KR102066459B1 - ChRO1 유전자 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 긴 비번역 RNA(long noncoding RNA)인 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자 및 이의 용도에 관한 것으로서, 상기 유전자를 이용하여 근육 질환 또는 근육 손상의 진단, 예방 또는 치료에 유용하게 사용할 수 있다.
Description
본 발명은 긴 비번역 RNA인 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자 및 이의 용도에 관한 것이다.
근육(Muscle)이란 중배엽의 줄기세포가 발달되어 생성된 조직으로써 근육세포(myoblast)들의 결합(fusion)으로 이루어진 근섬유(myofiber) 다발로 구성되어 있다. 근육은 체중의 40-50%를 차지하고 있어 뼈, 내장 기관을 지탱 및 보호하는 동시에 심장의 박동과 같은 근육 외의 다른 조직의 운동성을 갖도록 한다(Journal of Nutritional Science and Vitaminology, 61: 188-194, 2015). 또한, 기관의 보호 외에도 근육은 운동을 포함한 신체활동뿐만 아니라 영양소 대사(metabolism)에도 큰 영향을 주기 때문에 제 2형 당뇨, 비만, 심혈관 질환 등과 같은 대사성 질환의 발병과도 밀접하게 연관되어 있다.
근 위축(Muscle atrophy)이란 근육량의 점진적 감소에 의하여 발생하는 것으로, 근육의 약화 및 퇴행을 일컫는다(Cell, 119(7): 907-910, 2004). 근 위축은 비활동, 산화적 스트레스, 만성 염증에 의해 촉진되며 근육 기능과 운동 능력을 약화시킨다(Clinical Nutrition, 26(5): 524-534, 2007). 근 기능을 결정짓는 가장 중요한 요소는 근육량이며, 이는 단백질 합성과 분해의 균형에 의해 유지된다. 근 위축증은 단백질 분해가 합성보다 더 일어날 때 발생한다(The International Journal of Biochemistry and Cell Biology, 37(10): 1985-1996, 2005).
노화에 수반되는 질환 중 가장 대표적인 질환이 골격근이 위축되고 손실되는 근 위축증으로서, 기대수명이 늘어나고 양질의 삶을 오랫동안 유지하고자 하는 욕구가 늘어나면서 근 위축증의 진단, 예방 또는 치료가 각광받고 있다. 그러나, 근 위축증을 진단할 수 있는 진단 마커나 치료제는 아직 존재하지 않고, 근 위축증과 관련된 세포신호전달체계를 이용한 경우 근육세포 이외의 다른 세포에도 작용할 수 있어 발암 가능성의 문제가 있다. 따라서, 근육 세포에서 특이적으로 발현하고 근육 분화에 특이적으로 작용하면서, 근 위축증 발병 시 발현이 변화하는 패턴을 갖는 진단 마커 및 이를 이용한 치료제의 개발이 필요한 실정이다.
본 발명의 목적은 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자; 상기 ChRO1 유전자를 포함하는 재조합 벡터; 및 상기 재조합 벡터로 형질도입된 숙주세포를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자의 발현양을 측정하는 제제를 포함하는 근육 질환 또는 근육 손상의 진단용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는 근육 질환 또는 근육 손상의 진단용 키트를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 근육 질환 또는 근육 손상이 의심되는 환자로부터 분리된 생물학적 시료로부터 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자의 발현양을 측정하는 단계; 및 상기 측정된 발현양을 대조군 시료로부터 얻은 기준치와 비교하는 단계;를 포함하는 근육 질환 또는 근육 손상의 진단을 위한 정보제공 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자 또는 상기 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 유효성분으로 포함하는 근육 질환 또는 근육 손상의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자 또는 상기 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 인간을 제외한 개체에 처리하는 단계를 포함하는 근육 질환 또는 근육 손상의 치료 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자 또는 상기 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 유효성분으로 포함하는 근육 분화 촉진용 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자; 상기 ChRO1 유전자를 포함하는 재조합 벡터; 및 상기 재조합 벡터로 형질도입된 숙주세포를 제공한다.
본 발명에서의 용어, "재조합"은 세포가 이종의 핵산을 복제하거나, 상기 핵산을 발현하는 세포를 지칭하는 것이다. 재조합 세포는 상기 세포의 천연 형태에서는 발견되지 않는 유전자 또는 유전자 절편을, 센스 또는 안티센스 형태 중 하나로 발현할 수 있다. 또한, 재조합 세포는 천연 상태의 세포에서 발견되는 유전자를 발현할 수 있으며, 그러나 상기 유전자는 변형된 것으로서 인위적인 수단에 의해 세포 내 재도입된 것이다.
상기 벡터는 목적 유전자의 서열을 목적 세포에 삽입시킬 수 있는 것을 말하며, 이와 같은 벡터는 원핵생물세포, 효모, 동물세포, 식물세포, 곤충세포, 동물개체 및 식물개체 등의 숙주세포에 있어서 자율 복제가 가능한 것이 바람직하다.
상기 벡터는 비바이러스성 벡터 또는 바이러스성 벡터인 것이 바람직하며, 상기 바이러스성 벡터는 아데노바이러스 벡터, 렌티바이러스를 포함하는 레트로바이러스 벡터, 아데노-부속 바이러스 벡터 또는 헤르페스 심플렉스 바이러스 벡터인 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 숙주세포는 769-P 세포, A549 세포, HEK-293E세포, CHO(chinese hamster ovary) 세포, BHK(baby hamsterkidney) 세포, NIH-3T3 세포, HEK-293T 세포 또는 COS-7 세포인 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 형질도입은 리포펙타민(Lipofectamine), 도진도(Dojindo)사의 힐리맥스(Hilymax), 퓨젠(Fugene), 제트 피이아이(jetPEI), 이펙텐(Effectene) 및 드림펙트(DreamFect)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 상용화된 형질도입용 시약; 칼슘-인산(calcium-phosphate), 양전하성 고분자, 리포좀, 나노입자, 뉴클레오펙션(nucleofection), 전기천공법(electroporation), 열 충격(heat shock), 마그네토펙션(magnetofection)을 이용하는 방법; 및 레트로바이러스를 이용하는 방법으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나를 이용하여 수행될 수 있다.
또한, 본 발명은 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자의 발현양을 측정하는 제제를 포함하는 근육 질환 또는 근육 손상의 진단용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 ChRO1 유전자의 발현양을 측정하는 제제는 상기 유전자에 상보적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브인 것일 수 있다.
본 발명에서의 용어, "프라이머"는 짧은 자유 3-말단 수산화기(free 3' hydroxyl group)를 가지는 염기서열로서, 상보적인 템플레이트(template)와 염기쌍을 형성할 수 있고, 템플레이트 가닥 복사을 위한 시작 지점으로서 작용하는 짧은 염기서열을 말한다. 프라이머는 적절한 완충용액 및 온도에서 중합반응을 위한 시약(즉, DNA 폴리머레이트 또는 역전사효소) 및 상이한 4 가지의 뉴클레오사이드 트리포스페이트의 존재 하에서 DNA 합성을 개시할 수 있다. PCR 조건, 센스 및 안티센스 프라이머의 길이는 당업계에 공지된 기술에 따라 적절히 선택될 수 있다.
본 발명에서의 용어, "프로브"는 유전자에 특이적으로 결합을 이룰 수 있는 RNA 또는 DNA 등의 핵산 단편을 의미하며, 표지되어 있어 특정 유전자의 존재 유무 및 발현양을 확인할 수 있다. 프로브는 올리고뉴클레오타이드(oligonucleotide) 프로브, 단쇄 DNA(single strand DNA) 프로브, 이중쇄 DNA(double strand DNA)프로브, RNA 프로브 등의 형태로 제작될 수 있다. 적절한 프로브의 선택 및 혼성화 조건은 당해 기술분야에 공지된 기술에 따라 적절히 선택할 수 있다.
본 발명의 프라이머 또는 프로브는 포스포아미다이트(phosphoramidite) 고체 지지체 합성법이나 기타 널리 공지된 방법을 이용하여 화학적으로 합성할 수 있다. 이러한 염기서열은 또한 당해 기술분야에 공지된 다양한 방법을 통해 변형시킬 수 있다. 이러한 변형의 예로는 메틸화, 캡화, 천연 뉴클레오티드 하나 이상의 동족체로의 치환 및 뉴클레오티드 간의 변형, 예를 들면 하전되지 않은 연결체(예: 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포로아미데이트, 카바메이트 등) 또는 하전된 연결체(예: 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등)로의 변형이 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 프라이머는 서열번호 4 및 서열번호 5의 염기서열로 이루어진 프라이머 세트; 서열번호 6 및 서열번호 7의 염기서열로 이루어진 프라이머 세트; 서열번호 8 및 서열번호 9의 염기서열로 이루어진 프라이머 세트; 서열번호 10 및 서열번호 11의 염기서열로 이루어진 프라이머 세트; 및 서열번호 12 및 서열번호 13의 염기서열로 이루어진 프라이머 세트 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 프라이머 세트인 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 프로브는 서열번호 14 내지 서열번호 38의 염기서열로 이루어진 프로브 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 프로브인 것일 수 있다.
본 발명에서의 용어, "근육 질환"은 근기능 저하, 근육 소모 또는 근육 퇴화로 인한 근육 질환으로 당업계에 보고된 질병인 것이 바람직하며, 구체적으로 근육감소증(sarcopenia), 근위축증(muscular atrophy), 근이영양증(muscular dystrophy), 근육 퇴화 또는 악액질(cachexia)인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 근육 소모 또는 퇴화는 전적 요인, 후천적 요인, 노화 등을 원인으로 발생하며, 근육 소모는 근육량의 점진적 손실, 근육, 특히 골격근 또는 수의근 및 심장근육의 약화 및 퇴행을 특징으로 한다.
본 발명에서의 용어, "근육 손상"은 상해에 따른 물리적 또는 화학적인 파괴에 의한 손상으로, 근육 좌상(muscle strain), 근육 파열(muscle rupture), 근육 열상(muscle tearing), 타박상(contusion), 염좌(distortion), 회전근개 증후근(roator cuff syndrome) 또는 근육염(myositis)인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 물리적 파괴는 외상, 과도한 온도, 근독소, 국소빈혈, 염증, 운동 등을 원인으로 발생하며, 골격근 또는 수의근 및 심장근육의 손상을 특징으로 한다.
본 발명에서의 용어, "근육 재생"은 근육이 물리적으로 또는 화학적으로 손상을 입었을 때 빠르게 회복시키는 것을 의미하여, 손상된 근육이 정상인 기능을 할 수 있을 때까지의 과정과 기간을 포괄적으로 지칭한다.
보다 구체적으로, 상기 "근육"은 심줄, 근육, 건을 포괄적으로 지칭하고, "근 기능" 또는 "근육 기능"은 근육의 수축에 의해 힘을 발휘할 수 있는 능력을 의미하며, 근육이 저항을 이겨내기 위하여 최대한의 수축력을 발휘할 수 있는 근력; 근육이 주어진 중량에 얼마나 오랫동안 또는 얼마나 여러 번 수축과 이완을 반복할 수 있는지 나타내는 능력인 근 지구력; 및 단시간 내에 강한 힘을 발휘하는 능력인 순발력을 포함한다. 상기 근 기능은 간이 주관하며, 근육량에 비례한다.
또한, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 근육 질환 또는 근육 손상의 진단용 키트를 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 키트는 RT-PCR 키트 또는 DNA 칩 키트인 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 근육 질환 또는 근육 손상이 의심되는 환자로부터 분리된 생물학적 시료로부터 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자의 발현양을 측정하는 단계; 및 상기 측정된 발현양을 대조군 시료로부터 얻은 기준치와 비교하는 단계;를 포함하는 근육 질환 또는 근육 손상의 진단을 위한 정보제공 방법을 제공한다.
