턴 블롯을 보여준다.
도 3은 혈청에서 P3028 에피토프를 노출하는 알부민; P3028 펩티드와의 경쟁을 검출하는 샌드위치 ELISA를 보여준다.
도 4는 10% 자가 혈청에서 배양된, 신세포 암종 환자 (RCC)로부터의 인간 면역 세포 (PBMC) 및 건강한 대조군 샘플로부터의 PBMC에 의한 IL-2 유도된 증식을 보여준다.
도 5는 IL-2에 대한 증식 반응에 따른 신세포 암종 환자의 카플란 마이어(Kaplan Meyer) 분석을 보여준다.
도 6은 건강한 대조군 샘플로부터의 PBMC의 IL-2 유도된 증식에 대한 4종의 상이한 펩티드의 효과의 분석을 보여준다.
도 7은 암 환자 PBMC를 사용한 인간 생체외 모델에서 P3028에 의한, IL-2에 대한 증식 반응의 억제를 보여준다.
도 8은 4명의 건강한 사람으로부터의 PBMC의 TCR 자극된 림프구 증식에 대한 P3028의 효과를 보여준다.
도 9a-9b는 NK-세포 세포독성에 대한 알부민 펩티드의 효과를 보여준다. 도 9a는 K5 및 K6에 대한 효과를 도시한다. 도 9b는 K12 및 K13에 대한 효과를 도시한다.
도 10은 말초 혈액 백혈구의 확산에 대한 P3028의 효과를 보여준다.
도 11은 보이덴(Boyden) 챔버 기술을 사용하여 연구된 PBMC의 이동에 대한 P3028의 효과를 보여준다.
도 12는 IL-2 유도된 증식에 대한 P3028의 C-말단 (3218) 및 N-말단 (3325) 부분의 효과를 전장 P3028의 효과와 비교하여 보여준다.
도 13은 IL-2 유도된 증식에 대한 P3028의 억제 효과가 P3028의 C-말단 (3218) 및 N-말단 (3325) 부분 단독 또는 조합에 의해 중화되지 않는다는 것을 보여준다.
도 14는 정상 PBMC와 환자 혈청과의 인큐베이션에 의한, CD11a에 대해 지시된 항-LFA-1 항체의 결합의 억제를 보여준다.
도 15는 P3028에 의한, 단핵 혈액 세포에 대한 항-LFA-1 mAb의 결합의 억제를 보여준다.
도 16은 건강한 대조군 샘플로부터의 PBMC (A), 및 억제 P3028에 대해 지시된 항체를 사용한 처리 전의 암 환자로부터의 PBMC (B) 및 이러한 처리 후의 암 환자로부터의 PBMC (C) 상의 LFA-1의 염색을 보여준다.
도 17은 항-LFA-1 항체 (A)에 의한 단핵 혈액 세포의 염색이 P3028 (B) 또는 암 환자 혈청 (C)에 의해 차단된다는 것을 보여준다.
도 18a 및 18b는 rhuIL-2R에 대한 비오티닐화 IL-2의 결합을 보여주는 ELISA 분석을 보여준다. 도 18b는 비-비오티닐화 IL-2에 대한 결합 데이터를 도시하기 위한, 도 18a의 조영-증진 영상이다 (삼각형;
도 19는 IL-2 결합 부위 (B)에서 P3028에 결합하는 IL-2 수용체의 α-쇄 (CD25) (A)를 보여준다.
도 20은 P3028로 면역화된 토끼로부터의 항혈청이 P3028에 결합한다는 것을 보여준다.
도 21은 ELISA에서 알부민 펩티드에 의한, P3028로 코팅된 웰에의 토끼-항 3028 혈청 L의 결합의 억제를 보여준다.
도 22는 면역억제된 암 환자 및 정상 대조군 샘플로부터의 PBMC의 IL-2에 대한 증식 반응에 대한, P3028에 대해 지시된 친화도 정제된 항체의 효과를 보여준다.
도 23은 용액 중 P3028 억제제의 확인을 보여준다. 이전 분석을 기반으로 P3028의 잠재적 결합제를 칩 상에서 합성하였다. 도 23a는 검정 1-14에 대한 결과를 보여준다. 도 23b는 검정 15-28에 대한 결과를 보여준다. 도 23a 및 23b는 텍스트를 보다 분명하게 보여주기 위해 확대된 단일 그래프의, 각각 좌측 및 우측을 나타낸다. Y축은 참조를 위해 도 23b에서 재현되었다.
도 24는 IL-2에 대한 억제된 증식 반응에서 P28R의 자극 활성을 보여준다. 도 24a, 24b, 24c 및 24d는 각각 4명의 상이한 암 환자에 대한 자극 활성을 보여준다.
도 25는 신선한 동결 유방암 종양에 대한 비오티닐화 P28R의 결합을 보여준다.
도 26은 LFA-1에 대해 지시된 항체로 염색된, 완충제와 함께 인큐베이션된 유방암 조직 (도 26A) 또는 P28R과 함께 인큐베이션된 유방암 조직 (도 26B)을 보여준다.
도 27은 P28R의 각 위치의 단일 아미노산 치환을 갖는 펩티드에의 P3028의 결합에 대한 rampo 점수를 보여준다.
도 28은 500 초과의 rampo 점수를 갖는 펩티드 P28R의 단일 아미노산 치환을 보여준다.
도 29는 P28R 및 펩티드 P28R의 N-말단 및/또는 C-말단에의 P3028의 결합에 대한 rampo 점수를 보여준다.
도 30은 펩티드 P28R의 내부 결실 돌연변이체 및 단일 아미노산 치환 돌연변이체에의 P3028의 결합에 대한 rampo 점수를 보여준다. 도 30a 및 30b는 텍스트를 보다 분명하게 보여주기 위해 확대된 단일 그래프의, 각각 좌측 및 우측을 나타낸다. Y축은 도 30b에서 재현되었다.
도 31은 펩티드 3028과 펩티드 KKL15 사이의 유리한 정전기적 상호작용 및 소수성 상호작용을 보여준다.
도 32는 위치 스캔 실험에서 P3028에 결합하는 것으로 확인된 시클릭 펩티드 (서열 265-267) 및 P3028에 결합하는 것으로 확인된 선형 펩티드 (서열 2 및 268-293)의 정렬을 보여준다.
도 33a 및 33b는 (도 33a) 건강한 대조군 샘플로부터의 PBMC 및 (도 33b) 암 환자로부터의 PBMC에서 MTS 생체환원에 대한 펩티드 P28R의 다양한 농도의 효과를 보여준다.
도 34는 암 환자로부터의 PBMC에 대한 P28R (일명 "SCF 28R") (N=9) 및 P27 (일명 "SCF 27") (N=8)의 효과 (제7일 MTS 측정)를 보여준다.
도 35는 BrdU 혼입에 의해 측정된, 암 환자 세포에서의 IL-2에 대한 반응을 보여준다.
도 36은 (도 36a) 고 반응자 및 (도 36b) 저 반응자의 세포에서 IL-2 유도된 증식에 대한 P28R (일명 "P28")의 효과를 보여준다.
도 37은 BrdU 혼입을 기반으로, 암 환자로부터의 PBMC의 IL-2 자극에 대한 P28R (일명 "SCF 28R") 및 P27 (일명 "SCF 27")의 효과를 보여준다.
도 38은 BrdU 혼입 (도 38a, 38c) 및 MTS 혼입 (도 38b, 38d)을 기반으로 IL-2-유도된 증식에 대한 P28R (일명 "SCF 28R") 및 P27 (일명 "SCF 27")의 효과를 보여준다. 각각 2명의 상이한 환자의 세포 (도 38a, 38b) 및 (도 38c, 38d)를 보여준다.
도 39는 P3028 펩티드 존재 (하단 열) 및 부재 (상단 열) 하의 세포의 효소 연결 면역흡착점 검정을 보여준다.
도 40은 P3028 펩티드 존재 및 부재 하의 세포의 효소 연결 면역흡착점 검정으로부터의 데이터를 보여준다.
도 41은 건강한 대조군 사람으로부터의 PBMC의 활성화에 대한 변형된 펩티드의 효과를 보여주는 일련의 그래프이다. PBMC는 RPMI + 10% 인간 AB 혈청에서 24시간 동안 펩티드 (40μg/mL)와 함께 인큐베이션하였다. 활성화는 유동 세포측정법을 사용하여 증진된 마커 CD69를 갖는 세포의 백분율로서 결정한다. 도 41a는 각 펩티드에 대해 수행된 두 실험 (410 및 412)의 결과를 보여준다. 도 41b는 각 펩티드에 대해 수행된 두 실험 (414 및 416)의 결과를 보여준다.
도 42는 정상 인간 AB 혈청을 함유하는 배양 배지에서의 전장 펩티드 P28R 및 6개의 아미노산 중심 서열 (32230, FFVKLS, 서열 62)의 효과를 보여주는 일련의 그래프이다. 활성화는 유동 세포측정법을 사용하여 증진된 마커 CD69 또는 CD71을 갖는 세포의 백분율로서 결정한다. PBMC는 RPMI + 10% 인간 AB 혈청에서 24시간 동안 펩티드 (40μg/mL)와 함께 인큐베이션하였다. 도 42a는 각 펩티드에 대해 수행된 두 실험 (420 및 422)의 결과를 보여준다. 도 42b는 각 펩티드에 대해 수행된 두 실험 (424 및 426)의 결과를 보여준다.
도 43은 2명의 상이한 암 환자로부터의 혈청 ("인간 ca 혈청 1" (430)) 및 ("인간 ca 혈청 2" (432))을 함유하는 배양 배지에서의 전장 펩티드 P28R 및 6개의 아미노산 중심 서열 (32230, FFVKLS, 서열 62)의 비교를 보여주는 그래프이다.
도 44는 누드 마우스에서의 이종이식편 모델에서 인간 전립선암 PC3의 P28R 처리를 보여주는 일련의 현미경 영상이다. 종양에 P28R (도 44a) 및 단지 약물 용매만 (도 44b)을 종양내로 주사하였다. 카스파제 3에 대한 염색 (440) (아폽토시스의 유도를 입증함) 및 염색의 부재 (442)가 도시되어 있다.
도 45는 P28R을 사용한 B16 흑색종의 종양내 처리를 보여주는 일련의 현미경 영상이다. 염증성 침윤물은 CD45에 대해 지시된 폴리클로날 토끼 항체를 사용한 처리 3 일 후에 입증되었고 (도 45a), 대조군 절편은 동일한 농도의 토끼 IgG와 함께 인큐베이션되었다 (도 45b). 염색 (450) 및 염색의 부재 (452)가 도시되어 있다.
도 46은 건강한 대조군 사람으로부터의 PBMC의 활성화에 대한 변형된 펩티드의 효과를 보여주는 일련의 그래프이다. 활성화는 유동 세포측정법을 사용하여 증진된 마커 CD69 (두 실험, exp 1 (460) 및 exp 2 (462)의 결과를 보여주는 도 46a) 또는 CD71 (두 실험, exp 1 (464) 및 exp 2 (466)의 결과를 보여주는 도 46b)을 갖는 세포의 백분율로서 결정한다. PBMC는 RPMI + 10% 인간 AB 혈청에서 48시간 동안 펩티드 (40μg/mL)와 함께 인큐베이션하였다.
도 47은 인간 유방암의 두 영역 (각각 도 47a 및 도 47b)에서 면역억제 3028 구조물의 발생을 보여주는 일련의 현미경 영상이다. 비오티닐화 P28R을 사용한 면역조직화학적 염색 (470)이 도시되어 있다. 염색의 부재 (472)가 도 47a에서 관찰된다.

인간 (예를 들어, 암, 지속성 또는 만성 감염성 또는 염증성 질환을 갖는 인간)에서 면역억제를 야기하는 면역조절 펩티드와 상호작용하는 여러 면역조절 펩티드 억제제가 개발되었다. 바람직한 면역조절 펩티드 억제제는 P3028 구조물 및/또는 P3028 서열 (서열 185)을 포함하는 단백질 또는 펩티드에 결합한다. 본원에 기재된 일부 실시양태 및 기재를 참조하면, P3028 구조물은 P3028 서열 (서열 185)을 포함하는 폴리펩티드, 예컨대 펩티드, 단백질 등을 지칭한다. P3028 구조물은 P3028 구조물에 특이적으로 결합하는 항체에 의해 인식되는 거대분자, 예컨대 펩티드, 단백질 등을 포함할 수 있다 (실시예 1 및 도 2 참조). 예를 들어, 알부민 응집체, 변성된 알부민 및 다른 손상된 알부민 응집체는 P3028 구조물을 포함할 수 있다. 본원의 일부 문맥에서, P3028 구조물, P3028 서열 및 P3028은 상호교환가능하게 사용되는 용어이다. P3028 구조물을 갖는 분자는 면역 세포 상의 수용체, 예컨대 IL-2 수용체 및 LFA-1 수용체와 상호작용하여, 면역억제를 야기한다. 이에 따라 펩티드, 단백질, 알부민 단편, 손상된 알부민 (예를 들어 변성된 알부민) 및 알부민 응집체는 P3028 구조물을 포함할 수 있으며 면역 세포 수용체, 예컨대 IL-2 수용체 및 LFA-1 수용체와 상호작용할 수 있는 것으로 고려된다. 면역억제는 감소된 면역 세포 증식, 확산 및 이동 뿐만 아니라 NK-세포 세포독성을 특징으로 할 수 있다. 그러나, 본원에 기재된 바와 같은 면역조절 펩티드 억제제의 존재 하에서, P3028 구조물에 의해 매개된 면역억제는 변경될 수 있다 (예를 들어, 감소, 개선, 배제 또는 전적으로 제거될 수 있다). 일부 실험에서, 예를 들어, 면역조절 펩티드 억제제가 P3028 구조물을 포함하는 분자를 LFA-1 수용체로부터 제거하여 P3028 구조물에 의해 매개된 면역억제를 변경시킬 수 있다는 것이 밝혀졌다. 따라서, 하기하는 기재는 항체 또는 항체 단편 기반 면역조절 펩티드 억제제, 펩티드 기반 면역조절 펩티드 억제제, 펩티드모방체 면역조절 펩티드 억제제, 변형된 면역조절 펩티드 억제제 (예를 들어, D 아미노산, N-말단 아세틸 또는 C 말단 아미드 기를 함유하는 것), 시클릭 펩티드 억제제 및 압타머 기반 면역조절 펩티드 억제제를 포함하나 이에 제한되지는 않는 많은 상이한 부류의 면역조절 펩티드 억제제에 대한 상세설명을 제공한다. 면역억제 또는 그의 측면을 감소시키는 (예를 들어, 면역 세포 증식, 확산, 이동 또는 NK-세포 세포독성의 P3028-매개 억제를 감소시키는) 조성물 (본원에 기재된 바와 같은 것)을 사용하는 방법, 뿐만 아니라 암 또는 염증성 질환의 진행을 억제, 감소 또는 변경시키는 접근법이 제공된다. 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 면역조절 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 따라서, 본원에 기재된 바와 같은 면역조절 펩티드 억제제는 면역억제를 개선하고/거나, 면역억제의 증상을 감소시키고/거나, 면역억제의 중증도를 감소시키고/거나, 면역억제를 치료하는데 유용할 수 있다.

본원에 기재된 바와 같은 면역조절 펩티드 억제제는 서열 183-185 또는 188-246 중 적어도 하나를 포함하는 단백질 또는 펩티드와 상호작용하거나 또는 그에 결합한다. 이러한 펩티드는 P3028 서열 및 구조물과 유사한 면역조절 특성을 가질 수 있다 (실시예 17 내지 26 참조).

하기 개시내용에서의 일부 실시양태를 참조하면, 아미노산 또는 아미노산 잔기는 3-문자 또는 1-문자 코드에 의해 지칭될 수 있다. 20개의 아미노산은 전형적으로 유전자 코드에 의해 코딩되며, 본원에서 하기 코드 또는 약어를 사용하여 지칭될 수 있다: 아르기닌 ("Arg" 또는 "R"), 히스티딘 ("His" 또는 "H"), 리신 ("Lys" 또는 "K"), 아스파르트산 ("Asp" 또는 "D"), 글루탐산 ("Glu" 또는 "E"), 세린 ("Ser" 또는 "S"), 트레오닌 ("Thr" 또는 "T"), 아스파라긴 ("Asp" 또는 "N"), 글루타민 ("Gln" 또는 "Q"), 시스테인 ("Cys" 또는 "C"), 글리신 ("Gly" 또는 "G"), 프롤린 ("Pro" 또는 "P"), 알라닌 ("Ala" 또는 "A"), 발린 ("Val" 또는 "V"), 이소류신 ("Ile" 또는 "I"), 류신 ("Leu" 또는 "L"), 메티오닌 ("Met" 또는 "M"), 페닐알라닌 ("Phe" 또는 "F"), 티로신 ("Tyr" 또는 "Y"), 트립토판 ("Trp" 또는 "W").

하기 개시내용에서의 일부 실시양태를 참조하면, "펩티드"는 여러 상이한 길이 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36,37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 240, 260, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800 또는 1000개 이상의 아미노산 또는 이들 숫자 중 임의의 숫자에 의해 한정된 범위)를 가질 수 있는 단백질 및/또는 단백질의 단편을 의미한다.

하기 개시내용에서의 일부 실시양태를 참조하면, 아미노산 (및 그의 잔기는) 아미노산의 알파 탄소의 측쇄의 다양한 특징에 따라 분류될 수 있다. 유전자 코드에 의해 코딩된 20개의 자연 발생 아미노산 및 또한 합성 아미노산이 본원에서 고려된다는 것을 주목한다. 본원에 사용된 "소수성 아미노산" (이 근본 용어의 복수화 및 변형 포함)은 소수성 측쇄를 갖는 자연 발생 또는 합성 아미노산, 예를 들어 A, V, I, L, M, F, Y 또는 W를 지칭한다. 본원에 사용된 "양으로 하전된 아미노산" (이 근본 용어의 복수화 및 변형 포함)은 양으로 하전된 측쇄를 갖는 자연 발생 또는 합성 아미노산, 예를 들어, R, H 또는 K을 지칭한다. 본원에 사용된 "음으로 하전된 아미노산" (이 근본 용어의 복수화 및 변형 포함)은 음으로 하전된 측쇄를 갖는 자연 발생 또는 합성 아미노산, 예를 들어 D 또는 E를 지칭한다. 본원에 사용된 "소수성 비-방향족 탄소 쇄 아미노산" (이 근본 용어의 복수화 및 변형 포함)은 소수성 비-방향족 탄소 측쇄를 갖는 자연 발생 또는 합성 아미노산, 예를 들어 A, V, I 또는 L을 지칭한다. 본원에 사용된 "극성 비하전된 아미노산" (이 근본 용어의 복수화 및 변형 포함)은 극성 비하전 측쇄를 갖는 자연 발생 또는 합성 아미노산, 예를 들어 S, T, N 또는 Q를 지칭한다.

본원의 일부 실시양태 및 기재를 참조하면, 핵산, 예컨대 DNA, RNA 등의 염기는 염기의 명칭 또는 1 문자 코드에 의해 지칭될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 일부 아미노산 잔기의 경우에 2개 이상의 3-염기 코돈이 동일한 아미노산을 코딩할 수 있다는 점에서 유전자 코드가 축중성이라는 것을 인지할 것이다. 따라서, 본원에 기재된 일부 1 문자 코드는, 예를 들어 단일 아미노산을 코딩할 수 있는 2개 이상의 가능한 핵산을 기재하기 위해, 2개 이상의 염기 중 하나를 나타탤 수 있다. 본원에 사용된 1-문자 코드는 다음을 포함한다: "A" (아데닌), "G" (구아닌), "C" (시토신), "T" (티민), "R" (아데닌 또는 구아닌 중 하나), "Y" (시토신 또는 티민 중 하나), "M" (아데닌 또는 시토신 중 하나), "K" (구아닌 또는 티민 중 하나), "S" (시토신 또는 구아닌 중 하나), "W" (아데닌 또는 티민 중 하나), "H" (아데닌, 시토신 또는 티민 중 하나), "B" (시토신, 구아닌 또는 티민 중 하나), "V" (아데닌, 시토신 또는 구아닌 중 하나), "D" (아데닌, 구아닌 또는 티민 중 하나) 및 "N" (아데닌, 구아닌, 시토신 또는 티민 중 하나).

본원에 사용된 용어 "탈차단" 및 "비차단" (이 근본 용어의 복수화 및 변형 포함)은 수용체로부터 결합된 면역조절 펩티드 또는 P3028 구조물을 이탈시키는 것을 지칭한다. 이에 따라, 수용체의 탈차단 또는 비차단은 수용체-결합된 면역조절 펩티드와 수용체-결합되지 않은 면역조절 펩티드 사이의 평형을 수용체-결합되지 않은 면역조절 펩티드 쪽으로 이동시킨다. 예를 들어, LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체는 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체로부터 결합된 펩티드 P3028을 이탈시킴으로써 본원의 실시양태에 따라 탈차단될 수 있다. 예를 들어, LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체는 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체로부터 표 1-4에서의 하나 이상의 서열을 포함하는 임의의 면역조절 펩티드를 이탈시킴으로써 본원의 실시양태에 따라 탈차단될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "면역 세포 활성화" 및 이 근본 용어의 복수화 및 변형 (예컨대 "면역 세포를 활성화시키는"을 포함)은 면역 세포 증식, CD69 및/또는 CD71의 활성화 또는 발현 증진, 신호 물질 (예를 들어 IFNγ 또는 IL-12)의 분비의 유도, 세포용해 분자 (예를 들어 퍼포린 또는 그랜자임 B)의 분비의 유도, 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동, 세포 증식 또는 이들 열거된 항목 중 2개 이상을 지칭한다. 예로서, 본원의 일부 실시양태에 따른 면역 세포 활성화는, 면역 세포가 증식하는 경우, 또는 면역 세포가 검출가능한 CD69를 발현하기 시작하는 경우, 또는 면역 세포가 CD71의 발현을 증가시키는 경우, 또는 면역 세포가 IFNγ, IL-12 또는 IFNγ 및 IL-12를 분비하는 경우에 일어날 수 있다.

이용가능한 데이터는 암 대조군 샘플에서 면역계의 주요 역할을 지지한다. 그러나, 악성 종양은 면역 매개 항종양 반응성을 억제하기 위한 수많은 면역조절 메카니즘을 이용할 수 있다. 인터류킨-6 (IL-6)의 증가된 혈청 농도가 종종 다양한 진단의 암 환자에서 불량한 예후와 상관관계가 있다는 관찰을 기반으로, 이 시토카인의 기원 및 유도가 조사되었다. 정상 혈청 알부민의 단백질분해 단편화 또는 변성이 신생-구조물을 생성할 수 있고, 이는 면역 세포에 결합함으로써 면역조절 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 새로운 부류의 면역조절 물질이 발견되었다.

면역 세포에 결합하는 신생-구조물을 갖는 알부민 서열의 존재는 "인공 세포 표면 칼럼" (ACS) 상에서의 친화성 크로마토그래피를 기반으로 하는 인간 생체외 모델을 사용하여 확인되었다. 인간 면역 세포 (PBMC)의 IL-2 유도된 증식에 대한 상이한 알부민 단편의 효과는 ACS 시스템에서 분석되었다 (실시예 9 참조). 간략하게, PBMC는 IL-2 및 다양한 합성적으로 제조된 알부민 단편의 존재 하에 7일 동안 배양되었다. 증식은 마지막 18시간 동안 ³H 티미딘의 혼입으로서 측정되었다. 펩티드 중 하나인 P3028 (또한 "펩티드 3028"로서 지칭되며 아미노산 서열 VFDEFKPLVEEPQNLIK - 서열 185를 가짐)은 IL-2 유도된 증식을 정기적으로 억제하였지만, 인공 세포 표면에 대한 결합에 의해 확인된 어떠한 다른 펩티드도 P3028 서열/구조물만큼 억제 활성을 보이지 않았다 (도 6 참조). 따라서, LFA-1 또는 IL-2에 의해 유도된 면역 세포 증식 반응은 P3028에 의해 억제될 수 있으며, 이는 P3028 서열/구조물이 적어도 LFA-1 또는 IL-2 수용체를 통해 작용할 수 있다는 것을 나타낸다.

³HTdR의 증진된 혼입은 세포내 티미딘 풀의 증진된 비활성 및 그에 의한 DNA의 증진된 비활성의 결과일 수 있고, 따라서 반드시 세포의 수의 증가를 반영하지는 않는다. 따라서, 림프구 증식의 자극의 상이한 방식을 조사하고 상이한 방법인 MTS 기술을 사용하여 반응을 측정하는 것이 중요한 것으로 고려된다 (실시예 3 참조). 따라서, T-세포는 CD3에 대해 지시된 모노클로날 항체로 예비-코팅된 플레이트 상의 배양물에서 자극되었고, 대사적 활성 세포의 수는 배양 3 내지 7일 후의 MTS 염색을 사용하여 결정되었다 (도 8 참조). 도시된 바와 같이, P3028 서열/구조물은 억제 효과를 가졌다. P3028 서열/구조물에 의해 야기된 감소된 MTS 염색은 감소된 세포 대사로 인한 것일 수 있다고 주장될 수 있지만; 그러나, 림프구 증식의 두 모델로부터의 결과를 함께 취해보면, 감소된 대사는 타당하게 내인성 티미딘 풀을 감소시켜 증가된 외인성 티미딘의 흡수/티미딘 풀의 비활성을 유발할 것이고, 이어서 이는 증진된 증식으로서 오류 등록될 것이다. ³H-TdR은 이들 실험에서 실제로 감소되었으며, 이는 증식의 억제를 나타낸다. 따라서, 3028 서열을 포함하는 펩티드가 IL-2 매개 면역 세포 증식을 효과적으로 억제하였다는 것이 확인되었다.

이어서 P3028의 C- 및 N-말단 부분을 포괄하는 펩티드 단편이 합성되었고, 면역 세포의 IL-2 유도된 증식을 억제하는 이들 펩티드 (개별적으로 및 조합으로)의 능력이 분석되었다 (실시예 6 참조). P3028의 N-말단 단편 (즉, 아미노산 서열 VFDEFKPLVE (서열 186)를 갖는 P3325) 및 P3028의 C-말단 단편 (즉, 아미노산 서열 EPQNLIK (서열 187)를 갖는 P3218))이 합성되었다. P3028의 이들 2개 단편 (단독으로 또는 조합으로)의 억제 활성은 P3028보다 더 약했고 (도 12 참조), 3028의 펩티드 단편은 IL-2 유도된 증식에 대한 P3028의 효과를 억제하지 않는다는 것 (도 13 참조)이 결정되었다.

이어서, P3028 서열/구조물 서열을 포함하는 펩티드는 IL-2 수용체와 상호작용할 뿐만 아니라 LFA-1 수용체와 상호작용하는 것으로 결정되었다. 실험의 제1 세트에서, P3028 펩티드는 인간 면역 세포 상의 LFA-1 수용체에 대한 LFA-1 특이적 모노클로날 항체의 결합을 조절할 수 있는 능력을 갖는 것으로 밝혀졌다 (실시예 7 참조). 이 LFA-1 특이적 모노클로날 항체는 IL-2 유도된 면역 세포 증식의 강력한 억제제이다 (문헌 [Vyth-Dreese et al., Eur. J. Immunol. 12:3292-3299 (1993)] 참조). 표준 면역조직화학적 염색 절차는 P3028 펩티드의 존재 및 부재 하에서 사용되었다. 간략하게, 건강한 개체 및 암 환자로부터의 면역 세포 (PBMC)가 비교되었다. 세포는 아세톤을 이용하여 고정되고, P3028이 있는 또는 없는 10% 인간 AB-혈청에 의해 차단되고, 모노클로날 항-LFA-1 항체 및 2차 항체와 함께 인큐베이션된 후에, 패스트 레드(Fast Red)를 사용하여 색 발현이 이어졌다. 도 16A에 도시된 바와 같이, 약한 염색 (5)을 나타낸 진행성 암을 가진 환자로부터의 PBMC와 달리, 분명한 막 염색 (3)이 건강한 대조군 샘플로부터의 PBMC 상에서 발견되었다. 그러나, 이 암 환자로부터의 PBMC가 3028 구조물에 특이적인 항체와 함께 24시간 동안 인큐베이션되었을 때, 막 염색 (3)이 출현하였으며, 이는 항체가 3028-구조물에 결합하여 LFA-1을 비차단시킨다는 것 (도 16C 참조) 및 하기 논의를 나타낸다.

P3028 서열/구조물이 IL-2에 대한 면역 세포의 증식 반응을 유의하게 억제하였기 때문에, CD25에의 IL-2의 결합에 대한 P3028 서열/구조물의 효과가 연구되었다. CD25 및 IgG의 Fc-부분의 융합 단백질을 단백질 G 코팅된 마이크로-플레이트 / ELISA 플레이트에 결합시키고, 플레이트를 P3028의 존재 또는 부재 하에서 비오티닐화 IL-2와 함께 인큐베이션하였다. 놀랍게도, CD25에 대한 IL-2의 결합은 P3028의 존재에 의해 증진되었으며, 이는 IL-2, CD25 및 P3028 사이의 3-부분 상호작용의 증거를 제공한다 (도 18a-b 참조). CD25에 대한 IL-2의 결합이 증진될지라도, P3028 서열/구조물이 IL-2 유도된 증식의 강력한 억제제이므로, 고친화도 수용체 및/또는 신호 전달의 적절한 조립이 차단된다. 컴퓨터-보조 분자 모델링을 사용하여, P3028 서열/구조물이 CD25에 IL-2 결합 부위에서 결합하는 것으로 결정되었다 (도 19 참조). 이들 결과는 P3028 서열/구조물이 LFA-1 수용체 및 IL-2 수용체 둘 다에 결합하기 때문에 적어도 이중 면역조절 능력을 갖는다는 보다 큰 증거를 제공한다.

NK-세포 세포독성에 영향을 미치는 특정 알부민 단편의 능력이 또한 평가되었다. 이들 실험에서, 알부민 단편에 상응하는 합성 펩티드 (P3028, P3026 및 P3027) (각각 서열 185, 183 및 184)가 제조되었고, K562 표적 세포의 용해 양이 평가되었다 (실시예 4 참조). 억제는 대조군 샘플 펩티드 P3027의 존재 하에서는 보이지 않았지만, P3028의 존재 하에서는 보였으며, 보다 적은 정도로 P3026은 NK-세포 세포독성의 감소를 야기하였다 (도 9a-b 참조). 따라서, P3028의 서열을 갖는 펩티드는 NK-세포 세포독성을 효과적으로 억제한다.

백혈구 확산 및 면역 세포 이동을 억제하는 특정 알부민 단편의 능력이 또한 분석되었다. 간략하게, 백혈구 연층 세포를 헤파린첨가 혈액으로부터 덱스트란 보조 침강에 의해 제조하였다. 이어서, 이들 세포를 PBS 중에서 2회 세척하고 깨끗한 슬라이드로 옮겼다. 세포를 유리 표면에 강하게 부착시키고 확산시켰지만; 그러나, 이들 세포를 15분 동안 10μg/ml 농도의 P3028으로 예비-처리한 것이 면역 세포 확산을 효율적으로 억제하였다 (실시예 5 참조). 유사하게, PBMC 이동에 대한 P3028의 영향은 보이덴 챔버 기술을 사용하여 연구되었다 (실시예 5 참조). 도 11에 도시된 바와 같이, P3028은 면역 세포 이동의 강력한 억제제이다 (p<0.002).

P3028 서열/구조물을 갖는 단백질에 특이적인 항체가 제조되고, 정제되고, 특징화된다 (실시예 9 참조). P3028에 특이적인 폴리클로날 항체는 토끼 또는 염소에서 생성되었다. 간략하게, 토끼는 P3028로 면역화되고, 특이적 항체는 P3028을 사용하여 친화도 정제되었다. 이들 항체는 P3325 (N-말단 단편 서열 186)에 결합하였지만 P3218 (P3028의 C-말단 단편 (서열 187))에는 결합하지 않는 것으로 밝혀졌다.

실험의 다음 시리즈에서, 악성 종양 (예를 들어, 악성 흑색종, 신세포 암종 및 결장직장암)에서의 P3028의 발현이 친화도 정제된 토끼 항-3028 항체를 사용하는 면역조직화학적 염색에 의해 확인되었다 (실시예 9 참조). 악성 흑색종, 신세포 암종 및 결장직장암 조직 슬라이스의 면역조직화학적 염색은 P3028 서열 함유 분자가 암 세포 상에 폭넓게 발현 및/또는 국재화된다는 것을 보여주었다. 이들 결과는 웨스턴 기술을 사용하여 악성 흑색종 전이로부터 제조된 종양 추출물에서 3028-구조물을 입증한 것에 의해 추가로 지지되었다 (실시예 1 참조). 주목할만한 3028 구조물 (대략, 66kD보다 약간 더 큼)이 웨스턴 블롯에 의해 확인되었지만, 3028 서열 또한 전체 크기 알부민 및 보다 큰 분자에서 검출되었다 (도 2 참조). 이들 결과는 3028 구조물을 포함하는 분자가 단백질분해 단편화, 뿐만 아니라 변성에 의해 생성된다는 증거를 제공한다. 따라서, P3028 서열 및/또는 이 서열을 포함하는 분자는 종양 조직에 존재하고/거나 이에 국재화되는 것으로 결정되었다.

이어서, ELISA 기술이, 3028 서열을 포함하는 단백질 및 펩티드가 인간 혈청에 존재했다는 것을 확인하는데 사용되었다. 간략하게, 샌드위치 검정을 사용하였으며, 여기서 친화도 정제된 항-3028 항체를 고 단백질 결합 ELISA 마이크로웰 (포획 항체) 상에 코팅한 다음, 증가하는 농도의 P3028와 섞은 열-불활성화 혈청의 1% 용액을 웰에 첨가하였다. 세척 후에, 비오티닐화 마우스 항-인간 알부민 모노클로날 항체를 첨가하고, 결합된 항체의 양을 HRP-접합 스트렙타비딘 및 TMB 발색체 기질로 검출하였다 (실시예 1 참조). 혈청 농도는 5개의 건강한 대조군 샘플로부터의 1개의 혈청 풀, 1개의 건강한 대조군 샘플 혈청 및 암 환자로부터 수득된 2개의 혈청에서 1.2-1.6 μg/ml P3028 당량의 범위 내인 것으로 밝혀졌다. 3028 함유 분자의 양은 샌드위치 ELISA에서 포획 항체 (3028 에피토프에 대해 지시된 것)에 대한 혈청 중의 3028 구조물의 결합의 50%를 억제하는 P3028의 양으로 결정되었다 (도 3 참조). 혈청 중 이들 3028-물질의 양은 알부민의 분자량이 P3028의 것보다 약 35배 더 크므로 상당히 더 많을 수 있지만, 그의 에피토프 특이적 반응성은 상기 기재된 방법을 사용하여 정확하게 결정된다.

이어서, P3028 서열/구조물에 특이적인 제1 부류의 억제제를 사용하여 실험이 수행되었다. IL-2 유도 후에 건강한 개체 및 암 환자로부터의 인간 면역 세포의 증식 반응이 P3028 서열/구조물에 특이적인 항체의 존재 및 부재 하에서 분석되었다 (실시예 9 참조). 즉, 신세포 암종을 갖는 환자 및 악성 흑색종을 갖는 환자로부터의 PBMC의 증식 반응이 P3028 서열/구조물에 특이적인 항체의 존재 및 부재 하에서 건강한 개체로부터 수득된 PBMC의 증식 반응과 비교되었다. P3028 서열/구조물에 특이적인 항체의 존재 하에서, IL-2 유도 후에 PBMC의 증진된 증식이 보인 것으로 결정되었다. 즉, P3028 서열/구조물에 대한 항체 억제제는 P3028 서열/구조물에 의해 매개되는 면역 세포의 IL-2-유도 증식에 대한 차단을 제거할 수 있었다. 이들 결과는 P3028 서열/구조물에 대한 결합 파트너 (예를 들어, P3028에 특이적인 항체 또는 그의 결합 단편)가 P3028 서열/구조물에 의해 매개되는 면역 억제를 감소시킬 수 있다는 것을 입증한다.

P3028 서열/구조물은 면역계의 강력한 생리학적 억제제이며 면역 활성을 조절할 수 있는 치료 조성물에 대한 가능한 표적이다. P3028 서열/구조물에 대해 지시된 항체는 암-관련 면역억제를 역전시켰으며, 이는 인간 생체외 모델에서 IL-2에 대한 PBMC의 감소된 증식 반응으로서 모델링되었다 (실시예 9 참조). 또한, 이 모델에서의 결과는 암 환자의 전체 생존과 상관관계가 있었다 (실시예 2 참조). 따라서, P3028 서열/구조물에 대한 추가의 결합 파트너 (예를 들어, 펩티드, 시클릭 펩티드, 펩티드모방체, 항체 및 그의 부분)는 P3028 서열/구조물-매개 면역 억제를 억제하는데 유용할 수 있는 것으로 고려되었다.

P3028 서열/구조물에 대한 3종의 펩티드-기반 결합 파트너가 처음에 개발되었고, 용액에서 이들 억제제와 P3028과의 결합 능력이 도 23에 도시된 바와 같이 시험되었다 (실시예 10 참조). 단지 1개의 분자 SCF28만이 생물학적 인간 생체외 모델에서 시험하기에 충분한 용해도를 가졌다. 이 구조물을 기반으로, 제1 약물 후보인 P28R (서열 2)이 개발되었다.

P28R이 P3028에 강하게 결합하였기 때문에, P3028 서열/구조물의 기능을 억제하는 P28R의 능력이 시험되었다. 상기 기재된 바와 같이, β2-인테그린은 면역계의 정상 기능에서 주요 역할을 한다. 그러나, β2-인테그린 LFA-1에 대한 P3028 서열/구조물의 결합은 실질적 면역억제 효과를 갖는다. 상기 입증된 바와 같이 (실시예 7 참조), LFA-1을 염색하는 검정에서, 암 환자로부터의 PBMC의 막 염색은 정상 대조군 샘플과 비교하여 현저하게 감소된다. 그러나, LFA-1의 노출은 암 환자로부터의 PBMC를 억제 P3028 서열/구조물에 대해 지시된 항체와 함께 인큐베이션함으로써 증진될 수 있다 (실시예 7 및 도 16C 참조). 유사하게, 신선한 동결 종양 절편과 펩티드 P28R (서열 2)과의 인큐베이션은 종양 침윤 림프구의 LFA-1을 탈차단시켜 (즉, LFA-1 수용체로부터 결합된 면역조절 펩티드 또는 P3028 구조물을 이탈시킴), 항-CD11a 항체의 증진된 결합을 유발한다 (도 26). 이들 결과는 LFA-1 수용체가 항체에 의한 P3028 구조물의 제거에 의해 탈차단되었다는 것을 제시하였다. P3028 구조물을 억제하는 P28R의 능력을 시험하기 위해, 신선한 동결 종양 절편을 고정 없이 LFA-1 염색 전에 약물 후보인 P28R의 존재 하에서 4-20시간 동안 인큐베이션하였다 (실시예 15 참조). 비교를 위해, 종양 절편을 단지 포스페이트 완충 염수와 함께 인큐베이션하였다. 도 26에 도시된 바와 같이, P28R은 LFA-1 수용체를 효과적으로 비차단시켜 (LFA-1 수용체로부터 결합된 면역조절 펩티드 또는 3028 구조물을 이탈시킴), 이들 세포의 이동 및 세포독성 활성을 가능하게 하는 LFA-1의 기능적 발현을 현저하게 증진시켰다. 따라서, P28R은 LFA-1에 대한 P3028의 결합을 감소시키고, P3028에 의해 매개되는 면역 억제를 효과적으로 억제한다. 본원의 일부 실시양태에 따른 P28 코어 (서열 62)와의 인큐베이션은 또한 LFA-1을 탈차단시키는 것 (예를 들어, LFA-1 수용체로부터 결합된 면역조절 펩티드 또는 3028 구조물을 이탈시킴)으로 고려된다.

이에 따라, P3028의 수용체는 LFA-1 및 IL-2 수용체의 알파 쇄 (CD25)를 포함한다. CD11a (LFA-1의 알파 쇄)에 대한 모노클로날 항체의 결합이 LFA-1의 생리학적 차단제의 가능한 발생, 및 P28R 및 P3028에 대해 지시된 항체의 탈차단 활성을 연구하는데 사용되었다. 따라서, LFA-1 수용체와 유사하게, IL-2 수용체는 본원에 기재된 바와 같은 면역조절 펩티드 억제제에 의해 탈차단될 수 있는 것 (예를 들어 결합된 면역조절 펩티드 또는 3028 구조물이 IL-2 수용체로부터 이탈될 수 있음)으로 추가로 고려된다. 이에 따라, 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 면역조절 펩티드 억제제는 IL-2 수용체, 예를 들어 표 1-4에 열거된 펩티드 중 어느 1종 이상 (예를 들어 서열 185를 포함하는 펩티드)에 의해 차단된 IL-2 수용체를 탈차단시킨다.

건강한 대조군으로부터의 PBMC를 P3028 (도 15 및 17) 또는 암 환자 혈청 (도 17)과 인큐베이션하는 것은 LFA-1에 대한 항-CD11a 항체의 결합을 차단한다. 또한, 진행성 암 환자로부터의 PBMC를 P3028에 대해 지시된 항체와 인큐베이션하는 것은 LFA-1에 대한 항-CD11a 항체의 결합을 되돌린다 (도 16). P3028은 PBMC에 결합할 수 있다 (첨가된 펩티드가 부재함을 도시하는 도 15A 및 펩티드 3028과의 예비인큐베이션을 도시하는 도 15B 참조; 항-LFA-1 mAb HI111은 펩티드 3028과의 예비인큐베이션에 의해 억제되었으며, 이는 단핵 혈액 세포에 대한 펩티드 3028의 결합을 나타낸다).

P28R이 P3028 서열/구조물에 의해 억제된 LFA-1 수용체를 탈차단시키기 때문에 (예를 들어 LFA-1 수용체로부터 결합된 면역조절 펩티드 또는 3028 구조물을 이탈시킴), 면역 자극을 증진시키는 P28R의 능력이 인간 생체외 모델에서 시험되었다. PBMC에 대한 P28R의 자극 활성을 7개의 건강한 대조군 샘플 및 7명의 다양한 진단의 암 환자에서 MTS 또는 CFSE 기술을 사용하여 측정하였다 (실시예 13 참조). 다른 유형의 자극의 부재 하에서도, P28R은 7명의 암 환자 중 6명에서 유의한 자극 활성을 갖고; 반면에 대조군 샘플로부터의 PBMC는 단지 약한 자극 또는 자극 부재를 보여주었다 (실시예 13 참조). 상기 암 관련된 면역억제를 역전시키기 위한 P3028에 대해 지시된 항체의 효능에 대한 연구와 유사하게 (실시예 9 참조; 도 22 참조), IL-2 수용체를 비차단시켜 면역 세포 증식을 유도하는 P28R 억제제의 능력이 조사되었다. 4개의 상이한 처리 나이브 환자로부터의 PBMC의 배양물을 각각 P28R로 처리하고, PBMC의 증식을 측정하였다. P28R 처리 전에 높은 증식 활성을 갖는 PBMC는 약물에 의해 큰 영향을 받지 않았지만 (도 24c 및 도 24d 참조), 낮은 초기 증식을 갖는 PBMC는 현저하게 자극되었다 (도 24a 및 도 23b 참조; 실시예 13 참조). 따라서, P28R 억제제는 추가의 자극의 부재 하에서도, 면역 세포가 P3028 서열/구조물에 의해 결합되고 억제될 때, 면역 세포 증식을 효과적으로 유도한다.

암 세포에 P3028 구조물이 풍부화되어 있는 것으로 나타났기 때문에 (실시예 1 및 도 1-2 참조), 암 세포에 특이적으로 결합하는 P28R의 능력이 조사되었다. 종양에 대한 비오티닐화 P28R의 결합이 연구되었다. 3개의 유방암, 2개의 신세포 암종 및 4개의 악성 흑색종이 분석되었다. 주목할만하게, 실험에서 분석된 모든 상이한 유형의 종양이 P28R에 결합하였다. 도 25에 도시된 염색된 유방암 절편은, 예를 들어 강한 양성 신호를 나타내며, 이는 종양에서 억제 P3028-구조물의 존재 및 이 종양에 결합하는 P28R의 능력을 나타낸다 (실시예 14 참조).

P3028-구조물은 림프구 이동뿐만 아니라 세포독성 활성을 억제하기 때문에 (실시예 4 및 5 참조), 양성-염색 종양 영역에 대한 면역계 매개 공격은, P3028-함유 구조물이 존재하고 P3028 서열/구조물에 대한 결합 파트너 (예를 들어, 항체, 그의 결합 단편, 및/또는 억제 펩티드, 예컨대 P28R 또는 P28R 구조물에 상응하는 펩티드모방체)에 의해 격리되지 않는 한, 효율적으로 억제될 것으로 예상된다. P3028이 LFA-1 수용체에 강하게 결합한다는 관찰과 일치하게, 림프구는 이 절차에 의해 염색되지 않았는데, 이는 P3028 구조물이 이들 세포 상의 LFA-1에 결합함으로써 차단되었기 때문이다.

P3028 서열/구조물에 결합하고 LFA-1 수용체를 비차단시키고 P3028 서열/구조물-의존성 면역억제를 개선하는 P28R의 능력을 기반으로, P3028에 결합하고 그를 격리시키는 추가의 화합물을 확인하기 위한 주형 화합물로서 P28R을 사용하였다. P28R 구조물의 변이체를 합성하고, PEPSCAN 기술을 사용하여 P3028에 결합하는 능력에 대해 시험하였다 (실시예 12 참조). P28R의 각 아미노산 위치에서의 각 유전자-코딩된 아미노산 치환 (즉, 각 위치에 대해 19개의 치환)을 포함하는 펩티드의 라이브러리를 합성하였다. 각 펩티드를 지지 핀에 고정시키고, 펩티드 라이브러리를 P3028과 함께 인큐베이션하였다. P3028에 대한 후보 억제제의 결합은 샌드위치 ELISA 검출하였으며, 여기서 토끼 항-마우스 퍼옥시다제 (rampo) 2차 항체를 사용하였다 (실시예 12 참조). 이어서, 각 펩티드의 결합에 rampo 점수를 배정하였다 (도 27 참조). 펩티드 P28R은 rampo 값이 약 262 내지 460이었으며 평균 값은 370이었다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 면역조절 펩티드 억제제가 목적하는 P3028 결합 rampo 점수를 위해 선택된다. 일부 실시양태에서, 목적하는 P3028 결합 rampo 점수는 P28R의 rampo 점수 이상이다. 또한, P28R보다 더 적은 친화도로 P3028에 결합하는 일부 펩티드는 치료 용도를 갖는 것으로 고려된다. 예를 들어, P28R보다 더 적은 결합 친화도를 갖는 일부 펩티드는 P3028에 대한 친화도가 적다는 사실에 의해 P28R과 상이하게 신호 전달 사건을 조절할 수 있다. 따라서, 실시양태는 또한 P3028에 결합하는 임의의 펩티드를 포함하며, 여기서 상기 펩티드는 P28R에 의해 나타내어지는 rampo 점수 미만인 rampo 점수를 갖는다. 따라서, 고려되는 실시양태는 P3028에 임의의 친화도로 결합하는 펩티드 (예를 들어, 표 5.1에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 바람직하게는 면역계를 조절하는 펩티드 (예를 들어, 면역계 또는 면역억제의 마커를 조절, 상향조절 또는 하향조절하는, 예컨대 면역 세포 증식, 확산, 이동, 또는 NK-세포 세포독성의 P3028-매개 억제를 감소시키는 펩티드))를 포함한다.

펩티드 P28R의 총 31개 치환 (서열 3-33)은 500 초과의 rampo 값을 가지며 (도 28 참조), 이는 이들 31개 펩티드 (P3028에 대한 강한 결합 파트너)가 P3028에 효율적으로 결합하고 그를 격리시켜 P3028-매개 면역억제를 감소시키는데 사용될 수 있는 것을 나타낸다. 표 6.1은 검정에서 평가되어 P3028에 대한 주목할만한 결합을 갖는 것으로 나타난 이들 31개 펩티드를 열거한다. 추가로, 각 위치에서의 치환된 펩티드의 결합 강도 (rampo 점수를 기준으로 함)는 동일한 위치에 대한 P28R (서열 2) 대조군 샘플의 결합 강도와 비교되었다 (실시예 12 참조). P28R 대조군 샘플의 rampo 점수와 실질적으로 동일하거나 그 초과인 rampo 점수를 갖는 결합된 펩티드 (즉, P28R 대조군 샘플의 rampo 점수의 적어도 98%를 갖는, P3028에 결합하는 펩티드)가 확인되었다 (서열 268-393). 표 6.2는 P3028에 대한 주목할만한 결합을 갖는 것으로 나타난 이들 126개 펩티드를 열거한다. 이들 126개 펩티드는 표 6.1의 31개 펩티드를 포함한다는 것을 주목한다. 따라서, P3028에 대한 126개의 상이한 결합 파트너는 이 초기 스크린에 의해 확인되었고, 이들 분자 또는 그의 변이체 (예를 들어, 이들 결합 파트너에 상응하는, D 아미노산, N-말단 아미드 및/또는 C 말단 아세틸 기를 갖는 변이체 또는 펩티드모방체 또는 압타머)는 면역 세포에 대한 P3028 서열/구조물의 결합을 억제하여 P3028-의존성 면역억제를 완화 또는 감소시키는데 사용될 수 있다. 단지 C-말단 아르기닌만이 결핍된 P28R의 한 변이체인 펩티드 KKL15 (서열 1)는 하전된 및 소수성 상호작용 둘 다를 통해 P3028 서열/구조물에 결합하는 것으로 생각된다. 도 31에 도시된 바와 같이, KKL15의 양으로 하전된 아미노산은 P3028 상의 음으로 하전된 아미노산과 상호작용하고, 소수성 아미노산은 상호작용을 증진시키는 소수성 접촉을 생성한다.

P28R의 P3028 결합 도메인을 추가로 맵핑하기 위해, P28R의 결실 및 말단절단을 맵핑하고, PEPSCAN 검정을 사용하여 P3028에의 결합에 대해 시험하였다. 이 접근법은 P3028에 대한 보다 많은 결합 파트너의 개발로 이어졌다. 잔기 6-9 ("FFVK" - 서열 182) 및 C-말단 아미노산의 결실은 rampo 점수를 기준으로 P3028에 대한 펩티드의 결합을 감소시키는 경향이 있는 반면 (실시예 12 및 도 30 참조), 펩티드 P28R의 여러 결실 및 말단절단은 펩티드 P28R에 필적하거나 그 보다 높은 rampo 점수를 갖는다 (예를 들어, 서열 34, 64-66, 68 및 76 참조). 추가로, P28R의 N-말단으로부터 적어도 8개의 아미노산이 결실된 펩티드 (예를 들어, 서열 46-53 참조)는 rampo 점수에 의해 측정된 바와 같이 P3028에 대한 고 치환도를 보유하였으며, 이는 P28R보다 작은 억제제가 P3028에 결합하고 그를 격리시켜, P3028과 면역 세포 수용체, 예컨대 IL-2 또는 LFA-1 수용체와의 상호작용을 방지함으로써, P3028-유도된 면역억제를 감소시키는데 유용할 수 있다는 증거를 제공한다.

P28R이 면역 세포 증식의 IL-2 자극에 대한 조절 효과를 갖는 것으로 나타났기 때문에 (실시예 2 참조), P28R이 면역 세포의 IL-2 자극의 다른 측면에 대한 조절 효과를 가질지의 여부가 추가로 조사되었다. 8개의 건강한 대조군 샘플 및 9명의 다양한 진단을 갖는 암 환자로부터의 PBMC를 다양한 용량의 P28R (또한 "P28R 부재" 대조군 샘플 또는 5μg/mL, 10μg/ml 또는 20μg/ml의 P28R)의 존재 하에서 7일 동안 실시예 2의 생체외 모델의 변형된 버전으로 배양되었다. MTS의 전환으로서 측정된 미토콘드리아 대사의 용량 의존성 자극은 8개의 대조군 샘플 중 5개 (도 33a 참조) 및 9명의 암 환자 중 9명 (도 33b 참조)에서 관찰되었다. PBMC가 단지 3일 동안만 배양되었을 때도 유사한 결과가 얻어졌다 (실시예 28 참조).

다른 면역조절 펩티드 억제제의 유효성을 확인하기 위해, MTS 전환을 기반으로 미토콘드리아 대사에 대한 P28R (서열 2)의 효과를 밀접하게 관련된 펩티드 P27의 효과와 비교하였다. P27은 서열 KKLDTFFKKLSLFTER (서열 264)을 가지며, P28R의 V8이 P27에서는 K8로 치환되어 있다는 점에서 상이한 P28R의 변이체이다. P28R은 P27보다 더 효율적으로 P3028에 결합한다 (P27은 253의 rampo 점수로 P3028에 결합하고, 반면에 P28R 대조군 샘플은 308의 rampo 점수로 P3028에 결합한다; 실시예 12 참조). 농도는 비처리 대조군 샘플, 5μg/mL ("SCF28-R5" 및 "SCF275"), 10μg/ml ("SCF28-R10" 및 "SCF2710"), 20μg/ml ("SCF28-R20" 및 "SCF2720") 또는 40μg/ml ("SCF28-R40" 및 "SCF2740")였다. 결과는 도 34에 도시되어 있다. P28R이 용량-의존성 방식으로 암 환자의 세포를 자극한 반면에, P27은 어떠한 효과도 없었다 (실시예 29 참조).

IL-2 유도된 증식에 대한 P28R (서열 2)의 효과는 또한 BrdU 혼입 검정으로 측정되었다. 6개의 건강한 대조군 샘플 및 10개의 암으로부터의 PBMC는 생체외 모델의 변형된 버전으로 수거되었다. 6개의 대조군 샘플 중 4개는 10개의 암 환자 샘플 중 4개와 비교하여 IL-2에 대한 높은 증식 반응을 가졌다 (도 35 참조). PBMC에서의 IL-2에 대한 증식 반응에 있어서 이들 차이는 IL-2 자극에 대한 고 반응자 및 저 반응자의 차이의 존재를 입증하였다 (실시예 30 참조).

다양한 용량의 P28R에 대한 고 반응자 및 저 반응자의 반응을 비교하였다. 고 반응자 또는 저 반응자로부터의 세포를 다양한 용량의 P28R과 배양하였다 (도 36a 및 36b 참조). IL-2-유도된 증식을 BrdU 혼입으로서 측정하였다. P28R이 IL-2에 대한 고 반응을 갖는 환자로부터의 세포에서 어떠한 자극 효과도 갖지 않은 반면에 (N=4) (도 36a 참조), P28R은 IL-2에 대한 저 반응을 갖는 환자로부터의 세포에서 자극 효과를 가졌다 (N=6) (도 36b 참조). 따라서, P3028에의 결합 및 P3028의 면역억제 활성의 차단에 대한 P28R의 효과를 생체외 모델에서 입증하였는데, 배양물에의 P28R의 첨가는 건강한 대조군 및 암 환자로부터의 PBMC에 정상 증식률로 첨가될 때에는 증식에 대해 효과를 갖지 않았지만, 면역억제된 암 환자로부터의 PBMC의 증식은 P28R에 의해 유의하게 자극되었다. 어떠한 이론에 제한되지는 않지만, 일부 실시양태에서, P28R (서열 2) 또는 P28 코어 (서열 62)는 면역 세포 증식의 차단제에 결합하고, 면역 세포 증식을 유도한다.

이어서, BrdU 혼입에 의해 측정된 바와 같이 IL-2 유도된 증식에 대한 P28R (서열 2)의 효과와 P27 (서열 264)의 효과를 비교하였다. 저 반응자 암 환자로부터의 PBMC는 펩티드 부재 ("비처리 세포")에서부터 5μg/mL, 10μg/ml 또는 20μg/ml의 범위인 다양한 농도의 P28R 또는 P27을 가졌다. 도 37에 도시된 바와 같이, P28R 및 P27 둘 다는 BrdU 혼입에 의해 측정된 바와 같이 IL-2에 의해 유도된 PBMC의 증식률을 증진시켰다. 도 37에 도시된 결과를 도 34의 것과 비교할 때, P27은 BrdU 혼입에 의해 측정된 바와 같이 세포 증식의 IL-2 자극을 증진시켰지만, MTS 전환에 의해 측정된 바와 같이 미토콘드리아 대사는 증진시키지 않은 것으로 관찰되었다. 다른 한편으로는, P28R은 IL-2 자극에 반응하여 MTS 전환 및 BrdU 혼입 둘 다를 증진시킨 것으로 관찰되었다 (실시예 31 참조).

BrdU 혼입 및 MTS 전환에 대한 상이한 면역조절 펩티드 억제제의 상이한 효과를 추가로 조사하였다. 면역 세포 증식의 IL-2 자극에 대한 P28R의 효과는 어느 검정이 사용되었는지에 따라 현저하게 상이하였다 (도 38 참조). 펩티드 P28R은 검사된 암 환자의 100% (N=9) 및 검사된 건강한 대조군 샘플의 63% (N=8)에서 PBMC의 7일 배양물에서 MTS 전환의 자극 활성을 가지고 있었다. 대조적으로, P28R은 단지 17% (N=6) 및 20% (N=10)의 환자로부터의 PBMC의 7일 배양물에서 BrdU의 혼입을 자극하였다. P28R은 IL-2에 대한 낮은 증식 반응을 갖는 암 환자로부터의 PBMC 배양물에서, BrdU의 혼입으로서 측정된 IL-2 유도된 증식을 자극하였다. 다른 한편으로는, 검사된 건강한 대조군 샘플의 67% (N=3) 및 암 환자의 50% (N=4)로부터의 PBMC는, 효과를 MTS 전환으로서 측정하였을 때 IL-2에 의해 자극되지 않았다 (실시예 32 및 도 38 참조). 그러나, MTS로 측정하였을 때 반응하지 않았던 모든 이들 사람 ("비-반응자")으로부터의 PBMC는, 효과를 BrdU의 혼입으로서 측정하였을 때 IL-2에 의해 유의하게 자극되었다 (도 38 참조). 2명의 환자에서, BrdU 혼입으로서 측정된 IL-2에 대한 반응은 P28R에 의해 증진되었지만 (도 38a 및 38c 참조), 그러나 P28R의 이 효과는 MTS 전환이 사용되었을 때는 이들 환자 중 1명에서만 관찰되었다 (도 38b 참조). 따라서, 1명의 환자에서 (도 38a 및 38b 참조) IL-2의 자극 활성은 BrdU 및 MTS 둘 다를 사용하여 등록되었고, 다른 환자에서 IL-2의 자극 활성은 단지 BrdU를 사용하여 등록되었다 (도 38c 참조) (실시예 32 참조). 이들 관찰을 기반으로, MTS 전환으로서 측정된 대사 활성에 대한 효과가 BrdU의 혼입으로서 측정된 DNA 합성과 항상 상관관계가 있는 것은 아니고, 상이한 환자 집단이 면역조절 펩티드의 억제제에 상이하게 반응할 수 있다는 것이 고려되었다.

