KR102034314B1 - 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물 - Google Patents

적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 파프리카 추출물 또는 파프리카 추출물 유래 카로티노이드 화합물인 캡산틴(Capsanthin)을 포함하는 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 상기 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 예방 또는 개선용 식품 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 파프리카 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물인, 캡산틴을 포함하는 조성물은 근육 질환 예방, 개선 또는 치료에 유용하게 활용될 수 있을 뿐만 아니라, 운동능력 증진용 식품 조성물 또는 근육강화용 조성물로도 유용하게 이용될 수 있다.

Description

적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물{Composition for preventing, improving or treating muscular disease comprising Red Paprika extract or Capsanthin}
본 발명은 적색 파프리카 추출물 또는 적색 파프리카 추출물 유래 카로티노이드인 캡산틴(Capsanthin)을 포함하는 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 상기 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 예방 또는 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.
골격근은 인체에서 가장 큰 부분을 차지하는 기관으로 총 몸무게의 40-50%를 차지하며 에너지 항상성 및 열생성 등을 비롯한 체내 여러 대사 기능에도 중요한 역할을 한다. 근육 크기(muscle size)는 근육 내에서 일어나는 동화작용(anabolism)이나 이화작용(catabolism)을 유도하는 세포 내 신호전달 과정(signalling pathways)에 의해 조절된다. 근육 단백질의 분해보다 합성을 유도하는 신호전달 반응이 많이 일어날 경우 근육 단백질 합성이 증가되며, 결과적으로 근육의 크기가 증가하는 근 비대(hypertrophy)나 근섬유 수의 증가(hyperplasia)가 발생한다(The Korea Journal of Sports Science, 20(3): 1551-1561, 2011).
사람의 근육은 40세 이후부터 매년 1% 이상씩 감소하며, 80세가 되면 최대 근육량의 50% 수준이 감소되며, 노년의 근육 감소는 전반적인 신체기능을 떨어뜨리는 가장 중요한 요소로 인식되어지고 있다. 노화가 진행될수록 근육과 지방의 함량, 골격 왜곡 등 체형이 변화되는 것을 인지하게 되는데, 노년기 근감소에 의한 비만 유병률은 전 세계적으로 30%이상 수준에서 지속적인 증가 추세를 보이고 있다. 인슐린 분비 이상인 경우 세포에 에너지를 제대로 공급하지 못해 근육발달장애를 일으킬 수 있어, 일반인 보다 당뇨병 환자에게 근감소증이 증가한다. 또한 근육의 감소는 관절염, 허리통증, 만성통증을 더 증가시키는 원인이 되며, 복부비만에 의한 요실금 증세도 악화시킬 수 있고, 골절에 의한 부상은 노년의 우울증을 증가시켜 사망에 이를 수 있기 때문에 노년의 근감소증은 다양한 질환과 연계되어 삶의 질을 떨어뜨리는 주요 원인이 된다. 근감소증은 골다공증, 인슐린저항성 및 관절염과 같은 노인성 만성질환과도 밀접한 관계가 있는 것으로 알려져, 근감소증의 예방 또는 개선을 통해서 노화로 인한 신체 활동력의 감소를 억제할 수 있다.
세계의 진행성 운동실조증 및 근력약화 치료제 시장은 2011년 약 140억 달러 규모를 기록했으며 그 이후에는 9.4%의 연평균 복합 성장률로 성장해 2017년에는 약 235억 달러에 이를 것으로 전망되고 있다. 근감소의 치료법으로는 미토콘드리아 생성 증가, 근육 단백질 분해억제, 항염제 등이 제시되고 있으나 뚜렷한 치료약이 없는 실정이다.
또한 근감소증을 예방하기 위하여 제시되고 있는 식사법으로는 매식사마다 25-30 g의 양질의 단백질을 섭취해야하는 것으로 나타났다. 이는 달걀 4-5개 또는 닭가슴살 약 120 g을 매식사마다 섭취해야만 하는 것으로 일상생활을 하는 일반인이 현실적으로 실천하기 어렵다. 따라서 최근 많은 사람들이 단백질 보충제를 대안으로 선택하고 있지만 단백질 보충제는 단백질 과다 섭취의 원인이 되어 부작용의 가능성이 크다. 더욱이 신장질환이 있는 경우 고단백질 식이를 할 수 없고 노화에 따라 신장 기능 또한 감소되므로 근감소증 예방을 위해서 고단백질 섭취 이외의 다른 대안이 필요하다.
이에 본 발명자들은 근육량, 근지구력 또는 운동능력을 향상시킬 수 있는 조성물을 개발하기 위하여 다양한 천연재료를 이용한 연구를 수행한 결과, 적색 파프리카 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물이 근육량, 근지구력, 운동능력 향상 또는 근육 강화 효과가 있음을 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명의 목적은 적색 파프리카 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
또한 본 발명의 다른 목적은 적색 파프리카 추출물을 유효성분으로 포함하는 운동능력 증진용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
또한 본 발명의 또 다른 목적은 적색 파프리카 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육강화용 조성물을 제공하는 것이다.
또한 본 발명의 다른 목적은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
[화학식 1]
Figure 112018017959846-pat00001
또한 본 발명의 다른 목적은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 운동능력 증진용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
또한 본 발명의 다른 목적은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 근육강화용 조성물을 제공하는 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 적색 파프리카 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 적색 파프리카 추출물을 유효성분으로 포함하는 운동능력 증진용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 적색 파프리카 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육강화용 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112018017959846-pat00002
본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 운동능력 증진용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 근육강화용 조성물을 제공한다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 적색 파프리카 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112018017959846-pat00003
본 발명에 따른 상기 조성물은 약학적 조성물 또는 식품 조성물일 수 있고, 상기 약학적 조성물은 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 유효성분으로 포함하는 조성물일 수도 있고, 유효성분으로서 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴으로 구성되는 조성물일 수도 있으며, 또는 유효성분으로서 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴이 필수적으로 구성되는 조성물일 수도 있다.
본 명세서에서 용어 ‘~을 포함하는(comprising)’이란 ‘함유하는(including)’또는 ‘특징으로 하는(characterized by)’과 동일한 의미로 사용되며, 본 발명에 따른 조성물 또는 방법에 있어서, 구체적으로 언급되지 않은 추가적인 구성 성분 또는 방법의 단계 등을 배제하지 않는다. 또한 용어 ‘로 구성되는(consisting of)’이란 별도로 기재되지 않은 추가적인 요소, 단계 또는 성분 등을 제외하는 것을 의미한다. 용어 ‘필수적으로 구성되는(essentially consisting of)’이란, 조성물 또는 방법의 범위에 있어서, 기재된 물질 또는 단계와 더불어 이의 기본적인 특성에 실질적으로 영향을 미치지 않는 물질 또는 단계 등을 포함할 수 있는 것을 의미한다.
본 발명의 ‘파프리카(Capsicum annuum L., Bell pepper, Paprika)’는 피망을 개량한 작물로서 원산지는 중앙아메리카로 목본성 줄기를 가지는 저목형 작물로 그룹 착화 특성이 강한 작물이다. 식물체는 2m 이상 자랄 수 있고 가지가 적게 갈라지며, 잎은 7∼12cm이다. 꽃자루는 길이 2.5cm이고 화관은 지름 2∼5cm, 길이 2cm 정도이다. 열매는 짧은 타원형으로 꼭대기가 납작하고 크며, 바닥은 오목하고 세로로 골이 져 있다. 단맛이 나며 식감이 아삭아삭 하고 비타민 A와 C가 풍부하며, 파프리카 추출물의 주요 성분은 carotene, vitamin C, B6 그리고 p-coumaric acid 등이 보고되어 있다.