본 발명에서의 용어, "환자"는 근육 질환 또는 근육 손상이 의심되는 개체를 의미하고, 바람직하게는 인간, 또는 마우스를 포함한 설치류일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 생물학적 시료는 조직 또는 세포인 것일 수 있고, 바람직하게는 근아세포를 포함한 근육 조직 또는 근육 세포일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 ChRO1 유전자의 발현양이 기준치에 비하여 낮은 경우 근육 질환 또는 근육 손상의 가능성이 높은 것으로 판단하는 단계를 추가적으로 더 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 측정은 역전사효소 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사효소 중합효소반응(competitive RT-PCR), 실시간 역전사효소 중합효소반응(real time quantitative RT-PCR), RNase 보호 분석법(RNase protection method), 노던 블랏팅(Northern blotting) 또는 DNA 칩 분석법(DNA chip technology assay)에 의하여 수행되는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자 또는 상기 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 유효성분으로 포함하는 근육 질환 또는 근육 손상의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 재조합 벡터는 바이러스 벡터인 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 근육 질환은 근육감소증(sarcopenia), 근 위축증(muscular atrophy), 근이영양증(muscular dystrophy), 근육 퇴화 또는 악액질(cachexia)인 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 근육 질환은 근기능 저하, 근육 소모 또는 근육 퇴화로 인한 근육 질환인 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 근육 손상은 근육 좌상(muscle strain), 근육 파열(muscle rupture), 근육 열상(muscle tearing), 타박상(contusion), 염좌(distortion), 회전근개 증후근(roator cuff syndrome) 또는 근육염(myositis)인 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자 또는 상기 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 인간을 제외한 개체에 처리하는 단계를 포함하는 근육 질환 또는 근육 손상의 치료 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자 또는 상기 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 유효성분으로 포함하는 근육 분화 촉진용 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자는 근육 분화된 세포에서 특이적으로 발현되는 긴 비번역 RNA로서, 상기 유전자의 발현양을 측정하여 근육 질환 또는 근육 손상의 진단이 가능하고, 상기 유전자의 발현이 증가되면 근육 분화가 촉진됨으로써, 상기 유전자의 발현을 증가시켜 근육 질환 또는 근육 손상의 예방 또는 치료에 유용하게 사용할 수 있다.
도 1a은 근육 분화 전의 근아세포(MB), 근육 분화 후의 근관세포(MT) 및 골아세포(OB)에서 전체 RNA를 얻어 광범위한 유전자 분석(RNA-seq)에 대한 결과로서, 근관세포에서만 특이적으로 발현하는 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1)을 발견한 결과이다.
도 1b는 ChRO1의 두 가지 아형(isoform) 중 크기가 작은 ChRO1a의 서열을 RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends)를 통해 분석한 결과이다.
도 1c는 ChRO1의 염기서열 분석을 통해 CT-rich한 특성을 확인한 결과이다.
도 1d는 근아세포(MB) 및 근육 분화가 유도(D1,D2,D3)된 세포에서 ChRO1의 발현양을 RT-qPCR를 통해 확인한 결과이다.
도 1e는 쥐의 다양한 조직(뇌, 심장, 폐, 간, 비장, 신장 및 근육)에서 RNA를 추출한 후, ChRO1의 발현 여부를 RT-qPCR를 통해 확인한 결과이다.
도 1f는 ChRO1의 세포 내 위치를 RNA-FISH를 통해 확인한 결과이다.
도 2a는 근아세포에서 ChRO1을 knockdown 시키고 분화를 유도한 후, ChRO1의 발현양을 확인한 결과(왼쪽 패널)와 근육 분화 마커인 MyHC(Myosin Heavy Chain) 및 Troponin T 단백질에 대한 발현양을 웨스턴블럿을 통해 비교한 결과(오른쪽 패널)이다.
도 2b는 ChRO1을 knockdown 시킨 후, MyHC 단백질을 발현하는 세포수 및 세포들이 합쳐져서 근관세포로 형성되는 정도(fusion)를 확인한 결과이다.
도 2c는 ChRO1a의 과발현을 유도한 후, ChRO1의 발현양을 확인한 결과(왼쪽 패널)와 근육 분화 마커인 MyHC 및 Troponin T의 발현양을 웨스턴블럿을 통해 비교한 결과(오른쪽 패널)이다.
도 2d는 ChRO1의 과발현을 유도한 후, MyHC 단백질의 발현을 면역염색을 통해 확인한 결과이다.
도 3a는 ChRO1을 knockdown 시킨 후, chromocenter의 크기 및 개수를 측정한 결과이다.
도 3b는 ChRO1을 knockdown 시킨 후, chromocenter에 위치하는 pericentromere(PeriCEN) 및 centromere(CEN)의 DNA 회수율(recovery)를 FAIRE 실험을 통해 확인한 결과이다.
도 3c는 ChRO1의 과발현을 유도하고 1일간 분화시킨 후, chromocenter에 위치하는 pericentromere(PeriCEN) 및 centromere(CEN)의 DNA 회수율(recovery)를 FAIRE 실험을 통해 확인한 결과이다.
도 4a는 쥐의 종아리 근육에 CTX(Cardiotoxin)을 처리하여 근육을 손상시키고 회복을 유도한 후, ChRO1 및 MyHC의 발현양을 RT-qPCR을 통해 확인한 결과이다.
도 4b는 쥐의 근아세포인 C2Cl2 세포를 4일간 분화를 유도하고, 덱사메타손을 2일간 처리한 후, 근위축 시 증가한다고 알려져 있는 Atrogin 및 Murf 유전자, 근육 마커인 MyHC 및 ChRO1의 발현양을 RT-qPCR을 통해 확인한 결과이다.
도 1b는 ChRO1의 두 가지 아형(isoform) 중 크기가 작은 ChRO1a의 서열을 RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends)를 통해 분석한 결과이다.
도 1c는 ChRO1의 염기서열 분석을 통해 CT-rich한 특성을 확인한 결과이다.
도 1d는 근아세포(MB) 및 근육 분화가 유도(D1,D2,D3)된 세포에서 ChRO1의 발현양을 RT-qPCR를 통해 확인한 결과이다.
도 1e는 쥐의 다양한 조직(뇌, 심장, 폐, 간, 비장, 신장 및 근육)에서 RNA를 추출한 후, ChRO1의 발현 여부를 RT-qPCR를 통해 확인한 결과이다.
도 1f는 ChRO1의 세포 내 위치를 RNA-FISH를 통해 확인한 결과이다.
도 2a는 근아세포에서 ChRO1을 knockdown 시키고 분화를 유도한 후, ChRO1의 발현양을 확인한 결과(왼쪽 패널)와 근육 분화 마커인 MyHC(Myosin Heavy Chain) 및 Troponin T 단백질에 대한 발현양을 웨스턴블럿을 통해 비교한 결과(오른쪽 패널)이다.
도 2b는 ChRO1을 knockdown 시킨 후, MyHC 단백질을 발현하는 세포수 및 세포들이 합쳐져서 근관세포로 형성되는 정도(fusion)를 확인한 결과이다.
도 2c는 ChRO1a의 과발현을 유도한 후, ChRO1의 발현양을 확인한 결과(왼쪽 패널)와 근육 분화 마커인 MyHC 및 Troponin T의 발현양을 웨스턴블럿을 통해 비교한 결과(오른쪽 패널)이다.
도 2d는 ChRO1의 과발현을 유도한 후, MyHC 단백질의 발현을 면역염색을 통해 확인한 결과이다.
도 3a는 ChRO1을 knockdown 시킨 후, chromocenter의 크기 및 개수를 측정한 결과이다.
도 3b는 ChRO1을 knockdown 시킨 후, chromocenter에 위치하는 pericentromere(PeriCEN) 및 centromere(CEN)의 DNA 회수율(recovery)를 FAIRE 실험을 통해 확인한 결과이다.
도 3c는 ChRO1의 과발현을 유도하고 1일간 분화시킨 후, chromocenter에 위치하는 pericentromere(PeriCEN) 및 centromere(CEN)의 DNA 회수율(recovery)를 FAIRE 실험을 통해 확인한 결과이다.
도 4a는 쥐의 종아리 근육에 CTX(Cardiotoxin)을 처리하여 근육을 손상시키고 회복을 유도한 후, ChRO1 및 MyHC의 발현양을 RT-qPCR을 통해 확인한 결과이다.
도 4b는 쥐의 근아세포인 C2Cl2 세포를 4일간 분화를 유도하고, 덱사메타손을 2일간 처리한 후, 근위축 시 증가한다고 알려져 있는 Atrogin 및 Murf 유전자, 근육 마커인 MyHC 및 ChRO1의 발현양을 RT-qPCR을 통해 확인한 결과이다.
이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 전사체 분석을 통한 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자의 발견 및 이의 분석
본 발명자들은 근육에서 특이적으로 발현하며 근육 분화에 관여하는 새로운 유전자를 찾기 위해, 근아세포(myoblasts)와 근관세포(myotubes)에서 광범위한 전사체(rsanscriptome) 분석을 수행하였고, 이를 통해 발견한 새로운 유전자의 서열, 세포 내 발현 위치, 조직 특이적인 발현 여부를 확인하였다.
1.1. 세포배양 및 전사체 분석
쥐의 근아세포(murine myoblast cell line)인 C2C12 세포(ATCC)를 10% FBS와 1% 페니실린/스트렙토마이신 (P/S)을 포함하는 DMEM 배지에서 배양하였다. 이 세포의 분화를 유도하여 근관세포(myotubes)를 형성하기 위해, 2% HS(Horse serum) 및1% P/S를 포함하는 DMEM 배지에서 3일간 배양하였다. 또한, 근아세포를 골아세포(osteoblasts)로 분화 시키기 위해, 5% FBS, 1% P/S 및 200μg/ml BMP2(bone morphogenetic protein 2)를 포함하는 DMEM 배지에서 3일간 배양하였다. 상기와 같이 배양한 근아세포 (MB), 근관세포 (MT) 및 골아세포 (OB)에서 NucleoSpinⓡ RNA prep kit를 이용하여 전체 RNA를 얻어 광범위한 전사체(transcriptome) 분석을 수행하였다. 그 결과, 근관세포에서만 발현하는 새로운 비번역 유전자인 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1)을 발견하였다(도 1a).
1.2. ChRO1의 서열 확인
ChRO1의 일부 서열을 이용해 ChRO1을 타겟할 수 있는, 방사성 동위원소로 표지된 DNA 프로브를 제작하였고, 상기 DNA 프로브를 이용하여 노던블럿(Northern blot)을 수행한 경우 ChRO1이 크기가 다른 두 개의 isoform 형태(ChRO1a: 서열번호 1; 및 ChRO1b: 서열번호 2)로 존재한다는 것을 확인하였다. 이들 중 크기가 작은 ChRO1a의 염기서열을 알아보기 위해 근관세포에서 RNA를 얻어 RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)를 수행하였다. RACE는 PCR 및 시퀀싱(sequencing)을 통해 유전자의 5' 말단과 3' 말단을 확인할 수 있는 실험방법으로서, 이를 통해 ChRO1a의 5' 말단과 3' 말단의 서열을 결정하여 ChRO1a의 전체 서열을 확인하였고, ChRO1a는 특이적인 CT-rich 서열이 있음을 확인하였다 (도 1b 및 1c).