P3028에 결합하는 다른 분자가 확인될 수 있다는 것이 고려되었다. 이들 추가의 결합 분자는 또한 P3028을 잠재적으로 차단할 수 있었다. 루프형 6-량체 펩티드가 합성되었고, P3028에 대한 주목할만한 결합을 입증한 6-량체가 확인되었다 (표 12 참조, 서열 265-267) (실시예 19 참조). rampo 점수를 기준으로 P3028에 대한 가장 강한 결합을 갖는 6-량체 중 2종은 3028에 결합하는 선형 펩티드에 대해 상동성을 갖는다는 것이 관찰되었다 (도 32 참조).

P3028에 추가하여, 여러 다른 알부민 단편 및 합성 펩티드가 면역 세포에 결합하는 것으로 밝혀졌다. 이들 단편 중 일부는 P3028과 유사한 면역조절 활성을 가질 수 있고/거나, P3028과 유사한 면역 세포에 결합할 수 있고/거나, P3028을 인식하는 면역조절 항체에 결합할 수 있다. 실험의 제1 세트에서, 알부민 단편은 트립신 소화에 의해 생성되었고, 트립신 단편은 본원에 기재된 ACS 시스템에서 면역 세포에 결합하는 것으로 밝혀졌다 (실시예 17 참조). 표 1은 MALDI-TOF 분석에 의해 검출된 바와 같이, ACS 시스템에서 면역 세포에 결합하는 트립신-생성된 알부민 단편의 목록을 제공한다.

<표 1> ACS에 결합하는 트립신-생성된 알부민 단편

실험의 제2 세트에서, 변성된 인간 혈청 알부민은 아스파라기나제 (ASN-N)에 의해 분해되었고, 면역 세포와 결합하는 이들 단백질분해 단편의 능력은 ACS 시스템에서 평가되었다. 다시, 면역 세포 결합 펩티드는 MALDI TOF 기술을 사용하여 흡착 및 비흡착 펩티드 용액과 비교함으로써 확인되었다. 이들 펩티드는 표 2에 제시되어 있다.

<표 2> ACS에 결합하는 ASP-N-생성된 알부민 단편

추가로, 여러 합성 펩티드가 표 3에 제시된 바와 같이 합성되었고, ACS 시스템을 사용하여 면역 세포에 대한 이들 분자의 결합이 평가되었다.

<표 3> 합성 알부민 펩티드

추가로, 여러 알부민 단편 펩티드는 면역조절 효과를 갖는 dHSA-특이적 항체 (mAb A)에 특이적으로 결합한다 (실시예 18 참조). 이들 펩티드는 표 4에 제시되어 있다.

<표 4> 모노클로날 항체 mAb A에 결합하는 알부민 펩티드

표 1-4에 열거된 펩티드 중 어느 1종 이상에 대한 억제제는 P3028에 대한 억제제가 생성된 경우와 대체로 동일한 방식으로 생성될 수 있다는 것이 고려된다. 간략하게, 표 1-4에서의 펩티드 중 어느 1종 이상에 특이적인 폴리클로날 및 모노클로날 항체는 면역학에서 통상적인 기술을 사용하여 용이하게 생성될 수 있다. 항체 결합 단편은 또한 면역학에서 통상적인 기술을 사용하여 제조 및 단리될 수 있다. 이들 항체 또는 항체 단편은 본원에 기재된 바와 같이 인간 또는 인간화일 수 있다. 상기 문헌 및 실시예 9 및 10에 기재된 것과 유사한 접근법을 사용하여, 이들 펩티드 억제제는 칩 기반 검정에서 평가될 수 있고, 생화학적 검정, 예컨대 펩티드 억제제의 존재 및 부재 하에서의 면역 세포 증식이 평가될 수 있다. 하기 섹션은 면역조절 펩티드 억제제, 바람직하게는 P3028의 억제제의 개발에 대한 보다 많은 정보를 제공한다.

표 1-4에 열거된 펩티드 중 어느 1종 이상의 억제제가 P28R (서열 2) 또는 P28 코어 (서열 62) 서열의 변형을 포함할 수 있고, 추가로 LFA-1 수용체의 억제를 감소시키는데 또는 면역 세포를 자극하는데 유용할 수 있는 것으로 고려된다. 본원의 일부 실시양태에 따라 억제제 펩티드에 대한 변형을 확인하기 위해, 위치 스캔 데이터가 P3028 (서열 185)의 결합에 대한 P28R (서열 2)의 각 위치에서의 상이한 유형의 아미노산의 치환의 영향을 연구하는데 사용되었다. P28R (서열 2)의 펩티드 서열에서의 각 아미노산은 모든 자연 발생 아미노산과 교환되었고, 고체 상 칩 상에서의 각 펩티드에 대한 P3028 (서열 185)의 결합이 평가되었다 (예를 들어 실시예 36 참조). 본원의 실시양태에 따른 P28R에 대한 수많은 임의적 변경은 표 5.3, 5.4, 5.5, 5.6 및 13에 요약되어 있다. 임의로, 본원의 일부 실시양태에 따른 억제제 펩티드는 표 5.3 또는 표 13의 변형 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 임의로, 억제제 펩티드는 표 5.3에 제공된 바와 같은 위치 2, 5-11 및 15의 중심 코어를 포함하고, 나머지 위치는 생략되거나 실질적으로 임의의 아미노산으로 치환된다. 임의로, 억제제 펩티드는 서열 2의 위치 K2, T5-S11 및 E15의 중심 코어를 포함하고, 나머지 위치는 생략되거나 실질적으로 임의의 아미노산으로 치환된다.

위치 스캔 데이터로부터 "코어 펩티드"인 FFVKLS (서열 62) (또한 본원에서 "P28 코어"로 지칭됨)가 확인될 수 있다는 것을 또한 주목한다. 일부 실시양태에서, P28 코어 (서열 62)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드가 제공된다. 펩티드는 약 30개 이하의 아미노산 잔기, 예를 들어 약 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7 또는 6개 이하의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 코어 펩티드는 표 1-4의 1종 이상의 면역조절 펩티드에 의해 결합된 LFA-1 수용체를 탈차단시킨다 (예를 들어 LFA-1 수용체로부터 결합된 면역조절 펩티드 또는 3028 구조물을 이탈시킨다).

위치 스캔 데이터를 기반으로, 서열 2의 치환은 본원의 일부 실시양태에 따라 P3028에 결합하는데, P3028-매개 억제로부터 LFA-1 수용체를 탈차단시키는데 (LFA-1 수용체로부터 결합된 P3028 펩티드 및 P3028-구조물 함유 분자를 이탈시키는데) 및/또는 면역 세포를 자극하는데 유용할 수 있는 것으로 고려된다. 펩티드 P28R (서열 2) 및 P28R의 변형의 활성은 단기 배양물에 건강한 대조군 인간으로부터의 PBMC를 사용하는 인간 생체외 모델에서 연구되었으며, 이때 PBMC 활성화는 증진된 CD69를 갖는 세포의 백분율로서 측정된다 (실시예 37 참조). P28R (서열 2) 및 펩티드 31135 (KKLDTFFVYLSLFTER) (서열 589)는 이 생체외 모델에서 건강한 PBMC를 직접적으로 자극하지만, 펩티드 30677 (KKLDTFFVKLSLMTER) (서열 583), 30678 (KKLDTFFVKLQLFTER) (서열 584), 30680 (KKLDTVMVKLQLMTER) (서열 585), 30864 (KSLDTFFVKLSLFTER) (서열 587); 30685 (KKLDTFFVKLSLFTFR) (서열 588); 및 31136 (KKLDTFFVNLSLFTER) (서열 590), 및 31138 (KKLDTFFVDLSLFTER) (서열 591)은 이 생체외 모델에서 건강한 PBMC를 자극하지 않았다는 것이 관찰되었다 (도 41a 및 41b 참조). 이에 따라, 일부 실시양태에서, P28R (서열 2), 펩티드 31135 (서열 589) 또는 P28R 및 펩티드 31135의 조합을 포함하거나, 그로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진 조성물이 면역 세포를 직접적으로 자극하기 위해 제공된다. 이에 따라, 일부 실시양태에서, 서열 2, 서열 62, 또는 서열 583-586 또는 587-595 중 임의의 것의 펩티드, 또는 이들 펩티드의 조합을 포함하거나, 그로 본질적으로 이루어진 조성물이 제공된다.

펩티드 31135는 서열 2의 위치 9 및 서열 62의 위치 4에 상응하는 위치에 Y를 포함한다는 것을 주목한다 (표 5.3 및 5.5 참조). 일부 실시양태에서, 서열 2의 위치 9에 Y를 포함하는 P28R의 변형을 포함하는 변형된 펩티드를 포함하거나, 그로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진 조성물이 제공된다. 임의로, 면역 세포는 건강한 면역 세포를 포함할 수 있다. 임의로, 면역 세포는 암 환자 혈청에서의 면역 세포, 예를 들어 암 환자 면역 세포를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 서열 62의 위치 4에 Y를 포함하는 P28 코어의 변형을 포함하는 변형된 펩티드를 포함하거나, 그로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진 조성물이 제공된다. 임의로, 면역 세포는 건강한 면역 세포를 포함할 수 있다. 임의로, 면역 세포는 암 환자 혈청에서의 면역 세포, 예를 들어 암 환자 면역 세포를 포함할 수 있다.

P28R (서열 2)가 P3028에 결합하고, 단기 배양물에, 예를 들어 RPMI + 10% 정상 인간 AB 혈청을 포함하는 배양 배지에 존재할 때 건강한 대조군으로부터의 PBMC를 자극할 수 있는 것과 같이 (실시예 37 참조), 본원의 일부 실시양태에 따른 P28R의 말단절단은 표 1-4에 열거된 펩티드 중 어느 1종 이상의 억제제에 결합하는데 유용할 수 있다는 것으로 고려된다. P28R의 말단절단은 PBMC를 활성화시키는 그의 능력에 대해 평가되었다 (실시예 38 참조). PBMC는 RPMI + 10% 인간 AB 혈청에서 24시간 동안 펩티드 (40μg/mL)와 함께 인큐베이션되었다. PBMC 활성화는 유동 세포측정법을 사용하여 CD69 (도 42a) 또는 CD71 (도 42b)의 증진된 발현을 갖는 세포 퍼센트로서 측정되었다. 도 42a 및 42b에 도시된 바와 같이, 펩티드 P28R (서열 2)은 이 생체외 모델에서 건강한 PBMC를 효과적으로 활성화시켰지만, 펩티드 32251 (서열 592) 및 펩티드 32230 ("P28 코어") (FFVKLS) (서열 62)는 그렇지 않았다. 그러나, PBMC는 또한 개로부터의 암 혈청에서 또는 인간 암 환자로부터의 암 혈청에서 펩티드와 함께 인큐베이션되었다 (도 43 참조). 전장 펩티드 P28R (서열 2) 및 P28 코어 펩티드 (펩티드 32230) (서열 62)는 암 혈청의 존재 하에서 PBMC를 활성화시키는 것으로 관찰되었다. 이에 따라, 본원의 일부 실시양태에 따르면, P28R, P28 코어 또는 이들 펩티드의 조합은 암을 갖는 대상체의 혈청에서 면역 세포를 자극하는데 유용한 것으로 고려된다.

일부 실시양태에서, P28 코어 (서열 62)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드가 제공된다. 임의로, P28 코어 (서열 62)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드는 P3028 펩티드에 결합할 수 있다. P28 코어 펩티드 (서열 62)는 전장 펩티드 P28R만큼 효율적으로 3028 펩티드에 결합할 수 있고, 암 혈청에서 PBMC의 활성화 (예를 들어 증식, CD69 및/또는 CD71의 증진된 발현, IL-12 또는 IFNγ의 분비, 또는 퍼포린 또는 그랜자임 B의 분비, 증진된 세포독성, 세포 이동 또는 시토카인 생산)를 유도할 수 있지만 (실시예 38 및 도 43 참조), PBMC의 단기 배양물을 포함하는 생체외 모델에서 P28 코어 펩티드 (서열 62)는 P28R 펩티드만큼 PBMC 활성화 (CD69 및 CD71)를 자극하지 않는 것으로 관찰되었다 (도 42a 및 42b 참조). 따라서, 일부 실시양태에서, P28 코어 (서열 62)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드는 P28R (서열 2)만큼 효율적으로 또는 실질적으로 효율적으로 P3028 펩티드에 결합한다. 일부 실시양태에서, P3028에 결합하고 세포 수용체를 탈차단시키는 (예를 들어 세포 수용체로부터 결합된 면역조절 펩티드 또는 3028 구조물을 이탈시키는) P28R (서열 2)이 제공된다. 임의로, P28R은 추가로 면역 세포에 대한 직접적 자극 활성을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, P3028에 결합하고 세포 수용체를 탈차단시키는 (예를 들어 세포 수용체로부터 결합된 P3028 펩티드 또는 3028 구조물을 이탈시키는) P28 코어 (서열 62)가 제공된다.

또한 비오티닐화 P28R은 P28R 코팅된 비드의 면역세포화학 또는 로세팅 (세포에 대한 비드의 결합)에 의해 입증된 바와 같이 PBMC에 직접 결합하는 것으로 나타났다. 따라서, 일부 실시양태에서, PBMC에 직접 결합하는 P28R이 제공된다. 일부 실시양태에서, PBMC에 결합하는, 검출가능한 모이어티를 포함하는 P28R이 제공된다. 일부 실시양태에서, PBMC에 결합하는, 독소를 포함하는 P28R이 제공된다. 일부 실시양태에서, 독소 또는 검출가능한 모이어티를 포함하는 펩티드 31135가 제공된다.

암 세포에 대한 P28R (서열 2)의 효과는 누드 및 면역적격 마우스의 생체내 모델에서 추가로 연구되었다. P28R은 누드 마우스의 이종이식편 모델에서 인간 췌장암 내로 종양내로 주사되었고, 1일 후에 종양 세포 아폽토시스를 유도하였다 (실시예 39 참조). 진행중인 아폽토시스의 마커인 P28R 유도된 카스파제 3은, 단지 약물 용매만을 사용한 종양의 처리 동안에 카스파제 3을 유도하지 않았다 (도 44a 및 44b 참조). 일부 실시양태에서, P28R (서열 2)은 종양 세포, 예를 들어 전립선암 세포에 대한 직접적 세포독성 작용을 갖는다. 일부 실시양태에서, 표 5.3의 펩티드 또는 표 5.2의 적어도 하나의 변형을 포함하는 변형된 P28R 펩티드는 종양 세포, 예를 들어 전립선암 세포에 대한 직접적 세포독성 작용을 갖는다.

P28R이 면역자극 효과를 갖는 것으로 관찰됨에 따라 (예를 들어 실시예 37 참조), 면역계를 활성화시키는 P28R (서열 2)의 능력이 또한 평가되었다. 100 마이크로리터 중 40 마이크로그램의 P28R이 B16 흑색종-접종된 면역적격 마우스인 C57Bl의 B16 흑색종 내로 종양내로 주사되었다 (실시예 40 참조). 종양은 3일 후에 취해지고, 절편은 폴리클로날 토끼 항-CD45 항체를 사용하는 면역조직화학적으로 염색되었다. CD45 면역염색 (450)에 의해 나타내어진 바와 같이, P28R 처리 후 종양 내 우세한 세포는 염증 세포였다 (도 45a 참조). 염색 (452)은 동일한 농도의 토끼 IgG와 함께 인큐베이션된 대조군 종양 절편에서는 관찰되지 않았다 (도 45b). 일부 실시양태에서, P28R (서열 2), P28 코어 (서열 62), 서열 586 또는 589의 펩티드, 또는 표 5.2의 적어도 하나의 변형을 포함하는 변형된 P28R 펩티드가, 예를 들어 종양 세포에 대한 면역 반응을 지시하기 위해 면역계를 활성화시킬 수 있는 것으로 고려된다. 일부 실시양태에서, 열거된 펩티드 중 1종 이상이 종양에 또는 종양 근처에 투여된다. 일부 실시양태에서, 열거된 펩티드 중 1종 이상은 종양주위로 투여된다. 일부 실시양태에서, 열거된 펩티드 중 1종 이상은 전신으로 투여된다.

P28R의 변형이 면역 세포 자극에 유용할 수 있는 것으로 고려됨에 따라, 면역자극 효과에 대한 P28R에 대한 다양한 아미노산 치환 및 부가의 영향이 추가로 연구되었다. 건강한 대조군 사람으로부터의 PBMC의 활성화에 대한 변형된 펩티드의 효과가 평가되었다 (실시예 41 참조). PBMC는 RPMI + 10% 인간 AB 혈청에서 48시간 동안 펩티드 (40μg/mL)와 함께 인큐베이션되었고, PBMC 활성화는 증진된 마커 CD69 또는 CD71을 갖는 세포의 백분율을 기반으로 유동 세포측정법에 의해 결정되었다. 펩티드 P28R (서열 2), P28 코어 (펩티드 32230) (서열 62), 32251 (KKLDTFFPKLSLFTER) (서열 592), 32814 (RKLDTFFVKLSLFTERRR) (서열 586), 32815 (KKLDQFFVKLSQHNER) (서열 595), 32665 (KKLDTFMVKLSQHTER) (서열 593) 및 32819 (KKLDTFFVKLSLFTER(C(PEG24))) (서열 594)가 시험되었다. 도 46에 도시된 바와 같이, 펩티드 32814 (서열 586)는 CD69 증진 (도 46a 참조) 및 CD71 증진 (도 46b 참조) 둘 다에 대해 P28R (서열 2)의 경우와 유사한 단기 배양물에서의 자극 효과를 가졌다 (배치 CS8040). 따라서, 본원에서 예상된다.

치료 용도에 추가하여, P28R 및 그의 말단절단 및 변형의 진단 용도가 또한 고려된다. 예를 들어, 환자 전신 및 국부 (종양내) 면역 상태에 관한 정보는 P28R 또는 그의 말단절단 또는 변형을 포함하는 시약을 사용하여 얻을 수 있다.

종양 내 면역억제 3028-구조물의 발생은 P3028에 대해 지시된 항체를 사용하거나 또는 표지된 P28R (서열 2) 또는 P28 코어 (서열 62), 예를 들어 비오티닐화 P28R 또는 P28 코어를 사용하는 면역조직화학적 염색에 의해 확인할 수 있는 것으로 고려된다. 도 47은 비오티닐화 P28R을 사용하여 염색된 인간 유방암의 2개 영역을 도시한다. 염색 (470)이 도 47b에서 관찰된다. 염색은 도 47a에서는 관찰되지 않는다. 염색의 부재는 (472)로 나타나 있다.

이에 따라, P3028 구조물을 포함하는 종양의 영역 (뿐만 아니라 이들 구조물을 포함하지 않는 영역)은 본원의 실시양태에 따라 표지된 펩티드를 사용하여 확인될 수 있다. 일부 실시양태에서, 서열 2, 서열 62, 서열 584의 펩티드, 표 5.4에 열거된 펩티드, 또는 표 5.3 또는 표 13에 열거된 하나 이상의 변형을 포함하는 변형된 P28R 또는 P28 코어 펩티드가 제공되고, 이는 추가로 검출가능한 모이어티를 포함한다. 검출가능한 모이어티를 포함하는 펩티드는 표 1-4의 1종 이상의 면역조절 펩티드, 예를 들어 P3028 (서열 185)에 결합할 수 있다.

면역억제 개선

본원에 기재된 면역조절 펩티드의 억제제가 면역억제를 제거하는데 유용할 수 있으므로, 본원의 일부 실시양태는 면역억제를 개선하거나, 그의 증상을 감소시키거나, 면역억제를 감소시키거나 또는 치료하는 방법을 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역억제를 앓고 있는 대상체가 확인된다. 대상체는 인간 또는 비-인간 포유동물을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 면역조절 펩티드의 억제제 중 적어도 1종을 포함하는 조성물이 환자에게 투여될 수 있다. 조성물은 서열 1-33, 34, 46-53, 62, 64-66, 68, 76, 94-96,98, 265-393, 583-586, 587-595 중 어느 하나를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 적어도 1종의 펩티드, 또는 표 5.3 또는 표 13의 변형 중 하나 이상을 포함하는 변형된 P28R 또는 P28 코어 펩티드를 포함할 수 있다. 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산의 길이, 또는 이들 숫자 중 임의의 2개 사이의 범위에 의해 한정된 길이를 가질 수 있다. 임의로, 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 완충제, 예를 들어 트리즈마, 비신, 트리신, MOPS, MOPSO, MOBS, 트리스, 헤페스, HEPBS, MES, 포스페이트, 카르보네이트, 아세테이트, 시트레이트, 글리콜레이트, 락테이트, 보레이트, ACES, ADA, 타르트레이트, AMP, AMPD, AMPSO, BES, CABS, 카코딜레이트, CHES, DIPSO, EPPS, 에탄올아민, 글리신, HEPPSO, 이미다졸, 이미다졸락트산, PIPES, SSC, SSPE, POPSO, TAPS, TABS, TAPSO 또는 TES를 추가로 포함할 수 있다. 임의로, 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 분해성 입자를 추가로 포함할 수 있다. 조성물은 대상체에게 다양한 경로를 통해, 예를 들어 전신으로, 면역억제의 부위에 (예를 들어 종양에 의해 국부 면역억제가 존재하는 경우), 또는 면역억제의 부위의 근처, 예를 들어 면역억제의 부위의 10cm 9cm, 8cm, 7cm, 6cm, 5cm, 4cm, 3cm, 2cm, 1cm 또는 0.5cm 이내에 투여될 수 있다. 임의로 제2 치료제가 조성물에 추가하여, 예를 들어 조성물의 투여 전에, 그와 공동으로 또는 그 이후에 투여될 수 있다. 예를 들어, 제2 치료제는 면역자극제를 포함할 수 있다. 임의로, 대상체의 면역 세포의 활성화 (예를 들어 CD69 및/또는 CD71의 증진된 발현, IL-12 또는 IFNγ의 분비, 또는 퍼포린 또는 그랜자임 B의 분비, 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식)가 검출될 수 있다. 예를 들어, 면역 세포의 활성화는 면역 세포의 1종 이상의 마커, 예를 들어 CD69, CD71 등의 증진된 발현으로서 검출될 수 있다. 면역 세포의 활성화 (예를 들어 CD69 및/또는 CD71의 증진된 발현, IL-12 또는 IFNγ의 분비, 또는 퍼포린 또는 그랜자임 B의 분비, 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식)는 통상의 기술자에게 공지된 수많은 기술, 예를 들어 유동 세포측정법, 면역조직화학, ELISA, 웨스턴 블롯팅, 이뮤노블롯팅, 정량적 PCR, 증식을 측정하기 위한 BUdR 혼입의 검출 등에 의해 검출될 수 있다. 어떠한 이론에 제한되지는 않지만, 상이한 유형의 면역억제 세포, 조절 T-세포, 미성숙 수지상 세포 (iDC), 종양 연관 대식세포 (TAM) 및 골수 유래 억제자 세포 (MDSC)는 면역억제 기능을 할 수 있고, 추가로 다른 면역억제 메카니즘, 예컨대 혈청 차단 인자, 면역 복합체의 순환, 증진된 IL-1Ra 생산 및 증진된 종양내 단백질분해 활성이 암 관련된 면역억제에서 기능을 할 수 있다. 이에 따라 일부 실시양태에서, 면역억제의 치료, 개선, 감소 또는 그의 증상의 감소는 면역억제 세포의 활성, 표현형 또는 증식의 변화, 또는 면역억제 인자의 발현 수준 또는 국재화의 변화에 의해 결정될 수 있다.

면역조절 펩티드의 억제제

일부 실시양태는 면역조절 펩티드, 예컨대 P3028 및/또는 표 1-4에 열거된 면역조절 펩티드 (서열 183-184 및 188-246) 중 1종 이상의 억제제 (또한, 알부민 유래 면역조절 펩티드의 차단제로도 지칭됨), 면역조절 펩티드에 대한 결합 파트너, 또는 면역조절 펩티드 억제제를 포함한다. 면역조절 펩티드 억제제는 펩티드, 시클릭 펩티드, 펩티드모방체, 단백질, 핵산, 항체; 항체 단편, 핵산 압타머; 펩티드 압타머; 및 소분자를 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 하기 섹션은 항체 또는 항체 단편-기반 면역조절 펩티드 억제제에 대한 보다 상세한 설명을 제공한다.

항체 또는 항체 단편-기반 면역조절 펩티드 억제제

일부 실시양태는 항체 또는 항체 단편 기반 면역조절 펩티드 억제제를 포함한다. 대상체 (예를 들어, 암 또는 병원성 감염, 예컨대 박테리아 또는 바이러스 감염을 갖는 대상체)에서 면역억제를 억제하기 위해 이들 면역조절 펩티드 억제제를 사용하는 방법이 또한 고려된다. 코어 항체 구조 단위는 사량체를 포함하는 것으로 공지되어 있다. 각 사량체는 폴리펩티드 쇄의 2개의 동일한 쌍으로 구성되며, 각 쌍은 1개의 "경"쇄 (약 25 kDa) 및 1개의 "중"쇄 (약 50-70 kDa)를 갖는다. 각 쇄의 아미노-말단은 주로 항원 인식을 담당하는 약 100개 내지 110개 또는 그 초과의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. 각 쇄의 카르복시-말단은 주로 이펙터 기능을 담당하는 불변 영역을 정의한다. 중쇄는 뮤, 델타, 감마, 알파 또는 엡실론으로서 분류되고, 각각 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE로서 항체의 이소형을 정의한다. 추가의 동위원소인 IgY는 조류 숙주에서 발견된다. 쇄는 모두 3개의 초가변 영역 (또한, 상보성 결정 영역 또는 CDR로도 칭해짐)에 의해 연결된, 비교적 보존된 프레임워크 영역 (FR)의 동일한 일반 구조를 나타낸다. 각 쌍의 2개 쇄로부터의 CDR은 프레임워크 영역에 의해 정렬되어, 특정 에피토프에 대한 결합을 가능하게 한다. N-말단에서 C-말단으로, 경쇄 및 중쇄 둘 다는 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 각 도메인에 대한 아미노산의 배정은 [Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991)), 또는 Chothia & Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989)]에 따른다.

따라서, 일부 실시양태는 면역조절 펩티드, 예컨대 P3028 또는 표 1-4에 제공된 면역조절 펩티드 (서열 183-184 및 188-246) 중 1종 이상의 하나 이상의 영역에 결합하는 도메인을 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함하는 면역조절 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항체 단편은 마우스, 토끼, 래트, 햄스터, 기니 피그, 염소, 당나귀, 소, 말, 낙타, 소, 닭 또는 인간 숙주로부터의 것이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 단편은 이소형 IgG, IgM, IgA, IgD, IgE 또는 IgY를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 단편은 폴리클로날 항체의 집합의 일부이다. 일부 실시양태에서, 항체는 모노클로날이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 단편은 키메라이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 단편은 인간 숙주로부터의 적어도 하나의 영역을 포함하며, 하기 Fc; Fab; 경쇄 가변 영역; 경쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3; 중쇄 가변 영역; 중쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3; 경쇄 프레임워크 영역; 경쇄 FR1, FR2, FR3 또는 FR4; 중쇄 프레임워크 영역; 중쇄 FR1, FR2, FR3 또는 FR4 중 적어도 하나일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 비-인간 숙주의 적어도 하나의 CDR 또는 FR을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 영역은 카바트(Kabat)의 정의에 따른다. 일부 실시양태에서, 항체 영역은 코티아(Chothia)의 정의에 따른다. 일부 실시양태에서, 항체 영역은 카바트 및 코티아의 정의의 조합에 따른다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항체 단편은 표 5.1, 표 5.4, 표 5.5 또는 표 5.6에 기재된 펩티드 중 1종 이상을 모방한다.

항체는 면역학에서의 통상적인 기술, 예를 들어 미국 특허 번호 (8,142,784 및 7,628,986)에 기재된 기술을 사용하여 용이하게 생산될 수 있다. 비-인간 숙주에서 생성된 항체는, 예를 들어 비-인간 숙주의 항체의 적어도 하나의 가변 영역을 인간 항체 내로 치환시킴으로써 인간화될 수 있다. 또한, 인간 항체는, 예를 들어 트랜스제닉 숙주 동물에서 생성될 수 있다. 트랜스제닉 동물 (예를 들어, 마우스, 예컨대 제노마우스)은 면역화 시에 내인성 이뮤노글로불린 생산의 부재 하에서 인간 항체의 전체 레퍼토리를 생산하도록 조작될 수 있다 (Jakobovits et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551; Jakobovits et al. (1993) Nature 362:255-258; Bruggermann et al. (1993) Year in Immuno. 7:33; 및 미국 특허 번호 5,591,669; 미국 특허 번호 5,589,369; 미국 특허 번호 5,545,807). 또한, 파지 디스플레이 기술 (McCafferty et al. (1990) Nature 348:552-553)은 비면역화 공여자로부터의 이뮤노글로불린 가변 (V) 도메인 유전자 레퍼토리로부터 인간 항체 및 항체 단편을 시험관내 생산하는데 사용될 수 있다 (Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J. (1993) Current Opinion in Structural Biology 3:564-571). 비면역화 인간 공여자로부터의 V 유전자의 레퍼토리가 구축될 수 있고, 항원 (자기-항원 포함)의 다양한 어레이에 대한 항체가 본질적으로 단리될 수 있다 (Marks et al. (1991) J. Mol. Biol. 222:581-597; Griffith et al. (1993) EMBO J. 12:725-734; 미국 특허 번호 5,565,332; 미국 특허 번호 5,573,905). 많은 파지 디스플레이 라이브러리, 예를 들어 (미국 특허 번호 7,985,840)의 것들이 공지되어 있거나 생성될 수 있다. 인간 항체는 또한 시험관내 활성화된 B 세포에 의해 생성될 수 있다 (미국 특허 번호 5,567,610; 미국 특허 번호 5,229,275). 따라서, 일부 실시양태는 P3028 (서열 185) 및/또는 표 1-4의 펩티드 (서열 183-184 및 188-246)에 결합하는 항체를 생성하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 비-인간 숙주 항체의 적어도 하나의 가변 영역을 포함하는 인간화 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 비-인간 숙주, 예를 들어 트랜스제닉 동물에서 생성된 인간 항체이다. 일부 실시양태에서, 트랜스제닉 동물은 트랜스제닉 마우스이다. 일부 실시양태에서, 항체는 시험관내 생성된다. 일부 실시양태에서, 항체는 파지 디스플레이 기술을 사용하여 생성된다. 일부 실시양태에서, 항체는 시험관내 활성화된 B 세포에서 생성된다.

항체 및 항체 단편은 세포독성 화합물을 표적 부위로 전달하도록 구성될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태는 본원에 기재된 바와 같은 세포독성 화합물에 결합된 항체 및/또는 항체 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항체 단편은 본원에 기재된 바와 같은 절단가능한 링커를 통해 세포독성 화합물에 결합된다.

일부 실시양태는 P3028 (서열 185)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 결합 단편을 포함하는 면역조절 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물을 포함한다. 일부 실시양태는 P3028 (서열 186 및 187)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 단편을 포함한다. P3028에 결합하는 예시적인 항체는 실시예 9에 기재된다.

일부 실시양태에서, 상기 기재된 항체 또는 그의 단편은 P3028을 억제 또는 격리하는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, P3028에 특이적인 항체 또는 그의 단편은 P3028에 결합된 적어도 하나 면역 세포를 갖는 환자에게 투여되어 환자의 LFA-1 또는 IL-2 수용체 중 적어도 하나가 비차단되도록 할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 단편은 본원에 기재된 바와 같은 면역억제의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여되어 상기 환자의 면역 반응을 자극 또는 증진시킬 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 그의 단편은 면역억제의 억제를 필요로 하는 환자 (예를 들어, 암 또는 병원성 감염, 예컨대 박테리아 또는 바이러스 감염을 갖는 대상체)에게 제공될 수 있다. 항체 또는 그의 단편을 제공한 후에 환자는 면역억제의 억제에 대해 평가될 수 있으며, 이는 종양의 면역 세포 침윤 또는 박테리아 또는 바이러스 감염의 감소, 예를 들어 상기 대상체의 PBMC에 의한 개선된 면역 반응을 결정함으로써 달성될 수 있다.

다른 실시양태에서, 항체 또는 그의 단편은, 예를 들어 생물학적 샘플에서 P3028의 존재를 검출하는데 사용될 수 있다. 항체 또는 그의 단편은, 예를 들어 면역조절 펩티드 억제제 (예를 들어, 펩티드 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98 또는 264-393)가 지지체에 부착되는 경우에 복합체의 형성을 검출하는데 사용될 수 있고, 항체는 1차 항체 또는 그의 단편으로서 사용되어 억제제에 결합된 P3028의 존재를 검출하는데 사용된다.

일부 실시양태는 P3028의 면역조절 펩티드 억제제에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 단편 (예를 들어, 표 5.1의 펩티드 중 1종 이상을 모방하거나 또는 그에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 98% 동일성을 갖는 항체 또는 그의 단편)을 포함한다. 항체 또는 그의 단편은 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98 또는 264-393 중 적어도 하나를 포함하는 펩티드에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, P3028의 면역조절 펩티드 억제제에 특이적인 항체 또는 그의 단편은 생물학적 샘플에서 P3028의 면역조절 펩티드 억제제의 존재를 검출하는데 사용될 수 있다. P3028의 면역조절 펩티드 억제제에 특이적인 항체 또는 그의 단편은 또한, 예를 들어 P3028이 지지체에 부착되는 경우에 복합체의 형성을 검출하는데 사용될 수 있고, 항체 또는 그의 단편은 P3028에 결합된 면역조절 펩티드 억제제의 존재를 검출하기 위한 1차 항체로서 사용된다.

일부 실시양태에서, P3028의 면역조절 펩티드 억제제에 특이적인 항체 또는 그의 단편은 P3028의 억제제를 단리하거나 그의 존재를 확인하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 그의 단편은 인간의 면역 세포를 자극하기 위해 및/또는 인간의 암 세포에 결합하기 위해 사용되는 억제제를 정제하는데 사용될 수 있다.

일부 실시양태에서, P3028의 면역조절 펩티드 억제제에 특이적인 항체 또는 그의 단편은 P3028의 존재를 검출하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, P3028의 면역조절 펩티드 억제제에 특이적인 항체 또는 그의 단편은 면역조절 펩티드 억제제와 접촉된 암 세포의 존재를 검출하기 위해 생물학적 샘플의 면역조직화학적 염색에 사용될 수 있다. 예를 들어, P3028의 면역조절 펩티드 억제제에 특이적인 항체는 면역조절 펩티드 억제제에 결합된 면역 또는 암 세포를 검출 및/또는 단리하기 위해 유동 세포측정법에 사용될 수 있다. 하기 섹션은 펩티드-기반 면역조절 펩티드 억제제에 대한 보다 상세한 설명을 제공한다.

펩티드-기반 면역조절 펩티드 억제제

일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드, 예컨대 P3028의 하나 이상의 영역에 결합하는 도메인을 포함하는 단리된 펩티드가 제공된다. 용어 "단리된"은 물질이 그의 본래 환경 (예를 들어, 자연 발생 물질인 경우에 자연 환경)으로부터 제거될 것을 요구한다. 예를 들어, 살아있는 동물에 존재하는 자연 발생 폴리뉴클레오티드는 단리된 것이 아니지만, 자연계에 공존하는 물질 중 일부 또는 모두로부터 분리된 동일한 폴리뉴클레오티드는 단리된 것이다. 서열이 정제된 형태인 것이 또한 유리하다. 용어 "정제된"은 절대적 순도를 요구하지 않으며; 오히려, 상대적 정의로 의도된다. 단리된 단백질은, 예를 들어 쿠마시(Coomassie) 염색에 의한 전기영동 동질성으로 통상적으로 정제되었다. 출발 물질 또는 천연 물질을 적어도 한 자릿수, 바람직하게는 두 또는 세 자릿수, 보다 바람직하게는 네 또는 다섯 자릿수로 정제하는 것이 명백하게 고려된다. 단리된 펩티드는, 예를 들어 실질적으로 염 형태, 결정 형태, 동결건조 형태로, 용액 (예를 들어 완충제를 포함할 수 있는 수용액) 중에, 및/또는 제약상 담체 또는 희석제 중에 존재할 수 있다. 단리된 펩티드는 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있으며, 예를 들어 약 1 중량% 이상의 펩티드, 예를 들어 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 무게에 의해 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 98.5, 99, 99.5, 99.9, 99.99 또는 99.999 중량% 이상의 펩티드를 포함하는 조성물로 존재할 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 단리된 면역조절 펩티드 억제제 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 62, 64-66, 68, 76, 94-96,98, 265-393, 583-586, 587-595 중 어느 하나를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드, 또는 표 5.3 또는 표 13의 변형 중 하나 이상을 포함하는 변형된 P28R 또는 P28 코어 펩티드)는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다. 예를 들어, 서열 (FVKL)로 이루어진 면역조절 펩티드 억제제는, FVKL을 포함하며 6 내지 16개 아미노산의 길이인 면역조절 펩티드 억제제에 필적하는 rampo 점수로 P3028에 결합할 수 있다 (도 29 및 실시예 12 참조). 추가로, 펩티드의 N 말단, C 말단 또는 노출된 루프 근처의 아미노산 서열은 보다 고차의 펩티드 구조물에 혼입되기 보다는 잠재적 결합 표적에 접근하여 1100개 이하의 아미노산이 P3028에 결합하는 것을 허용할 가능성이 크다. 따라서, 본 발명의 일부 실시양태는 본원에 기재된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상 (예를 들어, 표 5.1, 5.4, 5.5 또는 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물 및 그의 사용 방법 (예를 들어, P3028에 결합시키는 방법 또는 P3028-매개 면역억제를 감소시키는 방법)에 관한 것이다. 바람직하게는 이들 펩티드 (예를 들어, 표 5.1, 5.4, 5.5 또는 5.6의 펩티드 중 어느 1종 이상)은 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

<표 5.1> 서열 및 상응하는 Rampo 점수

실시예 12에 제시된 바와 같이, 표 6.1에 제시된 P28R의 적어도 31개의 단일 아미노산 치환 (서열 3-34)은 P28R보다 높은 rampo 점수로 P3028에 결합한다. 추가로, P28R의 잔기에 대한 글리신 잔기의 적어도 4개의 단일 치환 (서열 94-96 및 98)은 P28R에 적어도 필적하는 rampo 점수, 예를 들어 약 500 초과의 rampo 점수로 P3028에 결합한다. 추가로, 적어도 129개의 단일 아미노산 치환은 표 6.2에 제시된 바와 같은 P28R (서열 268-393)과 적어도 실질적으로 동일한 (즉, 적어도 98%의) rampo 점수로 P3028에 결합한다. 추가로, P28R의 적어도 N 말단 아르기닌의 말단절단 (서열 34) 및 P28R의 처음 8개까지의 C 말단 아미노산의 말단절단 (서열 46-53)은 P28R에 적어도 필적하는 rampo 점수를 펩티드에 제공한다. 추가로, P28의 적어도 일부 내부 아미노산 잔기 결실 (서열 64-66, 68, 76)은 P28R에 적어도 필적할만한 rampo 점수를 갖는 펩티드를 제공한다. 따라서, 서열 3-34의 치환 중 2개 이상의 조합을 포함하는 P28R의 치환을 포함하는 펩티드가 본원에서 고려된다. 또한, 서열 34, 46-53, 64-66, 68 및/또는 74에서와 같이 P28R의 적어도 1개의 결실 및 서열 3-34, 94-96, 98 및/또는 268-393에서와 같이 P28R의 (비-결실 잔기의) 적어도 1개의 치환을 포함하는 펩티드가 본원에서 고려된다.

따라서, 일부 실시양태는 하기 화학식 I을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 면역조절 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물에 관한 것이다:

<화학식 I>

XX₁VKX₂X₃X₄ (서열 166)

여기서 X는 임의적인 서열이고, KKLDT (서열 167), RKLDT (서열 168), KKGDT (서열 169), KKEDT (서열 170), KKLDQ (서열 171), KKGDQ (서열 252), KKEDQ (서열 253), RKLDQ (서열 254), RKGDQ (서열 255), RKEDQ (서열 256), RKGTD (서열 257), RKEDT (서열 258), KLDT (서열 172), KGDT (서열 259), KEDT (서열 260), KLDQ (서열 261), KGDQ (서열 262), KEDQ (서열 263), LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T 또는 Q일 수 있거나 부재할 수 있다.

X₁은 FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT 또는 VL 중 하나일 수 있다.

X₂는 LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT 또는 VH 중 하나일 수 있다.

X₃은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR 중 하나일 수 있다.

X₄는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다.

일부 실시양태에서, X가 부재하는 경우에, X₁은 FF이고, X₂는 LS이다.

일부 실시양태에서, 화학식 I을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

일부 실시양태는 하기 화학식 II를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 면역조절 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물에 관한 것이다:

<화학식 II>

X₂₀TFFVKLSX₂₁X₂₂ (서열 173)

여기서 X₂₀은 임의적인 서열이고, KKLD (서열 174), RKLD (서열 175), KKGD (서열 176), KKED (서열 177), KLD, LD 또는 D일 수 있거나 부재할 수 있다.

X₂₁은 임의적인 서열이고, LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR일 수 있거나 부재할 수 있다.

X₂₂는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다.

일부 실시양태에서, 화학식 II를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

일부 실시양태는 하기 화학식 III을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 면역조절 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물에 관한 것이다:

<화학식 III>

X₃₀X₃₁VKLX₃₂LX₃₃TEX₃₄ (서열 178)

여기서 X₃₀은 임의적인 서열이고, KKLDTF (서열 179), KLDTF (서열 180), LDTF (서열 181), DTF, TF 또는 F일 수 있거나 부재할 수 있다.

X₃₁은 임의적인 서열이고, F, S, M, V, T 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 F이다.

X₃₂는 S, Q, M, T 또는 H일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S이다.

X₃₃은 F, M, Q, H, N, P, S, G, A 또는 R일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₄는 F이다.

X₃₄는 임의적인 서열이고, R일 수 있거나 부재할 수 있다.

일부 실시양태에서, 화학식 III을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

일부 실시양태는 하기 화학식 VII을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 면역조절 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물에 관한 것이다:

<화학식 VII>

X₇₀₀K X₇₀₁X₇₀₂X₇₀₃ X₇₀₄X₇₀₅X₇₀₆K X₇₀₇ X₇₀₈ X₇₀₉ X₇₁₀ X₇₁₁E X₇₁₂ (서열 394)

여기서 X₇₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다.

X₇₀₁은 임의적인 서열이고, L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다.

X₇₀₂는 임의적인 서열이고, D, A, E, I, V, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다.

X₇₀₃은 임의적인 서열이고, T, C, M, N, P, Q, R, S, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다.

X₇₀₄는 임의적인 서열이고, F, A, I, M, N, P, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다.

X₇₀₅는 임의적인 서열이고, F, L, M, Q, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다.

X₇₀₆은 임의적인 서열이고, V, F, G, L, P 또는 R일 수 있거나 부재할 수 있다.

X₇₀₇은 임의적인 서열이고, L, A, F, G, I, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다.

X₇₀₈은 임의적인 서열이고, S, H, M, N, Q 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다.

X₇₀₉는 임의적인 서열이고, L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다.

X₇₁₀은 임의적인 서열이고, F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다.

X₇₁₁은 임의적인 서열이고, T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다.

X₇₁₂는 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다.

일부 실시양태에서, 화학식 VII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

일부 실시양태는 하기 화학식 VIII을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 면역조절 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물에 관한 것이다:

<화학식 VIII>

X₈₀₀K X₈₀₁K X₈₀₂E X₈₀₃ (서열 395)

여기서 X₈₀₀은 K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K이거나 부재한다.

X₈₀₁은 LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV 또는 L이거나 부재하고;

X₈₀₂는 LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT 또는 T이거나 부재하고;

X₈₀₃은 R, F, K, N, R, T 또는 Y이거나 부재한다.

일부 실시양태에서, 화학식 VIII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

일부 실시양태는 표 5.1에 기재된 펩티드 중 어느 1종 이상을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 면역조절 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 이들 조성물에 사용된 표 5.1으로부터의 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

일부 실시양태에서, 펩티드는 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96 또는 98 중 하나를 포함한다. 다시, 이 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 가질 수 있다.

본 발명의 실시양태는 또한 P3028 서열 또는 구조물에 대한 특이적 친화도를 갖는 면역조절 펩티드 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는, 면역조절 펩티드 억제제를 고체 상에 고정시키고, P3028을 첨가하고, 결합을 검출하도록 rampo 2차 항체의 효소적 활성을 측정하는 rampo 검정에 의해 측정된 바와 같은, P3028 서열 또는 구조물에 대한 특이적 친화도를 갖는다 (실시예 12 참조). 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 P28R의 rampo 점수와 적어도 실질적으로 동일한 rampo 점수로 P3028 구조물 또는 서열에 결합한다 (실시예 12, 표 6.2 참조). 바람직하게는, 면역조절 펩티드 억제제는 이 rampo 검정에 의해, 약 300 이상의 rampo 유닛, 예를 들어 약 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800과 동일하, 820, 840, 860, 880, 900, 920, 940, 960, 980, 1000, 1020 또는 1040 이상의 rampo 유닛 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)의, P3028에 대한 특이적 친화도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 500의 rampo 점수로 P3028 구조물 또는 서열에 결합한다 (실시예 12, 표 6.1 참조). P3028에 대한 친화도를 갖는 예시적인 펩티드는 실시예 12에 제공된다 (표 6.1, 6.2 및 도 29-30 참조).

유사하게, 실시양태는 표 1-4에 열거된 면역조절 펩티드 (서열 183-184 및 188-246) 중 어느 1종 이상에 대한 친화도를 갖는 단리된 면역조절 펩티드 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는, 면역조절 펩티드 억제제를 고체 상에 고정시키고, 표 1-4에 열거된 면역조절 펩티드 (서열 183-184 및 188-246) 중 어느 1종 이상을 첨가하고, 결합을 검출하도록 rampo 2차 항체의 효소적 활성을 측정하는 rampo 검정에 의해 측정된 바와 같은, 표 1-4에 열거된 면역조절 펩티드 (서열 183-184 및 188-246) 중 어느 1종 이상에 대한 특이적 친화도를 갖는다. 예를 들어, 본 발명의 측면은 표 5.1에 제공된 임의의 펩티드를 포함하고, 본원에 기재된 임의의 방법은 표 5.1에서 기재된 펩티드 중 1종 이상을 사용하여 실시될 수 있다. 바람직하게는, 면역조절 펩티드 억제제는 이 rampo 검정에 의해, 약 300 이상의 rampo 유닛, 예를 들어 약 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800과 동일하, 820, 840, 860, 880, 900, 920, 940, 960, 980, 1000, 1020 또는 1040 이상의 rampo 유닛 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)의, 표 1-4에 열거된 면역조절 펩티드 (서열 183-184 및 188-246) 중 어느 1종 이상에 대한 특이적 친화도를 갖는다.

펩티드 서열 변이

면역조절 펩티드 억제제 P28R (KKLDTFFVKLSLFTER; 서열 2)에 대한 수많은 서열 변이는 종양 세포에서 면역자극 활성 및/또는 세포독성을 갖는 것으로 나타났다 (실시예 참조 37-40). 어떠한 이론에 제한되지는 않지만, 서열 2 및 표 5.3에 기재된 바와 같은 서열 2의 변이, 예를 들어 표 5.4의 펩티드 중 1종 이상은 본원의 일부 실시양태에 따라 펩티드 3028 (서열 185)에 결합하는데, 서열 185를 포함하는 펩티드 또는 알부민 단편에 결합하는데, 표 1-4에 열거된 펩티드 중 어느 1종 이상에 결합하는데, 면역 세포를 직접적으로 자극하는데, 및/또는 종양 세포를 사멸시키는데 유용할 수 있다 (실시예 36-40 참조). 이에 따라, 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제 펩티드는 표 5.3에 제시된 바와 같은 서열 2에 대한 변형, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 변형, 예를 들어 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-6, 1-7, 1-8, 1-9, 1-10, 2-3, 2-4, 2-5, 2-6, 2-7, 2-8, 2-9, 2-10, 3-4, 3-5, 3-6, 3-7, 3-8, 3-9, 3-10, 4-5, 4-6, 4-7, 4-8, 4-9, 4-10, 5-6, 5-7, 5-8, 5-9, 5-10, 6-7, 6-8, 6-9, 6-10, 7-8, 7-9, 7-10, 8-9, 8-10 또는 9-10개의 변이 중 하나 이상을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진다. 억제제 펩티드는 추가로 서열 2의 위치 1, 3-4, 12-14 또는 16 중 하나 이상에 추가의 변이를 포함할 수 있으며, 여기서 추가의 변이는 임의의 아미노산 또는 아미노산의 부재, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 추가의 변이를 포함한다:

<표 5.3>

일부 실시양태에서, 변이된 펩티드는 위치 8에 M을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 변이된 펩티드는 위치 9에 M을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 변이된 펩티드는 위치 15에 M을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 변형된 펩티드는 위치 8, 9 또는 15 중 임의의 위치에 M을 포함하지 않는다.

따라서, 일부 실시양태에서, P28R의 변이를 포함하는 펩티드 억제제는 하기 화학식 IX의 펩티드를 포함하거나, 그로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진다:

<화학식 IX>

X₉₀₁X₉₀₂X₉₀₃X₉₀₄X₉₀₅X₉₀₆X₉₀₇X₉₀₈X₉₀₉X₉₁₀X₉₁₁X₉₁₂X₉₁₃X₉₁₄X₉₁₅X₉₁₆X₉₁₇

여기서 X₉₀₁은 임의의 아미노산이거나 부재하고,

X₉₀₂는 양으로 하전된 아미노산, F 또는 N이고,

X₉₀₃은 임의의 아미노산이고,

X₉₀₄는 임의의 아미노산이고,

X₉₀₅는 극성 비하전된 아미노산, R, Y 또는 W이고,

X₉₀₆은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고,

X₉₀₇은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고,

X₉₀₈은 M 또는 F가 아닌 소수성 비-방향족 탄소 쇄 아미노산이고,

X₉₀₉는 양으로 하전된 아미노산, T, Q 또는 Y이고,

X₉₁₀은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고,

X₉₁₁은 극성 비하전된 아미노산 또는 H이고,

X₉₁₂는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고,

X₉₁₃은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고,

X₉₁₄는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고,

X₉₁₅는 음으로 하전된 아미노산, Y 또는 Q이고,

X₉₁₆은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고,

X₉₁₇은 하나 이상의 양으로 하전된 아미노산이거나 부재한다.

임의로, X₉₀₁은 양으로 하전된 아미노산을 포함한다. 임의로, X₉₀₁은 R 또는 K이다. 임의로, X₉₁₇은 RR을 포함하거나 그로 이루어진다.

본원에 기재된 펩티드의 변이를 기반으로 하는 수많은 펩티드 억제제는 면역 세포를 자극하는 것으로 나타났다 (실시예 36 참조). 예시적인 변이된 펩티드는 표 5.4에 제시되어 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 펩티드 억제제는 표 5.4의 펩티드를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진다. P3028에 대한 낮은 결합 (실시예 36 참조) 또는 건강한 혈청 중 건강한 PBMC의 낮은 자극 (실시예 37 참조)을 갖는 것으로 나타난 추가의 예시적인 변이된 펩티드는 표 5.5 및 5.6에 제시되어 있다. 일부 실시양태에서, 표 5.4, 5.5 또는 5.6의 펩티드를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드가 제공된다.

<표 5.4> 위치 스캔을 기반으로 P3028에 대한 "고" 결합을 갖는 펩티드

<표 5.5> 위치 스캔을 기반으로 P3028에 대한 "저" 결합을 갖는 펩티드

<표 5.6> P28R의 추가의 변형

본 발명의 실시양태는 또한 본원에 기재된 단리된 면역조절 펩티드 억제제에 대한 동일성을 갖는 펩티드 및 단백질을 포함한다. 용어 "동일성"은 핵산 또는 단백질 서열 상동성 또는 3차원 상동성을 포함함을 의미한다. 핵산 또는 펩티드 서열 상동성 및/또는 펩티드에 대한 3차원 상동성을 결정하기 위한 여러 기술이 존재한다. 이들 방법은 하나의 서열, 도메인 또는 모델이 표적 서열, 도메인 또는 모델에 대해 갖는 동일성의 정도를 발견하기 위해 상용적으로 사용된다. 기능적 면역조절 펩티드 억제제 (예를 들어, P3028 서열 또는 구조물에 대한 면역조절 펩티드 억제제)의 폭넓은 범위는 본원에 기재된 펩티드 억제제의 특색을 포함할 수 있고, 따라서 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589의 면역조절 펩티드 억제제에 대한 폭넓은 정도의 동일성을 제공한다. 예를 들어, 억제제의 작은 영역을 갖는 융합 단백질은 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589의 면역조절 펩티드 억제제에 대해 낮은 정도의 전체 동일성을 나타낼 수 있지만, 억제제 (예를 들어, P3028의 억제제, 예컨대 P3028에 결합하는 분자)로서의 기능하거나, 또는 LFA-1 및/또는 IL-2 수용체를 통해 면역 세포 자극을 증진시키거나 (예를 들어, 면역계 또는 면역억제의 마커를 조절, 상향조절 또는 하향조절하거나, 예컨대 면역 세포 증식, 확산, 이동 또는 NK-세포 세포독성의 P3028-매개 억제를 감소시키거나), 또는 면역 세포 자극을 증진시키는 능력을 보유할 수 있다. 따라서, 본 발명의 실시양태는 서열 1-33, 34, 46-53, 62, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589의 서열에 대해 1% 동일성 내지 100% 동일성을 가질 수 있다. 즉, 실시양태는 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589 중 어느 하나에 대해 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100% 동일성을 가질 수 있다. 바람직하게는, 이들 펩티드 또는 변형된 펩티드는 또한 면역계를 조절하는 (예를 들어, 면역계 또는 면역억제의 마커를 조절, 상향조절 또는 하향조절하는, 예컨대 면역 세포 증식, 확산, 이동 또는 NK-세포 세포독성의 P3028-매개 억제를 감소시키는) 능력을 보유한다.

실시양태는 또한 단리된 면역조절 펩티드 억제제 및/또는 지지체에 결합된 단리된 면역조절 펩티드 억제제의 다량체를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태는 단일 면역조절 펩티드 억제제의 다중 카피를 포함하는 면역조절 펩티드 억제제의 다량체를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태는 2종 이상의 상이한 면역조절 펩티드 억제제를 포함하는 다량체를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 다량체는 2종 이상의 면역조절 펩티드 억제제, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99, 100 또는 101종의 면역조절 펩티드 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 다량체는 동일한 면역조절 펩티드 억제제를 갖고, 다른 실시양태에서, 다량체는 상이한 면역조절 펩티드 억제제를 갖는다. 따라서, 일부 실시양태는 1종 이상의 면역조절 펩티드 억제제를 포함하는 조성물에 관한 것이고, 일부 실시양태에서, 1종 이상의 면역조절 펩티드 억제제는 동일한 분자의 다량체이다.

펩티드-기반 면역조절 펩티드 억제제의 제조 방법

펩티드의 많은 제조 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 펩티드의 제조 방법의 예는 미국 특허 번호 6,495,674 (이는 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨)에서 찾을 수 있다. 일부 실시양태에서, 펩티드 억제제는 화학적으로 합성된다. 펩티드의 화학적 합성은 또한 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 고체 상 화학적 합성은 적어도 약 100개 아미노산의 길이인 펩티드를 생산하는데 사용될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 합성 펩티드이다.

다른 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 관련 기술분야에 널리 공지된 기술을 사용하여 재조합 DNA 기술에 의해 제조된다. 이러한 방법은, 예를 들어 면역조절 펩티드 억제제를 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 및 적절한 전사 및 번역 제어 신호를 함유하는 발현 벡터를 구축하는데 사용될 수 있다. 이들 방법은, 예를 들어 시험관내 재조합 DNA 기술, 합성 기술 및 생체내 유전자 재조합을 포함할 수 있다. 대안적으로, 펩티드 억제제를 코딩할 수 있는 RNA는, 예를 들어 합성기를 사용하여 화학적으로 합성될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Oligonucleotide Synthesis, 1984, Gait, M. J. ed., IRL Press, Oxford] (이는 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 기술을 참조한다. 대안적으로, 펩티드 억제제보다 실질적으로 더 긴 펩티드 또는 단백질을 코딩하는 DNA 또는 RNA가 제공되어 (여기서 펩티드 억제제는 프로테아제 표적 부위에 플랭킹됨), 그 결과 보다 큰 펩티드 또는 단백질로부터 펩티드 억제제를 생산할 수 있다. 예시적인 프로테아제는 트롬빈, 트립신, 키모트립신, LysC, GluC 및 AspN을 포함한다. 대안적으로, 2 카피 이상의 펩티드 억제제를 코딩하는 DNA 또는 RNA가 제공되어 (여기서 펩티드 억제제는 프로테아제 표적 부위에 플랭킹됨), 그 결과 보다 큰 펩티드 또는 단백질로부터 펩티드 억제제를 생산할 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, P3028의 펩티드 억제제는 리보솜에 의해 생산된다.

여러 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 세포주에서 발현된다. 예를 들어, 일부 세포에는 1종 이상의 면역조절 펩티드 억제제를 코딩하는 핵산이 제공되며, 상기 세포는 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589의 펩티드 또는 표 5.1에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상을 발현하고, 면역조절 펩티드 억제제는 단리 및/또는 정제된다. 예시적인 핵산, 서열 102-165가 표 5.2에 열거된다.

다양한 숙주-발현 벡터 시스템이 본 발명의 일부 실시양태의 억제제 펩티드를 발현하는데 이용될 수 있다. 면역조절 펩티드 억제제가 가용성 펩티드인 경우에, 그것은 배양으로부터 회수될 수 있는데, 즉 펩티드 또는 폴리펩티드가 분비되지 않는 경우에는 숙주 세포로부터 회수될 수 있고, 펩티드 또는 폴리펩티드가 세포에 의해 분비되는 경우에는 배양 배지로부터 회수될 수 있다. 그러나, 발현 시스템은 또한 계내, 즉 세포 막에 고정된 펩티드 또는 기능적 등가물을 발현하는 조작된 숙주 세포를 포괄한다. 이러한 발현 시스템으로부터의 펩티드의 정제 또는 풍부화는 적절한 세제 및 지질 미셀 및 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법을 사용하여 달성될 수 있다. 그러나, 이러한 조작된 숙주 세포 그 자체는, 펩티드의 구조적 및 기능적 특징을 보유하는 것, 뿐만 아니라 예를 들어 약물 스크리닝 검정에서 생물학적 활성을 평가하는 것이 중요한 상황에서 사용될 수 있다.

