KR102034289B1

KR102034289B1 - 알레르기 질환 개선에 관여하는 저선량방사선 특이적 바이오마커 및 이를 이용한 스크리닝 방법

Info

Publication number: KR102034289B1
Application number: KR1020180106263A
Authority: KR
Inventors: 김지영; 이영애; 이영로; 한소현; 주해미; 남선영
Original assignee: 한국수력원자력 주식회사
Priority date: 2018-09-06
Filing date: 2018-09-06
Publication date: 2019-10-18

Abstract

본 발명은 알레르기 질환 개선에 관여하는 저선량방사선 특이적 바이오마커에 관한 것으로서, 상기 바이오마커는 Nos1(nitric oxide synthase1,neuronal), Nr4a2(nuclear receptor subfamily 4, group A, member 2), Nr4a3(nuclear receptor subfamily 4, groupA, member 3), Egr1(early growth response 1), Egr2(early growth response2), Gstm3(glutathione S-transferase mu 3), Crem(cAMP responsive element modulator) 및 Chrnb1(cholinergic receptor, nicotinic, beta1(muscle))로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함한다.
상기와 같은 본 발명에 따르면, 알레르기 질환 개선에 관여하는 저선량방사선 특이적 바이오마커를 선별함으로써, 비만세포 시스템을 이용한 알레르기 질환 모델에서 저선량방사선의 알레르기 개선 효과를 설명하는 기초자료로 활용 가능하고, 저선량방사선에 의해 조절되는 반응 지표 유전자들을 치료법이 완벽하게 개발되지 않은 알레르기 질환에서 치료 대상 유전자 설명 마커로 활용이 가능한 효과가 있다.

Description

알레르기 질환 개선에 관여하는 저선량방사선 특이적 바이오마커 및 이를 이용한 스크리닝 방법 {LOW-DOSE RADIATION-SPECIFIC BIOMARKERS INVOLVED IN THE IMPROVEMENT OF ALLERGIC DISEASES}

본 발명은 알레르기 질환 개선에 관여하는 저선량방사선 특이적 바이오마커에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 저선량방사선에 의해 특이적으로 알레르기 개선 방향으로 유전자 발현 변화를 보이는 유전자를 발굴하고 기능을 확인하는 것이다.

알레르기 반응은 특정 환경에 대한 면역체계의 과민성으로 인해 발생하는 질환으로 최근 20~30년간 환자수가 꾸준히 증가하고 있다. 현대사회에서 알레르기 질환의 발병률은 지속적으로 증가하고 있으나, 아직까지 완전한 치료법이 개발되지 않은 상태이다. 이러한 알레르기 질환 반응을 유발하는 가장 주효세포는 비만세포로, 알레르기 질환연구 세포모델로 사용되고 있다. 비만세포는 선·후천적 면역 반응뿐만 아니라 IgE 매개 알레르기 반응에서 중요한 역할을 하는 주효 면역조절세포로 알려져 있으며, 골수에서 유래하여 조직으로 이동, 성숙세포로 분화하여 호흡기와 소화기 계통, 피부, 혈관, 림프관 및 신경주위에 있는 결합조직에 주로 분포한다. 비만세포의 세포질에는 많은 과립(granule)들이 존재하며, 이들 과립에는 히스타민(histamine), 프로테아제(Protease), 사이토카인(cytokine)과 같은 화학적 매개물들이 함유되어 있어 항원-항체 반응에 의해 비만세포 활성화 시 분비되어 알레르기 반응을 유발한다.

이전 연구에서 비만세포의 세포막에 존재하는 FcεRI 수용체에 Dinitrophenyl(DNP)-IgE 항체를 붙이고 DNP-human serum albumin(HSA)항원을 교차결합하여 비만세포를 활성화시키면 과립 내 다양한 화학적 매개물들 (히스타민, β-hexosaminidase, 사이토카인 등)이 분비되어 알레르기 반응을 유도하고 이때 저선량방사선을 조사하면 알레르기 질환이나 β-hexosaminidase 등 매개물질 분비가 억제됨으로서 알레르기 질환화 염증 반응이 개선됨을 확인하였다. 하지만 실제 저선량방사선 조사에 의해 알레르기 증상이 완화되는 과정에서 특이적으로 관여하는 유전자군의 발굴은 전무한 상태로 지표 개발이 필요한 상황이다.