특히, ChRO1의 isoform 중 ChRO1a는 쥐의 7번 염색체 중 44473544 번째 내지 44474881 번째의 염기서열(서열번호 1)로 이루어진 것으로 확인되었으며, ChRO1b는 쥐의 7번 염색체 중 44473544 번째 내지 44485521 번째의 염기서열(서열번호 2)로 이루어진 것으로 확인되었다. 또한, 인간 유전체에서도 이와 유사한 유전자가 존재함을 확인하였고, 인간의 19번 염색체 중 50989847 번째 내지 51003551 번째의 염기서열(서열번호 3)로 이루어진 것으로 확인되었다.
1.3. ChRO1의 조직 특이적인 발현 여부 및 세포 내 발현 위치 확인
본 발명자들은 쥐의 근아세포인 C2C12 세포의 분화를 유도한 후, 각 세포에서 RNA를 추출하고 ChRO1의 발현양을 RT-qPCR로 확인하는 실험을 수행하였다. RT-qPCR에 사용된 프라이머 서열은 하기 표 1과 같다. 그 결과, 근아세포의 분화가 진행될수록 ChRO1의 발현양이 증가하는 것을 확인하였다 (도 1d). 또한, 본 발명자들은 ChRO1이 실제로 근육세포 특이적으로 발현하는 유전자인지 확인해보기 위해서 8주된 수컷 쥐의 여러 조직들을 얻고 그 조직들에서 RNA를 추출한 후, RT-qPCR을 수행하였다. 그 결과, ChRO1은 심장이나 골격근과 같은 근육 세포들에 특이적으로 발현한다는 것을 알 수 있었다 (도 1e).
Primer name | Strand | Sequence | Location | |
ChRO1 Replicon #1 | For | 5'-GCCCTGTGTTCTCTCCTGAATAAAG-3' (서열번호 4) | 710-876 | |
Rev | 5'-CTATGTCCTGTTGTGTAGGGCAG-3' (서열번호 5) | |||
ChRO1 Replicon #2 | For | 5'-TGCAGAGGAAGCAGCAACTA-3' (서열번호 6) | 1901-2135 | |
Rev | 5'-GCATGAGGCACAAGTGAGAA-3' (서열번호 7) | |||
ChRO1 Replicon #3 | For | 5'-GGCTGTCCTGGAATTCACTC-3' (서열번호 8) | 5748-5911 | |
Rev | 5'-AGAGGGGAAAGAGGAAGCAA-3' (서열번호 9) | |||
ChRO1 Replicon #4 | For | 5'-TTCCTGTCCTGTCTGCCTCT-3' (서열번호 10) | 6768-6945 | |
Rev | 5'-CAGGAAAAGATGAGGGCAAG-3' (서열번호 11) | |||
ChRO1 Replicon #5 | For | 5'-ATGAAGTTGGTCCGGAACTG-3' (서열번호 12) | 8783-9026 | |
Rev | 5'-GGTATCCTGCCCCATATCCT-3' (서열번호 13) |
또한, ChRO1의 세포 내 위치를 확인하기 위해 ChRO1 서열에 대한 상보적인 서열을 일부 가지고 있으면서 형광 표지 된 프로브(probe)를 근관세포 내에 도입하여 형광의 위치를 공초점(confocal) 현미경을 통해서 확인하는 실험인 RNA-FISH를 수행하였다. RNA-FISH에 사용된 프로브의 서열은 하기 표 2과 같다. 그 결과, ChRO1은 핵을 염색하는 DAPI와 일치하며, 특히, DAPI의 진한 부분인 chromocenter에 밀집해 있다는 사실을 알 수 있었다 (도 1f).
Probes for RNA-FISH of ChRO1 | |
Location | Sequence |
59 | 5'-aagcagacaggtggagagac-3' (서열번호 14) |
641 | 5'-catggaaggggtgggaaaca-3' (서열번호 15) |
1248 | 5'-taggacaggaagtgcagagg-3' (서열번호 16) |
1324 | 5'-tgctcacaaggtttctagtg-3' (서열번호 17) |
1473 | 5'-tggtatacagtagaggctca-3' (서열번호 18) |
1625 | 5'-gagaatgcataccagagctg-3' (서열번호 19) |
1737 | 5'-aaagcttagcacacagctgg-3' (서열번호 20) |
1790 | 5'-gagagccagtaggaagcaaa-3' (서열번호 21) |
1832 | 5'-cacactcagtgctcaatcag-3' (서열번호 22) |
1863 | 5'-aagagaggcataggtgtgga-3' (서열번호 23) |
1912 | 5'-tctgcctgaaatagttgctg-3' (서열번호 24) |
2007 | 5'-atacgttcctggagacaagg-3' (서열번호 25) |
2083 | 5'-agggaggggacaaagaggat-3' (서열번호 26) |
2886 | 5'-cttaggagatgaggagggtg-3' (서열번호 27) |
4325 | 5'-agcggaggaggatagatgta-3' (서열번호 28) |
4970 | 5'-tggaagagatgtgggtaggg-3' (서열번호 29) |
5030 | 5'-ctgaggtagaggtgtgagat-3' (서열번호 30) |
6012 | 5'-gggggaacgaggactatgaa-3' (서열번호 31) |
6123 | 5'-gagactgatatggagggtcg-3' (서열번호 32) |
6304 | 5'-cagagagtggaagaggtgga-3' (서열번호 33) |
6798 | 5'-aagtggaggagggtgagtag-3' (서열번호 34) |
6947 | 5'-atgatgggagaactggagct-3' (서열번호 35) |
7102 | 5'-aagaaggtgagtgggcaagg-3' (서열번호 36) |
7212 | 5'-gggtaggagtgaaggagaga-3' (서열번호 37) |
7716 | 5'-caatagaggggctcaaggag-3' (서열번호 38) |
실시예 2. ChRO1에 의한 분화 관련 여부 확인
2.1. siRNA를 의해 ChRO1의 발현을 감소시킨 경우
본 발명자들은 ChRO1에 대한 siRNA 두 개(siChRO1-1 및 siChRO1-2, 표 3)를 제작하여 Lipofectamine RNAimax(Invitrogen)를 이용해 근아세포인 C2C12 세포에 도입하였고, 이후, 3일간 분화를 유도한 후, siRNA에 의해 ChRO1의 발현을 감소시켰을 때 근아세포의 분화에 어떤 영향을 미치게 되는지 알아보기 위해 웨스턴 블럿을 수행하였다. 웨스턴 블럿은 단백질을 SDS-PAGE를 통해 크기별로 분리한 후, 발현을 확인하고자 하는 단백질을 검출하는 1차 항체에 16시간 노출 시키고 HRP(HorseRadish Peroxidase)라는 효소가 표지된 2차 항체에 1시간 노출 시킨 후, 그 효소에 대한 기질을 넣어 주어 형광이 나오게 한 다음 AGFA 필름에 노출 시킴으로써 단백질의 발현을 분석하는 실험방법이다. 본 발명에서는 siRNA에 의해 ChRO1의 발현을 감소시켰을 때, 분화마커인 MyHC(Myosin Heavy Chain)이나 Troponin T의 양이 변화하는지 웨스턴블럿을 통해 확인하였다. 그 결과, siRNA를 의해 ChRO1의 발현이 감소된 경우 MyHC(Myosin Heavy Chain) 및 Troponin T 단백질의 발현양이 감소되었음을 확인하였다 (도 2a).
RNAi Name | Sequence | Location | |
siChRO1-1 | 5'-CCA GAG AGG CAG GGA GGA AUU-3' (서열번호 39) | 900-919 | |
siChRO1-2 | 5'-CCA GGA ACG UAU CCA GAA AUU-3' (서열번호 40) | 2014-2033 |
또한, MyHC 단백질에 대한 항체를 세포 내에 도입시킨 후, 형광 표지하여 면역염색(immunostaining)을 수행하여 MyHC 단백질의 세포 내 위치 및 발현양을 공초점 현미경을 통해 확인하는 실험을 수행하였다. 그 결과, ChRO1 발현이 감소된 경우 MyHC를 발현하고 있는 근관세포의 양이 줄어들었고, 세포들이 합쳐져서 여러 개의 핵이 한 세포질에 존재하는 현상(Fusion)도 줄어드는 것을 관찰하였다 (도 2b).
2.2. ChRO1이 과발현된 경우
본 발명자들은 ChRO1을 과발현시켰을 때 근아세포의 분화가 유도되는지 확인하는 실험도 진행하였다. 상기 실시예 1에서 ChRO1a의 완전한 서열을 확인하였기 때문에, 클로닝(cloning)을 통해서 ChRO1a를 레트로바이러스 벡터인 pBabe puro에 삽입하고, 상기 벡터를 PEI(polyethyleneimine) transfection을 통해 HEK293T 세포에 도입하여 ChRO1a를 포함하고 있는 바이러스를 만든 다음, 근아세포에 도입하여 ChRO1a를 과발현하는 근아세포를 만들었다. 이후, 상기 ChRO1이 과발현된 세포의 분화를 유도한 후, 분화마커인 MyHC(Myosin Heavy Chain) 및 Troponin T 단백질의 발현양을 웨스턴 블럿 및 면역염색을 수행하여 확인하였다. 그 결과, 근아세포에서 ChRO1이 과발현된 경우 분화마커의 발현이 촉진되는 것을 확인하였다 (도 2c 및 2d).
실시예 3. ChRO1의 작용 기전
3.1. ChRO1에 의한 chrmocenter의 재구성 기여
근아세포가 근관세포로 분화할 때는 핵 내 chromocenter가 매우 급격한 재구성을 겪게 되는데, 분화가 진행되면 chromocenter의 개수는 감소하고 크기가 증가하는 양상을 보이게 된다. 상기 실시예 1에서 ChRO1의 세포 내 위치가 chromocenter에 존재한다는 것을 근거로, ChRO1이 근아세포의 분화가 진행하는 동안 일어나는 chromocenter의 재구성에 기여하는지 확인해보았다. siRNA를 이용해 ChRO1의 발현을 감소시키고 분화를 유도한 후, chromocenter의 개수 및 모양을 DAPI로 핵을 염색하여 공초점 현미경으로 확인하였다. 그 결과, ChRO1의 발현이 감소하였을 때, 대조군에 비해 chromocenter의 개수가 증가하고, 크기는 감소함을 확인하였다 (도 3a).
3.2. ChRO1에 의한 염색질 밀집(chromatin compaction)
근관세포의 chromocenter 재구성이 일어나게 되면 이 부분의 염색질을 좀 더 촘촘한 형태로 변화하게 된다 (chromatin compaction). 본 발명자들은 염색질 밀집을 확인하기 위하여 FAIRE (Formaldehyde Associated Isolation of Regulatory Element) 실험을 수행하였는데, FAIRE는 먼저 포름알데하이드로 세포 내의 단백질들과 염색질들을 모두 crosslink 시킨 후, 일부는 65℃에서 4시간동안 반응시켜 decrosslink를 유도 한 후에 DNA를 정제하고, 나머지는 decrosslink를 유도하지 않고 DNA를 정제하여 qPCR을 통해 decrosslink 시킨 DNA와 그렇지 않은 DNA를 비교하여 얼마나 많은 DNA가 얻어졌는지 확인하는 실험이다. Decrosslink 시키지 않은 것에서 많은 DNA가 얻어졌다면 비교적 촘촘하지 않은 형태의 크로마틴에 존재하고 있다는 것을 의미하며, decrosslink 시키지 않은 것에서 적은 DNA가 얻어졌다면 촘촘한 형태의 크로마틴에 존재하고 있다는 것을 의미한다.
본 발명자들은 ChRO1의 발현을 감소시키거나, 혹은 ChRO1a를 과발현시킨 후, chromocenter에 위치하는 pericentromere 및 centromere의 촘촘한 정도를 FAIRE 실험을 통해 확인하였다. 그 결과, ChRO1의 발현이 감소되었을 때, pericentromere 및 centromere 부분의 DNA 회수율이 증가하였고 (도 3b), 이는 크로마틴의 구조가 촘촘지지 못하였음을 확인하였다. 반면, ChRO1a를 과발현 시켰을 때는 pericentromere 및 centromere 부분의 DNA 회수율이 감소하였고 (도 3c), 이로부터 ChRO1에 의해 크로마틴의 구조가 더 촘촘해지는 것을 확인하였다.