본 발명에서 상기 파프리카는 이에 한정하지는 않지만, 적색의 파프리카(Red paprika)일 수 있다.
본 발명의 캡산틴‘Capsanthin’은 하기 화학식 1로 표시되며, 적색 파프리카로부터 분리된 화합물일 수 있다.
[화학식 1]
Figure 112018017959846-pat00004
본 발명에서 캡산틴은 화학적으로 합성된 것일 수도 있고 적색 파프리카를 비롯한 고추, 피망 등 캡산틴을 포함하는 천연물로부터 분리된 것일 수도 있다. 또한, 캡산틴은 고추장, 김치 등 발효 식품에서 얻어진 것일 수도 있다. 캡산틴은 양 말단의 치환기 R이 수소 원자인지, 팔미토일기 등의 지방산인지에 따라 프리형과 에스테르형으로 나뉜다. 에스테르형 캡산틴은 프리형 캡산틴일 때보다 안정하다. 캡산틴은 천연물 내에서는 에스테르형으로 존재한다. 성숙한 고추 중에 함유된 캡산틴은 2개의 수산기 모두가 각종 지방산과 에스테르를 형성하고 있다. 캡산틴 에스테르를 검화하여 얻은 지방산은 예컨대 라우린산 26.5%, 미리스틴산 48.3%, 팔미틴산 17.6%, 린오레인산 7.5%의 혼합물일 수 있다((M.Isavel Minguez-Mosquera, Changes in carotenoid esterification during the fruit ripening of capsicum annuum Cv. Bola, J. Agric. Food Chem., 1994, 42, 640-644). 천연물 내에 존재하는 에스테르형 캡산틴은 동물에 경구 투여하면 위장관에서 리파아제 또는 콜레스테롤 에스테라제 등의 효소에 의해 프리형 캡산틴으로 가수분해된 후 흡수된다.
프리형 및 에스테르형 캡산틴을 합성, 분리, 정제 및 제조하는 방법은 특정의 것으로 한정되지 않는다. 캡산틴을 천연물로부터 분리하는 경우에는 예컨대 건조된 천연물을 잘게 분쇄한 후 분쇄물 무게의 약 2-20배의 알콜 수용액, 또는 에틸아세테이트 등의 유기용매를 사용하여 냉침 추출, 초음파 추출, 환류 냉각 추출, 약탕기 추출, 초임계 추출 등의 추출 방법으로 용매 추출하고, 이 용매 추출물을 용매 분획한 후 실리카겔 컬럼으로 크로마토그래피 처리하는 방법으로 분리할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물 또는 식품 조성물은 필요에 따라 프리형 및 에스테르형 캡산틴과 이와 동일 또는 유사한 효능이 있는 유효성분을 함께 포함할 수도 있다.
본 발명의 조성물에 포함되는 캡산틴은 그 자체 또는 염, 바람직하게는 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용될 수 있다. 본 발명에서 '약학적으로 허용가능한'이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 말하며, 상기 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의하여 형성된 산 부가염이 바람직하다. 상기 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있다. 상기 유기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 말레인산, 푸마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플로오로아세트산, 벤조산, 글루콘산, 메타술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 글루탐산 및 아스파르트산을 포함한다. 또한 상기 무기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 염산, 브롬산, 황산 및 인산을 포함한다.
본 명세서에서, ‘근’은 심줄, 근육, 건을 포괄적으로 지칭하고, ‘근 기능’은 근육의 수축에 의해 힘을 발휘하는 능력을 의미하며, 근육이 저항을 이겨내기 위하여 최대한으로 수축력을 발휘할 수 있는 능력인 근력, 근육이 주어진 중량에 얼마나 오랫동안 또는 얼마나 여러 번 수축과 이완을 반복할 수 있는지를 나타내는 능력인 근지구력, 단시간 내에 강한 힘을 발휘하는 능력인 순발력을 포함한다. 이러한 근 기능은 간이 주관하며, 근육량에 비례한다.
본 발명의 ‘근육 질환’은 근육 소모 또는 퇴화로 인한 질환을 의미한다. 상기 질환의 예로는 근육감소증(sarcopenia), 긴장감퇴증(atony), 근위축증(muscular atrophy), 근이영양증(muscular dystrophy), 근육 퇴화, 근경직증, 근디스트로피, 근위축성 축삭경화증, 근무력증 및 악액질(cachexia)을 들 수 있다. 근육 소모는 근육량의 점진적 손실, 근육, 특히 골격근 또는 수의근 및 심장근육의 약화 및 퇴행을 특징으로 한다. 근육 소모 및 퇴화는 유전적 요인, 후천적 요인, 노화 등을 원인으로 발생한다. 본 발명의 조성물은 근육 증가 효과를 가지고, 근육은 그 종류를 제한하지 않는다. 근육 증가는 신체 성분 중에서도 특히 근육의 성능을 향상시키는 것으로, 육제적 운동 및 지구력 향상을 통해 근육량을 증가시킬 수 있고, 근육 증가 효과를 가지는 물질을 체내에 투여하는 방식으로 근육량을 증가시킬 수 있다.
본 발명의 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물은 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 단독으로 함유하거나 또는 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴과 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 추가적인 성분을 포함하게 되면 본 발명의 조성물의 근육 질환 개선 효과가 더욱 증진될 수 있을 것이다. 상기 성분 추가 시에는 복합 사용에 따른 피부 안전성, 제형화의 용이성, 유효성분들의 안정성을 고려할 수 있다.
본 발명의 적색 파프리카 추출물은 추출물의 제조시 추출 효율을 증대시키기 위해 상기 원료에 대한 건조 과정 등의 전처리 과정을 포함할 수 있다.
본 발명의 적색 파프리카 추출물은 공지의 천연물 추출방법에 의하여 추출될 수 있다. 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 6개의 유기용매 및 아임계 또는 초임계 유체로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출될 수 있다. 상기 탄소수 1 내지 6개의 유기용매는 탄소수 1 내지 6개의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane) 및 석유에테르(petroleum ether)로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 적색 파프리카 추출물은 파프리카를 식품가공에 적합한 정제수, 에탄올 및 아임계수 또는 초임계 이산화탄소를 이용하여 추출, 정제하여 얻을 수 있거나, 또는 파프리카를 직접 압착하여 얻은 오일로부터 분리 정제하여 얻을 수 있다. 예를 들어, 100 Mpa 이상의 초고압 조건 하에서 적색 파프리카를 추출하여 추출물을 수득할 수 있다. 바람직하게는 100 MPa 내지 1000 MPa의 초고압 조건일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 추출물은 여과 및/또는 농축하여 액상으로 사용할 수 있고, 분무건조 또는 동결건조 등 통상의 건조 공정을 통하여 고형화하여 사용할 수 있다. 상기 건조 공정에서는 분무건조 또는 동결건조 전 덱스트린 등을 혼합하여 건조할 수 있다.
본 발명의 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴은 근육량 증가 활성이 우수하므로 약학적 조성물의 유효한 성분으로 이용될 수 있다.
