KR102048119B1 - 피부 노화 방지용 키트 및 피부미용 시스템 - Google Patents

Abstract

본 발명은 텔로머라제 활성화 조성물; 피부 진피층 조사 레이저; 히알루로니다제를 포함하는 국소지방 제거용 조성물; 및 피부 근육층 조사 레이저를 포함하는 피부 노화 방지용 키트 및 피부미용 시스템, 및 상기 키트 및 시스템을 이용하여 사람의 피부 노화를 방지하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 피부 노화 방지 키트 및 피부미용 시스템은 짧은 적용 시간에도 불구하고 즉각적인 주름 개선 효과 및 피부 윤곽 정리, 피부 탄력 증진, 주름 개선, 국소지방 제거, 피부 보습도 개선 등 피부 노화와 관련된 전방위적인 효과를 가질 뿐 아니라, 1년에서 1년 6개월에 이르는 장기간 유지 효과를 가지는 발명으로 피부 노화 방지 분야에서 탁월한 효과를 가지는 발명이라 할 것이다.

Description

피부 노화 방지용 키트 및 피부미용 시스템 {Kit for prevention of skin aging and a system for skin beauty}

본 발명은 텔로머라제 활성화 조성물, 피부 진피층 조사 레이저, 히알루로니다제를 포함하는 국소지방 제거용 조성물 및 피부 근육층 조사 레이저를 포함하는 피부 노화 방지용 키트 및 피부미용 시스템, 상기 키트 및 시스템을 이용하여 사람의 피부 노화를 방지하는 피부미용 방법에 관한 것이다.

인간의 피부는 시간의 흐름에 따라 끊임없이 변화를 겪게 되며, 그 중 가장 대표적인 것이 노화에 의한 피부의 기능 저하 및 시각적인 아름다움의 감소이다. 인체에서 자연스럽게 일어나는 노화 외에도 여러 가지의 외부 환경에 의해서 자극을 받아 노화가 일어난다. 피부의 노화는 크게 유전적 요소에 따른 내적 노화와 태양광선 등의 외부 환경적 요소에 따른 외적 노화로 구분된다.

피부의 외적 노화는 피부에 주름을 형성시킨다. 대표적인 주름 형성 인자로는 지방 축적, 피하 근육 소실, 활성 산소, 자외선, 콜라겐의 생합성 감소 등을 들 수 있다. 즉, 외부의 물리, 화학적 인자, 예를 들어 뜨거운 열, 강한 자외선, 물리적 마찰(외상), 산성 물질 등에 의해 피부 조직이 파괴된다. 피부 조직이 파괴되면 그 기저의 콜라겐이나 엘라스틴 구조, 젤라틴 등이 파괴되어 피부에 주름이 형성되는 것이다.

구체적으로 콜라겐은 피부의 섬유아세포에서 생성되는 주요 기질 단백질로서 세포외 간질에 존재하고, 생체 단백질 총중량의 30 %를 차지하는 중요한 단백질로 견고한 3중 나선구조를 가지고 있다. 주된 기능으로는 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 조직의 결합력, 세포접착의 지탱, 세포분할과 분화의 유도 등이 알려져 있다. 콜라겐은 자외선 노출 시간의 축적에 비례해서 파괴되는 것으로 알려져 있다. 이렇듯, 자외선과 같은 외부 요인은 피부 진피층에서 탄력섬유성 물질을 축적시키고 교원섬유를 변성시켜 피부에 주름을 만들고 탄력성을 저하시킨다.

피부의 내적 노화는 인위적인 조절이 어려우나, 외적 노화는 활성산소 제거, 섬유아세포의 증식, 콜라겐의 생합성 촉진 등의 조절로서 내적 노화에 비해 조절이 용이하다. 주름의 예방 및 치료를 위한 연구가 발전되면서 피부에서 콜라겐의 중요한 기능들이 밝혀지고 있으며, 이러한 연구들로부터 피부 내 콜라겐의 합성 촉진에 의해 콜라겐 대사가 활발해지면 진피 메트릭스 성분이 증가되어 주름개선, 탄력증진, 피부강화 등의 효과가 있는 것으로 밝혀지고 있다. 최근 새롭게 등장한 주름치료법으로 초음파 치료, 피부 스케일링, 레이저 박피술, 보툴리눔톡신 주사 등이 있으나 시술 효과 및 지속성 면에서 아직 부족한 실정이다.

한편, 유전적 노화인 내적 노화는 피부를 이루는 세포들이 염색체가 손상되거나 소실되어 일어날 수 있다. 특히 세포 내 염색체 말단에 존재하는 텔로미어(Telomere)는 세포의 분열에 따른 유전체 복제 기작에 따라 유전체가 짧아지는 유전 정보 소실의 완충 역할을 한다. 세포가 분열할 때마다 염색체는 일정 길이의 유전체를 잃어버리는 데, 일정한 횟수 이상의 세포 분열이 있게되면, 텔로미어가 짧아지고 결국 그 세포는 분열을 멈추고 죽게 된다. 반면 텔로미어가 길게 유지되면 세포의 수명이 연장된다고 알려져 있으며, 이를 유지하는 효소가 텔로머라제(telomerase)이다. 이에 따라, 세포의 유전적 노화를 막기 위한 방법으로 텔로머라제에 대한 연구가 계속 진행되고 있다.

대한민국 공개특허 10-2014-0146074 (2014.12.24).

본 발명은 위와 같은 문제점을 감안하여 창출된 것으로, 그 목적은 피부의 외적 노화 뿐 아니라 내적 노화까지 막거나 지연시킬 수 있는 전방위적인 피부 노화 방지를 위하여 콜라겐 형성을 촉진하고, 텔로머라제의 활성을 촉진하며, 피부 노화에 따른 탄력 회복, 주름 개선, 불필요한 지방층 분해 등을 통해 윤곽을 정리하는 피부 노화 방지용 키트 및 피부미용 시스템, 상기 키트 및 시스템을 이용하여 사람의 피부 노화를 방지하는 피부미용 방법을 제공하는데 있다. 또한, 가능한 짧은 적용 시간을 가지고, 적용 후 후유증이 거의 없으며, 즉각적인 주름 개선 및 그에 따른 피부 윤곽 정리 효과를 가지고, 적용 효과가 장기간 유지되는 피부 노화 방지용 키트 및 피부미용 시스템, 상기 키트 및 시스템을 이용하여 사람의 피부 노화를 방지하는 피부미용 방법을 제공하는데 있다.

본 발명자는 콜라겐 형성을 촉진하고, 텔로머라제의 활성을 촉진하며, 피부 노화에 따른 탄력 회복, 주름 개선, 불필요한 지방층 분해 등을 통해 윤곽을 정리하는 피부 노화 방지 시스템 개발을 위해 노력한 결과, 텔로머라제 활성화 조성물; 진피층 조사 레이저; 히알루로니다제를 포함하는 국소지방 제거용 조성물; 및 피부 근육층 조사 레이저를 포함하는 본 발명의 피부 노화 방지용 키트 및 피부미용 시스템이 피부의 외적 노화 뿐 아니라 내적 노화까지 막거나 지연시킬 수 있는 전방위적인 피부 노화 방지 효과를 가짐을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 피부의 유전적 요인에 의한 내적 노화와 다양한 요인에 의한 외적 노화를 전방위적으로 예방하고 이미 노화된 피부를 회복시켜 노화를 방지하는 조성물과 일정 주파수를 갖는 광원(레이저)를 포함하는 것이다.

본 발명에서 피부 노화 방지란, 콜라겐 생성을 촉진하고, 탄력을 잃고 지방층이 축적되어 늘어진 피부의 윤곽을 정리하고, 피부의 탄력을 증진시키며 주름을 개선하는 것을 포함한다. 또한, 불필요하게 축적된 국소지방을 지방세포 내 지방을 융해(lipolysis) 등을 통해 제거 또는 감축시키고, 피부 세포의 텔로머라제를 활성화하여 피부 세포의 내적 노화를 방지하거나 지연시키는 것을 포함한다. 또한, 피부 보습도를 개선하거나 피부 거칠기를 개선시키며, 피부의 색소침착 정도를 개선하여 피부 톤을 개선하는 것을 포함한다. 즉, 본 발명에서 피부 노화 방지란 위 나열된 피부 노화 현상 중 적어도 하나 이상을 개선 또는 예방하는 것이나, 이에 제한되지는 않는다.

이하에서는 본 발명의 피부 노화 방지 키트 및 피부미용 시스템을 구성하는 A) 텔로머라제 활성화 조성물, B) 피부 진피층 조사 레이저, C) 국소지방 제거용 조성물, D) 피부 근육층 조사 레이저 및 이를 이용한 시술 방법에 대해 상세하게 설명한다.

※ 텔로머라제 활성화 조성물(A)

본 발명에서 용어, "텔로머라제(Telomerase)"란 염색체 말단에 반복적으로 존재하는 유전물질인 텔로미어(Telomere)의 길이를 길게 유지하는 효소로, 세포의 노화를 방지하는 역할을 하는 효소이다. 아울러, 상기 텔로미어는 염색체의 손상이나 다른 염색체와의 결합을 방지하고, 세포가 분열할 때마다 일정 길이씩 짧아진다. 세포는 그 분열이 일정 횟수를 넘어서면 텔로미어가 아주 짧아져 분열을 멈추고 죽게 된다.

즉, 텔로머라제는 세포 내의 유전 물질 및 유전 정보의 소실을 방지하여, 세포가 노화되지 않는 상태로 유지하는 역할을 하는 효소이다. 본 발명은 텔로머라제를 활성화시키고(텔로좀 단백질 발현 증가), 텔로미어의 길이를 길게 유지시키는 텔로머라제 활성화 조성물을 포함하여 세포의 노화를 예방 또는 방지한다.

본 발명에서 텔로머라제 활성화 조성물은 텔로머라제를 활성화 시킬 수 있는 것이라면 제한 없이 사용할 수 있다. 본 발명의 텔로머라제 활성화 조성물은 피부 세포 내에 텔로좀(Telosome)을 구성하는 단백질의 발현을 증가시키거나/증가시키고, 피부 세포 내 염색체의 텔로미어(Telomere) 길이를 유지하는 것을 특징으로 한다. 본 발명에서 텔로좀을 구성하는 단백질은 TRF1(Telomeric Repeat Factor 1), TRF2(Telomeric Repeat Factor 2), RAP1(Repressor activator protein 1), TIN2(TERF1-interacting nuclear factor 2), POT1(Protection of telomeres 1), 및 TPP1(Tripeptidyl peptidase 1) 중 하나 이상이다.

본 발명의 텔로머라제 활성화 조성물의 하나의 실시양태로서 황칠 추출물(Dendropanax morbifera Lev.) 또는 도티 추출물(Kappaphycus alvarezii)을 유효성분으로 포함한다. 본 발명의 황칠 추출물 및 도티 추출물은 황칠 나무(bark) 또는 도티를 분쇄하여 용매(물, 에탄올, 메탄올, 헥산 등 C₁ 내지 C₆의 알코올, 또는 유기용매) 등에 침전시킨 후, 가수분해 효소로 처리하여 추출물을 제조하는 것이나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에서 텔로머라제 활성화 조성물은 황칠 추출물 또는 도티 추출물의 유효성분을 0.00001 내지 10%(w/w)로 포함하거나, 0.0001 내지 5%(w/w)로 포함하거나, 0.001 내지 3%(w/w)를 포함한다.

본 발명에서 텔로머라제 활성화 조성물은 통상 사용하는 윤활제, 습윤제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제, 계면활성제 등의 담체, 희석제 또는 부형제를 사용하여 제형화될 수 있다. 텔로머라제 활성화 조성물의 하나의 실시양태는 외용제이며, 구체적으로 에센스, 영양제, 세럼, 에멀전, 크림, 앰플, 로션 또는 팩제이나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 조성물은 각각의 제형에 따라 황칠 추출물 또는 도티 추출물의 유효성분 외에 각각의 제형에서 통상적으로 이용되는 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민제, 안료, 향료 등을 포함할 수 있다.

상기 담체, 부형제 및 희석제로의 예로는 락토오스, 텍스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로오스, 물, 시럽, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 잔탄검, 탈크, 스테아르산 마그네슘, 미네랄 오일 등이 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.

아울러, 본 발명의 텔로머라제 활성화 조성물은 다른 실시양태로 화장료 조성물이며, 피부에 유용한 효과를 미치는 물질이라고 화장료 조성물 분야에 널리 알려진 물질이 추가로 포함될 수 있다. 예를 들어, 겨우살이 추출물, 모근 추출물, 콩 추출물 등이 추가로 포함될 수 있으며, 본 발명의 추출물 각각은 효모나 락토 바실러스 등의 미생물로 발효된 추출물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 텔로머라제 활성화 조성물의 제조 실시예로 도티 추출물을 0.00056%(w/w)로 포함하는 앰플과 크림을 제조하였다(표 1 및 표 2).

본 발명의 텔로머라제 활성화 조성물을 피부에 도포할 때는 피부의 상태, 조성물 제형, 시간에 따라 다르지만, 해당 분야의 숙련자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 구체적으로 1회 도포량은 3 내지 20 cc이고, 필요에 따라 일일 1회 내지 5회 도포하여 투여할 수 있다.

본 발명은 텔로머라제 활성화 조성물 도포 후 10 내지 90 Hz 주파수를 갖는 초음파 레이저가 동반 시술될 수 있다. 동반 시술은 텔로머라제 활성화 조성물의 도포와 동시에 또는 직후에 초음파 레이저를 시술하는 것이고, 그 시간은 5분 내지 20분간 조사하는 것이다. 본 발명의 텔로머라제 활성화 조성물의 구체적인 시술 실시예의 하나로 텔로머라제 활성화 조성물을 피부에 10 cc 도포한 후, 30 Hz 주파수를 갖는 초음파 레이저를 10분간 조사하였다.