Platts-Mills TA et al., Is the hygiene hypothesis still a viable explanation for the increased prevalence of asthma? Allergy. (2005) 60 Suppl 79:25-31 McConnell et al., The Nature of Disease: Pathology for the Health Professions (2007) p159 L. Borish, B.Z. Joseph. Inflammation and the allergic response. Med Clin North Am, 76 (1992) pp.765-787 Joo HM et al., The inhibitory effects of low-dose ionizing radiation in IgE-mediated allergic response (2015) 10(8) Joo HM et al., The effects of low-dose ionizing radiation in the activated rat basophilic leukemia (RBL-2H3) mast cells (2012) 287:27789-27795 Chau, J. Y et al. Malaria-associated L-arginine deficiency induces mast cell-associated disruption to intestinal barrier defenses against nontyphoidal Salmonella bacteremia. (2013) Infect Immun. 81(10): 3515-3526 Wu Z et al., Mast cell FceRI-induced early growth response2 regulates CC Chemokine ligand 1-dependent CD4+ T cell migration. (2013) J Immunol. 190(9):4500-7 Verjans et al., The cAMP response element modulator (CREM) regulates TH2 mediated inflammation (2015) Oncotarget. 6(36):38538-38551 Khan MA et al., Expressional regulation of genes linked to immunity & programmed development in human early placental villi (2014) Indian J Med Res. 139(1):125-40 Meding S et al., Tissue-based proteomics reveals FXYD3, S100A11 and GSTM3 asnovel markers for regional lymph node metastasis in colon cancer. (2012) J Pathol. 228(4):459-70

본 발명의 목적은, 알레르기 반응 세포모델에서 저선량방사선 조사에 의해 억제되는 알레르기 반응과 관련된 유전자군의 변화를 확인하고 기능별로 분류함으로써, 저선량방사선을 이용한 알레르기 질환 치료 타깃 유전자 목록을 제공함에 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 저선량방사선 조사 단계를 포함하고 알레르기 질환 개선에 관여하는 저선량방사선 특이적 바이오마커 및 이를 이용한 스크리닝 방법을 제공한다.

상기와 같은 본 발명에 따르면, 알레르기 질환 개선에 관여하는 저선량방사선 특이적 바이오마커를 선별함으로써, 비만세포 시스템을 이용한 알레르기 질환 모델에서 저선량방사선의 알레르기 개선 효과를 설명하는 기초자료로 활용 가능하고, 저선량방사선에 의해 조절되는 반응 지표 유전자들을 치료법이 완벽하게 개발되지 않은 알레르기 질환에서 치료 대상 유전자 설명 마커로 활용이 가능한 효과가 있다.

도 1 은 Microarray를 통한 유전자군의 변화 양상이다.
도 2 는 알레르기 반응 비만세포 모델에서 저선량방사선 특이적으로 반응하는 유전자군을 기능별로 분류한 그래프이다.
도 3 은 알레르기 반응 증상완화 관련 발현 변화를 나타낸 저선량방사선 특이적 반응 유전자 목록이다.
도 4 는 도 3에 도시된 유전자 목록 유전자의 Realtime PCR을 통한 mRNA 발현 변화이다.
도 5 는 도 3에 도시된 유전자 목록 유전자의 Western blotting을 통한 단백질 발현 변화이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 일 형태는 알레르기 질환 개선에 관여하는 저선량방사선 특이적 바이오마커이다.

상기 바이오마커는 Nos1(nitric oxide synthase1,neuronal), Nr4a2(nuclear receptor subfamily 4, group A, member 2), Nr4a3(nuclear receptor subfamily 4, groupA, member 3), Egr1(early growth response 1), Egr2(early growth response2), Gstm3(glutathione S-transferase mu 3), Crem(cAMP responsive element modulator) 및 Chrnb1(cholinergic receptor, nicotinic, beta1(muscle)) 로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.

본 발명의 다른 형태는 알레르기 질환 개선에 관여하는 저선량방사선 특이적 바이오마커를 이용한 스크리닝 방법으로 알레르기가 유발된 비만세포주(mast cell)준비하는 단계, 상기 비만세포주에 저선량방사선을 조사하는 단계, 상기 저선량 방사선을 조사한 비만세포주의 mRNA수준을 확인하는 단계 및 상기 저선량 방사선을 조사한 비만세포주의 mRNA 수준을 대조군인 저선량 방사선 미처리한 상기 비만세포주의 mRNA 수준과 비교하는 단계를 포함한다.