실시예 4. 근 손상 또는 근 위축증에서 ChRO1의 발현 변화
4.1. 근 손상 시 ChRO1의 발현 변화
쥐의 종아리 근육에 CTX(Cardiotoxin)이라는 약물을 주사하여 근 손상을 유도하였다. 이후, 근육이 재생될 수 있는 시간을 주면서 회복을 유도하였을 때, ChRO1의 발현양상이 어떻게 되는지를 RT-qPCR을 통해서 확인하였다. 그 결과, 근 손상이 유도되었을 때 ChRO1의 발현이 급격히 감소하였다가, 시간이 흐르면서 근육조직 주변의 줄기세포들이 근육세포로 분화하면서 근육이 회복될 때 ChRO1의 발현 역시 함께 회복되는 것을 관찰하였다 (도 4a 왼쪽 아래 패널). ChRO1의 증가양상이 근육 분화마커인 MyHC 보다 빨리 진행되는 것으로 확인되었고 (도 4a 오른쪽 아래 패널), 이는 ChRO1의 발현 증가에 의해 근육 분화가 유도될 수 있음을 의미한다.
4.2. 근 위축 시 ChRO1의 발현 변화
쥐의 근아세포인 C2C12 세포에 덱사메타손(Dexamethasone)을 처리하게 되면 근 위축증과 같은 상황을 유도할 수 있는데, 본 발명자들은 쥐의 근아세포를 먼저 4일간 분화 시키고, 덱사메타손을 이틀 동안 처리하여 근 위축증을 유도하였다. 이후, 근 위축 시 증가한다고 알려져 있는 Atrogin 및 Murf 유전자, 근육 마커인 MyHC 및 ChRO1의 발현양을 RT-qPCR을 통해 확인하였다. 그 결과, Atrogin 및 Murf 유전자의 발현양이 증가하였으나, MyHC 및 ChRO1의 발현양은 감소되었다 (도 4b). Atrogin 및 Murf 유전자의 발현 증가에 따라 근 위축이 잘 유도되었음을 확인하였고, 근 위축 시 MyHC 및 ChRO1의 발현양이 감소됨을 확인하였다.
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<130> R-2018-0290-KR-1
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<210> 1
<211> 1338
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mouse ChRO1a
<400> 1
acagacacca aggccaggtg agagggtcct gctgcgctgg ggcccacaag ggctcggtgt 60
ctctccacct gtctgcttgc ctctcctgac tgggctcctg ccttccatac ccccatcctc 120
tccttctctg cctctatctc ctctctctct ttctctctct ctctctctct ctctctctct 180
ctctctttct cttcctctgt gtgtgtgtgt gtgtctctct ctctgtctct ctatctctgt 240
gtgtgtgtct ttgtatgtct ttctttgtct ctctgtctct gagtatctct ctgtatgtga 300
ctctctctct gtctctgtgt atctgatttc ccatctctat ctttctctct ctgtctcttt 360
ccatctgttt ctctctctgc ctttgtgtct ctccatcttt cttgccaatt ttctatcccc 420
cttcatctct ctgtctttct ccatctctgt ctctctcagc ctaatttttt cgtctctgat 480
gttccttcca tgtgtctgtc tgcctctcca tctgattttc cttctctctg catttctttt 540
tccatatctg tctttctctc tctcttgtct ctgcctttgt ctctttctct ctccatctct 600
ctgtctctct ttgattcccc cctctctatc tctgcctgct tgtttcccac cccttccatg 660
ccatctccta ttttcgggtc tctcttcctc cctctctgct ggggcctgag ccctgtgttc 720
tctcctgaat aaagctggtt ctgtcctggc tcccccttct ctgcctccgt ctttccttcc 780
ccctctgccc ccacccacgc ccagccccaa tcctggttga agggctcagt cctggcagca 840
ggggcatccc ctcctgccct acacaacagg acataggggt ggaaatcagg gactcgagac 900
cagagaggca gggaggaaag tcagcccaga tgaggcacaa caggtcatgg gatgcagagg 960
ccaggcagca ccctacacca agcagaccag gctcccctcc cccctcgggc caggctgtgc 1020
cagcaccagg acaatgcacc cttgtctcct gtcctgacag ctgggggctc ctgcctccgc 1080
ctccttcaga ggggccagtg gctctctgct ctgccctagg caggggaatg accctgggga 1140
ctaggcctag ggatctacca cctccaggct cctgtctctg cctgagcccc agggttctct 1200
cattattctg gtcaccctgg gtgtttggcc acccttcctg tgcgctgcct ctgcacttcc 1260
tgtcctagct ctgctgtccc tctactacat ccttcctccc cttctggtat gtgtggtcct 1320
ccccactaga aaccttgt 1338
<210> 2
<211> 11977
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mouse ChRO1b
<400> 2
acagacacca aggccaggtg agagggtcct gctgcgctgg ggcccacaag ggctcggtgt 60
ctctccacct gtctgcttgc ctctcctgac tgggctcctg ccttccatac ccccatcctc 120
tccttctctg cctctatctc ctctctctct ttctctctct ctctctctct ctctctctct 180
ctctctttct cttcctctgt gtgtgtgtgt gtgtctctct ctctgtctct ctatctctgt 240
gtgtgtgtct ttgtatgtct ttctttgtct ctctgtctct gagtatctct ctgtatgtga 300
ctctctctct gtctctgtgt atctgatttc ccatctctat ctttctctct ctgtctcttt 360
ccatctgttt ctctctctgc ctttgtgtct ctccatcttt cttgccaatt ttctatcccc 420
cttcatctct ctgtctttct ccatctctgt ctctctcagc ctaatttttt cgtctctgat 480
gttccttcca tgtgtctgtc tgcctctcca tctgattttc cttctctctg catttctttt 540
tccatatctg tctttctctc tctcttgtct ctgcctttgt ctctttctct ctccatctct 600
ctgtctctct ttgattcccc cctctctatc tctgcctgct tgtttcccac cccttccatg 660
ccatctccta ttttcgggtc tctcttcctc cctctctgct ggggcctgag ccctgtgttc 720
tctcctgaat aaagctggtt ctgtcctggc tcccccttct ctgcctccgt ctttccttcc 780
ccctctgccc ccacccacgc ccagccccaa tcctggttga agggctcagt cctggcagca 840
ggggcatccc ctcctgccct acacaacagg acataggggt ggaaatcagg gactcgagac 900
cagagaggca gggaggaaag tcagcccaga tgaggcacaa caggtcatgg gatgcagagg 960
ccaggcagca ccctacacca agcagaccag gctcccctcc cccctcgggc caggctgtgc 1020
cagcaccagg acaatgcacc cttgtctcct gtcctgacag ctgggggctc ctgcctccgc 1080
ctccttcaga ggggccagtg gctctctgct ctgccctagg caggggaatg accctgggga 1140
ctaggcctag ggatctacca cctccaggct cctgtctctg cctgagcccc agggttctct 1200
cattattctg gtcaccctgg gtgtttggcc acccttcctg tgcgctgcct ctgcacttcc 1260
tgtcctagct ctgctgtccc tctactacat ccttcctccc cttctggtat gtgtggtcct 1320
ccccactaga aaccttgtga gcacctgtcg tgtatggggt cccagactca gggactcctt 1380
cctctcttgc gcctgctccc actcgcccca tcctcatctc atatttgtct cctccccttt 1440
ctgccctcct gggagaagga atgaacacac cttgagcctc tactgtatac caggggttcc 1500
actaacttct ttacctcatc acaccctccc cgcacccccc ccataccccg tctcttctcc 1560
ctcccctccc cctctcactg ttttctccac tctcttccaa gacaaagaac gcatttattg 1620
aacacagctc tggtatgcat tctctccctt gtcctccatt ctgcactgac aatggtctct 1680
gccagcctct gcttcctgct cctctctgcc tggggaatat gggcatacat tgggcaccag 1740
ctgtgtgcta agctttttat aaacacttcc ctctcttccc cttctgtcct ttgcttccta 1800
ctggctctcc ccccaggaaa gggaaggggc actgattgag cactgagtgt gtgccaagcc 1860
atccacacct atgcctctct tggcgctcta gctcctcctc tgcagaggaa gcagcaacta 1920
tttcaggcag aggggtgagg tgccctttgg gagcacagct agggtaagga tgggccaaaa 1980
ggcttcaggg ctaagcagga accagccctt gtctccagga acgtatccag aaacaggctg 2040
atggaaagaa gtggccccca cagctagcct gagccaccta ttatcctctt tgtcccctcc 2100
ctgactcccc cactcttctc acttgtgcct catgccatct tcctttgacc tcttcccatc 2160
tctgcccaca tgatatggct acatgaagct catcacagat tcagacactg caacccccct 2220
gaaggccagc tgcgtttcct cctcccctcc ttcactctac tcttctcctc ttcctccacc 2280
tcctcctcct ctccccttct cctcttcctc ctccaacttc ttcctctctt cctcttctcc 2340
atctttctcc tcttcctctc catttccttc tactcctgtc ctttcatctc ctctccttcc 2400
tcctctttta tttcctcctt ctcccccatt ctcttcctcc ttccccttgt cctccacttc 2460
ccgtttcttc tctttctcca tgttcttctg cccctccttt tcctctccat tttctcttct 2520
cacatctcct cctcctcctt ttcctcctcc tcttcctcct cctcctcctt ctccacttcc 2580
atgtcccttg ccttgtccca tcttctttct gctccttcac tttctcttac ctcctcttcc 2640
tacaactcct cctccttttt cttctctttc tctcccactg ttttcttacc catctctcct 2700
ctctcaccac ctcctcatct gccctttctt tctcatcttc tctctccctc tgctcctatt 2760
acatctctta attctctgct tcctcctctc ctacctcttc tttccttacc ctttctttca 2820
tattctcctt ctcttcctcc cccttcttgt ttctttctcc atttcctcct tctcttcctc 2880
caacacaccc tcctcatctc ctaagcatcc tcctcttcat tgcatcctca tatatatatg 2940
tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtatcct atctttcctc tttctctgac ttccttctct 3000
tcctcctttt ctccctccat atttctcttc cttcatctcc tttcttcact ttctcctctt 3060
ttttttctcc atcatcttct tttttctgct tttctcctcc ttagtcccac tttccttttc 3120
ttctaatctt cttcctcctc ctctcttcct ctttttcctc tattatctcc tcctaattca 3180
tcctttctcc ttttccatct tctcttcctt ctagctgctg acttctcttg taccttctat 3240
tcttcctcct gttcttatcc ctccacttcc ttctcttccc ccttcatctc ctcctcttcc 3300
atttcatccc tttcttcatc ttgtcatttc ctttttctct catttcctcc ttctacatct 3360
tctcttttcc ttctaattgt ccccttcctt ctttctttac cctgtccatc tttctctttt 3420
acctcctcct ttctcatatt ctttcatctt cctccttctc ttctgccttt cttctcttcc 3480
ctcccctact catgttctct tccttttcct tctttatttc ctcatccttt gttctttttt 3540
catctcttct ttctcctttt ctcctccatc acttctttct tctcttcctt ttctgccttc 3600
acctgtttct tctcctctct tccatctctt tctcctcttt cctatctcct cttccttctc 3660
tttctcctcc cctcctcctc ctgctccacc tcctttcctg ttctatctcc tcctcttcat 3720
ccccctcctc tttcttttcc tttgctctat ctcatcctct tcttccttct ctccccatat 3780
ctcttgctcc tcttgtatct ccctcatctc atcctccttg tccccctcct tcttctccat 3840
tttcttttct tccttcctct ccaactcttt cctcttcttc atctcttctt cctccttttc 3900
acctcctttc tccatcttcc cttgctccct attttttcta tccttccatt ttcttccttc 3960
atctcttcca tcttttcttc ctctatcttt cttctcctcc ccttctattt tttctcttct 4020
attttctcct catcatcgtc ctatttcatt tcctcttcct catccttcat accttcctcc 4080
tgtatctcct gttcatcctt ctacatttcc tcttcgtatc tatttcctcc tcctcctcaa 4140
tctcctacct atacttcatc tcctctttct ctatctcctc ctactcttct acatcccttt 4200
acttctccat ctcctcctct gttttcttct ccatctgctc tcccttttct ttccatccat 4260
atcattcctt atctatctct cttctctgct gtttcctctg ccatctttct cagttttgtt 4320
cttctacatc tatcctcctc cgctgcctcc tccttttact ttgcctgctt cctgctccat 4380
cttctctttc tccagctcct cttccacctt ctccttctct cccatctcct tctcctcctc 4440