※ 피부 진피층 조사 레이저(B)

본 발명의 피부 진피층 조사 레이저는 2 내지 100 Hz의 주파수를 갖는 레이저 또는 고주파 RF(Radio Frequiency)를 가지는 레이저이고, 진피층 또는 진피층과 피부 근막층에 열 에너지를 도달시키는 것이다. 본 발명의 피부 진피층 조사 레이저는 하나 또는 그 이상의 레이저를 이용할 수 있으며, 예를 들어 [2 내지 9Hz의 주파수를 가지는 레이저], [30 내지 50 Hz 주파수를 가지는 레이저] 및 [고주파 RF(35 Mhz 내지 45 Mhz)를 가지는 레이저]로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상이다.

본 발명에 이용되는 1064 nm의 파장, 2 내지 9 Hz의 주파수를 갖는 피부 진피층 조사 레이저는 진피층 깊이 레이저 에너지를 침투시켜 열에너지를 전달하여 콜라겐 생성을 촉진시키는 기능을 한다. 조사시간은 피부 표면에 1 내지 10분간 조사할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.

또한 본 발명에 이용되는 30 내지 50 Hz의 주파수를 갖는 피부 진피층 조사 레이저는 고강도 집속 초음파를 이용해 깊은 진피층과 피부 근막층까지 레이저 에너지(65 ℃의 열 에너지)를 도달시키는 기능을 한다. 이를 통해 진피층 밑의 근육층을 수축시켜 주름 완화 효과를 가지며, 콜라겐 및 엘라스틴 형성에 도움을 준다. 아울러, 과다 형성된 지방층이 있을 경우 이의 융해를 돕는다. 본 레이저는 파장이 이르는 단계를 두 단계로 나누어 시술할 수 있다. 하나의 단계는, 특히 레이저 파장이 피부 표면으로부터 3.5 mm 깊이까지 이르러 피부층을 수축시켜 주름완화와 콜라겐 및 엘라스틴 형성을 촉진하는 단계이고, 다른 단계는 레이저 파장이 피부 표면으로부터 4.5 mm 깊이까지 이르러 피부에 존재하는 지방층의 융해를 도와주는 단계이다. 시술 시에는 상기 두 단계 중 어느 하나의 단계만을 시술할 수도 있고, 둘 다 시술할 수도 있으며, 조사시간은 각각 10 내지 40분간 조사할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

또한 본 발명에 이용되는 92 W의 고주파 RF 레이저(35 Mhz 내지 45 Mhz)는 피부 진피/지방층까지 고주파 RF를 침투시켜, 진피층 깊이 열을 발생시키며 이를 통해 조직 수축 및 재편성을 유도한다. 결합조직에 열을 발생시키므로 혈류량과 순환이 증가하여 조직이 강화되고 피부결이 좋아진다. 아울러, 세포 사이의 수분 및 독성 물질들이 배출되는 효과를 가지며, 이에 따라 조사된 부위의 피부 윤곽이 시각적으로 정리되는 효과를 가진다. 본 레이저의 경우에는 unipolar mode로 3 내지 10분동안 조사할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 깊은 진피층(deep dermis)에 에너지를 조사하는 레이저는 상기 3가지 레이저 중 선택될 수 있고, 3가지 레이저 중 선택된 조합일 수 있으며, 3가지 레이저 모두를 이용할 수도 있다.

본 발명에서 피부 진피층 조사 레이저로 피부에 시술하는 구체적인 하나의 실시예에서는, 먼저 1064 nm의 파장, 5Hz의 주파수를 가지는 레이저(젠틀맥스)를 3분 또는 5분간 조사하고, 다음으로 30 내지 50 Hz 주파수를 가지는 인디고 레이저를 사용하여, mode A(레이저 파장이 피부 표면으로부터 3.5 mm 깊이까지 이름) 및 mode B(레이저 파장이 피부 표면으로부터 4.5 mm 깊이까지 이름)로 각각 10분간 또는 20분간 조사하며, 끝으로 40.68 Mhz 주파수를 가지는 고주파 RF 레이저로 6분간 조사하였다.

본 발명의 피부 진피층 조사 레이저는 진피층 또는 진피층과 피부 근막층에 열 에너지를 도달시키는 것을 통해 하기 중 하나 이상의 변화를 일으킬 수 있다:

i) 진피층 조직 수축과 재편성;

ii) 피부 근육층 수축;

iii) 콜라겐, 엘라스틴 또는 콜라겐 및 엘라스틴 형성 유도;

iv) 피부 결합조직 내 혈류량 및 림프액 순환 증가; 및

v) 피부 내 수분 및 독성 배출.

※ 국소지방 제거용 조성물(C)

본 발명의 국소지방 제거용 조성물은 히알루로니다제를 일회 주사 용량당 300 IU 내지 600 IU 단위로 포함하고, 국소마취제, 항히스타민제, 지방분해촉진제 및 콜라겐 생성촉진제 중 어느 하나 이상을 추가로 포함하는 것일 수 있다.

본 발명에서 용어, "히알루로니다제"는 포유류의 정관이나 고환에서 분비되는 수용성 효소로, 주요 세포 간 물질인 히알루론산(Hyaluronic acid)과 결합조직 간의 글루코사민 결합(Glucosaminic bond)을 가수분해하여 용해시킴으로써, 조직 간 장벽을 없애주는 작용과 함께 조직의 섬유증식증을 감소시키는 특성이 있으며, 동시에 조직의 붓기와 부종을 감소시키는 작용을 하는 것으로 알려져 있다.

히알루로니다제가 피부조직 내에서 물질을 가수 분해시켜 용해시키는 특징을 가지고 있음을 이용하여, 히알루로니다제를 직접 피하로 주사하였을 때 피하조직 내의 섬유질을 비롯한 물질을 분해하여, 림프순환을 촉진함으로써 체내 지방조직의 순환을 도와 지방조직을 감소시키고 비만을 해소하는 LLD(Lipolytic Lymph Drainage) 치료법이 널리 사용되고 있다. 그러나 상기의 치료법은 히알루로니다제를 고단위(2000 내지 15000 IU)로 사용함으로써 지방조직을 감소시키는데 도움이 되나 여러가지 부작용이 발생하였다.

히알루로니다제를 고단위로 사용하는 종래의 LLD(Lipolytic Lymph Drainage) 치료법은 발적이나 가려움증 등의 알레르기 증상이 발생하고, 지방조직을 과도하게 용해함으로써 피하출혈에 의한 피멍이나 피부함몰(Dimpling) 현상이 발생하였다. 부작용 치료를 위해 LLD(Lipolytic Lymph Drainage) 치료법을 중단하는 경우가 빈번하게 발생하고, 통증에 의한 환자의 거부감으로 지속적인 치료가 어려워지는 문제점이 있었다.

또한 고단위의 사용에 따라 주사부위의 고밀화(약 5cm 간격 주사)가 어려워 주사부위 주변에서만 집중적으로 지방이 제거됨으로써, 피부의 굴곡 현상, 피부처짐, 주름 발생 등의 불균형이 발생하고, 탄력 저하가 심하여 환자의 불만을 초래하였다.

본 발명자는 이러한 문제점에 대하여 예의 연구한바, 히알루로니다제의 약효가 발현되는 최소단위가 300IU 임을 확인하였으며, 600IU를 초과하면 지방세포가 과도하게 가수분해되어 피부함몰(Dimpling)이나 피하조직에 출혈이 발생할 우려가 있는 것을 확인하여, 본 발명의 국소지방 제거용 주사제 조성물의 일회 주사 투여함량을 히알루로니다제 활성도 300 IU 내지 600 IU 내로 조절함으로써, 약물 사용에 의한 부작용을 최소화하면서도 최소한의 용량으로 넓은 부위에서 지방을 제거할 수 있다.

그리고 히알루로니다제의 활성도 단위가 300IU, 투여 용량 1 cc일때 주사액 확산범위가 직경 약 1㎝인 점을 임상시험으로 확인하고, 주사 투여 간격을 0.5 내지 2㎝로 조밀하게 투여하여 균일한 지방제거 및 피부자극에 의한 콜라겐 생성 효과도 촉진할 수 있다.

본 발명의 주사 투여 방법은 히알루로니다제 300IU 내지 600IU 단위로, 일회 투여 용량은 0.5 내지 2㏄, 주사 포인트는 0.5 내지 1.5㎝ 간격으로 주사하는 것이 가장 바람직하며, 히알루로니다제 하루 투여량은 15,000IU 이내인 것이 바람직하며, 상기의 일회 주사 투여용량이나 주사 포인트는 히알루로니다제의 단위에 따라 적절하게 조절이 가능하다.

본 발명의 주사제 조성물은 히알루로니다제 300IU 단위를 가지는 1㏄ 용량을 기준으로 일정 간격으로 50회의 주사투여가 가능하며, 그 주사부위는 복부를 비롯하여 둔부, 허벅지, 종아리, 턱, 이마, 팔뚝 등 지방이 축적된 전신 부위에 사용이 가능하다.

또한, 주사제 투여에 의한 통증완화를 위하여 국소 마취제를, 알레르기 부작용을 방지하기 위하여 항히스타민제를, 분해된 지방의 지방산을 미토콘드리아로 신속하게 이동시켜 분해하기 위한 지방분해촉진제와, 콜라겐 생성 촉진제를 포함할 수 있다. 이로써, 피부 발적이나 가려움증의 알레르기와 통증 및 피멍 등을 방지하고, 지방의 제거를 신속하게 하며, 콜라겐 형성에 의한 피부 탄력 유지에도 매우 우수한 효과를 발휘한다.

상기의 국소마취제는 리도카인(Lidocain)을 사용하였으며, 그 용량은 백분율로 환산하면 조성물 총중량에서 0.08 내지 0.4중량%로 포함할 수 있다. 상기 성분이 0.08 % 미만이면 통증효과가 떨어지고, 0.4%를 초과하면 마취시간이 길어지고 비경제적이다.

나머지 성분들도 백분율로 환산하면 항히스타민제로 페니라민(Pheniramin)을 0.01 내지 0.02중량% 범위 내에서 포함하고, 지방분해촉진제로 L-카르니틴(Carnitine)을 0.01 내지 4.0 중량% 포함하며, 콜라겐 생성 촉진제는 비타민-C를 0.1 내지 2.0 중량% 포함한다.

또한 본 발명에는 일반적으로 주사용액에 사용되는 등장화제, 비이온성 계면활성제, 안정화제 및 보존제 등에서 선택되는 하나 이상의 물질을 주사제 허용용량 범위 내에서 포함할 수 있다. 또한 지방분해제인 포스파티딜콜린(Phosphatidycholine), 아미노필린(Aminophylline), 카페인(Caffeine) 등과 Placenta(태반) 추출물이나, 혈액순환을 향상시키는 펜톡시필린(Pentoxifylline) 성분 등을 0.01 내지 4.0 중량% 추가로 포함할 수 있다.

상기 성분들의 조성범위는 각 약물들이 가지고 있는 하루 사용 가능한 용량의 범위 내에서, 히알루로니다제 300IU 단위를 바람직한 하루 투여량 범위인 15,000IU 투여하였을 경우를 대비하여 용량 범위를 정한 것이다.

본 발명의 국소지방 제거용 주사제 조성물의 하나의 실시양태는 히알루로니다제를 일회 주사용량당 300 IU 내지 600 IU 단위로 포함하고 조성물 총중량 대비 국소마취제로 리도카인을 0.08 내지 0.4 중량%, 항히스타민제로 페니라민을 0.01 내지 0.02 중량%, 지방분해촉진제로 L-카르니틴을 0.01 내지 4.0 중량%, 콜라겐 생성촉진제로 비타민-C를 0.1 내지 2.0 중량% 및 나머지 생리 식염수로 이루어진 국소지방 제거용 주사제 조성물을 일회 0.5 내지 2cc 주사 용량으로, 0.5 내지 1.5 cm로 주사 포인트 간격으로 투여하는 것이다.

본 발명의 국소지방 제거용 주사제 조성물의 구체적인 제조 실시예로, 히알루로니다제 30,000IU 내지 60,000IU 단위로 포함하고, 리도카인 210 mg, 페니라민 12 mg, L-카르니틴 660 mg, 및 비타민-C 600 mg를 포함시켜 100 cc의 조성물을 제조하였다.

※ 피부 근육층 조사 레이저 (D)

본 발명의 피부 근육층 조사 레이저는 구강 내부에서 안면 방향으로 조사되는 것이고, 피부 근육층에 에너지를 전달하는 1 내지 3.5 Hz의 주파수를 갖는 것이다. 본 레이저는 근육층에 에너지가 도달하게 하여 콜라겐 생성, 주름 개선, 및 피부 탄력 증진에 탁월하다. 특히 구강 내부에서 안면 방향으로 레이저 빔을 조사하여 피부 근육층에 에너지를 효과적으로 전달할 수 있다.

구체적으로, 통증이 없으며 마취를 하지 않는 비절제, 비침습적 방식으로 구강 점막에 열 효과를 주어 리모델링 및 타이트닝 효과를 가진다. 이 단계의 구강 내 시술법은 진피층 위쪽에 45 ℃ 내지 70 ℃, 또는 45 ℃ 내지 65 ℃ 사이의 온도를 형성할 수 있도록 제어된 에너지를 가하는 레이저를 조사하여, 조직의 30%의 즉각적인 수축을 일으킬 수 있다. 진피층 위쪽의 즉각적 수축에 의해 밑에 있는 깊은 조직층이 기계적으로 끌어 올려지는 리프팅(lifting) 효과가 있다.