상기 비만세포주는 RBL-2H3 세포 일수 있다.

상기 저선량방사선을 조사하는 단계는 누적선량 0.01Gy가 되도록 조사할 수 있다.

상기 저선량방사선을 조사한 비만세포주의 mRNA수준을 확인하는 방법은 Realtime PCR을 수행할 수 있다.

상기 저선량방사선을 조사한 비만세포주의 mRNA 수준을 대조군인 저선량방사선 미처리 비만세포주의 mRNA 수준과 비교하는 단계에서 비교대상이 되는 바이오마커 유전자는 Nos1(nitric oxide synthase1,neuronal), Nr4a2(nuclear receptor subfamily 4, group A, member 2), Nr4a3(nuclear receptor subfamily 4, groupA, member 3), Egr1(early growth response 1), Egr2(early growth response2), Gstm3(glutathione S-transferase mu 3), Crem(cAMP responsive element modulator) 및 Chrnb1(cholinergic receptor, nicotinic, beta1(muscle)) 로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상 일 수 있다.

상기 비교대상이 되는 바이오마커 유전자는 상기 저선량방사선 미처리 비만세포주보다 상기 저선량 방사선을 조사한 비만세포주에서 감소되어 알레르기 질환이 개선된 것을 확인할 수 있다.

알레르기 질환에 관여하는 바이오마커 유전자를 선정하기 위해서는 비만세포에 항원-항체 반응을 통해 알레르기 반응을 유도한 후, 0.01Gy의 저선량방사선을 조사하여 유전자군의 변화를 Microarray를 통해 살펴보았다. 그 결과 1,283개의 유전자가 알레르기 반응을 유도했을 때 2배 이상 증가했다가, 저선량방사선 조사 시 절반 이하로 감소하는 패턴을 보이는 것을 확인하였다. 1,283개의 유전자 중에서 비만세포의 알레르기 반응에 관여하는 것으로 알려진 유전자 5개 (Nos1, Egr1, Egr2, Nr4a2, Nr4a3)와 아직 기능이 확실히 알려지지 않았지만 직접 작용할 것으로 추정되는 유전자 3개 (CREM, Gstm3, Chrnb1)를 선별하여 mRNA 및 단백질 수준에서 8개의 유전자가 Microarray 결과와 동일하게 변화하는 것을 증명하였고, 저선량방사선 치료의 타깃 유전자로서의 가능성을 확인하였다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1. Microarray를 통한 유전자군의 변화 양상 확인

알레르기 반응에 관여하는 것으로 알려진 비만세포 중 하나인 RBL-2H3 세포에 Ag-Ab 처리를 통해 세포 단위에서 알레르기 반응을 유도한다. 알레르기 반응이 유도된 RBL-2H3 세포에 0.01Gy의 저선량방사선을 조사한다. 이후 아무런 처리를 하지 않은 RBL-2H3 세포를 대조군으로, Ag-Ab 처리하여 알레르기 반응을 유도한 RBL-2H3 세포(Ag-Ab)를 제1실험군으로, Ag-Ab 처리하여 알레르기 반응 유도 후 저선량방사선을 조사한 RBL-2H3 세포(Ag-Ab+0.01Gy)를 제2실험군으로 명명하고 각각의 실험군을 준비하였다. 각각의 실험군에서 RNA를 추출하여 Microarray를 통해 유전자군의 Transcription level에서의 변화를 확인하였다.

이렇게 대조군, 제1실험군 및 제2실험군 각각의 샘플에서 RNA를 추출하여 Microarray를 통해 유전자군의 Transcription level에서의 변화를 확인한 결과, 총 30,367개의 유전자에 대한 프로파일 분석을 수행하였으며, 그중 3,543개의 유전자가 알레르기 반응 유도 시 2배 이상 증가하고 3,246개의 유전자가 저선량방사선을 조사했을 때 특이적으로 절반 이하로 감소하는 것을 확인하였다. 이들 중 알레르기 반응 유도 시 증가했다가 동시에 저선량방사선 조사 시 감소하는 1,283개의 유전자를 선별하였다.