본 발명의 목적에 사용될 수 있는 발현 시스템은, 억제제 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 재조합 박테리오파지 DNA, 플라스미드 DNA 또는 코스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 미생물, 예컨대 박테리아 (예를 들어, 이. 콜라이(E. coli) 또는 비. 서브틸리스(B. subtilis)); 억제제 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 재조합 효모 발현 벡터로 형질전환된 효모 (예를 들어, 사카로미세스(Saccharomyces), 피키아(Pichia)); 억제제 펩티드를 코딩하는 서열을 함유하는 재조합 바이러스 발현 벡터 (예를 들어, 바큘로바이러스(baculovirus))로 감염된 곤충 세포 시스템; 억제제 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 재조합 바이러스 발현 벡터 (예를 들어, 콜리플라워 모자이크 바이러스, CaMV; 담배 모자이크 바이러스, TMV)로 감염되거나 또는 재조합 플라스미드 발현 벡터 (예를 들어, Ti 플라스미드)로 형질전환된 식물 세포 시스템; 포유동물 세포의 게놈 (예를 들어, 메탈로티오네인 프로모터) 또는 포유동물 바이러스 (예를 들어, 아데노바이러스 후기 프로모터; 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터)로부터 유래된 프로모터를 함유하는 재조합 발현 구축물을 보유하는 포유동물 세포 시스템 (예를 들어, COS, CHO, BHK, 293 3T3); 또는 세포 용해물 또는 그의 분획 및 억제제 펩티드를 코딩하는 핵산을 포함할 수 있는 세포-무함유 발현 시스템을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

박테리아 시스템에서, 생산될 펩티드에 대해 의도된 용도에 따라 다양한 발현 벡터가 유리하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 제약 조성물의 생성 또는 펩티드에 대한 항체의 생성을 위해 다량의 상기 펩티드가 생산되어야 하는 경우에는, 예를 들어 용이하게 정제되는 융합 단백질 산물의 높은 수준의 발현을 지시하는 벡터가 바람직할 수 있다. 이러한 벡터는 이. 콜라이 발현 벡터 pUR278 (Ruther et al., EMBO J., 2:1791 (1983))을 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 여기서 억제제 펩티드 코딩 서열은 lacZ 코딩 영역과 인 프레임으로 벡터 내로 개별적으로 라이게이션되어 융합 단백질이 생산될 수 있다; pIN 벡터 (Inouye & Inouye, Nucleic Acids Res., 13:3101-3109 (1985); Van Heeke & Schuster, J. Biol. Chem., 264:5503-5509 (1989)) 등. pGEX 벡터는 또한 글루타티온 S-트랜스퍼라제 (GST)와의 융합 단백질로 외래 폴리펩티드를 발현시키는데 사용될 수 있다. 일반적으로, 이러한 융합 단백질은 가용성이고, 글루타티온-아가로스 비드에의 흡착에 이어서 유리 글루타티온의 존재 하의 용리에 의해 용해된 세포로부터 용이하게 정제될 수 있다. pGEX 벡터는 클로닝된 표적 유전자 산물이 GST 모이어티로부터 방출될 수 있도록 트롬빈 또는 인자 Xa 프로테아제 절단 부위를 포함하도록 설계된다.

곤충 시스템에서, 아우토그라파 칼리포르니카(Autographa californica) 핵 다각체병 바이러스 (AcNPV)는 외래 유전자를 발현시키기 위한 벡터로서 사용된다. 바이러스는 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포에서 성장한다. 펩티드 코딩 서열은 바이러스의 비-필수 영역 (예를 들어, 폴리헤드린 유전자) 내로 개별적으로 클로닝시키고, AcNPV 프로모터 (예를 들어, 폴리헤드린 프로모터)의 제어 하에 놓일 수 있다. 펩티드 코딩 서열의 성공적인 삽입은 폴리헤드린 유전자의 불활성화 및 비-폐색 재조합 바이러스 (즉, 폴리헤드린 유전자에 의해 코딩되는 단백질성 코트가 결핍된 바이러스)의 생산을 유발할 것이다. 이어서, 이들 재조합 바이러스는 스포도프테라 프루기페르다 세포를 감염시키는데 사용되며, 상기 세포에서 삽입된 유전자가 발현된다. (예를 들어, 문헌 [Smith et al., J. Virol. 46: 584 (1983)]; 및 미국 특허 번호 4,215,051 (Smith) 참조).

포유동물 숙주 세포에서, 다수의 바이러스-기반 발현 시스템이 이용될 수 있다. 아데노바이러스가 발현 벡터로서 사용되는 경우에, 관심 뉴클레오티드 서열은 아데노바이러스 전사/번역 제어 복합체, 예를 들어 후기 프로모터 및 트리파르타이트 리더 서열에 라이게이션될 수 있다. 이어서, 이 키메라 유전자는 시험관내 또는 생체내 재조합에 의해 아데노바이러스 게놈에 삽입될 수 있다. 바이러스 게놈의 비-필수 영역 (예를 들어, 영역 E1 또는 E3)에의 삽입은 감염된 숙주에서 생존가능하고 펩티드를 발현할 수 있는 재조합 바이러스를 유발할 것이다. (예를 들어, 문헌 [Logan & Shenk, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:3655-3659 (1984)] 참조). 또한, 특정 개시 신호가 펩티드를 코딩하는 삽입된 뉴클레오티드 서열의 효율적인 번역에 요구될 수 있다. 이들 신호는 ATG 개시 코돈 및 인접 서열을 포함한다.

세포 무함유 시스템에서, 세포 추출물 또는 그의 분획은 시험관내에서 핵산을 폴리펩티드로 번역시키기 위해 제공된다. 세포 유리 시스템은, 예를 들어 이. 콜라이 추출물, 효모 추출물을 포함할 수 있다. 추출물은 용해물일 수 있다. 추출물은, 예를 들어 리보솜을 풍부화하고 목적하지 않는 물질, 예컨대 파편 또는 숙주 게놈 DNA 제거하기 위해 정제될 수 있다. 세포-무함유 시스템에서 면역조절 펩티드 억제제를 코딩하는 핵산은 플라스미드 DNA, 선형 DNA 또는 RNA를 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 발현 후에 단리 또는 정제된다. 단리 또는 정제는 친화도 정제를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 발현 시스템의 펩티드 산물은 친화성 태그, 예를 들어 절단가능한 링커에 의해 분리된 GST, 예를 들어 트롬빈 또는 인자 Xa 프로테아제 절단 부위를 포함한다. 친화도 정제 후에, 친화성 태그는 절단되어, 친화성 태그 또는 절단 부위를 갖지 않는 실질적으로 순수한 펩티드를 생산할 수 있다. 일부 실시양태에서, 정제는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 98.5, 99, 99.5, 99.9, 99.99 또는 99.999 중량% 이상의 펩티드가 존재하는 조성물을 유발한다. 하기 섹션은 본원에 기재된 실시양태와 함께 사용될 수 있는 제약상 허용되는 담체 및 희석제에 대한 보다 많은 정보를 제공한다.

D 아미노산 및 비-천연 아미노산

일부 실시양태는 적어도 하나의 D 아미노산을 포함하는 1종 이상의 면역조절 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물을 포함한다. 글리신을 제외하고, 아미노산의 키랄 탄소는 D 또는 L 이성질체로 존재할 수 있다. 전형적으로, 리보솜에 의해 합성된 아미노산은 L 배위로 존재한다. 그러나, D 아미노산 또는 D 및 L 아미노산의 조합을 포함하는 펩티드는, 예를 들어 리간드 또는 억제제로서의 활성을 가질 수 있다. 예를 들어, 적어도 하나의 D 아미노산을 포함하는 펩티드는 P3028 서열/구조물에 결합하여 LFA-1 수용체 및/또는 IL-2 수용체에 결합하는 P3028 서열/구조물의 능력을 억제할 수 있다.

따라서, 일부 실시양태는 비-천연 아미노산을 적어도 포함하는 면역조절 펩티드 억제제를 포함한다. 비-천연 아미노산은 표준 유전자 코드에 의해 코딩된 20개의 아미노산의 R 기와는 다른 R 기를 포함한다. 비-천연 아미노산은 L 또는 D 배위로 존재할 수 있다. 따라서, 일부 실시양태는 D 배위 및/또는 L 배위의 비-천연 아미노산을 갖는 펩티드를 포함한다. 예시적인 비-천연 아미노산은 미국 특허 번호 8,153,758, 7,888,533, 6,344,483 (이는 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨)에 기재되어 있다. 일부 실시양태는 본원에 기재된 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상 (예를 들어, P3028 서열/구조물의 면역조절 펩티드 억제제, 예컨대 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물에 관한 것이며, 여기서 상기 면역조절 펩티드 억제제는 적어도 하나의 D 아미노산을 포함한다. 유사하게, 일부 실시양태는 P3028 서열/구조물의 면역조절 펩티드 억제제를 포함하는 조성물에 관한 것이며, 여기서 상기 면역조절 펩티드 억제제 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합)는 적어도 하나의 비-천연 아미노산을 포함한다. 추가의 실시양태는 면역조절 펩티드 억제제 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합)를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 면역조절 펩티드 억제제의 각 비-글리신 아미노산은 D 아미노산이다.

IL-2 수용체 (CD25)의 결정 구조가 해결되었고, IL-2 수용체의 IL-2 결합 부위에 결합하는 P3028의 컴퓨터 모델링이 수행되었다 (도 19 참조). 또한, IL-2의 리간드 결합 도메인의 결정 구조가 공지되어 있다 (문헌 [Qu, A and Leahy, DJ, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1995, 92: 10277-10281] (이는 그 전문이 명백하게 참조로 포함됨) 참조). 또한, P3028과 적어도 1종의 면역조절 펩티드 억제제 사이의 유리한 상호작용은 유리한 상호작용을 유지하기 위한 추가의 아미노산 잔기, D 아미노산 잔기 및/또는 비-천연 아미노산 잔기의 선택을 용이하게 할 수 있다.

일부 실시양태에서, 이들 면역조절 펩티드 억제제 중 적어도 일부는 합리적 설계 또는 P3028 서열/구조물 억제제를 사용하여 선택된 D 아미노산 위치를 포함한다. 미국 특허 번호 7,957,912에 언급된 바와 같이, 펩티드의 합리적 설계는 단백질 백본 구조로 시작하고, 3차원 폴딩 특성을 유지하면서 단백질의 특성을 변형시키도록 아미노산 서열을 설계한다. 일부 실시양태에서, 많은 수의 서열이 단백질 구조 (서열, 하위서열, 등)의 설계를 가능하게 하는 컴퓨터 모델링을 사용하여 조작될 수 있다. 합리적 설계의 측면은, 예를 들어 문헌 [Malakauskas and Mayo (1998) "Design, Structure and Stability of a Hyperthermophilic Protein Variant" Nature Struc. Biol. 5:470; Dahiyat and Mayo (1997) "De Novo Protein Design: Fully Automated Sequence Selection" Science, 278, 82-87. DeGrado, (1997) "Proteins from Scratch" Science, 278:80-81; Dahiyat, Sarisky and Mayo (1997) "De Novo Protein Design: Towards Fully Automated Sequence Selection" J. Mol. Biol. 273:789-796; Dahiyat and Mayo (1997) "Probing the Role of Pachng Specificity in Protein Design" Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94:10172-10177; Hellinga (1997) "Rational Protein Design--Combining Theory and Experiment" Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94: 10015-10017; Su and Mayo (1997 j "Coupling Backbone Flexibility and Amino Acid Sequence Selection in Protein Design" Prot. Sci. 6:1701-1707; Dahiyat, Gordon and Mayo (1997) "Automated Design of the Surface Positions of Protein Helices" Prot. Sci., 6:1333-1337; Dahiyat and Mayo (1996) "Protein Design Automation" Prot. Sci., 5:895-903]을 비롯한 수많은 간행물에 기재되어 있다.

일부 실시양태에서, 하나 이상의 D 아미노산 및/또는 비-천연 아미노산을 함유하는 P3028 서열/구조물의 면역조절 펩티드 억제제의 변이체의 라이브러리는 P3028 서열/구조물에의 결합에 대해 스크리닝된다. 일부 실시양태에서, 라이브러리는 P3028에의 결합에 대해 스크리닝된다 (실시예 10 및 12 참조). 일부 실시양태에서, 라이브러리는 LFA-1 수용체에 대한 P3028 서열/구조물의 결합의 억제에 대해 스크리닝된다 (실시예 15 참조).

일부 실시양태에서, 리드 분자는 지시된 약물 설계를 위한 주형으로서 사용된다. 예를 들어, 리드 펩티드는 실시예 12에서와 같이 본원에 제공된 P3028 서열/구조물에 결합하는 예시적인 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합)을 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 리드 펩티드는 적어도 하나의 D 아미노산 및/또는 적어도 하나의 비-천연 아미노산을 포함하도록 합성될 수 있다. 이어서, 일부 실시양태에서, 제1 세대 인공 면역조절 펩티드 억제제의 결합 활성은, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같이 P3028 서열/구조물에 대한 결합 친화도를 평가함으로써 검출된다. 추가로, 제1 세대 인공 면역조절 펩티드 억제제의 면역자극 활성은, 예를 들어 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체를 갖는 세포에서 LFA-1 및/또는 IL-2 의존성 반응의 자극을 평가함으로써 검출될 수 있으며, 이는 P3028 서열/구조물에 의해 억제될 수 있다. 일단 제1 세대 인공 면역조절 펩티드 억제제의 결합 및/또는 면역자극 활성이 획득되면, 적어도 하나의 추가의 변형이 리드 펩티드에 이루어지고, 이 제2 세대 면역조절 펩티드 억제제는 P3028 서열/구조물에 대한 결합 및 면역자극 활성에 대해 평가된다. 추가의 변형은 적어도 하나의 추가의 D 아미노산 및/또는 비-천연 아미노산의 부가 또는 치환을 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 이 스크리닝 및 변형 절차를 반복적으로 수행함으로써, 보다 많은 면역조절 펩티드 억제제가 제조될 수 있다.

추가로, 본원에 기재된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합)은 N-말단 아세틸 기 및/또는 C-말단 아미드 기를 포함할 수 있다. 또한, 적어도 하나의 D 아미노산 및/또는 적어도 하나의 비-천연 아미노산을 포함하는 본원에 기재된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합)은 N-말단 아세틸 기 및/또는 C-말단 아미드 기를 포함하도록 제조될 수 있다.

펩티드모방체

일부 실시양태는 펩티드모방체-기반 면역조절 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물을 포함한다. 펩티드모방체는 펩티드가 또한 갖는 적어도 하나의 생화학적 상호작용을 갖는 소분자 화합물을 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 일부 펩티드모방체는 소분자 백본을 포함할 수 있다. 일부 펩티드모방체는 소분자 백본에 공유적으로 결합된 자연 발생 아미노산의 적어도 하나의 R 기를 포함할 수 있다. 일부 펩티드모방체는 공지된 펩티드 서열의 적어도 하나의 위치로 치환된다. 따라서, 일부 실시양태는 본원에 제공된 P3028 서열/구조물에 결합하는 예시적인 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물을 포함하며, 여기서 상기 면역조절 펩티드 억제제는 적어도 1종의 펩티드모방체 치환 (예를 들어, 비-펩티드 결합, 소분자 백본 또는 인공 펩티드 연결)을 포함한다.

일부 실시양태는 본원에 제공된 P3028 서열/구조물에 결합하는 예시적인 단리된 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물을 포함하며, 여기서 상기 면역조절 억제제는 2종 이상의 단량체를 포함하는 펩티드모방체 치환을 포함하며, 여기서 각 단량체는 적어도 하나의 R 기에 공유적으로 결합된 소분자 백본을 포함한다. 보다 많은 실시양태는 본원에 제공된 P3028 서열/구조물에 결합하는 예시적인 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물을 포함하며, 여기서 상기 면역조절 억제제는 적어도 1종의 펩티드모방체 소분자 백본을 포함하며, 여기서 각 백본 분자는 아릴 기, 예를 들어 벤젠, 피롤, 푸란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 트리아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진 및 피리미딘 등; 시클로알칸 또는 헤테로시클로알칸; 시클로알켄 또는 헤테로시클로알켄 중 1종; 또는 열거된 분자 중 2종 이상의 조합을 포함한다. 각 R 기는 자연 발생 아미노산의 R 기일 수 있거나 또는 임의로 합성 분자일 수 있다. 각 R 기는 상이할 수 있지만, 2개 이상의 R 기는 동일할 수 있다. 일부 펩티드모방체는, 예를 들어 P3028의 제1 위치에 결합하는 제1 단량체, 및 P3028의 제2 위치에 결합하는 제2 단량체를 포함하며, 여기서 제1 및 제2 단량체는 공유적으로 결합된다 (예를 들어, 문헌 [Chen et al., ACS Chemical Biology 2009; 4(9): 769-81] (이는 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨)의 접근법 참조). 본원에 제공된 P3028 서열/구조물에 결합하는 예시적인 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합) 내로 혼입된 펩티드모방체 백본은 미국 특허 번호 6,881,719 (이는 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨)에 교시된 바와 같이, 하기 화학식 IV의 β-턴 펩티드모방체 시클릭 화합물의 유도체를 포함할 수 있다:

<화학식 IV>

일부 실시양태에서, 상기 화학식 IV의 R1 및 R3은 천연 및/또는 합성 아미노산의 R 기를 포함한다. 일부 실시양태는 본원에 제공된 P3028 서열/구조물에 결합하는 예시적인 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물을 포함하며, 여기서 상기 면역조절 억제제는 화학식 IV의 2종 이상의 유도체의 중합체를 포함하는 펩티드모방체 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 화학식 IV로부터 유래된 개별 펩티드모방체 단량체 또는 이량체는 P3028 서열/구조물에 결합하는 그의 능력에 대해 선택된 다음, 중합체로 조립되어, P3028 서열/구조물에 특이적으로 결합하는 펩티드모방체 중합체를 생산한다.

미국 특허 번호 7,816,324에 기재된 바와 같이, 하기 화학식 V 또는 화학식 VI의 펩티드모방체는 펩티드에 결합하는 알파-헬릭스 모티프를 모방하도록 변형될 수 있다.

<화학식 V>

<화학식 VI>

따라서, 본 발명의 측면은 본원에 제공된 P3028 서열/구조물에 결합하는 예시적인 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물을 포함하며, 여기서 상기 면역조절 억제제는 강성 구조를 제공하는 화학식 V 또는 화학식 VI의 스캐폴드를 혼입시키며, 알파-헬릭스가 한 것처럼 치환기를 배치 및 배향하는 펩티드모방체 치환을 포함한다. 예를 들어, 강성 트리스-벤즈아미드 상의 치환은, 펩티드에 의해 결합된, 이상적 알파-헬릭스의 i, i+4 및 i+7 위치에서 발견된 아미노산의 측쇄에 상응하는 3개의 관능기 (R₁-R₃)의 배치를 가능하게 한다. 도 19에 도시된 바와 같이, P3028은 IL-2 수용체의 알파 헬릭스-함유 영역에 결합하도록 모델링된다. 따라서, 일부 실시양태는 P3028에 결합하는 예시적인 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물을 포함하며, 여기서 상기 면역조절 억제제는 화학식 V 또는 화학식 VI의 펩티드모방체를 혼입시키는 펩티드모방체 치환을 포함하며, 여기서 R₁ - R₃은 P3028의 공지된 결합 파트너 상의 위치, 예를 들어 IL-2 수용체의 알파 서브유닛 (CD25) (서열 247), LFA-1 수용체 (CD 11a - 서열 248 및 CD18 - 서열 249), 또는 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589의 펩티드, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합으로부터 선택된다.

실시양태는 또한 펩티드모방체의 라이브러리를 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드모방체의 라이브러리는 합리적 설계 접근법을 사용하여 선택 및/또는 합성된다. 미국 특허 번호 7,816,324 (이는 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨)에 개시된 바와 같이, 펩티드모방체 라이브러리는 단백질 복합체의 계면의 구조적 지식을 기반으로 개발될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 펩티드모방체 화합물은 P3028의 구조물 및 공지된 결합 파트너와의 그의 상호작용, 예를 들어 결정 구조가 공지된 IL-2 수용체 (도 19 참조), 결정 구조가 공지된 LFA-1 수용체, KKL15 펩티드 (실시예 11 참조) 및 P3028 서열/구조물의 공지된 억제제 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98 또는 264-393, 또는 표 5.1에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상)를 기반으로 한다. 일부 실시양태에서, 알파-헬릭스 모방체는 단백질-단백질 또는 단백질-펩티드 상호작용을 조절하는데 사용될 수 있다. 따라서, P3028 서열/구조물과 그의 결합 파트너 사이의 계면에서 발견된 핵심 요소를 모방하는 합성 스캐폴드는 소분자 면역조절 단백질 억제제의 개발을 위해 고려된다. 일부 실시양태에서, 펩티드모방체 라이브러리의 분자는 미국 특허 번호 7,153,68 (이는 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨)에서와 같이, 지지체, 칩, 표면 또는 기질, 예를 들어 마이크로어레이에 부착된다. 하기 섹션은 압타머-기반 면역조절 펩티드 억제제에 대한 보다 상세한 설명을 제공한다.

시클릭 펩티드

일부 실시양태는 적어도 1종의 시클릭 펩티드 면역조절 펩티드 억제제를 포함한다. 때로는 "루프형 펩티드"로 지칭되는 시클릭 펩티드는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 화학적으로 합성될 수 있거나 (예를 들어, 미국 특허 번호 7,589,170 (이는 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨) 참조), 또는 생체내에서 합성될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 번호 7,252,952 (이는 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨) 참조). 미국 특허 번호 7,589,170에 교시된 바와 같이, 고리화는, 예를 들어 2개의 측쇄 관능기 사이의 디술피드 결합 형성, 1개의 측쇄 관능기와 백본 알파-아미노 또는 카르복실 관능기 사이의 아미드 또는 에스테르 결합 형성, 2개의 측쇄 관능기 사이의 아미드 또는 에스테르 결합 형성, 백본 알파-아미노 또는 카르복실 관능기 사이의 아미드 결합 형성에 의해, 또는 펩티드의 2개 이상 위치를 연결하는 링커를 통해 달성될 수 있다.

펩티드의 일부가 고리화될 수 있거나, 또는 임의로, 전체 펩티드가 고리화되어 시클릭 펩티드를 형성할 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 펩티드의 N 말단은 펩티드의 C 말단에 결합되어 전체 펩티드가 고리화된다. 일부 실시양태에서, N 말단은 알파-아미드 연결을 통해 C 말단에 결합된다. 일부 실시양태에서, N 말단은 비-알파-아미드 연결, 예를 들어 Ser (S) 또는 Thr (T)의 측쇄와 C-말단 카르복실 기 사이의 결합, 두 Cys (C) 잔기 사이의 디술피드 결합, 또는 Trp (W)과 Cys (C) 잔기 사이의 티오에테르, 또는 합성 링커 분자를 통해 C 말단에 결합된다. 일부 실시양태에서, C 말단은 비-알파-아미드 연결, 예를 들어 Ser (S) 또는 Thr(T)의 측쇄와 C-말단 카르복실 기 사이의 결합, 또는 합성 링커 분자를 통해 내부 아미노산에 결합된다. 일부 실시양태에서, N 말단 또는 C 말단은 내부 아미노산에 결합되거나, 또는 2개의 내부 아미노산은 비-알파-아미드 연결, 예를 들어 두 Cys (C) 잔기 사이의 디술피드 결합, 또는 Trp (W)과 Cys (C) 잔기 사이의 티오에테르를 통해 서로에 결합된다.

일부 실시양태에서, 시클릭 펩티드 면역조절 펩티드 억제제는 단일 시클릭 폴리펩티드 구조물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 시클릭 펩티드 면역조절 펩티드 억제제는 2개 이상의 시클릭 폴리펩티드 구조물, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개의 시클릭 폴리펩티드 구조물을 포함한다. 각 시클릭 폴리펩티드 구조물은 적어도 2개의 아미노산 잔기, 예를 들어 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35 또는 40개의 아미노산 잔기 또는 이들 숫자 중 임의의 2개에 의해 한정된 범위를 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 시클릭 펩티드의 라이브러리는 알부민-유래 면역조절 펩티드, 예를 들어 표 1-4 또는 5.4의 펩티드 (서열 183-184, 188-246)에 결합하는 시클릭 펩티드에 대해 스크리닝된다. 시클릭 펩티드 라이브러리의 스크리닝은 PCT 공개 WO 95/09344 (이는 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, 시클릭 펩티드의 라이브러리가 합성된다. 일부 실시양태에서, 라이브러리 내 각 루프형 펩티드는 동일한 길이, 예를 들어 5-량체, 6-량체, 7-량체, 8-량체, 9-량체, 10-량체, 11-량체 또는 12-량체를 갖는다. 일부 실시양태에서, 라이브러리는 2개 이상의 길이의 시클릭 펩티드를 포함한다. 실시예 12에 제시된 바와 같이, 6-량체의 라이브러리가 합성되었고, P3028에 결합하는 펩티드에 대해 스크리닝되었다. P3028에 대한 주목할만한 결합을 나타내는 것으로 확인된 리드 시클릭 펩티드 (서열 265)의 위치 스캔 (즉, 각 위치에서의 단일 아미노산 치환)이 P3028에 결합하는 추가의 시클릭 6-량체를 확인하기 위해 수행되었다. 가장 높은 친화도로 P3028에 결합하는 2종의 6-량체 (서열 266-267)는 P3028에 결합하는 선형 펩티드에 대한 상동성을 갖는 것으로 관찰되었다 (도 32 참조). 따라서, 알부민-유래 면역조절 펩티드에 결합하는 선형 펩티드의 측면이 시클릭 펩티드에 혼입되어, 알부민-유래 면역조절 펩티드에 결합에 결합하는 시클릭 펩티드를 생산할 수 있는 것으로 본원에서 고려된다.

일부 실시양태에서, 알부민-유래 면역조절 펩티드 또는 구조물의 억제제 또는 그의 부분은 고리화된다. 일부 실시양태에서, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589의 임의의 펩티드, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합, 또는 그의 부분은 고리화를 용이하게 하도록 변형된다. 일부 실시양태에서, 시클릭 구조물을 위한 것일 수 있는 측쇄를 포함하는 아미노 잔기, 예를 들어 시스테인이 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589의 임의의 펩티드, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합의 N 말단, C 말단 및/또는 내부 위치에 첨가된다.

압타머

압타머는 표적 분자에 특이적으로 결합하는 소분자이다. 압타머는 올리고뉴클레오티드 압타머, 예를 들어 DNA, RNA 또는 합성 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드 압타머는 합성 백본, 예를 들어 모르폴리노를 갖는 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 압타머는 또한 펩티드 압타머를 포함할 수 있다. 본 발명의 측면은 압타머 (예를 들어, 핵산 기반 또는 펩티드 기반)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물을 포함하며, 여기서 상기 압타머는 본원에 제공된 P3028 서열/구조물에 결합하는 예시적인 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합)에 상응하거나 또는 그를 모방한다. 본 발명의 일부 실시양태는 P3028 서열/구조물에 특이적으로 결합하는 압타머를 포함한다.

일부 실시양태는 올리고뉴클레오티드 압타머의 라이브러리를 포함한다. P3028 서열/구조물에 결합하는 올리고뉴클레오티드 압타머는 본원에 기재된 교시 하에 용이하게 개발될 수 있다. 미국 특허 번호 7,745,607 (이는 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨)에 기재된 바와 같이, 표적, 예를 들어 P3028 서열/구조물에 특이적으로 결합하는 압타머는, i) 안티센스 올리고뉴클레오티드를 상보적 안티센스 결합 도메인을 가지며 추가로 무작위 뉴클레오티드 도메인을 갖는 라이브러리 올리고뉴클레오티드와 상호작용시켜 이중 가닥 듀플렉스를 형성시키고; ii) 고체 지지체 상에 듀플렉스 구조물을 고정시키고; iii) P3028 서열/구조물의 존재 하에서 듀플렉스 구조물을 인큐베이션하고; iv) 듀플렉스 구조물로부터 해리되어 P3028 서열/구조물에 결합하는 라이브러리 올리고뉴클레오티드를 수집함으로써 확인될 수 있다. 대안적으로, 비오티닐화 안티센스 올리고뉴클레오티드에 혼성화되어 듀플렉스 분자를 형성하는 올리고뉴클레오티드의 라이브러리가 제공될 수 있다. 듀플렉스 분자를 표면, 예를 들어 아비딘-코팅된 비드 상에 고정시킨다. 표적, 예컨대 P3028을 제공하여 올리고뉴클레오티드와 접촉시킨다. 표적에 결합된 올리고뉴클레오티드를 수집하고 증폭시킨다. 유사한 스크리닝 접근법이 P3028 서열/구조물에 결합하는 펩티드-기반 압타머를 확인하는데 사용될 수 있다. P3028 서열/구조물에 결합하는 펩티드 기반 압타머는 본원에 기재된 면역조절 펩티드 억제제 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589 중 어느 하나 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합), 및 그의 변이체를 모방할 수 있다. 하기 섹션은 본원에 기재된 면역조절 펩티드 억제제에 혼입될 수 있는 많은 변형을 논의한다.

변형

본원에 기재된 실시양태는 또한 본원에 제공된 P3028 서열/구조물에 결합하는 예시적인 단리된 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물을 포함하며, 여기서 상기 면역조절 억제제는 적어도 하나의 변형 (예를 들어, 글리코실화, 니트로실화, 세포독소, 검출가능한 모이어티 또는 방사성핵종)을 포함한다. 글리코실화는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)의 첨가를 포함할 수 있다. PEG의 첨가는 수용액 중 본원에 기재된 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상의 용해도를 증가시킬 수 있고/거나, 숙주의 면역계에 의해 분자를 공격으로부터 보호하고/거나, 숙주에서 분자의 반감기를 증가시킬 수 있다.

일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 세포독소에 직접적으로 결합된다. 일부 실시양태에서, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589 중 하나, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합으로 이루어지거나, 그로 본질적으로 이루어지거나 또는 그를 포함하는 펩티드는 세포독소에 공유적으로 결합된다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 링커를 통해 독소에 부착된다. 일부 실시양태에서, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589 중 하나, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합으로 이루어진 펩티드는 링커를 통해 세포독소에 부착된다. 링커 기술의 폭넓은 모음이 사용될 수 있다. 링커는 절단가능하거나 또는 절단가능하지 않다. 다수의 경우에서, 약물의 전체 세포독성 잠재력은 세포독성 분자가 표적 부위에서 비변형된 형태로 접합체, 예를 들어 면역조절 펩티드의 억제제로부터 방출될 때 관찰될 수 있는 것으로 공지되어 있다. 세포독소 접합체의 제조에 사용된 절단가능한 링커 중 하나는 상이한 세포내 구획, 예컨대 세포내이입 동안 마주친 엔도솜 및 리소솜의 산성 환경을 이용하는 시스-아코니트산 기재의 산-불안정성 링커이다. 쉔(Shen) 및 리서(Ryser)는 거대분자 담체와의 다우노루비신의 접합체의 제조 방법을 도입하였다 (Biochem. Biophys. Res. Commun. 102:1048-1054 (1981)). 양(Yang) 및 레이스펠드(Reisfeld)는 항-흑생종 항체에 다우노루비신을 접합시키는 동일한 기술을 사용하였다 (J. Natl. Canc. Inst. 80:1154-1159 (1988)). 최근에, 딜만(Dillman) 등은 항-T 세포 항체와의 다우노루비신의 접합체를 제조하기 위해 유사한 방식으로 산-불안정성 링커를 사용하였다 (Cancer Res. 48:6097-6102 (1988)). 트루에(Trouet) 등에 의해 조사된 대안적 접근법은 펩티드 스페이서 아암을 통해 표적화 분자에 다우노루비신을 연결시키는 것을 수반하였다 (Proc. Natl. Acad. Sci. 79:626-629 (1982)). 이것은 유리 약물이 리소솜 펩티다제의 작용에 의해 상기 접합체로부터 방출될 수 있었다는 전제 하에서 수행되었다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 항체에 세포독소를 접합시키는데 사용된 절단가능한 링커 접근법이 또한 펩티드, 예를 들어 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589 중 하나, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 세포독소에 접합시키는데 사용될 수 있다는 것을 인지할 것이다.

본원에 제공된 P3028 서열/구조물에 결합하는 예시적인 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합) 내에 혼입될 수 있는 예시적인 세포독소는 다음을 포함한다: 방사성독소, 모노메틸아우리스타틴-E, 모노메틸아우리스타틴-F, 아플리딘, 아자리빈, 아나스트로졸, 아자시티딘, 블레오마이신, 보르테조밉, 브리오스타틴-1, 부술판, 칼리케아마이신, 캄프토테신, 10-히드록시캄프토테신, 카르무스틴, 셀레브렉스, 클로람부실, 시스플라틴, 이리노테칸 (CPT-11), SN-38, 카르보플라틴, 클라드리빈, 시클로포스파미드, 시타라빈, 다카르바진, 도세탁셀, 닥티노마이신, 다우노마이신 글루쿠로니드, 다우노루비신, 덱사메타손, 디에틸스틸베스트롤, 독소루비신, 독소루비신 글루쿠로니드, 에피루비신 글루쿠로니드, 에티닐 에스트라디올, 에스트라무스틴, 에토포시드, 에토포시드 글루쿠로니드, 에토포시드 포스페이트, 플록수리딘 (FUdR), 3',5'--O-디올레오일-FudR (FUdR-dO), 플루다라빈, 플루타미드, 플루오로우라실, 플루옥시메스테론, 겜시타빈, 히드록시프로게스테론 카프로에이트, 히드록시우레아, 이다루비신, 이포스파미드, L-아스파라기나제, 류코보린, 로무스틴, 메클로레타민, 메드로프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 멜팔란, 메르캅토퓨린, 6-메르캅토퓨린, 메토트렉세이트, 미톡산트론, 미트라마이신, 미토마이신, 미토탄, 페닐 부티레이트, 프레드니손, 프로카르바진, 파클리탁셀, 펜토스타틴, PSI-341, 사포린, 세무스틴 스트렙토조신, 타목시펜, 탁산, 테스토스테론 프로피오네이트, 탈리도미드, 티오구아닌, 티오테파, 테니포시드, 토포테칸, 우라실 머스타드, 벨케이드, 빈블라스틴, 비노렐빈, 빈크리스틴, 리신, 예를 들어 리신 A 쇄, 아브린, 리보뉴클레아제, 온코나제, rapLR1, DNase I, 스타필로코쿠스 장독소-A, 미국자리공 항바이러스 단백질, 겔로닌, 디프테리아 독소, 슈도모나스 외독소, 및 슈도모나스 내독소.

예시적인 검출가능한 모이어티 (이는 또한 본원에 제공된 P3028 서열/구조물에 결합하는 예시적인 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합) 내에 또는 P3028에 특이적으로 결합하는 항체에 혼입될 수 있는 "검출가능한 표지"로 본원에서 지칭됨)는 다음을 포함한다: 방사성표지, 형광단, 비오틴, 형광 단백질, 콜로이드성 금 및/또는 조효소. 방사성표지는 ³H 및 ¹⁴C를 포함할 수 있다. 형광단은 알렉사-플루오르(Alexa-Fluor) 염료, 퍼시픽 블루(Pacific Blue), 퍼시픽 오렌지(Pacific Orange), 캐스케이드 블루(Cascade Blue), 캐스케이드 옐로우(Cascade Yellow) 및 R-피코에리트린, 플루오레세인 (FITC), 로다민, 텍사스 레드(Texas red), BODIPY 패밀리 염료, Cy2, Cy3, C5 및 Cy7을 포함할 수 있다. 형광 단백질은 블루(Blue), 시안(Cyan), 그린(Green), 옐로우(Yellow) 및 레드(Red) 형광 단백질을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 형광 표지는 FRET 쌍을 포함한다. 예를 들어, 단일 펩티드는 FRET 공여자 및 FRET 수용자에 부착될 수 있는데, 이들은 FRET 수용자가, 펩티드가 제1 배위 (예를 들어, 표적에 결합됨)로 존재할 때에는 실질적으로 FRET 공여자의 FRET 반경 내에 있지만 펩티드가 제2 배위 (예를 들어, 표적에 결합되지 않음)로 존재할 때에는 상기 반경 내에 있지 않도록 구성된다. 예를 들어, FRET 수용자는 제1 펩티드 및 제2 펩티드가 각각 표적, 예를 들어 표적 세포에 결합될 때에는 실질적으로 FRET 공여자의 FRET 반경 내에 있지만 적어도 1종의 펩티드가 표적에 결합되지 않을 때에는 상기 반경 내에 있지 않도록, 제1 펩티드는 FRET 수용자에 부착될 수 있고, 제2 펩티드는 FRET 공여자에 부착될 수 있다. 일부 실시양태에서, 형광 표지는 형광단 및 켄처를 포함한다. 켄칭은 펩티드가 제1 배위 (예를 들어, 표적에 결합됨)로 존재할 때에는 형광단에 의해 방출된 전자기 방사선을 흡수하지만 펩티드가 제2 배위 (예를 들어, 표적에 결합되지 않음)로 존재할 때에는 상기 방사선을 흡수하지 않도록, 형광단 및 켄처는 각각 펩티드에 부착될 수 있다. 조효소는 비타민, 예컨대 비오틴을 포함할 수 있다.

본원에 제공된 P3028 서열/구조물에 결합하는 예시적인 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합) 또는 P3028에 특이적으로 결합하는 항체 내에 혼입될 수 있는 예시적인 방사성핵종은 다음을 포함한다: ¹¹¹I, ¹³¹I, ⁹⁰Y, ⁶⁷Cu, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ²¹²Bi 또는 ²¹¹At. 바람직한 방사성표지된 면역조절 펩티드 억제제는, 예를 들어 종양에 6000 rad 초과를 전달할 수 있고, 환자의 골수가 300 rad 초과에 노출되지 않도록 충분한 친화도를 가질 수 있다. 하기하는 섹션은 본원에 기재된 면역조절 펩티드 억제제를 포함하는 단백질 복합체를 포괄하는 일부 실시양태를 보다 상세하게 기재한다.

일부 실시양태에서, 진단 키트가 제공된다. 키트는 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합, 또는 서열 183-185 또는 188-246 중 임의의 펩티드, 예를 들어 P3028 (서열 185)에 특이적으로 결합하는 항체를 포함할 수 있다. 키트는 또한 본원에 기재된 바와 같은 검출가능한 모이어티를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 키트의 펩티드 억제제 또는 항체는 비오티닐화된다.

담체 분자

일부 실시양태는 담체 분자를 포함한다. 담체 분자는, 예를 들어 안정성 또는 반감기를 증가시키고/거나, 용해도를 증가시키고/거나, 흡수를 증가시키고/거나, 펩티드를 적절한 세포, 기관 또는 조직에 표적화하고/거나, 치료 분자에 대한 면역 반응을 최소화할 수 있다.

예시적인 담체 분자는 인간 혈청 알부민; 다수의 산 모이어티를 갖는 중합체 (PCT 공개 번호 WO 01/93911 참조); 양이온성 치료 분자를 위한 약물 담체로서 사용될 때 그 분자의 안정성을 개선할 수 있는 음이온성 기-함유 친양쪽성 블록 공중합체 (PCT 공개 번호 WO 03/00778 참조); 기초적 치료 분자의 특성을 개선하기 위한 시클로덱스트린 및 산 (유럽 특허 번호 0 681 481); 소수성 치료 분자를 위한 담체로서의 지질 (PCT 공개 번호 WO 04/064731 참조); 이뮤노글로불린; 및 반감기를 개선하고 면역 반응을 최소화하기 위한 담체로서의 Fc 단편 (미국 특허 번호 7,736,653 참조)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드)는 담체를 포함하거나 담체에 연결된다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드)는 2종 이상의 담체를 포함한다.

일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제에 분해성 입자가 제공된다. 어떠한 이론에 제한되지는 않지만, 분해성 입자는 면역조절 입자가 가용성이게 할 수 있고, 체순환에서 제어된 기간 동안 그의 활성을 발휘하게 할 수 있는 것으로 고려된다. 따라서, 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드)를 포함하는 분해성 입자가 제공된다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제를 포함하는 분해성 입자는 그를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 임의로, 분해성 입자는 전신으로 투여될 수 있다. 임의로, 분해성 입자는 국부로, 예를 들어 면역억제의 부위에 또는 그 근처에 (예를 들어, 면역억제의 부위의 10cm, 9cm, 8cm 7cm, 6c, 5cm, 4cm, 3cm, 2cm, 1cm 또는 0.5cm 또는 이들 숫자 중 임의의 2개에 의해 한정된 범위 이내에) 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 대상체는 표 1-4 중 임의의 표의 면역조절 펩티드 서열에 의해 LFA-1 수용체 차단을 앓고 있다. 임의로, 분해성 입자는 1종 이상의 추가의 치료제와 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, 면역조절 펩티드 억제제가 LFA-1 수용체를 탈차단시키는데 (예를 들어 LFA-1 수용체로부터 결합된 면역조절 펩티드 또는 3028 구조물을 이탈시키는데) 유용한 경우에, 예를 들어 LFA-1 수용체를 통해 면역 반응을 자극하는 치료제는 면역조절 펩티드 억제제 및 분해성 입자와 공-투여하는데 유용할 수 있다. 일부 실시양태에서, 추가의 치료제는, 예를 들어 분해성 입자의 일부로서 면역조절 펩티드 억제제와 동시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 면역조절 펩티드 억제제 후에, 예를 들어 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24시간 이후에, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 또는 31일 이후에, 또는 상기 언급된 시간 중 임의의 2개에 의해 한정된 범위 이후에 투여된다. 다양한 적합한 분해성 입자가 본원의 실시양태에 따라 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 분해성 입자는 구체, 예를 들어 마이크로구체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 분해성 입자는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 분해성 입자는 전분 또는 당을 포함한다. 일부 실시양태에서, 분해성 입자는 유기 중합체 또는 유기 중합체의 조합, 예를 들어 폴리에스테르, 폴리포스페이트 에스테르, 폴리포스파젠, 폴리오르토에스테르, 폴리무수물, 폴리카르보네이트, 폴리아미드, 폴리-락트산, 폴리-글리콜산, 또는 2종 이상의 중합체, 예를 들어 열거된 중합체 중 2종 이상의 조합을 포함한다.

단백질 복합체

일부 실시양태는 면역조절 펩티드 억제제를 포함하는 단리된 단백질 복합체를 포함하는 조성물을 포함한다. 단리된 단백질 복합체는 면역조절 펩티드, 예를 들어 P3028 (서열 185) 또는 표 1-4에 기재된 면역조절 펩티드 (서열 183-184 및 188-246) 중 어느 1종 이상, 및 적어도 1종의 면역조절 펩티드 억제제 (예를 들어, 표 5.1에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상)를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 단리된 단백질 복합체는 펩티드 3028 (서열 185), 및 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96 또는 98의 서열 또는 표 5.1에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상을 포함하는 억제제 펩티드를 포함한다. P3028 서열/구조물에 결합된, 펩티드 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 각각 포함하는 예시적인 단백질 복합체가 실시예 10, 11 및 12, 및 표 5.1에 제공된다. 단백질 복합체는 P3028 또는 그의 변이체의 아미노산 잔기와 억제제 펩티드 또는 펩티드 모방체의 아미노산 사이에 적어도 하나의 유리한 정전기적 상호작용을 포함할 수 있다. 단백질 복합체는 P3028 또는 그의 변이체의 아미노산 잔기와 억제제 펩티드 또는 펩티드 모방체의 아미노산 사이에 적어도 하나의 유리한 소수성 상호작용을 포함할 수 있다 (실시예 11 참조). 일부 실시양태에서, 단백질 복합체는, P3028에 대해 적어도 약 80% 동일성, 예를 들어 P3028에 대해 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 P3028의 변이체를 포함한다. 단백질 복합체는 암 세포에 결합된 적어도 하나의 단백질, 예를 들어 표면 단백질을 추가로 포함할 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 단리된 단백질 복합체는 암 세포의 표면으로 국재화될 수 있다.

따라서, 일부 실시양태는 본원에 기재된 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상을 포함하는 단백질 복합체의 제조 방법을 포함한다. 방법은, 예를 들어 P3028 또는 그의 변이체 또는 단편에, 본원에 기재된 바와 같은 면역조절 펩티드 억제제를 결합시킴으로써 실시될 수 있다. 방법은 본원에 기재된 바와 같은 rampo 연구에 의해 달성될 수 있는, 복합체의 존재를 검출하는 것을 임의로 포함할 수 있다.

일부 실시양태는 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드를, P3028 서열/구조물 (서열 185)을 포함하는 분자에 결합시키는 방법을 포함한다. 일부 실시양태는 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589 중 적어도 하나, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드를, P3028 서열/구조물 (서열 185)을 포함하는 분자에 결합시키는 방법을 포함한다. 일부 실시양태는, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589 중 적어도 하나, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하는 펩티드를, P3028 서열/구조물 또는 P3028의 단편 (서열 185)을 포함하는 단백질에 결합시키는 방법을 포함하며, 여기서 P3028의 단편은 적어도 약 10개 아미노산, 보다 바람직하게는 11개 아미노산, 보다 바람직한 12개 아미노산, 보다 바람직하게는 13개 아미노산, 보다 바람직하게는 14개 아미노산, 보다 바람직하게는 15개 아미노산, 보다 바람직하게는 16개 아미노산, 또는 보다 바람직하게는 17개 아미노산의 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 결합은 단백질 복합체의 구성원 사이의 유리한 친수성 및/또는 정전기적 상호작용을 포함한다. 일부 실시양태에서, 결합은, 예를 들어 가교를 통한 단백질 복합체의 구성원 사이의 공유 결합을 포함한다. 가교는 화학적으로 및/또는 전자기 방사선, 예를 들어 자외선 스펙트럼의 전자기 방사선을 통해 유도될 수 있다.

일부 실시양태에서, 펩티드는 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 583-586 또는 589 중 적어도 하나, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함한다. 예시적인 지지체는 핀, 비드, 표면, 매트릭스, 인공 세포 표면, 또는 세포 표면을 포함한다. 예를 들어, 펩티드는 지지체에 친화성 태그를 통해 고정될 수 있다. 일부 실시양태에서, P3028 또는 그의 변이체 또는 단편은 지지체에 고정된다. 일부 실시양태에서, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 583-586 또는 589 중 적어도 하나, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하는 펩티드는 지지체에 고정되고, P3028 또는 그의 변이체 또는 단편은 용매 중에 용해된다. 일부 실시양태에서, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 583-586 또는 589 중 적어도 하나, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하는 펩티드는 용매 중에 용해되고, P3028 또는 그의 변이체 또는 단편은 지지체에 고정된다. 일부 실시양태에서, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 583-586 또는 589 중 적어도 하나, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하는 펩티드 및 P3028은 각각 용매, 예를 들어 혈청 중에 용해된다.

일부 실시양태에서, 결합은 유기체, 예를 들어 세포외 매트릭스에서, 및/또는 유기체, 예컨대 인간으로부터 수득된 혈청 또는 생물학적 샘플에서 일어난다. 생물학적 샘플은 유기체의 적어도 하나의 세포, 조직 또는 세포외 조성물을 포함할 수 있고, 추출물, 정제된 추출물 및/또는 그의 분획을 포함할 수 있다. 예시적인 생물학적 샘플은 전혈, 혈청, 골수, 단리된 면역 세포 및 종양 생검을 포함한다. 단리된 면역 세포는 백혈구, 및 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 예를 들어 림프구, 단핵구 또는 대식세포를 포함할 수 있다. 방법은 복합체의 적어도 하나의 구성원, 예를 들어 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 583-586 또는 589 중 적어도 하나, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하는 펩티드를 유기체에게 전달하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 결합은 시험관내, 예를 들어 완충제 용액에서 또는 생물학적 샘플에서 일어난다. 방법은 복합체의 적어도 하나의 구성원, 예를 들어 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 583-586 또는 589 중 적어도 하나, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하는 펩티드를, 복합체의 나머지 구성원을 함유하는 용액에 첨가하는 것을 포함할 수 있다. 대안적으로, 방법은 복합체의 2종 이상의 구성원, 예를 들어 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 583-586 또는 589 중 적어도 하나, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하는 펩티드, 및 P3028 또는 그의 단편 또는 변이체를 용액에 첨가하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 583-586 또는 589 중 적어도 하나, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하는 펩티드가 생물학적 샘플에 첨가된다.

일부 실시양태는 복합체의 존재를 검출하는 것을 포함한다. 일부 실시양태는, 예를 들어 ELISA에 의해, 지지체에 고정되는 펩티드에 결합된 P3028 서열/구조물의 존재를 검출하는 것 (실시예 12 참조)을 포함한다. 일부 실시양태는 FRET에 의해 복합체의 존재를 검출하는 것을 포함한다. 예를 들어, FRET 전달은 단지 복합체가 형성될 때에만 일어나도록, FRET 공여자 형광단은 복합체의 제1 구성원에 부착될 수 있고, FRET 수용자 형광단은 복합체의 제2 구성원에 부착될 수 있다. 일부 실시양태는 켄칭의 정지에 의해 복합체의 존재를 검출하는 것을 포함한다. 예를 들어, 복합체 구성원이 결합되어 있지 않을 때 형광단이 실질적으로 켄처 반경 내에 있고 켄처가 형광단에 의해 방출된 전자기 방사선을 흡수하도록, 복합체의 구성원은 형광단 및 형광단에 의해 방출된 전자기 방사선을 위한 켄처에 부착될 수 있다 (예를 들어, 켄처는 N 말단에 부착될 수 있고 형광단은 C 말단에 부착될 수 있거나, 또는 켄처는 C 말단에 부착될 수 있고 형관단은 N 말단에 부착될 수 있다). 복합체 형성 시에, 형광단은 켄처 반경의 밖에 있어, 형광단에 의해 방출된 전자기 방사선의 검출을 가능하게 할 수 있다.

일부 실시양태는 복합체 기능을 검출하는 것에 의해 복합체의 존재를 검출하는 것을 포함한다. 예를 들어, 펩티드 3028이 LFA-1 및/또는 IL-2 수용체에 결합된 면역 세포는 감소된 IL-2-유도 증식, T 세포 수용체 자극, 백혈구 확산, 면역 세포 이동 및/또는 NK 세포 세포독성을 나타낼 수 있다 (실시예 참조 2-6). 증가된, 예를 들어 복합체 중 적어도 하나의 구성원이 첨가되지 않은 비처리 대조군 샘플과 비교하여 증가된 IL-2-유도 증식, T 세포 수용체 자극, 백혈구 확산, 면역 세포 이동 및/또는 NK 세포 세포독성의 직접적 또는 간접적 검출은 복합체 형성을 검출할 수 있다. 예를 들어, 실시예 13에 제시된 바와 같이, P3028 서열/구조물과 면역조절 펩티드 억제제 사이의 복합체의 형성은 림프구 자극을 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 실시예 1에 제시된 바와 같이, 복합체의 형성은 LFA-1 수용체를 비차단시킬 수 있다. 따라서, 일부 실시양태는, 예를 들어 복합체 형성이 결핍되어 있는 것으로 공지된 대조군 샘플과 비교하여 증가된 림프구 자극을 검출하는 것, 비차단된 LFA-1 수용체를 검출하는 것, 및/또는 비차단 LFA-1 수용체를 통해 면역 세포 자극을 검출하는 것에 의해 간적접으로 복합체 형성을 검출하는 것을 포함한다.

일부 실시양태는 복합체 구성원의 국재화를 검출하는 것에 의해 복합체의 존재를 검출하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 복합체의 존재를 검출하는 것은 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589 중 적어도 하나, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합, 또는 종양 세포 상의 P3028 서열/구조물에 특이적으로 결합하는 펩티드모방체를 포함하는 면역조절 펩티드 억제제의 존재를 검출하는 것을 포함한다. 실시예 1에 제시된 바와 같이, P3028 서열/구조물은 종양 세포에 결합할 수 있다. 실시예 14에 제시된 바와 같이, P3028 서열/구조물의 억제제는, 예를 들어 P3028 서열/구조물에 결합함으로써 종양 세포에 결합할 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 종양 세포 상의 P3028 서열/구조물의 억제제, 예를 들어 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589 중 적어도 하나, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합의 존재는 복합체 형성을 나타낼 수 있다. 따라서, 복합체 형성은 억제제와 종양 세포의 적어도 1종의 마커와의 공동국재화에 의해 검출될 수 있다. 공동국재화는, 예를 들어 면역조직화학 또는 유동 세포측정법에 의해 검출될 수 있다. 일부 실시양태에서, 억제제는, 예를 들어 형광단 또는 방사성표지로 표지된다. 일부 실시양태에서, 억제제는, 예를 들어 억제제에 특이적으로 결합하는 1차 항체로 검출된다. 하기하는 섹션은 면역조절 펩티드 억제제를 코딩하는 핵산 실시양태의 일부를 보다 상세하게 기재한다.

억제제 펩티드를 코딩하는 핵산

일부 실시양태는 면역조절 펩티드 억제제를 코딩하는 단리된 핵산을 포함한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 주어진 펩티드 서열에 대해, 그 펩티드 서열을 코딩하는 핵산 서열이 용이하게 결정될 수 있고, 유전자 코드의 축중성으로 인해, 하나 초과의 핵산 서열이 임의의 하나의 펩티드를 코딩할 수 있다는 것을 인지할 것이다. 펩티드를 코딩하는 핵산 서열은 또한 공지된 기술을 사용하여 발현 벡터 내로 혼입될 수 있다. 발현 벡터는 펩티드를 발현 시스템, 예를 들어 숙주 세포, 숙주 유기체, 세포-무함유 발현 시스템 등에서 생산하는데 사용될 수 있다. 발현 벡터는 또한 펩티드를 유기체, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같이 면역억제의 차단을 필요로 하는 환자에서 생산하는데 사용될 수 있다. 예시적인 발현 벡터는 플라스미드 DNA, 예컨대 pVAX 구축물, 박테리오파지 DNA, 코스미드 DNA, 인공 염색체, 예컨대 BAC 및 YAC, 레트로바이러스 시스템, 예를 들어 렌티바이러스, DNA 바이러스 시스템, 예를 들어 아데노바이러스 또는 백시니아 바이러스 (예를 들어, MVA)를 포함한다. 번역 개시 코돈에 상응하는 N-말단 아미노산 (전형적으로 ATG에 상응하는 Met)을 갖지 않는 펩티드의 경우, 발현 벡터는 인-프레임 번역 개시 코돈을 포함할 수 있다. 이러한 아미노산은 절단가능한 링커, 예를 들어 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 서열에 의해 펩티드의 N-말단으로부터 분리될 수 있다. 발현 벡터는 전사 조절 서열, 예를 들어 코어 프로모터, 전사 인핸서 및/또는 인슐레이터 서열을 포함할 수 있다. 이러한 서열은 전사 기구 (예를 들어 RNA 폴리머라제 III)의 조립, 및 이후 펩티드를 코딩하는 전사체의 생산을 (예를 들어, 전사에 유리한 이색 환경을 촉진함으로써) 용이하게 할 수 있다.

일부 실시양태에서, 발현 벡터는 2 카피 이상의 펩티드 및/또는 2종 이상의 고유한 펩티드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 발현 벡터는 2종 이상의 펩티드를 코딩하고, 각 펩티드는 고유한 전사 유닛 (예를 들어, 프로모터, 전사 인핸서 및/또는 전사 종결인자)의 제어 하에 있다. 일부 실시양태에서, 2종 이상의 펩티드를 코딩하는 핵산은 단일 전사 유닛의 제어 하에 있다. 이러한 실시양태에서, 개별 펩티드를 코딩하는 서열은 개별 번역 개시 부위, 예를 들어 내부 리보솜 진입 부위 (IRES)의 제어 하에 있을 수 있다. 이러한 실시양태에서, 단일 핵산은 적어도 하나의 프로테아제 표적 부위에 의해 분리되는 2종 이상의 펩티드를 코딩하는 단백질 또는 폴리펩티드를 코딩할 수 있다.

관련 기술분야의 통상의 기술자는 펩티드, 예컨대 펩티드 억제제를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 펩티드의 서열을 기반으로 용이하게 구축될 수 있다는 것을 인지할 것이다. (서열 2-33)의 면역조절 펩티드 억제제 펩티드의 서열을 코딩하는 예시적인 폴리뉴클레오티드는 표 5.2에 제공된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 유전자 코드의 축중성으로 인해, 주어진 폴리펩티드가 하나 초과의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 따라서, 유전자 코드의 전형적인 축중성을 설명하는 컨센서스 폴리뉴클레오티드, 뿐만 아니라 예시적인 폴리뉴클레오티드가 본원에서, 예를 들어 표 5.2에 제공된다. 표 5.2의 폴리뉴클레오티드가 예로서 제공되고, 서열 102-165를 포함한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 추가의 폴리뉴클레오티드가 펩티드 억제제, 예컨대 본원에 개시된 펩티드 억제제를 코딩할 수 있다는 것 (예를 들어, 표 5.1에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상을 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 실시양태임)을 추가로 인지할 것이다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드는, 예를 들어 대안적 스플라이싱에 의해, 및/또는 폴리뉴클레오티드의 염기를 변형시킬 수 있는 효소, 예컨대 RNA-특이적 아데노신 데아미나제 (ADAR)에 의해 전사후 변형될 수 있다.

<표 5.2> P3028 서열/구조물의 펩티드 억제제를 코딩하는 폴리뉴클레오티드

따라서, 본원에 기재된 실시양태는 또한 본원에 제공된 P3028 서열/구조물에 결합하는 예시적인 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96 또는 98에 의해 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상)을 코딩하는 단리된 핵산 또는 폴리뉴클레오티드를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물을 포함한다. 상기 언급된 핵산 또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 구축물 및 플라스미드가 또한 실시양태이다. 하기 섹션은 본원에 기재된 조성물 중 1종 이상에 포함될 수 있는 추가의 성분을 논의한다.