또한, 본 발명의 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴은 근육량 증가 활성이 우수하므로 식품 조성물의 유효한 성분으로 이용될 수 있다.
본 발명의 근육 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 더 포함할 수 있다.
약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여용 담체는 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다. 또한 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코스 및 글리콜 등을 포함할 수 있다. 또한, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).
본 발명의 약학적 조성물은 인간을 비롯한 포유동물에 어떠한 방법으로도 투여할 수 있다. 예를 들어, 경구 또는 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구적인 투여방법으로는 이에 제한되는 것은 아니나, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장내 투여일 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 경구 투여용 또는 비경구 투여용 제제로 제형화 할 수 있다. 제형화할 경우에는 하나 이상의 완충제(예를 들어, 식염수 또는 PBS), 항산화제, 정균제, 킬레이트화제(예를 들어, EDTA 또는 글루타치온), 충진제, 증량제, 결합제, 아쥬반트(예를 들어, 알루미늄 하이드록사이드), 현탁제, 농후제 습윤제, 붕해제 또는 계면활성제, 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.
경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 현탁액 또는 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 약학적 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분(옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분 등 포함), 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose), 덱스트로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 말티톨, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 예컨대, 활성성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다.
단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물 또는 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 또는 보존제 등이 포함될 수 있다.
또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있으며, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
비경구적으로 투여하는 경우 본 발명의 약학적 조성물은 적합한 비경구용 담체와 함께 주사제, 경피 투여제 및 비강 흡입제의 형태로 당 업계에 공지된 방법에 따라 제형화될 수 있다. 상기 주사제의 경우에는 반드시 멸균되어야 하며 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염으로부터 보호되어야 한다. 주사제의 경우 적합한 담체의 예로는 이에 한정되지는 않으나, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 이들의 혼합물 및/또는 식물유를 포함하는 용매 또는 분산매질일 수 있다. 보다 바람직하게는, 적합한 담체로는 행크스 용액, 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS (phosphate buffered saline) 또는 주사용 멸균수, 10% 에탄올, 40% 프로필렌 글리콜 및 5% 덱스트로즈와 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 상기 주사제를 미생물 오염으로부터 보호하기 위해서는 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르빈산, 티메로살 등과 같은 다양한 항균제 및 항진균제를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 주사제는 대부분의 경우 당 또는 나트륨 클로라이드와 같은 등장화제를 추가로 포함할 수 있다.
경피 투여제의 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태가 포함된다. 상기에서 ‘경피 투여’는 약학적 조성물을 국소적으로 피부에 도포하여 약학적 조성물에 함유된 유효한 양의 활성성분이 피부 내로 전달되는 것을 의미한다.
흡입 투여제의 경우, 본 발명의 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 적합한 추진제, 예를 들면, 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체를 사용하여, 가압 팩 또는 연무기로부터 에어로졸 스프레이 형태로 편리하게 전달할 수 있다. 가압 에어로졸의 경우, 투약 단위는 계량된 양을 전달하는 밸브를 제공하여 결정할 수 있다. 예를 들면, 흡입기 또는 취입기에 사용되는 젤라틴 캡슐 및 카트리지는 화합물, 및 락토즈 또는 전분과 같은 적합한 분말 기제의 분말 혼합물을 함유하도록 제형화할 수 있다. 비경구 투여용 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour)에 기재되어 있다.
본 발명의 근육 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물은 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 유효량으로 포함할 때 바람직한 근육 질환 예방 및 치료 효과를 제공할 수 있다. 본 명세서에서, '유효량'이라 함은 음성 대조군에 비해 그 이상의 반응을 나타내는 양을 말하며 바람직하게는 근육량을 증가시키거나, 근 기능을 향상시키기에 충분한 양을 말한다. 본 발명의 약학적 조성물에 적색파프리카 추출물 또는 캡산틴이 0.01 내지 99.99% 포함될 수 있으며, 잔량은 약학적으로 허용 가능한 담체가 차지할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴의 유효량은 조성물이 제품화되는 형태 등에 따라 달라질 것이다.
본 명세서에서 '치료'란 치료되는 개체 또는 세포의 자연적 과정을 변경시키려는 임상적 시술을 의미하며, 임상적 병리의 예방을 위해서도 수행될 수 있다. 치료의 바람직한 효과는 질병의 발생 또는 재발 억제, 증상의 완화, 질병의 임의의 직접 또는 간접적인 병리학적 결과의 감소, 질병 진행 속도의 감소, 질병 상태의 개선, 호전, 완화 또는 개선된 예후 등을 포함한다. 또한 용어 '예방'은 질병의 발병을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 약학적 조성물의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있다. 비경구 투여시는 파프리카 추출물을 기준으로 하루에 체중 1 kg당 바람직하게 0.01 내지 50 mg, 더 바람직하게는 0.1 내지 30 mg의 양으로 투여되도록, 그리고 경구 투여시는 파프리카 추출물을 기준으로 하루에 체중 1 kg당 바람직하게 0.01 내지 100 mg, 더 바람직하게는 0.01 내지 10 mg의 양으로 투여되도록 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 그러나 상기 파프리카 추출물 또는 캡산틴의 용량은 약학적 조성물의 투여 경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환자의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 질환의 중증도, 식이 및 배설율 등 다양한 요인들을 고려하여 환자에 대한 유효 투여량이 결정되는 것이므로, 이러한 점을 고려할 때 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 상기 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 근육 질환 예방 및 치료를 위한 특정한 용도에 따른 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다.
본 발명의 근육 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물은 단독으로 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 또는 생물학적 반응조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 근육 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물은 또한 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 유효성분으로 포함하는 외용제의 제형으로 제공할 수 있다.
본 발명의 근육 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 피부외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 유화제, 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 활성제, 친유성 활성제 또는 지질 소낭 등 피부 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
본 발명의 근육 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물이 피부 외용제로 제공될 경우, 이에 제한되는 것은 아니나, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제 등의 제형일 수 있다.
본 발명의 근육 질환 예방 또는 개선용 조성물은 또한 식품 조성물일 수 있다. 본 발명의 근육 질환 예방 또는 개선용 조성물이 식품 조성물인 경우, 근육 소모 또는 퇴화로 인한 근육 질환의 예방 또는 개선에 사용될 수 있다. 근육 소모 및 퇴화는 유전적 요인, 후천적 요인, 노화 등을 원인으로 발생하며, 근육 소모는 근육량의 점진적 손실, 근육, 특히 골격근 또는 수의근 및 심장근육의 약화 및 퇴행을 특징으로 한다. 이와 관련된 질환의 예로는 근육감소증(sarcopenia), 긴장감퇴증(atony), 근위축증(muscular atrophy), 근이영양증(muscular dystrophy), 근육 퇴화, 근경직증, 근디스트로피, 근위축성 축삭경화증, 근무력증 및 악액질(cachexia) 등을 들 수 있다. 본 발명의 조성물은 근육량 증대 효과가 있으며, 근육은 그 종류를 제한하지 않는다.
본 발명의 식품 조성물은 기능성 식품(functional food), 영양 보조제(nutritional supplement), 건강식품(health food), 식품 첨가제(food additives) 및 사료 등의 모든 형태를 포함하며, 인간 또는 가축을 비롯한 동물을 취식대상으로 한다. 상기 유형의 식품 조성물은 당 업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다.
