KR102087651B1

KR102087651B1 - 카레야 아르보레아 추출물을 이용한 아토피 피부염 개선용 조성물

Info

Publication number: KR102087651B1
Application number: KR1020190078742A
Authority: KR
Inventors: 강재신; 이재호; 유은화; 마스팔 크라이; 킴선 챙; 정영훈; 안은경; 이재연
Original assignee: 대한민국(환경부 국립생물자원관장); 재단법인 경기도경제과학진흥원
Priority date: 2016-06-10
Filing date: 2019-07-01
Publication date: 2020-03-12
Also published as: KR20190095173A; KR20170140099A

Abstract

본 발명은 INF-γ와 TNF-α로 처리된 인간각질형성세포주인 HaCaT 세포에서 MDC 및 TARC의 발현을 억제하고, DNCB(dintrochlorobenzene)로 아토피 피부염이 유발된 동물모델에서 아토피 중증도 지수(SCORAD index)를 낮추고 혈중 IgE의 농도를 낮추는 등 아토피 피부염에 유효한 카레야 아르보레아 추출물을 개시한다.

Description

카레야 아르보레아 추출물을 이용한 아토피 피부염 개선용 조성물{Composition for Improving Atopy Dermatitis Using an Extract of Careya arborea}

본 발명은 카레야 아르보레아(Careya arborea) 추출물을 이용한 아토피 피부염 개선용 조성물에 관한 것이다.

아토피 피부염은 재발성 만성 피부질환으로, 영유아기에서 흔히 발생하지만 성인까지도 지속되거나 성인이 되어서 새롭게 발병할 수도 있으며 최근 그 유병률이 증가하고 있는 추세이다(Kor J Pharmacogn., 43:59-65, 2012). 아토피 피부염은 소양감, 피부 건조증, 모낭 주위 항진, 구순염, 태선화, 습진 양병변 등의 증상을 특징적으로 나타낸다(Korean J Invest Dermatol., 14:67-72, 2007).

아토피 피부염의 원인은 아직까지 명확히 규명되어 있지 않으나, IgE의 비정상적 증가, 세포 면역의 중추적 역할을 담당하는 T 세포의 수적 감소와 기능 저하, 단핵구와 대식세포의 침윤, 비만세포와 호산구의 수적 증가, CD4+ T 림프구 등의 수적 증가 등의 면역학적 요인이 보고되어 있으며(J Invest Dermatol., 96:523-526, 1991; J Invest Dermatol., 97:389-394, 1991; Immunol., 11:81-88, 1999; Curr Drug Targets Inflamm Allergy., 2:199-120, 2003; J Allergy Clin Immunol., 107:871-877, 2001; Adv Immunol., 78:57, 2001; International Immunology, 14(7):767-773, 2002; Pediatr Allergy Immunol., 19:605-613, 2008), 특히 Th1 세포에 비해 Th2 세포의 수적 증가로 인한 Th1/Th2 불균형이 중요한 요인으로 알려져 있다(Kor J Pharmacogn, 43:59-65, 2012).

인체의 외부 침입에 대한 방어 기작인 면역 체계는 T 세포의 활성화를 중심으로 이루어진다. Th1 세포가 생산하는 IL-2, IFN-γ, TNF 등 사이토카인들은 Th1 세포의 분화를 유도하고 Th2 세포의 증식과 분화를 억제하는 반면, Th2 세포가 생산하는 IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13 등 사이토카인들은 Th2 세포의 증식과 분화를 유도하고 Th1 세포의 분화를 억제한다(J Am Acad Dermatol., 44, S1-S12, 2001). 정상적인 상태에서는 Th1 세포와 Th2 세포 간의 상호작용으로 균형을 이루면서 면역반응을 유지하지만, 아토피 피부염에서는 T 세포의 Th2 세포로의 전환이 촉진되고 증가된 Th2 세포가 많은 양의 사이토카인을 분비시켜 IgE 생성을 증가시키며 비만세포(mast cell)와 호산구 (eosinophil) 분화를 유도시킴으로써 과민반응을 유발한다(J Clin Invest. 113(5):651-7, 2004; J Allergy Clin Immunol. 2003;112(2):252-62; Kor J Pharmacogn, 43:59-65, 2012).

케모카인(chemokine)은 저분자 단백질로 화학주성(chemoattractants)을 나타내며 그 구조와 기능에 따라 C, CC, CXC 및 CX3C 등 4 가지로 나누어지는데, 최근 이러한 케모카인들이 면역세포의 발생과 성숙, T 세포의 분화와 이주, Th1/Th2 균형 조절 등에 중요한 역할을 하는 것으로 보고 있다.