##########제약 조성물

일부 실시양태에서, 펩티드 억제제 (예를 들어, 표 5.1에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상)를 포함하거나, 그로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진 제약 조성물이 제공된다. 제약 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 펩티드 억제제 및 본원에 기재된 바와 같은 제약상 허용되는 성분을 포함할 수 있다. 예시적인 제약상 허용되는 성분은 희석제, 담체, 부형제 및/또는 완충제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진다. 예를 들어, 조성물은 화학식 I, XX₁VKX₂X₃X₄ (서열 166)의 펩티드를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, X는 임의적인 서열이고, KKLDT (서열 167), RKLDT (서열 168), KKGDT (서열 169), KKEDT (서열 170), KKLDQ (서열 171), KKGDQ (서열 252), KKEDQ (서열 253), RKLDQ (서열 254), RKGDQ (서열 255), RKEDQ (서열 256), RKGTD (서열 257), RKEDT (서열 258), KLDT (서열 172), KGDT (서열 259), KEDT (서열 260), KLDQ (서열 261), KGDQ (서열 262), KEDQ (서열 263), LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T 또는 Q일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₁은 FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT 또는 VL 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₂는 LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT 또는 VH 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₃은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₄는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X가 부재하는 경우에, X₁은 FF이고, X₂는 LS이다. 일부 실시양태에서, 화학식 I을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 조성물은 화학식 II, X₂₀TFFVKLSX₂₁X₂₂ (서열 173)의 펩티드를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₀은 임의적인 서열이고, KKLD (서열 174), RKLD (서열 175), KKGD (서열 176), KKED (서열 177), KLD, LD 또는 D일 수 있거나 부재할 수 있다. X₂₁은 임의적인 서열이고, LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₂는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 II를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 조성물은 화학식 III, X₃₀X₃₁VKLX₃₂LX₃₃TEX₃₄ (서열 178) 또는 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96 또는 98의 펩티드를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 임의적인 서열이고, F, S, M, V, T 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 F이다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S, Q, M, T 또는 H일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S이다. X₃₃은 F, M, Q, H, N, P, S, G, A 또는 R일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₄는 F이다. X₃₄는 임의적인 서열이고, R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₀은 임의적인 서열이고, KKLDTF (서열 179), KLDTF (서열 180), LDTF (서열 181), DTF, TF 또는 F일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 III을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VII, X₇₀₀K X₇₀₁X₇₀₂X₇₀₃ X₇₀₄X₇₀₅X₇₀₆K X₇₀₇ X₇₀₈ X₇₀₉ X₇₁₀ X₇₁₁E X₇₁₂ (서열 394)의 펩티드를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₁은 임의적인 서열이고, L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₂는 임의적인 서열이고, D, A, E, I, V, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₃은 임의적인 서열이고, T, C, M, N, P, Q, R, S, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₄는 임의적인 서열이고, F, A, I, M, N, P, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₅는 임의적인 서열이고, F, L, M, Q, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₆은 임의적인 서열이고, V, F, G, L, P 또는 R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₇은 임의적인 서열이고, L, A, F, G, I, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₈은 임의적인 서열이고, S, H, M, N, Q 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₉는 임의적인 서열이고, L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₀은 임의적인 서열이고, F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₁은 임의적인 서열이고, T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₂는 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VIII, X₈₀₀K X₈₀₁K X₈₀₂E X₈₀₃ (서열 395)의 펩티드를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₁은 임의적인 서열이고, LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₂는 임의적인 서열이고, LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₃은 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VIII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다. 추가로, 조성물은 표 5.1에 제시된 펩티드 중 어느 1종 이상을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 조성물에 사용된 표 5.1로부터의 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

제약 조성물은 1종 이상의 다른 제약상 허용되는 제약 성분, 예컨대 제약상 허용되는 희석제, 담체, 부형제 및/또는 완충제를 포함할 수 있다. "제약상 허용되는"은 활성 성분의 생물학적 활성의 유효성을 감소시키지 않는 비-독성 화합물을 의미한다. 이러한 제약상 허용되는 첨가제, 희석제, 완충제, 담체 또는 부형제는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다 (문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A.R Gennaro, Ed., Mack Publishing Company (1990) 및 handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd edition, A. Kibbe, Ed., Pharmaceutical Press (2000)] 참조).

제약 조성물은 완충제를 포함할 수 있다. 용어 "완충제"는 pH를 안정화하는 목적을 갖는 산-염기 혼합물을 함유하는 수용액을 지칭하는 것으로 의도된다. 완충제의 예는 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; 알긴산; 발열원-무함유 물; 등장성 염수; 링거액; 에틸 알콜; pH 완충 용액; 폴리에스테르, 폴리카르보네이트 및/또는 폴리무수물; 및 제약 제제에 이용되는 다른 비-독성 상용성 물질이다. 완충제의 다른 예는 트리즈마, 비신, 트리신, MOPS, MOPSO, MOBS, 트리스, 헤페스, HEPBS, MES, 포스페이트, 카르보네이트, 아세테이트, 시트레이트, 글리콜레이트, 락테이트, 보레이트, ACES, ADA, 타르트레이트, AMP, AMPD, AMPSO, BES, CABS, 카코딜레이트, CHES, DIPSO, EPPS, 에탄올아민, 글리신, HEPPSO, 이미다졸, 이미다졸락트산, PIPES, SSC, SSPE, POPSO, TAPS, TABS, TAPSO 및 TES이다.

제약 조성물은 희석제를 포함할 수 있다. 용어 "희석제"는 제약 제제에서 화합물을 희석하는 목적을 갖는 수성 또는 비-수성 용액을 지칭하는 것으로 의도된다. 희석제는 염수, 물, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 또는 에탄올 중 1종 이상일 수 있다.

제약 조성물은 부형제를 포함할 수 있다. 부형제는 탄수화물, 계면활성제, 중합체, 지질 및 미네랄 중 1종 이상일 수 있다. 탄수화물의 예는 락토스, 수크로스, 만니톨 및 시클로덱스트린을 포함하며, 이는 예를 들어 동결건조를 용이하게 하기 위해 조성물에 첨가된다. 중합체의 예는 전분, 셀룰로스 에테르, 셀룰로스 카르복시메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸 셀룰로스, 히드록시에틸 셀룰로스, 에틸히드록시에틸 셀룰로스, 알기네이트, 카라기난, 히알루론산 및 그의 유도체, 폴리아크릴산, 폴리술포네이트, 폴리에틸렌글리콜/폴리에틸렌 옥시드, 폴리에틸렌옥시드/폴리프로필렌 옥시드 공중합체, 다양한 가수분해 정도의 폴리비닐알콜/폴리비닐아세테이트 및 폴리비닐피롤리돈 (모든 다양한 분자량)이며, 이는 예를 들어 점도 제어를 위해, 생체접착을 달성하기 위해, 또는 지질을 화학물질 및 단백질분해적 분해로부터 보호하기 위해 조성물에 첨가된다. 지질의 예는 지방산, 인지질, 모노-, 디-, 및 트리글리세리드, 세라미드, 스핑고지질 및 당지질 (모든 다양한 아실 쇄 길이 및 포화도), 난황 레시틴, 대두 레시틴, 수소화된 난황 및 대두 레시틴이며, 이는 중합체에 대한 것과 유사한 이유를 위해 조성물에 첨가된다. 미네랄의 예는 활석, 산화마그네슘, 산화아연 및 산화티타늄이며, 이는 액체 축적의 감소 또는 유리한 안료 특성과 같은 이익을 얻기 위해 조성물에 첨가된다.

제약 조성물은 담체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 담체는 비-수성 담체이다. 본 발명의 제약 조성물에 이용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예는 물, 에탄올, 폴리올 (예컨대 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 그의 적합한 혼합물, 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일, 및 주사가능한 유기 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트를 포함한다. 적절한 유동성은 예를 들어 코팅 물질, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우에 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.

이들 조성물은 아주반트 예컨대 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제를 함유할 수 있다. 대상 화합물에 대한 미생물의 작용의 방지는 다양한 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산 등을 포함시킴으로써 보장될 수 있다. 등장화제, 예컨대 당, 염화나트륨 등을 조성물에 포함시키는 것이 또한 바람직할 수 있다. 추가로, 주사가능한 제약 형태의 지속 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제 예컨대 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시키는 것에 의해 이루어질 수 있다.

제약 조성물은 연장 방출을 위해 제제화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 연장 방출을 위해 겔 또는 겔-유사 물질로서 제제화된다. 겔 또는 겔-유사 물질은 약 3일, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14일, 3-4일, 3-5, 3-6, 3-7, 3-8, 3-9, 3-10, 3-11, 3-12, 3-13, 3-14, 4-5, 4-6, 4-7, 4-8, 4-9, 4-10, 4-11, 4-12, 4-13, 4-14, 5-6, 5-7, 5-8, 5-9, 5-10, 5-11, 5-12, 5-13, 5-14, 6-7, 6-8, 6-9, 6-10, 6-11, 6-12, 6-13, 6-14, 7-8, 7-9, 7-10, 7-11, 7-12, 7-13, 7-14, 8-14, 9-14 또는 10-14일 동안 생리학적 조건 하에 안정하게 유지될 수 있다. 일부 실시양태에서, 겔은 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393 또는 583-586 중 임의의 것을 포함하거나 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 억제제 펩티드를 포함하며, 여기서 억제제 펩티드는 수용성이 아니고, 완충제 또는 아주반트는 억제제 펩티드와 조합되었을 때 겔을 제제화하도록 선택된다. 어떠한 이론에 제한되지는 않지만, 본원의 일부 실시양태에 따르면, 겔은 억제제 펩티드의 느린 방출에 적합할 수 있다.

제약 조성물은 수용액 중 용해도를 위해 제제화될 수 있다. 예로서, 서열 589로 이루어지거나 또는 본질적으로 이루어진 억제제 펩티드는 수용액 중에 가용성인 것으로 밝혀졌다. 이에 따라, 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 수용액 중에 가용화되거나 또는 부분적으로 가용화된 서열 589로 이루어지거나 또는 본질적으로 이루어진 억제제 펩티드를 포함한다. 임의로, 수용액은 아주반트로서 제공될 수 있다.

투여 형태

본원에 기재된 제약 제제는 국부로 또는 전신으로 투여될 수 있다. 투여 경로는 국소, 안구, 비강, 폐, 협측, 비경구 (정맥내, 피하 및 근육내), 경구, 질 및 직장을 포함한다. 경구 투여가 가장 통상적으로 사용된다.

일부 실시양태에서, 예를 들어 종양의 면역 세포 침습, 종양의 세포독성 또는 종양의 면역 세포 수용체의 탈차단이 바람직한 경우에, 제약 제제는 종양에 또는 그 근처에 투여된다. 예를 들어, 제약 제제는 종양주위로, 또는 종양의 10cm 이내에, 예를 들어 종양의 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 또는 0.5cm 이내에 또는 이들 거리 중 임의의 2개에 의해 규정되는 범위 내에 투여될 수 있다.

제약 조성물은 치료 유효량 또는 용량으로 환자에 투여될 것이다. 치료 유효량은 환자가 앓고 있는 장애의 증상을 적어도 부분적으로 정지시키기에 충분한 제약 조성물의 용량을 포함한다. 정확한 용량은 투여 방식, 장애의 성질 및 중증도에 따라 달라진다. 전반적 건강, 환자의 성별, 연령 및 체중에 따라 상이한 용량이 필요할 수 있다. 용량의 투여는 개별 용량 단위 또는 그 밖의 여러 더 작은 용량 단위의 형태로의 단일 투여, 및 또한 특정 간격, 예를 들어 1일 간격 (예를 들어, 용량 사이에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30일 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함))의 분할 용량의 다중 투여 둘 다에 의해 수행될 수 있다. 예시적인 투여는 밀리그램, 마이크로그램 또는 나노그램-범위, 예를 들어 대상체의 체중 kg당 밀리그램, 마이크로그램 또는 나노그램의 용량을 포함할 수 있다. 활성 화합물 또는 물질은 또한 투여 형태에 따라 함께 또는 개별적으로 투여될 수 있다. 본원의 일부 실시양태에 따른 예시적인 투여 요법은 화합물 또는 물질의 제1 용량이 제1 투여로 투여되고 화합물 또는 물질의 제2 용량이 제2 투여로 투여되는 "프라임 부스트" 접근법을 포함한다. 임의로, 추가의 후속 투여 (예를 들어 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9 또는 제10)가 수행된다. 임의로, 제1 용량은 후속 용량 (예를 들어 제2 용량, 또는 수행되는 경우, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9 또는 제10) 초과, 예를 들어 후속 용량의 적어도 1.1x, 1.2x, 1.5x, 2x, 3x, 4x, 5x, 10x, 20x, 30x, 40x, 50x, 100x, 200x, 500x, 1000x, 2000x, 5000x 또는 10000x이다. 임의로, 후속 용량 (예를 들어 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9 또는 제10)은 제1 용량 초과, 예를 들어 제1 용량의 적어도 1.1x, 1.2x, 1.5x, 2x, 3x, 4x, 5x, 10x, 20x, 30x, 40x, 50x, 100x, 200x, 500x, 1000x, 2000x, 5000x 또는 10000x이다. 일부 실시양태에서, 후속 용량 (예를 들어 제1 용량 후 제2 용량, 수행되는 경우, 제2 용량 후 제3 용량, 수행되는 경우, 제4 용량 후 제5 용량)은, 선행 용량 적어도 1일 후, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 60, 90 또는 100일 후 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)에 투여된다.

적합한 제제 형태는 예를 들어 과립, 분말, 정제, 코팅된 정제, (마이크로) 캡슐, 미세과립, 발포성 분말 또는 과립, 좌제, 앰플 형태의 주사액 및 또한 활성 화합물을 연장 방출하는 제제이며, 이들 제제의 부형제, 희석제 또는 담체는 상기 기재된 바와 같이 통상적으로 사용된다. 다른 제제는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 활성 성분의 다양한 방출 프로파일을 일으키는 것들일 수 있다. 그 예는 지속-방출, 지속-작용, 연장-방출, 지연-방출 또는 지연된-방출, 제어-방출, 변형 방출 또는 연속-방출을 포함한다. 지속-방출 정제 또는 캡슐의 이점은 이들이 종종 동일한 약물의 즉시-방출 제제보다 덜 빈번하게 투여될 수 있으며 이들이 혈류 내의 약물의 보다 일정한 수준을 유지한다는 점이다. 오늘날, 많은 지연-방출 약물은 용해 약물이 매트릭스 내의 홀을 통해 그의 출구를 발견해야 하도록 불용성 물질(들) (예를 들어 일부 아크릴 또는 키틴)의 매트릭스에 활성 성분이 포매되게 제제화된다. 일부 약물은, 한 면에는 레이저로 뚫린 홀이 있고 다른 면에는 다공성 막이 있는 중합체-기반 정제 내에 봉입된다. 위산이 다공성 막을 통해 밀어 내고, 이에 따라 약물은 레이저로 뚫린 홀을 통해 밀려 나간다. 이때, 중합체 용기가 무손상 상태로 남아있는 동안에 전체 약물 용량은 계 내로 방출되며, 중합체 용기는 나중에 정상 소화를 통해 배설된다. 일부 제제에서, 약물은 매트릭스 내로 용해되고, 매트릭스는 물리적으로 팽윤하여 겔을 형성하고, 이는 약물이 겔의 외부 표면을 통해 나가도록 한다. 마이크로-캡슐화는 또한 복합 용해 프로파일을 제공하기 위한 보다 완전한 기술로 간주된다. 불활성 코어 주위에 활성 제약 성분을 코팅하고 불용성 물질로 여기에 층을 만들어 마이크로구체를 형성함으로써, 보다 일관되며 반복가능한 용해 속도를 얻는 것이 가능하다. 일부 실시양태에서, 조성물은 중량을 기준으로 적어도 대략, 적어도 0.1%의 면역조절 펩티드 억제제, 예를 들어 중량을 기준으로 적어도 0.1%, 0.2%, 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 20% 또는 30% (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)의 면역조절 펩티드 억제제를 포함한다. 이들 모두는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다.

알부민 또는 알부민 단편의 존재를 검출하는 방법

일부 실시양태는 면역조절 펩티드 억제제를 생물학적 샘플과 접촉시켜 면역조절 펩티드 억제제를 알부민 또는 알부민 단편에 결합시키고 결합된 면역조절 펩티드 억제제의 존재를 검출함으로써, 생물학적 샘플에서 알부민 또는 알부민 단편의 존재를 검출하는 방법을 포함한다. 일부 실시양태에서, P3028 서열/구조물 또는 그의 단편의 존재를 검출하는 방법은 P3028 서열/구조물을 포함하는 생물학적 샘플을 P3028 서열/구조물에 결합하는 면역조절 펩티드 억제제 또는 항체와 접촉시키고, 결합된 면역조절 펩티드 억제제의 존재를 검출하는 것을 포함할 수 있다. 임의로, 면역조절 펩티드 억제제 또는 항체는 본원에 기재된 바와 같은 검출가능한 모이어티를 포함한다.

이들 방법에 사용된 면역조절 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 펩티드를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 예를 들어, 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 I, XX₁VKX₂X₃X₄ (서열 166)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X는 임의적인 서열이고, KKLDT (서열 167), RKLDT (서열 168), KKGDT (서열 169), KKEDT (서열 170), KKLDQ (서열 171), KKGDQ (서열 252), KKEDQ (서열 253), RKLDQ (서열 254), RKGDQ (서열 255), RKEDQ (서열 256), RKGTD (서열 257), RKEDT (서열 258), KLDT (서열 172), KGDT (서열 259), KEDT (서열 260), KLDQ (서열 261), KGDQ (서열 262), KEDQ (서열 263), LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T 또는 Q일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₁은 FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT 또는 VL 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₂는 LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT 또는 VH 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₃은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₄는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X가 부재하는 경우에, X₁은 FF이고, X₂는 LS이다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 I을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 II, X₂₀TFFVKLSX₂₁X₂₂ (서열 173)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₀은 임의적인 서열이고, KKLD (서열 174), RKLD (서열 175), KKGD (서열 176), KKED (서열 177), KLD, LD 또는 D일 수 있거나 부재할 수 있다. X₂₁은 임의적인 서열이고, LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₂는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 II를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 III, X₃₀X₃₁VKLX₃₂LX₃₃TEX₃₄ (서열 178)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₀은 임의적인 서열이고, KKLDTF (서열 179), KLDTF (서열 180), LDTF (서열 181), DTF, TF 또는 F일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 임의적인 서열이고, F, S, M, V, T 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 F이다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S, Q, M, T 또는 H일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S이다. X₃₃은 F, M, Q, H, N, P, S, G, A 또는 R일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₄는 F이다. X₃₄는 임의적인 서열이고, R일 수 있거나 부재할 수 있다. 추가로, 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96 또는 98을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 III을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VII, X₇₀₀K X₇₀₁X₇₀₂X₇₀₃ X₇₀₄X₇₀₅X₇₀₆K X₇₀₇ X₇₀₈ X₇₀₉ X₇₁₀ X₇₁₁E X₇₁₂ (서열 394)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₁은 임의적인 서열이고, L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₂는 임의적인 서열이고, D, A, E, I, V, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₃은 임의적인 서열이고, T, C, M, N, P, Q, R, S, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₄는 임의적인 서열이고, F, A, I, M, N, P, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₅는 임의적인 서열이고, F, L, M, Q, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₆은 임의적인 서열이고, V, F, G, L, P 또는 R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₇은 임의적인 서열이고, L, A, F, G, I, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₈은 임의적인 서열이고, S, H, M, N, Q 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₉는 임의적인 서열이고, L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₀은 임의적인 서열이고, F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₁은 임의적인 서열이고, T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₂는 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VIII, X₈₀₀K X₈₀₁K X₈₀₂E X₈₀₃ (서열 395)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₁은 임의적인 서열이고, LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₂는 임의적인 서열이고, LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₃은 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VIII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 IX를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 펩티드 억제제는 화학식 IX: X₉₀₁X₉₀₂X₉₀₃X₉₀₄X₉₀₅X₉₀₆X₉₀₇X₉₀₈X₉₀₉X₉₁₀X₉₁₁X₉₁₂X₉₁₃X₉₁₄X₉₁₅X₉₁₆X₉₁₇의 펩티드를 포함하고, 여기서 X₉₀₁은 임의의 아미노산이거나 부재하고; X₉₀₂는 양으로 하전된 아미노산, F 또는 N이고; X₉₀₃은 임의의 아미노산이고; X₉₀₄는 임의의 아미노산이고; X₉₀₅는 극성 하전된 아미노산, R, Y 또는 W이고; X₉₀₆은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₇은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₈은 M 또는 F가 아닌 소수성 비-방향족 탄소 쇄 아미노산이고; X₉₀₉는 양으로 하전된 아미노산, T, Q 또는 Y이고; X₉₁₀은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₁은 극성 하전된 아미노산 또는 H이고; X₉₁₂는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₃은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₄는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₅는 음으로 하전된 아미노산, Y 또는 Q이고; X₉₁₆은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₇은 하나 이상의 양으로 하전된 아미노산이거나 부재한다. 임의로, X₉₀₁은 양으로 하전된 아미노산을 포함한다. 임의로, X₉₀₁은 R 또는 K이다. 임의로, X₉₁₇은 RR이다. 일부 실시양태에서, 화학식 IX를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 이들 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제시된 펩티드 중 어느 1종 이상 또는 그에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된, 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6으로부터의 단리된 펩티드 또는 그에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합은 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

따라서, 면역조절 펩티드 억제제가 P3028 서열/구조물을 포함하는 알부민 단편 또는 알부민에 결합하면, 억제제의 존재가 검출되고, 따라서 P3028 서열/구조물의 존재가 검출된다.

P3028 서열/구조물을 포함하는 알부민 또는 알부민 단편의 존재를 검출하기 위한 일부 방법에서, 면역조절 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 펩티드를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드를 포함한다. 예를 들어, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 I, XX₁VKX₂X₃X₄ (서열 166)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X는 임의적인 서열이고, KKLDT (서열 167), RKLDT (서열 168), KKGDT (서열 169), KKEDT (서열 170), KKLDQ (서열 171), KKGDQ (서열 252), KKEDQ (서열 253), RKLDQ (서열 254), RKGDQ (서열 255), RKEDQ (서열 256), RKGTD (서열 257), RKEDT (서열 258), KLDT (서열 172), KGDT (서열 259), KEDT (서열 260), KLDQ (서열 261), KGDQ (서열 262), KEDQ (서열 263), LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T 또는 Q일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₁은 FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT 또는 VL 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₂는 LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT 또는 VH 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₃은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₄는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X가 부재하는 경우에, X₁은 FF이고, X₂는 LS이다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 I을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 II, X₂₀TFFVKLSX₂₁X₂₂ (서열 173)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₀은 임의적인 서열이고, KKLD (서열 174), RKLD (서열 175), KKGD (서열 176), KKED (서열 177), KLD, LD, D일 수 있거나 부재할 수 있다. X₂₁은 임의적인 서열이고, LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₂는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 II를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 III, X₃₀X₃₁VKLX₃₂LX₃₃TEX₃₄ (서열 178)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₀은 임의적인 서열이고, KKLDTF (서열 179), KLDTF (서열 180), LDTF (서열 181), DTF, TF 또는 F일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 임의적인 서열이고, F, S, M, V, T 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 F이다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S, Q, M, T 또는 H일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S이다. X₃₃은 F, M, Q, H, N, P, S, G, A 또는 R일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₄는 F이다. X₃₄는 임의적인 서열이고, R일 수 있거나 부재할 수 있다. 추가로, 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96 또는 98을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 III을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VII, X₇₀₀K X₇₀₁X₇₀₂X₇₀₃ X₇₀₄X₇₀₅X₇₀₆K X₇₀₇ X₇₀₈ X₇₀₉ X₇₁₀ X₇₁₁E X₇₁₂ (서열 394)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₁은 임의적인 서열이고, L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₂는 임의적인 서열이고, D, A, E, I, V, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₃은 임의적인 서열이고, T, C, M, N, P, Q, R, S, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₄는 임의적인 서열이고, F, A, I, M, N, P, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₅는 임의적인 서열이고, F, L, M, Q, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₆은 임의적인 서열이고, V, F, G, L, P 또는 R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₇은 임의적인 서열이고, L, A, F, G, I, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₈은 임의적인 서열이고, S, H, M, N, Q 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₉는 임의적인 서열이고, L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₀은 임의적인 서열이고, F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₁은 임의적인 서열이고, T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₂는 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VIII, X₈₀₀K X₈₀₁K X₈₀₂E X₈₀₃ (서열 395)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₁은 임의적인 서열이고, LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₂는 임의적인 서열이고, LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₃은 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VIII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 IX를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 펩티드 억제제는 화학식 IX: X₉₀₁X₉₀₂X₉₀₃X₉₀₄X₉₀₅X₉₀₆X₉₀₇X₉₀₈X₉₀₉X₉₁₀X₉₁₁X₉₁₂X₉₁₃X₉₁₄X₉₁₅X₉₁₆X₉₁₇의 펩티드를 포함하며, 여기서 X₉₀₁은 임의의 아미노산이거나 부재하고; X₉₀₂는 양으로 하전된 아미노산, F 또는 N이고; X₉₀₃은 임의의 아미노산이고; X₉₀₄는 임의의 아미노산이고; X₉₀₅는 극성 하전된 아미노산, R, Y 또는 W이고; X₉₀₆은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₇은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₈은 M 또는 F가 아닌 소수성 비-방향족 탄소 쇄 아미노산이고; X₉₀₉는 양으로 하전된 아미노산, T, Q 또는 Y이고; X₉₁₀은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₁은 극성 하전된 아미노산 또는 H이고; X₉₁₂는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₃은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₄는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₅는 음으로 하전된 아미노산, Y 또는 Q이고; X₉₁₆은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₇은 하나 이상의 양으로 하전된 아미노산이거나 부재한다. 임의로, X₉₀₁은 양으로 하전된 아미노산을 포함한다. 임의로, X₉₀₁은 R 또는 K이다. 임의로, X₉₁₇은 RR이다. 일부 실시양태에서, 화학식 IX를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 이들 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 표 5.1에 제시된 펩티드 중 어느 1종 이상을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 표 5.1로부터의 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 지지체에 부착된다 (실시예 12 참조). 예시적인 지지체는 표면, 시험 스트립, 페트리 디쉬, 매트릭스, 수지 또는 비드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 용액 중에 용해된다 (실시예 10 참조). 일부 실시양태에서, P3028 서열/구조물을 함유할 수 있는 생물학적 샘플은 용액 중에서 억제제와 접촉된다 (실시예 10 및 12 참조). 생물학적 샘플은 혈액, 혈청, 면역 세포, 면역 세포 용해물, 종양 세포 또는 종양 세포 용해물을 포함할 수 있다. 면역조절 펩티드 억제제와의 접촉 후에, 단백질 복합체가 배치되어 있는 지지체는 임의의 비결합된 또는 느슨하게 부착된 면역조절 펩티드 억제제를 제거하기 위해 임의로 세척된다. P3028 서열/구조물이 샘플에 존재하는 경우에, 지지체에 부착된 억제제에 결합된 P3028 서열/구조물의 존재는 예를 들어 rampo 검정을 사용하여 검출된다. P3028 서열/구조물이 샘플에 존재하지 않는 경우에, 어떠한 결합된 단백질도 검출되지 않는다.

일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 검출가능한 표지에 부착된다. 예시적인 검출가능한 표지는 비오틴, 형광단, 방사성표지 및 효소를 포함한다. 일부 실시양태에서, P3028 서열/구조물을 함유할 수 있는 생물학적 샘플이 제공된다. 샘플은 혈액, 혈장, 혈청, 단리된 면역 세포, 단리된 암 세포, 조직 생검 및/또는 종양 생검을 포함할 수 있다. 펩티드 3028의 억제제 (면역조절 펩티드 억제제)는 생물학적 샘플과 접촉된다. 이어서, 샘플은 임의로 세척될 수 있다. P3028 서열/구조물이 존재하는 경우에, 검출가능한 표지는 생물학적 샘플에 존재할 것이다 (실시예 14 참조). P3028 서열/구조물이 존재하지 않는 경우에, 어떠한 표지도 검출되지 않는다. 검출가능한 표지를 검출하는 예시적인 방법은 현미경검사, 조직학적 절편화, 면역검정, 면역조직화학, 유동 세포측정법, 이뮤노블롯팅, ELISA 및 ELISpot를 포함한다 (도 39 참조). 예를 들어, 조직학적 절편을 검사하여 P3028 서열/구조물을 함유하는 세포 및/또는 조직을 결정할 수 있다. 예를 들어, 해리된 면역 및/또는 종양 세포의 샘플은 동결 또는 플라스틱 절편 기술을 사용하여 P3028 서열/구조물에 결합된 세포에 대해 스크리닝될 수 있다. 하기 섹션은 면역억제의 치료, 예방 또는 억제를 필요로 하는 대상체 (예를 들어, 암 또는 병원성 감염, 예컨대 바이러스 감염 또는 박테리아 감염을 갖는 대상체)에서 면역억제를 치료, 예방 또는 억제하기 위한 접근법에 대한 보다 상세한 설명을 제공한다.

면역억제를 치료, 예방 또는 억제하는 방법

많은 상태 및 질환이 면역억제와 연관되며, 예를 들어 많은 유형의 암, 감염 및 염증성 질환이 면역억제와 연관된다. 따라서, 본원에 기재된 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상을 사용하여 치료, 예방 또는 억제될 수 있는 면역억제와 연관된 예시적인 상태는 많은 유형의 암, 예컨대 결장직장암, 신암, 유방암, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 폐암 또는 조혈 세포 암을 포함한다. 이들 상태는 또한 본원에 기재된 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상을 사용하여 치료, 예방, 개선 또는 억제될 수 있다. 본원에 기재된 면역조절 펩티드 억제제 중 1종 이상을 사용하여 치료, 예방 또는 억제될 수 있는 면역억제와 연관된 예시적인 상태는 호르몬 불균형, 예컨대 증가된 및/또는 이소성 코르티솔 활성을 추가로 포함한다.

따라서, 일부 실시양태는 인간에서 면역억제 또는 상기 언급된 감염 또는 질환 중 하나 이상을 치료, 예방 또는 감소시키는 방법을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 면역억제와 연관된 상태 (예를 들어, 암)를 갖는 환자를 확인하는 것을 포함한다. 이러한 확인 단계는 임상 평가 (예를 들어, CT, MRI 또는 PET 스캔) 또는 진단 검정에 의해 달성될 수 있다. 방법은 확인 또는 선택된 환자에게 면역조절 펩티드 억제제 서열, 또는 본원에 기재된 바와 같은 분자를 코딩하는 핵산을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 예를 들어, 면역조절 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물은 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589 중 어느 하나, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 종양주위로, 또는 종양 근처에, 예를 들어 종양의 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 또는 0.5cm 이내에 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 전신으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 제2 치료제, 예를 들어 면역 세포의 LFA-1 수용체가 탈-차단된 (예를 들어 LFA-1 수용체로부터 결합된 면역조절 펩티드 또는 3028 구조물이 이탈된) 후에 면역 세포를 자극하도록 선택된 치료제와 함께 투여된다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 이들 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 면역조절 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 펩티드 또는 이러한 분자를 코딩하는 핵산을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 예를 들어, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 I, XX₁VKX₂X₃X₄ (서열 166)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X는 임의적인 서열이고, KKLDT (서열 167), RKLDT (서열 168), KKGDT (서열 169), KKEDT (서열 170), KKLDQ (서열 171), KKGDQ (서열 252), KKEDQ (서열 253), RKLDQ (서열 254), RKGDQ (서열 255), RKEDQ (서열 256), RKGTD (서열 257), RKEDT (서열 258), KLDT (서열 172), KGDT (서열 259), KEDT (서열 260), KLDQ (서열 261), KGDQ (서열 262), KEDQ (서열 263), LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T 또는 Q일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₁은 FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT 또는 VL 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₂는 LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT 또는 VH 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₃은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₄는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X가 부재하는 경우에, X₁은 FF이고, X₂는 LS이다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 I을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 II, X₂₀TFFVKLSX₂₁X₂₂ (서열 173)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₀은 임의적인 서열이고, KKLD (서열 174), RKLD (서열 175), KKGD (서열 176), KKED (서열 177), KLD, LD, D일 수 있거나 부재할 수 있다. X₂₁은 임의적인 서열이고, LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₂는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 II를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 III, X₃₀X₃₁VKLX₃₂LX₃₃TEX₃₄ (서열 178)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₀은 임의적인 서열이고, KKLDTF (서열 179), KLDTF (서열 180), LDTF (서열 181), DTF, TF 또는 F일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 임의적인 서열이고, F, S, M, V, T 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 F이다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S, Q, M, T 또는 H일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S이다. X₃₃은 F, M, Q, H, N, P, S, G, A 또는 R일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₄는 F이다. X₃₄는 임의적인 서열이고, R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 III을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VII, X₇₀₀K X₇₀₁X₇₀₂X₇₀₃ X₇₀₄X₇₀₅X₇₀₆K X₇₀₇ X₇₀₈ X₇₀₉ X₇₁₀ X₇₁₁E X₇₁₂ (서열 394)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₁은 임의적인 서열이고, L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₂는 임의적인 서열이고, D, A, E, I, V, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₃은 임의적인 서열이고, T, C, M, N, P, Q, R, S, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₄는 임의적인 서열이고, F, A, I, M, N, P, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₅는 임의적인 서열이고, F, L, M, Q, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₆은 임의적인 서열이고, V, F, G, L, P 또는 R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₇은 임의적인 서열이고, L, A, F, G, I, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₈은 임의적인 서열이고, S, H, M, N, Q 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₉는 임의적인 서열이고, L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₀은 임의적인 서열이고, F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₁은 임의적인 서열이고, T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₂는 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VIII, X₈₀₀K X₈₀₁K X₈₀₂E X₈₀₃ (서열 395)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₁은 임의적인 서열이고, LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₂는 임의적인 서열이고, LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₃은 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VIII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 펩티드 억제제는 화학식 IX를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 펩티드 억제제는 화학식 IX: X₉₀₁X₉₀₂X₉₀₃X₉₀₄X₉₀₅X₉₀₆X₉₀₇X₉₀₈X₉₀₉X₉₁₀X₉₁₁X₉₁₂X₉₁₃X₉₁₄X₉₁₅X₉₁₆X₉₁₇의 펩티드를 포함하며, 여기서 X₉₀₁은 임의의 아미노산이거나 부재하고; X₉₀₂는 양으로 하전된 아미노산, F 또는 N이고; X₉₀₃은 임의의 아미노산이고; X₉₀₄는 임의의 아미노산이고; X₉₀₅는 극성 하전된 아미노산, R, Y 또는 W이고; X₉₀₆은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₇은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₈은 M 또는 F가 아닌 소수성 비-방향족 탄소 쇄 아미노산이고; X₉₀₉는 양으로 하전된 아미노산, T, Q 또는 Y이고; X₉₁₀은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₁은 극성 하전된 아미노산 또는 H이고; X₉₁₂는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₃은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₄는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₅는 음으로 하전된 아미노산, Y 또는 Q이고; X₉₁₆은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₇은 하나 이상의 양으로 하전된 아미노산이거나 부재한다. 임의로, X₉₀₁은 양으로 하전된 아미노산을 포함한다. 임의로, X₉₀₁은 R 또는 K이다. 임의로, X₉₁₇은 RR이다. 일부 실시양태에서, 화학식 IX를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 이들 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589로 제시된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

일부 실시양태에서, 이러한 펩티드 억제제를 코딩하는 핵산, 예를 들어 서열 102-165의 핵산이 제공될 수 있다. 바람직하게는, 상기 언급된 방법에 사용된 면역조절 펩티드 억제제는 P28R, 그의 유도체, 또는 이러한 분자를 코딩하는 핵산이다 (예를 들어, 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상은 본원에 기재된 바와 같은 펩티드를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진다). 예를 들어, 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 I, XX₁VKX₂X₃X₄ (서열 166)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X는 임의적인 서열이고, KKLDT (서열 167), RKLDT (서열 168), KKGDT (서열 169), KKEDT (서열 170), KKLDQ (서열 171), KKGDQ (서열 252), KKEDQ (서열 253), RKLDQ (서열 254), RKGDQ (서열 255), RKEDQ (서열 256), RKGTD (서열 257), RKEDT (서열 258), KLDT (서열 172), KGDT (서열 259), KEDT (서열 260), KLDQ (서열 261), KGDQ (서열 262), KEDQ (서열 263), LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T 또는 Q일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₁은 FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT 또는 VL 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₂는 LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT 또는 VH 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₃은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₄는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X가 부재하는 경우에, X₁은 FF이고, X₂는 LS이다. 일부 실시양태에서, 화학식 I을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 펩티드 억제제는 화학식 II, X₂₀TFFVKLSX₂₁X₂₂ (서열 173)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₀은 임의적인 서열이고, KKLD (서열 174), RKLD (서열 175), KKGD (서열 176), KKED (서열 177), KLD, LD 또는 D일 수 있거나 부재할 수 있다. X₂₁은 임의적인 서열이고, LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₂는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 II를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 펩티드 억제제는 화학식 III, X₃₀X₃₁VKLX₃₂LX₃₃TEX₃₄ (서열 178)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₀은 임의적인 서열이고, KKLDTF (서열 179), KLDTF (서열 180), LDTF (서열 181), DTF, TF, F일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 임의적인 서열이고, F, S, M, V, T 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 F이다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S, Q, M, T 또는 H일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S이다. X₃₃은 F, M, Q, H, N, P, S, G, A 또는 R일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₄는 F이다. X₃₄는 임의적인 서열이고, R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 III을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VII, X₇₀₀K X₇₀₁X₇₀₂X₇₀₃ X₇₀₄X₇₀₅X₇₀₆K X₇₀₇ X₇₀₈ X₇₀₉ X₇₁₀ X₇₁₁E X₇₁₂ (서열 394)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₁은 임의적인 서열이고, L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₂는 임의적인 서열이고, D, A, E, I, V, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₃은 임의적인 서열이고, T, C, M, N, P, Q, R, S, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₄는 임의적인 서열이고, F, A, I, M, N, P, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₅는 임의적인 서열이고, F, L, M, Q, S, TV일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₆은 임의적인 서열이고, V, F, G, L, P 또는 R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₇은 임의적인 서열이고, L, A, F, G, I, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₈은 임의적인 서열이고, S, H, M, N, Q 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₉는 임의적인 서열이고, L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₀은 임의적인 서열이고, F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₁은 임의적인 서열이고, T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₂는 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T,+ 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VIII, X₈₀₀K X₈₀₁K X₈₀₂E X₈₀₃ (서열 395)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₁은 임의적인 서열이고, LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₂는 임의적인 서열이고, LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₃은 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VIII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 펩티드 억제제는 화학식 IX를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 펩티드 억제제는 화학식 IX: X₉₀₁X₉₀₂X₉₀₃X₉₀₄X₉₀₅X₉₀₆X₉₀₇X₉₀₈X₉₀₉X₉₁₀X₉₁₁X₉₁₂X₉₁₃X₉₁₄X₉₁₅X₉₁₆X₉₁₇의 펩티드를 포함하며, 여기서 X₉₀₁은 임의의 아미노산이거나 부재하고; X₉₀₂는 양으로 하전된 아미노산, F 또는 N이고; X₉₀₃은 임의의 아미노산이고; X₉₀₄는 임의의 아미노산이고; X₉₀₅는 극성 하전된 아미노산, R, Y 또는 W이고; X₉₀₆은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₇은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₈은 M 또는 F가 아닌 소수성 비-방향족 탄소 쇄 아미노산이고; X₉₀₉는 양으로 하전된 아미노산, T, Q 또는 Y이고; X₉₁₀은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₁은 극성 하전된 아미노산 또는 H이고; X₉₁₂는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₃은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₄는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₅는 음으로 하전된 아미노산, Y 또는 Q이고; X₉₁₆은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₇은 하나 이상의 양으로 하전된 아미노산이거나 부재한다. 임의로, X₉₀₁은 양으로 하전된 아미노산을 포함한다. 임의로, X₉₀₁은 R 또는 K이다. 임의로, X₉₁₇은 RR이다. 일부 실시양태에서, 화학식 IX를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 펩티드 억제제는 표 5.1, 5.4, 5.5 또는 5.6에 제시된 펩티드 중 어느 1종 이상 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 표 5.1, 5.4, 5.5 또는 5.6으로부터의 단리된 펩티드 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합은 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다. 예를 들어, 이러한 펩티드 억제제를 코딩하는 핵산은 서열 102-165에 의해 제공될 수 있다.

상기 언급된 방법에 사용된 면역조절 펩티드 억제제는 적어도 하나의 D 아미노산, 적어도 하나의 비-천연 아미노산, N-말단 아세틸 기 또는 C 말단 아미드 기를 포함할 수 있고, 상기 면역조절 펩티드 억제제는 글리코실화될 수 있거나, 또는 PEG, 세포독소 또는 방사성핵종에 연결될 수 있다. 펩티드는 환자의 적어도 1개의 세포에 투여될 수 있다. 투여는 생체내에서, 예를 들어 치료적으로 수행될 수 있다. 투여는 생체외에서, 예를 들어 진단 도구로서, 또는 면역 세포를 환자에게 투여하기 전에 환자의 면역 세포를 자극하기 위한 생체외 요법으로서 수행될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 펩티드 억제제 또는 이러한 분자를 코딩하는 핵산을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 면역조절 펩티드 억제제의 인간 면역 세포로의 투여, 및 면역 세포 자극의 검출은 실시예 13에 기재되어 있다. 예를 들어, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 I, XX₁VKX₂X₃X₄ (서열 166)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X는 임의적인 서열이고, KKLDT (서열 167), RKLDT (서열 168), KKGDT (서열 169), KKEDT (서열 170), KKLDQ (서열 171), KKGDQ (서열 252), KKEDQ (서열 253), RKLDQ (서열 254), RKGDQ (서열 255), RKEDQ (서열 256), RKGTD (서열 257), RKEDT (서열 258), KLDT (서열 172), KGDT (서열 259), KEDT (서열 260), KLDQ (서열 261), KGDQ (서열 262), KEDQ (서열 263), LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T 또는 Q일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₁은 FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT 또는 VL 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₂는 LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT 또는 VH 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₃은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₄는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X가 부재하는 경우에, X₁은 FF이고, X₂는 LS이다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 I을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 II, X₂₀TFFVKLSX₂₁X₂₂ (서열 173)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₀은 임의적인 서열이고, KKLD (서열 174), RKLD (서열 175), KKGD (서열 176), KKED (서열 177), KLD, LD 또는 D일 수 있거나 부재할 수 있다. X₂₁은 임의적인 서열이고, LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₂는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 II를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 III, X₃₀X₃₁VKLX₃₂LX₃₃TEX₃₄ (서열 178)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₀은 임의적인 서열이고, KKLDTF (서열 179), KLDTF (서열 180), LDTF (서열 181), DTF, TF 또는 F일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 임의적인 서열이고, F, S, M, V, T 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 F이다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S, Q, M, T 또는 H일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S이다. X₃₃은 F, M, Q, H, N, P, S, G, A 또는 R일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₄는 F이다. X₃₄는 임의적인 서열이고, R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 III을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VII, X₇₀₀K X₇₀₁X₇₀₂X₇₀₃ X₇₀₄X₇₀₅X₇₀₆K X₇₀₇ X₇₀₈ X₇₀₉ X₇₁₀ X₇₁₁E X₇₁₂ (서열 394)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₁은 임의적인 서열이고, L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₂는 임의적인 서열이고, D, A, E, I, V, W,Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₃은 임의적인 서열이고, T, C, M, N, P, Q, R, S, W,Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₄는 임의적인 서열이고, F, A, I, M, N, P, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₅는 임의적인 서열이고, F, L, M, Q, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₆은 임의적인 서열이고, V, F, G, L, P 또는 R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₇은 임의적인 서열이고, L, A, F, G, I, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₈은 임의적인 서열이고, S, H, M, N, Q 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₉는 임의적인 서열이고, L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₀은 임의적인 서열이고, F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₁은 임의적인 서열이고, T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₂는 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VIII, X₈₀₀K X₈₀₁K X₈₀₂E X₈₀₃ (서열 395)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₁은 임의적인 서열이고, LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₂는 임의적인 서열이고, LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₃은 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VIII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 이들 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 표 5.1에 제시된 펩티드 중 어느 1종 이상을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 표 5.1로부터의 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

이러한 펩티드 억제제를 코딩하는 핵산, 예를 들어 서열 102-165의 핵산이 제공될 수 있다. 면역조절 펩티드 억제제의 투여 후에, 인간의 인간 면역 세포의 자극이 검출될 수 있다 (예를 들어, 면역 세포 증식, NK 세포 세포독성의 이동에서의 증가). 면역조절 펩티드 억제제가 투여되면, 이들 방법은 임의로 환자에서 면역억제의 감소를 측정 또는 관찰하는 것을 포함할 수 있다 (예를 들어, 면역 세포 증식, 이동 또는 확산 또는 NK-세포 세포독성에서의 증가가 평가될 수 있음, 또는 CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 또는 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극, 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식의 검출).

상기 언급된 바와 같이, 일부 실시양태는 면역억제를 앓고 있는 환자를 확인하는 단계를 포함한다. 이 분석은 일반적으로 환자의 면역 세포 활성을 결정하는 것, 예를 들어 환자의 생물학적 샘플에서 적어도 1종의 면역 세포 유형, 예를 들어 백혈구, PBMC, 림프구, 단핵구, 대식세포의 양을 결정하는 것을 포함할 수 있다. 환자의 혈청 내의 및/또는 환자의 암 세포 상의 P3028 서열/구조물의 존재 (표지된 면역조절 펩티드 억제제를 사용하여 달성될 수 있는 평가)가 또한 환자의 면역계의 억제를 나타낸다. 따라서, 본 발명의 일부 실시양태는 환자의 생물학적 샘플, 예를 들어 혈액, 혈장, 혈청 또는 암 세포 생검을 포함하는 샘플 내의 P3028 서열/구조물의 존재를 검출하는 것을 포함한다. 환자의 생물학적 샘플에서 펩티드 3028의 존재를 검출하기 위한 예, 방법 및 조성물은 미국 특허 번호 7960126, 8133688, 8110347 및 미국 공개 번호 2010/0323370 및 2011/0262470 (이들 각각은 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨)에서 찾아볼 수 있다. P3028 서열/구조물은 예를 들어, P3028 서열/구조물에 결합하는 적어도 1종의 항체를 사용하여, 생물학적 샘플의 면역검정, 블롯팅 기술, ELISA, ELISpot, 유동 세포측정법, 세포측정 비드 검정, 단백질체학 및/또는 면역조직화학에 의해 검출될 수 있다. P3028 서열/구조물은 또한 예를 들어, 환자의 생물학적 샘플 또는 그의 분획의 질량 분광측정법에 의해 검출될 수 있다. P3028 서열/구조물은 본원에 기재된 바와 같은 P3028 서열/구조물의 표지된 펩티드 억제제의 직접적 검출에 의해, 예를 들어 조직학적 염색, 형광 현미경검사, 면역조직화학 또는 비색 효소적 검정에 의해 추가로 검출될 수 있다 (실시예 14 참조). P3028 서열/구조물은 또한 예를 들어 환자의 혈청에 접촉시킨 면역 세포를, P3028 서열/구조물을 함유하지 않는 것으로 공지된 대조군 샘플 혈청에 접촉시킨 면역 세포와 비교함으로써 기능적으로 검출될 수 있다. 일부 실시양태에서, 혈청은 변성된다. 예시적인 면역 세포는 PBMC를 포함한다. 일부 실시양태에서, 혈청은 변성되지 않는다. 면역 세포는 예를 들어 IL-2 또는 리포폴리사카라이드 (LPS)에 의해 임의로 자극될 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 IL-6 생산에 대해 분석된다.

일부 실시양태에서, 면역억제를 앓고 있는 환자는 암을 갖는 환자를 진단함으로써 확인될 수 있다. 일부 실시양태에서, 암 세포가 확인될 수 있고, 따라서 환자의 세포의 P3028 서열/구조물 (실시예 7 참조) 또는 P3028 서열/구조물의 억제제 (실시예 14 참조)에 대한 결합을 검출함으로써 환자가 확인될 수 있다. 확인될 수 있으며 면역억제와 연관된 예시적인 암은 유방암, 신세포 암종 및 악성 흑색종을 포함한다.

환자에 대한 면역조절 펩티드 억제제의 투여는 다양한 접근법에 의해 달성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 환자에게 직접 투여된다. 면역조절 펩티드 억제제는 정맥내로, 복강내로, 피하로, 근육내로, 국소로, 경피로, 경구로 및/또는 종양주위로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 예를 들어 직접 주사를 통해 종양의 부위에 투여된다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 종양 근처에 예를 들어 종양의 10cm, 9cm, 8cm, 7cm, 6cm, 5cm, 4cm, 3cm, 2cm, 1cm 또는 0.5cm, 또는 상기 언급된 거리 중 임의의 2개에 의해 한정된 범위 이내에 투여된다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 제약상 허용되는 희석제 또는 담체와 함께 투여된다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 생체외에서 투여된다. 환자의 면역 세포는 예를 들어 환자로부터 단리되고, 억제제와 접촉되고, 환자에게 복귀될 수 있다. 실시예 13 및 14는 환자의 면역 세포를 P3028 서열/구조물의 억제제와 접촉시키는 것을 기재한다.

본원에 기재된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상은 상기 언급된 방법 중 1가지 이상과 함께 이용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589 중 적어도 하나, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589 중 어느 하나 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합에 상응하는 P3028 서열/구조물의 적어도 1종의 펩티드모방체 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589 중 어느 하나 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합에 상응하는 펩티드 3028의 소분자 억제제이다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 P3028 서열/구조물에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 단편을 포함한다. P3028 서열/구조물을 억제하는 항체는 실시예 9에 기재되어 있다.

일부 상기 언급된 방법에서, P3028 서열/구조물의 면역조절 펩티드 억제제는 본원에 기재된 펩티드와 같은 면역조절 펩티드 억제제를 코딩하는 핵산을 포함한다. 예를 들어, 핵산에 의해 코딩된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 I, XX₁VKX₂X₃X₄ (서열 166)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X는 임의적인 서열이고, KKLDT (서열 167), RKLDT (서열 168), KKGDT (서열 169), KKEDT (서열 170), KKLDQ (서열 171), KKGDQ (서열 252), KKEDQ (서열 253), RKLDQ (서열 254), RKGDQ (서열 255), RKEDQ (서열 256), RKGTD (서열 257), RKEDT (서열 258), KLDT (서열 172), KGDT (서열 259), KEDT (서열 260), KLDQ (서열 261), KGDQ (서열 262), KEDQ (서열 263), LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T 또는 Q일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₁은 FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT 또는 VL 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₂는 LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT 또는 VH 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₃은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₄는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X가 부재하는 경우에, X₁은 FF이고, X₂는 LS이다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 핵산에 의해 코딩된 화학식 I을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 핵산에 의해 코딩된 펩티드 억제제는 화학식 II, X₂₀TFFVKLSX₂₁X₂₂ (서열 173)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₀은 임의적인 서열이고, KKLD (서열 174), RKLD (서열 175), KKGD (서열 176), KKED (서열 177), KLD, LD 또는 D일 수 있거나 부재할 수 있다. X₂₁은 임의적인 서열이고, LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₂는 임의적인 서열이고, ER, E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 핵산에 의해 코딩된 화학식 II를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 핵산에 의해 코딩된 펩티드 억제제는 화학식 III, X₃₀X₃₁VKLX₃₂LX₃₃TEX₃₄ (서열 178)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₀은 임의적인 서열이고, KKLDTF (서열 179), KLDTF (서열 180), LDTF (서열 181), DTF, TF 또는 F일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 임의적인 서열이고, F, S, M, V, T 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 F이다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S, Q, M, T 또는 H일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S이다. X₃₃은 F, M, Q, H, N, P, S, G, A 또는 R일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₄는 F이다. X₃₄는 임의적인 서열이고, R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 핵산에 의해 코딩된 화학식 III을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 핵산에 의해 코딩된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VII, X₇₀₀K X₇₀₁X₇₀₂X₇₀₃ X₇₀₄X₇₀₅X₇₀₆K X₇₀₇ X₇₀₈ X₇₀₉ X₇₁₀ X₇₁₁E X₇₁₂ (서열 394)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₁은 임의적인 서열이고, L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₂는 임의적인 서열이고, D, A, E, I, V, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₃은 임의적인 서열이고, T, C, M, N, P, Q, R, S, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₄는 임의적인 서열이고, F, A, I, M, N, P, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₅는 임의적인 서열이고, F, L, M, Q, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₆은 임의적인 서열이고, V, F, G, L, P 또는 R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₇은 임의적인 서열이고, L, A, F, G, I, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₈은 임의적인 서열이고, S, H, M, N, Q 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₉는 임의적인 서열이고, L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₀은 임의적인 서열이고, F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₁은 임의적인 서열이고, T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₂는 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 핵산에 의해 코딩된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VIII, X₈₀₀K X₈₀₁K X₈₀₂E X₈₀₃ (서열 395)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₁은 임의적인 서열이고, LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₂는 임의적인 서열이고, LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₃은 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VIII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 핵산에 의해 코딩된 펩티드 억제제는 화학식 IX를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 펩티드 억제제는 화학식 IX: X₉₀₁X₉₀₂X₉₀₃X₉₀₄X₉₀₅X₉₀₆X₉₀₇X₉₀₈X₉₀₉X₉₁₀X₉₁₁X₉₁₂X₉₁₃X₉₁₄X₉₁₅X₉₁₆X₉₁₇의 펩티드를 포함하며, 여기서 X₉₀₁은 임의의 아미노산이거나 부재하고; X₉₀₂는 양으로 하전된 아미노산, F 또는 N이고; X₉₀₃은 임의의 아미노산이고; X₉₀₄는 임의의 아미노산이고; X₉₀₅는 극성 하전된 아미노산, R, Y 또는 W이고; X₉₀₆은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₇은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₈은 M 또는 F가 아닌 소수성 비-방향족 탄소 쇄 아미노산이고; X₉₀₉는 양으로 하전된 아미노산, T, Q 또는 Y이고; X₉₁₀은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₁은 극성 하전된 아미노산 또는 H이고; X₉₁₂는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₃은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₄는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₅는 음으로 하전된 아미노산, Y 또는 Q이고; X₉₁₆은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₇은 하나 이상의 양으로 하전된 아미노산이거나 부재한다. 임의로, X₉₀₁은 양으로 하전된 아미노산을 포함한다. 임의로, X₉₀₁은 R 또는 K이다. 임의로, X₉₁₇은 RR이다. 일부 실시양태에서, 화학식 IX를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 핵산에 의해 코딩된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 핵산에 의해 코딩된 이들 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 핵산에 의해 코딩된 펩티드 억제제는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제시된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 핵산에 의해 코딩되는 표 5.1 5.4, 5.5, 5.6으로부터의 단리된 펩티드, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합은 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

예를 들어, 이러한 펩티드 억제제를 코딩하는 핵산, 예를 들어 서열 102-165의 핵산이 제공될 수 있다. 핵산은 본원에 기재된 바와 같은 발현 벡터로 제공될 수 있다. 핵산은, 예를 들어 유전적 면역화 (예를 들어, pVAX)에 사용된 레트로바이러스 또는 아데노바이러스 벡터 또는 발현 플라스미드를 통해, 면역조절 펩티드 억제제를 코딩하는 핵산을 포함하는 발현 벡터를 인간에게 직접 투여함으로써 인간에게 제공될 수 있다. 발현 벡터는 생체외에서 인간의 세포로 제공될 수 있고, 세포는 전기천공 기술을 사용하여 인간에게 또는 생체내로 복귀될 수 있다. 바이러스 벡터를 통해 핵산을 숙주 세포로 전달하는 방법은 미국 특허 번호 7,572,906 (이는 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨)에 기재되어 있다. 생체외에서 면역 세포에 아데노바이러스를 형질도입하고 이들을 환자에게 복귀시키는 방법은 미국 특허 번호 8,012,468 (이는 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨)에 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 P3028의 면역조절 펩티드 억제제를 코딩하는 벡터와 접촉된다. 벡터는 숙주 세포에서 복제될 수 있다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 또한 "헬퍼-발현 벡터", 즉 비감염된 숙주에서 벡터의 복제를 촉진시키는 바이러스 게놈과 접촉된다. 일부 실시양태에서, 억제제는 실시예 16에서와 같이 투여된다. 일부 실시양태에서, 세포는 생체외에서 접촉된다. 일부 실시양태에서, 세포는 면역 세포이다. 일부 실시양태에서, 세포는 림프구, PBMC 또는 백혈구 중 하나이다. 일부 실시양태에서, 억제제는 실시예 13에서와 같이 투여된다.

바람직하게는, 치료 유효량의 면역조절 펩티드 억제제가 제공된다. 이미 P3028-의존성 면역억제를 앓고 있는 환자의 경우, 치료 유효량의 억제제는 면역억제의 증상을 적어도 부분적으로 정지시키기에 충분한 면역조절 펩티드 억제제의 용량 (예를 들어, 면역 세포의 증식 또는 이동을 개선하기에 충분한 양)을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료 유효량은 적어도 약 1 나노그램의 실질적으로 순수한 면역조절 펩티드 억제제를 포함하며, 예를 들어 약 1 나노그램, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000 나노그램, 1 마이크로그램, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000 마이크로그램, 약 1 밀리그램, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000 밀리그램, 또는 1.1 그램, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2., 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99, 100, 105, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 250, 300, 350, 400, 450 또는 500 그램 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함) 이상이 이를 필요로 하는 환자에게 제공될 수 있다.

일부 실시양태에서, 치료 유효량은 치료 유효량의 억제제의 1회, 또는 1회 초과의 투여, 예를 들어 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99, 100, 105, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 250, 300, 350, 400, 450 또는 500회 이상의 투여를 포함하는 스케줄에 따라 제공될 수 있다. 투여는 1시간 또는 그 미만마다, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24시간마다 1회 이하로, 또는 1일, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 9, 10, 11, 12, 13,15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 또는 31일미다 1회 이하로 제공될 수 있다.

일부 방법에 의해, 면역조절 펩티드 억제제의 투여 후에, 면역억제에서의 감소가 측정, 검출 또는 관찰된다. 일부 실시양태에서, 면역억제에서의 감소는, 면역조절 펩티드 억제제를 제공받은 환자로부터 생물학적 샘플을 수득하고 P3028에 대한 면역 세포 수용체 결합에서의 감소를 검출하고/거나 생물학적 샘플에 존재하는 면역 세포의 IL-2 유도 후의 면역 세포 증식을 검출함으로써, 검출 측정 또는 관찰된다. 일부 실시양태에서, 상기 환자로부터 수득된 생물학적 샘플의 분석은 대조군 생물학적 샘플, 예를 들어 면역조절 펩티드 억제제의 투여 전에 동일한 환자로부터 채취한 생물학적 샘플 또는 건강한 인간으로부터 채취한 생물학적 샘플에 대해 수행된 동일한 분석 (예를 들어, P3028 서열/구조물에 대한 면역 세포 수용체 결합의 양 또는 IL-2 유도된 면역 세포 증식의 결정)과 비교된다. 실시예 9 및 13은 대조군 샘플과 비교 시에 혈청과 접촉된 세포에서의 면역억제 감소의 검출을 기재한다.

상기 언급된 바와 같이, 면역억제에서의 감소는 면역 세포 자극, 예를 들어 면역 세포 증식 또는 면역 세포 세포독성에서의 증가로서 검출될 수 있다. 상기 기재된 방법으로 측정될 수 있는 P3028-유도된 면역억제에서의 감소는 증가된 T-세포 수용체 자극 (실시예 3 참조); 증가된 NK-세포 세포독성 (실시예 4 참조); 증가된 백혈구 확산 (실시예 5 참조); 증가된 면역 세포 이동 (실시예 5 참조); 및/또는 IL-2 유도된 증식 (실시예 6 참조)을 포함할 수 있다. 감소된 IL-6 생산은 또한 암 환자, 예를 들어 면역억제를 앓고 있는 암 환자에 대한 개선된 예후일 수 있다 (미국 특허 번호 8,110,347 (이는 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨) 참조). 바람직하게는, 면역억제에서의 감소는 실시예 9에 나타낸 바와 같이 IL-2에 대한 PBMC의 증가된 증식성 반응에 의해, 또는 CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 또는 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극, 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식의 검출에 의해 검출된다.

