KR102028285B1 - 미생물 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법, 및 상기 미생물 체외고분자물질을 이용한 미세 균열 보수 방법 - Google Patents
미생물 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법, 및 상기 미생물 체외고분자물질을 이용한 미세 균열 보수 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR102028285B1 KR102028285B1 KR1020180055736A KR20180055736A KR102028285B1 KR 102028285 B1 KR102028285 B1 KR 102028285B1 KR 1020180055736 A KR1020180055736 A KR 1020180055736A KR 20180055736 A KR20180055736 A KR 20180055736A KR 102028285 B1 KR102028285 B1 KR 102028285B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- polymer material
- eps
- microorganisms
- culture
- urea
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 56
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 48
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 title claims abstract description 45
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 28
- 239000000126 substance Substances 0.000 title abstract description 7
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 110
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 claims abstract description 61
- 229910021532 Calcite Inorganic materials 0.000 claims abstract description 48
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 30
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims abstract description 21
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 57
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 claims description 32
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 31
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 18
- VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L calcium acetate Chemical compound [Ca+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 17
- 239000001639 calcium acetate Substances 0.000 claims description 17
- 235000011092 calcium acetate Nutrition 0.000 claims description 17
- 229960005147 calcium acetate Drugs 0.000 claims description 17
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 16
- 229910001748 carbonate mineral Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 12
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 12
- 239000011435 rock Substances 0.000 claims description 11
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 claims description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 230000008439 repair process Effects 0.000 claims description 8
- 230000033558 biomineral tissue development Effects 0.000 claims description 7
- MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L calcium lactate Chemical compound [Ca+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 239000004575 stone Substances 0.000 claims description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 5
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- CBOCVOKPQGJKKJ-UHFFFAOYSA-L Calcium formate Chemical compound [Ca+2].[O-]C=O.[O-]C=O CBOCVOKPQGJKKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 241000588770 Proteus mirabilis Species 0.000 claims description 4
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229940044172 calcium formate Drugs 0.000 claims description 4
- 239000004281 calcium formate Substances 0.000 claims description 4
- 235000019255 calcium formate Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000001527 calcium lactate Substances 0.000 claims description 4
- 229960002401 calcium lactate Drugs 0.000 claims description 4
- 235000011086 calcium lactate Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 4
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000006994 mh medium Substances 0.000 claims description 3
- 229960002713 calcium chloride Drugs 0.000 claims description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 2
- 241000004267 Marinobacterium coralli Species 0.000 claims 1
- 229960004424 carbon dioxide Drugs 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 8
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 abstract description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 103
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 45
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 12
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 9
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 9
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 229940088417 precipitated calcium carbonate Drugs 0.000 description 8
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 7
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 229960005069 calcium Drugs 0.000 description 5
- -1 carbonate anion Chemical class 0.000 description 5
- 210000003278 egg shell Anatomy 0.000 description 5
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 4
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000212301 Marinobacterium Species 0.000 description 3
- 241000220259 Raphanus Species 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 108010009004 proteose-peptone Proteins 0.000 description 3
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 241000206572 Rhodophyta Species 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 229940044170 formate Drugs 0.000 description 2
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000003014 reinforcing effect Effects 0.000 description 2
- 239000012779 reinforcing material Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 1
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 238000000441 X-ray spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 1
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 239000005431 greenhouse gas Substances 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000000243 photosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011197 physicochemical method Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01F—COMPOUNDS OF THE METALS BERYLLIUM, MAGNESIUM, ALUMINIUM, CALCIUM, STRONTIUM, BARIUM, RADIUM, THORIUM, OR OF THE RARE-EARTH METALS
- C01F11/00—Compounds of calcium, strontium, or barium
- C01F11/18—Carbonates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C04—CEMENTS; CONCRETE; ARTIFICIAL STONE; CERAMICS; REFRACTORIES
- C04B—LIME, MAGNESIA; SLAG; CEMENTS; COMPOSITIONS THEREOF, e.g. MORTARS, CONCRETE OR LIKE BUILDING MATERIALS; ARTIFICIAL STONE; CERAMICS; REFRACTORIES; TREATMENT OF NATURAL STONE
- C04B14/00—Use of inorganic materials as fillers, e.g. pigments, for mortars, concrete or artificial stone; Treatment of inorganic materials specially adapted to enhance their filling properties in mortars, concrete or artificial stone
- C04B14/02—Granular materials, e.g. microballoons
- C04B14/26—Carbonates
- C04B14/28—Carbonates of calcium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/04—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C04—CEMENTS; CONCRETE; ARTIFICIAL STONE; CERAMICS; REFRACTORIES
- C04B—LIME, MAGNESIA; SLAG; CEMENTS; COMPOSITIONS THEREOF, e.g. MORTARS, CONCRETE OR LIKE BUILDING MATERIALS; ARTIFICIAL STONE; CERAMICS; REFRACTORIES; TREATMENT OF NATURAL STONE
- C04B2111/00—Mortars, concrete or artificial stone or mixtures to prepare them, characterised by specific function, property or use
- C04B2111/72—Repairing or restoring existing buildings or building materials
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Ceramic Engineering (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Geology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Civil Engineering (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Structural Engineering (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
본 발명은 미생물 체외고분자물질(extracellular polymeric substance, 이하 EPS)을 이용한 방해석의 제조 방법, 및 상기 미생물 체외고분자물질을 이용한 미세 균열 보수 방법에 관한 것으로, 본 발명에 따르면, 미생물의 체외고분자물질(EPS)을 이용하여 간단한 방법으로 결정질의 방해석을 빠른 시간내에 침전시킬 수 있고, 친환경적 방법으로 용존 이산화탄소를 고정화할 수 있다. 또한, 미생물 배양액에서 미생물은 사용하지 않고, 체외고분자물질(EPS)만을 분리하여 사용함으로써 미생물 생장 조건 또는 반응 시간을 고려할 필요가 없이 현장 적용에 유리하다.