상기 유형의 식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다. 일반 식품으로는 이에 한정되지 않지만 음료(알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예: 햄, 소시지 콘비이프 등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게이트, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치이즈 등), 식용식물 유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 상기 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 영양보조제로는 이에 한정되지 않지만 캡슐, 타블렛, 환 등에 적색 파프리카 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 건강기능식품으로는 이에 한정되지 않지만 예를 들면, 상기 파프리카 추출물 자체 또는 캡사틴을 차, 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용(건강음료)할 수 있도록 액상화, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한, 상기 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 식품 첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다. 또한, 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴과 근육 질환 예방 및 근 기능 개선 효과가 있다고 알려진 공지의 활성 성분과 함께 혼합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다.
본 발명의 근육 질환 예방 또는 개선용 조성물이 건강음료 조성물로 이용되는 경우, 상기 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드; 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드; 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드; 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜일 수 있다. 감미제는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제; 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL 당 일반적으로 약 0.01 ∼ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ∼ 0.03 g 이다.
적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴이 근육 질환 예방 또는 개선용 식품 조성물의 유효성분으로 함유될 때, 그 양은 근육 질환 예방 및 근 기능 개선용 작용을 달성하기에 유효한 양으로 특별히 한정되는 것은 아니나, 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 100 중량%인 것이 바람직하다. 본 발명의 식품 조성물은 파프리카 추출물 또는 캡산틴과 함께 근육 질환 예방 및 근 기능 개선용 조성물에 효과가 있는 것으로 알려진 다른 활성 성분과 함께 혼합하여 제조될 수 있다.
상기 외에 본 발명의 건강식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산, 펙트산의 염, 알긴산, 알긴산의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 또는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강식품은 천연 과일주스, 과일주스 음료 또는 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은 적색 파프리카 추출물을 유효성분으로 포함하는 운동능력 증진용 식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 운동능력 증진용 식품 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112018017959846-pat00005
본 명세서에서 용어‘운동능력 증진’이란 근력, 근지구력과 같은 근 기능 향상 효과를 의미하는 것이며, 바람직하게는 근력 또는 근지구력이 증가되는 것이다.
상기 식품용 조성물을 제조하기 위한 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴에 대하여서는 전술한 바와 같다. 또한 상기 식품용 조성물의 예시 및 함유량에 대하여서도 전술한 바와 같다.
또한, 본 발명은 적색 파프리카 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육강화용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 근육강화용 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112018017959846-pat00006
본 명세서에서 용어 “근육강화”는 근육량이 증가되거나, 또는 근 감소가 억제되는 것을 의미한다.
본 발명의 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴은 근지구력 증가 활성이 우수하므로 약학적 조성물의 유효한 성분으로 이용될 수 있다.
또한, 본 발명의 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴은 근지구력 증가 활성이 우수하므로 식품 조성물의 유효한 성분으로 이용될 수 있다.
상기 적색 파프리카 추출물의 제조방법 또는 캡산틴의 분리방법은 전술한 바와 같으며, 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 약학적 조성물의 제형화, 투여 경로와 투여량 등의 투여 방법 등에 대하여서는 전술한 바와 같다.
본 발명에 따른 상기 약학적 조성물은 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 유효성의 예시 및 함유량에 대하여서도 전술한 바와 같다.
따라서, 본 발명은 적색 파프리카 추출물 또는 적색 파프리카 추출물 유래 카로티노이드인 캡산틴(Capsanthin)의 근육 세포에 미치는 영향을 확인한 것으로, 상기 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴은 섭취시 근육량, 근지구력 또는 운동능 향상 효과를 보였므로, 근육질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물, 운동능력 증진용 식품 조성물, 근육강화용 조성물로 유용하게 활용될 수 있다.
도 1은 적색 파프리카로부터 분리한 캡산틴(capsanthin)의 NMR 결과이다.
도 2는 마우스에 고지방 식이로 비만을 유도하고 적색 파프리카를 급여 후 운동능을 평가한 결과이다(NOR: 정상식이군, HFD: 고지방 식이군, RPL: 고지방 식이 + 적색 파프리카 추출물(5%), RPH: 고지방 식이 + 적색 파프리카 추출물(10%).
도 3은 마우스에 고지방 식이로 비만을 유도하고 캡산틴(capsanthin)을 급여 후 운동능을 평가한 결과이다(NOR: 정상식이군, HFD: 고지방 식이군, CST: 고지방 식이 + 캡산틴(0.025%)).
도 4는 마우스에 고지방 식이로 비만을 유도하고 적색 파프리카를 급여 후 근육 무게의 변화를 평가한 결과이다(NOR: 정상식이군, HFD: 고지방 식이군, RPL: 고지방 식이 + 적색 파프리카 추출물(5%), RPH: 고지방 식이 + 적색 파프리카 추출물(10%)).
도 5는 마우스에 고지방 식이로 비만을 유도하고 적색 파프리카를 급여 후 체중 100g 대비 근육 무게의 변화를 평가한 결과이다(NOR: 정상식이군, HFD: 고지방 식이군, RPL: 고지방 식이 + 적색 파프리카 추출물(5%), RPH: 고지방 식이 + 적색 파프리카 추출물(10%)).
도 6은 마우스에 고지방 식이로 비만을 유도하고 캡산틴을 급여 후 근육 무게의 변화를 평가한 결과이다(NOR: 정상식이군, HFD: 고지방 식이군, CST: 고지방 식이 + 캡산틴(0.025%)).
도 7은 마우스에 고지방 식이로 비만을 유도하고 캡산틴을 급여 후 체중 100g 대비 근육 무게의 변화를 평가한 결과이다(NOR: 정상식이군, HFD: 고지방 식이군, CST: 고지방 식이 + 캡산틴(0.025%)).
도 8은 마우스에 고지방 식이로 비만을 유도하고 적색 파프리카를 급여 후 근 수축 mRNA의 발현 변화를 확인한 결과이다(NOR: 정상식이군, HFD: 고지방 식이군, RPL: 고지방 식이 + 적색 파프리카 추출물(5%), RPH: 고지방 식이 + 적색 파프리카 추출물(10%)).
도 9는 마우스에 고지방 식이로 비만을 유도하고 캡산틴을 급여 후 근 수축 mRNA의 발현 변화를 확인한 결과이다(NOR: 정상식이군, HFD: 고지방 식이군, CST: 고지방 식이 + 캡산틴(0.025%)).
도 10은 마우스에 고지방 식이로 비만을 유도하고 적색 파프리카를 급여 후 근육 타입 및 근 수축 단백질의 발현 변화를 확인한 결과이다(NOR: 정상식이군, HFD: 고지방 식이군, RPL: 고지방 식이 + 적색 파프리카 추출물(5%), RPH: 고지방 식이 + 적색 파프리카 추출물(10%)).
도 11은 마우스에 고지방 식이로 비만을 유도하고 캡산틴을 급여 후 근육 타입 및 근 수축 단백질의 발현 변화를 확인한 결과이다(NOR: 정상식이군, HFD: 고지방 식이군, CST: 고지방 식이 + 캡산틴(0.025%)).
도 12는 분화된 근육아세포에 팔미트산(Palmitic acid)을 처리한 후 적색 파프리카 처리에 따른 변화를 확인한 이미지이다.
도 13은 분화된 근육아세포에 팔미트산을 처리한 후 캡산틴 처리에 따른 변화를 확인한 이미지이다.