catttcctca tgtctcttgt tcttccacta tctccatccc ctcctcctcc accccattct 4500
caccatctct tcctactctt tcctctatct ttcctgtacc tcctcctctt ccatattctt 4560
ttacctcatt tcctactgcc ccttcatctc catcttctat gtctgtctcc ctccccttct 4620
ggctcctttt ctcattcact tctttctcct ctaactcttc atctttctcc tctgccattc 4680
ccctcttctc ctcactcttg tcctcctcca tctcctttgt tttcatctcc atctttttca 4740
gtatcttcct ctatgtcttc cttcttctca ccatctcctc tccaatctcc tccatctttc 4800
cctctttcat ctcattgccc tgctcctcca acacgtctcc ttttccttaa tcactttctt 4860
catctacacc tacctctgcc tgcatctctt tgctctctac tcatctcctt ctactgtctt 4920
accccccact tactcatctc agctctctat cctccctcct ttgtatcttc cctacccaca 4980
tctcttccat cccccctctt ctgccttcct ttcctgcctc ctctttcata tctcacacct 5040
ctacctcagc ccctgccctt cccttcttta tcttcacctc acttgtctcc tccacctttc 5100
ccttgcctca tctcttcctt ccttcatctt ctccttctac cttctcttcc tcctttatct 5160
ccttaccttt tcctactctt gtctcctcct gctgctcgat cttctcctct atcttgtcat 5220
tctcttcact gtcaactatc tcttacgttt ctctccatct cccttttccc tgccactctt 5280
cctcttccat ctcttcctgt ttcctattct ttatatccta atcctccata tcttctcttg 5340
tatctcctct ttgttcatct cctccatatc ttccccattc tctatttcct cctccataat 5400
cttttttctc ctatcttctc ctacttcctt tcttttcctc tcatttgctc ttccatctcc 5460
tcccctattt tcaactcctc tttctcttcc catccttcta cgatacacct atcccccctc 5520
cacctgtcat caacctcctc cacatctccc ctctccctcc atctttctcc tccttcgtct 5580
cttcatttca cctttctctc cttgctcctc catttccccc ttttttcatc tcattttctt 5640
tttctttttt tttttttttg tttttgtttt tgtttttgtt tttttttttt gcttttttgt 5700
ttttgttttt tgtggttttt agagacaggg tttctctgtg tagccctggc tgtcctggaa 5760
ttcactctgt aggccaggct ggccccgaac tcagaaatcc acctgcctct gcctcccgag 5820
ttctgggatt aaaggcatgt gccaccatgc ccggctcatc tcattttctt attctccttc 5880
ctacttctcc attgcttcct ctttcccctc tctcctgcct tttcatttac tattcttttc 5940
cccttctcct cttcttcttc aatctcctgt cctcttcctt accactcctc ttttccttct 6000
ccatcttctt attcatagtc ctcgttcccc ccatatctct tcttcccact tcttctcctg 6060
ctcctcatat gttctatttc tccttattaa tcccccactg cctgtgtctt ctttcctcct 6120
cccgaccctc catatcagtc tccacttcct ccacctcctc ctcctgctgc ttcccctctt 6180
cctcctgctt cttccttctc catcttttct acctgatctt cccctttttc tgtgaatttt 6240
tctctacctc actgttcacc ctccctcctc ctagcctttt cgtccagctt cccacctccc 6300
cattccacct cttccactct ctgtcctccc acttccttct tcctttactg gtccctctct 6360
tttcccctta cattcttcct cttccttctt ttcatcctca tcttcccatc actgtctcct 6420
ttctagcttt ctcctcctcc tcctcctcct cctcctcctc ctcctcctct tcctccttct 6480
ctggctctgt ctccccttcc ttgccctctc tctttctctt ctttttctcc tccctgtcct 6540
ctccctcttg ctattcttcc tttccttcct ctgcctcttc agtttcctct ttttattcct 6600
tgacaccttg ccatattcta aaatcctcat cctctttctt tgttgtcttc ttcttgagat 6660
ctctttcacc cttccttctc ctacttctct ggtgtcttac tccccccccc ccacacacac 6720
accttctcct tatctcaccc tctccctgca tctcctcttt ctccaacttc ctgtcctgtc 6780
tgcctctctt cttcatccta ctcaccctcc tccacttcca actgttttct cttcagccca 6840
tctcctttct agctccttct ctattcctca tcttcctttc tctgtaccct cttcccccac 6900
ttcctcatcc tctcctctct tccttcttgc cctcatcttt tcctgcagct ccagttctcc 6960
catcatgttt ctcttgctct tccttctcca tccatcactt tcctcttcct tccaattctc 7020
atttccttcc tccttttcct tagtcctgtc taccactacc tcttcctcct cctctcccac 7080
tgtcttttcc tgtgctcact cccttgccca ctcaccttct ttcaagtttc tcctttatct 7140
tctttactcc tggacaaccc cccagtatca tctttttagt attttcctcc cccttttctt 7200
cttccaccag atctctcctt cactcctacc catcttttat tcttcctttt tctcttcttc 7260
tccatcgtta attcaactct tctttccctt ctgttcctca attctcctcc tccctgcttc 7320
ttcatttctt tgaatactat ccatcttcat ccctctttct cttcattcct ctcttctacc 7380
ctttcttttc cttctgttcc tccacatgca tccctgtggt tttccacaca ttctctctcc 7440
tctctttccc cttcaccctc tacctcctcc tctgtctttc cttgtccttt ggtttcctct 7500
acagtgtctc atccaatatc tcctgctgtt cttccttctc tctggcattt acactgtttc 7560
tgcttctgtt tctcctaatt atttctactc cgtctcctct atccctcctc tcctttaact 7620
gctctatccc ctcccttccc tttcacccct ccttctctgt ctcctctatt cctccctttt 7680
tgctttcacc ttcatcacct tcataatccc ctcttctcct tgagcccctc tattgcctcc 7740
tcttctgctc cccctccttc atctttttta tcctttctct tcttcctctc atttatttca 7800
actatccccc tcttgcttct gtctgattct ctcttcctga ctaccttcct ctcctcctcc 7860
tctatctcct cctctgcttc ctctcctcca actcattttc tcctttcttg tcttcttctc 7920
ttccctcctc tccttaatct catctatccc ccttcctcct tccctcctat ctcctctgcc 7980
tcctctattc ccccttcatc cttttcctgt ctcctcctcc tctattcctt ctgcttcctc 8040
cttcacctcc tgtatcctct tcttctttcc ccttattgtc tctatttctt tctcttcttg 8100
cctcccctcc tacctcctct ttctccccca tcttctgcct tgcttctgtt tacaactctt 8160
ctgtcctgtc ccctcctgtg cctctctcgt cttcatcttt ctcccttccc accatcttct 8220
cctcttccac ctttgtcctc ctttctcctc ccaactcatt ctactctaca accttctcct 8280
ccaccatcac ctcccagtcc cctgcttccc tctctgccca tctcttcctc ctttcttctc 8340
cttcacctcc tgtccctcct ttcctctctc attttctttt cttttcttct tcttcttctt 8400
cttcttcttc ttcttcttct tcttcttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 8460
tttttttttt cgagacaggg tttctctgtg tagccctggc tgtcctggaa atcactctgt 8520
agaccaggct ggccttgaac tcagaaatcc acctgcctct gcctcccaag tgctgggatt 8580
aaaggtgtgc accaccatgc ccagctctcc tctcattttc tatggtacct tcacactttt 8640
ctttatccct ttcccttttc tgtgtacctt atatatactc taatttctcc atctctcctc 8700
ctcctctccc tcctcttcct tcagattctt taagagaggg cttctctgtg tagccctggc 8760
tatcctcaaa cttactctgt aaatgaagtt ggtccggaac tgagtccagc ctgcctctgc 8820
ctcctgagtg ctaggattaa aggcagatgc catgtatgct gctcattctc catcataact 8880
gatattcctg tttcctggtc ccatctgccc tgtcctgccc cctacctttc ctcctcaccc 8940
attttcagtc tttccccctc tctctggact cttctccctc gcctgctagc ccagtcctag 9000
tctcagagga tatggggcag gatacccagg gcttgatgtc ctcctggatc cctccccaca 9060
accagacctc tgtctgtctc tgggtcctag cctggggaca taaggaatgt gatcaagagt 9120
gctcagtcca ctttgctcct ctacctgccc agtctcctcc tctacctgcc ctgtctcctt 9180
gctcgtttct ctatccccac ctccttctcc ctaggctgcc tagcccccct ttctgggctc 9240
tctgtcctgt tcttttctgt gcttgccctc atggcctcac tgttctttct ggaatcttct 9300
tttgttctgt tctccatcac tattcccttt cttcctccat tttctttaca acccaggctc 9360
tcccaccagt gctgtaacac cacctcctcc cctttcctca ctgaaactta gaagctgtct 9420
ccacctccct tagcatctct gctgtttatc tcccttgacc attcaggcct ttcttgtctc 9480
cgatatccag tctctcctcc cctcttatct attctgaccc aaggtgctga tctctctctc 9540
tctctctctc acacacacac acacacacac acacacacac acacacccaa cttctgacta 9600
attccctttc tggttgtccc tcactctgct ctctctgtcc ctcacactcc tgtggaactc 9660
cttctggtct tcctgtctct ttcttgcact gactccctat cctctcctgg tgtgtgtgtg 9720
tgtgtgtatg tgcatatgtg cacacacagt ataggacaga ggtcaacctt aggtgttact 9780
catgcttatt ttgtatgttc atgtatgcat atggtgtgct cacctgtaaa acatgtgtga 9840
aggtaggaca tcaacatctc gtgtcctctc tattgttttg cgccttagtt tttgaacttg 9900
acaccttccg atttggtgag tctggccagc caggaagcct gggaatcccc agcaccagga 9960
tcacttacag gcactgtcac tgtgggggct gtaatgtggg tacaggcagt gtcactgtga 10020
gggctgtagt gtgggtacag gcactgccac tgtgcaggct gtagtgtggg tacaggcact 10080
gccactgtgc aggctgtagt gtgggtacag gcactgtcac tgtgcaggct gtagtgtggg 10140
tacaggcact gtcactgtgg gggctgtaat gtgggtacag gcagtgtcac tgtgagggct 10200
gtagtgtggg tacaggcact gccactgtgc aggctgtagt gtgggtacag gcactgccac 10260
tgtgcaggct gtagtgtggg tacaggcact gtcactgtgc aggctgtagt gtgggtacag 10320
gcacctgcca ctgtgtgggc tgtagtgtgg gtacaggcac tgtcactgtg caggctgtag 10380
tgtgggtaca ggcactgtca ctgtgcaggc tgtagtgtgg gtacaggcac tgtcactgtg 10440
caggctgtag tgtgggtaca ggcacctgcc actgtgtggg ctgtagtgtg ggtacaggca 10500
gtgtcactgt gtgggctgca gtgtgggtac aggcacctgc tactgtgtgg gctgtagtgt 10560
gggtacaggc actgtcactg tgcaggctgt agtgtgggta caggcactgt cactgtgcgg 10620
gctgtagtgt gggtacaggc acctgccact gtgtgggctg tagtgtgggt acaggcacct 10680
gccagtgtgt gggctgtagt gtgggtacag gcacctgcca ctgtgtgggc tgtaatgtgg 10740
gtacaggcac ctgccactgt gtgagctgta gtgtgggtag aggcactgtc actgtgaggg 10800
ctgtagtgtg ggtacagaca gtgtcactgt gtgggctgta gtgtaggtac aggtacctgc 10860
cactgtgagg gctgtagtgt gggtacaggc agtgtcactg tgtgggctgt agtgtgggta 10920
caggcacctg ccactgtgca ggctgtagtg tgggtactgg gactcaaact cggatcttgc 10980
tgcttacata acaaatactt catcaacaaa cctgtctccc atttatttct cttcctgtct 11040
ttcttccatc ctctggcctt tgacctctct ccttcttctt ctcaacttct ttgcctttct 11100
cctccgcacc ctccttccct cccctccctc cccagttctc aatgctgaga gcctctaaat 11160
gggttcctct cctgctctcc ccagccccct gccttggtgc tgtgaggtcc tcaggccctg 11220