구강 점막을 통해 에너지를 전달하기 때문에 표피(epidermis)를 보호할 수 있으며, 콜라겐 신생(neo-colagenesis)을 촉진한다(최대 6개월 지속). 아울러 구강 점막에 가벼운 열감이 느껴지는 정도일 뿐, 출혈이나 통증도 없고 구강 점막은 특히 회복이 빠른 조직으로 시술 후 일상 생활에 아무런 영향이 없다는 장점도 있다.

본 발명에서 피부 근육층 조사 레이저로 피부에 시술하는 구체적인 하나의 실시예에서는, 1.8 Hz 또는 3 Hz의 주파수의 피부 근육층 조사 레이저를 구강 내부에서 안면 방향으로 5 또는 6분간 조사하였다.

본 발명의 피부 근육층 조사 레이저가 피부 근육층 또는 피부 근육층과 진피층 위쪽에 열 에너지를 도달시키는 것을 통해 하기 중 하나 이상의 변화를 일으킬 수 있다:

i) 근육층 콜라겐 신생(neo-colagenesis);

ii) 피부 근육층 수축;

iii) 진피층 상단 조직 수축.

이하에서 본 발명의 구체적인 실시 양태를 설명한다.

본 발명의 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 A) 텔로머라제 (Telomerase) 활성화 조성물; B) 피부 진피층 조사 레이저; C) 히알루로니다제를 300 IU 내지 600 IU 단위로 포함하는 국소지방 제거용 조성물; 및 D) 피부 근육층 조사 레이저를 포함하는 피부 노화 방지용 키트를 제공한다.

또한 본 발명의 피부 노화 방지용 키트는 텔로머라제 활성화 조성물의 도포와 동시에 또는 직후에 시술되는 10 내지 90Hz 주파수를 갖는 초음파 레이저를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명 키트에서 상기 A) 내지 D) 구성은 순서에 상관없이, 예를 들어, 순차로, 역순으로, 또는 무작위적으로 수행되는 것일 수 있다.

가령, 본 발명의 키트는 [A), B), C) 및 D) 순서], [A), B), D) 및 C) 순서], [A), C), B), 및 D) 순서], [A), C), D), 및 B) 순서], [A), D), B), 및 C) 순서], [A), D), C), 및 B) 순서], [B), A), C), 및 D) 순서], [B), A), D), 및 C) 순서], [B), C), A), 및 D) 순서], [B), D), A), 및 C) 순서], [B), D), C), 및 A) 순서], [C), A), B), 및 D) 순서], [C), A), D), 및 B) 순서], [C), B), A), 및 D) 순서], [C), B), D), 및 A) 순서], [C), D), A), 및 B) 순서], [C), D), B), 및 A) 순서], [D), A), B), 및 C) 순서], [D), A), C), 및 B) 순서], [D), B), A), 및 C) 순서], [D), B), C), 및 A) 순서], [D), C), A), 및 B) 순서], 또는 [D), C), B), 및 A) 순서]로 수행되는 것일 수 있다.

아울러, 본 발명의 키트는 1회 내지 10회 사이클로 반복되어 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 각 회차별로 A) 내지 D) 구성은 순서에 상관없이 수행될 수 있다.

또 다른 본 발명의 실시 양태로서, 본 발명은 A) 텔로머라제(Telomerase) 활성화 조성물; B) 피부 진피층 조사 레이저; C) 히알루로니다제를 300 IU 내지 600 IU 단위로 포함하는 국소지방 제거용 조성물; 및 D) 피부 근육층 조사 레이저를 포함하는, 피부 노화 방지를 위한 피부미용 시스템을 제공한다.

본 발명의 텔로머라제, 텔로머라제 활성화 조성물, 피부 진피층 조사 레이저, 히알루로니다제, 히알루로니다제를 300 IU 내지 600 IU 단위로 포함하는 국소지방 제거용 조성물, 및 피부 근육층 조사 레이저는 상기 설명된 바와 같다.

본 발명의 피부미용 시스템은 텔로머라제 활성화 조성물의 도포와 동시에 또는 직후에 시술되는 10 내지 90Hz 주파수를 갖는 초음파 레이저를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 피부미용 시스템은 하기의 구성을 포함한다. 피부 미용 시스템의 사용은 각 구성을 순서에 상관없이, 예를 들어, 순차로, 역순으로 또는 무작위적으로 수행되는 것일 수 있다:

i) 피부에 도포되는 텔로머라제 활성화 조성물;

ii) 피부에 3분 내지 60분간 조사하는 피부 진피층 조사 레이저;

iii) 일회 용량 0.5 내지 2㏄, 포인트 간격 0.5 내지 1.5㎝ 간격으로 주사 투여되는 국소지방 제거용 조성물; 및

iv) 구강 내부에서 안면 방향으로 3분 내지 10분간 조사되는 피부 근육층 조사 레이저.

아울러, 본 발명은 i) 구성과 동시에 또는 직후에 10 내지 90Hz 주파수를 갖는 초음파 레이저를 5분 내지 20분간 조사하는 것을 추가로 포함하는 것일 수 있다.

가령, 본 발명의 피부 미용 시스템은 [i), ii), iii), 및 iv) 순서], [i), ii), iv), 및 iii) 순서], [i), iii), ii), 및 iv) 순서], [i), iii), iv), 및 ii) 순서], [i), iv), ii), 및 iii) 순서], [i), iv), iii), 및 ii) 순서], [ii), i), iii), 및 iv) 순서], [ii), i), iv), 및 iii) 순서], [ii), iii), i), 및 iv) 순서], [ii), iv), i), 및 iii) 순서], [ii), iv), iii), 및 i) 순서], [iii), i), ii), 및 iv) 순서], [iii), i), iv), 및 ii) 순서], [iii), ii), i), 및 iv) 순서], [iii), ii), iv), 및 i) 순서], [iii), iv), i), 및 ii) 순서], [iii), iv), ii), 및 i) 순서], [iv), i), ii), 및 iii) 순서], [iv), i), iii), 및 ii) 순서], [iv), ii), i), 및 iii) 순서], [iv), ii) ,iii), 및 i) 순서], [iv), iii), i), 및 ii) 순서], 또는 [iv), iii), ii), 및 i) 순서]로 사용될 수 있다.

본 발명의 피부 미용 시스템에서, 위 ii)의 피부 진피층 조사 레이저는 5Hz의 주파수를 가지는 레이저, 30 내지 50 Hz 주파수를 가지는 레이저 및 고주파 RF를 가지는 레이저로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상이고, 상기 5Hz의 주파수를 가지는 레이저의 경우 3 내지 8분간 조사하고, 상기 30 내지 50 Hz 주파수를 가지는 레이저의 경우 15 내지 40분간 조사하며, 상기 고주파 RF를 가지는 레이저의 경우, 40.68 Mhz 주파수로 4 내지 10분간 조사하는 것일 수 있다.

아울러, 본 발명의 피부 미용 시스템은 1회 내지 10회 사이클 반복되어 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 각 회차별로 i) 내지 iv) 구성은 순서에 상관없이 수행될 수 있다. 가령, 예를 들어, i), ii), iii), 및 iv)의 구성이 일주일의 간격을 두고 순차적으로 수행될 수 있으며, 이를 1 사이클로 보아 3 사이클 반복되어 수행될 수 있다.

본 발명의 구체적인 하나의 시술 실시예에서는, 먼저 도티 추출물을 0.00056%(w/w)로 포함하는 텔로머라제 활성화 조성물을 도포한 후 30 Hz 주파수를 가지는 초음파 레이저로 10분간 조사하였다. 그 후 피부 진피층 조사 레이저로, 5Hz의 주파수를 가지는 레이저(젠틀맥스)를 5분간 조사하고, 30 내지 50 Hz 주파수를 가지는 레이저로 인디고 레이저를 사용하여, mode A 및 mode B로 각각 20분간 조사하고, 고주파 RF를 갖는 레이저로 40.68 Mhz의 주파수로 6분간 조사하였다. 그 후 국소지방 제거용 조성물로, 히알루로니다제 30,000IU 내지 60,000IU 단위와 리도카인 210 mg, 페니라민 12 mg, L-카르니틴 660 mg, 및 비타민-C 600 mg를 포함한 100 cc를 1cm씩 떨어지게 1cc씩 50 포인트에 1주일 간격으로 4회 주사하였다. 그 후 1.8 Hz 또는 3 Hz의 주파수를 갖는 피부 근육층 조사 레이저로 구강 내부에서 안면 방향으로 5분간 조사하였다.

본 발명의 또 다른 하나의 시술 실시예에서는, 먼저 도티 추출물을 0.00056%(w/w)로 포함하는 텔로머라제 활성화 조성물을 3 cc 도포한 후 30 Hz 주파수를 가지는 초음파 레이저로 10분간 조사하였다. 그 후 피부 진피층 조사 레이저로, 5Hz의 주파수를 가지는 레이저(젠틀맥스)를 3분간 조사하고, 30 내지 50 Hz 주파수를 가지는 레이저로 인디고 레이저를 사용하여, mode A 및 mode B로 각각 10분간 조사하고, 상기 90w의 고주파 RF를 가지는 레이저를 unipolar 모드로 6분간 조사하였다. 그 후 국소지방 제거용 조성물로, 히알루로니다제 30,000IU 내지 60,000IU 단위와 리도카인 210 mg, 페니라민 12 mg, L-카르니틴 660 mg, 및 비타민-C 600 mg를 포함한 100 cc를 제조하여, 1cm씩 떨어지게 1cc씩 주사제를 10 포인트에 주사하였다. 그 후 3 Hz의 주파수를 갖는 피부 근육층 조사 레이저로 구강 내부에서 안면 방향으로 6분간 조사하였다.

또 다른 본 발명의 실시 양태로서, 본 발명은 본 발명의 피부 노화 방지용 키트 및 피부미용 시스템을 이용하여 피부 노화를 방지하는 피부미용 방법을 제공한다.

본 발명의 피부 노화 방지용 키트 및 피부미용 시스템은 상기 설명한 바와 같다.

구체적으로 본 발명은 하기의 단계가 순서에 관계없이 각 1회 이상 수행되는 피부노화 방지를 위한 피부미용 방법이다:

i) 텔로머라제 활성화 조성물을 도포하는 단계;

ii) 피부 진피층 조사 레이저를 3분 내지 60분간 조사하는 단계;

iii) 국소지방 제거용 조성물은 일회 용량 0.5 내지 2㏄, 포인트 간격을 0.5 내지 1.5㎝ 간격으로 주사 투여되는 단계; 및

iv) 피부 근육층 조사 레이저는 구강 내부에서 안면 방향으로 3분 내지 10분간 조사하는 단계.

아울러, 본 발명은 i) 단계와 동시에 또는 직후에 10 내지 90Hz 주파수를 갖는 초음파 레이저를 5분 내지 20분간 조사하는 것을 추가로 포함하는 것일 수 있다.

본 발명은 상기 단계가 순서에 관계없이, 예를 들어, 순차로, 역순으로 또는 무작위적으로 수행하는 것일 수 있다. 가령, 본 발명은 [i), ii), iii), 및 iv) 순서], [i), ii), iv), 및 iii) 순서], [i), iii), ii), 및 iv) 순서], [i), iii), iv), 및 ii) 순서], [i), iv), ii), 및 iii) 순서], [i), iv), iii), 및 ii) 순서], [ii), i), iii), 및 iv) 순서], [ii), i), iv), 및 iii) 순서], [ii), iii), i), 및 iv) 순서], [ii), iv), i), 및 iii) 순서], [ii), iv), iii), 및 i) 순서], [iii), i), ii), 및 iv) 순서], [iii), i), iv), 및 ii) 순서], [iii), ii), i), 및 iv) 순서], [iii), ii), iv), 및 i) 순서], [iii), iv), i), 및 ii) 순서], [iii), iv), ii), 및 i) 순서], [iv), i), ii), 및 iii) 순서], [iv), i), iii), 및 ii) 순서], [iv), ii), i), 및 iii) 순서], [iv), ii) ,iii), 및 i) 순서], [iv), iii), i), 및 ii) 순서], 또는 [iv), iii), ii), 및 i) 순서]로 수행하는 것일 수 있다.

상기 i) 내지 iv)의 단계는 동일자에 수행되는 것일 수 있고, 각 단계 간에 적절한 시간차를 두고 진행되는 것일 수 있다. 각 단계를 수행하는 상기 적절한 시간차로는 피부 상태와 시술 준비 시간에 따라 1 내지 60분의 차이일 수도 있고, 1 내지 24시간의 차이일 수 있으며, 1일에서 2주의 시간차를 가질 수도 있다. 이는 해당 분야의 숙련자에 따라 정해질 수 있으며, 수행된 단계와 피부의 상태에 따라 시술 시간차는 상이할 수 있다.

아울러, 본 발명의 ii) 단계에서 피부 진피층 조사 레이저는 5Hz의 주파수를 가지는 레이저, 30 내지 50 Hz 주파수를 가지는 레이저 및 고주파 RF를 가지는 레이저로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상이고, 상기 5Hz의 주파수를 가지는 레이저는 3 내지 8분간 조사하고, 상기 30 내지 50 Hz 주파수를 가지는 레이저는 15 내지 40분간 조사하며, 상기 고주파 RF를 가지는 레이저는 40.68 Mhz의 주파수로 4 내지 10분간 조사할 수 있다.