다양한 케모카인들 중 TARC(Thymus & activation-regulated chemokine)와 MDC(macrophage-derived chemokine)은 Th2 세포에 작용하는 대표적인 CC 케모카인으로, Th2 세포의 CCR4(CC chemokine receptor 4)에 작용하여 염증 병변으로 Th2 세포의 이동과 침윤을 유도한다(J Clin Invest. 113(5):651-7, 2004; Curr Allergy Asthma Rep. 5(4):284-90, 2005)

최근 아토피 피부염 환자에서 TARC와 MDC의 혈청 농도가 현저히 증가한다는 보고가 있고(J Allergy Clin Immunol., 113(2):334-340), 아토피 피부염 동물모델에서 TARC와 MDC의 피부발현이 증가된다는 보고가 있으며, 아토피 피부염의 치료 물질로 사용되는 사이크로스포린 A나 코르티코스테로이드를 아토피 피부염 환자에게 투여하였을 때는 MDC 및 TARC의 혈청 농도가 감소한다는 보고가 있다(J Dermatol Sci., 34:201-208, 2004). 또한 시험관내 실험에서 인간각질형성세포주인 HaCaT 세포에 INF-γ나 TNF-α를 처리하였을 때 MDC 및 TARC가 다량 발현되는데 이러한 발현을 억제할 수 있는 물질은 아토피 피부염 치료제로 사용될 수 있음이 제시된 바 있다(Int Immunol., 14(7):767-773, 2002).

최근에는 면역학적 기전뿐만 아니라 피부장벽의 손상도 아토피성 피부염 악화의 주요한 요인으로 대두되고 있다. 표피 중에서도 가장바깥에 존재하는 각질층은 각질 형성세포로부터 형성되며, 분화된 각질 세포와 그를 둘러싼 지질층으로 구성되어 있다. 이러한 피부장벽은 과도한 세안이나 목욕 등의 생활 습관이나 건조한 대기, 오염물질 등의 환경적 요인 및 각질 형성세포의 지질합성능력 저하 등과 같은 내인성 질환 등으로 인해 쉽게 손상되어 아토피성 피부염을 유발하는 것이다. 따라서 아토피성 피부염은 태선화, 인설 및 건조와 같은 증상을 나타낸다. 또한 급·만성기 전반에 걸쳐 소양감이 발생하게 되는데, 이는 긁는 행위로 인해 창상, 2차 감염 등 2차적인 피부증상 악화를 초래하기 때문에 아토피성 피부염 치료에 있어서 중요시되고 있다.

이에 따라 아토피성 피부염 실험시에는 혈중 면역 물질의 생성을 확인할 뿐 아니라 피부자극 모델, 식이유도모델, 환경유도모델, 오발부민(ovalbumin) 피부감작 모델 등 동물모델을 사용하여 직접적인 피부증상을 확인하게 된다. 일반적으로는 오발부민 피부감작 모델과 피부자극 모델을 많이 사용하고 있으나 오발부민 피부감작 모델은 화학물질 피부자극 모델에 비해 상대적으로 유발하는데 걸리는 시간이 비교적 길며, 실제 피부염 증상은 눈으로 확인하기 어렵기 때문에 피부자극모델이 선호되는 경향을 보인다. 피부자극모델은 화학물질(DNCB: dintrochlorobenzene, DNFB: dinitrofluorobenzene, PiCl: picryl chloride)을 이용하여 아토피성 피부염을 유발하는 방법인데, 이는 급성 아토피 유발 모델로 비교적 빠른 기간 안에 피부염을 유발할 수 있으며 유발시 눈으로 태선 및 수포를 눈으로 확인할 수 있는 장점이 있어 연구에 유용하다.

현재 아토피성 피부염 치료제로 염증 반응과 cytokine 생산을 억제 하는 스테로이드제가 주로 이용되고 있으나, 장기간 투여 할 경우 피부의 위축이나 성장 지연 가능성 등 여러 가지 부작용을 초래하여 최근에는 비스테로이드제의 사용이 증가하고 있다. 그러나 비스테로이드제 역시 홍반, 가려움, 부종, 짓무름 및 태선화 등의 증상과 면역력 약화 등의 다양한 부작용을 가지고 있어 근본적인 아토피성 피부염의 치료가 어려운 실정이다(Arellano FM et al., J Invest Dermatol. 2007 Apr;127(4):808-16.). 따라서 상대적으로 안전성이 높은 천연물로부터 치료 효과가 우수한 물질을 찾기 위한 연구가 필요하다.