agagggaggt gggtcaccag cagccacaga aagtcatggc agtaggttga tcaccggaag 11280
catggctaag actgagtcca ggtgtggctc aggctttgtg acactctttt tttttttttt 11340
ttttttctgt ttgccctgga cactggctgg aggaatgagg cctggaagca ggaagcaaaa 11400
gatcagctcg gagagaagga agagtgctgc cccagacaca gcgggtaaga gccagaactg 11460
tgtgcaatcc tgggctggcc agcgatgggc tctgggactc ttgtgagatt gatgaaggct 11520
gatgaggctg ctctgtcccc tgccaggtgc cccatcttct tcaggcatca gcaatgaaag 11580
acctcggctg acttcagttt tccagatgaa aacatctgta cacctgcagg acactgaaaa 11640
cctgcagctg ctaggacaga ggcttcttag gactcacctg ccttggagga ccaacactgc 11700
ccagcatctg ccatctgtgt gtttggaaag gagctaatgg gactctgtca ccacctgctg 11760
gcatggagtg gaactgcaac ccagctatac taggcactgc aaactgttca aagaatggag 11820
gagtggtggg tgggtatgga aaattctgta gaaataaaca tgtttactcc taacacagta 11880
accttcacag caagtgcctg agacagggcc tcctcattcc gcccaggttg accttgaacc 11940
tgatcctcct gctgcctctt cccagtgctg gagttac 11977
<210> 3
<211> 13705
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Human ChRO1
<400> 3
cagctgccac cgacgccagg tgagaggggc tgttctttcc tcgacctcct gccgcaaggc 60
tccgcgcgtc ttctctcgct gtctccctcc gtctctctct ccctctctct ctccgtctcc 120
ctctctccct gtctctctct ccctctgtct ccctctctcc ctctgtctct ctctctccct 180
gtctctctct ccgtctctct ctctccctct gtctctctct ccgtctccct ctgtctctct 240
ctctccatct ctctctctct ttctccctct ctccctctgt ctctctctcc gtctctgtct 300
ccctctctct ctctctgtct ctctctccct ctgtctccct ctccctctgt caccctctct 360
ccctctgtct ctctctctcc ctgtctctcc ctctgtctct ctctctccat ctctctctct 420
ccgtctctct ctccgtctcc ctctgtctct ctctctccgt ctctctctct ccctctctcc 480
gtctctctct ctccgtctct ctctctccct ctctccctct gtctctctcc gtctctctct 540
ccctctctct ctctctcctt ctctctccct ctctctgtct ctctctccct ctgtctctct 600
ctccgtctct ctctctccgt ctctctctct ccctctgtct ctctctccct gtgtctctct 660
ctccctgtct ccctctgtct ctctctccct gtctctctct ccctgtctct ctctctccgt 720
ctctctctcc ctctctttct ccgtctctcc ctctgtctct ctctccctct ctctctctct 780
ccctctgtct ctctctctgt ctccctctgt ctctctctct ccgtctctct ctccctctct 840
ttctccctct ctccctctgt ctctctctcc gtctctgtct ccctctctct ctctgtctct 900
ctctccctgt ctctctctcc ctctgtctct ctctctccct ctgtctctct ctctccctgt 960
ctctccctct gtctccctct ctccctctgt ctctctcttc ctgtctctct ctctccctct 1020
gtctctctct ctccctgtct ctccctctgt ctccctctct ccctctgtct ctctctctcc 1080
gtctctctct ctccctgtct ctctctccgt ctccctctgt ctctctctcc gtctctctct 1140
ccctctctcc gtctctctct ctccgtctcc ctctgtctct ctctccgtct ctctctctcc 1200
ctctctccgt ctctctctct ccgtctctct ctctccctct ctccctctgt ctctctccgt 1260
ctctctctct ccctctctct ctttctccct ctctccctct gtctctctct gtctctgtct 1320
ccctctctct ctctctctcc ttctctctcc ctctctctgt ctctctctcc ctctgtctct 1380
ctctccgtct ctccctctcc gtctctctct ctccctctct ctctctctcc ctgtgtctct 1440
ctctccctgt ctccctctgt ctctctctcc ctgtctctct ctctccgtct ctctctccct 1500
ctctttctcc gtctctccct ctgtctctct ctccctctct ctctctctcc ctctttctct 1560
ctccctctcc ctctctccct ctgtctctct ctcccactct ctctctccct ctttctctct 1620
ccctctgtct ctctctctcc gtctccctct ctccgtctct ctctctcccc ctctttcccg 1680
ctgtctccct ctctcctctc tctctccgtc tctctctcct tctctttctc cctgtctctg 1740
tctctctccc catctgtctt tctctgtgtc cctctcccca gttctcttta tctcctctcc 1800
tgcctcatct ccctctcctc actgtctctg tctctcattc tccctatcgt tctctccatc 1860
tctctctcct ccttctcgtc tgtttctctc tgtctctcca tctgtctcat ctgtctcttc 1920
ctcccacctc ttttctgtgt ctctgtctcc tccccccaac tttctctcag tctccctcag 1980
caccccctgt ttctctttct tactctccct tttctcccca tctctctgtc tctccctggc 2040
tttgtatctc tgtgtctctt tctctctgtc ttcttctatc tctgtctctc cccatcttct 2100
gtctctgcct ctcctccact tctttctctg cctctccccc acttctctgt ctctccccca 2160
cttctatctc tgactctccc ccacttctct gtctctctct cccccacttc tctctgtctc 2220
tgtttctccc ccacttctat ctctgtctct cccccatttc tctctctgtc tctccccact 2280
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cacttctctg cctctgtctg tcccccactt ctctctgtct ctctccccca tttctatctc 2400
tgtctctccc ccacttctct ctgtctctgt ctctccccat ttctatctct gtctctctcc 2460
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ccactatctc tgtctctccc ccacttctct ctgtctctcc cccacttctc tgtctctgtc 2580
tcccccactt ctatctctgt ctctccattt ctctctgtct ctgtctctcc cccacttctc 2640
tctgtctctc ctccacttcc tctatctctg tctctccccc atttctctgt ctctgtctct 2700
cccccacttc tctctgtctc tcccccactt ctatctctgt ctctcctcta cttctctctg 2760
tctctgcctc tcccccactt ctatctctgt ctcttcccca tttctatctc tgactgtccc 2820
ccacttctct ctgcctctct cccaccattt ctctctgtct ctgtctctac ccccatttct 2880
gtctctgtct ctccccccat ttctctccat ctctgtctgt ctctcctgtc tctgactcct 2940
cctctctccc cagctccctg gacgaagccc tccggggcct ctgcggtccc tgctgaataa 3000
agctgtttct gtcctcacct ctctcccttc tgcgcctcct tctttccttc ctcactcctc 3060
tgcctctcag ctcggccccc cagccctgat cctgggtata gggggtggga attctggagc 3120
tgggggtggg ggctcctccc tcccagagac agagatggat gcagagagag aaccagagac 3180
aggcacggaa agagacagag agagacagag cgagacagag acaagatggg ggccgtaagc 3240
tcagaaatga gagagacagc aggtcacaga gacacagcac gtgagagaca gggagacaca 3300
gagagactca gagacagaca gaccagacag cgcccccact ccaatacaca caaacagaca 3360
caggggacaa gagccggtca gggctggaca gcctcccctc cccctccagg ccaggccagg 3420
ccaggcggtg ccaggcccag gacaatgggc ccttgtcagg gctccggagg agccagccag 3480
ctggggaggc ctgtgggctg ggccacggag gagggtcggc cacagcggct gctgggttgg 3540
ggaaggtgca cctcctgcgg gcctggccca cggcctccac cctcagactc tccttctccc 3600
ctggcctccc ttcctggggt ctccacctac tcccagcctg ctttctctgc tctgcctggg 3660
gaaggggaca ggcatttatg gagtacctgc tgtatgcacc caaaatgcct cctcgcctct 3720
cctcacacac tccgtctccc gccacgggtg tgccgtcctc gggtgtgccc gcctcgggtg 3780
tgcccgcctc gggtgtgccg tcctcggcgc cctctacttg ttcctcctgt gcctctggct 3840
ccttccatgg aagaaacggg caattattaa gcacctgatg cttggcaggc aattccccta 3900
accgcgtctg cactttccat ccttcttgct ttcctgtccc ttctgcccca gttcctttct 3960
ctttctgatt tgcttggtct ctcctgggaa ggaaacgggc atctactgag catctgctat 4020
gcgccgagga gttgaggaac atggctcctc tctcgctacc ttctttcctc cccccacccc 4080
cattcctttc tttctttttt tctttctagg acagggtctc actccgtcgc tcaggttgga 4140
gcgcacacaa tcgcagctca ctgcagcctc gacttcctgg gctcaagcag tcctcccacc 4200
ccagcctccc aagtagctgg aactccacac accaccattc ctggctaatt tttgtattat 4260
tattattatt tgagatggag ttttgctctt gccgcccagg ctggagtgca atggcgtgat 4320
ctcagctcat tgcaacctcc acctcctggg ttcaagcgat tctcctgcct cagcctcccg 4380
agtagctggg attacaggca cccgccacca cgcctggata atttttaagt atttttagta 4440
gagacggggt ttcaccatgt tggtcaggct ggtcttcaac tcctgacctc aggtgatcca 4500
cccaccttgg ctcccaaagt gctggaatta caggaatgag ccaccgcacc cagcctaatt 4560
tttgtatttt ttgtagagac agggtctctc tacgttggcc aggctggtct cgaactcttg 4620
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ggcgcctggc ccctttcttt cctctctatt ggtgtcctct cctttctgac tttctgctct 4740
ctcctggcag agggagtgga cacattttga gcacttactg tgtactaaac accttacata 4800
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ctgccagctt atccccttgc tgttctctgg gtccttttct ggggaagggt acaggtgttt 5280
attgagtgcc tcctgtgtgc cccatggttt acctgcaatg ccccctccct gcgtatcctc 5340
tcctctgcca cactcctctc actgatccct cctccctctg ctcctccacc cccacggagg 5400
cctcctgggc caaccttttc ctctcattcc tgtctgtgcc ttcatttctg tcttgttctc 5460
ttgctcctcc aaggacgaca atgtgcattt attgagtgcc tcctgtgtgc ccaccacctc 5520
accagtgtac ttgttctcat ttcctctctt ctccctgcct ccttctctcc accagcttct 5580
ccccctcctc tctgccctgc cagctctttc ctgagggagg aaataggcat gtattgagtg 5640
cctactgtat gctgccgctt catctacact gtctgcttgc ctcacaggct ctgttctccc 5700
ttctctcctt ttctccttct ctccgcttgc tcccttcctc ctggctgctt tctctgtgct 5760
tgctgccagg gaggagaatg ggcatttatt aggcacccac tgtgtattag tcactttaca 5820
tatattgtct ccttcccaca caacagtctc ttctattctc tctgctggag tttcctcctc 5880
ctcctcctcc tcctcctctc ttcctcctct tctccttcct cctcctcttc ctccttctct 5940
tcctcctctt cctcctctcc tcactcctcc tttactttct cctgtctctt ggggaaaaga 6000
aataacactt aacaaacacc tactggtctg cttcacactt tccacccgtg cctctctctc 6060
tttttttttt tttttttttg agatggagtc ttgctctgtc gcccaggctg gagtgcaggg 6120
gggcaatctg agctcactgc aacctctgcc tcccgggttc aagcgattct cctgtctcag 6180
cctcctgagt agctgggatt acaggcaccc accaacatgc tcggctaatt ttttgtattt 6240
tagtagagac ggggtttcac cgtgttgccc aagctggtct cgaactcctg agctcaggca 6300
atccacctgc ctaggcctcc caaagtgctg ggattacagg cgtgagccac cgtgcctggc 6360