본 발명에 따른 피부 노화 방지 키트 및 피부미용 시스템은 짧은 적용 시간에도 불구하고 피부 탄력 증진, 주름 개선, 국소지방 제거, 피부 보습도 개선 등 피부 노화와 관련된 전방위적인 효과를 가질 뿐 아니라, 1년에서 1년 6개월에 이르는 장기간 유지 효과를 가지는 것으로 피부 노화 방지 분야에서 탁월한 효과를 가지는 발명이다.

도 1은 섬유아세포에 H₂O₂를 이용하여 노화 유도하여, 도티 추출물 0.25% 또는 0.5%를 처리하여 텔로좀(Telosome) 단백질인 POT1과 TPP1 단백질의 발현을 확인한 결과이다.
도 2는 섬유아세포에 H₂O₂를 이용하여 노화 유도하여, 도티 추출물 0.25% 또는 0.5%를 처리하여 섬유아세포 내 텔로미어 길이를 측정한 결과이다.
도 3은 섬유아세포에 H₂O₂를 이용하여 노화 유도하여, 도티 추출물 0.25% 또는 0.5%를 처리하여 β-갈락토시다제 염색 키트(시그마 노화 세포 염색 키트)로 노화 정도를 확인한 결과이다.
도 4는 도티 추출물을 포함하는 조성물을 도포하여 피부 노화 방지 효과를 확인하기 위한 임상 실험 결과로, 실험 시작하는 날과 42일째 되는 날의 공초점 현미경으로 노화 정도를 확인 결과이다.
도 5는 도티 추출물을 포함하는 조성물을 도포하여 피부 노화 방지 효과를 확인하기 위한 임상 실험 결과로, 실험 시작하는 날과 42일째 되는 날의 3차원 스캐너로 노화 정도를 확인 결과이다.
도 6은 도티 추출물을 포함하는 조성물을 도포하여 피부 노화 방지 효과를 확인하기 위한 임상 실험 결과로, 실험 시작하는 날과 42일째 되는 날에 지원자의 나이를 가늠해보는 인지실험을 진행한 결과이다.
도 7은 피부 진피층 조사 레이저를 조사한 직후, 이중턱과 볼살의 탄력이 증가하여 윤곽을 시각적으로 확인한 결과이다.
도 8은 피부 근육층 조사 레이저를 1회 치료한 후, 입 주변 팔자주름을 시각적으로 확인한 결과이다.
도 9는 본 발명의 피부 노화 예방 또는 방지를 위한 키트 및 피부미용 시스템의 효과를 총체적으로 확인하기 위해, 90명을 대상으로, 본 발명인 실험군과 대조군 1 내지 8 참여자의 시술 전과 1주 후, 2주 후, 3주 후, 4주 후 시점에 피부 생검조직을 채취하여 콜라겐 섬유 수를 측정한 결과이다. 본 발명인 실험군은 A) 텔로머라제 활성화 조성물, B) 피부 진피층 조사 레이저, C) 국소지방 제거용 조성물, D) 피부 근육층 조사 레이저 전부를 시술한 것이고, 대조군은 이 중 일부만을 시술한 것이다. 예컨대 대조군 1은 A 시술; 대조군 2는 B 시술; 대조군 3은 C 시술; 대조군 4는 D 시술; 대조군 5는 A, B, C 시술; 대조군 6은 A, B, D 시술; 대조군 7은 A, C, D 시술; 대조군 8은 B, C, D를 각 시술한 것이다.
도 10은 본 발명인 실험군과 상기 대조군 1 내지 8 참여자의 시술 전과 1주 후, 2주 후, 3주 후, 및 4주 후 시점에 피부 탄력도 개선율을 측정한 결과이다. DermaLab USB elasticity probe (Cortex Technology, Inc.)를 적용하여 피부 탄력도 변화를 분석하였다.
도 11은 본 발명인 실험군과 상기 대조군 1 내지 8 참여자의 시술 전과 1주 후, 2주 후, 3주 후, 및 4주 후 시점에 주름도를 측정하여 주름 개선 효과를 측정한 결과이다. 주름의 정도를 수치화해주는 기기(Aroma TS, Programmed by Aram HUVIS Co., 한국)를 사용하여 주름도 변화를 분석하였다.
도 12는 본 발명인 실험군과 상기 대조군 1 내지 8 참여자의 시술 전과 1주 후, 2주 후, 3주 후, 및 4주 후 시점에 지방 두께 감소 효과를 측정한 결과이다. 안면부 피하 지방 두께를 측정하는 SuperSonic Imagine (Les Jardins de la Duranne, Aix en Provence, 프랑스) 초음파를 이용하여 분석하였다.
도 13은 본 발명인 실험군과 대조군 1 내지 8 참여자의 시술 전과 1주 후, 2주 후, 3주 후, 및 4주 후 시점에 텔로머라제 활성화 효과를 측정한 결과이다. 참여자의 채혈하여 샌드위치 효소 면역 측정법을 이용하여 텔로머라제 양을 측정하여 분석하였다.
도 14는 본 발명인 실험군과 상기 대조군 1 내지 8 참여자의 시술 전과 1주 후, 2주 후, 3주 후, 및 4주 후 시점에 보습도 개선 효과를 측정한 결과이다. 피부에서 가장 높은 절연 계수를 가지고 있는 수분 함량에 따른 정전부하용량(capacitrance; 도체가 전하를 저장할 수 있는 능력)을 측정하여 보습도를 측정하여 분석하였다.
도 15는 본 발명인 실험군과 상기 대조군 1 내지 8 참여자의 시술 전과 1주 후, 2주 후, 3주 후, 및 4주 후 시점에 피부의 거칠기를 측정하여 거칠기 개선 효과를 확인한 결과이다. 직경 30 mm의 Beauty scope 기기(60배 렌즈)를 이용해 시험 부위를 촬영하여 피부의 굴곡상태를 그래프 및 수치로 환원하여 거칠기 측정값을 얻었다.
도 16은 본 발명인 실험군과 상기 대조군 1 내지 8 참여자의 시술 전과 1주 후, 2주 후, 3주 후, 및 4주 후 시점에 색소침착 변화량을 측정한 결과이다. RSA(Robo Skin Analyzer CS 50, In Forward. Inc., 일본) 기기를 이용하여 모공, 색소침착, 주름, 피부 톤 등을 종합적으로 측정할 수 있으며, 특히 색소침착 변화량을 측정하여 분석하였다.

본 발명자는 하기 참조예와 실시예를 통해 본 발명의 노화 방지용 키트 및 피부미용 시스템, 상기 키트 및 시스템을 이용하여 사람의 피부 노화를 방지하는 피부미용 방법을 개발하였다.

< 참조예 > 참조예 1: 텔로머라제 활성화 추출물 제조 및 효과 확인

(1) 텔로머라제 활성화 추출물 제조

본 발명자는 텔로머라제(Telomerase) 활성화 조성물을 제조하기 위해 도티 추출물(Kappaphycus alvarezii)을 이용하였다. 구체적으로, 상기 도티를 분쇄하여 용매(물, 에탄올, 메탄올, 헥산 등 C₁ 내지 C₆의 알코올, 또는 유기용매) 등에 침전시킨 후, 가수분해 효소를 첨가하여 추출물을 제조하였다.

(2) 실험관 내( in-vitro ) 피부노화 방지 실험

상기 제조한 도티 추출물의 실험관 내 피부노화 방지 효과를 확인하였다. 텔로머라제가 활성화되면 세포 내 염색체의 말단에 있는 텔로미어(Telomere)의 길이가 유지되거나 늘어나 세포의 수명이 연장될 수 있다. 이와 관련하여, 먼저, 인간 섬유아세포의 노화와 관련하여 실험관 내 실험을 진행하였다.

상기 인간 섬유아세포주를 100 mm 플레이트(Corning 100 mm TC-Treated Culture Dish, Product #430167)에 1800 세포수/cm²의 농도로 깔고, 최종 농도로 0.25% 또는 0.5% 농도의 도티 추출물을 포함하는 섬유아세포 배지로 처리한 후 H₂O₂(과산화수소 4 x 40 uM)를 96시간 동안 처리하여 노화 유도하였다. 이에 대하여, 노화 유도하지 않은 섬유아세포와 도티 추출물을 처리하지 않고 동일한 방법으로 노화 유도한 섬유아세포를 대조군으로 하여 텔로미어의 길이 및 텔로좀 단백질의 발현율을 비교하였다.

도티 추출물을 처리한 실험군에서는 텔로미어 보호 및 길이 유지에 작용하는 텔로좀(Telosome) 단백질인 POT1과 TPP1 단백질의 발현이 높게 유지되었다. 특히, 도티 추출물을 0.5% 농도로 포함하도록 도티 추출물을 처리한 경우에는 노화 유도하지 않은 정상 섬유아세포에 가까울 정도로 유지되었다. 반면 도티 추출물 처리 없이 노화 유도된 섬유아세포의 경우에는 상기 두 단백질의 발현이 각각 68%와 82%로 감소하였다(도 1).

아울러, 상기 실험에서 텔로미어의 감소율을 확인한 결과, 도티 추출물 0.5% 농도가 되도록 도티 추출물을 처리한 경우에는 노화에 따른 텔로미어 감소를 약 65% 억제할 수 있었다(도 2).

마지막으로, 상기와 동일한 조건으로 노화 유도 실험진행하여 β-갈락토시다제 염색 키트(시그마 노화 세포 염색 키트)로 확인한 섬유아세포의 노화 실험에서도 0.5% 도티 추출물로 포함하도록 도티 추출물을 처리한 경우에 세포 노화 정도가 현저히 줄었음을 확인할 수 있다 (도 3).

(3) 생체 내 ( in-vivo ) 피부노화 방지 실험

평균 나이 59 ± 5인 건강한 지원자를 대상으로 위약 그룹 21명, 실험군 그룹 24명으로 구분하여, 실험군 그룹에는 지원자의 피부에 도티 추출물을 3% 포함하는 에멀전 형태의 제제를 얼굴 전체 부위에 도포(하루에 2번 도포)하였으며, 실험시작하는 날(Day 0)과 42일째 되는 날(Day 42)에 공초점 현미경(Confocal Microscopy, Vivascope 1500 Trilaser Lucid^® - Mavig GmbH) 및 3차원 스캐너(Fringe projection, Eotech, France; Optocat software로 분석)로 피부 표면을 측정한 결과를 비교하였다(도 4 및 도 5). 참고로, 노화정도 1단계는 가장 노화된 상태이고, 노화정도 4단계로 갈수록 노화가 덜 진행된 젊은 피부를 의미한다.

그 결과, 상기 실험군 그룹이 위약 그룹에 비해, 도 4에서 확인되듯이 Day 0 비해서 Day 42에 피부 노화 정도가 완화되었고, 실험군 그룹의 58%가 피부 단계의 향상을 보였고, 그 중 46%의 지원자는 노화단계 1 또는 2에서 노화단계 3 또는 4 정도로 향상되었다.

도 5에서는 피부 표면에서 눈가 주름의 깊이 측정한 것으로 Day0에 비해서 Day42에서 주름의 깊이가 27.9%가 개선되었음을 확인할 수 있다.

상기 지원자들의 실험 전 후 사진을 기반으로 평균 나이를 가늠해보는 인지실험을 진행한 결과, 위약 그룹의 경우 평균 62세로 전후의 차이가 없었던 반면, 실험군 그룹의 경우 평균적으로 3년 내지 6년 젊어보인다는 평가를 받았다. 실험군 그룹의 88%가 젊어 보인다는 평가를 받았음을 확인하였다(도 6).

참조예 2: 텔로머라제 활성화 조성물 및 초음파 레이저 동반 시술

(1) 텔로머라제 활성화 조성물 제조

본 발명자는 텔로머라제(Telomerase) 활성화 조성물을 위해 상기 참조예 1의 도티 추출물(Kappaphycus alvarezii)을 이용하였다. 구체적으로, 참조예 1에서 제조한 도티 추출물을 포함하는 텔로머라제(Telomerase) 활성화 조성물을 크림 및 앰플로 제조하였다. 이의 조성은 하기와 같다.

텔로머라제 활성화 크림 조성

성분	성분 함량 % (w/w)
글리세린	8.0
해바라기씨오일	3.2
스테아릭 산	2.5
망고씨드버터	1.5
도티 추출 물	0.0056
효모/겨우살이발효추출물	0.007
락토바실러스/콩발효추출물	0.0036
효모/모근발효추출물	0.0026
정제수	잔량

텔로머라제 활성화 앰플 조성

성분	성분 함량 % (w/w)
글리세린	22.0
소듐피씨에이	12.0
잔탄검	0.2
시트릭 산	0.15
도티 추출물	0.0056
효모/겨우살이발효추출물	0.007
락토바실러스/콩발효추출물	0.0036
효모/모근발효추출물	0.0026
정제수	잔량

(2) 텔로머라제 활성화 조성물 및 초음파 레이저 동반 시술 효과

참조예 1의 실험군 그룹 24명에게 상기 외용제 형태의 텔로머라제 활성화 조성물을 피부에 도포한 후, 피부 내 전달을 촉진하기 위하여 10 내지 90 Hz의 주파수를 갖는 초음파 레이저를 조사하였다.

구체적으로, 상기 외용제 형태 텔로머라제 활성화 조성물을 피부에 10cc 도포한 후, 30 Hz의 주파수로 설정된 레이저(레가토- Alma Laser사, 이스라엘; 및 소노팩트- 메디우스사, 한국)로 10분간 1~2 회차(pass)에 걸쳐 얼굴 전체 부위에 조사하였다.