본 발명은 카레야 아르보레아 추출물의 항아토피 활성을 개시한다.

본 발명의 목적은 카레야 아르보레아 추출물을 이용한 아토피 피부염 개선용 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.

본 발명은 카레야 아르보레아 추출물이 INF-γ와 TNF-α로 처리된 인간각질형성세포주인 HaCaT 세포에서 MDC 및 TARC의 발현을 억제하고, DNCB(dintrochlorobenzene)로 아토피 피부염이 유발된 동물모델에서 아토피 중증도 지수(SCORAD index)를 낮추고 혈중 IgE의 농도를 낮추는 등 아토피 피부염에 유효함을 확인함으로써 완성된 것이다.

전술한 바를 고려할 때, 본 발명의 아토피 피부염 개선용 조성물은 카레야 아르보레아 추출물을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.

본 명세서에서, "카레야 아르보레아 추출물"이란 추출 대상인 카레야 아르보레아의 줄기, 잎, 열매, 꽃, 뿌리 등을 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜(메탄올, 에탄올, 부탄올 등), 메틸렌클로라이드, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, N,N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 침출하여 얻어진 추출물, 이산화탄소, 펜탄 등 초임계 추출 용매를 사용하여 얻어진 추출물 또는 그 추출물을 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 추출 방법은 활성물질의 극성, 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출 등 임의의 방법을 적용할 수 있다. 분획된 추출물의 경우 추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합·정치시켜 얻은 분획물, 상기 조추출물을 실리카겔 등이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 소수성 용매, 친수성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다. 또한 상기 추출물의 의미에는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 등의 방식으로 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물이 포함된다. 바람직하게는 추출용매로서 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물, 더 바람직하게는 추출용매로서 물과 에탄올의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물을 의미한다.

또 본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

또 본 명세서에서, "아토피 피부염"은 그 발생의 직·간접적인 원인을 불문하고 피부 과민 면역 반응을 수반하여 당업계에서 아토피 피부염로 분류되는 모든 질환을 포함하는 것으로 정의된다. 통상 아토피 피부염은 그 발병 시기 또는 그 발명 대상에 따라 유아형 아토피 피부염, 소아형 아토피 피부염, 성인형 아토피 피부염 그리고 임산부 아토피 피부염으로 분류되는데, 본 명세서에서 아토피 피부염은 이러한 모든 유형의 아토피 피부염을 포함한다.

또 본 명세서에서, "개선"은 아토피 피부염 치료, 예방 및 개선(증상의 경감)을 포함하는 의미이다.

본 발명의 조성물은 그 유효성분을 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 치료를 의도하는 아토피 피부염 개선 활성 또는 피부 과민 면역 반응 억제 활성 등을 나타낼 수 있는 한 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 15 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 그 적용 대상인 포유동물 바람직하게는 사람에게 의료 전문가 등의 제언에 의한 투여 기간 동안 본 발명의 조성물이 투여될 때, 과민 면역 등에 의한 아토피 피부염 개선 효과 등 의도한 의료적·약리학적 효과를 나타낼 수 있는, 본 발명의 조성물에 포함되는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.

본 발명의 면역억제 조성물은 유효성분 이외에, 피부 과민 면역 억제 효과의 상승·보강 등을 위하여 또는 항염증 활성, 피부 보호 활성(자외선에 의한 피부 손상 억제, 피부 보습 등) 등 유사활성의 부가를 통한 복용이나 섭취의 편리성을 증진시키기 위하여, 당업계에서 이미 안전성이 검증되고 해당 활성을 갖는 것으로 공지된 임의의 화합물이나 천연 추출물을 추가로 포함할 수 있다.

이러한 화합물 또는 추출물에는 각국 약전(한국에서는 "대한민국약전"), 각국 건강기능식품공전(한국에서는 식약처 고시인 "건강기능식품 기준 및 규격"임) 등의 공정서에 실려 있는 화합물 또는 추출물, 의약품의 제조·판매를 규율하는 각국의 법률(한국에서는 "약사법"임)에 따라 품목 허가를 받은 화합물 또는 추출물, 건강기능식품의 제조·판매를 규율하는 각국 법률(한국에서는 「건강기능식품에관한법률」임)에 따라 기능성이 인정된 화합물 또는 추출물이 포함된다. 예컨대 한국 「건강기능식품에관한법률」에 따라 '과민 면역반응 완화'로 개별적으로 기능성을 인정받은 Enterococcus faecalis 가열 처리 건조 분말, 구아바 잎 추출물 등의 복합물, 다래 추출물, 소엽 추출물, 피카오프레토 분말 등의 복합물, PLAG(1-palmitoyl-2-linoleoyl-3-acetyl-rac-glycerol) 등과, '과민피부상태 개선'으로 개별적으로 기능성을 인정받은 L. sakei Probio 65, 감마리놀렌산 함유 유지, 과채 유래 유산균인 L.plantarum CJLP133, 프로바이오틱스 ATP 등이 이러한 화합물 또는 추출물에 해당할 것이다.