일부 실시양태에서, 면역억제에서의 감소는 환자로부터 수집된 면역 세포 및/또는 혈청 및/또는 알부민으로부터의 마커의 존재 또는 양을 검출함으로써 검출된다. 일부 실시양태에서, 검출은 환자 혈청, 혈액 및/또는 환자 알부민을 수집하고, 환자 혈청, 혈장, 혈액 또는 알부민을 생체외에서 면역 세포와 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 또한 IL-2와 접촉된다. IL-2에 대한 면역 세포의 증식성 반응은 면역억제에서의 감소를 검출하는데 사용될 수 있다. 면역 세포는 환자 세포 또는 또 다른 인간으로부터의 세포 또는 세포 배양물로부터의 세포일 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역억제에서의 감소는 증가된 면역계 활성, 예를 들어 암 세포 수에서의 감소, 종양 크기에서의 감소, 또는 암 세포 증식의 감소 또는 억제의 검출 효과에 의해 검출될 수 있다. 일부 실시양태에서, 암 세포가 확인될 수 있고, 따라서 P3028 서열/구조물 (실시예 7 참조) 또는 P3028 서열/구조물의 억제제 (실시예 14 참조)에 결합하는 세포를 검출함으로써 암 세포가 정량화될 수 있다.

수용체에 대한 알부민 단편의 결합을 억제하는 방법

추가의 방법은 면역 세포 수용체 (예를 들어, LFA-1 및/또는 IL-2 수용체)에 대한 알부민 단편의 결합을 억제하기 위한 접근법을 포함한다. 방법은 본원에 기재된 바와 같은 면역억제를 앓고 있는 인간을 확인하는 것을 포함할 수 있다. 면역억제는 1종 이상의 면역조절 펩티드 또는 구조물에 의해 유발될 수 있다. 예시적인 면역조절 펩티드 또는 구조물은 P3028 서열/구조물 및/또는 서열 183-185 또는 188-246의 서열을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 단백질 또는 펩티드를 포함한다. 방법은 또한 면역 세포를 본원에 기재된 바와 같은 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드와 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어, 이들 방법에 사용된 펩티드는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 I, XX₁VKX₂X₃X₄ (서열 166)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X는 임의적인 서열이고, KKLDT (서열 167), RKLDT (서열 168), KKGDT (서열 169), KKEDT (서열 170), KKLDQ (서열 171), KKGDQ (서열 252), KKEDQ (서열 253), RKLDQ (서열 254), RKGDQ (서열 255), RKEDQ (서열 256), RKGTD (서열 257), RKEDT (서열 258), KLDT (서열 172), KGDT (서열 259), KEDT (서열 260), KLDQ (서열 261), KGDQ (서열 262), KEDQ (서열 263), LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T 또는 Q일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₁은 FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT 또는 VL 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₂는 LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT 또는 VH 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₃은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₄는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X가 부재하는 경우에, X₁은 FF이고, X₂는 LS이다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 I을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드는 화학식 II, X₂₀TFFVKLSX₂₁X₂₂ (서열 173)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₀은 임의적인 서열이고, KKLD (서열 174), RKLD (서열 175), KKGD (서열 176), KKED (서열 177), KLD, LD 또는 D일 수 있거나 부재할 수 있다. X₂₁은 임의적인 서열이고, LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₂는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 II를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드는 화학식 III, X₃₀X₃₁VKLX₃₂LX₃₃TEX₃₄ (서열 178)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₀은 임의적인 서열이고, KKLDTF (서열 179), KLDTF (서열 180), LDTF (서열 181), DTF, TF 또는 F일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 임의적인 서열이고, F, S, M, V, T 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 F이다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S, Q, M, T 또는 H일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S이다. X₃₃은 F, M, Q, H, N, P, S, G, A 또는 R일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₄는 F이다. X₃₄는 임의적인 서열이고, R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 III을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VII, X₇₀₀K X₇₀₁X₇₀₂X₇₀₃ X₇₀₄X₇₀₅X₇₀₆K X₇₀₇ X₇₀₈ X₇₀₉ X₇₁₀ X₇₁₁E X₇₁₂ (서열 394)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₁은 임의적인 서열이고, L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₂는 임의적인 서열이고, D, A, E, I, V, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₃은 임의적인 서열이고, T, C, M, N, P, Q, R, S, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₄는 임의적인 서열이고, F, A, I, M, N, P, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₅는 임의적인 서열이고, F, L, M, Q, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₆은 임의적인 서열이고, V, F, G, L, P 또는 R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₇은 임의적인 서열이고, L, A, F, G, I, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₈은 임의적인 서열이고, S, H, M, N, Q 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₉는 임의적인 서열이고, L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₀은 임의적인 서열이고, F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₁은 임의적인 서열이고, T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₂는 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VIII, X₈₀₀K X₈₀₁K X₈₀₂E X₈₀₃ (서열 395)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₁은 임의적인 서열이고, LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₂는 임의적인 서열이고, LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₃은 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VIII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 IX를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 펩티드 억제제는 화학식 IX: X₉₀₁X₉₀₂X₉₀₃X₉₀₄X₉₀₅X₉₀₆X₉₀₇X₉₀₈X₉₀₉X₉₁₀X₉₁₁X₉₁₂X₉₁₃X₉₁₄X₉₁₅X₉₁₆X₉₁₇의 펩티드를 포함하며, 여기서 X₉₀₁은 임의의 아미노산이거나 부재하고; X₉₀₂는 양으로 하전된 아미노산, F 또는 N이고; X₉₀₃은 임의의 아미노산이고; X₉₀₄는 임의의 아미노산이고; X₉₀₅는 극성 하전된 아미노산, R, Y 또는 W이고; X₉₀₆은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₇은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₈은 M 또는 F가 아닌 소수성 비-방향족 탄소 쇄 아미노산이고; X₉₀₉는 양으로 하전된 아미노산, T, Q 또는 Y이고; X₉₁₀은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₁은 극성 하전된 아미노산 또는 H이고; X₉₁₂는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₃은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₄는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₅는 음으로 하전된 아미노산, Y 또는 Q이고; X₉₁₆은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₇은 하나 이상의 양으로 하전된 아미노산이거나 부재한다. 임의로, X₉₀₁은 양으로 하전된 아미노산을 포함한다. 임의로, X₉₀₁은 R 또는 K이다. 임의로, X₉₁₇은 RR이다. 일부 실시양태에서, 화학식 IX를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 표 5.1에 제시된 펩티드 중 어느 1종 이상을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 표 5.1로부터의 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드는 본원에 기재된 바와 같은 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 이들 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다. 면역 세포는 인간 혈청, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 알부민 또는 알부민 단편의 존재 하에 있을 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태는 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체에 대한 인간 알부민 단편 (예를 들어, P3028 서열/구조물을 갖는 알부민 단편)의 결합을 억제하는 방법을 포함한다. P3028, 알부민 단편은 LFA-1 수용체 및 IL-2 수용체에 결합될 수 있고 (실시예 7 및 8 참조), 이러한 결합은 면역조절 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진 조성물을 제공함으로서 억제될 수 있다. 일부 실시양태에서, LFA-1 또는 IL-2 수용체에 대한 P3028의 결합을 억제하는 방법은 면역조절 펩티드 억제제를 생체내 또는 시험관내에서 P3028에 접촉 또는 결합시키고, 임의로 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체에 대한 P3028의 결합의 억제를 검출하는 것을 포함한다. LFA-1 수용체 및 IL-2 수용체에 대한 P3028의 결합은 예를 들어 P3028을 P3028에 특이적으로 결합하는 항체에 결합시킴으로써 억제될 수 있다 (실시예 9 참조). 이들 방법은 또한 LFA-1 수용체의 P3028의 차단을 제거 또는 억제하는 능력을 갖는 펩티드-기반 면역조절 펩티드 억제제, 예를 들어 P28R 면역조절 펩티드 억제제 (서열 2) (실시예 16 참조) 또는 P28 코어 펩티드 (서열 62) (실시예 38 참조)를 결합시킴으로써 실행될 수 있다.

바람직하게는, 이들 방법에 사용된 면역조절 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 화학식 I, XX₁VKX₂X₃X₄ (서열 166)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 면역조절 펩티드 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, X는 임의적인 서열이고, KKLDT (서열 167), RKLDT (서열 168), KKGDT (서열 169), KKEDT (서열 170), KKLDQ (서열 171), KKGDQ (서열 252), KKEDQ (서열 253), RKLDQ (서열 254), RKGDQ (서열 255), RKEDQ (서열 256), RKGTD (서열 257), RKEDT (서열 258), KLDT (서열 172), KGDT (서열 259), KEDT (서열 260), KLDQ (서열 261), KGDQ (서열 262), KEDQ (서열 263), LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T 또는 Q일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₁은 FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT 또는 VL 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₂는 LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT 또는 VH 중 하나이다. X₃은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR중 하나일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₄는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X가 부재하는 경우에, X₁은 FF이고, X₂는 LS이다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 I을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 II, X₂₀TFFVKLSX₂₁X₂₂ (서열 173)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₀은 임의적인 서열이고, KKLD (서열 174), RKLD (서열 175), KKGD (서열 176), KKED (서열 177), KLD, LD 또는 D일 수 있거나 부재할 수 있다. X₂₁은 임의적인 서열이고, LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₂는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 II를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 III, X₃₀X₃₁VKLX₃₂LX₃₃TEX₃₄ (서열 178)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₀은 임의적인 서열이고, KKLDTF (서열 179), KLDTF (서열 180), LDTF (서열 181), DTF, TF 또는 F일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 임의적인 서열이고, F, S, M, V, T 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 F이다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S, Q, M, T 또는 H일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S이다. X₃₃은 F, M, Q, H, N, P, S, G, A 또는 R일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₄는 F이다. X₃₄는 임의적인 서열이고, R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 III을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VII, X₇₀₀K X₇₀₁X₇₀₂X₇₀₃ X₇₀₄X₇₀₅X₇₀₆K X₇₀₇ X₇₀₈ X₇₀₉ X₇₁₀ X₇₁₁E X₇₁₂ (서열 394)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₁은 임의적인 서열이고, L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₂는 임의적인 서열이고, D, A, E, I, V, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₃은 임의적인 서열이고, T, C, M, N, P, Q, R, S, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₄는 임의적인 서열이고, F, A, I, M, N, P, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₅는 임의적인 서열이고, F, L, M, Q, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₆은 임의적인 서열이고, V, F, G, L, P 또는 R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₇은 임의적인 서열이고, L, A, F, G, I, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₈은 임의적인 서열이고, S, H, M, N, Q 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₉는 임의적인 서열이고, L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₀은 임의적인 서열이고, F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₁은 임의적인 서열이고, T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₂는 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VIII, X₈₀₀K X₈₀₁K X₈₀₂E X₈₀₃ (서열 395)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₁은 임의적인 서열이고, LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₂는 임의적인 서열이고, LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₃은 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T, Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VIII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 IX를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 펩티드 억제제는 화학식 IX: X₉₀₁X₉₀₂X₉₀₃X₉₀₄X₉₀₅X₉₀₆X₉₀₇X₉₀₈X₉₀₉X₉₁₀X₉₁₁X₉₁₂X₉₁₃X₉₁₄X₉₁₅X₉₁₆X₉₁₇의 펩티드를 포함하며, 여기서 X₉₀₁은 임의의 아미노산이거나 부재하고; X₉₀₂는 양으로 하전된 아미노산, F 또는 N이고; X₉₀₃은 임의의 아미노산이고; X₉₀₄는 임의의 아미노산이고; X₉₀₅는 극성 하전된 아미노산, R, Y 또는 W이고; X₉₀₆은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₇은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₈은 M 또는 F가 아닌 소수성 비-방향족 탄소 쇄 아미노산이고; X₉₀₉는 양으로 하전된 아미노산, T, Q 또는 Y이고; X₉₁₀은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₁은 극성 하전된 아미노산 또는 H이고; X₉₁₂는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₃은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₄는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₅는 음으로 하전된 아미노산, Y 또는 Q이고; X₉₁₆은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₇은 하나 이상의 양으로 하전된 아미노산이거나 부재한다. 임의로, X₉₀₁은 양으로 하전된 아미노산을 포함한다. 임의로, X₉₀₁은 R 또는 K이다. 임의로, X₉₁₇은 RR이다. 일부 실시양태에서, 화학식 IX를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 이들 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 표 5.1에 제시된 펩티드 중 어느 1종 이상을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 표 5.1로부터의 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다. 추가로, 이러한 펩티드 억제제를 코딩하는 핵산, 예를 들어 서열 102-165의 핵산이 제공될 수 있다.

바람직하게는, 상기 언급된 방법에 사용된 면역조절 펩티드 억제제는 P28R, 그의 유도체, 또는 이러한 분자를 코딩하는 핵산 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589로 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합, 또는 이러한 분자를 코딩하는 핵산)이다. 상기 언급된 방법에 사용된 면역조절 펩티드 억제제는 적어도 하나의 D 아미노산, 적어도 하나의 비-천연 아미노산, N-말단 아세틸 기 또는 C 말단 아미드 기를 포함할 수 있고, 상기 면역조절 펩티드 억제제는 글리코실화, 니트로실화, 카르보닐화, 산화될 수 있거나, 또는 연결된 약동학적 조절제, PEG, 세포독소 또는 방사성핵종에 연결될 수 있다.

일부 실시양태는 수용체 (예를 들어, P3028을 포함하는 분자)로부터 LFA-1 수용체 또는 IL-2 수용체의 결합 리간드를 제거하는 것을 포함한다. 실시예 15에 나타낸 바와 같이, P3028에 대한 P3028 서열/구조물의 억제제의 결합은, 억제제가 P3028에 결합되지 않은 대조군 샘플과 비교한 경우에 LFA-1 수용체에 특이적으로 결합된 항체에 대한 LFA-1 수용체의 이용가능성을 증가시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, P3028은 억제제에 결합되고, 따라서 IL-2 수용체로부터 P3028의 결합이 제거된다 (실시예 9 및 13 참조).

암 세포를 면역조절 펩티드 억제제와 결합시키는 방법

실시양태는 또한 암 세포를 면역조절 펩티드 억제제 (예를 들어, 세포독소, 방사성핵종 또는 검출가능한 표지를 갖는 면역조절 펩티드 억제제)와 결합시키는 방법을 포함한다. 이들 방법은 암 세포를 (예를 들어, 시험관내 또는 생체내에서) 본원에 기재된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물과 접촉시킴으로써 실행된다. 예를 들어, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 I, XX₁VKX₂X₃X₄ (서열 166)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X는 임의적인 서열이고, KKLDT (서열 167), RKLDT (서열 168), KKGDT (서열 169), KKEDT (서열 170), KKLDQ (서열 171), KKGDQ (서열 252), KKEDQ (서열 253), RKLDQ (서열 254), RKGDQ (서열 255), RKEDQ (서열 256), RKGTD (서열 257), RKEDT (서열 258), KLDT (서열 172), KGDT (서열 259), KEDT (서열 260), KLDQ (서열 261), KGDQ (서열 262), KEDQ (서열 263), LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T 또는 Q일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₁은 FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT 또는 VL 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₂는 LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT 또는 VH 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₃은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₄는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X가 부재하는 경우에, X₁은 FF이고, X₂는 LS이다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 I을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 II, X₂₀TFFVKLSX₂₁X₂₂ (서열 173)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₀은 임의적인 서열이고, KKLD (서열 174), RKLD (서열 175), KKGD (서열 176), KKED (서열 177), KLD, LD, D일 수 있거나 부재할 수 있다. X₂₁은 임의적인 서열이고, LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₂는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 II를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 III, X₃₀X₃₁VKLX₃₂LX₃₃TEX₃₄ (서열 178)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₀은 임의적인 서열이고, KKLDTF (서열 179), KLDTF (서열 180), LDTF (서열 181), DTF, TF 또는 F일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 임의적인 서열이고, F, S, M, V, T 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 F이다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S, Q, M, T 또는 H일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S이다. X₃₃은 F, M, Q, H, N, P, S, G, A 또는 R일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₄는 F이다. X₃₄는 임의적인 서열이고, R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 III을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VII, X₇₀₀K X₇₀₁X₇₀₂X₇₀₃ X₇₀₄X₇₀₅X₇₀₆K X₇₀₇ X₇₀₈ X₇₀₉ X₇₁₀ X₇₁₁E X₇₁₂ (서열 394)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₁은 임의적인 서열이고, L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₂는 임의적인 서열이고, D, A, E, I, V, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₃은 임의적인 서열이고, T, C, M, N, P, Q, R, S, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₄는 임의적인 서열이고, F, A, I, M, N, P, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₅는 임의적인 서열이고, F, L, M, Q, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₆은 임의적인 서열이고, V, F, G, L, P 또는 R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₇은 임의적인 서열이고, L, A, F, G, I, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₈은 임의적인 서열이고, S, H, M, N, Q 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₉는 임의적인 서열이고, L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₀은 임의적인 서열이고, F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₁은 임의적인 서열이고, T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₂는 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VIII, X₈₀₀K X₈₀₁K X₈₀₂E X₈₀₃ (서열 395)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₁은 임의적인 서열이고, LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₂는 임의적인 서열이고, LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₃은 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VIII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 이들 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 표 5.1에 제시된 펩티드 중 어느 1종 이상을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 표 5.1로부터의 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다. 추가로, 이러한 펩티드 억제제를 코딩하는 핵산, 예를 들어 서열 102-165의 핵산이 제공될 수 있다.

바람직하게는, 상기 언급된 방법에 사용된 면역조절 펩티드 억제제는 P28R, P28 코어, 그의 유도체 또는 이러한 분자를 코딩하는 핵산 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589로 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합, 또는 이러한 분자를 코딩하는 핵산 (예를 들어, 서열 102-165))이다. 상기 언급된 방법에 사용된 면역조절 펩티드 억제제는 적어도 하나의 D 아미노산, 적어도 하나의 비-천연 아미노산, N-말단 아세틸 기 또는 C 말단 아미드 기를 포함할 수 있고, 상기 면역조절 펩티드 억제제는 글리코실화될 수 있거나, 또는 PEG, 세포독소 또는 방사성핵종에 연결될 수 있다.

표 1-4의 임의의 면역조절 펩티드에 특이적으로 결합하는 면역조절 펩티드 억제제 또는 항체가 암 세포에 결합되면, 이는 검출될 수 있다. 즉, 임의로, 상기 방법은 면역조절 펩티드 억제제의 결합을 직접 또는 간접적으로 결정하는 검출 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제의 결합은 실시예 14에서와 같이 직접적으로 검출된다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제의 결합은 간접적으로 검출된다. 본원에 기재된 바와 같이, 암 세포 상의 P3028의 존재는 면역 반응을 국부로 억제할 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 암 세포에 대한 면역조절 펩티드 억제제의 결합을 검출하는 것은 또한 실시예 13에 기재된 바와 같은 면역억제의 역전을 검출하는 단계를 포함할 수 있다. 면역억제의 역전은 예를 들어 PBMC 증식 장애의 역전 (실시예 2 및 13 참조), T 세포 수용체 자극의 역전 (실시예 3 참조), 감소된 NK 세포 세포독성의 역전 (실시예 4 참조), 감소된 백혈구 확산의 역전 (실시예 5 참조) 또는 감소된 면역 세포 이동 (실시예 6 참조), 또는 증가된 IL-2 유도된 증식 (실시예 6 및 9 참조)으로서 결정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 암 세포는 생체내에서 면역조절 펩티드 억제제에 결합된다. 실시예 16은 생체내에서 P3028의 억제제의 암 세포로의 전달을 기재한다. 실시예 42는 암 세포 상의 P3028의 억제제의 검출을 기재한다.

일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제의 검출은 인간으로부터 수득된 조직 생검 상에서 일어날 수 있다. 일부 실시양태에서, 조직 생검은 추정 암 세포를 포함할 수 있거나, 또는 생검은 암 세포에 대해 스크리닝될 수 있다. 이들 방법에 의해, 조직 생검은 본원에 기재된 바와 같은 면역조절 펩티드 억제제와 접촉된다. 바람직하게는, 면역조절 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 검출가능한 표지를 포함한다. 일부 실시양태에서, 살아있는 세포가 면역조절 펩티드 억제제와 접촉된다 (실시예 14 참조). 일부 실시양태에서, 조직학적 절편이 면역조절 펩티드 억제제와 결합된다. 이어서, 검출가능한 표지가 검출되고, 따라서 면역계에 의해 공격될 수 없었던 암 세포의 확인을 가능하게 한다. 검출가능한 표지는 관련 기술분야에 공지된 방법을 통해, 예를 들어 면역검정, 블롯팅 기술, ELISA, ELISpot, 유동 세포측정법, 세포측정 비드 검정, 단백질체학 및/또는 면역조직화학에 의해 검출될 수 있다.

세포독소 또는 방사성핵종을 암 세포로 전달하는 방법

추가의 실시양태는 세포독소 또는 방사성핵종을 암 세포로 전달하는 방법을 포함한다. 일부 실시양태는 방사성 물질 (예를 들어, ¹¹¹I, ¹³¹I, ⁹⁰Y, ⁶⁷Cu, ¹⁸⁶ Re, ¹⁸⁸Re, ²¹²Bi 또는 ²¹¹At) 또는 치료 화합물 (예를 들어, 독소)을 암 세포로 표적화하는 것을 포함한다. 본원에 기재된 바와 같은 면역조절 펩티드 억제제, 예를 들어 펩티드 P28R은 암 세포에 결합하며, 건강한 면역 세포, 예를 들어 림프구에는 결합하지 않는다 (실시예 14 참조). 따라서, 일부 실시양태에서, 암 세포에 대한 치료 화합물의 결합은 면역조절 펩티드 억제제에 의해 매개될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 치료 화합물, 예를 들어 시톡신, 방사성독소 등은 P3028에 결합하는 면역조절 펩티드 억제제에 부착된다.

이들 방법은 암 세포를 (예를 들어, 시험관내 또는 생체내에서) 방사성 물질 (예를 들어, ¹¹¹I, ¹³¹I, ⁹⁰Y, ⁶⁷Cu, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ²¹²Bi 또는 ²¹¹At) 또는 치료 화합물 (예를 들어, 독소)를 포함하는 본원에 기재된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물과 접촉시킴으로써 실행된다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 면역조절 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 펩티드는 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진다. 예를 들어, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 I, XX₁VKX₂X₃X₄ (서열 166)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X는 임의적인 서열이고, KKLDT (서열 167), RKLDT (서열 168), KKGDT (서열 169), KKEDT (서열 170), KKLDQ (서열 171), KKGDQ (서열 252), KKEDQ (서열 253), RKLDQ (서열 254), RKGDQ (서열 255), RKEDQ (서열 256), RKGTD (서열 257), RKEDT (서열 258), KLDT (서열 172), KGDT (서열 259), KEDT (서열 260), KLDQ (서열 261), KGDQ (서열 262), KEDQ (서열 263), LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T 또는 Q일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₁은 FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT 또는 VL 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₂는 LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT 또는 VH 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₃은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₄는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X가 부재하는 경우에, X₁은 FF이고, X₂는 LS이다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 I을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 II, X₂₀TFFVKLSX₂₁X₂₂ (서열 173)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₀은 임의적인 서열이고, KKLD (서열 174), RKLD (서열 175), KKGD (서열 176), KKED (서열 177), KLD, LD, D일 수 있거나 부재할 수 있다. X₂₁은 임의적인 서열이고, LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₂는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 II를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 III, X₃₀X₃₁VKLX₃₂LX₃₃TEX₃₄ (서열 178)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₀은 임의적인 서열이고, KKLDTF (서열 179), KLDTF (서열 180), LDTF (서열 181), DTF, TF 또는 F일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 임의적인 서열이고, F, S, M, V, T 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 F이다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S, Q, M, T 또는 H일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S이다. X₃₃은 F, M, Q, H, N, P, S, G, A 또는 R일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₄는 F이다. X₃₄는 임의적인 서열이고, R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 III을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VII, X₇₀₀K X₇₀₁X₇₀₂X₇₀₃ X₇₀₄X₇₀₅X₇₀₆K X₇₀₇ X₇₀₈ X₇₀₉ X₇₁₀ X₇₁₁E X₇₁₂ (서열 394)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₁은 임의적인 서열이고, L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₂는 임의적인 서열이고, D, A, E, I, V, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₃은 임의적인 서열이고, T, C, M, N, P, Q, R, S, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₄는 임의적인 서열이고, F, A, I, M, N, P, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₅는 임의적인 서열이고, F, L, M, Q, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₆은 임의적인 서열이고, V, F, G, L, P 또는 R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₇은 임의적인 서열이고, L, A, F, G, I, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₈은 임의적인 서열이고, S, H, M, N, Q 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₉는 임의적인 서열이고, L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₀은 임의적인 서열이고, F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₁은 임의적인 서열이고, T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₂는 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VIII, X₈₀₀K X₈₀₁K X₈₀₂E X₈₀₃ (서열 395)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₁은 임의적인 서열이고, LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₂는 임의적인 서열이고, LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT, T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₃은 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VIII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 IX를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 펩티드 억제제는 화학식 IX: X₉₀₁X₉₀₂X₉₀₃X₉₀₄X₉₀₅X₉₀₆X₉₀₇X₉₀₈X₉₀₉X₉₁₀X₉₁₁X₉₁₂X₉₁₃X₉₁₄X₉₁₅X₉₁₆X₉₁₇의 펩티드를 포함하며, 여기서 X₉₀₁은 임의의 아미노산이거나 부재하고; X₉₀₂는 양으로 하전된 아미노산, F 또는 N이고; X₉₀₃은 임의의 아미노산이고; X₉₀₄는 임의의 아미노산이고; X₉₀₅는 극성 하전된 아미노산, R, Y 또는 W이고; X₉₀₆은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₇은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₈은 M 또는 F가 아닌 소수성 비-방향족 탄소 쇄 아미노산이고; X₉₀₉는 양으로 하전된 아미노산, T, Q 또는 Y이고; X₉₁₀은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₁은 극성 하전된 아미노산 또는 H이고; X₉₁₂는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₃은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₄는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₅는 음으로 하전된 아미노산, Y 또는 Q이고; X₉₁₆은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₇은 하나 이상의 양으로 하전된 아미노산이거나 부재한다. 임의로, X₉₀₁은 양으로 하전된 아미노산을 포함한다. 임의로, X₉₀₁은 R 또는 K이다. 임의로, X₉₁₇은 RR이다. 일부 실시양태에서, 화학식 IX를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 이들 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제시된 펩티드 중 어느 1종 이상 또는 그에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6으로부터의 단리된 펩티드 또는 그에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합은 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

바람직하게는, 상기 언급된 방법에 사용된 면역조절 펩티드 억제제는 P28R, 그의 유도체 또는 이러한 분자를 코딩하는 핵산 (예를 들어, 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96 또는 98로 제공된 면역조절 펩티드 억제제 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.1에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상)이다. 상기 언급된 방법에 사용된 면역조절 펩티드 억제제는 적어도 하나의 D 아미노산, 적어도 하나의 비-천연 아미노산, N-말단 아세틸 기 또는 C 말단 아미드 기를 포함할 수 있고, 상기 면역조절 펩티드 억제제는 글리코실화될 수 있거나, 또는 PEG에 연결될 수 있다.

세포독소 또는 방사성핵종을 포함하는 면역조절 펩티드 억제제가 (예를 들어, 인간 환자에서) 암 세포와 접촉되면, 독소 및/또는 방사성핵종은 암 세포 사멸을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 암 세포 사멸은 아폽토시스를 포함한다. 임의로, 세포 사멸은 카스파제 3 활성화를 포함할 수 있다 (실시예 39 참조). 일부 실시양태에서, 펩티드 P28R (서열 2), 또는 P28R을 포함하거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 제약 조성물은 종양주위로 또는 종양 근처에 (예를 들어 종양의 10cm, 9cm, 8cm, 7cm, 6cm, 5cm, 4cm, 3cm, 2cm, 1cm 또는 0.5cm 이내에) 투여되고, 종양 세포의 세포 사멸을 유도한다. 일부 실시양태에서, 종양은 전립선암 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 종양은 흑색종, 예를 들어 B16 흑색종을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 약 10ng/100ml, 예를 들어 약 10ng/100ml, 20ng/100ml, 30ng/100ml, 40ng/100ml, 50ng/100ml, 60ng/100ml, 70ng/100ml, 80ng/100ml, 90ng/100ml, 100ng/100ml, 200ng/100ml, 300ng/100ml, 400ng/100ml, 500ng/100ml, 600ng/100ml, 700ng/100ml, 800ng/100ml, 900ng/100ml, 1μg/100ml, 2μg/100ml, 3μg/100ml, 4μg/100ml, 5μg/100ml, 6μg/100ml, 7μg/100ml, 8μg/100ml, 9μg/100ml, 10μg/100ml 20μg/100ml, 30μg/100ml, 40μg/100ml, 50μg/100ml, 100μg/100ml, 200μg/100ml, 500μg/100ml, 1000μg/100ml (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함), 예를 들어 약 10ng-100ng/100ml, 10ng-200ng/100ml, 10ng-500ng/100ml, 10ng-1μg/100ml, 20ng-10μg/100ml, 100ng-200ng/100ml, 100ng-500ng/100ml, 100ng-1μg/100ml, 200ng-10μg/100ml, 200ng-500ng/100ml, 200ng-1μg/100ml, 200ng-10μg/100ml, 1μg-100μg/100ml, 1μg-500μg/100ml, 약 1μg-1000μg/100ml, 5μg-100μg/100ml, 5μg-500μg/100ml, 5μg-1000μg/100ml, 10μg-100μg/100ml, 10μg-500μg/100ml, 10μg-1000μg/100ml, 50μg-100μg/100ml, 50μg-500μg/100ml, 50μg-1000μg/100ml, 100μg-500μg/100ml, 또는 약 100μg-1000μg/100ml의 펩티드 억제제가 종양 주위로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 전신으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 제2 치료제, 예를 들어 면역 세포의 LFA-1 수용체가 탈-차단된 (예를 들어 LFA-1 수용체로부터 결합된 면역조절 펩티드 또는 3028 구조물이 이탈된) 후에 면역 세포를 자극하도록 선택된 치료제와 함께 투여된다.

임의로, 이들 방법은 환자의 암 또는 암의 진행을 관찰 또는 모니터링하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포독소 또는 방사성핵종을 포함하는 면역조절 펩티드 억제제는 결장직장암, 신암, 유방암, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 악성 흑색종, 소세포 폐암, 비소세포 폐 암 (선암종), 편평 세포 암종, 방광암, 골육종, 기관지암 또는 조혈 세포 암을 갖는 암 환자에 투여된다. 일부 실시양태에서, 인간의 생물학적 샘플은 세포독소 또는 방사성핵종을 포함하는 면역조절 펩티드 억제제를 투여하기 전에 면역조절 펩티드 억제제의 결합에 대해 스크리닝된다. 예를 들어, 검출가능한 표지에 결합된 표 1-4 중 임의의 하나의 면역조절 펩티드에 특이적으로 결합하는 면역조절 펩티드 억제제 또는 항체는 실시예 14 또는 실시예 41에서와 같은 생물학적 샘플에 투여될 수 있다. 검출가능한 표지의 검출로부터, 암 세포가 면역조절 펩티드 억제제에 결합된 것이 확인될 수 있으며, 이어서 세포독소 또는 방사성핵종을 포함하는 동일한 면역조절 펩티드 억제제가 환자에게 제공될 수 있다.

암 세포의 증식을 억제하는 방법

본 발명의 일부 실시양태는 암 세포의 증식을 억제하는 방법을 포함한다. 상기 방법은 인간 암 환자를 확인하는 것을 포함할 수 있다. 환자는 하나 이상의 암, 예를 들어 결장직장암, 신암, 유방암, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 악성 흑색종, 소세포 폐암, 비소세포 폐 암 (선암종), 편평 세포 암종, 방광암, 골육종, 기관지암 또는 조혈 세포 암을 앓고 있을 수 있다. 방법은 인간의 면역 세포를 면역조절 펩티드 억제제에 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역 세포를 접촉시키는 것은 종양내 투여 또는 종양 근처 투여, 예를 들어 종양의 10, 9, 8, 7, 6, 5,4, 3, 2, 1 또는 0.5 cm 이내 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 펩티드를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진다. 예를 들어, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 I, XX₁VKX₂X₃X₄ (서열 166)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X는 임의적인 서열이고, KKLDT (서열 167), RKLDT (서열 168), KKGDT (서열 169), KKEDT (서열 170), KKLDQ (서열 171), KKGDQ (서열 252), KKEDQ (서열 253), RKLDQ (서열 254), RKGDQ (서열 255), RKEDQ (서열 256), RKGTD (서열 257), RKEDT (서열 258), KLDT (서열 172), KGDT (서열 259), KEDT (서열 260), KLDQ (서열 261), KGDQ (서열 262), KEDQ (서열 263), LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T 또는 Q일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₁은 FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT 또는 VL 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₂는 LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT 또는 VH 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₃은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₄는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X가 부재하는 경우에, X₁은 FF이고, X₂는 LS이다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 I을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 II, X₂₀TFFVKLSX₂₁X₂₂ (서열 173)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₀은 임의적인 서열이고, KKLD (서열 174), RKLD (서열 175), KKGD (서열 176), KKED (서열 177), KLD, LD 또는 D일 수 있거나 부재할 수 있다. X₂₁은 임의적인 서열이고, LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₂는 임의적인 서열이고, ER, E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 II를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 III, X₃₀X₃₁VKLX₃₂LX₃₃TEX₃₄ (서열 178)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₀은 임의적인 서열이고, KKLDTF (서열 179), KLDTF (서열 180), LDTF (서열 181), DTF, TF 또는 F일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 임의적인 서열이고, F, S, M, V, T 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 F이다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S, Q, M, T 또는 H일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S이다. X₃₃은 F, M, Q, H, N, P, S, G, A 또는 R일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₄는 F이다. X₃₄는 임의적인 서열이고, R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 III을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VII, X₇₀₀K X₇₀₁X₇₀₂X₇₀₃ X₇₀₄X₇₀₅X₇₀₆K X₇₀₇ X₇₀₈ X₇₀₉ X₇₁₀ X₇₁₁E X₇₁₂ (서열 394)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₁은 임의적인 서열이고, L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₂는 임의적인 서열이고, D, A, E, I, V, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₃은 임의적인 서열이고, T, C, M, N, P, Q, R, S, W 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₄는 임의적인 서열이고, F, A, I, M, N, P, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₅는 임의적인 서열이고, F, L, M, Q, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₆은 임의적인 서열이고, V, F, G, L, P 또는 R일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₇은 임의적인 서열이고, L, A, F, G, I, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₈은 임의적인 서열이고, S, H, M, N, Q 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₉는 임의적인 서열이고, L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₀은 임의적인 서열이고, F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₁은 임의적인 서열이고, T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V 또는 W일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₂는 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VIII, X₈₀₀K X₈₀₁K X₈₀₂E X₈₀₃ (서열 395)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₁은 임의적인 서열이고, LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV 또는 L일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₂는 임의적인 서열이고, LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT 또는 T일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₃은 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VIII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 IX를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 펩티드 억제제는 화학식 IX: X₉₀₁X₉₀₂X₉₀₃X₉₀₄X₉₀₅X₉₀₆X₉₀₇X₉₀₈X₉₀₉X₉₁₀X₉₁₁X₉₁₂X₉₁₃X₉₁₄X₉₁₅X₉₁₆X₉₁₇의 펩티드를 포함하며, 여기서 X₉₀₁은 임의의 아미노산이거나 부재하고; X₉₀₂는 양으로 하전된 아미노산, F 또는 N이고; X₉₀₃은 임의의 아미노산이고; X₉₀₄는 임의의 아미노산이고; X₉₀₅는 극성 하전된 아미노산, R, Y 또는 W이고; X₉₀₆은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₇은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₈은 M 또는 F가 아닌 소수성 비-방향족 탄소 쇄 아미노산이고; X₉₀₉는 양으로 하전된 아미노산, T, Q 또는 Y이고; X₉₁₀은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₁은 극성 하전된 아미노산 또는 H이고; X₉₁₂는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₃은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₄는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₅는 음으로 하전된 아미노산, Y 또는 Q이고; X₉₁₆은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₇은 하나 이상의 양으로 하전된 아미노산이거나 부재한다. 임의로, X₉₀₁은 양으로 하전된 아미노산을 포함한다. 임의로, X₉₀₁은 R 또는 K이다. 임의로, X₉₁₇은 RR이다. 일부 실시양태에서, 화학식 IX를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제시된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 표 5.1로부터의 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

일부 실시양태에서, 방법은 인간에게 이러한 펩티드 억제제를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합)를 제공하는 것을 포함한다. 예를 들어, 이러한 펩티드 억제제를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 예를 들어 서열 102-165의 핵산이 제공될 수 있다.

암-연관 면역억제의 감소는 암 세포에 대한 면역 반응을 유도 및/또는 증진시킬 수 있다. 암 세포에 대한 면역 반응은 암 세포 증식을 감소시킬 수 있고/거나 암 세포가 세포 사멸 또는 아폽토시스를 겪도록 유도할 수 있다. 따라서, 방법은 환자의 암 세포의 증식에서의 억제를 검출하는 것을 포함할 수 있다. 방법은 환자의 암 세포의 세포 사멸 또는 아폽토시스의 유도를 검출하는 것을 포함할 수 있다. 방법은 환자의 암 세포의 증식에서의 억제 및 환자의 암 세포의 세포 사멸 또는 아폽토시스의 유도를 검출하는 것을 포함할 수 있다. 아폽토시스는 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 예를 들어 뉴트럴 레드 검정에 의해, 사멸 세포의 트리판 블루 배제에 의해, 아크리딘 오렌지 염색에 의해, TUNEL 염색에 의해 및/또는 절단된 PARP 및/또는 절단된 카스파제의 검출에 의해 확인될 수 있다.

LFA-1 수용체에 결합된 리간드를 제거하는 방법

본 발명의 일부 실시양태는 인간 림프구의 LFA-1 수용체에 결합된 리간드를 제거하는 방법을 포함한다. 방법은 인간 림프구를 면역조절 펩티드 억제제 또는 이러한 억제제를 코딩하는 폴리뉴클레오티드와 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역조절 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 펩티드를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진다. 예를 들어, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 I, XX₁VKX₂X₃X₄ (서열 166)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X는 임의적인 서열이고, KKLDT (서열 167), RKLDT (서열 168), KKGDT (서열 169), KKEDT (서열 170), KKLDQ (서열 171), KKGDQ (서열 252), KKEDQ (서열 253), RKLDQ (서열 254), RKGDQ (서열 255), RKEDQ (서열 256), RKGTD (서열 257), RKEDT (서열 258), KLDT (서열 172), KGDT (서열 259), KEDT (서열 260), KLDQ (서열 261), KGDQ (서열 262), KEDQ (서열 263), LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T 또는 Q일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₁은 FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT 또는 VL 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₂는 LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT 또는 VH 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₃은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₄는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X가 부재하는 경우에, X₁은 FF이고, X₂는 LS이다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 I을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 II, X₂₀TFFVKLSX₂₁X₂₂ (서열 173)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₀은 임의적인 서열이고, KKLD (서열 174), RKLD (서열 175), KKGD (서열 176), KKED (서열 177), KLD, LD 또는 D일 수 있거나 부재할 수 있다. X₂₁은 임의적인 서열이고, LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR일 수 있거나 부재할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₂는 임의적인 서열이고, ER, E일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 II를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 III, X₃₀X₃₁VKLX₃₂LX₃₃TEX₃₄ (서열 178)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₀은 임의적인 서열이고, KKLDTF (서열 179), KLDTF (서열 180), LDTF (서열 181), DTF, TF 또는 F일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 임의적인 서열이고, F, S, M, V, T 또는 L일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 F이다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S, Q, M, T 또는 H일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S이다. X₃₃은 F, M, Q, H, N, P, S, G, A 또는 R일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₄는 F이다. X₃₄는 임의적인 서열이고, R일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 III을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VII, X₇₀₀K X₇₀₁X₇₀₂X₇₀₃ X₇₀₄X₇₀₅X₇₀₆K X₇₀₇ X₇₀₈ X₇₀₉ X₇₁₀ X₇₁₁E X₇₁₂ (서열 394)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T 또는 V일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₁은 임의적인 서열이고, L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₂는 임의적인 서열이고, D, A, E, I, V, W 또는 Y일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₃은 임의적인 서열이고, T, C, M, N, P, Q, R, S, W 또는 Y일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₄는 임의적인 서열이고, F, A, I, M, N, P, T 또는 V일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₅는 임의적인 서열이고, F, L, M, Q, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₆은 임의적인 서열이고, V, F, G, L, P 또는 R일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₇은 임의적인 서열이고, L, A, F, G, I, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 Y일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₈은 임의적인 서열이고, S, H, M, N, Q 또는 T일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₉는 임의적인 서열이고, L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₀은 임의적인 서열이고, F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₁은 임의적인 서열이고, T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V 또는 W일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₂는 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VIII, X₈₀₀K X₈₀₁K X₈₀₂E X₈₀₃ (서열 395)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₁은 임의적인 서열이고, LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV 또는 L일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₂는 임의적인 서열이고, LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT 또는 T일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₃은 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VIII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 화학식 IX를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 펩티드 억제제는 화학식 IX: X₉₀₁X₉₀₂X₉₀₃X₉₀₄X₉₀₅X₉₀₆X₉₀₇X₉₀₈X₉₀₉X₉₁₀X₉₁₁X₉₁₂X₉₁₃X₉₁₄X₉₁₅X₉₁₆X₉₁₇의 펩티드를 포함하며, 여기서 X₉₀₁은 임의의 아미노산이거나 부재하고; X₉₀₂는 양으로 하전된 아미노산, F 또는 N이고; X₉₀₃은 임의의 아미노산이고; X₉₀₄는 임의의 아미노산이고; X₉₀₅는 극성 하전된 아미노산, R, Y 또는 W이고; X₉₀₆은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₇은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₈은 M 또는 F가 아닌 소수성 비-방향족 탄소 쇄 아미노산이고; X₉₀₉는 양으로 하전된 아미노산, T, Q 또는 Y이고; X₉₁₀은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₁은 극성 하전된 아미노산 또는 H이고; X₉₁₂는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₃은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₄는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₅는 음으로 하전된 아미노산, Y 또는 Q이고; X₉₁₆은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₇은 하나 이상의 양으로 하전된 아미노산이거나 부재한다. 임의로, X₉₀₁은 양으로 하전된 아미노산을 포함한다. 임의로, X₉₀₁은 R 또는 K이다. 임의로, X₉₁₇은 RR이다. 일부 실시양태에서, 화학식 IX를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 이들 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

추가로, 이들 방법에 사용된 펩티드 억제제는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6에 제시된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6으로부터의 단리된 펩티드, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합은 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 방법은 인간에게 이러한 펩티드 억제제를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공하는 것을 포함한다. 예를 들어, 이러한 펩티드 억제제를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 예를 들어 서열 102-165의 핵산이 제공될 수 있다.

본원에 제시된 바와 같이 (실시예 15 및 24 참조; 도 15, 16, 17 및 26 참조), 면역조절 펩티드 억제제는 면역조절 펩티드 서열/구조물에 결합할 수 있고, 따라서 면역조절 펩티드 서열/구조물이 LFA-1 수용체에 결합하는 것을 방지할 수 있다. 예시적인 면역조절 펩티드는 P3028 구조물/서열을 포함할 수 있다. 예시적인 면역조절 펩티드는 서열 183-185 또는 188-246의 펩티드를 포함할 수 있다. 따라서, 방법은 본원에 기재된 바와 같은 LFA-1 수용체에 대한 리간드의 감소된 결합을 검출하는 것을 포함할 수 있다. 리간드의 감소된 결합은 리간드가 결합되어 있는 경우에 차단되는 LFA-1 수용체의 적어도 1개의 에피토프를 인식하는 항체, 예를 들어 실시예 15 및 23의 항체를 사용하여 검출될 수 있다. 리간드의 감소된 결합은 LFA-1 수용체의 리간드에 특이적으로 결합하는 항체, 예를 들어 면역조절 펩티드 예컨대 P3028 서열/구조물 등에 특이적으로 결합하는 항체를 사용하여 검출될 수 있다 (실시예 9 참조).

필요로 하는 환자를 확인하는 방법

상이한 집단의 환자가 상이한 알부민-유래 면역조절 펩티드를 가질 수 있으며 주어진 알부민-유래 면역조절 펩티드가 상이한 개별 환자에서 상이한 효과를 가질 수 있다는 것이 본원에서 고려된다. 실시예 30에 나타낸 바와 같이, 일부 암 환자는 IL-2에 대한 높은 증식성 반응을 갖는 면역 세포를 갖는 반면, 다른 암 환자는 IL-2에 대한 낮은 증식성 반응을 갖는 면역 세포를 갖는다. 실시예 31 및 32에 나타낸 바와 같이, 상이한 집단의 환자는 면역조절 펩티드의 동일한 억제제에 상이하게 반응할 수 있다. 추가로, 주어진 억제제는 일부 환자에서 면역계를 조절할 수 있지만 다른 환자에서는 그렇지 않다. 따라서, 본 발명의 일부 실시양태는 필요로 하는 환자를 확인하는 방법을 포함한다. 필요로 하는 환자는 그의 면역 세포의 적어도 일부에 결합된 알부민-유래 면역조절 펩티드를 갖는 환자를 포함할 수 있다. 필요로 하는 환자는 면역조절 펩티드의 억제제에 반응할 수 있는 환자를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 환자의 면역 세포는 단리될 수 있다. 면역 세포 상의 면역조절 구조물의 존재는 검출될 수 있다. 면역 세포에 대한 면역조절 펩티드의 억제제의 효과는 검출될 수 있다. 면역조절 구조물이 존재하는 경우 및/또는 면역 세포 기능이 억제제에 의해 조절되는 경우에, 환자는 필요로 하는 환자로 분류될 수 있다. 임의로, 억제제의 유효 용량이 결정될 수 있다. 억제제의 치료 유효 용량은 필요로 하는 환자에게 투여될 수 있다.

일부 실시양태는 시험관내 검정에서 면역조절 펩티드의 존재를 검출하는 방법을 포함한다. 면역 세포, 면역조절 서열 및 구조물에 결합된 알부민-유래 면역조절 펩티드의 존재를 검출하는 시험관내 방법, 및 면역 세포 활성에 대한 알부민-유래 면역조절 펩티드의 효과를 검출하는 시험관내 방법은 미국 특허 번호 8,182,983 (이는 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨); 미국 특허 번호 7,960,126 (이는 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨); 미국 특허 번호 8,133,688 (이는 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨); 미국 특허 번호 8,110,347 (이는 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨); 및 미국 공개 번호 2011/0262470 (이는 그 전문이 본원에 명백하게 참조로 포함됨)에 제공되어 있다.

일부 실시양태는 면역조절 펩티드의 억제제에 대한 억제된 면역 세포의 반응을 검출하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 환자로부터 단리된다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 PBMC를 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 면역조절 펩티드의 억제제와 접촉된다.

일부 실시양태에서, 면역 세포는 서열 1-33, 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98, 264-393, 583-586 또는 589의 적어도 1종의 펩티드, 또는 표 5.1, 5.4, 5.5, 5.6, 6.1, 6.2 또는 12에 제공된 펩티드 중 어느 1종 이상, 또는 표 5.3 및 13에 제공된 바와 같은 P28R 또는 P28 코어의 임의의 변이 또는 변이들의 조합을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드를 포함하는 억제제와 접촉된다.

일부 실시양태에서, 면역 세포는 화학식 I, XX₁VKX₂X₃X₄ (서열 166)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드를 포함하는 억제제와 접촉된다. 일부 실시양태에서, X는 임의적인 서열이고, KKLDT (서열 167), RKLDT (서열 168), KKGDT (서열 169), KKEDT (서열 170), KKLDQ (서열 171), KKGDQ (서열 252), KKEDQ (서열 253), RKLDQ (서열 254), RKGDQ (서열 255), RKEDQ (서열 256), RKGTD (서열 257), RKEDT (서열 258), KLDT (서열 172), KGDT (서열 259), KEDT (서열 260), KLDQ (서열 261), KGDQ (서열 262), KEDQ (서열 263), LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T 또는 Q일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₁은 FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT 또는 VL 중 하나이다. 일부 실시양태에서, X₂는 LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT 또는 VH 중 하나일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃은 LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR 중 하나일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₄는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X가 부재하는 경우에, X₁은 FF이고, X₂는 LS이다. 일부 실시양태에서, 펩티드는 서열 2-33 중 하나를 포함한다. 일부 실시양태에서, 화학식 I을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

일부 실시양태에서, 면역 세포는 화학식 II, X₂₀TFFVKLSX₂₁X₂₂ (서열 173)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드를 포함하는 억제제와 접촉된다. 일부 실시양태에서, X₂₀은 임의적인 서열이고, KKLD (서열 174), RKLD (서열 175), KKGD (서열 176), KKED (서열 177), KLD, LD 또는 D일 수 있거나 부재할할 수 있다. X₂₁은 임의적인 서열이고, LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR 또는 MRR일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₂₂는 임의적인 서열이고, ER 또는 E일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 II를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

일부 실시양태에서, 면역 세포는 화학식 III, X₃₀X₃₁VKLX₃₂LX₃₃TEX₃₄ (서열 178)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드를 포함하는 억제제와 접촉된다. 일부 실시양태에서, X₃₀은 임의적인 서열이고, KKLDTF (서열 179), KLDTF (서열 180), LDTF (서열 181), DTF, TF 또는 F일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 임의적인 서열이고, F, S, M, V, T 또는 L일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₁은 F이다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S, Q, M, T 또는 H일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₂는 S이다. X₃₃은 F, M, Q, H, N, P, S, G, A 또는 R일 수 있다. 일부 실시양태에서, X₃₄는 F이다. X₃₄는 임의적인 서열이고, R일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 화학식 III을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

일부 실시양태에서, 면역 세포는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VII, X₇₀₀K X₇₀₁X₇₀₂X₇₀₃ X₇₀₄X₇₀₅X₇₀₆K X₇₀₇ X₇₀₈ X₇₀₉ X₇₁₀ X₇₁₁E X₇₁₂ (서열 394)를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드를 포함하는 억제제와 접촉된다. 일부 실시양태에서, X₇₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T 또는 V일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₁은 임의적인 서열이고, L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₂는 임의적인 서열이고, D, A, E, I, V, W 또는 Y일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₃은 임의적인 서열이고, T, C, M, N, P, Q, R, S, W 또는 Y일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₄는 임의적인 서열이고, F, A, I, M, N, P, T 또는 V일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₅는 임의적인 서열이고, F, L, M, Q, S, T 또는 V일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₆은 임의적인 서열이고, V, F, G, L, P 또는 R일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₇은 임의적인 서열이고, L, A, F, G, I, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 Y일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₈은 임의적인 서열이고, S, H, M, N, Q 또는 T일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₀₉는 임의적인 서열이고, L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₀은 임의적인 서열이고, F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V 또는 W일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₁은 임의적인 서열이고, T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V 또는 W일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₇₁₂는 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

일부 실시양태에서, 면역 세포는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 VIII, X₈₀₀K X₈₀₁K X₈₀₂E X₈₀₃ (서열 395)을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드를 포함하는 억제제와 접촉된다. 일부 실시양태에서, X₈₀₀은 임의적인 서열이고, K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V 또는 K일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₁은 임의적인 서열이고, LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV 또는 L일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₂는 임의적인 서열이고, LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT, T일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, X₈₀₃은 임의적인 서열이고, R, F, K, N, R, T 또는 Y일 수 있거나 부재할할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 VIII을 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

일부 실시양태에서, 면역 세포는 화학식 IX를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드를 포함하는 억제제와 접촉된다. 따라서, 일부 실시양태에서, 펩티드 억제제는 화학식 IX: X₉₀₁X₉₀₂X₉₀₃X₉₀₄X₉₀₅X₉₀₆X₉₀₇X₉₀₈X₉₀₉X₉₁₀X₉₁₁X₉₁₂X₉₁₃X₉₁₄X₉₁₅X₉₁₆X₉₁₇의 펩티드를 포함하며, 여기서 X₉₀₁은 임의의 아미노산이거나 부재하고; X₉₀₂는 양으로 하전된 아미노산, F 또는 N이고; X₉₀₃은 임의의 아미노산이고; X₉₀₄는 임의의 아미노산이고; X₉₀₅는 극성 하전된 아미노산, R, Y 또는 W이고; X₉₀₆은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₇은 소수성 또는 비하전된 극성 아미노산이고; X₉₀₈은 M 또는 F가 아닌 소수성 비-방향족 탄소 쇄 아미노산이고; X₉₀₉는 양으로 하전된 아미노산, T, Q 또는 Y이고; X₉₁₀은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₁은 극성 하전된 아미노산 또는 H이고; X₉₁₂는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₃은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₄는 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₅는 음으로 하전된 아미노산, Y 또는 Q이고; X₉₁₆은 음으로 하전되지 않은 임의의 아미노산이고; X₉₁₇은 하나 이상의 양으로 하전된 아미노산이거나 부재한다. 임의로, X₉₀₁은 양으로 하전된 아미노산을 포함한다. 임의로, X₉₀₁은 R 또는 K이다. 임의로, X₉₁₇은 RR이다. 일부 실시양태에서, 화학식 IX를 포함하는 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다.

일부 실시양태에서, 면역 세포는 표 5.1에 제시된 펩티드 중 어느 1종 이상을 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 펩티드 억제제를 포함하거나, 그로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 억제제와 접촉된다. 일부 실시양태에서, 이들 방법에 사용된 표 5.1로부터의 단리된 펩티드는 1100개 이하의 아미노산, 예를 들어 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 또는 1100개 이하의 아미노산 (열거된 값 중 임의의 2개 사이의 범위 포함)인 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 면역 세포의 반응이 검출된다. 일부 실시양태에서, IL-2 자극에 대한 반응이 검출된다 (실시예 2 참조). 일부 실시양태에서, T 세포 자극이 검출된다 (실시예 3 참조). 일부 실시양태에서, NK-세포 세포독성이 검정된다 (실시예 4 참조). 일부 실시양태에서, 백혈구 확산이 검출된다 (실시예 5 참조). 일부 실시양태에서, LFA-1 수용체의 비차단이 검출된다 (실시예 6 참조). 일부 실시양태에서, 종양에 대한 P28R의 결합이 입증될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-2 수용체에 대한 P3028 (서열 185)의 결합이 검출된다 (실시예 8 참조). 일부 실시양태에서, 면역 세포에 의한 MTS 전환이, 예를 들어 면역 세포 자극에 반응하여 검출된다 (실시예 31-32 참조). 일부 실시양태에서, 면역 세포에 의한 BrdU 혼입이, 예를 들어 면역 세포 자극에 반응하여 검출된다 (실시예 31-32 참조). 일부 환자가 억제제에 반응하여 일부 면역 세포 반응을 나타낼 것이나, 동일한 억제제에 반응하는 다른 면역 세포 반응은 나타내지 않을 것이라는 것이 본원에서 고려된다 (결과들 중 특히, P28R이 한 환자에서는 BrdU 흡수 및 MTS 전환의 IL-2 유도된 자극을 증진시켰으나, 또 다른 환자에서는 BrdU 흡수는 증진시키고 MTS 전환은 증진시키지 않았다는 것을 보여주는 실시예 31-32 및 도 34, 37 및 38 참조). 따라서, 일부 실시양태는 본원에 기재된 2종 이상의 면역 세포 반응을 검출하는 것을 포함한다. 2종 이상의 면역 세포 반응의 검출은 제1 반응을 유도할 수 있으나 제2 반응은 유도하지 않는 환자의 확인을 가능하게 할 수 있고, 어느 억제제 또는 억제제의 조합을 적용할지, 및 필요로 하는 환자에게 추가의 요법을 적용할지 여부와 같은 임상 결정을 가이드하는데 유용할 수 있다. 일부 실시양태에서, CD69 또는 CD71 발현의 증가에 의해 입증된 바와 같은 면역 세포의 활성화 또는 자극, 인터페론 감마 또는 IL-12 생산에 의해 입증된 바와 같은 신호 물질의 분비의 유도, 또는 그랜자임 B 또는 퍼포린의 방출에 의해 입증된 바와 같은 세포용해 물질의 방출의 자극의 검출이 수행된다. 일부 실시양태에서, 면역 세포의 활성화 또는 자극의 검출은 증진된 세포독성, 시토카인 생산, 세포 이동 및/또는 세포 증식 중 하나 이상을 검출하는 것을 포함한다.

일부 실시양태에서, 임의로, 필요로 하는 환자에 대한 억제제의 유효 용량이 결정된다. 일부 실시양태에서, 환자의 세포는 시험관내에서 2가지 이상의 용량의 억제제 및 면역 반응과 접촉된다. 도 33a, 33b 및 34에 나타낸 바와 같이, P28R은 예를 들어 미토콘드리아 대사에 대해 용량-의존성 면역조절 효과를 가질 수 있다 (실시예 28 및 29 참조).

도 34에 나타낸 바와 같이, 증가하는 용량의 P28R (서열 2)을 시험관내에서 암 환자의 면역 세포에 제공하였다. 20μg/ml 용량의 P28R은 40 μg/ml 용량의 P28R보다 유의하게 더 높은 MTS 전환을 일으켰다. 따라서, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 일부 실시양태가, 시험관내에서 환자의 세포에 대한 억제제의 유효 용량을 결정하고, 이어서 억제제의 적절한 용량을 환자에게 제공하는 것을 포함한다는 것을 인지할 것이다.

물질 및 방법

달리 언급된 경우를 제외하고는, 하기 물질 및 또는 방법을 하기 제공된 실시예에서 적절하게 사용하였다.

인간 혈청

인간 혈청을 PBMC의 단리를 위한 혈액 샘플과 동시에 첨가제 없이 혈청 수집 튜브 (바큐테이너(Vacutainer), 벡톤 디킨슨(Becton Dickinson), 뉴저지주 프랭클린 레이크스)에 수집하였다. 혈청을 56EC에서 30분 동안 열-불활성화시켰다.