도 14는 분화된 근육아세포에 팔미트산을 처리한 후 적색 파프리카 처리에 따른 근육 타입 mRNA의 발현 변화를 확인한 결과이다.
도 15는 분화된 근육아세포에 팔미트산을 처리한 후 캡산틴 처리에 따른 근육 타입 mRNA의 발현 변화를 확인한 결과이다.
도 16은 분화된 근육아세포에 팔미트산을 처리한 후 적색 파프리카 처리에 따른 근 축소 관련 mRNA의 발현 변화를 확인한 결과이다.
도 17은 분화된 근육아세포에 팔미트산을 처리한 후 캡산틴 처리에 따른 근 축소 관련 mRNA의 발현 변화를 확인한 결과이다.
도 18은 분화된 근육아세포에 팔미트산을 처리한 후 적색 파프리카 처리에 따른 근육 타입 및 근 수축 단백질의 발현 변화를 확인한 결과이다.
도 19는 분화된 근육아세포에 팔미트산을 처리한 후 캡산틴 처리에 따른 근육 타입 및 근 수축 단백질의 발현 변화를 확인한 결과이다.
도 20은 분화된 근육아세포에 팔미트산을 처리한 후 적색파프리카 처리에 따른 세포 호흡률 변화를 확인한 결과이다.
도 21은 분화된 근육아세포에 팔미트산을 처리한 후 캡산틴 처리에 따른 세포 호흡률 변화를 확인한 결과이다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<실험방법>
모든 연구결과는 GraphPad Prism 7 (GraphPad Software Inc., SanDiego, CA, USA)을 이용하여 one-way ANOVA를 수행하였고, 각 시료간 통계적 유의성은 본페로니 중다비교검정(Bonferroni multiple comparison post test)으로 검증하였다. 통계적 유의성은 p<0.05 이상일 때만 *(p<0.05), **(p<0.01), ***(p<0.001)로 표기하였다.
1. 파프리카 추출물 시료의 제조
적색 파프리카를 수세 후 꼭지, 태좌 및 씨를 제거한 후 동결건조하여 분말로 만든 후 동물실험 시료로 사용하였으며, AIN-76을 기반으로 한 30% 고지방 식이에 5% (v/v) 적색 파프리카 분말을 함유하는 RPL 그룹과 10% (v/v) 적색 파프리카 분말을 함유하는 RPH 그룹으로 나누어 실험을 수행하였다.
in vitro로 적색 파프리카에 함유된 캡산틴의 효능평가를 위해 동결건조 후 분말로 만든 5g 적색파프리카 시료를 아세톤으로 추출하여 30% KOH로 2시간 30분 동안 검화한 후 디에틸에테르(diethylether)로 지용성 부분을 분획하여 감압건조 한 후 정량된 고형분을 시료로 사용하였다.
2. 캡산틴 분리
파프리카 추출물 1kg에 무수에탄올 30L을 넣고 메톡사이드나트륨(sodium methoxide)을 촉매량 가하여 실온에서 교반하면서 에스터교환반응(trans-esterificaition)을 했다. 이 반응이 완료되면, 아세트산를 가하여 촉매를 파괴하고, 이를 감압 농축하여 캅산틴 지방산 에스테르와 지방산의 에칠에스테르 및 글리세린의 혼합물 1.03kg을 얻었다.(이때, 트리글리세라이드는 지방산의 에칠에스테르로 되지만, 에스테르형 캅산틴은 반응하지 않는다.(T. Philip, W. W. Nawar and F. J. Francis, The nature of fatty acids and capsanthin esters in paprika, Journal of Food Science., 1971, 36, 98-100))
상기에서 얻은 혼합물 1kg을 헥산 10L에 녹여 실리카겔 2kg과 헥산으로 제작한 칼럼을 이용한 크로마토그래피를 하여 지방산의 에틸 에스테르 성분이 남아 있지 않을 때까지 용출시켜 제거한 후 전개용매를 헥산 : 에틸 아세테이트 = 20 : 1로 바꾸어 용출시켜 에스테르형 캡산틴 분획물 8.75g를 얻었다.
이 분획물 8.75g을 헥산에 용해하여 4℃에 방치하여 암적색 무정형 분말 1.54g을 얻었다. 이를 CDCl3에 녹여 500Mhz H-NMR 하여 에스테르형 캡산틴임을 확인하였다. 그 결과는 하기 표 1 및 도 1과 같다.
Peak No. Carotenoid Rt(min) Content(mg/100g)
1 Neoxanthin 3.466 ND
2 Capsorubin 4.242 7.46±0.34
3 Violaxanthin 5.432 0.28±0.05
4 Capsanthin 7.795 53.23±5.79
5 Antheraxanthin 8.478 1.69±0.12
6 Zeaxanthin 12.314 8.33±0.69
7 Lutein 13.469 ND
8 α-Cryptoxanthin 20.503 0.07±0.00
9 β-Cryptoxanthin 20.631 0.13±0.02
10 α-Carotene 24.671 0.66±0.06
11 β-Carotene 25.092 2.15±0.22
Total carotenoid 74.01±7.06
3. 인 비보(in vivo) 실험
1) 동물 모델 준비
생후 5주령 된 수컷 C57BL/6N 중 10마리는 정상 식이인 chow diet를 섭취하게 하고, 나머지는 60% 고지방 식이로 8주간 비만을 유도하였다. 60% 고지방 식이로 비만을 유도한 쥐들 중에서 난괴법으로 고지방 식이군(HFD, 30%), 시료 식이군(HFD+RPL 또는 HFD+RPH)으로 나누어 각각의 실험 식이를 8주간 급여하였다. 정상 대조군 (NOR)은 chow diet를 섭취하게 한 그룹으로 하였다. 모든 식이는 AIN 76 식이 조성에 의하여 제조하였으며, 시료 식이군(HFD+RPL 또는 HFD+RPH)의 경우, RPL (5%) 또는 RPH(10%)를 첨가하여 8주간 급여함으로써 골격근 비대를 유도하였다. 마우스 해부 시에는 근육의 전조직을 구분하여 채취하여 그 무게를 소수점 4자리까지 취하여 측정하였다. 근육조직은 qPCR을 통해 mRNA를 정량하였으며, 웨스턴블랏을 통해 단백질 발현의 변화를 확인하였다.
2) 앞다리 그립 강도 시험(forelimb Grip Strength Test)
시험동물의 근기능개선으로 인한 운동수행능력을 측정하고자 실험식이 급여 7주 차에 앞다리 그립 강도 시험을 진행하였다. 앞다리 그립 강도 시험은 실험동물의 목덜미와 꼬리를 잡고 실험동물이 바(bar)를 양손으로 잘 잡을 수 있도록 자세를 유도하고, 꼬리를 잡아 쥐가 앞다리로 잡았던 막대를 놓치게 되는 순간의 최대 악력을 측정하는 방법으로 각각의 실험동물에게 연속적으로 그립 시험을 5회씩 실시하였으며, 5번의 시도 중 최고값 및 최저값을 제외시킨 평균값을 데이터로 사용하였다. 데이터 상의 수치는 측정된 힘의 값을 체중(g)으로 표준화(normalization)하여 나타내었다.