이러한 화합물 또는 천연 추출물은 본 발명의 조성물에 그 유효성분과 함께 하나 이상 포함될 수 있다.

본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 식품 조성물로서 파악할 수 있다. 본 발명의 조성물이 식품 조성물로 파악될 경우 그 용도는 피부 과민 반응 억제 또는 과민 반응 억제로 이해될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 어떠한 형태로도 제조될 수 있으며, 예컨대 차, 쥬스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구르트 등의 가공 유류, 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 정제, 캡슐, 환, 과립, 액상, 분말, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리, 바 등의 건강기능식품 제제류 등으로 제조될 수 있다.

또 본 발명의 식품 조성물은 법률상·기능상의 구분에 있어서 제조·유통 시점의 시행 법규에 부합하는 한 임의의 제품 구분을 띨 수 있다. 예컨대 한국 「건강기능식품에관한법률」에 따른 건강기능식품이거나, 한국 「식품위생법」의 식품공전(식약처 고시 「식품의 기준 및 규격」)상 각 식품유형에 따른 과자류, 두류, 다류, 음료류, 특수용도식품 등일 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 식품첨가물이 포함될 수 있다. 식품첨가물은 일반적으로 식품을 제조, 가공 또는 보존함에 있어 식품에 첨가되어 혼합되거나 침윤되는 물질로서 이해될 수 있는데, 식품과 함께 매일 그리고 장기간 섭취되므로 그 안전성이 보장되어야 한다. 식품의 제조·유통을 규율하는 각국 법률(한국에서는 「식품위생법」임)에 따른 식품첨가물공전에는 안전성이 보장된 식품첨가물이 성분 면에서 또는 기능 면에서 한정적으로 규정되어 있다. 한국 식품첨가물공전(식약처 고시 「식품첨가물 기준 및 규격」)에서는 식품첨가물이 성분 면에서 화학적 합성품, 천연 첨가물 및 혼합 제제류로 구분되어 규정되어 있는데, 이러한 식품첨가물은 기능 면에 있어서는 감미제, 풍미제, 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등으로 구분된다.

감미제는 식품에 적당한 단맛을 부여하기 위하여 사용되는 것으로, 천연의 것이거나 합성된 것 모두 본 발명의 조성물에 사용할 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.

풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.

보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등이 사용될 수 있고, 또 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있으며, 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등이 사용될 수 있다. 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.

점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 전술한 바의 식품첨가물 이외에, 기능성과 영양성을 보충, 보강할 목적으로 당업계에 공지되고 식품첨가물로서 안정성이 보장된 생리활성 물질이나 미네랄류를 포함할 수 있다.

그러한 생리활성 물질로서는 녹차 등에 포함된 카테킨류, 비타민 B1, 비타민 C, 비타민 E, 비타민 B12 등의 비타민류, 토코페롤, 디벤조일티아민 등을 들 수 있으며, 미네랄류로서는 구연산 칼슘 등의 칼슘 제제, 스테아린산마그네슘 등의 마그네슘 제제, 구연산철 등의 철 제제, 염화 크롬, 요오드칼륨, 셀레늄, 게르마늄, 바나듐, 아연 등을 들 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 전술한 바의 식품첨가물이 제품 유형에 따라 그 첨가 목적을 달성할 수 있는 적량으로 포함될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에 포함될 수 있는 기타의 식품첨가물과 관련하여서는 각국 식품공전이나 식품첨가물 공전을 참조할 수 있다.

본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서는 약제학적 조성물로 파악될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 당업계에 공지된 통상의 방법으로 투여 경로에 따라 경구용 제형 또는 비경구용 제형으로 제조될 수 있다. 여기서 투여 경로는 국소 경로, 경구 경로, 정맥 내 경로, 근육 내 경로, 및 점막 조직을 통한 직접 흡수를 포함하는 임의의 적절한 경로일 수 있으며, 두 가지 이상의 경로를 조합하여 사용할 수도 있다. 두 가지 이상 경로의 조합의 예는 투여 경로에 따른 두 가지 이상의 제형의 약물이 조합된 경우로서 예컨대 1차로 어느 한 약물은 정맥 내 경로로 투여하고 2차로 다른 약물은 국소 경로로 투여하는 경우이다.

