KR102077433B1 - 호열성 세균 바실러스 스미시 균주 dsm 4216의 대량 속성 배양방법 및 이 종균 배양물을 함유하는 유기성 폐기물 처리용 미생물 - Google Patents
호열성 세균 바실러스 스미시 균주 dsm 4216의 대량 속성 배양방법 및 이 종균 배양물을 함유하는 유기성 폐기물 처리용 미생물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 유기성 폐기물 처리용 호열성 세균의 경우 50~80℃의 고온에서 24시간이상 48시간의 장시간 배양하여도 소량생산에 그쳤던 단점을 개선하여 종래 배지에 규산염 광물질 성분을 배지에 더 첨가하여 15~25℃ 중온범위에서도 7~8시간의 단시간으로도 대량 생산할 수 있는 신규한 속성 배양방법을 개시하고, 상기 속성 대량 배양에서 얻은 종균 배양물(seed culture)의 동결건조물 1 중량%에 wood pellete 55~65 중량%, 활성탄(active carvon) 14~20 중량%, 왕겨 10~17 중량%, 글루코스 3.0~4.0 중량%, 유박 2.0~2.4 중량%, vermicalite 1.2~1.4 중량%를 포함시켜서 되는 신규한 음식물 쓰레기 처리용 미생물 스타터 혼합 제제(microbial starter hybrid composite)를 개시한다.
Description
본 발명은 호열성 세균(Thermophilic bacteria)의 배양방법 및 이 배양물을 함유하는 유기성 폐기물 처리용 미생물 스타터 제제에 관한 것으로 더욱 상세하게는 바실러스 스미시 DSM 4216 종균의 대량 속성 배양방법과 이 종균 배양물을 함유하는 음식물 쓰레기 처리용 스타터 제제(starter hybrid composite)에 관한 것이다.
최근 가정이나 식당 등으로부터 많은 양의 음식물쓰레기가 현저히 증가 배출되고 있으며, 이러한 음식물쓰레기는 재활용이 가능한 유기성폐기물의 한가지임에도 불구하고 그 대부분은 소각 처리되고 나머지 부분도 거의 매립으로 처분되고 있는 실정이다.
그러나, 이와 같은 음식물쓰레기의 소각은 이산화탄소나 다이옥신 등의 발생을 유발시켜 대기환경에 악영향을 주는 요인으로 작용하고 있어 음식물쓰레기의 유효한 처리방법에 대하여 조속한 해결이 요망되고 있다.
더욱이 최근에 들어 환경오염이 거의 없는 음식물쓰레기의 처리방법으로 고온고속 퇴비화법이 사용되고 있으며, 이러한 고온고속 퇴비화법은 주로 호열성 미생물의 작용에 의해 하루에서 수일이라는 단기간에 음식물쓰레기를 퇴비로 변환하는 기술이고, 퇴비화 용기에 음식물쓰레기와 상기 고열성 미생물을 가진 기재를 투입한 후, 교반 혼합하고 또 가온하면서 그 변환작용을 진행시키는 것이다.
현재 고온고속 퇴비화법에 의해 재활용되는 음식물쓰레기 양은 총 배출량의 0.1%도 되지 않으며 이 방법은 환경친화적인 방법에 의해 음식물쓰레기를 손쉽게 재활용할 수 있는 한 가지 수단으로써 일반 가정에도 널리 보급될 가능성을 갖고 있고 각 행정 자치단체에서 각 가정에 퇴비화 용기의 구입비 등 보조금을 지원하여 음식물쓰레기의 퇴비화를 유도하고 있다.
상기 고온고속 퇴비화법은 음식쓰레기 처리장치로 제작되어 실시되고 있는데, 대개의 경우 이것을 실시하는 과정에서 퇴비화 용기로부터 악취가 발생하거나, 퇴비화 처리능력이 매우 낮을 뿐만 아니라, 퇴비화 과정에서 빈번하게 미생물을 추가 또는 교환할 필요가 생기기 때문에 유지관리가 번잡하여 사용을 기피하는 문제점이 있다. 또한, 상기의 고온고속 처리장치로 퇴비화할 경우 사용되는 산에 약한 미생물이 퇴비의 수소이온지수(pH) 7을 상회하게 됨으로써 유효하게 작용하지 않게되어, 악취가 발생하고, 부패가 진행되는 등의 문제가 발생하게 된다.