PBMC의 단리

PBMC를 단리하기 위해, 정맥 혈액을 항응고제로서 산 덱스트로스 시트레이트 용액 A를 함유하는 유리 진공관 (바큐테이너, 벡톤 디킨슨, 뉴저지주 프랭클린 레이크스)에서 건강한 지원자로부터 또는 암 환자로부터 채취하였다. 적혈구를 0.9% NaCl 중 2% 덱스트란 T500 용액 (아머샴 파마시아 바이오테크 아베(Amersham Pharmacia Biotech AB), 스웨덴 웁살라) 상에서의 침강에 의해 제거하였다 (PHA-자극을 갖는 배양물에 대해서는 이 단계를 생략함 - 하기 참조). 이어서, PBMC를 피콜-파크 플러스(Ficoll-Paque Plus) (지이 헬스케어 바이오-사이언스 아베(GE Healthcare Bio-Sciences AB), 스웨덴 웁살라) 밀도 구배 원심분리에 의해 단리한 후, 세포를 2% 인간 혈청 알부민 (HSA) (파마시아 앤 업존(Pharmacia & Upjohn), 스웨덴 스톡홀름)을 함유하는 RPMI 1640 더치(Dutch) 변형 (깁코(Gibco), 인비트로젠 아베(InVitrogen AB), 스웨덴 스톡홀름) (RPMI/2%HSA) 중에서 2회 세척하였다. PHA-자극을 갖는 세포 배양물의 경우, PBMC를 RPMI/2%HSA 대신에 10% 자가 혈장을 함유하는 행크(Hank) 평형 염 용액 (HBSS) 중에서 세척하였다. 세포 생존율을 0.05% 트리판 블루의 배제에 의해 평가하였고, 항상 95% 초과였다. 세포 현탁액을 튀르크(Tuerk) 용액으로 염색하고, PBMC 제조물 중 림프구 및 단핵구의 수를 혈구계에서 계수하였다. PBMC를 RPMI/2%HSA 중에 현탁시키고, 세포 농도를 5 x 10⁵개 림프구/ml로 조정하였다.

비코팅된 및 코팅된 배양 플레이트에서의 PBMC의 IL-2 유도된 증식

HSA 및 HSA/IgG를 사용한 배양 플레이트의 예비-코팅. 둥근 바닥 96-웰 조직 배양 플레이트 (코스타(Costar), 코닝 인크.(Corning Inc.), 미국 뉴욕)를 HSA 단독, 또는 HSA 및 정맥내 주사용 풀링된 인간 IgG (감마가드(Gammagard), 백스터 AS(Baxter AS), 덴마크)로 예비-코팅하였다. HSA를 보충물을 함유하지 않는 RPMI1640 중에 10 mg/ml의 농도로 희석하였다. 일부 실험에서, 1 mg/ml IgG를 RPMI 중 9 mg/ml HSA의 용액 내로 혼합하였다 (HSA/IgG). 이어서, 200 μl의 HSA 또는 HSA/IgG를 플레이트의 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 4℃에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 웰을 200 μl의 RPMI1640으로 2회 세척하였다. 코팅된 플레이트를 즉시 사용하였다.

200 IU/ml 페니실린, 200 μl/ml 스트렙토마이신, 4 mM L-글루타민 (모두 시그마 케미칼 캄파니(Sigma Chemical Co., 미국 미주리주)로부터의 것) 및 20% 열-불활성화 인간 혈청 (자가 또는 암 환자로부터)으로 보충된 RPMI1640 100 μl를 비코팅된, HSA 또는 HSA/IgG 코팅된 조직 배양 마이크로타이터 플레이트에 첨가하였다. 건강한 개체 또는 전이성 신세포 암종을 갖는 환자로부터 단리된 PBMC를 5 x 10⁵개/ml의 농도로 RPMI/2%HSA 중에 희석하고, 100μl를 마이크로타이터 웰에 첨가하였다. 인터류킨-2 (IL-2, 프로류킨(Proleukin), 키론(Chiron), 네덜란드)를 120 IU/웰의 최종 농도로 일부 웰에 첨가하였다. 세포를 37℃에서 가습 5% CO2-분위기 하에 7일 동안 배양하였다. 마지막 18시간 동안 1.6 μCi/웰의 [³H]-티미딘 (아머샴 인터내셔널(Amersham Int.), 영국)의 혼입에 의해 증식을 검정하였다. 3회 반복의 dpm (분당 붕괴수)의 평균 값을 계산에 사용하였다.

알부민 펩티드의 존재 하에서의 PBMC의 인터류킨-2 (IL-2) 유도된 증식

IL-2 유도된 증식을 위한 배양을, PBMC를 먼저 10 μg/ml 농도의 나타낸 알부민 펩티드와 함께 실온에서 30분 동안 예비-인큐베이션한 것을 제외하고는 상기 기재된 바와 같이 건강한 공여자 및 자가 혈청으로부터의 PBMC를 사용하여 셋업하였다.

코팅된 및 비코팅된 조직 배양 플레이트에서 알부민 펩티드의 존재 하에서의 PBMC의 인터류킨-2 (IL-2) 유도된 증식

둥근 바닥 96-웰 조직 배양 플레이트 (코스타, 코닝 인크. 미국 뉴욕)를 하기와 같이 HSA 단독, 또는 HSA 및 정맥내 주사용 풀링된 인간 IgG (감마가드, 백스터 AS, 덴마크)로 예비-코팅하였다; HSA를 보충물을 함유하지 않는 RPMI1640 중에 10 mg/ml의 농도로 희석하였다. RPMI 중 9 mg/ml HSA의 용액 중 1 mg/ml IgG의 혼합물 (HSA/IgG)을 또한 제조하였다. 이어서, 200 μl의 HSA 또는 HSA/IgG를 플레이트의 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 4℃에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 웰을 200 μl의 RPMI1640으로 2회 세척하였다. 코팅된 플레이트를 즉시 사용하였다. 200 IU/ml 페니실린, 200 μl/ml 스트렙토마이신, 4 mM L-글루타민 (모두 시그마 케미칼 캄파니 (미국 미주리주)로부터의 것) 및 20% 열-불활성화 인간 혈청 (자가)으로 보충된 RPMI1640 100 μl를 HSA 또는 HSA/IgG 코팅된 조직 배양 마이크로타이터 플레이트에 첨가하였다. 건강한 개체로부터 단리된 PBMC를 RPMI/2%HSA 중에 희석하고, 펩티드를 10 μl/ml의 농도로 세포 현탁액에 직접 첨가하였다. 이어서, 이 세포 현탁액 100 μl (5x10⁴개 림프구)를 웰마다 첨가하여 웰당 5 μg/ml 펩티드의 최종 농도를 제공하였다. IL-2 (프로류킨, 키론, 네덜란드)를 120 IU/웰의 최종 농도로 웰에 첨가하였다. 세포를 37℃에서 가습, 5% CO2-분위기 하에 7일 동안 배양하였다. 마지막 18시간 동안 1.6 μCi/웰의 [³H]-티미딘 (아머샴 인터내셔널, 영국)의 혼입에 의해 증식을 검정하였다. 3회 반복의 dpm (분당 붕괴수)의 평균 값을 계산에 사용하였다.

알부민 펩티드

합성 알부민 펩티드를 CS바이오 캄파니(CSBio Co, 캘리포니아주 멘로 파크)에 의해 맞춤 제조하였다. 펩티드는 HPLC에 의해 확인 시에 > 95% 순도였다. 펩티드를 마이너스 20℃에서 동결 건조 하에 유지하였다. 펩티드를 ELISA에 사용하기 위해 멸균 H2O (시그마(Sigma)) 또는 세포 배양 실험에 사용하기 위해 RPMI1640 (깁코) 중에서 재구성하였다. 펩티드를 0.22 μm 시린지 필터 (밀리포어 코포레이션(Millipore Co))를 통해 멸균 여과한 후, 세포 배양 실험에 사용하였다.

인간 알부민에 대한 뮤린 항체 결합의 검출을 위한 ELISA

하이바인딩(Hibinding) 마이크로타이터 플레이트 (코스타 2592, 코닝 인크., 미국 뉴욕)의 이중 웰을 다양한 농도로 PBS 중에 희석된 dHSA 100 μl, 또는 대안적으로 동일한 농도의 대조군 알부민 샘플로 코팅하였다. 플레이트를 실온에서 밤새 인큐베이션하였다. 이어서, 웰을 PBS 중 0.05% 트윈(Tween)-20으로 이루어진 세척 완충제 (시그마)로 세척한 다음, PBS 중 소 피부로부터 제조된 0.1% 젤라틴 (시그마) 200 μl를 사용하여 25℃에서 1시간 동안 차단한 후, 세척 완충제 중에서 세척하였다. 변성된, 인간 알부민 (항-dAbclh040801 또는 항-dAlbclh040809)에 대한 특이성을 갖는 2종의 뮤린 모노클로날 항체 (IgG1) 중 임의의 하나를 ELISA 시약 희석제 (20 mM 트리스-완충 염수 (TBS, 시그마) 중 0.01% 젤라틴 (시그마) 및 0.05% 트윈-20 (시그마)) 중에 1 μg/ml로 첨가하였다. 항체를 25℃에서 1.5시간 동안 인큐베이션한 다음, 세척하였다. 엔비전(Envision)-HRP (다코시토메이션 노르덴 A/S(DakoCytomation Norden A/S), 덴마크 글로스트룹)를 ELISA 시약 희석제 중에 첨가하여 1/5 → 1/10 희석하고, 25℃에서 30분 동안 인큐베이션한 다음, 세척하였다. 최종적으로, H₂O₂ 및 테트라메틸벤지딘으로 이루어진 기질 용액 (알앤디 시스템즈 유럽, 리미티드(R&D Systems Europe, Ltd), 영국 아빙던)을 첨가하였다. 1M H₂SO₄를 사용하여 반응을 중지시키고, 멀티스캔(Multiscan) EX 마이크로플레이트 판독기 (랩시스템즈(Labsystems))를 이용하여 이중 파장, 450 nm 및 570 nm에서의 흡광도 (Ab)로서 광학 밀도를 측정하였다.

토끼-항 3028 항혈청을 사용한 ELISA

하이-바인딩 마이크로타이터 플레이트 (코스타 2592, 코닝 인크., 미국 뉴욕)의 이중 웰을 100 μl의 P3028 (10 ug/ml), 변성된 HSA (denHSA, 4.5 ug/ml) 또는 대조군 HSA 샘플 (4.5 ug/ml)로 코팅하였다. 모든 코팅 시약을 PBS 중에 희석하고, 실온에서 밤새 인큐베이션하였다. 이어서, 웰을 PBS 중 0.05% 트윈-20으로 이루어진 세척 완충제 (시그마)로 세척한 다음, PBS 중 소 피부로부터 제조된 0.5% 젤라틴 (시그마) 200 μl를 사용하여 25℃에서 1시간 동안 차단한 후, 세척 완충제 중에서 세척하였다. ELISA 시약 희석제 (PBS 중 0.01% 젤라틴 및 0.05% 트윈-20) 중에 1/1000,000 희석된 토끼 면역전 혈청 또는 항-3028 혈청을 첨가하고, 25℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 다음, 세척하였다. 이어서, ELISA 시약 희석제 중에 1/5 희석된 비오티닐화 말 항-토끼/마우스 IgG (벡타스타틴 엘라이트(Vectastain ELITE), 벡터 래보러토리즈 인크.(Vetor Laboratories Inc.), 미국 캘리포니아주)를 첨가하고, 플레이트를 25℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 다음, 세척하였다. 그 다음, HRP-접합된 스트렙타비딘 (알앤디 시스템즈 유럽, 리미티드, 영국)을 첨가하였다. 최종적으로, 세척 완충제 중에서 세척한 후, H₂O₂ 및 테트라메틸벤지딘으로 이루어진 기질 용액 (알앤디 시스템즈)을 첨가하였다. 1M H₂SO₄를 사용하여 반응을 중지시키고, 멀티스캔 EX 마이크로플레이트 판독기 (랩시스템즈)를 이용하여 이중 파장, 450 nm 및 570 nm에서의 흡광도 (A)로서 광학 밀도를 측정하였다.

통계학적 고려사항

상이한 환자 군 또는 상이한 시험 경우의 의미의 비교는 독립표본 t-검정을 사용하여 수행하였다. 진행까지의 시간 및 생존은 카플란-마이어 방법 및 로그순위 검정을 사용하여 분석하였다.

상이한 군에서 또는 상이한 시험 경우에서의 PHA에 대한 증식성 반응 사이의 비교는 독립표본 t-검정을 사용한 3회 반복의 dpm의 로그 평균 값에 대해 수행하였다. PHA-자극된 PBMC의 증식성 반응에 대한 CHL 첨가의 효과의 결정을 위해, 조절 지수 (MI)를 하기 식에 따라 계산하였다: MI = log (dpm PHA + 약물/dpm PHA).

실시예 1: 면역 억제 활성을 갖는 혈청 펩티드

면역조절 펩티드의 확인

인공 세포 표면 (ACS)은 PBMC의 세포 표면 구조를 선택적으로 비오티닐화하고 세포를 용해시킨 후 비오티닐화 단백질을 스트렙타비딘 칼럼에 결합시켜 제조하였다 (ACS의 추가의 기재에 대해 실시예 17 참조). 트립신처리 후에 수득된 펩티드의 혼합물을 ACS에 의해 흡착시키고, 결합 펩티드를 MALDI TOF ms 기술을 사용하여 흡착 및 비흡착 펩티드 용액을 비교함으로써 확인하였다. 결합도 및 이전에 확인된 면역조절 구조물에 대한 그의 공간 관계를 기반으로, 4종의 새로운 펩티드를 선택하여 합성하고 그의 면역조절 활성, 주로 IL-2에 대한 증식 반응에 대한 효과에 대해 조사하였다. 이들 펩티드 중 하나인 P3028 (서열 185)은 다중 면역억제 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다.

악성 종양 내 P3028 에피토프의 발현

P3028에 대해 토끼 폴리클로날 항체를 생성하고, 친화도 정제하였다 (실시예 9 참조). 종양 세포 내 P3028의 국재화를 결정하기 위해, 악성 전이의 절편을 항-P3028 토끼 폴리클로날 항체를 사용하여 면역염색하였다. 조직 절편은 암 환자로부터의 포르말린 고정된 생검으로부터 제조하였다. 절편을 탈파라핀화하고, 염색 전 1시간 동안 0.01 M 헤페스 (BSS, 깁코 BRL)로 보충된 행크 평형 염 용액에서 10% 정상 인간 AB-혈청으로 차단시켰다. 이어서, 절편을 30분 동안 2% AB-혈청 및 0.1 g/ml 사포닌을 갖는 BSS 중에 희석된 10 ug/ml 친화도 정제된 토끼 항-P3028로 염색하였다. 0.1 g/ml 사포닌을 갖는 BSS 중에서의 세척 후에, 마우스 및 토끼 Ig에 특이적인 울트라비전 원(Ultravision One) 알칼리성 포스파타제 중합체 (랩 비전 코포레이션(Lab Vision Co.), 미국 캘리포니아주)를 첨가하였다. 이어서, 과량의 중합체를 절편으로부터 0.1 g/ml 사포닌을 갖는 BSS로 세척하였다. 결합된 중합체 복합체를 나프톨 포스페이트 기질 및 액체 패스트 레드 발색체 (랩 비전 코포레이션)에 의해 검출하였다. 절편을 메이어(Mayer) 헤마톡실린 중에 염색하고, 글리세르겔(Glycergel) 중에 탑재하였다. 도 1에 도시된 바와 같이, 항-P3028 항체가 결합하는 구조물 1은 인간 악성 종양, 예를 들어 악성 흑색종, 신세포 암종 및 결장직장암에서 폭넓게 발현된다.

웨스턴 블롯팅은 P3028 구조물의 존재를 검출하기 위해 악성 흑색종 전이의 추출물 상에서 수행하였다. 웨스턴 블롯팅은 표준 기술을 사용하여 수행하였고, P3028 구조물은 P3028에 대한 친화도 정제된 토끼 폴리클로날 항체를 사용하여 검출하였다 (실시예 9 참조). 악성 흑색종 전이로부터의 종양 추출물 내 P3028 구조물은 스크리닝된 4명의 환자로부터의 7개 전이 중 7개의 추출물에서 확인되었다 (도 2 참조). P3028 펩티드는 모든 환자에서 존재하였다. 추가로, P3028 구조물은 전장 알부민에 존재하였다. 추가로, 이 구조물은 보다 큰 분자에서 발견되었다. 이들 결과는 P3028 구조물이 단백질분해 단편화에 의해서뿐만 아니라 변성에 의해서도 생성된다는 것과 부합한다.

혈청 내 P3028 구조물의 발생

P3028의 구조물을 노출시키는 물질은 샌드위치 ELISA에서의 친화도 정제된 항체를 사용하여 인간 혈청에서 결정하였다. 즉, 인간 혈청에서 P3028 구조물을 검출하는 능력을 확인하였다.

샌드위치 ELISA를 수행하여, 하기와 같이 혈청에서 P3028 에피토프를 노출시키는 알부민을 검출하였다: 인간 알부민 P3028에 특이적인 친화도 폴리클로날 정제된 토끼 항혈청을 고 단백질 결합 ELISA 마이크로웰 상에 코팅하였다 (포획 항체; 실시예 9 참조). 이어서, 증가하는 농도의 P3028와 섞은 열-불활성화 혈청의 1% 용액 (5개의 건강한 대조군 샘플의 혈청 풀, 1개의 건강한 대조군 혈청 샘플 및 암 환자로부터 수득된 2개의 혈청)을 웰에 첨가하였다. 세척 후에, 비오티닐화 마우스 항-인간 알부민 모노클로날 항체를 첨가하고, 결합된 항체의 양을 HRP-접합 스트렙타비딘 및 TMB 발색체 기질로 검출하였다. (2개의 대표적 실험 중 1개가 도 3에 도시되어 있다).

P3028 구조물의 양은 혈청 내 P3028 구조물의 포획 항체에 대한 결합의 50%를 억제하는 P3028의 양으로 결정하였다 (도 3 참조). 혈청 농도는 5개의 건강한 대조군 샘플로부터의 1개의 혈청 풀, 1개의 건강한 대조군 혈청 샘플 및 암 환자로부터 수득된 2개의 혈청에서 1.2-1.6μg/ml P3028 당량의 범위인 것으로 결정하였다. 혈청 내 이들 P3028-물질의 양은, 알부민의 분자량이 P3028의 분자량보다 약 35배 더 큼에 따라 상당히 더 많을 수 있다. P3028-물질의 에피토프 특이적 반응성은 본 실시예의 방법을 사용하여 정확하게 결정하였다.

실시예 2: IL-2 유도된 증식에 대한 ACS-확인된 펩티드의 효과

암 환자에서의 면역억제를 위한 인간 생체외 모델

인터류킨-2 (IL-2)는 면역 반응의 개시 및 활성화, 및 림포카인 활성화 킬러 세포 (LAK-세포), T-세포 증식 및 세포독성을 유도하는 그의 능력에 있어서 주요 역할을 한다. 따라서, 면역 세포의 IL-2 자극의 인간 생체외 모델이 개발되었다. 이 모델은 면역계 조절제, 예컨대 P3028 및 그의 억제제의 효과를 연구하는데 유용하였다.

모델은 건강한 혈액 공여자 (대조군 샘플) 또는 암 환자로부터의 정맥 혈액 샘플로부터 단리된 PBMC를 포함하였다. 100 pI의 배양 배지 (200 IV/ml 페니실린, 200 ug/ml 스트렙토마이신, 4 mM L-글루타민 (모두 미국 미주리주 시그마 케미칼 캄파니로부터의 것) 및 20% 열-불활성화 인간 혈청으로 보충된 RPMI 1640 더치 변형 (깁코, 인비트로젠 아베, 스웨덴 스톡홀름))를 둥근 바닥 96-웰 조직 배양 플레이트 (코스타, 코닝 인크. 미국 뉴욕)에 첨가하였다. 이어서, RPMI/2% HSA 중 PBMC 100 ul (5x10⁴개 림프구)를 웰마다 첨가하고, 이어서 IL-2 (프로류킨, 키론, 네덜란드)를 120 IU/웰의 최종 농도로 첨가하였다. IL-2이 없는 대조군 샘플 웰을 병렬로 설치하였다. 세포를 7일 동안 가습 5% CO₂ 분위기 하에 37℃에서 배양하였다. 세포 증식은 마지막 18-24시간 동안 1.6 pCi/웰의 [³H]-티미딘 (아머샴 인터내셔널, 영국)의 혼입에 의해 검정하였다. 삼중 웰의 dpm (분당 붕괴수)의 평균 값을 계산에 사용하였다.

건강한 대조군 샘플로부터의 PBMC 및 10% 자가 혈청에서 배양된 신세포 암종 환자 (RCC)로부터의 PBMC에 의한 IL-2 유도된 증식을 이 모델을 사용하여 연구하였다. 연구의 결과는 도 4에 도시되어 있다. IL-2 유도된 증식은 건강한 대조군 샘플과 비교하여 신암종 환자의 혈청에서 배양된 PBMC의 경우에 현저하게 감소하였다 (p < 0.0002).

생체외 모델에서의 IL-2 반응과 신세포 암종 환자의 전체 생존 사이의 상관관계

이 모델에서 IL-2에 대한 반응은 신세포 암종 환자의 전체 생존과 상관관계가 있는 것으로 입증되었다. 인터류킨-2에 대한 PBMC의 증식 반응에 따른 전체 생존의 분석에 포함된 환자는 전신 전이성 신세포 암종으로 진단되었다. 그들은 이전에 비처리되었고, 인터류킨-2 처리 (프로류킨, 키론, 네덜란드)가 예정되었다. 혈액 샘플을 처리 개시 전에 취하였다. 생존 곡선은 카플란 및 마이어의 방법을 사용하여 플롯팅하고, 하위군 사이의 진행까지의 시간 및 생존 비교는 로그 순위 검정을 사용하여 수행하였다. 또한, LPS-자극된 IL-6 생산의 수준의 예후 유의성은 콕스(Cox) 회귀를 사용하여 계산하였다.

도 5는 IL-2에 대한 증식 반응에 따른 신세포 암종 환자의 카플란 마이어 분석을 예시한다. 환자는 > 30,000 dpm (52), 15,000-30,000 dpm (54) 또는 <15,000 dpm (56)의 증식 반응을 갖는 것으로 분류하였다. 본 발명자들이 수행한 로그 순위 분석 및 전체 환자 생존은 증식 반응과 상관관계가 있었다 (p=0.0042). 도 5에 예시된 바와 같이, 생체외 모델에서 자가 혈청 내 PBMC의 최하위 IL-2 유도된 증식을 갖는 환자 (56)는 또한 최하위 전체 전체 생존 시간을 가졌다. 따라서, 낮은 증식률은 불량한 생존율을 나타낸다.

IL-2 유도된 증식에 대한 상이한 펩티드의 효과

IL-2 유도된 증식에 대한 상이한 펩티드의 효과는 건강한 대조군 샘플로부터의 PBMC를 사용하여 인간 생체외 모델에서 분석하였다. PBMC를 IL-2 (20 U/ml) 및 펩티드의 존재 하에 7일 동안 배양하였다. 펩티드를 첨가하지 않은 대조군 샘플 ("부재")을 또한 수행하였다. 증식은 최종 18시간 동안 ³H-티미딘의 혼입으로서 측정하였다. 펩티드는 P3026 (서열 183), P3027 (서열 184), P3028 (서열 185) 및 P3029 (서열 186)를 포함하였다. 펩티드 중 하나인 P3028은 IL-2 유도된 증식을 정기적으로 억제하였지만 (p < 0.0006, 대조군 샘플과 비교시; n=17), 인공 세포 표면에 대한 결합에 의해 확인된 어떠한 다른 펩티드도 임의의 억제 활성을 갖지 않았다 (P3026, P3027, P3029에 대해, n= 4 또는 5). 도 6은 4종의 상이한 펩티드의 효과의 분석을 예시한다.

P3028에 의한 IL-2에 대한 증식 반응의 억제는 또한 인간 생체외 모델에서 연구된 암 환자 PBMC에 대해 관찰되었다. IL-2 자극의 생체외 모델은 암 환자의 PBMC를 사용하여 구성하였고, IL-2 자극은 P3028의 존재 및 부재 하에서 비교하였다. 도 7에 예시된 바와 같이, IL-2에 대한 반응이 이미 억제되었을지라도, IL-2 유도된 증식에 대한 P3028의 억제 활성은 암 환자 PBMC를 갖는 배양물에서서 또한 입증될 수 있다 (도 7 참조).

실시예 3: T-세포 수용체 자극에 대한 P3028의 효과

T 세포 수용체 자극에 대한 P3028의 효과를 조사하기 위해, PBMC 단리를 위한 혈액을 건강한 대조군 샘플로부터 산 덱스트로스 시트레이트 용액 A를 갖는 50ml 수혈 백에 제공하였다. 전혈을 2mM EDTA를 함유하는 PBS 중에 1:1로 희석하였다. 이어서, PBMC를 피콜-파크 플러스 (지이 헬스케어 바이오-사이언스 아베, 스웨덴) 밀도 구배 원심분리에 의해 단리하고, 이 후에 세포를 먼저 2mM EDTA를 갖는 PBS 중에서 세척하고, 다음에 림프구 배양 배지 중에서 세척하였다. 세포 생존율은 0.02% 트리판 블루 배제에 의해 평가하였고, 이는 항상 95% 초과였다. 세포 현탁액을 혈구계에서 계수하였다. PBMC를 혈청이 없는 배양 배지 중에 현탁시키고, 세포 농도를 증식 검정을 위해 1x10⁶개 림프구/ml 및 이동 검정을 위해 6.4x10⁵개로 각각 조정하였다. 림프구 배양 배지 RPMI 1640 (인비트로젠, 스웨덴)을 1% 페니실린/스트렙토마이신 (인비트로젠, 스웨덴) 및 4mM 글루타-맥스(Gluta-Max) (인비트로젠, 스웨덴)로 보충하였다. CD3 유도된 증식을 위해 플레이트를 정제된 항-인간 CD3 항체 (BD 파밍겐(BD Pharmingen), 스웨덴)로 코팅하였다. 따라서, 2.5μg/ml 항체 PBS 용액 50 μl를 1시간 동안 인큐베이션된 각 웰에 피펫팅하였다. 세포를 37℃에서 가습 5% CO₂-분위기 하에 4, 5 또는 7일 동안 배양하였다. 세포 증식을 마지막 4시간 동안 미토콘드리아 활성 시험 셀타이터(CellTiter) 96® 수성 비-방사성 세포 증식 검정 (MTS, 프로메가(Promega), 스웨덴)에 의해 검정하였다. 각 웰에 MTS 용액 10μl를 첨가하고, 37℃에서 4시간의 인큐베이션 후에 측정하였다. 참조 염료의 측정된 값을 각 웰로부터 차감하였다. 펩티드 용액은 펩티드 3028, SCF28R, 28209 및 SCF27 (샤퍼(Schafer)-N, 덴마크 코펜하겐)을 림프구 배지에 25μg/ml의 농도로 용해시켜 제조하였다. 배양물 중 최종 농도는 5 또는 10μg/ml였다.

T 세포는 CD3에 대해 지시된 모노클로날 항체로 예비-코팅된 플레이트 상의 배양물에서 자극되었고, 대사적 활성 세포의 수 (즉, 세포 증식)를 배양 3 내지 7일 후에 MTS 염색을 사용하여 결정하였다. 고체 상 CD3 모노클로날 항체의 검출을 T 세포 증식의 측정으로서 사용하였다. 도 8은 4명의 건강한 사람으로부터의 PBMC의 TCR 자극된 림프구 증식에 대한 P3028의 효과를 예시한다. 각 사람에 대해, 림프구의 증식을 자극의 부재 하 (82), IL-2 자극 (84), P3028 단독으로의 처리 (86) 및 IL-2 자극 + P3028 (88)에서 측정하였다. 도 8의 막대 그래프의 막대는 각 사람에 대해 동일한 순서이다.

도 8에서 볼 수 있는 바와 같이, P3028은 4개의 실험 중 적어도 3개에서 억제 효과를 가졌다 (p<0.001). P3028에 의해 야기된 감소된 MTS 염색이 감소된 세포 대사로 인해서일 가능성은 없다. 림프구 증식의 두 모델로부터의 결과를 함께 취해보면, 감소된 대사는 타당하게 내인성 티미딘 풀을 감소시켜 증가된 외인성 티미딘의 흡수/티미딘 풀의 비활성을 유발할 것이고, 이어서 이는 증진된 증식으로서 오류 등록될 것이다. ³H-TdR은 이들 실험에서 실제로 감소되었으며, 이는 증식의 억제를 나타낸다.

실시예 4: NK-세포 세포독성에 대한 P3028의 효과

4명의 건강한 공여자로부터의 혈액 단핵 세포의 NK-세포 세포독성 활성을 시험하였다. 단핵 세포는 건강한 공여자로부터 수득된 헤파린첨가 혈액으로부터 표준 피콜-파크 플러스 (파마시아 아베(Pharmacia AB), 스웨덴) 밀도 구배 원심분리에 의해 분리하였다. 이어서, 단핵 세포의 NK 세포 세포독성 활성을 제조업체 프로토콜에 따라 상업용 키트 (NKTEST, 오르페겐 파마 게엠베하(Orpegen Pharma GmbH), 독일 하이델베르크)를 사용하여 시험하였다. 간략하게, 키트는 이펙터 및 표적 세포의 식별을 가능하게 하는 친지성 녹색 형광 막 염료로 표지된 동결보존된 NK-감수성 표적 세포 (K562)를 함유하였다. 이펙터 세포와의 인큐베이션 후에, 사멸된 표적 세포는 사멸 표적 세포의 핵에 침투하여 그를 특이적으로 염색하는 DNA-염색에 의해 확인하였다. 이 방식으로 사멸된 표적의 백분율은 유동 세포측정법에 의해 결정할 수 있다. 단핵 세포를 10 ug/ml의 지시된 펩티드 (펩티드는 이전에 기재되었음)와 함께 37℃에서 30분 동안 예비인큐베이션하였다. 이어서, 표적 세포를 첨가하여, 이펙터:표적 비 40:1을 제공하고, 세포 혼합물을 3-4시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 샘플을 FACS칼리버(FACSCalibur) (BD 바이오사이언시스(BD Biosciences), 캘리포니아주 산호세) 상에서 분석하였다.

도 9a-b는 NK-세포 세포독성에 대한 알부민 펩티드의 효과를 예시한다 (p = 0.015, 대응표본 t-검정, 정규 변환 로그-값). 도 9a-b에 도시된 바와 같이, P3028의 존재 및 보다 적은 정도의 펩티드 3026은 모든 4명의 공여자에 의한 K562 표적 세포의 특이적 용해 퍼센트를 감소시켰다. 억제는 P3028과 구조적 관계가 없는 대조군 샘플 펩티드 3027의 존재 하에서는 보이지 않았다. 이 모델에서, NK-세포 세포독성의 억제는, IL-2를 단기 배양물에 첨가하지 않았기 때문에, IL-2의 활성에 대한 P3028의 효과로 인한 것은 아니었다.

실시예 5: 백혈구 확산 및 면역 세포 이동에 대한 P3028의 효과

적절히 기능하는 면역계에서, 면역 세포는 조직에 동원되고, 조직 내에서 이동한다. 두 기능적 시험인 백혈구 확산 및 면역 세포 이동에서 P3028의 효과를 조사하였다.

백혈구 확산

백혈구 확산에 대한 P3028의 효과를 분석하기 위해, 백혈구 연층 세포를 헤파린첨가 혈액으로부터 덱스트란 보조 침강에 의해 제조하였다. 이어서, 이들 세포를 PBS 중에서 2회 세척하고, 70% 및 96% 에탄올에서 세척된 슬라이드로 옮겼다. 세포 현탁액을 슬라이드 상에 적하하고, P3028 10μg/ml를 갖거나 또는 갖지 않는 가습 챔버에서 15분 동안 인큐베이션하고, 용액을 주의깊게 배수시키고, 슬라이드를 공기 건조시키고, 1분 동안 메이 그륀발트 김사(May Gruenwald Giemsa)로 염색하였다. 도 10A에 도시된 바와 같이, 세포는 유리 표면에 강하게 부착했고, 확산되었다. P3028을 사용한 이들 세포의 전처리는 확산을 효율적으로 억제하였다 (도 10B 참조).

면역 세포 이동

PBMC 단리를 위한 혈액을 건강한 대조군 샘플로부터 산 덱스트로스 시트레이트 용액 A를 갖는 50ml 수혈 백에 제공하였다. 전혈을 2mM EDTA를 함유하는 PBS 중에 1:1로 희석하였다. 이어서, PBMC를 피콜-파크 플러스 (지이 헬스케어 바이오-사이언스 아베, 스웨덴) 밀도 구배 원심분리에 의해 단리하고, 이 후에 세포를 먼저 2mM EDTA를 갖는 PBS 중에서 세척하고, 다음에 림프구 배양 배지 중에서 세척하였다. 세포 생존율은 0.02% 트리판 블루 배제에 의해 평가하였고, 이는 항상 95% 초과였다. 세포 현탁액을 혈구계에서 계수하였다. PBMC를 혈청이 없는 배양 배지 중에 현탁시키고, 세포 농도를 증식 검정을 위해 1x10⁶개 림프구/ml 및 이동 검정을 위해 6.4x10⁵개로 각각 조정하였다. 림프구 배양 배지 RPMI 1640 (인비트로젠, 스웨덴)을 1% 페니실린/스트렙토마이신 (인비트로젠, 스웨덴) 및 4mM 글루타-맥스 (인비트로젠, 스웨덴)로 보충하였다. CD3 유도된 증식을 위해 플레이트를 정제된 항-인간 CD3 항체 (BD 파밍겐, 스웨덴)로 코팅하였다. 따라서, 2.5μg/ml 항체 PBS 용액 50 μl를 1시간 동안 인큐베이션된 각 웰에 피펫팅하였다. 세포를 37℃에서 가습 5% CO₂-분위기 하에 4, 5 또는 7일 동안 배양하였다. 세포 증식을 마지막 4시간 동안 미토콘드리아 활성 시험 셀타이터 96® 수성 비-방사성 세포 증식 검정 (프로메가, 스웨덴)에 의해 검정하였다. 각 웰에 MTS 용액 10μl를 첨가하고, 37℃에서 4시간의 인큐베이션 후에 측정하였다. 참조 염료의 측정된 값을 각 웰로부터 차감하였다. 펩티드 용액은 펩티드 3028, SCF28R, 28209 및 SCF27 (샤퍼-N, 덴마크 코펜하겐)을 림프구 배지에 25μg/ml의 농도로 용해시켜 제조하였다. 배양물 중 최종 농도는 5 또는 10μg/ml였다.

제조된 6.4x10⁵개 PBMC 희석물 50μl를 에펜도르프 튜브 내로 피펫팅하고, 400g에서 5분 동안 원심분리한 다음, 제조된 블랭크, P3028 및 억제제의 희석물을 첨가하였다. PBMC를 1시간 동안 시험 물질과 함께 37℃에서 인큐베션하였다. 한편 보이덴 챔버는 fMLP가 없는 배지 또는 1x10^-8M fMLP를 함유하는 배지 25μl를 하위 웰에 피펫팅함으로써 제조하였다. 이어서, 50μl의 PBMC 최종 농도, 3.2x10⁴개를 챔버의 상위웰로 옮겼다. PBMC가 37℃에서 1시간 동안 이동하도록 하였다. 필터를 제거하고, 밤새 70% 에탄올에 보관하였다. 그 후에 필터를 증가하는 알콜 농도로 탈수시키고, 최종적으로 크실렌에 넣었다. 이후에 슬라이드 상에 놓고, μm 규모를 함유하는 현미경에 탑재하고 계수하였다. 각 시험을 이중으로 수행하고, 이동은 fMLP가 없는 블랭크 이중물의 평균의 백분율로서 계산하였다. 도 11에 도시된 바와 같이, P3028은 보이덴 챔버의 막을 가로지르는 면역 세포 이동의 강력한 억제제이다 (p<0.002). 건강한 대조군 샘플 (N=6)에 대한 이동은 도 11에서 어두운 막대 (좌측)를 사용하여 예시되고, 반면에 암 환자 (N= 3)는 밝은 막대 (우측)로 도시되어 있다. 도 11에서, 오차 막대: 95% CI. P3028은 건강한 세포 및 암 환자 둘 다의 PBMC의 이동을 감소시켰다.

실시예 6: IL-2 유도된 증식에 대한 P3028의 효과의 추가적 특징화

P3028의 C 및 N-말단 부분을 합성하고, 개별적으로 및 조합으로 분석하였다. P3028의 이들 두 부분의 단독 또는 조합의 억제 활성은 매우 약하고 (도 12 참조), 생체외 인간 모델에서 IL-2 유도된 증식에 대한 P3028의 효과를 억제하지 않는다 (도 13 참조). 도 12는 전장 P3028의 효과와 비교하여, IL-2 유도된 증식에 대한 P3028의 C-말단 (P3218) (서열 187) 및 N-말단 (P3325) (서열 186) 부분의 효과를 예시한다. 1개의 대표적인 실험이 도시되어 있다. 도 13은 IL-2 유도된 증식에 대한 P3028의 억제 효과가 P3028의 C-말단 (P3218) 및 N-말단 (P3325) 부분의 단독 또는 조합에 의해 중화되지는 않는다는 것을 예시한다.

실시예 7: LFA-1에 대한 P3028의 결합

PBMC 상의 β2-인테그린의 존재는 면역세포화학적 염색에 의해 입증하였다. 암 환자 혈청에서 β2-인테그린에 대해 지시된 모노클로날 항체의 결합을 방해하는 인자의 발생은 PBMC 상의 β2-인테그린의 염색에 의해 분석하였다. 표준 면역조직화학적 염색 절차는 아세톤 고정, 차단을 위한 10% 인간 AB-혈청, 항-LFA-1 항체와의 인큐베이션을 사용한다. PBMC를 상기 기재된 바와 같이 분리하고, 슬라이드당 5 x 10⁴개 세포로 7분 동안 1000 RPM의 샨돈 시토스핀(Shandon Cytospin) (샨돈 사이언티픽 리미티드(Shandon Scientific Ltd), 영국)에서 예비-세정된 현미경 슬라이드 상에스 즉시 스핀 다운시켰다. 슬라이드를 실온에서 밤새 건조하도록 두고, 그 후에 파라필름으로 랩핑하고, 70℃에서 보관하였다. 사용 직전에, 시토스핀을 해동시키고, 실온에서 5분 동안 아세톤으로 고정시켰다. 시토스핀을 염색하기 전에 먼저 알부민 펩티드 (40 μg/ml)가 있는 또는 없는 10% 정상 인간 AB-혈청 또는 암 환자로부터의 혈청으로 1시간 동안 차단시켰다. 1 μg/ml (PBMC)의 트리스 완충 염수 (TBS, pH 7.6) 중에 희석된 모노클로날 마우스 항-인간 CD11a (BD 바이오사이언시스)로 이루어진 1차 항체를 첨가하였다. 슬라이드를 30분 동안 인큐베이션한 다음, TBS 중에서 세척한 후에 엔비전(Envision)-알칼리성 포스파타제 (다코 노르덴 A/S(Dako Norden A/S), 덴마크) 중에서 세척하거나 또는 대안적으로 울트라비전-알칼리성 포스파타제 (랩 비전 코포레이션)에서 30분 동안 세척하였다. TBS 중에서의 추가의 세척 후에, 슬라이드를 내인성 알칼리성 포스파타제 활성을 차단시키기 위한 패스트 레드 TR 염 (시그마), 나프톨 AS-MX (시그마) 및 5 mM 레바미솔 (시그마)로 이루어진 알칼리성 포스파타제 기질에서 20분 동안 인큐베이션한 후에 TBS 중에서 세척하였다. 이어서, 메이어 헤마톡실린에서 1분 동안 대조염색하고, 글리세르겔 (다코 노르덴 A/S)에 탑재하였다. 부적절한 항원 (아스페르길루스 니거 글루코스 옥시다제, 다코 노르덴 A/S)에 대한 모노클로날 마우스 IgG1을 음성 대조군 샘플로서 사용하였다. 모든 인큐베이션을 습윤 챔버에서 실온에서 수행하였다.

AB 혈청에 첨가된 펩티드와의 예비-인큐베이션은 첨가된 펩티드가 없거나 (도 15A 참조) 또한 P3028이 첨가된 경우였다 (도 15B 참조). 주목할만하게, 이들 실험에 사용된 항-LFA-1 항체는 IL-2 유도된 증식의 강력한 억제제였다.

도 14에 도시된 바와 같이, 이어서 β2-인테그린 차단 인자의 존재는, LFA-1에 대한 강한 염색 (3)을 보여주는 대조군 혈청 샘플과 예비-인큐베이션된 제제와 비교하여 (도 14A 참조), 암 환자 혈청과의 인큐베이션 후에 이들 세포의 감소된 염색성 (5)으로 입증하였다 (도 14B 참조).

도 15에 도시된 바와 같이, 암 환자 혈청에 대해 기재된 결과와 유사하게, P3028을 사용한 처리는 단핵 혈액 세포의 LFA-1에 대한 LFA-1 항체의 결합을 조절할 수 있다. 도 15는 P3028에 의한, 단핵 혈액 세포에 대한 항-LFA-1 mAb의 결합의 억제를 예시한다. LFA-1에 대한 강한 염색 (3)은 펩티드가 첨가되지 않은 세포에서 관찰되었고 (도 15A 참조), 반면에 LFA-1에 대한 약한 염색 (5)은 P3028이 첨가된 세포에서 관찰되었다 (도 15B 참조).

P3028 구조물에 의한 LFA-1의 차단을 추가로 입증하기 위해, 건강한 대조군 샘플 및 암 환자로부터의 PBMC 상의 상기 인테그린의 염색을 비교하였다. 도 16은 건강한 대조군 샘플로부터의 PBMC (도 16A 참조), 및 P3028에 대해 지시된 항체를 사용한 처리 전의 암 환자로부터의 PBMC (도 16B 참조) 및 상기 처리 후의 암 환자로부터의 PBMC (도 16C 참조) 상에서의 LFA-1의 염색을 예시한다. 도 16A에 도시된 바와 같이, 분명한 막 염색 (3)은 약한 염색 (5)을 나타낸 진행성 암을 가진 환자로부터의 PBMC와 달리 건강한 대조군 샘플로부터의 PBMC 상에서 발견되었다. 그러나, 이 환자로부터의 PBMC를 24시간 동안 P3028 구조물에 대해 지시된 항체와 인큐베이션하였을 때, 막 염색이 보였으며 (3), 이는 항체가 P3028-구조물에 결합하여 LFA-1를 비차단시켰다는 것을 나타낸다 (도 16C 참조)

유사하게, 도 17에 도시된 바와 같이, 건강한 대조군 샘플로부터의 PBMC와 P3028 또는 암 환자로부터의 혈청과의 인큐베이션은 LFA-1의 막 염색을 차단시켰다. 도 17은 항-LFA-1 항체에 의한 단핵 혈액 세포의 염색 (3) (A)이 P3028에 의해 차단되거나 (5) (B) 또는 암 환자 혈청에 의해 차단된다는 것 (5) (C)을 예시한다.

실시예 8: IL-2 수용체의 α-쇄 (CD25)에 대한 P3028의 결합

P3028이 IL-2에 대한 증식 반응을 현저하게 억제하기 때문에, IL-2의 그의 수용체 CD25에의 결합에 대한 P3028의 효과를 연구하였다. CD25 및 IgG의 Fc-부분의 융합 단백질을 단백질 G 코팅된 마이크로플레이트 / ELISA 플레이트에 결합시키고, 플레이트를 P3028의 존재 또는 부재 하에 비오티닐화 IL-2와 함께 인큐베이션하였다. 도 18-b는 비오티닐화 IL-2의 희석에 대한 이 ELISA 분석의 결과를 하기와 같이 예시한다: (마름모형 ◆) 1:300, (사각형 ■) 1:600, (삼각형 ▲; 도 18b 참조) 비오티닐화 IL-2 부재. rhuIL-2R 알파에 대한 비오티닐화 IL-2의 결합은 P3028의 양을 증가시킴으로써 증가되었다. 놀랍게도, CD25에 대한 IL-2의 결합은 P3028에 의해 증진되었으며, 이는 IL-2, CD25 및 P3028 사이의 3-부분 상호작용을 나타낸다 (도 18-b 참조). CD25에 대한 IL-2의 결합이 증진될지라도, P3028이 IL-2 유도된 증식의 강력한 억제제이므로, 고친화도 수용체 및/또는 신호 전달의 적절한 조립이 차단된다.

컴퓨터 보조 분자 모델링을 사용하여 P3028이 IL-2 결합 부위에서 CD25에 결합한다는 것이 입증되었다 (도 19 참조). IL-2에 결합된 IL-2 수용체의 결정 구조는 관련 기술분야에 공지되어 있고 (문헌 [Wang et al., Science 2005, 310(5751): 1159-1163, 및 Stauber et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2006, 103(8): 2788-2793] (이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨) 참조), P3028의 결합은 그에 따라 모델링되었다. 도 19에서, IL-2 결합 부위 (194) (B)에서 P3028 (192)에 결합하는 IL-2 수용체의 α-쇄 (CD25) (190) (A)가 도시되어 있다. IL-2 (196)이 또한 도시되어 있다.

실시예 9: P3028에 결합하는 항체

알부민 P3028에 대해 지시된 토끼 항혈청을 생성하였다. P3028은 N-말단에 시스테인을 첨가한 다음 운반체 단백질로서 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH)과 접합시켜 합성하였다. 폴리클로날 항혈청은 KLH-접합 P3028 및 프로인트(Freund) 아주반트로 토끼를 반복 면역화시켜 생성하였다. 일부 실험을 위해, 항혈청을 P3028-접합 울트라링크(Ultralink) 아이오도아세틸 겔 (피어스 바이오테크놀로지 인크.(Pierce Biotechnology Inc.)) 상의 크로마토그래피에 의해 친화도 정제하였다. 세포 배양 실험을 위해, RPMI 1640 더치 변형 (깁코, 인비트로젠 아베, 스웨덴 스톡홀름)에 대한 완충제 교환을 PD-10 세파덱스 칼럼 (아머샴 바이오사이언시스(Amersham Biosciences), 스웨덴 웁살라) 상에서 계대시킨 후에 0.22 μm 밀렉스(Millex) 시린지 필터 (밀리포어 캄파니(Millipore Co.), 미국 매사추세츠주) 상에서 필터 멸균하여 수행하였다. 토끼 면역화 및 항혈청의 정제를 아그리세라 아베(Agrisera AB) (스웨덴)에 의해 수행하였다.

2마리의 상이한 토끼로부터의 두 항혈청 R 및 L을 인간 혈청 및 변성 인간 혈청 알부민 (dHSA)에 결합하는 그의 능력에 대해 시험하였다. 치료 목적을 위해 상업적으로 입수가능한 인간 혈청 알부민을 시험하고, 바이러스를 없애기 위해 10회 가열하였다. 웰을 P3028, dHSA, 또는 변성 절차를 제외하고는 변성 HSA와 같이 제조된, HSA 처리된 (변성되지 않음, 그러나 10회 가열함) 대조군 샘플로 코팅하였다. 도 20에 도시된 바와 같이, 알부민 P3028로 면역화시킨 2마리의 토끼로부터의 항혈청 (면역전 혈청이 아님)은 P3028 (204), dHSA (206)로 코팅된 플레이트에 결합하고, HSA 처리된 대조군 샘플 (208)에는 보다 적은 정도로 결합한다. 코팅이 없는 웰 (202)에 대해서는 실질적 결합이 검출되지 않았다. 따라서, 알부민 P3028에 대해 지시된 토끼 항혈청은 dHSA에 결합하고, HSA 대조군 샘플에는 보다 적은 정도로 결합한다.

P3028 단편에 대한 토끼 항-P3028 혈청의 결합은 경쟁 ELISA 검정을 사용하여 검정하였다. ELISA 시약 희석제 중에 1/1000 000로 희석된 토끼 항혈청을 지시된 농도의 펩티드와 함께 실온에서 1시간 동안 예비-인큐베이션하였다. 이어서, 100 μl의 단독 모노클로날 항체, 또는 대안적으로, 펩티드와 혼합된 모노클로날 항체를 P3028 코팅된 웰에 첨가하고, ELISA를 수행하였다. P3028로 코팅된 웰에 대한 토끼 항-P3028 혈청 L의 결합의 억제를 알부민 펩티드 2607 (서열 192), 3218 (P3028의 C 말단) (서열 187), 3325 (P3028의 N 말단) (서열 186) 및 전장 P3028 (서열 185)에 대해 결정하였다. E5K 구조물을 함유하는 펩티드 2607을 음성 대조군 샘플로서 사용하였다. 도 21에 도시된 바와 같이, 이들 혈청 항체는 P3028의 3325 단편에 우선적으로 결합하지만 3218 단편에는 결합하지 않는다. 유사한 결과가 또한 친화도 정제된 항체에서 얻어진다.

IL-2에 대한 증식 반응에 대한, P3028에 대해 지시된 친화도 정제된 항체의 효과를 면역억제된 암 환자 및 정상 대조군 샘플로부터의 PBMC를 사용하여 생체외 모델에서 연구하였다. 3028에 특이적인 친화도 정제된 토끼 항체의 면역조절 효과를 시험하기 위한 배양은 하기 예외 하에서 IL-2 유도된 증식에 대해 상기 기재된 바와 같이 수행하였다; 2% HSA를 세척 배지 및 PBMC 현탁 배지로부터 생략시켰다. 혈청 함유 배양 배지 (100 μl/웰)를 20 μg/ml의 토끼 항체와 30분 동안 실온에서 예비-인큐베이션한 후에 100 μl PBMC 현탁액을 배양 웰에 첨가하였다.

P21은 신세포 암종을 가졌고, p26, p28 및 p29는 악성 흑색종을 가졌다. 도 22에 도시된 바와 같이, P3028에 대한 친화도-정제된 토끼 항체는 면역억제된 암 환자에서 IL-2에 대한 증식 반응의 억제를 극복하였다 (도 22A). IL-2에 대한 정상 증식 반응을 갖는 정상 대조군 샘플에서, 이들 항체의 첨가의 효과는 보이지 않았다 (도 22B 참조) (항체: R., 암 환자, p = 0.0002, 대응표본 t-검정, 정규 변환 로그-값). 100,000 dpm 미만의 증식률을 갖는, 면역 반응성이 하향조절된 정상 대조군 샘플에서, 증식률은 암 환자로부터의 배양물에서의 상황과 유사하게 자극되었다.

폴리클로날 토끼 IgG를 대조군 샘플 배양물에 첨가하여, 이 모델에서 친화도 정제된 항체의 효과가 토끼 IgG의 비특이적 활성으로 인한 것이 아님을 확실히 하였다. 토끼 IgG는 단지 최소 활성을 가졌다. 항-P3028 항체의 특이성은, 이들 항체의 자극 효과가 그 자체로 억제 활성을 갖지 않는 소량의 P3028에 의해 중화되었으므로, 추가로 입증되었다. 자가 생체외 모델에서의 결과와 유사하게, IL-2에 대한 낮은 증식 반응을 갖는 사람으로부터의 혈청의 면역억제 활성은 항-P3028 항체를 배양물에 첨가함으로써 극복되었다.

실시예 10: P3028에 결합하는 펩티드

PBMC 상의 LFA-1의 α-쇄인 CD11a의 염색에 대한 암 환자 혈청 및 합성 펩티드 P3028의 효과를 연구함으로써 얻은 정보를 면역조절 펩티드 P3028의 잠재적 결합제 / 억제제의 구조물을 설계하기 위해 사용하였다. 사용된 특정한 모노클로날 마우스 항체의 에피토프 HI 111을 CD11a의 잔기 249-300에 맵핑하였다 (Ma Q, et al., J Biol Chem. 2002;277:10638-41). 하전된 소수성 아미노산 서열의 상보성을 기반으로, P3028 펩티드에 결합하는 제1 후보를 설계하였다. 이어서, 이 서열은 모든 19개의 L-아미노산에 대해 각 아미노산을 치환시킨 후보 펩티드를 합성하고 그의 결합 효능을 시험함으로써 최적화하였다.

P3028 서열/구조물의 세 후보 펩티드 억제제를 확인하고, 용액 중 그의 차단 능력을 시험하였다. P3028의 잠재적 펩티드 억제제를 칩 상에 합성하였다. 선형 및/또는 CLIPS 펩티드를 표준 Fmoc-화학을 사용하여 표적 단백질의 아미노산 서열을 기반으로 합성하고, 트리플루오르산과 스캐빈저를 사용하여 사용하고 탈보호시켰다. 구속성 펩티드는 입체형태적 에피토프를 재구축하기 위해 스캐폴드 상의 화학적 연결 펩티드 (CLIPS) 기술을 사용하여 화학적 스캐폴드 상에 합성하였다 (Timmerman et al. (2007)). 예를 들어, 알파, 알파'-디브로모크실렌으로 처리하여 고리화시킨, 디시스테인을 함유하는 단일 루프형 펩티드를 합성하였으며, 루프의 크기는 가변 간격으로 시스테인 잔기를 도입함으로써 변경시킨다. 새로이 도입된 시스테인 이외에 다른 시스테인이 존재하는 경우에, 알라닌에 의해 대체하였다. 펩티드 중 다중 시스테인의 측쇄는 CLIPS 주형의 0.5 mM 용액, 예컨대 중탄산암모늄 중 1,3-비스 (브로모메틸) 벤젠 (20 mM, pH 7.9)/아세토니트릴 (1:1(v/v))을 사용하여 크레딧 카드 포맷의 폴리프로필렌 PEPSCAN 카드 상으로 반응시킴으로써 (455개 펩티드 형식/카드) CLIPS 주형에 커플링시킨다. 카드를 용액 중에 완전히 덮이도록 하면서 30 내지 60분 동안 용액 중에서 서서히 진탕하였다. 최종적으로, 카드를 과량의 H₂O로 광범위하게 세척하고, PBS (pH 7.2) 중 1 퍼센트 SDS/0.1 퍼센트 베타-메르캅토에탄올을 함유하는 파괴-완충제 중에서 70℃에서 30분 동안 초음파처리한 후에, H₂O 중에서 추가의 45분 동안 초음파처리하였다. 각 펩티드에 대한 His-태그부착 P3028의 결합을 PEPSCAN-기반 ELISA에서 시험하였다. 공유적으로 연결된 펩티드를 함유하는 455-웰 크레딧 카드 포맷의 폴리프로필렌 카드를, 예를 들어 차단 용액, 예를 들어 PBS/1% 트윈 중 4% 말 혈청, 5% 오브알부민 (w/v) 중에 희석된 1 마이크로그램/mL로 이루어진 펩티드 용액과 함께 인큐베이션하였다. 세척 후에, 펩티드를 모노클로날 마우스 항-his 태그 항체 (1/1000, 노바젠(Novagen), 70796-3)와 함께 인큐베이션하고, 이어서 세척 후에, 토끼-항-마우스 항체 퍼옥시다제 접합체 (1/1000, 서던 바이오테크(Southern Biotech), 6175-05)와 함께 1시간 동안 25℃에서 인큐베이션하였다. 세척 후에, 퍼옥시다제 기질 2,2'-아지노-디-3-에틸벤즈티아졸린 술포네이트 (ABTS) 및 2 마이크로리터의 3 퍼센트 H₂O₂를 첨가하였다. 1시간 후에, 색 발현을 측정하였다. 색 발현은 전하-커플링 장치 (CCD) - 카메라 및 영상 처리 시스템으로 정량화하였다.

미가공 데이터 (미가공 데이터: 광학 밀도, 임의적 OD 유닛)는 CCD-카메라에 의해 얻은 광학 값이다. 값은 대부분 표준 96-웰 플레이트 ELISA-판독기의 1 내지 3과 유사한 로그 스케일 0 내지 3000의 범위이다. 먼저 CCD-카메라는 퍼옥시다제 착색 전에 카드의 사진을 만들고, 이어서 퍼옥시다제 착색 후에 다시 사진을 만든다. 이들 2개의 사진을 서로 차감하여 미가공 데이터로 칭해지는 데이터를 생성한다. 이것을 펩랩(Peplab)™ 데이터베이스로 카피한다. 이어서 값을 엑셀로 카피하고, 이 파일을 미가공 데이터 파일로 표지한다. 하나의 추적 조작이 허용된다. 때때로 웰은 기포를 함유하여 가양성 값을 생성하는데, 카드를 수동으로 조사하여 기포에 의해 야기된 임의의 값을 0으로 점수화한다.

도시된 바와 같이 위치 17, 22 및 26은 P3028 (PGE73 = His-태그-P3028)의 우수한 결합제를 함유하였다. 다이어그램에 나타난 바와 같이, 펩티드 SCF28 및 SCF29는 P3028 (PGE73)의 결합을 효율적으로 차단시키지만 SCF27은 그렇지 않다. 펩티드 SCF28 (서열 1)은 생물학적 인간 생체외 모델에서 시험을 허용하기에 충분히 우수한 용해도를 갖는다. 이 구조물을 기반으로, 펩티드 P28R (서열 2)을 개발하였다. 각 위치에 대해, PBS 완충제 중 펩티드 무첨가 (230), PBS 완충제 중 SCF027 검정 (232), PBS 완충제 + 10% DMSO 중 SCF029 검정 (234), PBS 완충제 + 10% DMSO 중 펩티드 무첨가 (236) 및 PBS 완충제 + 10% DMSO 중 SCF028 검정 (238)에 대한 데이터가 나타나 있다. 도 23의 막대 그래프에서, 각 검정을 나타내는 막대는 각 위치에 대해 동일하게 좌측에서 우측으로의 순서였다. 각 펩티드는, 검정에 존재하는 경우에, 0.5 mg/mL의 농도였다.

실시예 11: P3028과의 펩티드 상호작용

PBMC 상의 LFA-1의 알파-쇄인 CD11a (서열 248)의 염색에 대한 암 환자 혈청 및 합성 펩티드 P3028의 효과를 연구함으로써 얻은 정보를 면역억제 펩티드 P3028의 잠재적 결합제 / 억제제의 구조물을 설계하기 위해 사용하였다. 사용된 특정한 모노클로날 마우스 항체의 에피토프 HI111을 CD11a (서열 248)의 잔기 274-325에 맵핑하였다 (유니프로트(UniProt) 등록 코드 P20701; Ma Q, et al., J Biol Chem. 2002; 277: 10638-41). 하전된 소수성 아미노산 서열의 상보성을 기반으로 (도 31 참조), CD11a의 312-326을 포함하는 서열을 사용하여 P3028 펩티드에 결합하는 제1 후보를 설계하였다. 이것은 펩티드 KKL15 (서열 1)를 생성하였다.

펩티드 KKL15 (서열 1)는, 예를 들어 P3028에 상보적인 것처럼 보인다. 도 31에 도시된 바와 같이, 양으로 하전된 아미노산은 P3028의 음으로 하전된 아미노산과 상호작용하고, 소수성 아미노산은 상호작용을 증진시키는 소수성 접촉을 한다.