약학적으로 허용되는 담체는 투여 경로나 제형에 따라 당업계에 주지되어 있으며, 구체적으로는 "대한민국약전"을 포함한 각국의 약전을 참조할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물이 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 제형으로 제조될 수 있다. 이때 적합한 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 덱스트로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨 등의 당류, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분 등의 전분류, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 맥아, 젤라틴, 탈크, 폴리올, 식물성유, 에탄올, 그리세롤 등을 들 수 있다. 제제화활 경우 필요에 따라적절한 결합제, 윤활제, 붕해제, 착색제, 희석제 등을 포함시킬 수 있다. 적절한 결합제로서는 전분, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분페리스트, 젤라틴, 메틸셀룰로스, 소듐 카복시메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 글루코스, 옥수수 감미제, 소듐 알지네이트, 폴리에틸렌 글리콜, 왁스 등을 들 수 있고, 윤활제로서는 올레산나트륨, 스테아르산나트륨, 스테아르산마그네슘, 벤조산나트륨, 초산나트륨, 염화나트륨, 실리카, 탈쿰, 스테아르산, 그것의 마그네슘염과 칼슘염, 폴리데틸렌글리콜 등을 들 수 있으며, 붕해제로서는 전분, 메틸 셀룰로스, 아가(agar), 벤토나이트, 잔탄 검, 전분, 알긴산 또는 그것의 소듐 염 등을 들 수 있다. 또 희석제로서는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 소비톨, 셀룰로스, 글라이신 등을 들 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물이 비경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제 및 좌제의 형태로 제제화될 수 있다. 주사제로 제제화할 경우 적합한 담체로서는 수성 등장 용액 또는 현탁액을 사용할 수 있으며, 구체적으로는 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화할 수 있다. 비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화할 수 있으며, 좌제로 제제화할 경우 그 담체로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등을 사용할 수 있다.

약제학적 조성물의 구체적인 제제화와 관련하여서는 당업계에 공지되어 있으며, 예컨대 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)] 등을 참조할 수 있다. 상기 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주 된다.

본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 성별, 연령, 환자의 중증도, 투여 경로에 따라 1일 0.001mg/kg ~ 10g/kg 범위, 바람직하게는 0.001mg/kg ~ 1g/kg 범위일 수 있다. 투여는 1일 1회 또는 수회로 나누어 이루어질 수 있다. 이러한 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.

본 발명의 조성물은 또 다른 구체적인 양태에 있어서, 화장료 조성물로 파악할 수 있다. 본 발명의 조성물이 화장품 조성물로 파악될 경우 그 용도는 피부 과민 면역 또는 비정상 면역에 의한 홍반, 건조, 태선화, 짓무름, 건조, 출혈 등의 피부 트러블 억제 등의 용도로 이해될 수 있다.

본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 파악될 경우에도 그 화장료 조성물은 그 용도상, 법률상 임의의 제품 구분을 띨 수 있으며, 구체적으로 피부 트러블 개선, 아토피 피부염 개선 등의 용도를 가진 기능성 화장품, 비기능성 일반 화장품 등일 수 있다. 제품 형태에 있어서도 임의의 제품 형태를 띨 수 있는데, 구체적으로 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 등의 제품 형태를 띨 수 있다. 구체적인 제품 형태에 있어서는 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형 등일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 그 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 예컨대, 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 비타민, 색소 및 항료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되는데, 구체적으로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 아토피 피부염 개선 활성 또는 피부 면역 과민 반응 억제 활성을 나타내는 그 유효성분을 포함하는 것을 제외하고는 당업계에 통상적으로 행하여지는 화장료 조성물의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.

전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 카레야 아르보레아 추출물을 이용한 아토피 피부염 개선용 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명의 아토피 피부염 개선용 조성물은 아토피 피부염 개선 등의 용도로 식품, 화장품, 약품 등으로 제품화될 수 있다.

도 1은 카레야 아르보레아 50% 에탄올 추출물이 MDC 및 TARC 발현에 미치는 영향을 보여주는 결과이다.
도 2는 카레야 아르보레아 70% 에탄올 추출물이 MDC 및 TARC 발현에 미치는 영향을 보여주는 결과이다.
도 3은 DNCB로 아토피 피부염을 유발한 동물모델 실험 관련 개략도이다.
도 4는 DNCB로 아토피 피부염을 유발한 동물모델 실험에서 체중 변화를 나타낸 결과이다.
도 5는 DNCB로 아토피 피부염을 유발한 동물모델 실험에서 피부 조직의 염증 병변의 관찰 결과이다.
도 6은 아토피 중증도 지수 측정 결과이다.
도 7는 홍반 지수 측정 결과이다.
도 8은 경표피수분손실량 지수의 측정 결과이다.
도 9는 혈중 IgE 농도 측정 결과와 피부조직 Th2 세포 cytokine 발현 분석 결과이다.
도 10은 피부 H&E staining 결과이다.
도 11은 Toluidine blue O staining 결과이다.