본 실험에서 초음파 레이저는 i) 시술 부위의 피부에 진동 효과(hamering-impact 효과; push-pull 효과)를 가지고, ii) 표피 조직 및 진피층에 진동으로 인한 열 효과를 가져온다. 아울러, iii) 초음파 조사에 따른 퇴화된 각질 세포를 파괴해주며, 세포 사이사이로의 조성물을 침투시켜 조성물을 진피층에 전달시키는데 효과적이었다.

참조예 3: 피부 진피층 레이저 조사 및 콜라겐 생성 촉진 효과

본 실험은 참조예 2 시술 후, 얼굴 전체 부위와 턱 부위에 피부 진피층에 도달되는 레이저를 조사하는 것이다. 본 단계에서는 진피층 깊숙히 에너지가 도달하게 하는 레이저를 사용하여 진피층 내 콜라겐 합성을 촉진시킨다.

본 참조예의 진피층 레이저 조사에는 3가지 레이저가 사용되었다. 먼저, 1064 nm의 파장, 5 Hz의 주파수를 가지는 레이저(젠틀 맥스- Candela사, 미국)로 피부 표면에 5분간 조사하여 레이저 에너지를 진피층 깊이 침투하여 열에너지를 전달하였다.

다음으로, 30 내지 50 Hz의 주파수를 갖는 레이저(인디고-K1MED, 한국)로 고강도 집속 초음파를 이용해 깊은 진피층과 피부 근막층까지 레이저 에너지(65 ℃의 열 에너지)를 도달시켰다. 본 레이저의 경우에는 mode A와 mode B가 있으며, 시술 시 mode A 및 mode B 둘다 각각 20분간 조사하였다. 이를 통해 진피층 밑의 근육층을 수축시켜 주름 완화 효과와 콜라겐 및 엘라스틴 형성을 촉진하였다. 아울러, 10 내지 20 mm 깊이에 과다 형성된 지방층이 있을 경우 이의 융해를 일으켰다.

마지막으로, 92 W의 고주파 RF 레이저(40.68 Mhz; 테너 레이저-Alma laser사, 이스라엘)를 unipolar mode로 6분동안 조사하였다. 이를 통해 피부 진피/지방층까지 고주파 RF를 침투시켜, 진피층 깊이 열을 발생시켰고 조직 수축 및 재편성이 유도 되었다. 결합조직에 열을 발생시켜 혈류량과 순환이 증가하여 조직이 강화되고 피부결이 좋아졌다. 아울러, 세포 사이의 수분 및 독성 물질들이 배출되어, 조사된 부위의 피부 윤곽이 시각적으로 정리되는 효과를 보였다.

실험 결과, 레이저 조사 직후 피부 주름이 시각적으로 확연히 줄어들었으며, 이중턱과 볼살의 탄력이 증가하여 윤곽이 현저히 정리되는 것을 확인하였다(도 7).

참조예 4: 히알루로니다제 포함 국소지방 제거용 조성물 및 이에 의한 지방 분해 효과

본 실험은 히알루로니다제 포함 국소지방 제거용 조성물을 20세 이상의 성인 남녀 중 BMI 25 이상의 복부 비만환자 중 남녀 지원자 각각 20명의 복부 부위에 주사형식으로 투여하는 것이다. 본 발명의 국소지방 제거용 조성물의 조성과 효과를 하기와 같이 확인하였다.

(1) 히알루로니다제 포함 국소지방 제거용 주사제 조성물의 제조

히알루로니다제는 대한뉴팜주식회사의 리포라제 (1 바이알 1500 IU, 유당수화물 13.3 mg 포함)를 사용하였고, 여기에 리도카인(제조원: 한미약품), 페니라민(제조원: 유한양행), L-카르니틴(제조원: 드림파마) 및 비타민-C(제조원: 대우제약)를 사용하여, 하기 함량으로 고르게 혼합하여 주사제 용액 조성물 100 cc를 제조하였다.

국소지방 제거용 조성물 조성

	실험예 1	실험예 2	실험예 3	실험예 4	비교예 1	비교예 2	비교예 3
히알루로니다제	30,000 IU	30,000 IU	60,000 IU	30,000 IU	25,000 IU	65,000 IU	-
리도카인	-	210 mg	210 mg	210 mg	210 mg	210 mg	-
페니라민	-	12 mg	12 mg	12 mg	12 mg	12 mg	-
L-카르니틴	-	-	660 mg	660 mg	660 mg	660 mg	-
비타민C	-	-	-	600 mg	600 mg	600 mg	-
생리식염수	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량	100 cc
총량(cc)	100	100	100	100	100	100	100

(2) 국소지방 제거용 조성물 투여에 의한 지방 분해 효과

상기 표 3의 실험예 4의 조성물을 투여한 것과 비교예 1 내지 3의 조성물 투여 및 기존 부종 치료 방법인 Endomology에 의한 복부 둘레의 변화를 비교하였다. 투여 방법은 갈비뼈와 치골 사이 복부에 배꼽을 기준으로 1 cm씩 떨어지게 1cc씩 50 포인트에 1주일 간격으로, 주사부위 포인트를 이동시키면서 총 4회 투약 후 1주일 뒤 복부 허리둘레 감소 수치를 측정하고, 1개월 뒤 복부 허리둘레를 다시 측정하여 평균치를 기록하였다.

한편, 기존 부종치료인 Endomology 관리를 주 1회, 1회당 30회씩 4회 시행 후 1주 뒤 및 한 달 뒤 복부 허리둘레 감소를 측정하여 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

구분	기준값(0일차)	4회 시술 후 1주 뒤	차이	4회 시술 후 1달 뒤	차이
비교예 3	90.1 ± 1.2	91.0 ± 1.8	+0.3 ± 1.2	90.5 ± 1.3	-0.2 ± 1.2
비교예 1	91.0 ± 1.0	89.4 ± 0.4	-1.6 ± 0.6	89.8 ± 1.3	-1.2 ± 0.3
비교예 2	90.7 ± 1.3	-	-	-	-
실험예 4	90.8 ± 1.7	81.4 ± 0.5	-9.4 ± 0.2	81.3 ± 0.3	-9.5 ± 0.4
Endomology	92.0 ± 2.0	89.8 ± 1.4	-2.2 ± 0.8	92.2 ± 1.2	+0.2 ± 1.5

통계 분석 및 검증 방법은 SPSS 통계 패키지를 사용하여 측정치의 분포를 얻었고, 실험 주사별 복부 허리둘레 감소 효과를 보기 위해 Paired t-test로 검정하였고, 신뢰도에 대한 검증 구간은 95% 이내로 정하여 분석하였으며 체중 변화에 대하여 보정하였다.

상기 실험에서 체성분 분석기(Inbody)를 이용한 체지방 분석상 평균 1.5 내지 2 kg의 지방감소가 확인되었다.

상기 표 4에 따르면 생리 식염수만을 투약한 비교예 3에서 -0.2±1.2 cm 감소하였으며, 실험예 4에서 4회 시술 후 1주일 뒤 -9.4±0.2 cm의 허리둘레 감소를 보였으며, 1개월 후에도 허리둘레가 -9.5±0.4 cm로 그대로 유지되어 요요현상이 없는 것을 확인하였다.

반면에 히알루로니다제 250IU 단위(1회 투여시 50 포인트에 걸쳐 총 12500IU 투여; 총 4회 투여 진행)로 투여한 비교예 1에서는 1주일 후 -1.6±0.6㎝ 감소하고, 1 개월 후에는 -1.2±0.3㎝ 감소하여 본 발명보다 그 효과가 현저하게 저하되었으며, 히알루로니다제 650IU 단위(1회 투여시 50포인트에 걸쳐 총 32500IU 투여; 총 4회 투여 진행)로 투여한 비교예 2에서는 1회 투여 후 피부 함몰(Dimpling) 발생 및 피멍이 발견되어 투약을 중지하였다.

또한 부종치료 방법인 Endomology 관리에서 나타난 부종제거에 의한 허리 둘레 사이즈 감소효과가 미미하며, 한달 뒤 원상 복귀됨에 따라 히알루로니다제에 의한 허리 둘레 사이즈 감소가 단순 부종 제거뿐만 아니라, 지방분해의 효과가 있음을 더욱 확실하게 알 수 있는 것으로 나타났다.

이상의 결과에서 보는 바와 같이 본 발명의 주사제 조성물은 국부지방 제거 효과가 우수하며, 부작용도 현저하게 감소하고 요요 현상도 없는 것으로 확인되었다.

또한 선행기술인 공개특허 제2009-0111916호의 고용량 히알루로니다제 주사제 조성물보다 저용량으로 사용함에도, 부작용을 최소화하고 국부지방제거 효과도 더욱 향상된 것으로 확인되었다.

(3) 국소지방 제거용 조성물 투여에 대한 부작용 평가

본 발명의 주사제 조성물 실험예 1 내지 4와 비교예 1 내지 3을 상기 (2)와 같은 방법으로 투여하고, 각 환자에게 나타나는 부작용을 표 5에 표기하였다.

구분	발적	부기	가려움	VAS 3 이상의 통증	피멍	피부함몰 (Dimpling)	피부 처짐	피부탄력
비교예 1	1	1	0	0	0	0	0	3
비교예 2	4	3	4	2	10	15	0	2
비교예 3	0	0	0	0	0	0	0	3
실험예 1	11	10	11	13	1	0	1	3
실험예 2	1	0	1	0	0	0	1	3
실험예 3	1	1	0	0	0	1	1	3
실험예 4	1	0	0	0	0	0	0	5

* 피부탄력은 촉감에 의하여 5점 척도법에 의하여 측정하였으며, 1: 매우나쁨, 2: 나쁨, 3: 보통, 4: 조금 양호, 5: 양호로 구분하였음.

상기 표 5에 나타난 바와 같이 본 발명의 국소지방 제거용 조성물 실험예 1은 국소마취제나 항히스타민제를 사용하지 아니하여 통증이나 알레르기 반응이 나타났으나, 고용량인 비교예 2에 비해서는 피멍이나 피부함몰 등의 부작용이 현저하게 감소한 것을 확인할 수 있다. 더욱이 국소마취제와 항히스타민제가 포함된 실험예 2, 3, 4는 실험예 1이나 비교예 2 등에 비하여 알레르기성 발적, 부기, 가려움 및 통증이 현저하게 감소하였음을 알 수 있다. 이러한 효과는 국소마취제와 항히스타민제의 사용 및 저용량의 히알루로니다제에 의하여 나타나는 것으로 보인다. 또한, 실험예 4의 경우에는 피부 탄력이 우수한 것을 확인하여 별도의 피부 탄력 개선효과가 기대되었으며, 피부 탄력 개선 효과를 통해 다른 노화 방지용 시술과의 조합을 시도해 볼 동기를 확인하였다.

또한 실험예 3은 지방분해 촉진제에 의한 지방제거의 효과에 의하여 일부 환자에게서 미미한 Dimpling 현상 및 피부처짐이 발생하였으나, 이는 과도한 비만환자에게서 발생한 것이며, 이른 시일 내에 원상으로 회복되었다.

실험예 4는 콜라겐 생성 촉진제를 포함함으로써 피부의 탄력이 신속하게 회복되면서 피부함몰이나 처짐 현상도 발생하지 아니하였다.

참조예 5: 피부 근육층 조사 레이저 및 탄력 증진 효과

본 실험은 참조예 3 단계까지 시술 받은 참여자 중 9명의 지원자에게 레이저 치료를 수행하는 것이다. 본 단계에서는 근육층에 에너지가 도달하게 하여 콜라겐 생성, 주름 개선, 및 피부 탄력 증진에 탁월하다. 특히 구강 내부에서 안면 방향으로 레이저 빔을 조사하여 피부 근육층에 에너지를 효과적으로 전달할 수 있다.

구체적으로, 본 참조예에서는 2940nm의 파장, 3 Hz의 주파수로 설정된 레이저(포토나 레이저-슬로베니아)로 5분간 구강 점막에서 안면 방향으로 얼굴 전체 부위에 조사하였다. 통증이 없으며 마취를 하지 않는 비절제, 비침습적 방식으로 구강 점막에 열 효과를 주어 리모델링 및 타이트닝 효과를 가진다. 이 단계의 구강 내 치료법은 진피층 위쪽에 45℃ 내지 65℃ 사이의 온도를 형성할 수 있도록 잘 제어된 에너지를 가하는 것을 통하여, 조직의 30%의 즉각적인 수축을 일으킬 수 있다. 진피층 위쪽의 즉각적 수축에 의해 밑에 있는 깊은 조직층이 기계적으로 끌어 올려지는 리프팅(lifting) 효과가 있다.

구강 점막을 통해 에너지를 전달하기 때문에 표피(epidermis)를 보호할 수 있으며, 콜라겐 신생(neo-colagenesis)을 촉진한다(최대 6개월 지속). 아울러 구강 점막에 가벼운 열감이 느껴지는 정도로, 출혈이나 통증도 없고 구강 점막은 특히 회복이 빠른 조직으로 시술 후 일상 생활에 아무런 영향이 없다는 장점도 있다.

본 실험에서는 9명의 지원자에게 레이저 치료를 한달 간격 5회 수행하였다. 그 결과 모든 지원자에서 입 주위 주름이 현저하게 감소되었다. 구체적으로 시술 전 주름 점수가 2.22 MFWS(Modified Fitzpatrick Wrinkle Scale)였으나, 시술 후 주름점수는 0.69 MFWS로 주름지수가 약 69% 감소하였다.

한편, 본 단계는 즉각적인 효과를 보여주는 것을 확인하였으며, 1.8 Hz로 이루어진 단 1회 치료만으로 입 주변 팔자주름이 현저히 줄어드는 것을 시각적으로 확인하였다(도 8).