상기 실시예 1의 Microarray를 통한 유전자군의 변화 양상을 도1에 도시하였다.

실시예 2. 유전자 선별

알레르기 반응 유도 시 증가했다가 저선량방사선 특이적으로 감소하는 1,283개의 유전자에 대해 GO analysis를 통해 기능별로 분류하였다. 결과적으로 413개의 유전자가 Response to stimulus에 관여하고 있고, 141개의 유전자가 Immune system process에 관여하는 것을 확인하였다.

상기 실시예 2의 알레르기 반응 비만세포 모델에서 저선량방사선 특이적으로 반응하는 유전자군을 기능별로 분류하여 그래프를 도2에 도시하였다.

또한 상기 기능 분류 결과를 토대로 비만세포의 염증반응에서 작용하는 것으로 알려진 유전자 5개(NOS1, Egr1, Egr2, Nr4a2, Nr4a3)와 알레르기 반응에 작용할 가능성이 있는 유전자 3개(CREM, Gstm3, Chrnb1)를 선별하여 도3에 도시하였다.

도 3에 도시된 유전자들 다음과 같은 기능이 알려져 있다.

NO synthase중 하나인 NOS1은 면역 반응에서 NO를 합성해 비만세포의 활성과 탈과립에 관여하는 것으로 알려졌다. Egr family와 NR의 경우 면역반응과 자가면역질환에서 조절자 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 특히 NR4a subfamily의 경우에는 자극이 주어졌을 때 가장 먼저 발현되는 growth factor 중 하나로 알려졌다. 특히 Nr4a2의 경우 Th1/Treg 세포의 비율을 조절해 면역 항상성을 조절하는 역할을 하는 것으로 알려져 있다. Egr도 비만세포에서 작용하는데, Egr1의 경우 비만세포의 활성화에 관여하고 Egr2는 비만세포에서 CD4+ T cell migration에 관여하는 것으로 밝혀져 있다. TH2 세포의 negative regulator로 알려진 CREM과 세포사멸 억제제로 알려진 Chrnb1 역시 저선량방사선을 조사했을 때 cell cycle progression regulator로서 어떤 역할을 하는 것으로 추측할 수 있다. GSTM3은 대장암에서 lymph node metastasis에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다.

실시예 3. 바이오마커의 기능 확인

실시예 1과 동일하게 대조군, 제1실험군 및 제2실험군의 실험군을 준비해 Realtime PCR을 수행하였다. Realtime PCR 수행을 통해 실제 transcription level을 확인하였다.

상기 실시예 2를 수행한 결과를 도4에 도시하였으며, 그 결과 다음과 같았다. 대조군에 비해 제1실험군에서는 도3에 도시된 유전자들이 2배 이상 증가하는 것을 확인할 수 있었고, 제2실험군에서는 제1실험군에 비해 도3에 도시된 유전자들이 절반 이하로 감소하는 것을 확인할 수 있었다.

실시예 4. 바이오마커의 기능 재확인

실시예 1과 동일하게 대조군, 제1실험군 및 제2실험군의 실험군을 준비하고, 각각의 실험군 세포에서 얻은 단백질을 바탕으로 Western blotting을 수행하였다.

실시예4를 수행한 결과는 도5에 도시하였으며, 그 결과는 다음과 같았다. 알레르기 반응을 유도한 제1실험군에서는 도3에 도시된 8개의 단백질 발현량이 증가했고 저선량방사선을 처리한 제2실험군에서는 다시 감소하는 것을 확인하였다. 그 결과 8개 유전자의 단백질 또한 RNA와 동일한 변화를 보이는 것을 확인 하였다.

이상, 본 발명내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 정의된다고 할 것이다.