한국의 음식물쓰레기의 특징인 고염분에 의하여 미생물의 활동이 시간이 지남에 따라 극히 저조해지므로 미생물의 잦은 교체를 필요로 하는 문제점이 있다.
한편, 퇴비화 과정에서 온도의 상승과 하강은 미생물에 의한 유기물의 분해정도를 나타내는 지표로 이용된다.
퇴비화 중에는 수분함량, 공기, 영양분의 조건이 알맞고 열을 차단할 수 있는 충분한 양의 유기물질이 쌓여 있으면 생물학적 자체발열(self heating)이 일어난다. 이 열은 미생물이 유기물을 분해하고 섭취하는 대사과정에서 생성되는 것으로 퇴비더미의 온도를 상승시킨다. 일반적으로 퇴비화에서는 퇴비더미의 수분함량이 50~60% 범위에 있을 때 초기 이틀 또는 며칠 이내에 70℃ 이상으로 온도가 상승한다.
상기 온도 상승은 미생물의 활성을 촉진하여 퇴비화 속도를 빠르게 하지만, 과도하게 상승하여 병원균 뿐만 아니라, 퇴비화를 진행시키는 미생물까지도 사멸시킨다는 문제점이 있었다. 또한 미생물은 변하는 온도범위에 따라 우점종이 달라지므로 미생물의 활동은 지속적으로 일어날 수 있으나 60℃ 이상이 되면 각종 고온성 미생물군의 적정온도를 초과하게 되므로 퇴비화 반응은 느려지며, 퇴비화에서 생물학적으로 달성 가능한 최고 온도인 82℃ 이상에서는 미생물의 활동과 대사에 의한 발열작용이 중지되는 문제점이 있었다.
이러한 문제로 인하여 음식물 쓰레기와 같은 유기성 폐기물을 소각하거나 매립하지 않고 효율적으로 활용하기 위한 방안들이 연구되고 있으며, 특히 미생물을 활용하여 퇴비화함으로써 농업 등의 분야에서 유용하게 활용할 수 있도록 하고 환경오염의 문제를 줄이는 일석이조의 효과를 기대하기 위한 연구가 활발히 이루어지고 있다.
이러한 연구결과를 바탕으로 대한민국 등록특허 제10-0805036호, 제10-1207792호, 제10-0721059호(특허문헌 1 내지 3 참조) 등 미생물을 이용하여 음식물 쓰레기를 처리하는 방법들이 개발된 바 있다.
이중 대한민국 등록특허 제10-0721059호(특허문헌 3)는 바실러스 스미시(Bacillus smithii) KACC 91161P의 내염성, 내산성, 내열성 특성을 이용하여 유기성 폐기물을 고온 퇴비화하는 기술로 음식물 쓰레기와 같은 유기성 폐기물을 매우 효율적으로 퇴비화할 수 있는 장점이 있고 감량률이 우수하였다. 특히 유기성 폐기물의 처리 분야에서 가장 중요시되는 감량률을 높일 수 있는 방법을 개발하기 위해 바실러스 스미시(Bacillus smithii) KCTC 3618와 바실러스 스미시(Bacillus smithii) ATCC 55404를 유기성 폐기물의 처리를 위한 미생물로 사용할 경우, 유기성 폐기물을 효율적으로 발효시켜 비료화하고 특히 유기성 폐기물의 대부분을 차지하는 수분의 감량효과를 높히고자하는 특허가 10-1715764호(특허문헌 4 참조)에 개시된 바 있다.
이 밖에도 20~40℃의 중요범위에서 악취 발생이 없는 음식물 쓰레기 처리에 유용한 호기성 신규 미생물 Bacillus cereus ENB-02(KACC 9131PP)를 이용한 음식물 쓰레기 소멸용 미생물 제제가 특허 10-0805036호(특허문헌 1 참조)에 그리고 음식물 발효 분해 처리 시 악취를 방기하기 위해 제안된 호기성 미생물 종균 Leuconostoc mesenteroides, Lactobacillus delbrueckii 균주가 특허 10-1207792호(특허문헌 2 참조)에 개시된 바 있다.