상기 참조예에 의해 A) 텔로머라제 활성화 조성물, B) 피부 진피층 조사 레이저, C) 국소지방 제거용 조성물, D) 피부 근육층 조사 레이저 시술의 효과를 확인하여 본 발명에 이르게 되었다. 이하 본 발명을 실시예에 의해 보다 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예>

본 발명자는 A) 텔로머라제 활성화 조성물, B) 피부 진피층 조사 레이저, C) 국소지방 제거용 조성물 및 D) 피부 근육층 조사 레이저 시술을 동시에 하는 것이 상기 참조예에서 확인된 각 단계만에 의해 발휘되는 효과보다 상승된 효과가 발휘된다는 것을 실험으로 확인하여 본 발명을 완성하였다. 본 발명의 피부 노화 방지 또는 치료를 위한 키트 및 피부미용 시스템의 효과를 총체적으로 확인하기 위해서, 90명을 대상으로 본 발명의 피부 노화 방지 키트 및 피부미용 시스템을 구성하는 A) 텔로머라제 활성화 조성물, B) 피부 진피층 조사 레이저, C) 국소지방 제거용 조성물, D) 피부 근육층 조사 레이저의 조합을 달리하여 시술한 후, 콜라겐 생성 효과; 탄력 개선 효과; 주름 개선 효과; 국소 지방제거 효과; 텔로머라제 활성화 효과; 피부톤 개선 효과; 만족도 및 부작용을 확인하였다. 구체적으로는 하기와 같은 방식으로 진행하였다.

(1) 참여 대상

피부 노화 방지 키트 및 시스템의 효과를 확인하기 위한 본 실험은 2016년 10월부터 2016년 11월까지 닥터 손유나 의원(서울 소재)에 내원한 90명의 40세 이상 50세 미만의 성인 남녀를 대상으로 진행하였다.

본 실시예 참여자는 i) 본 실험에 대한 목적과 개요, 실험 방법 및 참여에 따른 유의사항에 대해 충분한 설명을 듣고 자발적으로 동의서를 작성하고 서명한 사람으로, ii) 피부 질환을 포함하는 급, 만성 신체 질환이 없는 건강한 상태이고, iii) 시험기간 동안 추적 관찰이 가능한 사람을 선정하였다.

아울러, 하기와 같은 사정이 있는 경우에는 참여자에서 배제하였다:

1) 임신 또는 수유 중인 여성과 임신 가능성이 있는 여성,

2) 피부 질환 치료를 위해 스테로이드가 함유된 피부 외용제를 1개월 이상 사용하는 사람,

3) 민감성, 과민성 피부를 가진 사람,

4) 시험 부위에 점, 여드름, 홍반, 모세혈관 확장 등의 피부 이상 소견이 있는 사람,

5) 실험 시작 전 3개월 내에 시험 부위에 주름 개선 기능성 화장품을 사용한 사람,

6) 실험 시작 전 6개월 내에 시험 부위에 시술을 받은 사람,

7) 고혈압, 당뇨, 갑상선 질환 등의 내과적 질환이 있거나 투약중인 경우, 암이나 기타 감염성 질환을 않고 있는 경우, 혈액 관련 질환을 앓고 있는 경우, 자가 면역 질환을 앓고 있는 경우.

(2) 실험 방법

상기 참여자를 그룹으로 나누어, 하기와 같은 본 발명의 피부 노화 방지 키트 및 피부 미용 시스템을 구성하는 (A), (B), (C), (D)를 각기 다른 조합으로 시술하였다.

(A) 텔로머라제 활성화 조성물 도포: 도티 추출물을 0.00056 %(w/w)로 포함하는 텔로머라제 활성화 조성물을 3 cc 도포한 후 초음파 진동을 통하여 화장품의 깊은 침투를 돕는 초음파 레이저 레가토(Alma Laser사, 이스라엘)를 30 Hz 주파수, 50 % 파워 출력으로 10분 동안 1~2 회차(pass) 얼굴 전체 부위에 사용하여 흡수시키는 단계

(B) 피부 진피층 조사 레이저 조사: 5 Hz 이하의 주파수를 가지는 레이저(젠틀맥스)를 3분간 조사하고, 30 Hz ~ 50 Hz 주파수를 가지는 인디고 레이저를 A, B 모드로 각 10분간 조사한 후, 92 w의 고주파 RF 테너 레이저를 unipolar 모드로 10 분간 조사하는 단계

(C) 히알루로니다제를 국소지방 제거용 조성물 주사 투여: 상기 참조예 4의 실험예 4에 해당하는 조성물인 히알루로니다제 30,000 IU와 리도카인 210 mg, 페니라민 12 mg, L-카르니틴 660 mg, 및 비타민-C 600 mg를 포함하는 국소지방 제거용 조성물을 100 cc 단위로 제조하여, 히알루로니다제 300IU를 가지는 주사제 1 cc를 1 cm씩 떨어지게 10 포인트에 투약하는 단계

(D) 피부 근육층 조사 레이저는 구강 내부에서 안면 방향으로 조사: 3 Hz의 주파수로 피부 근육층을 조사하는 포토나 레이저는 구강 내부에서 안면 방향으로 6분간 조사하는 단계

참여자 그룹 별 다음과 같은 구성된 시술을 각 1회 수행하였으며, 각 그룹 별로 참여자 10명을 포함하였다.

참여자 그룹 별 시술 구성

	시술 구성
대조군 1	A
대조군 2	B
대조군 3	C
대조군 4	D
대조군 5	A + B + C
대조군 6	A + B + D
대조군 7	A + B + C
대조군 8	B + C + D
실험군	A + B + C + D

콜라겐 생성, 피부 탄력 증진 효과, 주름 개선 효과, 국소적인 지방 제거 효과, 피부세포 텔로머라제 활성화, 피부톤 개선 효과 등을 시간 경과에 따라 측정하였다.

실시예 1: 콜라겐 생성 효과 측정

실험 참여자의 피부 생검조직을 채취하여 콜라겐 섬유 수를 측정하였다. 구체적으로 피부 생검조직을 2.5% 글루타르알데히드 (glutaraldehyde) 용액에 고정하고 0.1 M 인산완충용액(pH 7.4)으로 세척한 후 1% 사산화오스뮴(osmium tetoxide) 용약에 2시간 동안 후고정하였다. 다음 50% 에틸 알코올부터 무수 알코올까지 농도 상승 순으로 탈수하여 프로필렌옥사이드 (propylene oxide) 용액으로 치환시킨 후 에폰 레진(epon resin) 혼합액에 피부조직을 포매시키고, 1 μm의 박절편으로 관찰 부위를 정한 후 초박절편을 시행하여 콜라겐 섬유의 해상도를 높이기 위하여 타닌산(tannic acid)으로 처리하고 통상적인 방법인 아세트산 우라닐(uranyl actate)과 시트르산 납(lead citrate)으로 이중전자염색을 실시한 후 투과전자 현미경(JEOL 200CX, 일분)으로 관찰하였으며 모두 동일한 배율(x40,000)에서 촬영하여 콜라겐 섬유의 변화를 비교했다. 결과는 하기 표 7과 같으며, 이를 도 9에 그래프로 나타내었다.

평균 콜라겐 섬유 수의 향상율

	각 그룹의 평균 콜라겐 섬유 수 향상율 (%)
	시술 후 1주	시술 후 2주	시술 후 3주	시술 후 4주
대조군 1 -A	3.3	7.9	9.9	16.1
대조군 2 -B	4.6	10.1	15	19.3
대조군 3 -C	0.7	0.95	1.1	1.4
대조군 4 -D	4.1	10.2	15.7	21.7
대조군 5 -ABC	10.3	20.4	21.5	39.7
대조군 6 -ABD	19.6	36.0	46.4	60.0
대조군 7 -ACD	12.2	25.3	38.1	46.3
대조군 8 -BCD	9.3	20.2	29.3	41.4
실험군 -ABCD	36.1	69.5	104.3	127.0

상기 표 7 및 도 9에서 확인되듯이, 본 발명의 실험군(A, B, C, D 조합 시술 군)에서 시술 후 1주에서 4주까지 모든 대조군보다 우수한 콜라겐 섬유 수 증가 효과를 보였으며, 특히 A, B, C, D 단일 시술 군의 피부 탄력 개선 효과(시술 후 4주 : 섬유 수 증가율 58.5%)를 단순히 합한 것보다도 더 우수한 상승 효과(시술 후 4주 : 127.0%)를 발휘하였다. 아울러, ABC 조합 군의 효과에 D 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : 61.4%), ABD 조합 군의 효과에 C 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : 61.4%), ACD 조합 군의 효과에 B 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : 65.6%), 및 BCD 조합 군의 효과에 A 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : 57.5%)보다도 우수한 효과를 발휘하였다. 즉, 본 발명 미용 키트 및 미용 시스템이 A, B, C, D의 구성을 모두 포함하는 것을 통해 콜라겐 섬유 수 증가에 있어 우수한 상승효과를 발휘하였다.

실시예 2: 탄력 개선 효과 측정

실험 참여자의 피부 탄력도를 측정하였다. 구체적으로 실험 참여자의 피부 탄력 개선 평가를 위해 DermaLab USB elasticity probe (Cortex Technology, Inc.)를 적용하였다. DermaLab USB elasticity probe는 측정 부위 흡입과 흡입시간 지속에 따른 피부 변화와 복원력을 수치로 나타내며, 기기의 probe를 특수 테이프로 피시험자의 왼쪽 볼 부위에 고정 후 측정하였다. 탄력도 측정 시 같은 부위를 반복 측정하게 되면 피부 피로도가 높아지는 것을 고려하여 같은 부위를 1번 측정하였다. DermaLab USB 전용 분석 프로그램인 Application softwareversion 1.09를 이용하여 피부 탄력도 변화를 분석하였다. 측정값 중 Young's 계수 (E)를 분석에 사용하며 Young's 계수(E)가 높을수록 탄력도가 높은 것으로 판단하였다. Young's 계수(E)란 피부 표면이 측정 probe 내에 있는 두 개의 적외선 감지선 거리인 1.5 mm만큼 상승될 때 필요한 힘의 차이에 기초한 값이며 측정단위는 MegaPascal(MPa)이다. 기기 측정은 시술 전과 1주 후, 2주 후, 3주 후, 및 4주 후의 이루어진다. 해당 결과는 하기 표 8과 같으며, 이를 도 10에 그래프로 나타내었다.

평균 피부 탄력도 개선율

	각 그룹의 평균 탄력도 개선율 (%)
	시술 후 1주	시술 후 2주	시술 후 3주	시술 후 4주
대조군 1 -A	4.46	10.21	16.76	22.35
대조군 2 -B	2.47	5.68	8.42	12.10
대조군 3 -C	0.41	0.65	0.8	1.2
대조군 4 -D	3.20	6.29	9.62	10.36
대조군 5 -ABC	7.21	18.27	26.7	38.2
대조군 6 -ABD	10.29	23.44	35.2	46.18
대조군 7 -ACD	8.61	18.64	29.41	35.15
대조군 8 -BCD	6.33	13.82	20.63	25.47
실험군 -ABCD	20.72	40.25	70.89	81.50

상기 표 8 및 도 10에서 확인되듯이, 본 발명의 실험군(A, B, C, D 조합 시술 군)에서 시술 후 1주에서 4주까지 모든 대조군보다 우수한 피부 탄력도 개선 효과를 보였으며, 특히 A, B, C, D 단일 시술 군의 피부 탄력 개선 효과(시술 후 4주 : 탄력 개선율 46.01%)를 합한 것보다도 더 우수한 효과(시술 후 4주 : 81.50%)를 지니는 것을 확인하였다. 아울러, ABC 조합 군의 효과에 D 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : 48.56%), ABD 조합 군의 효과에 C 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : 36.35%), ACD 조합 군의 효과에 B 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : 47.25%), 및 BCD 조합 군의 효과에 A 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : 47.82%)보다도 우수한 효과를 발휘하였다. 즉, 본 발명의 피부 노화 방지용 키트 및 피부미용 시스템이 A, B, C, D 구성의 유기적 조합을 통해 피부 탄력 개선에서 우수한 상승효과를 발휘하는 것을 확인할 수 있다.

실시예 3: 주름 개선 효과 평가

실험 참여자의 주름 개선 효과를 측정하였다. 주름의 정량적 평가를 위해, 주름의 정도를 수치화해주는 기기(Aroma TS, Programmed by Aram HUVIS Co., 한국)를 사용하였다. 직경 30mm의 Beauty scope(10배 렌즈) head 부분을 측정부위 피부 표면에 밀착시킨 후 일정한 압력으로 피부에 수직으로 누른 후 head 부분에서 나오는 빛에 의한 피부 명암도 차이를 이용하여 이를 수치화하여 나타낸다. 피부 주름의 negative 모현을 취한 것을 소프트웨어에서 positive로 변형할 수도 있고 측정라인을 다양하게 parameter 값을 취할 수 있다. 주름도의 정도는 20대 기준 10~12가 정상 주름도를 나타낸다. 해당 결과는 하기 표 9와 같으며, 이를 도 11에 그래프로 나타내었다.