3) 트레드밀(treadmill) 시험
시험동물의 운동 수행능력 개선을 확인하고자 실험식이 급여 7주 차에 트레드밀 운동을 실시하였다. 최대 운동 수행능력은 15℃의 경사의 트레드밀에서 마우스가 탈진할 때까지 운동한 거리(running distance, m)와 시간 (running time, min)으로 측정하였다. 트레드밀 운동 훈련을 위해 첫째 날에는 5 m/min.의 속도로 10분간, 10 m/min.으로 10분간, 둘째 날에는 5 m/min.으로 5분간, 10 m/min.으로 15분간 훈련시켰다. 시험 당일인 셋째 날에는 10 m/min.으로 20분간 운동 후 2분마다 2 m/min.으로 속도를 증가시켰다. 최대 운동 수행능력은 운동을 멈춘 후 그리드(grid)에서 10초 이상 머무를 때까지의 달린 거리로 환산하였다.
4) 정량적 Real-time PCR
시험동물의 근육조직(비복근 및 삼두근)을 일정량 취하여 RNA 추출 키트(NucleoRNA Spin Ⅱ, Macherey-Nagel, GmBH&Co, GA)의 사용자 프로토콜에 따라 총 RNA를 추출하였으며 추출된 RNA는 cDNA를 합성하여 qPCR을 실시하였다. Real-time PCR 분석은 Applied Biosystems 7900 HT thermal cycler(Applied Biosystems)의 제조자의 권장 사이클링 조건에 따라 실시하였고 각 mRNA의 발현정도는 18s를 내인성 대조군(endogenous control)으로 하여 대조군에 대한 폴드 변화를 2-Ct의 계산에 의해 산출하였다.
프라이머 염기서열
염기서열 서열번호
18s RNA Sense GTA ACC CGT TGA ACC CCA TT 1
Anti-sense CCA TCC AAT CGG TAG TAG CG 2
MURF-1 Sense TGT CTC ACG TGT GAG GTG CCT A 3
Anti-sense CAC CAG CAT GGA GAT GCA GTT AC 4
Atrogin Sense AAG GCT GTT GGA GCT GAT AGC A 5
Anti-sense CAC CCA CAT GTT AAT GTT GCC C 6
5）웨스턴 블럿
시험동물의 근육조직(비복근)을 일정량 취하여 RIPA 완충액를 이용하여 단백질을 추출한 후 BCA 정량법에 의하여 단백질을 정량하여 단백질원으로 이용하였다. 얻어진 단백질은 8-10% SDS-폴리아크릴아마이드 겔(polyacrylamide gels)을 사용하여 전기영동을 통해 분리하였고, 나이트로셀룰로오스 맴브레인(nitrocellulose membrane)으로 옮겼다. 맴브레인은 5% 스킴 밀크(skim milk) 또는 3% 소혈청 알부민(bovine serum albumin, BSA)을 이용하여 한시간 동안 블럭킹하였고, 밤새 1차 항체(MHC-total, MHC-Ⅰ, MHC-Ⅱa, MHC-Ⅱb (anti-mouse, 1:50, DSHB), MURF1 (anti-rabbit, 1:1000, Abcam), Fbx32 (anti-goat, 1:1000, Abcam))와 함께 배양하였다. 이를 트윈 20(Tween 20)이 함유된 PBS을 이용하여 세척하고 2차 항체(anti-mouse, anti-rabbit, anti-goat secondary antibodies, 1:5000, Santa Cruz))와 함께 한시간동안 배양하였다. 화학발광 이미지(chemiluminescent images)는 Image Quant LAS 4000 mini(GE Healthcare Life Sciences, Piscataway, NJ)를 이용하여 확인하였다.
6）산소 소비 속도(Oxygen Consumption Rate, OCR) 측정
C2C12 세포를 XF analyzer (Seahorse Bioscience, USA)용 plate에 10% FBS를 포함하는 DMEM배지로 배양한 후, 2% HS(horse serum)를 포함하는 DMEM 배지로 분화하였다. 분화를 유도한 세포에 RP와 CST를 농도별로 처리하여 24시간동안 배양한 후 0.5mM 팔미트산을 처리하여 24시간 배양하였다. 세포의 산소소비량 (oxygen consumption rate, OCR)을 측정하기 전에 중탄산염 제외 배지(bicarbonate-free medium)로 교체한 뒤 CO2 없이 세포 배양기에서 1시간 배양하였다. 기기에 플레이트를 넣은 후 기저(basal) OCR의 변화를 측정하면서 0,5 μM 올리고마이신(oligomycin), 1μM 카보닐 시아나이드-4-(트리플루오로메톡시)페닐하이드라존(carbonyl cyanide-4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone (FCCP)), 1μM 로테논(rotenone)의 호흡사슬 억제제를 순서대로 처리하면서 OCR 변화량을 측정하였다.
4. 인 비트로(in vitro) 실험
1) C2C12 세포주의 배양
실험에 사용한 C2C12(CRL1772 ATCC, USA) 마우스 유래 근아세포는 American type Cell Collection(ATCC, USA)로부터 구입하였으며, 10% FBS를 포함하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium) 배지로 배양하며, 분화를 유도하기 위해 2% HS를 포함하는 DMEM 배지를 매일 교체하면서 3일간 분화시켰다. 분화를 유도한 세포에 적색 파프리카 추출물(RP)과 캡산틴(CST)를 농도별로 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 그런 후 0.5 mM 팔미트산(Palmitic acid)을 포함하는 DMEM 배지를 24일간 처리하여 RP와 CST의 효능평가를 수행하였다.
2) 면역형광법(Immunofluorescence)
PA로 분화를 유도한 후, 1μg/ml RP 또는 5μg/ml를 각각 처리하여 배양한 세포를 4% 포름알데하이드(Formaldehyde)로 실온에서 15분간 고정한 후 0.05% 사포닌 용액으로 실온에서 30분간 투과화(permeablization)를 한 다음, 1% BSA 용액으로 1시간 동안 블로킹 하였다. 1차 항체(Total MHC)로 실온에서 1시간 동안 반응한 뒤 PBS로 세척을 해주고 2차 형광 항체를 동일한 방법으로 반응한 뒤 형광현미경으로 근관의 형태를 관찰하였다.
3) 정량적 Real-time PCR
PA로 분화를 유도한 후, 1μg/ml RP 또는 5μg/ml RP를 각각 처리하고 24시간 동안 배양한 근육아세포를 PBS를 이용하여 세척한 뒤, 수득하였다. 그런 후 제조사의 지침에 따라 TRIzol 시약을 이용하여 total RNA를 추출하였다. 그 다음, 1mM dNTP 및 oligo dT(0.5μg/μl)를 이용하여 1μg의 RNA를 역전사 하여 cDNA를 합성한 뒤, Tag DNA polymerase 1 unit, 0.2mM dNTP, X10 reaction buffer 및 primer 100pmol을 혼합하여 전체 부피가 25μl가 되도록 만들었다. 혼합한 시료로 PCR을 실시하여 MyHC1, MyHC2α, MyHC2b, PGC-1α, MURF-1, 아트로진(Atrogin)의 mRNA 발현량을 측정하였다.