그러나 상기 미생물 종균은 염도가 높고 고산성의 한국 음식물 쓰레기의 고염분함량 문제를 해결하지 못하였고 후자의 미생물 종균들은 내염성 문제는 어느정도 해결하였으나 내산성문제와 호기성 발효 중에 일어나는 고온 내열성 문제로 인하여 균주의 성장이 지연되어 균주의 대량 속성 배양과 음식물 처리 효율에 있어서 사실상 실용화에 제약요소가 되어왔다.
따라서, 본 발명의 목적은 호열성, 내염성 및 내산성이 우수한 호기성 미생물 균주의 대량 속성 배양과 동 균주가 함유된 미생물 스타터 혼합제제 조성물을 제공함으로서 수분 감량의 극대화와 호기성 미생물의 음식물쓰레기 처리과정에서 공극 확보의 극대화로 인하여 통기효과 및 pH 완층 효과의 극대화를 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 목적을 달성하기 위하여 호열성, 내산성 및 내열성이 우수한 공지된 호기성 미생물 균주를 대량 속성 배양하는 방법과 동 균주가 포함된 미생물 스타터 혼합제제 조성물을 제공하는데 있다.
상기 본 발명의 목적은 산도, 염도 및 채소류 함량이 많은 음식물 쓰레기의 cellulose 분해 특성을 감안하여 프로테아제, 리파아제, 셀룰라제, 아밀라제 효소활성이 우수하여 내산성, 내염성 및 내열성의 우수한 호열성 종균을 선발하여 DSM 4216 균주를 사용하되 음식물 쓰레기 처리 즉 발효 분해 과정에서 pH 완충능을 제고하기 위하여 규소와 알루미늄을 주성분으로 하는 규산염 광물 분말 성분을 첨가하여 배양한 다음, 상기 균주의 통기성 확보와 음식물 발효 분해 환경조건을 개선하기에 호적한 담체 종류를 선정하고 그 최적배합비를 선택하여 미생물 스타터 혼합제제(hybrid composite)를 제조하고 이를 평가함으로써 달성하였다.
본 발명은 호열성 미생물 균주를 대량 속성 배양하는 방법을 제공하는 뛰어난 효과가 있을 뿐만 아니라 내산성, 내염성 및 통기성이 우수하여 음식물 처리과정에서 악취가 없고 수분 감량을 극대화한 호기성 미생물 스타터 혼합제제 조성물을 제공하는데 뛰어난 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 실시에 가장 바람직한 제조공정의 개략도이다.
도 2는 본 발명 B.smithii 균주(DSM 4216)의 성장곡선이다.
도 3은 본 발명에 따른 음식물 처리용 미생물 제제(a)와 종래제품 사진도(b)이다.
도 4는 본 발명에 따라 음식물 쓰레기 발효 분해된 최종산물로 "서호무"의 종자 발아 시험 결과이다.
도 5는 본 발명에 따라 B.smithii 균주(DSM 4216)의 16S RNA seguence이다.
도 2는 본 발명 B.smithii 균주(DSM 4216)의 성장곡선이다.
도 3은 본 발명에 따른 음식물 처리용 미생물 제제(a)와 종래제품 사진도(b)이다.
도 4는 본 발명에 따라 음식물 쓰레기 발효 분해된 최종산물로 "서호무"의 종자 발아 시험 결과이다.
도 5는 본 발명에 따라 B.smithii 균주(DSM 4216)의 16S RNA seguence이다.
이하, 본 실시예에 따라 구체적으로 설명하지만 본 발명이 실시예에 한정하는 것이 아님은 자명하다.
본 발명 균주(DSM 4216)의 배지 조성과 seed 배양
본 발명 호열성 미생물(DSM 4216) 균주(도 5)를 0.3%의 KH2PO4 0.15%, (NH4)2SO4, 0.03%의 MgSO4·7H2O, 2%의 yeast extract, 1%의 Trypton을 칭량하여 증류수 1L에 넣은 후 혼합하여 121℃에서 15분간 autoclave에서 멸균시켰다.