평균 주름도

	각 그룹의 평균 주름도
	시술 전	시술 후 1주	시술 후 2주	시술 후 3주	시술 후 4주
대조군 1 -A	18.30	18.20	17.34	16.95	16.20
대조군 2 -B	22.25	22.10	21.26	21.11	20.95
대조군 3 -C	21.14	21.04	21.00	21.04	21.00
대조군 4 -D	20.10	20.08	20.06	20.05	20.04
대조군 5 -ABC	19.63	19.24	18.61	17.54	16.02
대조군 6 -ABD	20.60	19.68	18.45	18.11	17.80
대조군 7 -ACD	22.81	22.23	21.59	21.44	20.21
대조군 8 -BCD	21.22	21.00	20.85	20.64	20.58
실험군 -ABCD	18.89	16.52	15.23	14.47	12.08

상기 표 9 및 도 11에서 확인할 수 있듯이, 본 발명의 실험군(A, B, C, D 조합 시술 군)에서 시술 후 1주에서 4주까지 모든 대조군보다 우수한 주름 개선 효과를 보였다. 특히 A, B, C, D 단일 시술 군의 주름 개선 효과(시술 후 4주 : 주름도 감소 -3.60)를 합한 것보다도 더 우수한 상승효과(시술 후 4주 : -6.81)를 발휘하였다. 아울러, ABC 조합 군의 효과에 D 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : -3.67), ABD 조합 군의 효과에 C 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : -2.94), ACD 조합 군의 효과에 B 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : -3.90), 및 BCD 조합 군의 효과에 A 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : -2.74)보다도 우수한 상승효과를 발휘하였다. 즉, 본 발명 피부 노화 방지용 키트 및 피부미용 시스템이 A, B, C, D의 구성을 모두 포함하는 것을 통해 주름 개선에 있어 우수한 상승효과를 가짐을 확인할 수 있다.

실시예 4: 국소 지방제거 효과 평가

실험 참여자의 국소 지방제거 조성물 투여 등에 의한 지방 두께 감소 효과를 측정하였다. 구체적으로 실험 참여자의 안면부 피하 지방 두께를 측정하기 위해 초음파를 실시하였다. 초음파는 SuperSonic Imagine (Les Jardins de la Duranne, Aix en Provence, 프랑스) 기종을 이용하였다. 검사자와 피실험자가 마주보고 앉은 자세에서 볼과 턱부위의 피하 지방 두께를 측정하며 지방의 두께를 올바로 측정하기 위해 초음파 측정기기의 압력을 최소로 하여 측정하였다. 측정부위에 초음파가 잘 전달될 수 있도록 수용성 젤을 바르고 고주파 선형 프로브(high frequency linear probe)의 6.0-MHz의 탐촉자로 두 부위를 측정하고 평균값을 산정한다. 해당 결과는 하기 표 10과 같으며, 이를 도 12에 그래프로 나타내었다.

턱 주변 지방 두께 변화 정도

	각 그룹의 평균 지방 두께 변화 정도 cm
	시술 후 1주	시술 후 2주	시술 후 3주	시술 후 4주
대조군 1 -A	-0.01	-0.02	-0.01	-0.01
대조군 2 -B	-0.02	-0.02	-0.03	-0.02
대조군 3 -C	-0.21	-0.61	-0.61	-0.62
대조군 4 -D	-0.01	-0.01	-0.01	-0.01
대조군 5 -ABC	-0.2	-0.61	-0.61	-0.62
대조군 6 -ABD	-0.01	-0.02	-0.01	-0.01
대조군 7 -ACD	-0.22	-0.62	-0.62	-0.61
대조군 8 -BCD	-0.21	-0.61	-0.61	-0.62
실험군 -ABCD	-0.21	-0.61	-0.62	-0.62

상기 표 10 및 도 12에서 확인할 수 있듯이, 본 발명 실험군(A, B, C, D 조합 시술 군)에서 시술 후 1주에서 4주까지 우수한 지방 두께 감소 효과를 확인하였다. 이는 본 발명의 구성요소 C (국소지방 제거용 조성물)의 포함 여부에 의해 결정되는 것을 확인할 수 있고, 시술 후 1주부터 현저한 상승효과를 확인할 수 있으며 4주의 기간까지도 그 효과가 유지되는 것을 확인할 수 있다.

실시예 5: 텔로머라제 활성화 효과 평가

실험 참여자의 텔로머라제 활성화 정도를 평가하였다. 실험 참여자들은 채혈 전 24시간 동안 카페인, 과도한 약물 혹은 대사조절 물질을 복용하지 않으며, 오전 10시 충분한 휴식을 취하고 난 후 채혈하여 혈액 시료를 얻었다. 샌드위치 효소 면역 측정법 (sandwich enzyme immunoassay)을 이용하여 시료 내 텔로머라제 양을 측정하였으며, 구체적으로 텔로머라제(TA)에 특이적으로 결합하는 단클론 항체(monoclonal antiboy, MAb)로 코팅된 플레이트에 텔로머라제가 함유된 표준 물질이나 검사 시료를 적용시켜 텔로머라제를 플레이트 상에 접합시킨다. 시료 내의 텔로머라제의 양을 정량하기 위하여, 텔로머라제에 특이적으로 결합하는 HRP(horseradish peroxidase)가 접합된 다클론항체(polyclonal Ab)를 준비하여 플레이트에 적용시키면 플레이트 위에 접합되어 있던 텔로머라제와 샌드위치 형태로 결합한다. 인큐베이션을 통해 모든 반응이 끝나면 플레이트 상에 반응하지 않은 여분의 물질들을 세척과정을 통해 제거하고, 결합한 HRP 양을 측정하기 위해서 기질액을 반응시켰다. 기질이 HRP와 반응하면 HRP의 peroxidase 활성에 의해 가수분해되어 기질액을 변색시키게 된다. 이 효소와 기질액의 반응은 황산액(sulphuric acid) 첨가를 통해 종료되고, 변색된 기질액은 분광 광도계(spectrophotometer)에서 450 nm 파장에서 측정하여 표준 곡선을 만들어 텔로머라제의 농도를 산출하였다. 해당 결과는 하기 표 11과 같으며, 이를 도 13에 그래프로 나타내었다.

텔로머라제 활성도 개선율

	각 그룹의 평균 텔로머라제 활성도
	시술 전	시술 후 1주	시술 후 2주	시술 후 3주	시술 후 4주
대조군 1 -A	0.30±0.23	1.28±0.23	1.29±0.14	1.30±0.78	1.31±0.46
대조군 2 -B	0.31±0.58	0.31±0.25	0.31±0.11	0.32±0.64	0.32±0.21
대조군 3 -C	0.42±0.24	0.42±0.49	0.42±0.46	0.42±0.24	0.42±0.11
대조군 4 -D	0.45±0.16	0.45±0.65	0.46±0.77	0.45±0.31	0.46±0.14
대조군 5 -ABC	0.35±0.68	1.13±0.27	1.21±0.54	1.29±0.29	1.36±0.41
대조군 6 -ABD	0.36±0.42	1.20±0.81	1.23±0.16	1.28±0.64	1.37±0.32
대조군 7 -ACD	0.44±0.28	1.23±0.46	1.31±0.94	1.38±0.55	1.42±0.27
대조군 8 -BCD	0.48±0.22	0.46±0.27	0.49±0.51	0.48±0.27	0.48±0.42
실험군 -ABCD	0.39±0.67	1.38±0.91	1.56±0.67	1.75±0.29	1.59±0.68

상기 표 11 및 도 13에서 확인할 수 있듯이, 본 발명의 실험군(A, B, C, D 조합 시술 군)에서 시술 후 1주에서 4주까지 모든 대조군보다 우수한 텔로머라제 활성화 효과를 보였으며, 특히 A, B, C, D 단일 시술 군의 텔로머라제 활성화 효과(시술 후 4주 : 텔로머라제 활성도 증가 1.03)를 합한 것보다도 더 우수한 상승효과(시술 후 4주 : 1.20)가 발휘되는 것을 확인하였다. 아울러, ABC 조합 군의 효과에 D 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : 1.02), ABD 조합 군의 효과에 C 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : 1.01), ACD 조합 군의 효과에 B 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : 0.99) 및 BCD 조합 군의 효과에 A 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : 1.01)보다도 우수한 상승 효과를 발휘하는 것을 확인하였다. 즉, 본 발명의 피부 노화 방지용 키트 및 피부미용 시스템이 A, B, C, D의 구성을 모두 포함하는 것을 통해 텔로머라제 활성화에 있어 우수한 효과를 가짐을 확인할 수 있다.

실시예 6: 피부톤 개선 효과 측정

(1) 보습도 측정

실험 참여자의 보습도를 측정하였다. 피부에서 가장 높은 절연 계수를 가지고 있는 수분 함량에 따른 정전부하용량(capacitrance; 도체가 전하를 저장할 수 있는 능력)을 측정하여 보습도를 측정하며, 그 단위를 자체 기준인 임의의 단위로 지정한 arbitary unit (AU)로 표시된다. 즉, 피부의 수분 보유도는 보통 피부표면에 접촉하는 탐침(probe)을 통해 전달되는 미미한 전류의 정전부하용량 계측을 통해 이루어진다. 수분의 함량과 정전부하용량은 서로 비례하는 성질이 있어 피부의 보습도가 높을수록 측정 수치가 높아지는데, 이 측정기기를 통해 화장품, 약물의 도포에 크게 영향을 받지 않는 상태에서 각질층 하방 30~40 μm 깊이 이내의 수분 함량을 일정하게 측정할 수 있다 (conductor track in electric scatter field). 또는 특별한 시험조건, 예를 들어 탐침이 피부에 직접 접촉하지 않는 미세한 간격을 유지하는 상태에서 피부 수분 보유도를 평가할 수 있는 독특한 능력을 보유하고 있다. 이때, 기기의 수치는 최저 0 AU에서 120 AU로 나뉘는데 이 임의의 값은 일반적으로 고체의 정전용량이 7 F(farad)이고, 수분의 정전용량을 81 F로 보았을 때 7 F와 81 F 사이로 미세한 전류를 흘려 보내면 정전 부하의 차이가 난다. 이것을 120으로 분할하여 AU 값이 표시되며, 이러한 원리로 일반적으로 수분이 거의 없는 플라스틱 등을 측정한 경우에는 약 6~8 AU로 측정되었으며, 100 %를 측정 시에는 120 AU로 측정된다. 즉, 수치가 높을수록 수분 함량이 높은 것으로 해석된다. 직경 16 mm의 탐침을 측정부위 피부 표면에 밀착시킨 후 일정한 압력으로 피부에 수직으로 누르면 나타나는 수치를 표시하고, 측정값은 특정부위(광대뼈와 턱 사이의 중간 부위, 4 x 4 cm) 안에서 5회 측정한 평균치를 이용하였다. 보습도의 정도는 35~40은 양호, 31~34는 수분 조금 부족, 25~30은 수분 부족한 상태를 나타낸다. 해당 결과는 하기 표 12와 같으며, 이를 도 14에 그래프로 나타내었다.

피부 보습도 개선 정도

	각 그룹의 평균 피부 보습도
	시술 전	시술 후 1주	시술 후 2주	시술 후 3주	시술 후 4주
대조군 1 -A	34.00	34.67	34.54	34.55	34.52
대조군 2 -B	36.41	37.98	37.42	37.20	37.22
대조군 3 -C	35.26	35.24	35.38	35.30	35.22
대조군 4 -D	33.21	34.22	34.20	34.22	34.19
대조군 5 -ABC	34.60	36.68	36.52	36.40	36.33
대조군 6 -ABD	37.00	40.83	40.63	40.61	40.60
대조군 7 -ACD	35.80	37.87	37.60	37.54	37.31
대조군 8 -BCD	39.41	41.76	41.66	41.57	41.50
실험군 -ABCD	35.21	42.89	42.55	42.64	42.60

상기 표 12 및 도 14에서 확인할 수 있듯이, 본 발명의 실험군(A, B, C, D 조합 시술 군)에서 시술 후 1주에서 4주까지 모든 대조군보다 우수한 피부 보습도 개선 효과를 보였으며, 특히 A, B, C, D 단일 시술 군의 피부 보습도 개선 효과(시술 후 4주 : 피부 보습도 증가 2.27)를 합한 것보다도 더 우수한 상승효과(시술 후 4주 : 7.39)가 발휘되었다. 아울러, ABC 조합 군의 효과에 D 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : 2.71), ABD 조합 군의 효과에 C 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : 3.56), ACD 조합 군의 효과에 B 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : 2.32) 및 BCD 조합 군의 효과에 A 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : 2.61)보다도 우수한 상승효과가 발휘되는 것을 확인하였다. 즉, 본 발명의 피부 노화 방지용 키트 및 피부미용 시스템이 A, B, C, D의 구성을 모두 포함하는 것을 통해 피부 보습도 개선에 있어 우수한 효과를 가짐을 확인할 수 있다.

(2) 거칠기 측정

실험 참여자 피부 거칠기를 광학적 원리를 이용해 시험 부위를 촬영하여 피부의 굴곡상태를 그래프 및 수치로 측정하였다. 이에는 직경 30 mm의 Beauty scope 기기(60배 렌즈)를 이용하였으며, 해당 기기의 head 부분을 측정 부위 피부 표면에 밀착시킨 후 일정한 압력으로 피부에 수직으로 누르면 나타나는 수치를 표시하였고, 측정값은 특정부위(광대뼈와 턱 사이의 중간 부위, 4 x 4 cm) 안에서 5회 측정한 측정값의 평균을 이용하였다. 하기 거칠기 값은 28~31은 양호, 32~35는 조금 거침, 36~40은 거침을 의미한다. 해당 결과는 하기 표 13과 같으며, 이를 도 15에 그래프로 나타내었다.