실시예 12: P3028에 결합하는 펩티드

펩티드 P28R의 구조물을 기반으로, P3028에 결합하는 추가의 펩티드를 확인하였다. 추가의 결합제는 펩티드 P28R의 결실, 말단절단 및/또는 아미노산 치환을 포함하였다. P3028에 대한 펩티드의 결합은 PEPSCAN 기술을 사용하여 검정하였다. PEPSCAN 기술 또는 "rampo" 검정은 생화학적 결합 검정이며, 그의 상세설명은 하기에 제공된다:

펩티드 마이크로어레이 스크리닝 기술을 사용하여 P3028 (서열 185)에 대한 P28R (서열 2) 및 P28R 변이체의 결합을 측정하였다. 이 기술에서 합성 펩티드의 라이브러리를 폴리프로필렌 마이크로어레이 칩 상에 합성하고 공유적으로 연결시켰다. 선형 펩티드는 링커로서 헥사메틸렌디아민 (HMDA)을 사용하는 표준 Fmoc-화학을 사용하여 문헌 [Timmerman et al., 2004]에 기재된 바와 같이 크레딧 카드 포맷의 폴리프로필렌 카드 상에 합성하고 (455개 펩티드 형식/카드), 트리플루오로아세트산 (TFA)과 스캐빈저를 사용하여 탈보호시켰다.

각 펩티드에 대한 His-태그부착 P3028의 결합을 ELISA 검정에서 시험하였다. 공유적으로 연결된 펩티드를 함유하는 455-웰 크레딧 카드 포맷의 폴리프로필렌 카드를 차단 용액 (PBS/1% 트윈 중 4% 말 혈청, 5% 오브알부민 (w/v)) 중에 희석된 0.5 μg/mL로 이루어진 His-태그부착 P3028 펩티드 (PGE73) 용액과 함께 인큐베이션하였다. 세척 후에, 펩티드를 모노클로날 마우스 항-His 태그 항체 (노바젠, 70796-3, 인큐베이션 완충제 중에 1/1000으로 희석됨)와 함께 인큐베이션하고, 이어서 세척 후에, 토끼-항-마우스 항체 퍼옥시다제 (Rampo) 접합체 (서던 바이오테크, 6175-05, 1/1000로 희석됨)와 함께 1시간 동안 25℃에서 인큐베이션하였다. 세척 후에, 퍼옥시다제 기질 2,2'-아진-디-3-에틸벤즈티아졸린 술포네이트 (ABTS) 및 2 μL의 3% H₂O₂를 첨가하였다. mAb의 결합 능력은 405 nm에서의 색 발현 (광학 밀도, OD405)으로 측정하였다. 색 발현은 전하-커플링 장치 (CCD) - 카메라 및 영상 처리 시스템으로 정량화하였다.

CCD-카메라에 의해 얻은 OD405-값을 미가공 데이터 값 ("rampo 값", "rampo 유닛" 또는 "rampo 점수")으로 간주하였다. 값은 대부분 표준 96-웰 플레이트 ELISA-판독기의 1 내지 3과 유사한 로그 스케일 0 내지 3000의 범위였다. 먼저 CCD-카메라는 퍼옥시다제 착색 전에 카드의 사진을 만들고, 이어서 퍼옥시다제 착색 후에 다시 사진을 만들었다. 이들 2개의 사진을 서로 차감하여 미가공 데이터로 간주되는 데이터를 생성하였다. 이들 값을 엑셀로 카피하고, 미가공 데이터 파일로 표지하였다. 하나의 추적 조작이 허용되었다. 때때로 웰은 기포를 함유하여 가양성 값을 생성할 수 있다. 카드의 수동 조사가 기포를 검출하는 경우에, 값은 그 웰에 대해 0으로 설정된다.

펩티드 P3028에의 결합에 대해 시험된 펩티드의 라이브러리는 펩티드 P28R (서열 2)의 각 위치에 대해 모든 치환을 포함하였다 (즉, 각 위치에 대한 19개 치환). 결합 실험의 결과는 도 27, 28, 29 및 30, 및 표 5.1에 제시되어 있다. Rampo 점수는 P28R의 16개 위치 각각에서 모든 치환에 대해 102 내지 1190의 범위였다. P28R은 262 내지 460의 범위의 rampo 값을 가졌으며, 평균 값은 370이었다. 도 28에 도시된 바와 같이, 펩티드 P28R (서열 2)의 31개 단일-아미노산 치환은 500 초과의 rampo 점수를 가졌다. 이들 31개 치환된 펩티드는 서열 3-31을 포함하고, 표 6.1에 제시되어 있다. 유의하게 더 높은 값이 위치 13에서의 치환 M, Q, H, N (각각 서열 22 내지 25)에서 관찰되었으며, 모두 800 초과의 값을 가졌다. 추가로, 위치 7에서의 M 및 S (각각 서열 9 및 10), 및 위치 11에서의 Q 및 M (각각 서열 15 및 16)은 모두 700 초과의 rampo 값을 가졌다.

<표 6.1> 500 초과의 rampo 점수를 갖는, P3028에 결합하는 펩티드

P28R의 각 위치에 대해, L-아미노산 치환을 함유하는 19개의 상이한 펩티드 군의 rampo 점수를, 그 군에 대한 대조군 샘플 P28R 펩티드 (서열 2)의 rampo 점수와 비교하였다. P28R보다 크거나 또는 그와 실질적으로 동등한 rampo 점수를 갖는 단일-아미노산 치환을 확인하였다. 본원에 사용된, "P28R과 실질적으로 동등한" rampo 점수는 P28R의 rampo 점수의 적어도 98%인 rampo 점수이다. 따라서, P3028에 대한 동등한 또는 보다 우수한 결합을 갖는 P28R의 변이체를 확인하였다.

예를 들어, P28R (서열 2)의 위치 8에서는 V이다. 대조군 샘플 P28R 펩티드는 308의 rampo 점수를 가졌고, 위치 8에 F, G, L, P 또는 R을 갖는 펩티드 (각각 서열 326-330)는 각각 302 초과 (308의 98%)의 rampo 점수를 가졌다. 그 군에 대한 P28R 대조군 샘플 펩티드의 점수 이상의 점수를 갖는 P28R의 단일 아미노산 치환은 표 6.2에 제시되어 있다.

<표 6.2> P28R의 rampo 점수보다 크거나 또는 그와 실질적으로 동등한 rampo 점수를 갖는, P3028에 결합하는 펩티드

표 6.2에서 P28R의 위치 치환 (서열 268-393)은 도 32에 요약되어 있다. 위치 2 (K), 9 (K) 및 15 (E)는 P3028에 여전히 결합하면서 비교적 소수의 치환을 허용한다는 것을 주목한다. P28R의 위치 2, 9 및/또는 15에서의 잔기의 치환은 비치환된 P28R보다 실질적으로 더 낮은 P3028에 대한 결합 (rampo 점수에 의해 측정된 바와 같음)을 유발할 수 있다. 따라서, 이들 3개의 위치가 신호 전달을 조절하는 것처럼 보이는 것으로 본원에서 고려된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 이들 위치의 신호 전달 조절 활성이 면역조절 펩티드의 억제제를 설계하는데 유용할 수 있다는 것을 인지할 것이다.

PEPSCAN 분석을 또한 펩티드 P28R의 말단절단 및 내부 결실에 대해 수행하였다. KKLDTFFVKLSLFTER (서열 2); KKLDTFFVKLSLFTE (서열 34); KKLDTFFVKLSLFT (서열 35); KKLDTFFVKLSLF (서열 36); KKLDTFFVKLSL (서열 37); KKLDTFFVKLS (서열 38); KKLDTFFVKL (서열 39); KKLDTFFVK (서열 40); KKLDTFFV (서열 41); KKLDTFF (서열 42); KKLDTF (서열 43); KKLDT (서열 44); KKLD (서열 45); KLDTFFVKLSLFTER (서열 46); LDTFFVKLSLFTER (서열 47); DTFFVKLSLFTER (서열 48); TFFVKLSLFTER (서열 49); FFVKLSLFTER (서열 50); FVKLSLFTER (서열:51); VKLSLFTER (서열 52); KLSLFTER (서열 53); LSLFTER (서열 54); SLFTER (서열 55); LFTER (서열 56); FTER (서열 57); KLDTFFVKLSLFTE (서열 58); LDTFFVKLSLFT (서열 59); DTFFVKLSLF (서열 60); TFFVKLSL (서열 61); FFVKLS (서열 62); FVKL (서열 63)을 갖는 펩티드에 대한 rampo 점수가 도 29에 도시되어 있다.

KKLDTFFVKLSLFTER (서열 2); KLDTFFVKLSLFTER (서열 46); KKLTFFVKLSLFTER (서열 64); KKLDTFVKLSLFTER (서열 65); KKLDTFFKLSLFTER (서열 66); KKLDTFFVKSLFTER (서열 67); KKLDTFFVKLSFTER (서열 68); KLDTFFVKLSLFER (서열 69); KLDTFFVKLSLFTE (서열 58); LDTFFVKLSLFTER (서열 47); KKTFFVKLSLFTER (서열 70); KKLDFVKLSLFTER (서열 71); KKLDTEKLSLFTER (서열 72); KKLDTFFVSLFTER (서열:73); KKLDTFFVKLFTER (서열 74); KKLDTFFVKLSLER (서열 75); LDTFFVKLSLFT (서열 59); DTFFVKLSLFTER (서열 48); KKFFVKLSLFTER (서열 76); KKLDVKLSLFTER (서열 77); KKLDTFLSLFTER (서열 78); KKLDTFFVLFTER (서열 79); KKLDTFFVKLTER (서열 80); KKLDTFFVKLSLR (서열 81); KFFVKLSLFTER (서열 82); KKLVKLSLFTER (서열 83); KKLDTLSLFTER (서열 84); KKLDTFFLFTER (서열 85); KKLDTFFVKTER (서열 86); KKLDTFFVKLSR (서열 87); KFVKLSLFTER (서열 88); KKLKLSLFTER (서열 89); KKLDTSLFTER (서열:90); KKLDTFFFTER (서열 91); KKLDTFFVKER (서열 92); KKLDTFFVKLS (서열 38); GKLDTFFVKLSLFTER (서열 93); KKGDTFFVKLSLFTER (서열 94); KKLDGFFVKLSLFTER (서열 95); KKLDTFGVKLSLFTER (서열 96); KKLDTFFVGLSLFTER (서열 97); KKLDTFFVGLSLFTER (서열 98); KKLDTFFVKLGLFTER (서열 99); KKLDTFFVKLSLGTER (서열 100); KKLDTFFVKLSLFTGR (서열 101)을 갖는 펩티드에 대한 rampo 점수가 도 30에 도시되어 있다.

도 30에 도시된 바와 같이, 서열 64, 65, 68 및 76의 펩티드를 비롯한 펩티드 P28R의 여러 결실 및 말단절단은 펩티드 P28R에 필적하는 또는 그 보다 높은 rampo 점수를 갖는다. 추가로, 서열 94, 95, 96, 98 및 99의 펩티드를 비롯한 여러 글리신 치환은 P28R에 필적하는 rampo 점수를 갖는다. P28R의 N 말단으로부터 적어도 8개까지의 아미노산의 결실 (서열 46 내지 53)은 rampo 점수에 의해 측정된 바와 같이 P3028에 대한 고친화도를 보유하였다. P28R의 C 말단 R의 결실 (서열 34)은 P 3028에 대한 고친화도를 보유하였다.

실시예 13: 림프구 활성화에 대한 P3028의 저분자량 억제제의 효과

P3028의 억제제인 P28R의 분석을 인간 생체외 모델에서 수행하였다. MTS 또는 CFSE 기술을 사용하여 측정된 PBMC에 대한 자극 활성을 7개의 건강한 대조군 샘플 및 7명의 다양한 진단의 암 환자에서 연구하였다. 흥미롭게도, 다른 유형의 자극의 부재 하에서도 P28R은 7명의 암 환자 중 6명에서 유의한 자극 활성을 가졌고, 반면에 대조군 샘플로부터의 PBMC는 단지 약한 자극을 보이거나 자극을 보이지 않았다.

도 24에 도시된 바와 같이, P28R의 자극 활성은 IL-2에 대한 증식 반응을 억제하였다. PBMC를 IL-2와 함께 7일 동안 배양하고, 증식률을 BrdU의 혼입으로서 결정하였다. 각 막대는 삼중선의 평균 값을 나타낸다. IL-2에 대한 암 환자로부터의 PBMC의 불량한 증식 반응으로서 결정된 암 관련 면역억제를 역전시키기 위한 P3028에 대해 지시된 항체의 효능의 연구 (도 22 참조)와 유사하게, 억제된 IL-2 유도된 증식의 역전에 대한 저분자량 억제제 P28R의 효능을 조사하였다. 4명의 상이한 처리 나이브 환자로부터의 PBMC의 배양의 결과가 도 24에 도시되어 있다. 첨가된 P28R의 각 양에 대해, IL-2 자극된 세포 (240)는 좌측에 도시되고, 비자극된 세포 (242)는 우측에 도시된다. 낮은 초기 증식을 갖는 PBMC (도 24a 및 24b 참조)는 P28R에 의해 현저하게 자극되었고, 반면에 높은 초기 증식은 약물에 의해 본질적으로 영향을 받지 않았다 (도 24c 및 24d 참조). 예상한 대로, 전신 면역억제는 모든 환자에서 존재하지 않았고, 단지 면역억제를 갖는 환자에서만 자극되었다.

실시예 14: 종양 세포에 대한 P3028의 저분자량 억제제의 결합

본원에서 입증된 바와 같이, P3028 구조물이 종양에 존재한다. P3028의 비오티닐화 억제제인 P28R을 사용하여 종양 조직에서 3028 구조물의 분포 및 억제제의 결합을 추가로 연구하였다. 3개의 유방암, 2개의 신세포 암종 및 4개의 악성 흑색종을 분석하였다. 모든 조사된 종양은 억제제에 결합하였다. 염색된 유방암의 예가 도 25에 도시되고, 강한 양성 반응 (7)은 이 종양에서 억제 3028-구조물의 존재를 나타내는 것으로 보인다. P3028-구조물이 림프구 이동뿐만 아니라 세포독성 활성을 억제하기 때문에 (상기 기재됨), 종양 영역을 양성 염색하는 것에 대한 면역 매개 공격은 노출된 P3028이 P28R에 결합함으로써 차단되지 않는 한 효율적으로 억제될 수 있다. 그러나, 림프구는 P3028 구조물이 이들 세포 상의 LFA-1에 결합함으로써 차단되었기 때문에 이 절차에서 염색되지 않았다.

실시예 15: P28R에 의한 LFA-1 수용체 비차단

본원에 기재된 바와 같이, β2-인테그린은 면역계의 정상 기능에서 역할을 한다. β2-인테그린 LFA-1에 대한 내인성 억제제 P3028의 결합을 기반으로 한 면역억제 메카니즘이 또한 본원에 기재된다. 실시예 7에 기재된 바와 같이, 암 환자로부터의 PBMC의 막 염색은 정상 대조군 샘플과 비교하여 현저하게 감소하였다. 그러나, LFA-1의 노출은 암 환자로부터의 PBMC를 억제제 P3028에 대해 지시된 항체와 함께 인큐베이션함으로써 증진될 수 있다 (실시예 7 및 도 16 참조). LFA-1에 대한 염색은 실시예 7의 항-LFA-1 항체 및 2차 항체 (울트라비전)를 사용하여 수행한 후에, 패스트 레드를 사용하여 발현시켰다. 신선한 동결 종양 절편을 임의의 고정 없이 LFA-1에 대한 염색 전에 약물 후보인 P28R과 함께 4-20시간 동안 인큐베이션하였다 (실시예 26B 참조). 비교를 위해, 대조군 샘플 종양 절편을 단지 포스페이트 완충 염수와 함께 인큐베이션하였다 (도 26A 참조).

도 26에 도시된 바와 같이, P28R은 LFA-1을 비차단시켜, 이들 세포의 이동 및 세포독성 활성을 가능하게 하는 LFA-1의 기능적 발현을 현저하게 증진시켰다. P28R-처리된 세포에서 강한 LFA-1 염색 (3)은 비처리 세포에서 약한 LFA-1 염색 (5)과 대조된다. 이들 결과는 LFA-1이 P28R에 의한 P3028 구조물의 제거에 비차단되었음을 제시한다.

실시예 16: 암 환자에게의 나노투여를 통한 면역조절 펩티드 억제제의 전달

P3028 구조물의 존재로 인한 면역억제 및 피하 흑색종 전이를 갖는 암 환자를 선택하였다. 미세 바늘 생검을 사용하여 염증성 침윤물을 결정한 후에 이들 전이 중 하나에 마이크로-투석 카테터를 삽입하였다. 기준선: 염증성 침윤물, 시토카인 프로파일 및 P3028 구조물의 농도를 P3028-특이적 면역조절 펩티드 억제제의 주입 전에 결정하였다. 이어서, 시토카인 프로파일 및 P3028 구조물의 농도의 변화를 주입 동안 및 주입 후에 결정하였다. 주입은 24 또는 48시간 동안 계속할 것이고, 염증성 침윤물 및 종양 퇴행성 변화를 연구하기 위해 마이크로-투석 카테터에 의해 공급된 영역을 주입 즉시 및 이어서 1 및 2주 후에 절제하였다. 예를 들어, 면역조절 펩티드 억제제의 투여는, 예를 들어 LFA-1을 탈차단시키고/거나, P3028 구조물에 결합시키고/거나, 면역 세포 동원을 증진시킴으로써 측정된 바와 같이, 암 환자의 면역억제를 감소시킬 것으로 예상된다.

실시예 17: 세포 표면 분자의 알부민 펩티드 결합제

세포 표면 분자에 결합하는 알부민 단편

미국 공개 번호 2011/0262470 (이로써 전문에 본원에 명백하게 참조로 포함됨)에 교시된 바와 같이, 일부 알부민 단편은 세포 표면 분자에 결합할 수 있다. 미국 공개 번호 2011/0262470은 인공 세포 표면 (ACS) 칼럼에 결합하는 혈청 펩티드의 확인을 보고하였다. ACS 칼럼은 하기와 같이 제조하였다:

먼저, 비오티닐화 세포 표면 단백질을 제조하였다. 각각 450 ml 혈액으로부터 생성된 백혈구 연층을 4명의 건강한 공여자로부터 수집하였다. 적혈구는 0.9% NaCl 중 2% 덱스트란 T500 용액 (아머샴 파마시아 바이오테크 아베, 스웨덴 웁살라)에서의 침강에 의해 제거하였다. 이어서, 단핵 세포 (PBMC)를 피콜-파크 플러스 (지이 헬스케어 바이오사이언스 아베, 스웨덴) 밀도 구배 원심분리에 의해 단리하였다. 이어서, PBMC를 Ca 및 Mg를 함유하는 포스페이트 완충 염수 (PBS) (깁코) 중에 10 x 10⁶개/ml의 농도로 현탁시켰다. EZ 링크 술포-NHS-비오틴 (피어스 미국)을 최종 농도 0.2 mg/ml로 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 실온에서 진탕기 상에서 인큐베이션하였다. 이어서, 과량의 비오틴은 PBS 중에 PBMC를 세척함으로써 제거하였다. 이어서, 비오티닐화 PBMC는 2 x 10⁷개 펠릿형 세포당 1.0 ml 빙냉 용해 완충제 (50 mM 트리스-HCL, pH 7.5와 0.15 MNaCl, 5mM MgCl₂, 100 mM 옥틸 글루코시드 및 1 mM 페닐메틸술포닐 플루오라이드 함유)를 서서히 진탕하면서 첨가함으로써 용해시킨 다음, 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 파편을 10분 동안 4℃에서 5000xg로 원심분리하여 제거하고, 상청액을 모든 4명의 공여자로부터 수집 및 풀링하였다. 이어서, 용해물을 폴리프로필렌 플라스틱 튜브에 -70℃에서 보관하였다.

트립신-단편 dHSA에 의한 흡수를 연구하기 위해, 스트렙타비딘-세파로스에 커플링된 단핵 세포로부터의 비오티닐화 세포 표면 단백질을 갖는 친화도 칼럼을 하기와 같이 제조하였다: 용해 완충제 중 비오티닐화 세포 용해물 18 ml를 결합 완충제 (20 mM NaH₂P0₄, 0.15 M NaCl, pH 7.5) 중에 1/10로 희석하였다. 이 용해물 양은 36x10⁷개 단핵 세포에 상응한다. 그것을 1 ml 하이트랩 스트렙타비딘 HP 친화도 칼럼 (아머샴 바이오사이언시스)에 첨가하였다. 가능한 나머지 유리 비오틴을 차단시키기 위해, 0.1 M 글리신 (시그마) 5 ml를 칼럼에 첨가하였다. 이어서, 칼럼 상의 불포화 스트렙타비딘을 결합 완충제 중 150 ug 비오틴 (시그마)과 반응시켰다. 칼럼을 PBS로 주의깊게 세척하고, 사용시까지 4℃에서 0.1% NaN₃ 함유 PBS 중에 보관하였다.

ASP-N 단편화 dHSA의 흡수를 연구하기 위해, 스트렙타비딘-세파로스에 커플링된 단핵 세포로부터의 비오티닐화 세포 표면 단백질을 갖는 친화도 칼럼을 하기와 같이 제조하였다: 용해 완충제 중 비오티닐화 세포 용해물은 결합 완충제 (20 mM NaH₂P0₄, 0.15 M NaCl pH 7.5) 중 스펙트라포어(Spectrapore) 4 투석 튜빙 (스펙트럼 유럽(Spectrum Europe), 네덜란드 브레다)을 사용한 투석에 의해 완충제 교환이 수행되었다. 결합 완충제 중 비오티닐화 세포 용해물 27 ml (54 x 10⁷개 단핵 세포에 상응함)를 1.5 ml의 세척된 스트렙타비딘 세파로스 HP (아머샴 바이오사이언시스)에 첨가하였다. 가능한 나머지 유리 비오틴을 차단시키기 위해, 0.1 M 글리신 (시그마) 25 ml를 스트렙타비딘 세파로스에 첨가하였다. 이어서, 불포화 스트렙타비딘을 결합 완충제 중 225 ug 비오틴 (시그마)과 반응시켰다. 스트렙타비딘 세파로스를 PBS 중에서 주의깊게 세척하였다. 이어서, 스트렙타비딘 세파로스에 커플링된 비오티닐화 세포 용해물 1 ml를 빈 칼럼 (트리콘 엠프티 하이 퍼포먼스 칼럼(Tricorn Empty High Performance Column), 아머샴 바이오사이언스)에 팩킹하고, Ca²⁺ 및 Mg²⁺를 함유하는 포스페이트 완충 염수 (PBS) (깁코)로 세척하였다.

트립신 또는 ASP-N을 사용한 소화를 하기와 같이 수행하였다. 동결 건조된 dHSA (0.5 mg)를 10 mg의 서열분석 등급의 변형된 트립신 (프로메가 코포레이션(Promega Corporation), 위스콘신주) 또는 2 mg 엔도프로테이나제 ASP-N (시그마)을 함유하는 25 mM NH₄HCO₃ (pH 8) 중에 재구성하고, 밤새 37℃에서 인큐베이션하였다. 비단편화 알부민 및 효소를 제거하기 위해, 샘플을 아미콘 울트라(Amicon Ultra) 4 (mw 컷오프 5000) 또는 센트리플러스(Centriplus) (mw 컷오프 10000) 원심분리 필터 (밀리포어 아베(Millipore AB), 스웨덴 솔나)를 통해 초여과하였다. 효소 없이 단편화된 dHSA를 함유하는 여과물을 수집하고 Ca 및 Mg를 갖는 PBS (깁코)로 희석하였다.

dHSA를 트립신처리하고, 트립신처리 후에 수득된 펩티드의 혼합물을 ACS에 의해 흡착시켰다. 총 0.2 mg 단백질에 상응하는, PBS 중 효소-단편화 dHSA 2 ml를 ACS 칼럼 상에 통과시켰다. 통과액은 0.2 ml로 조금씩 수집함으로써, 흡착된 샘플의 허공 부피 및 희석을 고려하면서 수집하였다. 흡착되지 않은 대조군 샘플을 비롯한, 30 마이크로리터의 각 샘플을 스피드-백(Speed-Vac) 원심분리에서 건조시켰다. 결합 펩티드는 MALDI TOF 질량 분광측정법 기술을 사용하여 흡착 및 비흡착 펩티드 용액을 비교함으로써 확인하였다. 건조된 샘플을 0.1% TFA 10 ul 중에 재구성하였다. C18 역상 배지를 함유하는 집 팁(Zip Tip) 피펫 팁 (밀리포어, 미국)을 재구성된 샘플을 탈염시키는데 사용하였다. 질량 범위 700 - 3600 Da의 샘플의 분석을 위해, 각 집 팁 용리된 샘플 1 μl를 70% 아세토니트릴/0.3% 트리플루오로 아세트산 중 α-시아노-4-히드록시신남산 (0.02mg/ml)의 포화 용액 1 μl와 혼합하였다. 질량 범위 1500 - 9000 Da의 샘플의 분석을 위해, 각 집 팁 용리된 샘플 1 μl를 시나핀산 (3-메톡시-4-히드록시신남산) 1μl와 혼합하였다. 혼합물 1μl를 MALDI 플레이트 상에 스폿팅하고, MALDI-TOF MS (보이저-드 프로(Voyager-DE PRO), 어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems), 미국 캘리포니아주)를 사용하여 분석하였다. 생성된 스펙트럼의 질량 아이덴터티 검색은 MS-Fit를 사용하여 스위스프로트(SwissProt) 또는 NCBI 데이터베이스에서 수행하였다.

이들 펩티드는 표 7에 제시되어 있다.

<표 7> ACS에 결합하는 트립신-생성된 알부민 단편

알부민의 전체 펩티드 서열이 트립신 분해 후에 MALDI-TOF 기술을 사용하여 회수되지 않기 때문에, 및 면역 세포의 세포 표면 수용체에 결합하는 능력을 갖는 일부 서열이 트립신 처리에 의해 분해될 수 있기 때문에, dHSA를 또한 아스파라기나제 (ASN-N)에 의해 분해하고, 분해 후에 수득된 펩티드의 혼합물을 ACS에 의해 흡착시켰다. 결합 펩티드는 MALDI TOF ms 기술을 사용하여 흡착 및 비흡착 펩티드 용액을 비교함으로써 확인하였다. 이들 펩티드는 표 8에 제시되어 있다.

<표 8> ACS에 결합하는 ASP-N-생성된 알부민 단편

추가로, 표 9에 제시된 바와 같은 9종의 합성 알부민 펩티드를 합성하였다.

<표 9> 합성 알부민 펩티드

실시예 18: 세포 표면 분자의 알부민 펩티드 결합제

모노클로날 항체 mAb A는 면역조절 활성을 갖는 것으로 나타났다. mAb A에 의해 결합된 에피토프의 구조를 추가로 조사하였다. 간략하게, 알부민 단편을 항체와 함께 인큐베이션하고, 변성된 알부민에 특이적인 마우스 모노클로날 항체가 결합하는 인간 혈청 알부민 상의 가능한 부위 또는 부위들을 정의하기 위해 매트릭스-보조 레이저 탈착/이온화 비행 시간 질량 분광측정법 (MALDI-TOF ms)을 사용하였다. 하나의 접근법은 항체가 결합된 일부 트립신 펩티드가 분석에서 "숨겨지기" 때문에 MALDI에서 특징적 질량 스펙트럼을 생성하지 않을 것이라는 사실을 이용하였다. 또 다른 접근법은 항체가 결합된 단백질 상의 부위가 단백질분해로부터 보호된다는 사실을 이용한다.

정제된 인간 혈청 알부민 (HSA)을 우레아를 사용하여 변성시키고, DTT로 환원시키고, 알킬화하였다. 이어서, 변성된 HSA는 저농도 (0.02-2 ng/ml)의 트립신을 사용한 트립신 처리에 적용하였다. 그러나, 알부민에 대해 전형적인 펩티드 질량이 발견되지 않았으므로, MALDI를 사용하여 수득된 스펙트럼은 불만족스러웠다. 겔 전기영동을 기반으로 이 제제 (0.02 ng/ml의 트립신에 의해 소화됨)는 상당량의 소화되지 않은 알부민을 함유하는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 트립신 소화는 MALDI에 의한 단백질의 확인에 통상적으로 사용된 질량 스펙트럼을 수득하기 위해 보다 높은 농도 (5ug/ml)에서 계속하였다.

mAb A에 의해 결합된 결합된 알부민 단편을 확인하기 위해, 현재 완전히 절단된 알부민 용액의 일부를 mAb A와 함께 인큐베이션하였다. MALDI-TOF ms를 수행하고, mAb A의 존재 또는 부재 하에서 수득된 효소-처리된 변성 알부민의 스펙트럼을 비교하였다. mAb A와의 인큐베이션 후에 모인 14개의 알부민 (서열 231-244)은 부재하거나 또는 감소하였다. 이들 펩티드의 아미노산 서열은 표 10에 제시되어 있다. 스펙트럼은 알부민 분자의 잔기 66 내지 508을 포괄하는 다중 영역을 나타낸다.

이들 결과를 추가로 확인하기 위해, 모노클로날 항체 mAb A를 변성된 알부민 (이전에 0.02 ng/ml의 농도의 트립신에 의해 소화됨)에 결합하도록 하여 에피토프의 펩티드 서열을 보호하였다. 이어서, 복합체를 다시 트립신으로 처리하였다. 이어서, MALDI-TOF ms를 수행하고, 알부민으로부터 생성된 펩티드 질량 스펙트럼을 항체의 부재 하에 트립신-처리된 변성 알부민으로부터 생성된 스펙트럼과 비교하였다. mAb가 트립신 처리 동안 존재했던 샘플에서 39종의 알부민 물질 중 동일한 14종의 물질이 완전히 사라졌거나 또는 유의하게 감소하였다 (표 10, 칼럼 6 참조). 결과를 검증하기 위해 다중 판독을 취하였다.

<표 10> 모노클로날 항체 mAb A에 결합하는 알부민 펩티드

알부민의 일부 펩티드 단편은 알부민의 트립신처리된 단편에 항체를 결합시킴으로써 확인될 수 없는데, 이는 알부민의 mAb 결합 에피토프가 트립신에 의해 절단되어 mAb에 결합하기에는 너무 낮은 결합 친화도를 갖는 에피토프의 단편을 생성할 가능성 때문이다. 따라서, 추가의 방법을 사용하여 항체에 의해 결합된 단편을 확인하였다. 단백질분해의 항체 보호를 기반으로 하는 mAb A의 MALDI 에피토프 맵핑을 반복하였다. 이번에는 다소 상이한 접근법을 사용하였다. 변성 HSA를 mAb A와 함께 인큐베이션하였다. 항체에 의해 결합되지 않은 알부민을 울트라 필터 상의 크기 배제에 의해 샘플로부터 제거하였다. 이어서, 나머지 유리 mAb 및 mAb-알부민의 복합체를 트립신에 의해 소화시켰다 (mAb가 결합된 알부민 분자의 서열은 트립신 소화에 저항하여야 함). 이어서, mAb 및 비보호 알부민의 소형 절단 단편을 한외여과 (30 kD)에 의해 샘플로부터 제거하였다. mAb 및 결합된 알부민 단편의 복합체는 pH를 2.7로 낮춤으로써 해리시켰다. 다시 30kD의 한외여과를 수행하여 30kD보다 작은 알부민 단편으로부터 전체 mAb를 분리하였다. 이들 단편의 MALDI TOF 분석은 알부민에 대해 전형적인 스펙트럼을 확인시켜주지 않았다. 타당하게는, mAb A의 에피토프를 함유하는 단편이 여전히 너무 컸기 때문이다. 이어서, 이 여과물 (< 30 kD)을 트립신에 의해 추가로 소화시켜 (이전에 mAb에 의해 보호받은 부위의 절단을 위함) MALDI TOF ms 분석에 적합한 펩티드 물질을 생성하였다.

이 제2의 트립신 처리 후에, MALDI TOF ms에 의해 검출된 32종의 물질 중 8종이 알부민에 매칭되었다 (표 11 참조). 따라서, 이들 새로운 아미노산 서열은, 트립신 절단 지점의 반대편에 서열을 또한 함유하는 에피토프의 부분을 나타낸다. 8종의 펩티드 물질 중 6종 (서열 231, 233, 235, 236, 242 및 243)은, 이전에 완전히 절단된 알부민을 MALDI-TOF 분석 전에 mAb A와 함께 인큐베이션하였을 때 또한 사라진 펩티드 물질이었다 (표 10 참조). 8종의 펩티드 중 2종 (서열 245 및 346)은 완전히 절단된 알부민을 사용한 결합 검정에서 확인되지 않았다. 따라서, 이 항체의 에피토프(들)이 확립되었다. 이러한 다중 구조는 알부민 분자에 존재하며, 이어서 그들이 결합하는 수용체의 가교를 유발할 수 있다. 그러나, mAb A에 대한 다중 에피토프 부위가 사실상 알부민 상에 존재할 수 있다.

<표 11> 모노클로날 항체 mAb A에 결합하는 알부민 펩티드

실시예 19: P3028에 결합하는 시클릭 펩티드

P3028에 결합하는 시클릭 펩티드를 확인하기 위해, 디펩티드 및 트리펩티드의 모든 가능한 변이체를 칩 상에 합성하고, His-태그 표지된 P3028의 결합을 ELISA-기술을 사용하여 분석하였다. 확인된 결합 모티프를 기반으로, 루프형 6-량체를 생산하고 시험하였다. 이들 결과는 함께 리드 시클릭 펩티드 CLALNVMCG (서열 264)의 구축을 가능하게 한다. 위치 스캔을 각각의 다른 19개의 L-아미노산으로 대체된 리드 시클릭 펩티드의 각 위치에서 수행하였다. 각각의 치환된 펩티드의 결합을 시험하고, 리드 펩티드의 경우보다 훨씬 더 우수한 결합 능력을 갖는 펩티드 서열을 확인하였다. 가장 높은 친화도를 갖는 2개의 펩티드는 CLRLNVFCG (서열 265) 및 CLRLIVMCG (서열 266)였다. 위치 스캔 결합 검정을 기반으로 P3028에 결합하는 2종의 최고 루프형 펩티드가 표 12에 요약되어 있다.

<표 12> P3028에 결합하는 시클릭 펩티드

P3028 (서열 185)에 대한 개선된 결합을 제공하는 것으로 위치 스캔에서 확인된 리드 루프형 펩티드에서의 치환가능한 아미노산 잔기가 도 33에 요약되어 있다 (즉, 서열 264 내지 266). 또한, P3028에 대한 보다 높은 또는 실질적으로 동일한 결합을 제공하는 것으로 확인된 P3028에 대한 P28R의 동등하거나 또는 보다 우수한 결합 (표 6.1 및 6.2 참조)을 유발하는 P28R의 위치 치환이 도 33에 요약되어 있다. 스캔 데이터를 기반으로 P3028에 결합하는 루프형 펩티드 서열 (서열 264-266)과 P3028에 대한 결합으로서 확인된 선형 펩티드의 서열 (서열 2-31 및 268-393) 사이에 매우 우수한 상동성이 존재하는 것으로 관찰되었다 (도 33 참조). 시클릭 펩티드의 N-말단 C 잔기 및 C-말단 CG 잔기는 펩티드의 고리화에 수반된다는 것을 주목한다. 따라서, 도 33에 음영 상자에 의해 도시된 바와 같이, P3028의 결합제로서 확인된 6-량체 시클릭 펩티드 (서열 264-266)와 P28R-관련 펩티드 (서열 2-31 및 268-393)의 N 말단 또는 C-말단 사이에 강한 상동성이 존재한다. 알부민-유래 면역조절 펩티드에 결합하여 그를 억제하는 추가의 시클릭 펩티드가 확인될 수 있는 것으로 고려된다.

실시예 20: IL-2 유도된 증식에 대한 알부민 펩티드의 효과

서열 183-185 또는 188-246 중 적어도 하나를 포함하는 알부민 펩티드의 효과를 실시예 2에 기재된 바와 같은 생체외 인간 모델을 사용하여 결정하였다.

PBMC를 건강한 혈액 공여자 (대조군 샘플) 또는 암 환자로부터의 정맥 혈액 샘플로부터 단리하였다. 100 pI의 배양 배지 (200 IV/ml 페니실린, 200 ul/ml 스트렙토마이신, 4 mM L-글루타민 (모두 미국 미주리주 시그마 케미칼 캄파니로부터의 것) 및 20% 열-불활성화 인간 혈청으로 보충된 RPMI 1640 더치 변형 (깁코, 인비트로젠 아베, 스웨덴 스톡홀름))를 둥근 바닥 96-웰 조직 배양 플레이트 (코스타, 코닝 인크. 미국 뉴욕)에 첨가하였다. 실험 배양을 위해, 각 웰의 배양 배지를 서열 183-185 또는 188-246의 펩티드로 보충하였다. 이어서, RPMI/2% HSA 중 PBMC 100 pI (5x10⁴개 림프구)를 웰마다 첨가하고, 이어서 IL-2 (프로류킨, 키론, 네덜란드)를 120 IU/웰의 최종 농도로 첨가하였다. IL-2이 없는 대조군 웰을 병렬로 설치하였다. 세포를 7일 동안 가습 5% CO₂ 분위기 하에 37℃에서 배양하였다. 세포 증식은 마지막 18-24시간 동안 1.6 pCi/웰의 [³H]-티미딘 (아머샴 인터내셔널, 영국)의 혼입에 의해 검정하였다. 삼중 웰의 dpm (분당 붕괴수)의 평균 값을 계산에 사용하였다.

따라서, PBMC의 IL-2 자극을 억제하는 알부민 펩티드를 확인하였다.

실시예 21: T 세포 수용체 자극에 대한 알부민 펩티드의 효과

T 세포 수용체 자극에 대한 서열 183-185 또는 188-246 중 적어도 하나를 포함하는 알부민 펩티드의 효과를 실시예 3에서와 같이 결정하였다. 세포는 CD3에 대해 지시된 모노클로날 항체로 예비-코팅된 플레이트 상의 배양물에서 자극되었고, 대사적 활성 세포의 수 (즉, 세포 증식)를 배양 3 내지 7일 후에 MTS 염색을 사용하여 결정하였다. 고체 상 CD3 모노클로날 항체의 검출을 T 세포 증식의 측정으로서 사용하였다.

따라서, T 세포 수용체 자극을 억제하는 알부민 펩티드를 확인하였다.

실시예 22: NK 세포 세포독성에 대한 알부민 펩티드의 효과

NK 세포 세포독성에 대한 서열 183-185 또는 188-246 중 적어도 하나를 포함하는 알부민 펩티드의 효과를 실시예 4에서와 같이 결정하였다.

단핵 세포는 건강한 공여자로부터 수득된 헤파린첨가 혈액으로부터 표준 피콜-파크 플러스 (파마시아 아베, 스웨덴) 밀도 구배 원심분리에 의해 분리하였다. 이어서, 단핵 세포의 NK 세포 세포독성 활성을 제조업체 프로토콜에 따라 상업용 키트 (NKTEST, 오르페겐 파마 게엠베하, 독일 하이델베르크)를 사용하여 시험하였다. 간략하게, 키트는 이펙터 및 표적 세포의 식별을 가능하게 하는 친지성 녹색 형광 막 염료로 표지된 동결보존된 NK-감수성 표적 세포 (K562)를 함유하였다. 이펙터 세포와의 인큐베이션 후에, 사멸된 표적 세포는 사멸 표적 세포의 핵에 침투하여 그를 특이적으로 염색하는 DNA-염색에 의해 확인하였다. 이 방식으로 사멸된 표적의 백분율은 유동 세포측정법에 의해 결정할 수 있다. 단핵 세포를 10 ug/ml의 지시된 펩티드 (펩티드는 이전에 기재되었음)와 함께 37℃에서 30분 동안 예비인큐베이션하였다. 이어서, 표적 세포를 첨가하여, 이펙터:표적 비 40:1을 제공하고, 세포 혼합물을 3-4시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 샘플을 FACS칼리버 (BD 바이오사이언시스, 캘리포니아주 산호세) 상에서 분석하였다.

따라서, NK 세포 세포독성을 억제하는 알부민 펩티드를 확인하였다.

실시예 23: 백혈구 확산에 대한 알부민 펩티드의 효과

백혈구 확산에 대한 서열 183-185 또는 188-246 중 적어도 하나를 포함하는 알부민 펩티드의 효과를 실시예 5에서와 같이 결정하였다. 백혈구 연층 세포를 헤파린첨가 혈액으로부터 덱스트란 보조 침강에 의해 제조하였다. 각 펩티드의 효과를 시험하기 위해, 세포의 샘플을 10μg/ml의 농도의 서열 183-185 또는 188-246의 펩티드 중 하나로 15분 동안 처리하여 확산을 효율적으로 억제하였다. 이어서, 이들 세포를 PBS 중에서 2회 세척하고 깨끗한 슬라이드로 옮겼다. 유리 표면에 대한 세포 부착 및 확산을 검출하였다.

따라서, 백혈구 확산을 억제하는 알부민 펩티드를 확인하였다.

실시예 24: 면역 세포 이동에 대한 알부민 펩티드의 효과

면역 세포 이동에 대한 서열 183-185 또는 188-246 중 적어도 하나를 포함하는 알부민 펩티드의 효과를 실시예 5에서와 같이 결정하였다. PBMC 이동을 보이덴 챔버 기술을 사용하여 연구하였다. 건강한 대조군 샘플 및 암 환자의 PBMC에 대한 이동은 서열 183-185 또는 188-246의 펩티드 각각의 존재 및 부재 하에서 평가하였다. 따라서, 면역 세포 이동을 억제하는 알부민 펩티드를 확인하였다.

실시예 25: LFA-1에 대한 알부민 펩티드의 결합

LFA-1에 대한 서열 183-185 또는 188-246 중 적어도 하나를 포함하는 알부민 펩티드의 결합을 실시예 7에서와 같이 결정하였다. 표준 면역조직화학적 염색 절차는 아세톤 고정, 차단을 위한 10% 인간 AB-혈청, 항-LFA-1 항체 및 2차 항체 (울트라비전)와의 인큐베이션, 이어서 패스트 레드에 의한 발현을 사용하여 수행하였다. AB 혈청에 펩티드가 첨가되는 예비-인큐베이션은 첨가된 펩티드가 부재하거나 또는 서열 183-185 또는 188-246의 펩티드가 첨가되었다.

LFA-1에 결합하는 펩티드는 항체의 결합을 방지하여, 항체-처리된 세포에서의 패스트 레드 염색의 양을 비처리 대조군 샘플에 비해 감소시켰다.

실시예 26: 알부민 펩티드에 결합하는 항체

서열 183-185 또는 188-246 중 적어도 하나를 포함하는 펩티드에 특이적으로 결합하는 항체를 실시예 9에서와 같이 생성하였다. 서열 183-185 또는 188-246의 펩티드 각각에 대해 지시된 토끼 항혈청을 생성하였다. 서열 183-185 또는 188-246의 각 펩티드는 N-말단에 시스테인을 첨가한 다음 운반체 단백질로서 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH)과 접합시켜 합성하였다. 폴리클로날 항혈청은 KLH-접합 P3028 및 프로인트 아주반트로 토끼를 반복 면역화시켜 생성하였다. 항혈청을 P3028-접합 울트라링크 아이오도아세틸 겔 (피어스 바이오테크놀로지 인크.) 상의 크로마토그래피에 의해 친화도 정제하였다.

항혈청을 인간 혈청 및 dHSA에 결합하는 그의 능력에 대해 시험하였다. 치료 목적을 위해 상업적으로 입수가능한 인간 혈청을 시험하고, 바이러스를 없애기 위해 10회 가열하였다. 따라서, 알부민 펩티드에 특이적으로 결합하는 토끼 항혈청은 dHSA 및/또는 대조군 샘플 HSA에 결합한다.

서열 183-185 또는 188-246의 펩티드에 대한 토끼 항혈청의 결합은 경쟁 ELISA 검정을 사용하여 검정하였다.

IL-2에 대한 증식 반응에 대한, 서열 183-185 또는 188-246에 대해 지시된 친화도 정제된 항체의 효과는 면역억제된 암 환자 및 정상 대조군 샘플로부터의 PBMC를 사용하여 생체외 모델에서 검사하였다.

따라서, 서열 183-185 또는 188-246의 펩티드에 결합하는 항체를 확인하였다.

실시예 27: 알부민-유래 펩티드에 결합하는 펩티드

서열 183-185 또는 188-246 중 적어도 하나에 결합하는 펩티드를 실시예 10에서와 같이 확인하였다. 펩티드의 잠재적 결합제를 합성하였다. 서열 183-185 또는 188-246의 각 펩티드에 대해, His-태그부착 펩티드를 용액 중 잠재적 결합제와 접촉시킨 다음, His 태그를 사용하여 용액으로부터 단리하였다. 각 펩티드의 결합제를 또한 펩티드와 함께 단리하고, 이후에 확인하였다.

추가로, 각각의 알부민 펩티드에 결합하는 펩티드의 치환, 말단절단 및 결실을 실시예 12에서와 같이 확인하였다. 치환, 말단절단 및 결실을 칩 상에 합성하고, 서열 183-185 또는 188-246 중 하나의 알부민 펩티드와 접촉시켜 결합을 결정하였다. 결합된 펩티드의 양은 실시예 12에서와 같이 rampo 검정을 사용하여 정량화하였다. 가장 높은 rampo 점수를 갖는 결합제를 단리하였다.

각 펩티드의 가장 높은 점수 결합제를 실시예 13 및 15에서와 같이 면역억제를 감소시키는 그의 능력에 대해 평가하였다. 각 결합제를 림프구 활성화를 유도하는 그의 능력에 대해 평가하고, LFA-1 수용체를 비차단시켰다. 추가로, 각 결합제를 실시예 14에서와 같이 종양 세포에의 결합에 대해 평가하였다.

실시예 28: 미토콘드리아 대사 및 MTS의 전환에 대한 P28R의 효과

8개의 건강한 대조군 샘플 및 9명의 다양한 진단을 갖는 암 환자 (신세포암, 악성 흑색종, 직장암, 소세포 폐암, 비소세포 폐암 (선암종), 편평 세포 암종, 방광암, 골육종, 췌장암 또는 기관지암 포함)로부터의 PBMC를 다양한 양의 P28R (서열 2)의 존재 하에 7일 동안 실시예 2의 생체외 모델의 변형된 버전으로 배양하고, 대조군 샘플은 P28R로 비처리하였다. 도 33a 및 33b에 도시된 바와 같이, 세포를 P28R 부재 (322), 5μg/mL (324), 10μg/ml (326) 또는 20μg/ml (328)의 P28R 하에서 배양하였다. MTS의 전환으로서 측정된 미토콘드리아 대사의 용량 의존성 자극은 8개 대조군 샘플 중 5개 (도 33a 참조) 및 9명 암 환자 중 9명 (도 33b 참조)에서 관찰되었다. PBMC를 단지 3일 동안 배양하였을 때 유사한 결과를 얻었다.

실시예 29: 미토콘드리아 대사 및 MTS의 전환에 대한 면역조절 펩티드의 억제제의 효과

MTS 전환을 기반으로 한 미토콘드리아 대사에 대한 P28R (서열 2)의 효과를 밀접하게 관련된 펩티드 P27의 효과와 비교하였다. P27 (일명 "SCF 27")은 서열 KKLDTFFKKLSLFTER (서열 264)을 가졌고, P28R의 V8이 P27에서 K8로 치환된다는 점에서 상이한 P28R의 변이체이다. P28R은 P27보다 더 효율적으로 P3028에 결합한다 (P27은 253의 rampo 점수로 P3028에 결합하고, 반면에 P28R 대조군 샘플은 308의 rampo 점수로 P3028에 결합한다; 실시예 12 참조).

다양한 진단을 갖는 암 환자로부터의 PBMC를 다양한 농도의 P28R 또는 P27 (P28R에 대해 N=9: P27에 대해 N=8)과 함께 실시예 2의 생체외 모델의 변형된 버전으로 배양하였다. 농도는 비처리 대조군 샘플, 5μg/mL ("SCF28-R5" 및 "SCF275"), 10μg/ml ("SCF28-R10" 및 "SCF2710"), 20μg/ml ("SCF28-R20" 및 "SCF2720") 또는 40μg/ml ("SCF28-R40" 및 "SCF2740")였다. 결과는 도 34에 도시되어 있다. P28R이 용량-의존성 방식으로 암 환자의 세포를 자극한 반면에, P27은 어떠한 효과도 없었다.

실시예 30: IL-2 유도된 증식 (BrdU 혼입)에 대한 P28R의 효과

IL-2 유도된 증식에 대한 P28R (서열 2)의 효과를 BrdU 혼입 검정에서 측정하였다. 6개의 건강한 대조군 샘플 및 10명의 암 환자 (신세포암, 악성 흑색종, 직장암, 소세포 폐암, 비소세포 폐암 (선암종), 편평 세포 암종, 방광암, 골육종, 췌장암 또는 기관지암을 포함)로부터의 PBMC를 실시예 2의 생체외 모델의 변형된 버전으로 수거하였다. 100 pI의 배양 배지 (200 IV/ml 페니실린, 200 ul/ml 스트렙토마이신, 4 mM L-글루타민 (모두 미국 미주리주 시그마 케미칼 캄파니로부터의 것) 및 20% 열-불활성화 인간 혈청으로 보충된 RPMI 1640 더치 변형 (깁코, 인비트로젠 아베, 스웨덴 스톡홀름))를 둥근 바닥 96-웰 조직 배양 플레이트 (코스타, 코닝 인크. 미국 뉴욕)에 첨가하였다. 이어서, RPMI/2% HSA 중 PBMC 100 pI (5x10⁴개 림프구)를 웰마다 첨가하고, 이어서 IL-2 (프로류킨, 키론, 네덜란드)를 120 IU/웰의 최종 농도로 첨가하였다. IL-2이 없는 대조군 샘플 웰을 병렬로 설치하였다. 세포를 7일 동안 가습 5% CO₂ 분위기 하에 37℃에서 배양하였다. 세포 증식을 BrdU의 혼입에 의해 검정하였다.

도 35에 도시된 바와 같이, 6개의 대조군 샘플 중 4개는 10명의 암 환자 중 4명과 비교하여 IL-2에 대한 높은 증식 반응을 가졌다. PBMC에서 IL-2에 대한 증식 반응의 이들 차이는 IL-2에 대한 고 반응자 및 저 반응자의 차이의 존재를 입증하였다.

다양한 용량의 P28R에 대한 고 반응자 및 저 반응자의 반응을 비교하였다. 고 반응자 또는 저 반응자로부터의 세포를 P28R 부재, 5μg/mL, 10μg/ml 또는 20μg/ml의 P28R 하에서 7일 동안 배양하였다. IL-2-유도된 증식은 상기 실시예에서와 같이 BrdU 혼입으로서 측정하였고, 결과는 도 36a에서 고 반응자에 대해 및 도 36b에서 저 반응자에 대해 도시되어 있다. P28R이 IL-2에 대한 고 반응을 갖는 환자로부터의 세포에서 어떠한 자극 효과도 갖지 않은 반면에 (N=4) (도 36a 참조), P28R은 IL-2에 대한 저 반응을 갖는 환자로부터의 세포에 대한 자극 효과를 가졌다 (N=6) (도 36b 참조).

실시예 31: IL-2 유도된 증식 (BrdU 혼입 및 MTS 전환)에 대한 면역조절 펩티드의 억제제의 효과

BrdU 혼입에 의해 측정된 바와 같이, IL-2 유도된 증식에 대한 P28R과 관련된 펩티드인 P27의 효과를 P28R의 효과와 비교하였다. P27 (일명 "SCF 27")은 서열 KKLDTFFKKLSLFTER (서열 264)을 가졌고, P28R의 V8이 P27에서 K8로 치환된다는 점에서 상이한 P28R의 변이체이다. P28R은 P27보다 더 효율적으로 P3028에 결합한다 (P27은 253의 rampo 점수로 P3028에 결합하고, 반면에 P28R 대조군 샘플은 308의 rampo 점수로 P3028에 결합한다; 실시예 12 참조).

실시예 30의 저 반응자 암 환자로부터의 PBMC를 실시예 30에서와 같이 배양하되, 단 일부 샘플은 다양한 농도의 P28R (일명 "SCF28-R")과 함께 배양하고, 다른 것들은 다양한 농도의 P27 (일명 "SCF27")과 함께 배양하였다. 농도는 펩티드 부재 ("비처리 세포"), 5μg/mL, 10μg/ml 또는 20μg/ml였다. BrdU 혼입은 실시예 30에서와 같이 측정하였다. 도 37에 도시된 바와 같이, P28R 및 P27 둘 다는 IL-2에 의해 유도된 PBMC의 증식률을 증진시켰다. 비교에 의해, MTS 전환에 의해 측정된 바와 같이 P27이 아니라 P28R이 미토콘드리아 대사의 IL-2 자극을 증진시켰다는 실시예 29 및 도 34의 데이터를 도출할 수 있다. P27은 MTS 전환에 의해 측정된 바와 같이 미토콘드리아 대사를 증진시킨 것이 아니라 BrdU 혼입에 의해 측정된 바와 같이 세포 증식의 IL-2 자극을 증진시킨 것으로 관찰되었다. 다른 한편으로는, P28R은 두 파라미터를 증진시킨 것으로 관찰되었다. 억제 펩티드 P3028은 본원에 기재된 바와 같이, CD25 (실시예 8 및 도 18-19 참조) 및 LFA-1 (실시예 7 및 도 15-16 참조)을 비롯한 상이한 수용체에 결합한다. P3028의 보다 효율적인 결합제인 P28R은 LFA-1로부터 P3028을 제거할 수 있고/거나 CD25를 탈차단시킬 수 있는 것으로 고려된다. 그러나, P3028에 대한 보다 낮은/보다 약한 결합을 갖는 P27은 LFA-1을 비차단시키는 능력을 갖지 않지만 CD25를 비차단시킬 수는 있는 것으로 고려된다. 따라서, 상이한 집단의 환자는 면역조절 펩티드, 예컨대 P3028에 의해 상이한 방식으로 영향을 받을 수 있는 것으로 고려된다. 또한, 면역조절 펩티드의 상이한 억제제가 상이한 수용체의 활성 및/또는 상이한 신호 전달 경로를 조절할 수 있는 것으로 고려된다.

실시예 32: MTS 및 BrdU 검정의 비교

이 연구에서 2개의 세포 증식 검정은 둘 다 세포 증식을 측정하기 위해 폭넓게 사용된다. 펩티드 P28R은 9명의 환자 중 9명에서 및 8개의 건강한 대조군 샘플 중 5개에서 PBMC의 7일 배양물 중 MTS 전환의 자극 활성을 가졌다. 대조적으로, P28R은 단지 1명/6명 및 2명/10명 환자로부터의 PBMC의 7일 배양물 중 BrdU의 혼입을 자극하였다.

BrdU의 혼입으로서 측정된 IL-2 유도된 증식은 IL-2에 대한 낮은 증식 반응을 갖는 암 환자로부터의 PBMC 배양물에서 P28R에 의해 자극되었다 (실험 조건은 실시예 30에 기재된 바와 같았다). 3개의 건강한 대조군 샘플 중 2개 및 4명의 암 환자 중 2명으로부터의 PBMC는, 효과가 MTS 전환으로서 측정되었을 때 IL-2에 의해 자극되지 않았다 (실험 조건은 실시예 28에 기재된 바와 같았다). 그러나, MTS로 측정되었을 때 반응하지 않았던 모든 이들 사람 ("비-반응자")으로부터의 PBMC는, 효과가 BrdU의 혼입으로서 측정되었을 때 IL-2에 의해 유의하게 자극되었다.

상기 결과는 도 38에 예시되어 있다. PBMC를 IL-2 존재 (382) 하에 (좌측 막대) 또는 IL-2 부재 (384) 하에 (우측 막대), 2명의 상이한 환자로부터 배양하였다 (A, B) 및 (C, D). IL-2 및 펩티드 P28R (일명 "SCR28R") 및 P27 (일명 "SCF27")의 효과를 펩티드 부재 ("비처리 세포"), 5μg/mL, 10μg/ml 또는 20μg/ml의 펩티드의 농도에서 측정하였다.

2명의 환자에서, BrdU 혼입으로서 측정된 IL-2에 대한 반응은 P28R에 의해 증진되었지만 (도 38a 및 38c 참조), P28R의 이 효과는 MTS 전환이 사용되었을 때 이들 환자 중 1명에서만 관찰되었다 (도 38b 참조). 따라서, 1명의 환자에서 IL-2의 자극 활성은 BrdU 및 MTS 둘 다를 사용하여 등록되었고 (도 38a 및 38b 참조), 다른 환자에서 IL-2의 자극 활성은 단지 BrdU를 사용하여 등록하였다 (도 38c 참조). 이들 관찰을 기반으로, MTS 전환으로서 측정된 대사 활성에 대한 효과가 항상 BrdU의 혼입으로서 측정된 DNA 합성과 상관관계가 있는 것은 아니라고 결론내려진다.

추가로, P28R은 BrdU 및 MTS 둘 다로 측정된 IL-2의 효과를 증진시켰지만, SCF27의 자극 효과는 BrdU 혼입이 측정되었을 때만 관찰되었다. C에 도시된 환자에서 결과는 A에 도시된 것과 매우 유사하지만, D에서는 효과가 MTS 전환을 사용하여 결정될 때에 어떠한 자극 효과도 보이지 않았다.

이들 결과는 알부민-유래 면역조절 구조물, 예컨대 P3028이 상이한 메카니즘을 통해 신호 전달을 조절하는 것처럼 보임을 나타낸다. 따라서, 상이한 환자 집단은 면역조절 펩티드의 억제제와 상이하게 반응할 수 있다. 시험관내 진단 검정은, 어느 환자가 알부민-유래 면역조절 구조물을 갖는지를 확인하는데 도움이 될 수 있고, 추가로 어느 환자가 면역조절 구조물의 특정 억제제 (또는 억제제의 조합)에 반응할 것인지를 확인하는데 도움이 될 수 있을 것으로 고려된다.

실시예 33: 림프구 활성화에 대한 면역조절 펩티드의 결합제의 효과

면역조절 펩티드의 결합제, 예를 들어 표 5.1, 6.1, 6.2 또는 12의 펩티드 (서열 1-32, 265-393), 또는 서열 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98 또는 264를 실시예 13에서와 같이 림프구 활성화에 대한 효과에 대해 검정하였다. 이들 펩티드의 분석은 인간 생체외 모델에서 수행하였다. MTS 또는 CFSE 기술을 사용하여 측정된 PBMC에 대한 자극 활성을 7개의 건강한 대조군 샘플 및 7명의 다양한 진단의 암 환자에서 연구하였다. 펩티드를 다른 유형의 자극의 부재 하에서도 자극 활성에 대해 검정하고, 비처리 대조군 샘플과 비교하였다.

IL-2에 대한 증식 반응에 대한, 표 5.1, 6.1, 6.2 또는 12의 펩티드 (서열 1-32, 265-393), 또는 서열 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98 또는 264의 자극 활성은 P3028 서열 또는 구조물에 의해 억제되었다. PBMC를 IL-2와 함께 7일 동안 배양하고, 증식률을 BrdU의 혼입으로서 결정하였다. 조건의 각 세트를 3중으로 검정하였다. PBMC의 초기 증식은 각 펩티드를 사용한 처리 후에 동일한 공여자로부터의 PBMC의 증식과 비교하였다.