프라이머 염기서열
염기서열 서열번호
MyHC1 Sense CCA AGG GCC TGA ATG AGG AG 7
Anti-sense GTC CTG CAG CCT CAG CAC GTT 8
MyHC2α Sense AAG CGA AGA GTA AGG CTG TC 9
Anti-sense GTG ATT GCT TGC AAA GGA AC 10
MyHC2b Sense CAC CTG GAG CGG ATG AAG AAG AAC 11
Anti-sense GTC CTG CAG CCT CAG CAC GTT 12
PGC-1α Sense TAT GGA GTG ACA TAG AGT GTG CT 13
Anti-sense CCA CTT CAA TCC ACC CAG AAA G 14
MURF-1 Sense TGT CTC ACG TGT GAG GTG CCT A 15
Anti-sense CAC CAG CAT GGA GAT GCA GTT AC 16
Atrogin Sense AAG GCT GTT GGA GCT GAT AGC A 17
Anti-sense CAC CCA CAT GTT AAT GTT GCC C 18
4) 웨스턴 블럿
배양한 세포를 RIPA 완충액(Thermo Scientific, Waltham, MA, USA)을 이용하여 단백질을 추출한 후 SDS-PAGE 겔을 이용하여 전기영동을 실시하였다. 이후 단백질이 옮겨진 막을 5% 탈지분유로 1시간 동안 블로킹을 한 후, 1차 항체(MHC-total, MHC-Ⅰ, MHC-Ⅱa (anti-mouse, 1:50, DSHB), PGC-1α (anti-goat, 1:1000, Abcam), MURF1 (anti-rabbit, 1:1000, Abcam), Fbx32 (anti-goat, 1:1000, Abcam), Myogenin (anti-rabbit, 1:1000, Santa Cruz), β-actin (anti-mouse, 1:1000, Santa Cruz)와 2차 항체(anti-mouse, anti-rabbit, anti-goat secondary antibodies, 1:5000, Santa Cruz)를 부착시킨 후, ECL용액을 이용하여 단백질의 발현을 측정하였다.
<실시예 1>
운동능력 평가
정상 식이군(NOR), 고지방 식이군(HFD) 고지방 식이군에 파프리카 추출물(RPL 또는 RPH)을 섭취하게 한 실험군으로부터 운동능의 변화를 확인하여 도 2에 나타내었다.
더불어 고지방 식이군에 파프리카로부터 분리한 캡산틴을 섭취하게 한 실험군의 운동능의 변화도 확인하여 도 3에 나타내었다.
정상식이군에 비해 고지방 식이군의 운동능은 확연히 저하된 반면, 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 투여한 경우 앞다리 그립 강도가 증가하였고, 최대 운동 수행능력이 증가된 것을 확인할 수 있었다.
특히 파프리카 추출물의 경우, RPL보다 RPH를 투여하였을 경우 운동능이 더 향상된 것을 확인하였다.
<실시예２>
근육무게 변화 확인
고지방 식이로 비만을 유도한 마우스에 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 급여한 후, 비장근(Soleus), 장딴지근(Gastrocnemius), 사두근(Quandricept), 전경골근(Tibialis anterior), 장지신근(Extensor digitorum longus) 및 삼두박근(Tricept)의 무게를 확인하였다.
그 결과, 도 4와 같이 정상 식이 또는 고지방 식이 실험군에 비해 파프리카 추출물 급여 실험군의 근육의 무게가 증가된 것을 확인할 수 있었다. 특히, RPH를 급여한 경우 유의미하게 근육의 무게가 증가되었다.
또한, 도 5와 같이 비장근, 장딴지근, 사두근, 전경골근, 장지신근 및 삼두박근 각각에 있어서, 전체 100g 당 근육의 무게를 확인해 본 바, 고지방 식이에 의하여 감소된 근육무게가 파프리카 추출물을 급여한 경우 증가한 것을 확인하였다.
더불어 캡산틴도 마찬가지로 도 6을 통해 정상식이 또는 고지방 식이 실험군에 비해 캡산틴 급여 실험군의 근육의 무게가 증가된 것을 확인할 수 있었다.
비장근, 장딴지근, 사두근, 전경골근, 장지신근 및 삼두박근 각각에 있어서, 전체 100g 당 근육의 무게를 확인해 본 바 도 7과 같이, 고지방 식이에 의하여 감소된 근육 무게가 캡산틴 급여를 통해 증가한 것을 확인하였다.
따라서, 파프리카 추출물 또는 이로부터 추출한 캡산틴은 근육 무게를 증가시키는 효과를 가짐을 확인하였다.
<실시예 3>
근 수축 관련 mRNA 발현 변화 확인
근육 단백질을 파괴함으로써 근 위축(atrophy)을 야기하는 아트로진-1(Atrogin-1) 또는 MURF1(Muscle RING-finger protein-1) 유전자의 발현에 있어서 파프리카 추출물과 캡산틴의 효과를 확인하였다.
도 8과 같이 고지방 식이 실험군의 MURF1 및 아트로진-1의 발현은 눈에 띄게 증가하였으나, 파프리카 추출물을 같이 급여한 경우 현저히 감소된 것을 확인할 수 있었다. 특히 RPL 보다 RPH를 급여하였을 때 발현 억제 효과가 더 우수하였다.
또한 도 9와 같이, 고지방 식이군에 캡산틴을 급여하였을 때도 우수한 발현 억제 효과를 보였다.
따라서, 파프리카 추출물 또는 이로부터 추출한 캡산틴은 근육 수축을 억제하는 효과를 가짐을 확인하였다.
<실시예 4>
근 수축 관련 단백질 발현 변화 확인
미오신 내 ATP를 분해하여 근 수축 또는 이완 과정에 관여하는 MHC(Myosin ATPase) 패밀리의 발현에 있어서 파프리카 추출물과 캡산틴의 효과를 확인하였다.
그 결과 도 10 및 도 11과 같이, 파프리카 추출물과 캡산틴 모두 MHC 패밀리(MHC-Ⅰ, MHC-Ⅱa 및 MHC-Ⅱb)의 발현을 증가시킨 반면, MURF-1의 발현은 현저히 억제시킨 것을 확인하였다.
<실시예 5>
근육세포 분화에 미치는 영향 확인
분화를 유도한 근육아세포인 C2C12 세포에 팔미트산(Palmitic acid, PA)를 처리한 후, 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 처리하여, 분화에 미치는 영향을 확인하였다.
그 결과 도 12 및 도 13과 같이, 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 처리한 경우 농도 의존적으로 세포의 응집이 증가된 것을 확인할 수 있었다.
<실시예 6>
근육세포 분화 시 조절 인자 발현 변화 확인
분화를 유도한 근육아세포에서 근원성 조절 인자(myogenic regulatory factor)인 미오신 헤비 체인(Myosin heavy chain, MyHC)의 mRNA 발현에 파프리카 추출물 또는 캡산틴이 미치는 영향을 확인하였다.
그 결과 도 14 및 도 15와 같이, 파프리카 추출물 또는 캡산틴의 처리에 의하여 MyHC1, MyHC2a 또는 MyHC2b의 발현이 증가된 것을 확인하였다.
특히 파프리카는 1μg/ml의 농도로 처리되었을 때보다 5μg/ml의 농도로 처리되었을 때 MyHC의 발현을 더 증가시켰고, 캡산틴은 1 μM의 농도로 처리되었을 때 MyHC의 발현을 더 증가시켰다.
이를 통해 파프리카 추출물 또는 이로부터 분리한 캡산틴이 근육의 분화 촉진능을 가짐을 확인하였다.