<110> KOREA HYDRO & NUCLEAR POWER CO., LTD <120> LOW-DOSE RADIATION-SPECIFIC BIOMARKERS INVOLVED IN THE IMPROVEMENT OF ALLERGIC DISEASES <130> P18-E308 <160> 8 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 4592 <212> RNA <213> Homo sapiens <220> <221> mRNA <222> (1)..(4592) <223> Gene name : NOS1 <400> 1 agacagaggc gacagaaact ctgcagccag ctcttgcccc cgaggagctc aggttcctgc 60 aggagtcatt ttagcttagt cttctgaagg acacagatac catggaagag aacacgtttg 120 gggttcagca gatccaaccc aatgtaattt ctgttcgtct cttcaaacgc aaagtgggag 180 gtctgggctt cctggtgaag gaacgggtca gcaagcctcc cgtgatcatc tcagacctga 240 ttcgaggagg tgctgcggag cagagcggcc ttatccaagc tggagacatc attctcgcag 300 tcaacgatcg gcccttggta gacctcagct atgacagtgc cctggaggtt ctcaggggca 360 ttgcctctga gacccacgtg gtcctcattc tgaggggccc tgagggcttc actacacatc 420 tggagaccac cttcacaggg gatggaaccc ccaagaccat ccgggtgacc cagcccctcg 480 gtcctcccac caaagccgtc gatctgtctc accagccttc agccagcaaa gaccagtcat 540 tagcagtaga cagagtcaca ggtctgggta atggccctca gcatgcccaa ggccatgggc 600 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(1)..(4275) <223> Gene name : Nr4a3 <400> 3 cacaggttta caaatcaacc tatgtatatc ttgggggatc aatggcctcc tctccaaatt 60 aattaacaag ttatttcctt cctttcccct tggccttccc tatggctaag gagacaactc 120 caattgtttt tgggagagtg tcgtcgttgt tgttgctgtt gttgttgttg tttaggagtt 180 aaactaattt aaaaatgggc ttatgagaga aagactctat atcaaagttt aatgaacaga 240 gcaagggaga gaagatgggt gtagccaccc cagggagtcc attttattgc cggtggggcc 300 cctttgtcag tcagggtctc agctgtcttc tcagggagga agaaaggagg ctaggggcat 360 tacgccttcg ccagcaggtg ggagaggatg ccactctgtt tcctgattct ggagagcagt 420 ggatccactg tggtgaccga tggagtgtca actggcttct gagccccttt ctctgtccct 480 gtagatatgc cctgcgtgca agcccaatat agcccttcgc ctcaggggtc cacttatccc 540 acgcagactt atggctcgga atacaccaca gaaatcatga accccgacta tgccaagctg 600 accatggacc tcggtagcac ggggatcatg gccacggcca cgacgtccct gcccagcttc 660 agtaccttca tggagggcta ccccagcagc tgcgaactca agccctcctg cctgtaccaa 720 atgccgcctt ctgggcctcg gcctttgatc aagatggaag agggtcgcga gcatggctac 780 caccaccacc accaccatca ccatcatcat caccaccacc 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tgccaatgac cctccattgt gaagttttgc aaccttagga atgttaacat ttaaaaaaca 2880 acccaagatg tcattttcga tatcacaagt tggatcagtt ttgttttgct cttgggaatg 2940 tagctatgta catttatcat gtaggtccag gctggtctta aactcacaat tctctcgcct 3000 cagccttctg agggcttgga ttacaggtgg ggccagaata tccagtttga tccagtattt 3060 ttttttataa aatattactt tctaattgcc tgtgtgtatg tctatgtgta tatgaatgta 3120 ggttctcaag gaggccagaa gcagctggtt cccctagagc tcgttataga tagttgtgag 3180 cctcccaacc taggtgctgg gaactgaact caggtatttt gcaagaacag cacatgttct 3240 aaatgactga gccacctctc cagccccatg ataaaatatc cttatgccag aacattcaaa 3300 taaattcatt ataattagga tagctttgtt actggtagta cccatagttt gtttttataa 3360 ggaaaagatt caaggtataa gcttgaagcc ctaaccctat gctgctatgt cacctttctc 3420 tcaccagcag gtactgactg actggactgc gggctagagt tgctgtgttg cctgtggctg 3480 acctctgatt tgttaagaat ctgcccgcct tccttcacta tcaacagggt tgatagtgga 3540 tctggtagtg agtaggaggt ggtctgacat ccagttgcca tttccagtgt gccttttcct 3600 tatctataac ttccaaaatg taggtgtgct ggttttgttt ctgttgccat gataaaatac 3660 cctgacagaa acaacttagg gtagaaaggg cttactttag ttcacaattc taggttggat 3720 aatccatcaa agcatggaaa tcaaggcaat aggaatttga agtgactggt cacatccatg 3780 aaaacacaca cacacacaca cacacacaca cacacacaca caggggtggg ggttggggga 3840 gatacacatc cagtgttgag ctcattttcc ctcttacaca acccaagact caaacccagt 3900 gaatggtgtg