Description
본 발명은 미생물 체외고분자물질(extracellular polymeric substance, 이하 EPS)을 이용한 이산화탄소 고정 방법, 및 상기 미생물 체외고분자물질을 이용한 미세 균열 보수 방법에 관한 것이다.
미생물을 이용한 탄산염 광물의 형성 기술은 중금속 및 방사성 핵종 원소 등의 오염 물질 고정, 이산화탄소의 격리, 자기치유 콘크리트 개발 등을 목적으로 연구되고 있다. 미생물의 생광물화작용(biomineralization)을 통해 형성되는 탄산칼슘(CaCO3)은 방해석(calcite), 아라고나이트(aragonite), 바테라이트(vaterite)의 형태로 나뉜다. 형태적으로 방해석은 능면체, 아라고나이트는 바늘 형태, 바테라이트는 작은 구의 모양을 가지며, 그 중 방해석이 용해도가 낮고 광물적으로 가장 안정하다.
대표적인 온실가스인 이산화탄소는 탄산염 광물로 고정화할 수 있기 때문에 현재는 이산화탄소 배출을 저감하기 위한 친환경적 공정으로 미생물을 활용한 방법이 제안되고 있으나, 탄산염 광물 합성능이 보고된 한정된 미생물의 종, 생장 환경(호기성/혐기성 환경, pH, 염도, 온도 등)의 조절 어려움, 일정 반응 시간의 소요 등의 한계점으로 실용화 단계에 미치지 못하고 있다.
최근에는 콘크리트 균열 발생시 물리화학적인 방법을 사용하지 않고, 미생물의 생광물화작용을 이용한 자기치유(self-healing) 콘크리트 개발 연구가 주목받고 있다. 이 기술을 개발하기 위해 알칼리 환경(pH 11~13)에서 내성을 가진 극한 미생물의 발굴과 미생물의 생존율을 높일 수 있는 생장 환경의 유지가 조절되어야 하지만, 아직 국내에서는 실제 현장 적용에 성공적인 사례는 없었다.
또한, 미생물의 생광물화작용으로서, 엽록소를 가진 광합성 세균인 시아노박테리아의 세포벽 EPS에 Ca2 + 이온의 흡착에 의한 광물화가 개시된 바 있으나(Geochimica et Cosmochimica Acta, Vol.73, Issue 14, 15 July 2009, pages 4180-4198), 상기 미생물이 생성하는 탄산칼슘은 비결정질 아라고나이트(aragonite)로서, 비결정질이므로 쉽게 용해될 수 있어 미세 균열 밀봉에는 적합하지 않았다.
또한, 콘크리트 미세균열을 위한 다양한 화학적 보강재가 개발되고 있으나, 미세한 균열을 보강하기 위한 방법으로는 주사기로 주입되는 에폭시 주입 방법이 대표적이다. 그러나, 에폭시는 점도가 높아 미세한 균열 내부로 침투되기 어려워 표면만 밀봉되는 한계가 있다.
따라서, 극한 환경의 현장 적용을 위해, 새로운 방법의 콘크리트 미세균열의 밀봉 방법이 요구되고 있다.
1. Journal of the Korea concrete Institute, Vol.22, No.4, pp.547~557, August, 2010
2. Geochimica et Cosmochimica Acta, Vol.73, Issue 14, 15 July 2009, pages 4180-4198
본 발명의 제1 목적은 상기 문제를 해결하기 위한 것으로, 요소 분해 미생물의 체외고분자물질(EPS)을 이용하여 결정질의 방해석을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 제2 목적은 요소 분해 미생물의 체외고분자물질(EPS)을 이용하여 이산화탄소를 고정화하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 제3 목적은 요소 분해 미생물의 체외고분자물질(EPS)을 이용하여 미세균열의 보수 방법을 제공하는 것이다.
상기 제1 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은
1) 요소 분해 미생물을 배양하는 단계;
2) 상기 요소 분해 미생물 배양액으로부터 미생물을 제거하여 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액을 제조하는 단계; 및
3) 상기 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액에 칼슘 이온을 반응시켜 결정질 방해석을 형성하는 단계를 포함하는, 미생물의 체외고분자물질 배양액을 이용한 결정질 방해석의 제조 방법을 제공한다.