tctatgtccc tctctttagg ctgcctctcc ttctgctttt gctctgcggg actttcttct 6420
tctccctttt catgtggtcc tgaagggcct gggcagttat tgagcaccga ctgtgtgcca 6480
ggctttttat agatacagcc tccccttctc accctcgatt ccccctttct cttcctctct 6540
ctgccttcct actctctgtg ctctccccta ggaaagggga agggcaccaa ttgagcgcca 6600
actgtgtacc aaggcgactc tctttagccc cttcctttcc cctcagccgc cacagcccta 6660
gaaggggtgg ccagctacac cgtgcggggc tgcaggaaag aggaggagga aggaggatgt 6720
gggctgcagc ctgatttctc ccttggaaaa atatgtggac gacaatggct actccctccc 6780
aggtcagggt ggggtggggg aggctgaagg aggcctggag ggactctagg aaggaacact 6840
ctagaatctg agcctgagag gcagcccgtg cccatggagg ggacgcttct gctgccagtc 6900
accacactgg attcaagcct gagcctcctt cctccacctc cctctcccct ccgcaggcct 6960
tcctgccctg cagacacttg gcgggtggtc cctggactcc tcaccacctg agggagcaga 7020
tgaggaaact gaggctcggg cgggaaagag gatttgcccc tccccattct ccttctacct 7080
ctcctctgtg acccccttcc tctgtctctc tcgccctctc ctctctccca ttctctgaat 7140
ctctccccca acccctgctc ccactctgtt cctgtctctg catgccccca aattcccttt 7200
tttttttttt tttttttttt ttgagatggg gactcgctct gtcgcccagg ctggagtgca 7260
atggagcgat ctcagctcac cgcaacctcc tcctccctct tactccacct cctcctcttt 7320
cctccttcct catctttcct tctccttctt cctccttcct cttactccct cctccttcct 7380
cctcctttcc ctctttcctc ttcctcctcc ctcctcctcc tcacccctcc tccccctttc 7440
ctcctcctct ccctctttcc tcttcttcct ccctcctcct ccttcctctt tcctcctcct 7500
ctttcctcct cctcctcacc cctcctcccc ctttcctcct cctccccctt cctcctcttt 7560
cctcttcctc cttcttcctt ctcctcctcc tctttcctct cccccctcct cctcccccta 7620
tccataacac acacacacac aggctgtccc tgtccctgtg tgtcctctct tcggctggat 7680
cctcagtgtt tcctcctctc taggtcttgc acacactgct cctcccttgg gcgatattcc 7740
agtcctccac acgcttccac ccagccccac cttttcctga ttgtccacct tgtggctctc 7800
agcctttctg gaatcttctc ccttgtcctc cagactgcca ccccccactg tcttctgccc 7860
tctccttccc ctgcgctagg tcctcctcct catccccgcc ctgtcatttc ctcatcgtct 7920
gtacccaacc cccagaggag gcgctgatgg ggccccagtc tcactgtgcc cgtccacagc 7980
aaccgactgt gtcagaagga gacaaggggg ccggggacaa ggggcagcac tgtggttagg 8040
gcctgtgccc ttggtctccc tccctcctct gcctcctttg cctccagttt ctgtcccttg 8100
gatttgcctc tcctctttcc tctcactcct gcctcccctt cctctccctg caccttcagt 8160
gagttccacc tggcttcccc tccacacgct cctggtggct tctctttggc gcttctctct 8220
ctctctctct ctctctctct ctctctctct ctctccctgt ctctcccatc tctcgctgtc 8280
tctgtctcat tttctcagtc cgtctctgtc tctctcgctc tgtctctctc actctcttgc 8340
catcattgtc tctgtttctc tcgctgtctc tttctttctc actctctcgc catcattttg 8400
tctgtttctc tcactgtctc tctctgtctc tcgctttctg tctcattgtc tgtctctctc 8460
tggctatctc tcttttactg tctctctctc gctgtctgtc tctcactctc tctctcggtc 8520
tccctcttac tgtctctctc actgtctctc ttgctgtctc cctgtctctt tctctcactc 8580
tttctcgcta tctctgtttc tctcaacgtc tctgtctctc tcgctgtctc tttctctctc 8640
catctctcgc catctctctc tccctctctg tctctgacac actctatttc tcccatcctc 8700
ccctccatgg ggctttcctg tttcctttcc atcctcacct tcactcgctc tttcctctcc 8760
gttttctccc tcaccccaca agctctctcc cctcgcctct agtcccccaa gtccttccca 8820
gctccgcctc tccatgcccg ctccttcctt tccagttcct ctgccagtca ttgtccttga 8880
cccttccctc tcctcgtctc tgctcccacc ggctcgtctg agcctggcgc tgacagcctt 8940
ctccccaccc cgcccaaccc cacccccgac tcccgccatc ccctcgcctc ctggtccctg 9000
tccccctccc gcgtccccgt cttcttgatg actccaacag ctgcagctgc agaggccccg 9060
aggcccctcg gaggagactg ggcagggagg gctcctccgc atgctgggat atttttatcc 9120
tgccttggac gatcgggacg attggtcctg caatctgttt caccctttaa gaaactcatt 9180
tcatgtcctg ccaggtcctg ggaccataag ctcgcgtgtc tccacagttg cacattcccg 9240
tccgtctgca gctcattatc tgggccacaa ggacgttacc ccatgacttg gaaggacgcg 9300
ccatcacgca ggaggtcaca aagtggacgg caggaaagcc agccttccct cttctgcctt 9360
cctcctcacc tctctctctc tctctcagta ctttgttctt gttaatatca gtgtatcaat 9420
gagcctggtt ttttgccttt tattattatt attaacatag tgagcacagg cgtttcgtac 9480
tctgcgtctg attttccagc agcgaagcct ctgccatccg ccccaccgtc ccgctggctc 9540
ttgctcattg tctttccctt ccctgcttgc ctgctccctc acgcccctgc tctgcgtgtt 9600
ggatgtgaaa aggatgtcag ggactaggcg gagggcatgt tcctccgagc ccaggctgca 9660
ccttggcaca gtggagggtc cacccacccc aggtagccca ggtgaggccc ctgggtcccc 9720
ctgtcactca ggctgtccac atgaaagtcc agatgtctcc gaccaacaga tccctgggag 9780
aaaggacgtg acgctgccgc ttcaccggga tgggttccca cgtccctccg cgttgaccca 9840
cagcttcctt acggtcttgt atgtagtttg atgcttttaa gggccggcca cggtggctca 9900
acgcctgtaa tcccagcact ttgggaggcc aaggtgggcg gatcatgagg tcaggaattc 9960
gagaccagcc tagccaaaat ggtgaaaccc cgtctctact aaaaaataca aaaattagca 10020
ggcacgatgg cgggcccctg taatcccagc tacttgggag gctgaggcag gagaatcgct 10080
taaacccggg aggcggagtt tgcagtgagc cgagatcgcg ccactgcact ctagcttggg 10140
caacacagca agactccgtc tcaaaaaaaa aattgttaag actattttat ccaggttcct 10200
acttgttttc agttatgggg ttgggggcgg ggtgggaggg caatgacctg acacagtgtt 10260
accggatgag gagtctggtc ttgctttgct ttctctgcct tttctgtctt gtcattggct 10320
ctcccgccct cctacacgca ccccgcctgt tgcttctctc attctccagt tcccttccaa 10380
tcccccttca cttctcttta ctcccctccc ccaggtcagt gctcggcgtt tcctccctct 10440
ttctgttctc ccatcctccc gggcagctgt ctctgtcctg ttctgtctcc tgttctcccg 10500
cccctccagc tccttccctt cctcctttct cctgggccct tctctgccgc accttccaca 10560
gctgctctgt tcctccccat cctcgtctag tcccattcgt tgtcctttct ctccctgggt 10620
cacagagatg gccccggggt ggctgcgccc tgttgaggca gggaacgttt ctgctgcatg 10680
gccgagttcc caacctggac ccgccgggtc tggcagcctg tccccgcagt agcctgggct 10740
gtgcccacga cacccccgcc gcccagctac ccggccctct ccgtgcctca cactggctcc 10800
taacctgctt cacgttcctg cttcctgccc cggtctctgg gctgacgctg tcttaggggc 10860
gccccctcct cagctggagg ggcatggtcc tctgtcgcta cttccaatcc tctctccctt 10920
ctttctctcc atattgctct tccacactca tgcacctctt ctttcctttc tgcttttttt 10980
ctcgctcact cacccgctgg agtgcagtag tgcagcctcc acctcccagg ctccagtgat 11040
cctcctgcct tagcctctca aagtgctggg accacaggtg cgaggcacca tgcccggcct 11100
gttcttttct ctctgccctt ttttgtattt tttcctttct cctttccttc ttccctaatg 11160
tctgtctctc tccttccctt cttaacttcc cttctctctc cagccctctc ctaccctcct 11220
tttctctttt cccctatctc cagccctctc ctaccctcct tccctccctc tttctctctc 11280
cccctccgca ccgctccatc tccctctcgg tccagtccgc tgtctgtgcc ccctctctgt 11340
tccgttttct ctcccaccct tcttccctct cccatttctt ctcttttccc ctcttcctgt 11400
tctctttttc tcgctgtcct ctctgtggcc accctccttt ttctcacttc tgctctccct 11460
gtccggctct tctctctcct ctctcccttc tagcagattc tctggctgtt tcctctcctc 11520
tccctctgtg ctcctccctc ctcctctctc ctcccagcca ctatcctctc tcttcaccct 11580
cttctctttc tgtctcatgg tctcctccta gctcttttcc ttcccagttc ctagctctct 11640
cctttctctt tcctcttctc tggctggagc tccccgctcc tccatccctc cctctcccgg 11700
ggccccctct cccccaccct cttctccccc aacaccctct cccccaccca cttctcccta 11760
ggacgctccc tccttcaccc gtttctctgc ttccctcttc tccgagctca ccagccatgg 11820
cacccaccct ctccctctct tccttcctgt cccttttttc accccctcgt ctttctttcc 11880
tcttctgttt tttcttctct ttccacttct gaccccctac actgtttcct tctttctccc 11940
tcttcctctc tcccctcctg ctctggccat cttttctttt tttttttttt tttttttttg 12000
agacggagtc tcgctctgtc gcccaggctg gagtgcagtg gcgcaatctc ggctcactgc 12060
aagctccgcc tccagggttc acgccattct cctgcctcag cctcccgagt agctgggact 12120
acaggcgcct gccaccatgc cctgctaatt ttttttttgt atttttagta gagacagggt 12180
ttcaccgtgt tagccaggac ggtctcgatc tcctcacctc gtgatctgcc tgccttggcc 12240
tcccaaagtg ctgggattac aggcgtgagc caccgtgccc ggctctttcc tcctgctttt 12300
ttcctacact ctctcctccc tcctctcctc cctctttctc ctgtttgatt tccacctctt 12360
ttctctcctc tctcctctga atctgcctct tcctcttctc acctccctct tccttccctg 12420
tctctccccc ttgggtctct cttccttccc tctctctggt ttctctgtct ctgccctgtc 12480
ctttcctttc cctcctctct ggacctgtct cctctcctgg ctctctctcc ttcaagctct 12540
cactcccact ggcctccctc ccgggagccc cgtctcctcc gtctccaggt ggcccctgca 12600
tccctgcctg gtgggccttt gcctccctct cctgttcctg ccttgcctgc tcccaggttt 12660
ccaggtcctg accaggaggc aggagtccat accgaggccc aaacaggcta gccctgagca 12720
gggcccccaa gcctgaggcc caggagtgga cagacctttg tgacacccat tctctcttcc 12780
ttttccatct gtccggaact ctggacactg cctggaggaa tcaggcctgc cgtaggccca 12840
ggaaggcgga aacaaagacg acgctcagag acaggaagca acttgcctaa agatacacag 12900
cacgtaagga gcagggacag gactgggtgg ggcccctggg gttggccagg agtgggctcc 12960
tgaatctgcc gatccctggc ctcctatctg agctcagtga gcagcggatg acgcctttct 13020
gctccattcc gctcccttcc caactcttcc tctgacaaca tgaagcacct cagcactgag 13080
gggacctcac ctgaattcca tttcagaaat gagaaaattg gtgcccaatg tttctgaaga 13140