gcaaggccac cttccacaga catgcccaca ggccagccag atggccacct 3960 tccacagaca tgcccacagg ccagccagat ggccaccttc cacaaatatg cccacaggcc 4020 agccagatgg ccaccttcca cagacatgcc cacaggccag ccagatggcc accttccaca 4080 gacatgccca caggccagcc agatatggac agtatttcac cgggactctc tccacaggtg 4140 gatctagttt gtgtcaagtt gacaattaaa actcaccagc atagtagcta gagagatggc 4200 tcagcagtta agagcagttg atgctctttc agaggactgg tgcttgtttt ccagcacgca 4260 aatggtgctg aaatctgttt ctaactccag agggtctggc atggttttct gatccctatg 4320 gacaccgggc gtgcacgtgg cgcacataca tgcatgcagc caaaacattc acacacaaaa 4380 taaaaataaa taaaaaacac cctaaccata a 4411 <210> 8 <211> 2283 <212> RNA <213> Homo sapiens <220> <221> mRNA <222> (1)..(2283) <223> Gene name: Chrnb1 <400> 8 cgtcacttcc cctggcctgg cggcctcggc cgcacttcgg acaaacccac tgagcgaaat 60 cggcagggcc atggccttag gggcgctgct tctgattctg gggatactcg ggacgcccct 120 cgccccagga gcccgcgggt cggaagccga aggccaactg cttaagaaac ttttctcgga 180 ttatgatagc tcagtaaggc cggcgcagga ggtgggagac cgcgtcgggg tcagcatcgg 240 cctcaccctg gcgcaactca tcagcctgaa cgagaaggat gaagaaatga gcacaaaggt 300 gtacttagac ctggagtgga ccgactacag gttaagctgg gaccccgcag aacacgatgg 360 catcgagtct ctccgtgtca ctgctgaatc tgtttggctc ccggacgtgg tgctgctgaa 420 caacaatgat ggaaactttg acgttgccct ggacattaat gtcgtggtgt cctttgaggg 480 ctctgtgcgc tggcaacccc ctggcctgta tcgcagcagc tgcagcatcc aggtcaccta 540 cttccccttt gactggcaga attgcaccat ggtgtttagt tcctacagct atgacagctc 600 tgaggtcagc ctgaagacag gcccagatcc tgatggacag gagaggcagg aaatctacat 660 ccatgaaggg accttcatcg agaatggtca atgggagatt atccacaaac cctctaggtt 720 aatccacctt ccaggggatc gaagaggagg gaaggaagga catcgtgagg aagttatctt 780 ctatctcatt attcggagga agcctctctt ctacctggtc aatgtcattg ccccgtgcat 840 cctcatcacc ctcctggcca tctttgtttt ctaccttcca ccagatgcag gagagaagat 900 ggggctctcc atctttgccc tgctgaccct cactgtgttc ttgctgctgc tggccgacaa 960 agtgcctgag acctccctgg cggtccccat catcatcaag tatctcatgt ttaccatgat 1020 ccttgtcacc ttctcagtta tccttagcgt tgtggtcctc aacttgcacc atcgctcacc 1080 ccacacccac caaatgccct tttgggtccg ccagatcttc attcacaagc tccctccata 1140 cctgggtctg aagaggccca aacccgagag agaccaacta cccgaaccac atcactcctt 1200 ctccccaagg agtggctggg gccgaggaac tgatgaatat ttcatacgga agcctccatg 1260 tgattttctt ttccctaaac ttaacaggtt tcagcctgaa tcacctgctc cggacctgag 1320 acgatttatc gatggtccac cccgggctgt aggtctgcct caggagctac gcgaggtcat 1380 ttcttccatc agctacatgg cccgacaact tcaggaacag gaggaccacg atgcactgaa 1440 ggaggactgg cagtttgtcg ccatggttgt ggaccgtctt tttctgtgga cattcatcgt 1500 tttcacaagc gtcgggacgc tagtcatttt cctagatgcc acgtaccatt tgccccctcc 1560 tgaacctttt ccttgaggac cctccggtca tttttgccaa gtgctgcagg tactctcacg 1620 ctgtatagcg cttggctcct gtaagaatct tgttcttgtt tctgggaaga cgttgaagtg 1680 ggacttgggg gggtgagcag ggtgccttgg acttcaacaa atgtccttca acccattagt 1740 tttgttcttc tgcagctttg tttttgttgg tttttttttg ttgttgtttt tttgtcgtcc 1800 cccccccccc ccccccccgg ctggggagcg aacccaggat cttgcgcttc ctaggtagaa 1860 gcgctctacc actgagccaa atccccaacc ccgtttttgt tgtttttgag acagagtctc 1920 actctgtgtc ccaggctagc ctggaactat gaagtccagg ctggcctcaa actcccagca 1980 gtgttacttc cttagcttac caaatgttgg aatggcaggt ctggtaagcc agcgcacttg 2040 gattttgttt cttgaaacta cacagaatgt cacaacttag atatctagtg aaagagaatt 2100 ataagcaact agtagcttga aagcctttgg aggacaggaa atctgttggc tactgtaagg 2160 tccccagcaa tgcgcacagg tcctacccca taagtgctta acatttgttg aagagggaaa 2220 aaaatccgga aggaaataca aaataatact gcctacaatt gcatgtattg aaattaaaat 2280 gta 2283