피부 거칠기 정도

	각 그룹의 평균 피부 거칠기
	시술 전	시술 후 1주	시술 후 2주	시술 후 3주	시술 후 4주
대조군 1 -A	33.59	33.25	32.82	32.56	32.21
대조군 2 -B	33.50	32.56	32.41	32.89	32.51
대조군 3 -C	29.00	29.56	29.56	29.47	29.44
대조군 4 -D	30.40	29.47	29.58	29.34	29.78
대조군 5 -ABC	34.40	32.40	32.25	32.47	32.47
대조군 6 -ABD	34.50	31.78	31.56	31.64	31.82
대조군 7 -ACD	33.05	32.14	32.52	32.89	32.29
대조군 8 -BCD	32.56	30.16	30.84	30.89	30.00
실험군 -ABCD	30.56	26.67	26.56	26.23	26.74

상기 표 13 및 도 15에서 확인되듯이, 본 발명의 실험군(A, B, C, D 조합 시술 군)에서 시술 후 1주에서 4주까지 모든 대조군보다 우수한 피부 거칠기 감소 효과를 보였으며, 특히 A, B, C, D 단일 시술 군의 피부 거칠기 감소 효과(시술 후 4주 : 피부 거칠기 감소 -2.17)를 합한 것보다도 더 우수한 상승효과(시술 후 4주 : -3.82)가 발휘되었다. 아울러, ABC 조합 군의 효과에 D 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : -2.55), ABD 조합 군의 효과에 C 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : -2.21), ACD 조합 군의 효과에 B 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : -1.75) 및 BCD 조합 군의 효과에 A 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : -3.56)보다도 우수한 상승효과가 발휘되었다. 즉, 본 발명의 피부 노화 방지용 키트 및 피부미용 시스템이 A, B, C, D의 구성을 모두 포함하는 것을 통해 피부 거칠기 감소에서 우수한 상승효과가 발휘되는 것을 확인할 수 있다.

(3) 색소침착 및 모공 측정

실험 참여자의 색소 침착 변화량을 측정하기 위해 RSA(Robo Skin Analyzer CS 50, In Forward. Inc., 일본) 기기를 이용하였다. RSA 기기는 모공, 색소침착, 주름, 피부 톤 등을 종합적으로 한번에 확인할 수 있는 기계로, Compact booth의 사용으로 동일한 각도 및 조명에서의 촬영이 가능하며, 재현성이 높다. 영상획득 장치와 영상분석 컴퓨터 시스템 두 부분으로 구성되어 주름, 색소, 피부색조, 모공 등의 영상정보를 얻어 곧바로 결과를 산출해주며, 3 각도에서 나누어 촬영이 가능하기 때문에 정확한 분석이 가능한 기계로 실험자들의 모공, 색소침착 변화량을 측정하였다. 해당 결과는 하기 표 14와 같으며, 이를 도 16에 그래프로 나타내었다.

색소 침착 감소율 (%)

	각 그룹의 평균 색소 침착 감소율 (%)
	시술 후 1주	시술 후 2주	시술 후 3주	시술 후 4주
대조군 1 -A	-1.22	-1.26	-1.54	-1.64
대조군 2 -B	-1.19	-1.28	-1.42	-1.54
대조군 3 -C	-0.01	-0.02	-0.01	-0.13
대조군 4 -D	-1.02	-1.04	-1.10	-1.11
대조군 5 -ABC	-2.00	-2.11	-2.24	-2.28
대조군 6 -ABD	-3.13	-3.47	-3.55	-3.96
대조군 7 -ACD	-1.65	-1.56	-1.66	-1.84
대조군 8 -BCD	-1.26	-1.33	-1.52	-1.62
실험군 -ABCD	-4.25	-4.22	-4.48	-4.58

상기 표 14 및 도 16에서 확인할 수 있듯이, 본 발명의 실험군(A, B, C, D 조합 시술 군)에서 시술 후 1주에서 4주까지 모든 대조군보다 우수한 색소 침착 감소 효과를 보였다. ABC 조합 군의 효과에 D 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : -3.39), ABD 조합 군의 효과에 C 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : -3.83), ACD 조합 군의 효과에 B 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : -3.38) 및 BCD 조합 군의 효과에 A 단일 시술 군의 효과를 합한 수치(시술 후 4주 : -3.26)보다 현저히 우수한 상승효과(시술 후 4주 : -4.58)가 발휘되었다. 즉, 본 발명의 피부 노화 방지용 키트 및 피부미용 시스템이 A, B, C, D의 구성을 모두 포함하는 것을 통해 피부 색소 침착 감소에 있어 현저히 우수한 상승효과를 가짐을 확인할 수 있다.

실시예 7: 시술 후 피부변화 및 만족도에 대한 평가 설문 및 부작용

실험 참여자의 시술 후 피부 변화 및 만족도에 대하여 시술 4주 후에 평가 설문을 진행하였다. 총 설문 8개의 설문 문항은 피부 변화에 대한 만족도 평가 7문항과, 향후 재사용의사에 관한 1문항으로 구성하여 시술 후 자가적 평가를 확인하였다. 추가로, 시험부위에서 피부 이상으로 판단되는 홍반, 부종, 인설, 가려움, 따끔거림의 여부를 관찰하고 피부이상 반응이 나타난 결과를 하기 표 15에 정리하였다.

상기 표 15에서 확인되듯이, 모든 자가적 효과 판단 항목에서 본 발명의 피부 노화 방지용 키트 또는 피부미용 시스템(실험군 - ABCD 시술 군)의 만족도가 가장 높다는 것을 확인할 수 있다.

이러한 자가적 효과 판단은 상기 실시예 1 내지 6에서 수치로 확인한 콜라겐 섬유 향상율, 탄력 개선율, 주름 개선율, 보습도 개선율, 거칠기 개선율, 및 색소 침착 개선율 결과와 일치하는 것으로, 본 발명의 피부 노화 방지용 키트 또는 피부미용 시스템이 그 구성요소 A, B, C, 및 D를 포함함에 따라 피부 노화와 관련된 다양한 방면에서 상승효과를 가지는 것을 확인할 수 있다. 이에 따라, 본 발명의 피부 노화 방지용 키트로 시술된 ABCD 조합 시술 군의 참여자 중 80%가 강한 향후 사용의사를 보인 반면, 대조군에서 향후 사용의사를 보인 비율은 30% 미만이었다.

한편, C 단일 시술 군, ABD 조합 시술 군, ACD 조합 시술 군, 및 BCD 조합 시술 군에서 한 명의 참여자가 홍반을 겪었으며, C 단일 시술 군, D 단일 시술 군, ABD 조합 시술 군, ACD 조합 시술 군, 및 BCD 조합 시술 군에서 한 명의 참여자가 가려움을 경험하였으나, 시술 군 간에 유의미한 차이는 보이지 않았다.

이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (23)

1. A) 도티 추출물(Kappaphycus alvarezii)을 유효성분으로 포함하는 텔로머라제(Telomerase) 활성화 조성물;
   B) 피부 진피층 조사 레이저;
   C) 히알루로니다제를 300 IU 내지 600 IU 단위로 포함하는 국소지방 제거용 조성물; 및
   D) 피부 근육층 조사 레이저를 포함하는 피부 노화 방지용 키트로서,
   상기 피부 노화 방지는 콜라겐 생성, 피부 탄력 증진, 주름 개선, 국소지방 제거, 피부 세포의 텔로머라제 활성화, 피부 보습도 개선, 피부 거칠기 개선, 피부 색소침착 개선 및 피부 톤 개선 중 하나 이상인 것인 키트.
2. 제1항에 있어서, A) 텔로머라제 활성화 조성물은 피부 세포 내에 TRF1(Telomeric Repeat Factor 1), TRF2(Telomeric Repeat Factor 2), RAP1(Repressor activator protein 1), TIN2(TERF1-interacting nuclear factor 2), POT1(Protection of telomeres 1), 및 TPP1(Tripeptidyl peptidase 1) 중 하나 이상인 텔로좀(Telosome)을 구성하는 단백질의 발현을 증가시키는 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지용 키트.
3. 제1항에 있어서, A) 텔로머라제 활성화 조성물은 도포된 후에 시술되는 10 내지 90Hz 주파수를 갖는 초음파 레이저를 추가로 포함하는 피부 노화 방지용 키트.
4. 제1항에 있어서, B) 피부 진피층 조사 레이저는 진피층 또는 진피층과 피부 근막층에 열 에너지를 도달시키는 2 내지 100 Hz의 주파수를 갖는 레이저, 및 고주파 RF(Radio Frequency) 레이저 중에서 선택된 하나 이상인 피부 노화 방지용 키트.
5. 제4항에 있어서, B) 상기 피부 진피층 조사 레이저는 5 Hz의 주파수를 가지는 레이저, 30 내지 50 Hz 주파수를 가지는 레이저 및 35 내지 45 Mhz 주파수를 가지는 고주파 RF(Radio Frequency) 레이저로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것인 피부 노화 방지용 키트.
6. 제1항에 있어서, C) 히알루로니다제를 300 IU 내지 600 IU 단위로 포함하는 국소지방 제거용 조성물은 주사제 조성물인 피부 노화 방지용 키트.
7. 제6항에 있어서, 국소지방 제거용 주사제 조성물은 국소마취제, 항히스타민제, 지방분해촉진제 및 콜라겐 생성촉진제 중 어느 하나 이상을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지용 키트.
8. 제7항에 있어서, 국소지방 제거용 주사제 조성물에 포함된 국소마취제는 리도카인이고, 항히스타민제는 페니라민(Peniramin)이며, 지방분해촉진제는 L-카르니틴(Carnitine) 및 콜라겐 생성 촉진제는 비타민-C인 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지용 키트.
9. 제8항에 있어서, 국소지방 제거용 주사제 조성물은 히알루로니다제를 일회 주사용량당 300 IU 내지 600 IU 단위로 포함하고, 조성물 총중량 대비 국소마취제로 리도카인을 0.08 내지 0.4 중량%, 항히스타민제로 페니라민을 0.01 내지 0.02 중량%, 지방분해촉진제로 L-카르니틴을 0.01 내지 4.0 중량%, 콜라겐 생성촉진제로 비타민-C를 0.1 내지 2.0 중량% 및 나머지 생리 식염수로 이루어지고, 일회 주사용량이 0.5 내지 2cc이며 주사 포인트 간격이 0.5 내지 1.5 cm로 투여되는 조성물인 것을 특징으로 하는 것인 피부 노화 방지용 키트.
10. 제9항에 있어서, 국소지방 제거용 주사제 조성물은 포스파티딜콜린(Phosphatidycholine), 아미노필린(Aminophylline), 카페인(Caffeine), 플라센타(Placenta) 추출물, 펜톡시필린(Pentoxifylline) 성분 중에 선택된 어느 하나 이상의 성분을 0.01 내지 4.0 중량% 추가로 포함하는 피부 노화 방지용 키트.
11. 제1항에 있어서, D) 피부 근육층 조사 레이저는 피부 근육층 또는 피부 근육층과 진피층 상단에 열 에너지를 도달시키는 1 내지 3.5 Hz의 주파수를 갖고, 구강 내부에서 안면 방향으로 조사되는 레이저인 피부 노화 방지용 키트.
12. 제11항에 있어서, D) 피부 근육층 조사 레이저는 조사를 목적하는 피부층에 45 내지 70 ℃의 온도가 형성되도록 하는 것인 피부 노화 방지용 키트.
13. A) 도티 추출물(Kappaphycus alvarezii)을 유효성분으로 포함하는 텔로머라제(Telomerase) 활성화 조성물;
    B) 피부 진피층 조사 레이저;
    C) 히알루로니다제를 300 IU 내지 600 IU 단위로 포함하는 국소지방 제거용 조성물; 및
    D) 피부 근육층 조사 레이저를 포함하는, 피부 노화 방지 또는 치료를 위한 피부미용 시스템으로서,
    상기 피부 노화 방지는 콜라겐 생성, 피부 탄력 증진, 주름 개선, 국소지방 제거, 피부 세포의 텔로머라제 활성화, 피부 보습도 개선, 피부 거칠기 개선, 피부 색소침착 개선 및 피부 톤 개선 중 하나 이상인 것인 피부미용 시스템.
14. 제13항에 있어서, A) 텔로머라제 활성화 조성물과 함께 10 내지 90 Hz 주파수를 갖는 초음파 레이저를 추가로 포함하는 피부미용 시스템.
15. 제13항에 있어서, B) 피부 진피층 조사 레이저는 진피층 또는 진피층과 피부 근막층에 열 에너지를 도달시키는 2 내지 100 Hz의 주파수를 갖는 레이저, 및 고주파 RF(Radio Frequency) 레이저 중에서 선택된 하나 이상인 피부미용 시스템.
16. 제13항에 있어서, C) 국소지방 제거용 조성물은 국소지방 제거용 주사제 조성물로서, 국소마취제, 항히스타민제, 지방분해촉진제 및 콜라겐 생성촉진제를 추가로 포함하는 것인 피부미용 시스템.
17. 제16항에 있어서, C) 국소지방 제거용 주사제 조성물은 히알루로니다제를 일회 주사용량당 300 IU 내지 600 IU 단위로 포함하고, 조성물 총중량 대비 국소마취제로 리도카인을 0.08 내지 0.4 중량%, 항히스타민제로 페니라민을 0.01 내지 0.02 중량%, 지방분해촉진제로 L-카르니틴을 0.01 내지 4.0 중량%, 콜라겐 생성촉진제로 비타민-C를 0.1 내지 2.0 중량% 및 나머지 생리 식염수로 이루어지고, 일회 주사용량이 0.5 내지 2cc이며 주사 포인트 간격을 0.5 내지 1.5 cm로 투여하는 것을 특징으로 하는 것인 피부미용 시스템.
18. 제13항에 있어서, D) 피부 근육층 조사 레이저는 구강 내부에서 안면 방향으로 조사되며, 피부 근육층 또는 피부 근육층과 진피층 위쪽에 열 에너지를 도달시키는 1 내지 3.5 Hz의 주파수를 갖는 레이저인 것인 피부미용 시스템.
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