이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 > 카레야 아르보레아 추출물의 제조

건조된 카레야 아르보레아 잎과 가지 혼합 분쇄물 200 g에 70% 에탄올 2 L를 가하여 상온에서 24 시간 2회 반복 침지 추출 후 여과지로 여과하였다. 얻어진 70% 에탄올 여액을 감압 농축 후 동결 건조하여 카레야 아르보레아 추출물을 얻었다.

또 50% 에탄올을 사용하여 같은 방법으로 카레야 아르보레아 추출물을 얻었다.

< 실험예 > 카레야 아르보레아 추출물의 아토피 피부염 개선 활성 실험

<실험예 1> 아토피 피부염 개선 활성 세포실험

HaCaT 세포를 1×10⁶cells/well로 6 well plate에 배양한 후, IFN-γ(10 ng/ml), TNF-α(10 ng/ml)와 실시예의 시료를 농도별로 처리하여 18시간 배양하였다. PBS로 2번 세척하고 Trizol(Invitrogen)을 넣어서 세포를 용해시킨 후 chloroform을 넣고 13000rpm에서 15분간 원심분리하여 상층액을 얻었다. 상층액과 isopropanol을 섞은 후 반응시켜 RNA를 침전시킨 후 에탄올로 1회 세척하여 RNA를 분리하였다. 분리한 RNA를 이용하여 정량 후 역전사 연쇄중합반응 키트인 Superscript kit(Invitrogen)를 사용하여 제조사의 프로토콜에 따라 cDNA를 합성하였다. 구체적으로 역전사 반응은 3 ㎍의 total RNA를 oligo(dT)20 primer, dNTP (50 ng/ml), 1 unit RNaseOUT 그리고 SuperscriptⅢ 역전사 효소 (200 U/ml)로 65℃ 5분, 40℃ 5분, 50℃ 50분, 그리고 85℃에서 15분 동안 반응시켜 수행하였다. 중합효소연 연쇄 반응(PCR)은 합성된 cDNA로부터 MDC, TARC, GAPDH를 증폭시키기 위하여 1 ㎕ cDNA, 10 pM의 5'과 3' primer, AccuPower Pfu PCR Premix (Bioneer, KOREA)를 섞고 증류수로 전체를 20 ㎕로 맞춘 다음, 95℃ 45초, 55℃ 45초, 72℃ 2분을 설정하여 32 cycle 반응시켰다. 사용된 프라이머 서열은 아래의 [표 1]과 같다. 반응 후 아가로오스 겔 상에서 발현량을 비교하였다. 결과를 [도 1] 및 [도 2]에 나타내었다. [도 1] 및 [도 2]의 결과는 카레야 아르보레아 50% 에탄올, 70% 에탄올 추출물 모두 처리 농도에 비례하여 MDC와 TARC의 발현을 억제함을 보여준다. 양성대조군으로 항알러지 활성을 가지는 것으로 알려진 dexamethasone(100μM)을 사용하였다.

프라이머

MDC	F: GCATGGCTCGCCTACAGACT(서열번호 1)
	R: GCAGGGAGGGAGGCAGAGGA (서열번호 2)
TARC	F: ATGGCCCCACTGAAGATGCT(서열번호 3)
	R: TGAACACCAACGGTGGAGGT(서열번호 4)
GAPDH	F-GAGTCAACGGATTTGGTCGT(서열번호 5)
	R-GACAAGCTTCCCGTTCTCAG(서열번호 6)

<실험예 2> 아토피 피부염 개선 활성 동물실험

<1> 실험 방법

<1-1> 아토피 질환 동물모델 제작

6주령의 20-23g의 마우스(Balb/c mouse, 대한바이오링크사, 한국)의 등을 귀 하단부에서부터 꼬리 상단부까지 전체를 제모하고 24시간 방치 후 1.5% DNCB(2,4-dinitrochlorobenzene) 용액(아세톤:올리브오일=3:1) 200㎕를 제모 부위에 도포하고 3일 후 2차 도포하였다. 1차 도포 실시 후 7일째부터는 1주일에 3회씩 6주간 0.5% DNCB 용액 200㎕를 재차 도포하여 아토피 피부염을 유발하였다. 실시예의 시료(70% 에탄올 추출물)는 DNCB 1차 도포 실시 후 7일째부터는 매일 1회 경구 투여하였다. 동물모델 실험 관련 개략도를 [도 3]에 나타내었으며, 실험군의 구성은 아래의 [표 2]에 나타내었다.