Claims

알레르기 질환 개선에 관여하는 바이오마커를 검출하기 위한 조성물로서,
상기 바이오마커는 Nos1(nitric oxide synthase1,neuronal), Nr4a2(nuclear receptor subfamily 4, group A, member 2), Nr4a3(nuclear receptor subfamily 4, groupA, member 3), Egr1(early growth response 1), Egr2(early growth response2), Gstm3(glutathione S-transferase mu 3), Crem(cAMP responsive element modulator) 및 Chrnb1(cholinergic receptor, nicotinic, beta1(muscle))로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 알레르기 질환 개선에 관여하는 저선량방사선에 특이적인 바이오마커를 검출하기 위한 조성물.
알레르기가 유발된 비만세포주(mast cell)준비하는 단계;
상기 비만세포주에 저선량방사선을 조사하는 단계;
상기 저선량방사선을 조사한 비만세포주에 상기 제1항의 조성물을 이용하여 mRNA수준을 확인하는 단계; 및
상기 저선량방사선을 조사한 비만세포주의 mRNA 수준을 대조군인 저선량방사선 미처리한 비만세포주의 mRNA 수준과 비교하는 단계를 포함하는 알레르기 질환 개선에 관여하는 저선량방사선에 특이적인 바이오마커를 스크리닝하는 방법.
제2항에 있어서,
상기 비만세포주는 RBL-2H3 세포임을 특징으로 하는 알레르기 질환 개선에 관여하는 저선량방사선 특이적 바이오마커를 스크리닝하는 방법.
제2항에 있어서,
상기 저선량방사선을 조사하는 단계는 누적선량 0.01Gy가 되도록 조사하는 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 개선에 관여하는 저선량방사선 특이적 바이오마커를 스크리닝하는 방법.
제2항에 있어서,
상기 저선량방사선을 조사한 비만세포주의 mRNA 수준을 대조군인 저선량방사선 미처리 비만세포주의 mRNA 수준과 비교하는 단계에서 비교대상이 되는 바이오마커 유전자는 Nos1(nitric oxide synthase1,neuronal), Nr4a2(nuclear receptor subfamily 4, group A, member 2), Nr4a3(nuclear receptor subfamily 4, groupA, member 3), Egr1(early growth response 1), Egr2(early growth response2), Gstm3(glutathione S-transferase mu 3), Crem(cAMP responsive element modulator) 및 Chrnb1(cholinergic receptor, nicotinic, beta1(muscle))로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 알레르기 질환 개선에 관여하는 저선량방사선 특이적 바이오마커를 스크리닝하는 방법.
제5항에 있어서,
상기 비교대상이 되는 바이오마커 유전자는 상기 대조군인 저선량방사선 미처리 비만세포주보다 상기 저선량방사선을 조사한 비만세포주에서 감소되어 알레르기 질환이 개선됨을 확인하는 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 개선에 관여하는 저선량방사선 특이적 바이오마커를 스크리닝하는 방법.