실시예 34: 종양 세포에 대한 면역조절 펩티드의 억제제의 결합

각각이 P3028에 결합하는 것으로 나타난, 표 5.1, 6.1, 6.2 또는 12의 각각의 P28R 펩티드 (서열 1-32, 265-393), 또는 서열 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98 또는 264의 비오티닐화 버전을 사용하여 종양 세포에 대한 펩티드의 결합을 검정하였다. 실시예 14에서와 같이, 5개의 유방암, 2개의 신세포 암종 및 4개의 악성 흑색종을 분석하였다.

실시예 35: 면역조절 펩티드의 억제제에 의한 LFA-1 수용체 비차단

본원에 기재된 바와 같이, β2-인테그린은 면역계의 정상 기능에서 역할을 한다. β2-인테그린 LFA-1에 대한 내인성 억제제 P3028의 결합을 기반으로 한 면역억제 메카니즘이 또한 본원에 기재된다. 실시예 7에 기재된 바와 같이, 암 환자로부터의 PBMC의 막 염색은 정상 대조군 샘플과 비교하여 현저하게 감소하였다. 그러나, LFA-1의 노출은 암 환자로부터의 PBMC를 억제제 P3028에 대해 지시된 항체와 함께 인큐베이션함으로써 증진될 수 있다 (실시예 7 및 도 16 참조).

LFA-1에 대한 염색은 실시예 7의 항-LFA-1 항체 및 2차 항체 (울트라비전)를 사용하여 수행한 후에, 패스트 레드를 사용하여 발현시켰다. 신선한 동결 종양 절편을 임의의 고정 없이 LFA-1에 대한 염색 전에, 각각이 P3028에 결합하는 것으로 나타난, 표 5.1, 6.1, 6.2 또는 12의 각각의 P28R 펩티드 (서열 1-32, 265-393), 또는 서열 34, 46-53, 64-66, 68, 76, 94-96, 98 또는 264와 함께 4-20시간 동안 인큐베이션하였다. 비교를 위해, 대조군 샘플 종양 절편을 단지 포스페이트 완충 염수와 함께 인큐베이션하였다. 항-LFA-1 항체 염색의 양이 관찰되었고, 이를 사용하여 LFA-1 수용체의 차단 (존재한다면)의 양을 결정하였다. 처리된 세포의 이동 및 세포독성 활성은 또한 진행중이었다.

실시예 36: 서열 2에서의 아미노산 잔기의 위치 스캔

위치 스캔 데이터를 사용하여 P3028 (서열 185)의 결합에 대한 P28R (서열 2)의 각 위치에서의 상이한 유형의 아미노산의 치환의 영향을 연구하였다. P28R (서열 2)의 펩티드 서열에서의 각 아미노산을 모든 자연 발생 아미노산으로 교환하고, 고체 상 칩 상에 고정화시켰다. 칩 상에 합성된 이들 "돌연변이된" P28R 펩티드에 대한 P3028의 결합은 ELISA 기술을 사용하여 결정하였다. 결과는 표 13에 요약되어 있다. 결과에 비추어, 표 13은 P3028에 대한 결합을 유지할 수 있는 각 위치에서의 임의적 치환을 확인시켜 주는 칼럼을 포함한다.

<표 13> 고체 상 P28R 변이체에 결합하는 P3028의 분석

* M은 측쇄에 황 원자를 갖고, 어떠한 이론에 제한되지는 않지만, 단지 위치 8, 9 및/또는 15에서의 M의 치환은 P3028에 대한 억제제 펩티드의 감소된 결합을 유발할 수 있다는 것을 주목한다.

하기 위치에서의 하기 아미노산 잔기의 카테고리는 P28R에 대한 P3028의 결합에 수반될 가능성이 있다는 것을 주목하였다 (일부 추가의 "가능한" 치환은 표 13에 언급됨):

K2 양성 하전된 아미노산

T5 극성 비하전된 아미노산

F6 소수성 및 비하전된 극성

F7 소수성 및 비하전된 극성

V8 소수성 비-방향족 탄소 쇄 아미노산

K9 양으로 하전된 아미노산

S11 극성 비하전된 아미노산

E15 음으로 하전된 아미노산

따라서, 일부 실시양태에서, 중심 코어 T5-S11, 및 2개의 추가의 아미노산 K2 및 E15가 펩티드 P3028의 결합에 수반되는 것으로 확인하였다.

위치 스캔 데이터로부터 "코어 펩티드"인 FFVKLS (서열 62) (또한 본원에서 "P28 코어"로 지칭됨)가 확인될 수 있으며, 전장 펩티드 P28R만큼 효율적으로 3028 펩티드에 결합한다는 것을 또한 주목한다. 그러나, P28 코어 펩티드는 이 모델의 단기 배양물에서 PBMC 활성화 (CD69 및 CD71)를 자극하지 않고, 반면에 P28R 펩티드는 이 모델의 단기 배양물에서 PBMC 활성화를 자극한다.

그러나, 인간 및 개 암 혈청을 갖는 배양물에서, P28 코어는 자극 활성을 갖는다. 이에 따라, 어떠한 이론에 제한되지는 않지만, P28 코어는 P3028의 억제 효과를 탈차단시키는데 (예를 들어 세포 수용체로부터 결합된 3028 구조물을 이탈시키는데) 유용할 수 있는 것으로 고려된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, P28 코어는 LFA-1 수용체의 P3028-매개 억제를 탈차단시키는데 유용할 수 있다.

위치 스캔 데이터를 기반으로, 서열 2의 치환은 P3028에 결합하는데, P3028-매개 억제로부터 LFA-1 수용체를 탈차단시키는데, 및/또는 면역 세포를 자극하는데 유용할 수 있는 것으로 고려된다.

실시예 37: PBMC 활성화에 대한 변형된 펩티드의 효과

펩티드 P28R (서열 2) 및 P28R의 변형의 활성을 24 또는 48시간의 단기 배양물에 PBMC를 사용하는 인간 생체외 모델에서 연구하였다. 건강한 대조군 사람으로부터의 PBMC에 대한 P28R 및 P28R의 변형의 효과를 연구하였다. 활성화는 유동 세포측정법을 사용하여 증진된 마커 CD69를 갖는 세포의 백분율로서 측정하였다. PBMC를 RPMI + 10% 인간 AB 혈청에서 24시간 동안 펩티드 (40μg/mL)와 함께 인큐베이션하였다.

이 생체외 모델에서 자극 효과 (CD69의 발현으로서 측정됨)에 대한 다양한 아미노산 치환의 영향을 연구하였다. 위치 스캔에 따라 우수한 결합 능력을 나타내는 P28R 및 아미노산 치환의 자극 효과를 평가하였다. P28R (KKLDTFFVKLSLFTER) (서열 2), 펩티드 30677 (KKLDTFFVKLSLMTER) (서열 583), 펩티드 30678 (KKLDTFFVKLQLFTER) (서열 584) 및 펩티드 30680 (KKLDTVMVKLQLMTER) (서열 585)을 검사하였다 (도 41a 참조). 도 41a는 각 펩티드에 대한 두 실험 (410 및 412)의 결과를 예시한다. 모든 4종의 펩티드는 건강한 대조군 사람으로부터의 PBMC의 활성화를 유도하였다.

P28R (서열 2), 펩티드 30864 (KSLDTFFVKLSLFTER, 서열 586); 펩티드 30685 (KKLDTFFVKLSLFTFR, 서열 587); 펩티드 31135 (KKLDTFFVYLSLFTER) (서열 588); 펩티드 31136 (KKLDTFFVNLSLFTER) (서열 589) 및 펩티드 31138 (KKLDTFFVDLSLFTER) (서열 590)을 검사하였다 (도 41b 참조). 도 41b는 각 펩티드에 대한 두 실험 (414 및 416)을 도시한다. 펩티드 31135는 또한 면역 세포를 자극하였다. 따라서, 표 13의 분석에 추가하여, 티로신이 또한 본원의 일부 실시양태에 따라 서열 2의 위치 9에서 치환될 수 있다.

이들 결과는 표 13에서의 위치 스캔을 기반으로 한 데이터와 일반적으로 일치함을 제시한다 (실시예 36 참조). 어떠한 이론에 제한되지는 않지만, 위치 스캔 데이터와 면역 세포 자극 데이터 사이의 일부 차이는 본원의 개시내용과 일치하지 않는다. 표 13은 ELISA 검정에서 P3028에 결합하는 능력에 관한 것이고, 반면에 도 41a-b는 PBMC 활성화에 대한 검정에 관한 것이라는 것을 주목한다. 일부 실시양태에서, 서열 2 또는 583-585를 포함하거나, 그로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진 펩티드는 건강한 면역 세포, 예를 들어 PBMC를 자극한다.

실시예 38: PBMC 활성화에 대한 P28 코어 펩티드의 효과

실시예 37에서 관찰된 바와 같이, P28R (서열 2)은 RPMI + 10% 정상 인간 AB 혈청을 배양 배지로서 사용할 때 단기 배양물에서 건강한 대조군으로부터의 PBMC를 자극할 수 있다. 또한, P28R의 말단절단을 PBMC를 활성화시키는 그의 능력에 대해 평가하였다. PBMC를 RPMI + 10% 인간 AB 혈청에서 24시간 동안 펩티드 (40μg/mL)와 함께 인큐베이션하였다. PBMC 활성화는 유동 세포측정법을 사용하여 CD69 (도 42a) 또는 CD71 (도 42b)의 증진된 발현을 갖는 세포 퍼센트로서 측정하였다. 각 펩티드에 대해 2회 실험을 수행하였다.

도 42a 및 42b에 도시된 바와 같이, 펩티드 P28R (서열 2)은 이 모델에서 건강한 PBMC를 효과적으로 활성화하였지만, 펩티드 32251 (서열 592) 및 펩티드 32230 ("P28 코어") (FFVKLS) (서열 62)은 이 모델에서 건강한 PBMC를 활성화시키지 않았다.

그러나, 배양 배지 중 정상 인간 AB-혈청을 암을 가진 개 또는 암을 가진 인간 환자로부터의 혈청으로 치환시킨 PBMC 배양물에서, P28R (서열 2) 및 P28 코어 (펩티드 32230 (FFVKLS) (서열 62))는 각각 PBMC를 활성화시켰으며, 이는 CD69의 증진된 발현으로서 측정되었다 (도 43 참조). 도 43은 2명의 상이한 암 환자로부터의 혈청 (인간 ca 혈청 1 (430) 및 인간 ca 혈청 2 (432))을 함유하는 배양 배지에서 전장 펩티드 P28R (서열 2)과 6개의 아미노산 P28 코어 서열 (펩티드 32230) (FFVKLS) (서열 62) 사이의 비교를 도시한다. P28R (서열 2) 및 P28 코어 (서열 62) 둘 다 암 혈청의 존재 하에서 PBMC를 활성화시켰다.

추가로, 비오티닐화 P28R은 P28R 코팅된 비드의 면역세포화학 또는 로세팅 (세포에 대한 비드의 결합)에 의해 입증된 바와 같이 PBMC에 직접 결합하는 것으로 나타났다.

이들 결과를 함께 취해보면 P28R (서열 2)은 P3028에 결합하여 세포 수용체를 탈차단시킬 수 있고, 또한 면역 세포에 대한 직접적 자극 활성을 가질 수 있다는 것을 제시한다. 추가로, P28 코어 (서열 62)는 P3028에 결합하여 세포 수용체를 탈차단시킬 수 있다.

실시예 39: P28R의 세포독성 활성

P28R (서열 2)의 효과를 누드 및 면역적격 마우스의 생체내 모델에서 추가로 연구하였다. P28R을 누드 마우스의 이종이식편 모델에서 인간 췌장암 내로 종양내로 주사한 것은, 1일 후에 종양 세포 아폽토시스를 유도하는 능력을 입증하였다. 도 44a 및 44b는 카스파제 3에 대한 면역조직화학적 염색 (440)을 도시하며, 이는 진행중인 아폽토시스를 나타내고, 단지 약물 용매만으로 처리된 종양과 비교하여 (도 44b) P28R 처리된 종양에서 이 효소의 유의하게 증진된 활성화를 나타낸다 (도 44a). 염색의 부재는 또한 (442)로 나타나 있다. 결과는 종양에 대한 면역 반응성을 형성하는 능력을 갖지 않는 동물에서 P28R의 투여 후 단지 1일만에 얻어진 것임을 주목한다.

이에 따라, P28R의 종양내 투여는 본원의 일부 실시양태에 따라 종양 세포에 대한 세포독성 작용을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, P28R은 종양 세포에 대한 직접적 세포독성 작용을 갖는다.

실시예 40: P28R의 치료 활성

면역계를 활성화시켜 종양 세포-용해를 유도하는 P28R (서열 2)의 능력을 B16 흑색종이 접종된 면역적격 마우스 C57Bl에서 연구하였다. 100 마이크로리터 중 40 마이크로그램의 P28R을 종양내로 주사하고, 종양을 3일 후에 취하였다. 도 45에 도시된 바와 같이, 이 처리 후에 종양에서 우세한 세포는 염증 세포이며, 이는 폴리클로날 토끼 항-CD45 항체를 사용하는 면역조직화학적 염색 (450)에 의해 확인하였다 (도 45a). 비교를 위해 대조군 종양 절편을 동일한 농도의 토끼 IgG와 함께 인큐베이션하였다 (도 45b). 염색의 부재가 또한 나타나 있다 (452).

따라서, P28R이 염증 세포에 의해 B16 흑색종 종양의 침윤을 유발할 수 있다는 것을 입증하였다. 본원의 일부 실시양태에 따르면, P28R은 면역 세포에 의해 종양, 예를 들어 흑색종의 침윤을 유도할 수 있다.

실시예 41: 면역 세포 자극에 대한 변형된 펩티드의 효과

면역자극 효과에 대한 다양한 아미노산 치환 및 부가의 영향을 연구하였다. 건강한 대조군 사람으로부터의 PBMC의 활성화에 대한 변형된 펩티드의 효과를 평가하였다. 활성화는 유동 세포측정법을 사용하여 증진된 마커 CD69 또는 CD71을 갖는 세포의 백분율로서 결정하였다. PBMC는 RPMI + 10% 인간 AB 혈청에서 48시간 동안 펩티드 (40μg/mL)와 함께 인큐베이션하였다. 각 펩티드에 대해 두 실험 (각각 도 46a에서 460 및 462; 도 46b에서 464 및 466)을 수행하였다. 펩티드 P28R (서열 2), P28 코어 (펩티드 32230) (서열 62), 32251 (KKLDTFFPKLSLFTER) (서열 592), 32814 (RKLDTFFVKLSLFTERRR) (서열 591), 32815 (KKLDQFFVKLSQHNER) (서열 595), 32665 (서열 593) 및 32819 (서열 594)를 시험하였다.

도 46에 도시된 바와 같이, 펩티드 32814 (서열 591)는 P28R (서열 2)의 경우와 유사한 단기 배양물에서의 자극 효과를 나타냈다 (배치 CS8040). 따라서, 펩티드 32814 (서열 591)는 증진된 CD69 (도 46a) 및 증진된 CD71 (도 46b)에 의해 나타내어진 바와 같이 건강한 PBMC를 활성화시켰다.

실시예 42: 진단 용도

치료 용도에 추가하여, P28R 및 그의 말단절단 및 변형의 진단 용도를 또한 고려하였다. 예를 들어, 환자 전신 및 국부 (종양내) 면역 상태에 관한 정보는 P28R 또는 그의 말단절단 또는 변형을 포함하는 시약을 사용하여 얻을 수 있다.

종양 내 면역억제 3028-구조물의 발생은 P3028에 대해 지시된 항체를 사용하거나 또는 표지된 P28R (서열 2) 또는 P28 코어 (서열 62), 예를 들어 비오티닐화 P28R 또는 P28 코어를 사용하는 면역조직화학적 염색에 의해 확인할 수 있는 것으로 고려된다. 도 47은 비오티닐화 P28R을 사용하여 염색된 인간 유방암의 2개 영역을 도시한다. 염색 (470)이 도 47b에서 관찰된다. 염색은 도 47a에서는 관찰되지 않는다. 염색의 부재는 (472)로 나타나 있다.

이에 따라, P3028 구조물을 포함하는 종양의 영역 (뿐만 아니라 이들 구조물을 포함하지 않는 영역)은 본원의 실시양태에 따라 표지된 펩티드를 사용하여 확인할 수 있다.

실시예 43: P28 펩티드 억제제를 사용하는 종양의 처리

흑색종을 갖는 환자를 확인하였다. 서열 2의 아미노산 서열로 이루어진 펩티드 40μg/100ml 및 겔-유사 물질로서 제제화된 PBS 완충제를 포함하는 제약 조성물을 3주 동안 1주 1회 환자에 종양주위로 주사하였다. 종양 세포독성이 관찰되었다. 종양의 면역 세포 침습이 관찰되었다.

실시예 44: P28 코어 펩티드 억제제를 사용하는 종양의 처리

유방암을 갖는 환자를 확인하였다. 서열 62의 아미노산 서열로 이루어진 펩티드 80μg/100ml 및 겔-유사 물질로서 제제화된 트리스 완충제를 포함하는 제약 조성물을 환자에 종양주위로 주사하였다. 종양의 면역 세포 침습이 관찰되었다.

실시예 45: P28R-변형 펩티드 억제제를 사용하는 종양의 처리

전립선암을 갖는 환자를 확인하였다. 수성 완충제 중에 용해된 서열 586의 아미노산 서열로 이루어진 펩티드 1mg/kg을 포함하는 제약 조성물을 총 5회 투여 동안 2일마다 1회 환자에게 전신으로 투여하였다. 종양 세포독성이 관찰되었다. 종양의 면역 세포 침습이 관찰되었다.

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<211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 49 Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 <210> 50 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 50 Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 <210> 51 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 51 Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 <210> 52 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 52 Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 <210> 53 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 53 Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 <210> 54 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 54 Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 <210> 55 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 55 Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 <210> 56 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 56 Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 <210> 57 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 57 Phe Thr Glu Arg 1 <210> 58 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 58 Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu 1 5 10 <210> 59 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 59 Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr 1 5 10 <210> 60 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 60 Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe 1 5 10 <210> 61 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 61 Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu 1 5 <210> 62 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 62 Phe Phe Val Lys Leu Ser 1 5 <210> 63 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 63 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<400> 82 Lys Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 <210> 83 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 83 Lys Lys Leu Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 <210> 84 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 84 Lys Lys Leu Asp Thr Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 <210> 85 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 85 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 <210> 86 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 86 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Thr Glu Arg 1 5 10 <210> 87 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 87 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Arg 1 5 10 <210> 88 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 88 Lys Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 <210> 89 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 89 Lys Lys Leu Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 <210> 90 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 90 Lys Lys Leu Asp Thr Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 <210> 91 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 91 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Phe Thr Glu Arg 1 5 10 <210> 92 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 92 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Glu Arg 1 5 10 <210> 93 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 93 Gly Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 94 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 94 Lys Lys Gly Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 95 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 95 Lys Lys Leu Asp Gly Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 96 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 96 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Gly Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 97 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 97 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Gly Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 98 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 98 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Gly Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 99 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 99 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Gly Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 100 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 100 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Gly Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 101 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 101 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Gly Arg 1 5 10 15 <210> 102 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding P28R (SEQ ID NO:2) <220> <221> misc_feature <222> 9,15,24,30,33,36,42,48 <223> N=A,G,C,or T <400> 102 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn wsnytnttya cngarmgn 48 <210> 103 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary polynucleotide encoding P28R (SEQ ID NO:2) <400> 103 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg agcctgttta ccgaacgc 48 <210> 104 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:3 <220> <221> misc_feature <222> 3,9,15,24,30,33,36,42,48 <223> N=A,G,C,or T <400> 104 mgnaarytng ayacnttytt ygtnaarytn wsnytnttya cngarmgn 48 <210> 105 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 3 <400> 105 cgcaaactgg ataccttttt tgtgaaactg agcctgttta ccgaacgc 48 <210> 106 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:4 <220> <221> misc_feature <222> 9,15,24,30,33,36,42,48 <223> N=A,G,C,or T <400> 106 aaraarggng ayacnttytt ygtnaarytn wsnytnttya cngarmgn 48 <210> 107 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 4 <400> 107 aaaaaaggcg ataccttttt tgtgaaactg agcctgttta ccgaacgc 48 <210> 108 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:5 <220> <221> misc_feature <222> 15,24,30,33,36,42,48 <223> N=A,G,C,or T <400> 108 aaraargarg ayacnttytt ygtnaarytn wsnytnttya cngarmgn 48 <210> 109 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 5 <400> 109 aaaaaagaag ataccttttt tgtgaaactg agcctgttta ccgaacgc 48 <210> 110 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:6 <220> <221> misc_feature <222> 9,24,30,33,36,42,48 <223> N=A,G,C,or T <400> 110 aaraarytng aycarttytt ygtnaarytn wsnytnttya cngarmgn 48 <210> 111 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 6 <400> 111 aaaaaactgg atcagttttt tgtgaaactg agcctgttta ccgaacgc 48 <210> 112 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:7 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 18, 24, 30, 33, 36, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 112 aaraarytng ayacngcntt ygtnaarytn wsnytnttya cngarmgn 48 <210> 113 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 7 <400> 113 aaaaaactgg ataccgcgtt tgtgaaactg agcctgttta ccgaacgc 48 <210> 114 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:8 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 18, 24, 30, 36, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 114 aaraarytng ayacngtntt ygtnaarytn wsnytnttya cngarmgn 48 <210> 115 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 8 <400> 115 aaaaaactgg ataccgtgtt tgtgaaactg agcctgttta ccgaacgc 48 <210> 116 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:9 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 36, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 116 aaraarytng ayacnttyat ggtnaarytn wsnytnttya cngarmgn 48 <210> 117 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 9 <400> 117 aaaaaactgg atacctttat ggtgaaactg agcctgttta ccgaacgc 48 <210> 118 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:10 <220> <221> misc_feature <222> 9 15, 21, 24, 30, 33, 36, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 118 aaraarytng ayacnttyws ngtnaarytn wsnytnttya cngarmgn 48 <210> 119 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 10 <400> 119 aaaaaactgg atacctttag cgtgaaactg agcctgttta ccgaacgc 48 <210> 120 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO: 11 <400> 120 aaaaaactgg atacctttgt ggtgaaactg agcctgttta ccgaacgc 48 <210> 121 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO:11 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 21, 24, 30, 33, 36, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 121 aaraarytng ayacnttygt ngtnaarytn wsnytnttya cngarmgn 48 <210> 122 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:12 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 21, 24, 30, 33, 36, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 122 aaraarytng ayacnttyac ngtnaarytn wsnytnttya cngarmgn 48 <210> 123 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 12 <400> 123 aaaaaactgg atacctttac cgtgaaactg agcctgttta ccgaacgc 48 <210> 124 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:13 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 21, 24, 30, 33, 36, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 124 aaraarytng ayacnttyyt ngtnaarytn wsnytnttya cngarmgn 48 <210> 125 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 13 <400> 125 aaaaaactgg atacctttct ggtgaaactg agcctgttta ccgaacgc 48 <210> 126 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:14 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 36, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 126 aaraarytng ayacnttytt ygtnaargtn wsnytnttya cngarmgn 48 <210> 127 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 14 <400> 127 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaagtg agcctgttta ccgaacgc 48 <210> 128 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:15 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 36, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 128 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn carytnttya cngarmgn 48 <210> 129 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 15 <400> 129 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg cagctgttta ccgaacgc 48 <210> 130 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:16 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 36, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 130 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn atgytnttya cngarmgn 48 <210> 131 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 16 <400> 131 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg atgctgttta ccgaacgc 48 <210> 132 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:17 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 36, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 132 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn acnytnttya cngarmgn 48 <210> 133 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 17 <400> 133 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg accctgttta ccgaacgc 48 <210> 134 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:18 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 134 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn cayytnttya cngarmgn 48 <210> 135 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 18 <400> 135 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg catctgttta ccgaacgc 48 <210> 136 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:19 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 136 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn wsncarttya cngarmgn 48 <210> 137 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 19 <400> 137 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg agccagttta ccgaacgc 48 <210> 138 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:20 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 36, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 138 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn wsngtnttya cngarmgn 48 <210> 139 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 20 <400> 139 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg agcgtgttta ccgaacgc 48 <210> 140 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:21 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 140 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn wsnatgttya cngarmgn 48 <210> 141 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 21 <400> 141 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg agcatgttta ccgaacgc 48 <210> 142 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:22 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 36, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 142 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn wsnytnatga cngarmgn 48 <210> 143 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 22 <400> 143 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg agcctgatga ccgaacgc 48 <210> 144 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:23 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 36, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 144 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn wsnytncara cngarmgn 48 <210> 145 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 23 <400> 145 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg agcctgcaga ccgaacgc 48 <210> 146 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:24 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 36, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 146 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn wsnytncaya cngarmgn 48 <210> 147 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 24 <400> 147 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg agcctgcata ccgaacgc 48 <210> 148 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:25 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 36, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 148 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn wsnytnaaya cngarmgn 48 <210> 149 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 25 <400> 149 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg agcctgaaca ccgaacgc 48 <210> 150 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:26 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 36, 39, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 150 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn wsnytnccna cngarmgn 48 <210> 151 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 26 <400> 151 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg agcctgccga ccgaacgc 48 <210> 152 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:27 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 36, 39, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 152 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn wsnytnwsna cngarmgn 48 <210> 153 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 27 <400> 153 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg agcctgagca ccgaacgc 48 <210> 154 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:28 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 36, 39, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 154 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn wsnytnggna cngarmgn 48 <210> 155 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 28 <400> 155 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg agcctgggca ccgaacgc 48 <210> 156 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:29 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 36, 39, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 156 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn wsnytngcna cngarmgn 48 <210> 157 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 29 <400> 157 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg agcctggcga ccgaacgc 48 <210> 158 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:30 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 36, 39, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 158 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn wsnytnmgna cngarmgn 48 <210> 159 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 30 <400> 159 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg agcctgcgca ccgaacgc 48 <210> 160 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:31 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 36, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 160 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg agcctgttta acgaacgc 48 <210> 161 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 31 <400> 161 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg agcctgttta acgaacgc 48 <210> 162 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:32 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 36, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 162 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn wsnytnttyc cngarmgn 48 <210> 163 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 32 <400> 163 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg agcctgtttc cggaacgc 48 <210> 164 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus polynucleotide encoding SEQ ID NO:33 <220> <221> misc_feature <222> 9, 15, 24, 30, 33, 36, 42, 48 <223> N=A,G,C,or T <400> 164 aaraarytng ayacnttytt ygtnaarytn wsnytnttym gngarmgn 48 <210> 165 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary NT encoding SEQ ID NO: 33 <400> 165 aaaaaactgg ataccttttt tgtgaaactg agcctgtttc gcgaacgc 48 <210> 166 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 1-5 <223> Variable length region= KKLDT RKLDT, KKGDT, KKEDT, KKLDQ, KKGDQ, KKEDQ, RKLDQ, RKGDQ, RKEDQ, RKGTD, RKEDT, KLDT, KGDT, KEDT, KLDQ, KGDQ, KEDQ, LDT, LDQ, GDT, GDQ, EDT, EDQ, DT, DQ, T, Q, <220> <221> VARIANT <222> 1-5 <223> Variable length region= or no amino acid <220> <221> VARIANT <222> 6-7 <223> Xaa Xaa= FF, FM, FS, FV, FT, FL, AF, AM, AS, AV, AT, AL, VF, VM, VS, VV, VT, or VL <220> <221> VARIANT <222> 10-11 <223> Xaa Xaa= LS, LQ, LM, LT, LH, VS, VQ, VM, VT, or VH <220> <221> VARIANT <222> 12-14 <223> Xaa Xaa Xaa=LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, <220> <221> VARIANT <222> (12)...(14) <223> Xaa Xaa Xaa=MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, <220> <221> VARIANT <222> (12)...(14) <223> Xaa Xaa Xaa=MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, <220> <221> VARIANT <222> (12)...(14) <223> Xaa Xaa Xaa=MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, <220> <221> VARIANT <222> (12)...(14) <223> Xaa Xaa Xaa=VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR, or MRR <220> <221> VARIANT <222> (15)...(16) <223> Variable length region=ER, R, or no amino acid <400> 166 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Val Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 167 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 167 Lys Lys Leu Asp Thr 1 5 <210> 168 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 168 Arg Lys Leu Asp Thr 1 5 <210> 169 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 169 Lys Lys Gly Asp Thr 1 5 <210> 170 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 170 Lys Lys Glu Asp Thr 1 5 <210> 171 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 171 Lys Lys Leu Asp Gln 1 5 <210> 172 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 172 Lys Leu Asp Thr 1 <210> 173 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 1-4 <223> Variable length region=KKLD, RKLD, KKGD, KKED, KLD, KGD, KED, LD, GD, ED, D, or no amino acid <220> <221> VARIANT <222> 12-14 <223> Xaa Xaa Xaa= LFT, LMT, LQT, LHT, LNT, LPT, LST, LGT, LAT, LRT, QFT, QMT, QQT, QHT, QNT, QPT, QST, QGT, QAT, QRT, VFT, VMT, VQT, VHT, VNT, VPT, VST, VGT, VAT, VRT, MFT, MMT, MQT, MHT, MNT, MPT, MST, <220> <221> VARIANT <222> 12-14 <223> Xaa Xaa Xaa= MGT, MAT, MRT, LFN, LMN, LQN, LHN, LNN, LPN, LSN, LGN, LAN, LRN, QFN, QMN, QQN, QHN, QNN, QPN, QSN, QGN, QAN, QRN, VFN, VMN, VQN, VHN, VNN, VPN, VSN, VGN, VAN, VRN, MFN, MMN, MQN, MHN, <220> <221> VARIANT <222> 12-14 <223> Xaa Xaa Xaa= MNN, MPN, MSN, MGN, MAN, MRN, LFP, LMP, LQP, LHP, LNP, LPP, LSP, LGP, LAP, LRP, QFP, QMP, QQP, QHP, QNP, QPP, QSP, QGP, QAP, QRP, VFP, VMP, VQP, VHP, VNP, VPP, VSP, VGP, VAP, VRP, MFP, <220> <221> VARIANT <222> 12-14 <223> Xaa Xaa Xaa= MMP, MQP, MHP, MNP, MPP, MSP, MGP, MAP, MRPR, LFR, LMR, LQR, LHR, LNR, LPR, LSR, LGR, LAR, LRR, QFR, QMR, QQR, QHR, QNR, QPR, QSR, QGR, QAR, QRR, VFR, VMR, VQR, VHR, VNR, VPR, VSR, VGR, <220> <221> VARIANT <222> (12)...(14) <223> Xaa Xaa Xaa= VAR, VRR, MFR, MMR, MQR, MHR, MNR, MPR, MSR, MGR, MAR, MRR, or no amino acid <220> <221> VARIANT <222> (15)...(16) <223> Variable length region=ER, R, or no amino acid <400> 173 Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 174 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 174 Lys Lys Leu Asp 1 <210> 175 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 175 Arg Lys Leu Asp 1 <210> 176 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 176 Lys Lys Gly Asp 1 <210> 177 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 177 Lys Lys Glu Asp 1 <210> 178 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 1-6 <223> Variable length region= KKLDTF, KLDTF, LDTF, DTF, TF, F, or no amino acid <220> <221> VARIANT <222> 7 <223> Xaa= F, S, M, V, T, L, or no amino acid <220> <221> VARIANT <222> 11 <223> Xaa= S, Q, M, T, or H <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa= F, M, Q, H, N, P, S, G, A, or R <220> <221> VARIANT <222> 16 <223> Xaa= R, or no amino acid <400> 178 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Val Lys Leu Xaa Leu Xaa Thr Glu Xaa 1 5 10 15 <210> 179 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 179 Lys Lys Leu Asp Thr Phe 1 5 <210> 180 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 180 Lys Leu Asp Thr Phe 1 5 <210> 181 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 181 Leu Asp Thr Phe 1 <210> 182 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 182 Phe Phe Val Lys 1 <210> 183 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 183 Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg 1 5 10 15 His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro 20 <210> 184 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 184 Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu 1 5 10 15 Val Arg <210> 185 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 185 Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu Ile 1 5 10 15 Lys <210> 186 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 186 Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu 1 5 10 <210> 187 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 187 Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys 1 5 <210> 188 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 188 Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg 1 5 10 15 <210> 189 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 189 Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Thr 1 5 10 <210> 190 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 190 Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu 1 5 10 <210> 191 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 191 Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser 1 5 10 <210> 192 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 192 Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu 1 5 10 <210> 193 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 193 Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe 1 5 10 <210> 194 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 194 Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg 1 5 <210> 195 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 195 Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg 1 5 10 15 <210> 196 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 196 Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu Ile 1 5 10 15 Lys <210> 197 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 197 Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg 1 5 10 <210> 198 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 198 Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys 1 5 10 15 <210> 199 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 199 Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg 1 5 <210> 200 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 200 Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys 1 5 <210> 201 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 201 Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys 1 5 10 <210> 202 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 202 Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg 1 5 <210> 203 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 203 Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg 1 5 <210> 204 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 204 Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala Lys 1 5 10 <210> 205 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 205 Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys 1 5 10 <210> 206 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 206 Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg 1 5 <210> 207 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 207 Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys 1 5 10 <210> 208 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 208 Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys 1 5 10 <210> 209 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 209 Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys 1 5 <210> 210 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 210 Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys 1 5 10 <210> 211 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 211 Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys 1 5 10 <210> 212 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 212 Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp 1 5 10 15 Arg <210> 213 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 213 Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe Lys 1 5 10 <210> 214 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 214 Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys 1 5 10 <210> 215 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 215 Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys 1 5 <210> 216 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 216 Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg 1 5 <210> 217 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 217 Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Thr Cys 1 5 10 15 Val Ala <210> 218 <211> 24 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 218 Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val Ala 1 5 10 15 Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu 20 <210> 219 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 219 Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro 1 5 10 15 Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val 20 <210> 220 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 220 Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr His 1 5 10 15 Ala <210> 221 <211> 27 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 221 Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu 1 5 10 15 Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn 20 25 <210> 222 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 222 Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met 1 5 10 15 <210> 223 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 223 Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Glu Thr Thr 1 5 10 15 Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala Lys 20 25 30 Val Phe <210> 224 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 224 Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala 1 5 10 15 Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln 20 25 30 His Lys <210> 225 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 225 Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala 1 5 10 15 Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu 20 25 30 Lys Ala Val Met 35 <210> 226 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 226 Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu 1 5 10 15 Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys His Cys Ile Ala Glu 20 25 30 Val Glu Asn 35 <210> 227 <211> 40 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 227 Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro Asp 1 5 10 15 Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Glu Thr Thr 20 25 30 Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala 35 40 <210> 228 <211> 42 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 228 Leu Gly Glu Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln 1 5 10 15 Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu 20 25 30 Val Thr Glu Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala 35 40 <210> 229 <211> 40 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 229 Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys 1 5 10 15 Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn 20 25 30 Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala 35 40 <210> 230 <211> 42 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 230 Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr 1 5 10 15 Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val 20 25 30 Asn Arg Arg Pro Phe Ser Ala Leu Glu Val 35 40 <210> 231 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 231 Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys 1 5 10 <210> 232 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 232 Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys 1 5 <210> 233 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 233 Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg 1 5 <210> 234 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P28R truncation <400> 234 Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys 1 5 10 <210> 235 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P28R truncation <400> 235 Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg 1 5 <210> 236 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 236 Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys 1 5 <210> 237 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 237 Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys 1 5 10 <210> 238 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 238 Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys 1 5 10 <210> 239 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 239 His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg 1 5 10 <210> 240 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 240 Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala Lys 1 5 10 <210> 241 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 241 Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys 1 5 10 <210> 242 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 242 Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg 1 5 <210> 243 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 243 Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg 1 5 <210> 244 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 244 Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys 1 5 10 <210> 245 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 245 Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys 1 5 <210> 246 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 246 Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg 1 5 <210> 247 <211> 272 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 247 Met Asp Ser Tyr Leu Leu Met Trp Gly Leu Leu Thr Phe Ile Met Val 1 5 10 15 Pro Gly Cys Gln Ala Glu Leu Cys Asp Asp Asp Pro Pro Glu Ile Pro 20 25 30 His Ala Thr Phe Lys Ala Met Ala Tyr Lys Glu Gly Thr Met Leu Asn 35 40 45 Cys Glu Cys Lys Arg Gly Phe Arg Arg Ile Lys Ser Gly Ser Leu Tyr 50 55 60 Met Leu Cys Thr Gly Asn Ser Ser His Ser Ser Trp Asp Asn Gln Cys 65 70 75 80 Gln Cys Thr Ser Ser Ala Thr Arg Asn Thr Thr Lys Gln Val Thr Pro 85 90 95 Gln Pro Glu Glu Gln Lys Glu Arg Lys Thr Thr Glu Met Gln Ser Pro 100 105 110 Met Gln Pro Val Asp Gln Ala Ser Leu Pro Gly His Cys Arg Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Trp Glu Asn Glu Ala Thr Glu Arg Ile Tyr His Phe Val Val 130 135 140 Gly Gln Met Val Tyr Tyr Gln Cys Val Gln Gly Tyr Arg Ala Leu His 145 150 155 160 Arg Gly Pro Ala Glu Ser Val Cys Lys Met Thr His Gly Lys Thr Arg 165 170 175 Trp Thr Gln Pro Gln Leu Ile Cys Thr Gly Glu Met Glu Thr Ser Gln 180 185 190 Phe Pro Gly Glu Glu Lys Pro Gln Ala Ser Pro Glu Gly Arg Pro Glu 195 200 205 Ser Glu Thr Ser Cys Leu Val Thr Thr Thr Asp Phe Gln Ile Gln Thr 210 215 220 Glu Met Ala Ala Thr Met Glu Thr Ser Ile Phe Thr Thr Glu Tyr Gln 225 230 235 240 Val Ala Val Ala Gly Cys Val Phe Leu Leu Ile Ser Val Leu Leu Leu 245 250 255 Ser Gly Leu Thr Trp Gln Arg Arg Gln Arg Lys Ser Arg Arg Thr Ile 260 265 270 <210> 248 <211> 1170 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 248 Met Lys Asp Ser Cys Ile Thr Val Met Ala Met Ala Leu Leu Ser Gly 1 5 10 15 Phe Phe Phe Phe Ala Pro Ala Ser Ser Tyr Asn Leu Asp Val Arg Gly 20 25 30 Ala Arg Ser Phe Ser Pro Pro Arg Ala Gly Arg His Phe Gly Tyr Arg 35 40 45 Val Leu Gln Val Gly Asn Gly Val Ile Val Gly Ala Pro Gly Glu Gly 50 55 60 Asn Ser Thr Gly Ser Leu Tyr Gln Cys Gln Ser Gly Thr Gly His Cys 65 70 75 80 Leu Pro Val Thr Leu Arg Gly Ser Asn Tyr Thr Ser Lys Tyr Leu Gly 85 90 95 Met Thr Leu Ala Thr Asp Pro Thr Asp Gly Ser Ile Leu Ala Cys Asp 100 105 110 Pro Gly Leu Ser Arg Thr Cys Asp Gln Asn Thr Tyr Leu Ser Gly Leu 115 120 125 Cys Tyr Leu Phe Arg Gln Asn Leu Gln Gly Pro Met Leu Gln Gly Arg 130 135 140 Pro Gly Phe Gln Glu Cys Ile Lys Gly Asn Val Asp Leu Val Phe Leu 145 150 155 160 Phe Asp Gly Ser Met Ser Leu Gln Pro Asp Glu Phe Gln Lys Ile Leu 165 170 175 Asp Phe Met Lys Asp Val Met Lys Lys Leu Ser Asn Thr Ser Tyr Gln 180 185 190 Phe Ala Ala Val Gln Phe Ser Thr Ser Tyr Lys Thr Glu Phe Asp Phe 195 200 205 Ser Asp Tyr Val Lys Arg Lys Asp Pro Asp Ala Leu Leu Lys His Val 210 215 220 Lys His Met Leu Leu Leu Thr Asn Thr Phe Gly Ala Ile Asn Tyr Val 225 230 235 240 Ala Thr Glu Val Phe Arg Glu Glu Leu Gly Ala Arg Pro Asp Ala Thr 245 250 255 Lys Val Leu Ile Ile Ile Thr Asp Gly Glu Ala Thr Asp Ser Gly Asn 260 265 270 Ile Asp Ala Ala Lys Asp Ile Ile Arg Tyr Ile Ile Gly Ile Gly Lys 275 280 285 His Phe Gln Thr Lys Glu Ser Gln Glu Thr Leu His Lys Phe Ala Ser 290 295 300 Lys Pro Ala Ser Glu Phe Val Lys Ile Leu Asp Thr Phe Glu Lys Leu 305 310 315 320 Lys Asp Leu Phe Thr Glu Leu Gln Lys Lys Ile Tyr Val Ile Glu Gly 325 330 335 Thr Ser Lys Gln Asp Leu Thr Ser Phe Asn Met Glu Leu Ser Ser Ser 340 345 350 Gly Ile Ser Ala Asp Leu Ser Arg Gly His Ala Val Val Gly Ala Val 355 360 365 Gly Ala Lys Asp Trp Ala Gly Gly Phe Leu Asp Leu Lys Ala Asp Leu 370 375 380 Gln Asp Asp Thr Phe Ile Gly Asn Glu Pro Leu Thr Pro Glu Val Arg 385 390 395 400 Ala Gly Tyr Leu Gly Tyr Thr Val Thr Trp Leu Pro Ser Arg Gln Lys 405 410 415 Thr Ser Leu Leu Ala Ser Gly Ala Pro Arg Tyr Gln His Met Gly Arg 420 425 430 Val Leu Leu Phe Gln Glu Pro Gln Gly Gly Gly His Trp Ser Gln Val 435 440 445 Gln Thr Ile His Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Gly Glu Leu 450 455 460 Cys Gly Val Asp Val Asp Gln Asp Gly Glu Thr Glu Leu Leu Leu Ile 465 470 475 480 Gly Ala Pro Leu Phe Tyr Gly Glu Gln Arg Gly Gly Arg Val Phe Ile 485 490 495 Tyr Gln Arg Arg Gln Leu Gly Phe Glu Glu Val Ser Glu Leu Gln Gly 500 505 510 Asp Pro Gly Tyr Pro Leu Gly Arg Phe Gly Glu Ala Ile Thr Ala Leu 515 520 525 Thr Asp Ile Asn Gly Asp Gly Leu Val Asp Val Ala Val Gly Ala Pro 530 535 540 Leu Glu Glu Gln Gly Ala Val Tyr Ile Phe Asn Gly Arg His Gly Gly 545 550 555 560 Leu Ser Pro Gln Pro Ser Gln Arg Ile Glu Gly Thr Gln Val Leu Ser 565 570 575 Gly Ile Gln Trp Phe Gly Arg Ser Ile His Gly Val Lys Asp Leu Glu 580 585 590 Gly Asp Gly Leu Ala Asp Val Ala Val Gly Ala Glu Ser Gln Met Ile 595 600 605 Val Leu Ser Ser Arg Pro Val Val Asp Met Val Thr Leu Met Ser Phe 610 615 620 Ser Pro Ala Glu Ile Pro Val His Glu Val Glu Cys Ser Tyr Ser Thr 625 630 635 640 Ser Asn Lys Met Lys Glu Gly Val Asn Ile Thr Ile Cys Phe Gln Ile 645 650 655 Lys Ser Leu Ile Pro Gln Phe Gln Gly Arg Leu Val Ala Asn Leu Thr 660 665 670 Tyr Thr Leu Gln Leu Asp Gly His Arg Thr Arg Arg Arg Gly Leu Phe 675 680 685 Pro Gly Gly Arg His Glu Leu Arg Arg Asn Ile Ala Val Thr Thr Ser 690 695 700 Met Ser Cys Thr Asp Phe Ser Phe His Phe Pro Val Cys Val Gln Asp 705 710 715 720 Leu Ile Ser Pro Ile Asn Val Ser Leu Asn Phe Ser Leu Trp Glu Glu 725 730 735 Glu Gly Thr Pro Arg Asp Gln Arg Ala Gln Gly Lys Asp Ile Pro Pro 740 745 750 Ile Leu Arg Pro Ser Leu His Ser Glu Thr Trp Glu Ile Pro Phe Glu 755 760 765 Lys Asn Cys Gly Glu Asp Lys Lys Cys Glu Ala Asn Leu Arg Val Ser 770 775 780 Phe Ser Pro Ala Arg Ser Arg Ala Leu Arg Leu Thr Ala Phe Ala Ser 785 790 795 800 Leu Ser Val Glu Leu Ser Leu Ser Asn 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<223> Synthetic peptide <400> 333 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Phe Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 334 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 334 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Gly Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 335 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 335 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Ile Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 336 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 336 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Met Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 337 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 337 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Asn Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 338 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 338 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Pro Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 339 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 339 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Gln Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 340 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 340 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Arg Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 341 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 341 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Ser Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 342 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 342 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Thr Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 343 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 343 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Val Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 344 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 344 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Tyr Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 345 <211> 16 <212> PRT 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16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 351 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser His Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 352 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 352 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Ile Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 353 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 353 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Met Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 354 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 354 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Asn Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 355 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 355 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Gln Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 356 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 356 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Arg Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 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Arg 1 5 10 15 <210> 363 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 363 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Gly Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 364 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 364 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu His Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 365 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 365 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Ile Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 366 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 366 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Leu Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 367 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 367 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Met Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 368 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 368 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Asn Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 369 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 369 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Pro Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 370 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 370 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Gln Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 371 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 371 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Arg Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 372 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 372 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Ser Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 373 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 373 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Thr Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 374 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 374 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 375 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 375 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Trp Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 376 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 376 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Phe Glu Arg 1 5 10 15 <210> 377 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 377 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Gly Glu Arg 1 5 10 15 <210> 378 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 378 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe His Glu Arg 1 5 10 15 <210> 379 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 379 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Ile Glu Arg 1 5 10 15 <210> 380 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 380 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Leu Glu Arg 1 5 10 15 <210> 381 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 381 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Met Glu Arg 1 5 10 15 <210> 382 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 382 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Asn Glu Arg 1 5 10 15 <210> 383 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 383 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Pro Glu Arg 1 5 10 15 <210> 384 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 384 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Ser Glu Arg 1 5 10 15 <210> 385 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 385 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Val Glu Arg 1 5 10 15 <210> 386 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 386 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Trp Glu Arg 1 5 10 15 <210> 387 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 387 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Asp Arg 1 5 10 15 <210> 388 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 388 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Phe 1 5 10 15 <210> 389 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 389 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Lys 1 5 10 15 <210> 390 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 390 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Asn 1 5 10 15 <210> 391 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 391 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 392 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 392 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Thr 1 5 10 15 <210> 393 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 393 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Tyr 1 5 10 15 <210> 394 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V, or absent <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = L, A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, Q, R, S, T, V, or absent <220> <221> VARIANT <222> 4 <223> Xaa = D, A, E, I, V, W, Y, or absent <220> <221> VARIANT <222> 5 <223> Xaa = T, C, M, N, P, Q, R, S, W, Y, or absent <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = F, A, I, M, N, P, T, V, or absent <220> <221> VARIANT <222> (7)...(7) <223> Xaa = F, L, M, Q, S, T, V, or absent <220> <221> VARIANT <222> (8)...(8) <223> Xaa = V, F, G, L, P, R, or absent <220> <221> VARIANT <222> (10)...(10) <223> Xaa = L,A,F,G,I,M,N,P,Q,R,S,T,V,Y, or absent <220> <221> VARIANT <222> (11)...(11) <223> Xaa = S, H, M, N, Q, T, or absent <220> <221> VARIANT <222> (12)...(12) <223> Xaa = L, A, H, I, M, N, Q, R, S, T, V, W, or absent <220> <221> VARIANT <222> (13)...(13) <223> XAa = F, A, C, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, or absent <220> <221> VARIANT <222> (14)...(14) <223> Xaa = T, F, G, H, I, L, M, N, P, S, V, W or absent <220> <221> VARIANT <222> (16)...(16) <223> Xaa = R, F, K, N, R, T, Y or absent <400> 394 Xaa Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Xaa 1 5 10 15 <210> 395 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = K, A, D, E, G, H, I, L, M, N, P, Q, R, T, V, or absent <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = LDTFFV, GDTFFV, EDTFFV, LDQFFV, LDTAFV, LDTVFV, LDTFMV, LDTFSV, LDTFVV, LDTFTV, LDTFLV, LDGFFV, LDTFGV, LDTFFK, ADTFFV, CDTFFV, DDTFFV, FDTFFV, HDTFFV, IDTFFV, KDTFFV, MDTFFV, NDTFFV, <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = QDTFFV, RDTFFV, SDTFFV, TDTFFV, VDTFFV, LATFFV, LETFFV, LITFFV, LVTFFV, LWTFFV, LYTFFV, LDCFFV, LDMFFV, LDNFFV, LDPFFV, LDRFFV, LDSFFV, LDWFFV, LDYFFV, LDTIFV, LDTMFV, LDTNFV, LDTPFV, <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = LDTTFV, LDTFQV, LDTFFF, LDTFFG, LDTFFL, LDTFFP, LDTFFR, LDTFIV, LDTSFV, LDTFAV, LDTFCV, LDTQFV, LDTLFV, LTTFFV, LDTFFI, LDHFFV, LMTFFV, LDTFEV, LDTFWV, LFTFFV, LDVFFV, LDTFRV, LDTFHV, <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = LDTYFV, LPTFFV, PDTFFV, LDTFPV, LDTFNV, LDTWFV, LDTGFV, LDAFFV, LQTFFV, LCTFFV, LSTFFV, YDTFFV, LDEFFV, WDTFFV, LDTKFV, LDTCFV, LDTFYV, LDTHFV, LHTFFV, LRTFFV, LDLFFV, LDTRFV, LLTFFV, <220> <221> VARIANT <222> (3)...(3) <223> Xaa = LDTFDV, LDTFFA, LDTFFT, LNTFFV, LDDFFV, LDIFFV, LDFFFV, LKTFFV, LDTFFQ, LGTFFV, LDTFFC, LDKFFV, LDTFKV, LDTEFV, LDTFFW, LDTFFM, LDTFFS, LDTFFH, LDTFFY, LDTFFN, LDTDFV, LDTFFE, LDTFFD, <220> <221> VARIANT <222> (3)...(3) <223> Xaa = LTFFV, LDTFF, TFFV, LDF, LDTE, FFV, LDV, LV, L, or absent <220> <221> VARIANT <222> (5)...(5) <223> Xaa = LSLFT, VSLFT, LQLFT, LMLFT, LTLFT, LHLFT, LSQFT, LSVFT, LSMFT, LSLMT, LSLQT, LSLHT, LSLNT, LSLPT, LSLST, LSLGT, LSLAT, LSLRT, LSLFN, LSLFP, LSLFR, LGLFT, ASLFT, FSLFT, GSLFT, ISLFT, MSLFT, <220> <221> VARIANT <222> (5)...(5) <223> Xaa = NSLFT, PSLFT, QSLFT, RSLFT, SSLFT, TSLFT, YSLFT, LNLFT, LSAFT, LSHFT, LSIFT, LSNFT, LSRFT, LSSFT, LSTFT, LSWFT, LSLCT, LSLIT, LSLLT, LSLTT, LSLVT, LSLWT, LSLFF, LSLFG, LSLFH, LSLFI, LSLFL, <220> <221> VARIANT <222> (5)...(5) <223> Xaa = LSLFM, LSLFS, LSLFV, LSLFW, LYLFT, LVLFT, LSFFT, LSGFT, LSKFT, LSCFT, LCLFT, LRLFT, LPLFT, LWLFT, LKLFT, LDLFT, LSYFT, LALFT, WSLFT, LSLFA, LSLFQ, LSPFT, HSLFT, LSLYT, LILFT, KSLFT, CSLFT, <220> <221> VARIANT <222> (5)...(5) <223> Xaa = LSLFY, LSLFK, LSLFC, LFLFT, LELFT, LSLKT, LLLFT, LSLFD, LSLDT, LSLFE, DSLFT, LSLET, LSDFT, LSEFT, ESLFT, SLFT, LSFT, LFT, LSL, LT, T, or absent <220> <221> VARIANT <222> (7)...(7) <223> Xaa = R, F, K, N, R, T, Y, or absent <400> 395 Xaa Lys Xaa Lys Xaa Glu Xaa 1 5 <210> 396 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 396 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 397 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 397 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Ile Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 398 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 398 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 399 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 399 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 400 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 400 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 401 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 401 Lys Lys Leu Asp Thr Ser Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 402 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 402 Lys Asn Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 403 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 403 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 404 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 404 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Ala Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 405 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 405 Lys Pro Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 406 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 406 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 407 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 407 Lys Arg Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 408 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 408 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 409 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 409 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Cys Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 410 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 410 Lys Lys Leu Asp Thr Gln Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 411 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 411 Lys Lys Leu Asp Thr Leu Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 412 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 412 Lys Gly Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 413 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 413 Lys Lys Leu Thr Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 414 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 414 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 415 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 415 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Tyr Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 416 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 416 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Ile Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 417 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 417 Lys Met Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 418 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 418 Lys His Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 419 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 419 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Val Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 420 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 420 Lys Lys Leu Asp His Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 421 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 421 Lys Phe Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 422 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 422 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Phe Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 423 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 423 Lys Lys Leu Met Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 424 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 424 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Glu Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 425 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 425 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Trp Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 426 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 426 Lys Lys Leu Phe Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 427 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 427 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 428 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 428 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 429 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 429 Lys Lys Leu Asp Val Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 430 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 430 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 431 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 431 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Gly Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 432 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 432 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Arg Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 433 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 433 Lys Lys Leu Asp Thr Phe His Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 434 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 434 Lys Lys Leu Asp Thr Tyr Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 435 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 435 Lys Lys Leu Pro Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 436 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 436 Lys Lys Pro Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 437 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 437 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Pro Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 438 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 438 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Lys Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 439 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 439 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Pro Arg 1 5 10 15 <210> 440 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 440 Lys Gln Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 441 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 441 Lys Glu Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 442 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 442 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 443 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 443 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Asn Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 444 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 444 Lys Lys Leu Asp Thr Trp Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 445 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 445 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Thr Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 446 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 446 Lys Lys Leu Asp Thr Gly Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 447 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 447 Lys Lys Leu Asp Ala Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 448 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 448 Lys Lys Leu Gln Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 449 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 449 Lys Lys Leu Cys Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 450 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 450 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Gln Arg 1 5 10 15 <210> 451 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 451 Lys Lys Leu Ser Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 452 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 452 Lys Lys Tyr Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 453 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 453 Ser Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 454 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 454 Lys Leu Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 455 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 455 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Cys Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 456 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 456 Lys Lys Leu Asp Glu Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 457 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 457 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Cys Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 458 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 458 Lys Lys Trp Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 459 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 459 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Tyr Arg 1 5 10 15 <210> 460 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 460 Lys Lys Leu Asp Thr Lys Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 461 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 461 Lys Asp Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 462 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 462 Lys Lys Leu Asp Thr Cys Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 463 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 463 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Tyr Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 464 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 464 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Arg Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 465 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 465 Phe Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 466 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 466 Lys Lys Leu Asp Thr His Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 467 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 467 Lys Ile Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 468 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 468 Lys Thr Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 469 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 469 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Gln Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 470 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 470 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Pro Leu Phe Thr 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Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 575 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 575 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Asp Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 576 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 576 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Glu Glu Arg 1 5 10 15 <210> 577 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 577 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Glu 1 5 10 15 <210> 578 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 578 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Asp Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 579 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 579 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Glu Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 580 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 580 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Asp Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 581 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 581 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Glu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 582 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 582 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Glu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 583 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 583 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Met Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 584 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 584 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Gln Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 585 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 585 Lys Lys Leu Asp Thr Val Met Val Lys Leu Gln Leu Met Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 586 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 586 Arg Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 Arg Arg <210> 587 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 587 Lys Ser Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 588 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 588 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Phe Arg 1 5 10 15 <210> 589 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 589 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Tyr Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 590 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 590 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Asn Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 591 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 591 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Asp Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 592 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 592 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Pro Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 593 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 593 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Met Val Lys Leu Ser Gln His Thr Glu Arg 1 5 10 15 <210> 594 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> 17 <223> Pegylation <400> 594 Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg 1 5 10 15 Cys <210> 595 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 595 Lys Lys Leu Asp Gln Phe Phe Val Lys Leu Ser Gln His Asn Glu Arg 1 5 10 15

Claims (88)

1. 아미노산 서열 FFVKLS (서열 62)를 포함하며, 30개 이하의 아미노산을 포함하고, 여기서 아미노산 서열 VFDEFKPLVEEPQNLIK (서열 185)로 이루어진 제2 펩티드와 접촉하는 경우에, 제2 펩티드에 특이적으로 결합하는 단리된 펩티드.
2. 제1항에 있어서, 아미노산 서열 KKLDTFFVKLSLFTER (서열 2)을 포함하는 단리된 펩티드.
3. 제1항에 있어서, 아미노산 서열 RKLDTFFVKLSLFTERRR (서열 586)을 포함하는 단리된 펩티드.
4. 제1항에 있어서, 아미노산 서열 FFVKLS (서열 62)로 이루어진 단리된 펩티드.
5. 제1항에 있어서, 아미노산 서열 KKLDTFFVKLSLFTER (서열 2)로 이루어진 단리된 펩티드.
6. 제1항에 있어서, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7 또는 6개 이하의 아미노산의 길이를 갖는 단리된 펩티드.
7. 제2항에 있어서, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7 또는 6개 이하의 아미노산의 길이를 갖는 단리된 펩티드.
8. 제3항에 있어서, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7 또는 6개 이하의 아미노산의 길이를 갖는 단리된 펩티드.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제약상 허용되는 담체 또는 희석제 중에 있는 단리된 펩티드.
10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 합성 펩티드를 포함하는 단리된 펩티드.
11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 지지체에 결합되는 단리된 펩티드.
12. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 단리된 펩티드; 및
    제약상 허용되는 담체 또는 희석제
    를 포함하는 암의 치료에 사용하기 위한 조성물.
13. 제12항에 있어서, 트리즈마(Trizma), 비신(Bicine), 트리신(Tricine), MOPS, MOPSO, MOBS, 트리스(Tris), 헤페스(Hepes), HEPBS, MES, 포스페이트, 카르보네이트, 아세테이트, 시트레이트, 글리콜레이트, 락테이트, 보레이트, ACES, ADA, 타르트레이트, AMP, AMPD, AMPSO, BES, CABS, 카코딜레이트, CHES, DIPSO, EPPS, 에탄올아민, 글리신, HEPPSO, 이미다졸, 이미다졸락트산, PIPES, SSC, SSPE, POPSO, TAPS, TABS, TAPSO 및 TES로 이루어진 군으로부터 선택된 완충제를 포함하는 조성물.
14. 제12항에 있어서, 암이 결장직장암, 신암, 유방암, 피부암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 악성 흑색종, 소세포 폐암, 비소세포 폐암 (선암종), 편평 세포 암종, 방광암, 골육종, 기관지암 또는 조혈 세포 암 중 적어도 하나를 포함하는 것인 조성물.
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