<실시예 7>
근육세포 분화 시 근 수축 관련 mRNA 발현 변화 확인
분화를 유도한 근육아세포에서 근육보호단백질인 PGC-1α(Peroxisome proliferative activated receptor alpha)와 아트로진-1 또는 MURF1 mRNA 발현에 파프리카 추출물 또는 캡산틴이 미치는 영향을 확인하였다.
그 결과 도 16 및 도 17과 같이, 파프리카 추출물 및 캡산틴은 근육강화 역할을 하는 PGC-1α의 발현은 증가시킨 반면, 근 수축에 관여하는 아트로진-1 또는 MURF1 의 발현은 억제시킨 것을 확인하였다.
<실시예 8>
근육세포 분화 시 근 수축 관련 mRNA 발현 변화 확인
분화를 유도한 근육아세포에 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 처리한 후, 근육타입 및 근수축 단백질의 발현 변화를 확인하였다.
그 결과 도 18과 같이, PA 처리에 의하여 MURF-1 단백질의 발현이 증가하였으나, 5μg/ml의 파프리카 추출물을 처리한 경우 MURF-1의 발현이 현저히 감소한 것을 확인하였다. 더불어 근아세포로부터 근관세포로의 분화에 따라 발현하는 MyoD족에 속하는 미오게닌(Myogenin)의 발현이 파프리카 추출물의 처리에 의해 증가하였다. 또한 PGC-1α의 발현도 증가된 양상을 보였다.
또한 마찬가지로 도 19와 같이 캡산틴을 1μM의 농도로 처리하였을 때, MURF-1의 발현이 감소되었고 Myogenin 및 PGC-1α의 발현이 증가되었다.
<실시예 9>
호흡률에 미치는 영향 확인
분화된 근육아세포에 팔미트산을 처리한 후, 적색 파프리카 또는 캡산틴을 처리에 따른 세포 호흡률의 변화를 확인하였다.
그 결과 5㎍/ml의 파프리카 추출물을 처리한 경우, 도 20과 같이 호흡률이 회복된 것을 확인할 수 있었다.
캡산틴을 처리한 경우도 마찬가지로, 도 21과 같이 호흡률을 회복된 것을 확인하였다.
이상 살펴본 바와 같이, 파프리카 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물은 근육량, 근지구력, 운동능력 향상 또는 근육 강화 효과를 보이므로 본 발명의 파프리카 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물인, 캡산틴을 포함하는 조성물은 근육 질환 예방, 개선 또는 치료에 유용하게 활용될 수 있을 뿐만 아니라, 운동능력 증진용 식품 조성물 또는 근육강화용 조성물로도 유용하게 이용될 수 있다.
<110> KOREA FOOD RESEARCH INSTITUTE <120> Composition for preventing, improving or treating muscular disease comprising Red Paprika extract or Capsanthin <130> NP17-0118 <160> 18 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18sRNA sense primer <400> 1 gtaacccgtt gaaccccatt 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18sRNA anti-sense primer <400> 2 ccatccaatc ggtagtagcg 20 <210> 3 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MURF-1 sense primer <400> 3 tgtctcacgt gtgaggtgcc ta 22 <210> 4 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MURF-1 anti-sense primer <400> 4 caccagcatg gagatgcagt tac 23 <210> 5 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Atrogin sense primer <400> 5 aaggctgttg gagctgatag ca 22 <210> 6 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Atrogin anti-sense primer <400> 6 cacccacatg ttaatgttgc cc 22 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MyHC1 sense primer <400> 7 ccaagggcct gaatgaggag 20 <210> 8 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MyHC1 anti-sense primer <400> 8 gtcctgcagc ctcagcacgt t 21 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MyHC2a sense primer <400> 9 aagcgaagag taaggctgtc 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MyHC2a anti-sense primer <400> 10 gtgattgctt gcaaaggaac 20 <210> 11 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MyHC2b sense primer <400> 11 cacctggagc ggatgaagaa gaac 24 <210> 12 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MyHC2b anti-sense primer <400> 12 gtcctgcagc ctcagcacgt t 21 <210> 13 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PGC-1a sense primer <400> 13 tatggagtga catagagtgt gct 23 <210> 14 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PGC-1a anti-sense primer <400> 14 ccacttcaat ccacccagaa ag 22 <210> 15 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MURF-1 sense primer <400> 15 tgtctcacgt gtgaggtgcc ta 22 <210> 16 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MURF-1 anti-sense primer <400> 16 caccagcatg gagatgcagt tac 23 <210> 17 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Atrogin sense primer <400> 17 aaggctgttg gagctgatag ca 22 <210> 18 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Atrogin anti-sense primer <400> 18 cacccacatg ttaatgttgc cc 22

Claims (18)

  1. 적색 파프리카 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6개의 유기용매, 아임계 유체, 초임계 유체 및 이의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매에 의한 추출물인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 근육 질환은 근육감소증(sarcopenia), 긴장감퇴증(atony), 근위축증(muscular atrophy), 근이영양증(muscular dystrophy), 근육 퇴화, 근경직증, 근디스트로피, 근위축성 축삭경화증, 근무력증 및 악액질(cachexia)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  4. 적색 파프리카 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  5. 적색 파프리카 추출물을 유효성분으로 포함하는, 근력의 감소 또는 근육량의 손실로 인하여 저하된 운동능력 증진용 식품 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 운동능력 증진이란 근력 또는 근지구력이 증가되는 것임을 특징으로 하는 식품 조성물.
  7. 적색 파프리카 추출물을 유효성분으로 포함하며, 근육량을 증가시키거나 근 감소를 억제시키는 것을 특징으로 하는, 근육 기능 약화 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  8. 삭제
  9. 적색 파프리카 추출물을 유효성분으로 포함하며, 근육량을 증가시키거나 근 감소를 억제시키는 것을 특징으로 하는, 근육 기능 약화 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  10. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
    [화학식 1]
    Figure 112019035652139-pat00007

  11. 제10항에 있어서, 상기 근육 질환은 근육감소증(sarcopenia), 긴장감퇴증(atony), 근위축증(muscular atrophy), 근이영양증(muscular dystrophy), 근육 퇴화, 근경직증, 근디스트로피, 근위축성 축삭경화증, 근무력증 및 악액질(cachexia)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  12. 제10항에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 적색 파프리카에서 분리되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  13. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 식품 조성물.
    [화학식 1]
    Figure 112019035652139-pat00031

  14. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 근력의 감소 또는 근육량의 손실로 인하여 저하된 운동능력 증진용 식품 조성물.
    [화학식 1]
    Figure 112019035652139-pat00008

  15. 제14항에 있어서,
    상기 운동능력 증진이란 근력 또는 근지구력이 증가되는 것임을 특징으로 하는 식품 조성물.
  16. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하며, 근육량을 증가시키거나 근 감소를 억제시키는 것을 특징으로 하는, 근육 기능 약화 예방 또는 치료용 약학 조성물.
    [화학식 1]
    Figure 112019035652139-pat00009

  17. 삭제
  18. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하며, 근육량을 증가시키거나 근 감소를 억제시키는 것을 특징으로 하는, 근육 기능 약화 예방 또는 개선용 식품 조성물.
    [화학식 1]
    Figure 112019035652139-pat00032
KR1020180020069A 2018-02-20 2018-02-20 적색 파프리카 추출물 또는 캡산틴을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물 KR102034314B1 (ko)

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