<1-2> 경표피수분손실량 측정(TEWL, transepidermal water loss assay)

투여가 끝난 후 마우스의 등과 귀 뒤쪽 제모된 부위의 피부를 경표피수분손실량(TE)DMF 측정기(cologne, Germany)를 이용하여 측정하였다. 측정은 실내 온도 21~23℃, 습도 50~60%가 유지되는 조건하에서 30~45초 동안 측정하여 평가하였다.

<1-3> 아토피 중증도 지수(SCORAD Index) 및 홍반 지수(Erythema Index)의 측정

① 아토피 중증도 지수의 측정

홍반(Erythema), 출혈(Hemorrhage), 건조(Dryness), 흉터(Scarring), 태선화(Lichenification), 짓무름(Erosin) 등의 임상적 육안평가는 아래 [표 3]의 예시에서 확인되는 바와 같이, 각 항목에 대해 증상이 없음(0점), 증상 약함(1점), 보통(2점), 심함(3점)으로 채점한 후 6항목의 점수 합산을 통해 최소 점수 0점(아무 증상 없는 상태)에서 최고 점수 18점(모든 항목의 증상이 심한 상태)으로 평가 점수를 부여하였다.

② 홍반 지수의 측정

홍반(erythema), 출혈(hemorrhage), 건조(dryness), 흉터(scarring), 태선화(lichenification), 짖무름(erosin)등의 임상적 육안평가를 통해, 각각의 항목에 대해 증상이 없음(0점), 증상 약함(1점), 보통(2점), 심함(3점)으로 채점한 후 6항목의 점수를 합산함으로써 최소 0점(아무 증상 없는 상태)에서 최고 18점(모든 항목의 증상이 심한 상태)사이의 평가 점수를 부여하였다.

<1-4> 피부조직 Th2 cytokine 발현분석

마우스를 희생 시킨 후 등 부위의 피부조직을 3×3cm 크기로 적출하여 분석 실시 전까지 액체 질소에서 보관하였다. 액체 질소에 의해서 얼려진 조직 시료는 막자사발을 사용하여 조직을 파쇄하고 파쇄 된 시료에서 RNA를 분리하여 RT-PCR을 통해 IL-4, IL-6, IL-1β, TNF-α와 같은 cytokine 발현양을 분석하였다.

<1-5> 혈중 IgE 농도 측정

마우스를 희생 시킨 후 혈액 내 혈장을 분리하여 IgE ELISA kit를 이용하여 IgE의 생체 내 농도를 측정하였다. 항체가 코팅된 96 well plate에 시료 및 각각의 cytokine 표준용액을 넣고 실온에서 반응시킨 후 3번 세척 후 biotin이 결합된 이차항체를 넣고 실온에서 반응하고, 다시 peroxidase가 결합된 streptavidin과 재차 반응시킨 후 기질을 첨가하여 반응시키고, stop buffer로 반응을 정지시켜 ELISA reader를 사용해 450nm에서 흡광도를 측정하였다.

<1-6> 피부 H&E staining 및 toluidine blue O staining

마우스 희생 후 등 부위의 피부조직을 33cm 크기로 적출하여 7일 정도 4% formaldehyde 용액에 고정하였다. 고정된 조직은 다시 1×0.5cm의 크기로 다시 세분화하여 조직용 cassette에 담아 tissue processor(Thermo scientific, USA)로 탈수, 투명, 파라핀화 과정을 거쳐 -20℃에서 보관 후 microtome(Thermo scientific, USA)으로 파라핀 블록을 5㎛ 두께로 자른 후 60℃ heating plate에서 건조시켰다. 피부조직의 병변 측정을 위해 피부조직의 절편을 xylene으로 탈파라핀화를 시켰다.

① H&E staining

탈파라핀화를 시킨 피부조직을 hematoxylin solution에 담가 조직세포의 핵 부위를 염색하고 eosin으로 세포질을 염색하였다. 염색된 조직의 탈파라핀 과정은 역행순으로 진행하였으며 mount regent를 사용해 봉입한 후 광학현미경 200배의 배율로 염색된 조직을 촬영하여 평가하였다.