멸균시킨 상기 호열성 균주의 통상적인 배양액을 2L fask에 clean beuch 올려놓고 본 발명 호열성 미생물 균주 1%를 접종하고 하기 [표 1]로 구성된 무균 처리한 규소와 알루미늄을 주성분으로 하는 규산염 광물 분말 0.1, 0.5 및 1 중량%를 각 pH4 를 유지하며 25℃에서 150rpm으로 24시간 진탕 배양하였다(도 1).
[비교예 1]
본 발명 균주의 본 배양
상기 실시예 1과 동일한 호열성 미생물 균주와 동일한 배지를 사용하되 80L fermenter에 규소와 알루미늄을 주성분으로 하는 하기 [표 1]의 규산염광물 분말 성분을 추가로 더 첨가하고 상기 균주를 pH4, 최적온도 55℃에서 1500rpm으로 24시간 진탕 배양하였다. 이때, 최적 pH4 를 유지하기 위하여 HCL을 주가하였다.
| 성분 | 함량 | 성분 | 함량 |
| 불소(F) | ND | 니켈(NiO) | 0.012 |
| 나트륨(Na) | 4.7 | 구리(CuO) | 0.0024 |
| 마그네슘(Mgo) | 1.3 | 아연(ZnO) | 0.0038 |
| 알루미늄(Al2O3) | 14.0 | 게르마늄(Ge2O3) | 0.0033 |
| 규산(SiO2) | 70.0 | 루비디움(Rb2O) | 0.017 |
| 인(P2O3) | 0.14 | 스트론튬(SrO) | 0.049 |
| 황산(SO3) | 0.031 | 이스티움(Y2O3) | ND |
| 염분(Cl) | 0.025 | 지르콘(ZrO2) | 0.012 |
| 가리(K20) | 3.8 | 바륨(BaO) | 0.083 |
| 칼슘(CaO) | 2.5 | 중석(WO2) | 0.11 |
| 티타늄(TiO2) | 0.34 | 납(PbO) | ND |
| 망간(MnO) | 0.079 | 비소(As2O3) | ND |
| 철분(Fe2O3) | 2.5 | 금(Au2O) | 0.0038 |
| 코발트(CO2O3) | 0.021 |
실험결과, 상기 규산염광물의 1 중량% 추가 첨가로 도 2a와 도 2b에서 확인할 수 있듯 55℃ 고온 배양 시 6시간만에 최대 OD 1.19에 이르고(비교예 1, 도 2b), 호열성 세균임에도 불구하고 25℃에서 중온범위 배양에 의하여도 6시간 이내에 OD 1.49에 이르는 속성생육으로 인하여 24시간 이내에 종래 OD 최대치 1.32(도 2b)에서 본발명 OD 최대치 1.65(실시예 1, 도 2a)에 이르는 대량 속성 배양이 가능하였다.
이는 종래 공지된 B.cereus 및 B.smithii 균주들이 48시간 이상 배양하여도 상기 균체량을 얻을 수 없는 점과 비교할 때 새로운 대량 생산의 방법으로 시사되었다.
그 뿐 아니라 통상 종래 공지된 방법 즉 50~55℃에서 48시간 이상의 고온, 장시간 배양을 수행하기 위해 소요되는 전기에너지 소모를 현저히 줄일 수 있는 경제적 이점도 시사되었다.
본 발명 균주의 대량 속성 배양
본 발명자들은 상기 실시예 1에 따라 seed culture가 완성된 배양액 1%를 80L 발효기(Fermenter)에 Batch culture를 수행하기 위해 접종하고 pH 4.0을 유지하기 위하여 NaOH reseviour와 HCL reseviour를 연결하여 자동 controll되게 하고 1,500rpm 에서 배양하였다. 배지조성은 하기[표 2]와 같이 구성하여 121℃에서 15분간 autoclave에서 멸균한 것을 사용하였다.
| 성분 | 함량 |
| yeast extract | 0.5~1%/L |
| glucose | 3~5%/L |
| Trypton | 1.0~1.5%/L |
| KH2PO4 | 0.1~0.2%/L |
| MgSO4 | 0.1~0.2%/L |
| 탈지대두 | 2.0%/L |
| 본 발명에 따른 [표 1]의 규산염광물 분말 성분 | 1.0%/L |
본 발명에 따라 실시하여 7시간 후 원심분리하여 wet weight로 1.35kg의 균체를 회수하였다.