ccagcaactg ctaagacaga gacttcgagg gaacccgacc ttgcctgaag gaccaacagc 13200
gccccctgca ggacacttcc ctccattgag agaagccaca ggcgccggcc tgaggcattc 13260
tgagtgcgtg gaatcctcta ttaccacctc ctggcaaaga acggagctgc aacccagcta 13320
tatgagacac cgagaatgat ctcaacaaaa aggaacagtg accagaatgc ctgggggagg 13380
aacaggggat actgggtgga aggaggggag agggagaagt tgtaatattt tgtaaaaatg 13440
aacattttta ctcctaatca atatacaaac atcatgctca gcaaacttct tggtatgaaa 13500
cttctgaact tcacacattt tcaagtcatt ctatgggtgg gtggattggc tcccatggaa 13560
atgcaactgg gactgcacat gggaaacaaa ggaaaatgga atttggttca cacaaacctg 13620
tttgggagat tgcatttcca ggaaatgggc caaattgagt ttgtttcctt tgtaacaaca 13680
ttgttgtgcc ttgctgactg gaagg 13705
<210> 4
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Replicon #1 Forward
<400> 4
gccctgtgtt ctctcctgaa taaag 25
<210> 5
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Replicon #1 Reverse
<400> 5
ctatgtcctg ttgtgtaggg cag 23
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Replicon #2 Forward
<400> 6
tgcagaggaa gcagcaacta 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Replicon #2 Reverse
<400> 7
gcatgaggca caagtgagaa 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Replicon #3 Forward
<400> 8
ggctgtcctg gaattcactc 20
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Replicon #3 Reverse
<400> 9
agaggggaaa gaggaagcaa 20
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Replicon #4 Forward
<400> 10
ttcctgtcct gtctgcctct 20
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Replicon #4 Reverse
<400> 11
caggaaaaga tgagggcaag 20
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Replicon #5 Forward
<400> 12
atgaagttgg tccggaactg 20
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Replicon #5 Reverse
<400> 13
ggtatcctgc cccatatcct 20
<210> 14
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 59
<400> 14
aagcagacag gtggagagac 20
<210> 15
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 641
<400> 15
catggaaggg gtgggaaaca 20
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 1248
<400> 16
taggacagga agtgcagagg 20
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 1324
<400> 17
tgctcacaag gtttctagtg 20
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 1473
<400> 18
tggtatacag tagaggctca 20
<210> 19
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 1625
<400> 19
gagaatgcat accagagctg 20
<210> 20
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 1737
<400> 20
aaagcttagc acacagctgg 20
<210> 21
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 1790
<400> 21
gagagccagt aggaagcaaa 20
<210> 22
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 1832
<400> 22
cacactcagt gctcaatcag 20
<210> 23
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 1863
<400> 23
aagagaggca taggtgtgga 20
<210> 24
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 1912
<400> 24
tctgcctgaa atagttgctg 20
<210> 25
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 2007
<400> 25
atacgttcct ggagacaagg 20
<210> 26
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 2083
<400> 26
agggagggga caaagaggat 20
<210> 27
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 2886
<400> 27
cttaggagat gaggagggtg 20
<210> 28
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 4325
<400> 28
agcggaggag gatagatgta 20
<210> 29
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 4970
<400> 29
tggaagagat gtgggtaggg 20
<210> 30
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 5030
<400> 30
ctgaggtaga ggtgtgagat 20
<210> 31
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 6012
<400> 31
gggggaacga ggactatgaa 20
<210> 32
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 6123
<400> 32
gagactgata tggagggtcg 20
<210> 33
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 6304
<400> 33
cagagagtgg aagaggtgga 20
<210> 34
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 6798
<400> 34
aagtggagga gggtgagtag 20
<210> 35
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 6947
<400> 35
atgatgggag aactggagct 20
<210> 36
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 7102
<400> 36
aagaaggtga gtgggcaagg 20
<210> 37
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 7212
<400> 37
gggtaggagt gaaggagaga 20
<210> 38
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ChRO1 Probe_Location 7716
<400> 38
caatagaggg gctcaaggag 20
<210> 39
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> siChRO1-1
<400> 39
ccagagaggc agggaggaau u 21
<210> 40
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> siChRO1-2
<400> 40
ccaggaacgu auccagaaau u 21
Claims (24)
- 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자.
- 제 1 항에 있어서,
상기 유전자는 긴 비번역 RNA(long noncoding RNA)인 것을 특징으로 하는 유전자. - 제 1 항의 유전자를 포함하는 재조합 벡터.
- 제 3 항의 재조합 벡터로 형질도입된 숙주세포.
- 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자의 발현양을 측정하는 제제를 포함하는 근위축증 또는 근육 손상의 진단용 조성물.
- 제 5 항에 있어서,
상기 ChRO1 유전자의 발현양을 측정하는 제제는 상기 유전자에 상보적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브인 것을 특징으로 하는 조성물. - 제 6 항에 있어서,
상기 프라이머는 서열번호 4 및 서열번호 5의 염기서열로 이루어진 프라이머 세트; 서열번호 6 및 서열번호 7의 염기서열로 이루어진 프라이머 세트; 서열번호 8 및 서열번호 9의 염기서열로 이루어진 프라이머 세트; 서열번호 10 및 서열번호 11의 염기서열로 이루어진 프라이머 세트; 및 서열번호 12 및 서열번호 13의 염기서열로 이루어진 프라이머 세트 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 프라이머 세트인 것을 특징으로 하는 조성물. - 제 6 항에 있어서,
상기 프로브는 서열번호 14 내지 서열번호 38의 염기서열로 이루어진 프로브 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 프로브인 것을 특징으로 하는 조성물. - 삭제
- 제 5 항에 있어서,
상기 근위축증은 근기능 저하, 근육 소모 또는 근육 퇴화로 인한 것을 특징으로 하는 조성물. - 제 5 항에 있어서,
상기 근육 손상은 근육 좌상(muscle strain), 근육 파열(muscle rupture), 근육 열상(muscle tearing), 타박상(contusion), 염좌(distortion), 회전근개 증후근(roator cuff syndrome) 또는 근육염(myositis)인 것을 특징으로 하는 조성물. - 제 5 항 내지 제 8 항, 및 제 10 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 근위축증 또는 근육 손상의 진단용 키트.
- 제 12 항에 있어서,
상기 키트는 RT-PCR 키트 또는 DNA 칩 키트인 것을 특징으로 하는 키트. - 근위축증 또는 근육 손상이 의심되는 환자로부터 분리된 생물학적 시료로부터 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자의 발현양을 측정하는 단계; 및
상기 측정된 발현양을 대조군 시료로부터 얻은 기준치와 비교하는 단계;를 포함하는 근위축증 또는 근육 손상의 진단을 위한 정보제공 방법. - 제 14 항에 있어서,
상기 생물학적 시료는 조직 또는 세포인 것을 특징으로 하는 방법. - 제 14 항에 있어서,
상기 ChRO1 유전자의 발현양이 기준치에 비하여 낮은 경우 근위축증 또는 근육 손상의 가능성이 높은 것으로 판단하는 단계를 추가적으로 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법. - 제 14 항에 있어서,
상기 측정은 역전사효소 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사효소 중합효소반응(competitive RT-PCR), 실시간 역전사효소 중합효소반응(real time quantitative RT-PCR), RNase 보호 분석법(RNase protection method), 노던 블랏팅(Northern blotting) 또는 DNA 칩 분석법(DNA chip technology assay)에 의하여 수행되는 것을 특징으로 하는 방법. - 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자; 또는 상기 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 유효성분으로 포함하는 근위축증 또는 근육 손상의 예방 또는 치료용 조성물.
- 제 18 항에 있어서,
상기 재조합 벡터는 바이러스 벡터인 것을 특징으로 하는 조성물. - 삭제
- 제 18 항에 있어서,
상기 근위축증은 근기능 저하, 근육 소모 또는 근육 퇴화로 인한 것을 특징으로 하는 조성물. - 제 18 항에 있어서,
상기 근육 손상은 근육 좌상(muscle strain), 근육 파열(muscle rupture), 근육 열상(muscle tearing), 타박상(contusion), 염좌(distortion), 회전근개 증후근(roator cuff syndrome) 또는 근육염(myositis)인 것을 특징으로 하는 조성물. - 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자; 또는 상기 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 인간을 제외한 개체에 처리하는 단계를 포함하는 근위축증 또는 근육 손상의 치료 방법.
- 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 ChRO1(Chromatin ReOrganization 1) 유전자; 또는 상기 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 유효성분으로 포함하는 근육 분화 촉진용 조성물.
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KR1020180106439A KR102066459B1 (ko) | 2018-09-06 | 2018-09-06 | ChRO1 유전자 및 이의 용도 |
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WO2015020960A1 (en) * | 2013-08-09 | 2015-02-12 | Novartis Ag | Novel lncrna polynucleotides |
KR101830395B1 (ko) | 2016-08-03 | 2018-02-20 | (주)앗코스텍 | 스쿠알렌을 함유하는 근기능 향상 및 근육 손상 예방용 조성물 |
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2018
- 2018-09-06 KR KR1020180106439A patent/KR102066459B1/ko active IP Right Grant
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KR101830395B1 (ko) | 2016-08-03 | 2018-02-20 | (주)앗코스텍 | 스쿠알렌을 함유하는 근기능 향상 및 근육 손상 예방용 조성물 |
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