② Toluidine blue O staining

탈파라핀화 시킨 피부조직을 toluidine blue O solution에 담가 조직 내 비만세포(mast cell) 부위를 염색하였다. 염색된 조직의 탈파라핀 과정은 역행순으로 진행하였으며 mount regent를 사용해 봉입한 후 광학현미경 200배의 배율로 염색된 조직을 촬영하여 평가하였다.

<2> 실험 결과

<2-1> 체중 변화

6주 실험 기간 동안 1주일 단위로 체중을 측정한 결과를 [도 4]에 나타내었다. 시료 투여군의 경우 정상군에 비해 체중이 조금 감소하는 경향을 보였으나, 음성 대조군과 시료 투여군 사이에는 체중 변화가 거의 없는 것으로 나타나 시료가 생체 내 안전성에 영향을 미치지 않을 것으로 판단되었다.

<2-2> 피부 조직 관찰

피부 조직의 육안 관찰 결과를 [도 5]에 나타내었다. 음성 대조군과 비교할 때 시료 투여군의 경우 대체로 투여량에 비례하여 염증 부위가 감소함을 확인할 수 있다.

<2-3> 아토피 중증도 지수 및 홍반 지수

① 아토피 중증도 지수

아토피 중증도 지수의 측정 결과를 [도 6]에 나타내었다. 시료 투여군의 경우 음성 대조군에 비해, 50MPK 시료 투여군의 7일째 측정 결과를 제외하고 실험 전 기간에 걸쳐 아토피 중증도 지수가 낮음을 알 수 있다.

② 홍반 지수

홍반 지수의 측정 결과를 [도 7]에 나타내었다. 홍반 지수의 경우도 시료 투여군이 음성 대조군에 비해, 대체로 실험 전 기간에 걸쳐 낮음을 알 수 있다.

<2-4> TEWL index

경표피수분손실량의 측정 결과를 [도 8]에 나타내었는데, 아토피 중증도 지수나 홍반 지수와 마찬가지로 시료 투여군이 음성 대조군에 비해, 대체로 시료 투여량에 비례하여 낮아지는 결과를 보였다.

<2-5> 피부조직 Th2 세포 cytokine 발현 분석

RT-PCR을 통해 IL-4, IL-6, IL-1β, TNF-α와 같은 cytokine 발현양을 분석한 결과를 [도 9]에 나타내었다. 시료 투여군이 음성 대조군에 비해, 대체로 시료 투여량에 비례하여 낮아지는 결과를 보였다. 아토피 피부염의 염증은 손상 부위에 대한 국소적인 반응으로, 여러 종류의 염증 세포들과 염증 유발 cytokine들이 관여하는데, 특히 IL-1β, IL-6, TNF-α 등은 급성 염증 단백질의 생성을 유도하는 cytokine으로 염증반응의 정도를 나타내는 지표로 이용되고 있으며(Cytokine 36: 296-304, 2006; Biophys Acta 1072: 63-80, 1991), 또 IL-4는 Th1 cytokine인 IFN-γ의 발현을 억제시킴으로써 Th1과 Th2의 불균형을 초래하여 아토피 피부염 증상을 악화시키는 것으로 알려져 있다(J Clin Invest 103: 1103-1111, 1999; Clin Exp Immunol 138: 375-387, 2004).

<2-6> 혈중 IgE 농도 측정

혈중 IgE 농도 측정 결과를 [도 9]에 함께 나타내었다. 시료 투여군의 경우 음성 대조군에 비하여 시료 투여량에 비례하여 혈중 IgE의 농도가 감소함을 알 수 있다.

<2-7> 피부 H&E staining 및 toluidine blue O staining

① 피부 H&E staining

피부 H&E staining 결과를 [도 10]에 나타내었다. 음성 대조군에 비하여 시료 투여군의 경우 대체로 시료 투여량에 비례하여 피부 두께가 낮아짐을 알 수 있다.

② Toluidine blue O staining

Toluidine blue O staining을 통한 비만세포의 수를 측정한 결과를 [도 11]에 나타내었는데, 음성 대조군에 비하여 시료 투여군의 경우 대체로 시료 투여량에 비례하여 비만세포의 수가 줄어듬을 알 수 있다.

Claims

카레야 아르보레아 잎과 가지의 혼합물의 추출물을 유효성분으로 포함하되,
상기 추출물은 물과 에탄올의 혼합용매에 의하여 얻어진 추출물인 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 개선용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 혼합용매는 70% 에탄올 추출물인 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 개선용 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 조성물은 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 개선용 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 개선용 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 조성물은 화장품 조성물인 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 개선용 조성물.