본 발명 starter 혼합제제의 제조
상기 실시예 2에 따라 제조된 본 발명 균주의 균체를 생균 상태로 장기 보존하기 위해 통상의 동결보존제를 첨가하여 -80℃에서 1차 동결하고(보관용), 이를 꺼내 다시 동결건조기(Freeze dryer)에 투입하여 -50℃에서 48~72시간의 진공 동결 건조를 수행하고 본 발명 동결건조물을 확보였다.
상기 동결건조된 dryed cells를 분쇄기로 분쇄하고 하기 음식물 처리과정에서 균주 활성 및 안정적인 생균수 확보에 바람직한 담체(carrier) 종류와 최적배합비로 혼합하여 본 발명 미생물제제 hybrid composite를 제조하였다.(표 3)
| 번호 | 구성성분 | 최적함량(중량%) | 적정범위(중량%) |
| (1) | 본 발명 B.smithii strain cell(dried) | 1.0 | 1.0 |
| (2) | wood pellet | 59.0 | 55~65 |
| (3) | 활성탄 | 20.0 | 14~20 |
| (4) | 왕겨 | 13.0 | 10~17 |
| (5) | glucose | 3.5 | 3~4 |
| (6) | 유박 | 2.2 | 2.0~2.4 |
| (7) | vermicalite | 1.3 | 1.2~1.4 |
| 계 | 100 | ||
본 발명에 따른 미생물 starter 혼합제제를 음식물 쓰레기 전체 무게에 대하여 5 ∼ 15중량%, 가장 바람직하게는 10중량% 첨가 사용하여 처리한 음식물 쓰레기 피처리물의 분석결과는 하기 [표 4]와 같다. 이때 피처리물의 수분함량은 6.61%까지 감량되었다.
실험결과에서 확인할 수 있는 바와 같이 수분함량 6.61% 수준으로 업계 사용 미생물 중 가장 낮은 값을 확인할 수 있었다. 따라서, 본 발명에 따른 음식물 쓰레기의 수분 감량 효과가 현저히 뛰어난 효과를 나타내었다.
또, 본 발명의 실시예를 통하여 얻은 음식물 쓰레기 처리물을 사용하여 "서호무"종자의 발아 시험 결과 성장저해가 없는 염류장해에 의한 무해한 것을 입증하였다(도 4).
본 발명은 우리나라 음식물 쓰레기의 효율적인 처리를 통하여 환경개선을 도모하는 뛰어난 효과가 있으므로 환경산업상 매우 유용한 발명인 것이다.
Claims (4)
- 호열성 세균 Bacillus smithii 균주의 통상적 배양 배지 조성물에 1중량%의 규산염광물 분말 성분을 추가로 더 첨가한 배양 배지에서 pH 4를 유지하기 위하여 NaOH와 HCL을 추가하며 25℃의 중온에서 7~8시간 진탕 속성 배양하는 것이 특징인 음식물 쓰레기 처리용 바실러스 스미시 DSM 4216 균주의 속성 배양방법.
- 삭제
- 제 1항의 방법에 따라 배양된 Bacillus smithii DSM 4216 균주의 배양물에 동결보존제를 첨가하고 동결건조기에 투입하여 -50℃에서 48~72시간 진공 동결시킨 동결건조물 1 중량%와 wood pellet 55~65 중량%, 활성탄 14~20 중량%, 왕겨 10~17 중량%, 글루코스 3.0~4.0 중량%, 유박 2.0~2.4 중량% 및 vermiculite 1.2~1.4 중량%으로 이루어진 음식물 쓰레기 처리용 미생물 스타터 혼합 제제 조성물.
- 제 3항의 미생물 스타터 혼합제제 조성물을 음식물 쓰레기 전체에 대하여 5~15 중량%를 첨가 처리하여 쓰레기 처리물의 수분함량을 6.61%까지 감량시키는 것이 특징인 음식물쓰레기의 처리방법.
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