또한 바람직하게는, 상기 단계 1)의 요소 분해 미생물을 배양하는 단계는
자연 환경 내 생물기원의 탄산염광물이 형성된 암석 또는 침전물을 채취하는 단계; 및
요소가 포함된 염기성 미생물 성장 배지(pH 8~9)에서 호기적으로 3일 이상 배양하는 단계를 포함할 수 있다.
또한 바람직하게는, 상기 요소 분해 미생물은 프로테우스 미라빌리스(Proteus mirabilis), 마리노박테리움 코랄리이(Marinobacterium coralli) 및 스포로살시나 파스테우리(Sprosarcina pasteurii)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있다.
또한 바람직하게는, 상기 미생물 성장배지는 요소를 포함한 D-1 배지, MH 배지 또는 살린(saline) 배지일 수 있다.
또한 바람직하게는, 상기 단계 2)의 상기 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액은 상기 단계 1)에서 배양된 요소 분해 미생물 배양액을 원심분리한 후, 상층액을 0.2~0.45 ㎛ 크기의 필터로 필터링하여 수집하여 얻을 수 있다.
또한 바람직하게는, 상기 칼슘 이온은 0.01~0.5 M의 농도로 첨가할 수 있다.
또한 바람직하게는, 상기 칼슘 이온은 칼슘 아세테이트, 칼슘 락테이트, 염화 칼슘 및 칼슘 포름산염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상을 사용할 수 있다.
또한 바람직하게는, 제조된 방해석은 5~20 ㎛ 크기의 능면체 모양일 수 있다.
상기 제2 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은
1) 요소 분해 미생물을 배양하는 단계;
2) 상기 요소 분해 미생물 배양액으로부터 미생물을 제거하여 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액을 제조하는 단계; 및
3) 상기 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액을 오염수에 처리하고 반응시켜, 오염수 내의 용존 이산화탄소를 방해석으로 고정화시키는 단계를 포함하는, 미생물의 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법을 제공한다.
또한 바람직하게는, 상기 단계 3)에서 오염수에 칼슘 이온을 더 첨가할 수 있다.
상기 제3 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은
1) 요소 분해 미생물을 배양하는 단계;
2) 상기 요소 분해 미생물 배양액으로부터 미생물을 제거하여 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액을 제조하는 단계; 및
3) 상기 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액과 칼슘 이온을 콘크리트 또는 암석의 미세균열 내에서 반응시켜 미세균열 내에 방해석이 충진되는 단계를 포함하는, 미생물의 체외고분자물질을 이용한 미세균열의 보수 방법을 제공한다.
또한 바람직하게는, 상기 미세균열은 폭이 100 ㎛ ~ 2 mm인 미세균열일 수 있다.
또한 바람직하게는, 상기 암석은 석조문화재일 수 있다.
본 발명에 따르면, 미생물의 체외고분자물질(EPS)을 이용하여 간단한 방법으로 결정질의 방해석을 빠른 시간내에 침전시킬 수 있고, 친환경적 방법으로 용존 이산화탄소를 고정화할 수 있다.
또한, 미생물 배양액에서 미생물은 사용하지 않고, 체외고분자물질(EPS)만을 분리하여 사용함으로써 미생물 생장 조건 또는 반응 시간을 고려할 필요가 없이 현장 적용에 유리하다.
다만, 본 발명의 기술적 효과들은 이상에서 언급한 것들로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또다른 기술적 효과들은 이하의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 미생물의 체외고분자물질(EPS)과 칼슘 이온이 반응하여 침전된 탄산칼슘을 나타내는 사진이다.
도 2는 본 발명의 일 비교예에 따른 EPS를 포함하지 않은 화학적 반응 조건의 경우, 탄산칼슘 침전 결과를 나타내는 사진이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에서 제조된 탄산칼슘 침전물의 X-선 회절분석(XRD) 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에서 제조된 탄산칼슘 침전물을 주사전자현미경(SEM)으로 형태와 크기를 관찰한 사진이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에서 제조된 탄산칼슘 침전물을 X-선 분광분석기(EDS)를 통해 성분을 확인한 그래프이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에서 미생물의 체외고분자물질(EPS)과 칼슘 아세테이트를 반응할 때, 칼슘 농도에 따라 생성된 탄산칼슘의 생성량을 비교한 실험결과 그래프이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따라 침전된 탄산칼슘으로 달걀껍질의 미세균열 충진 실험을 실시한 사진(a)과 균열 내 침전된 탄산칼슘을 주사전자현미경으로 관찰한 사진(b)이다.
도 2는 본 발명의 일 비교예에 따른 EPS를 포함하지 않은 화학적 반응 조건의 경우, 탄산칼슘 침전 결과를 나타내는 사진이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에서 제조된 탄산칼슘 침전물의 X-선 회절분석(XRD) 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에서 제조된 탄산칼슘 침전물을 주사전자현미경(SEM)으로 형태와 크기를 관찰한 사진이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에서 제조된 탄산칼슘 침전물을 X-선 분광분석기(EDS)를 통해 성분을 확인한 그래프이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에서 미생물의 체외고분자물질(EPS)과 칼슘 아세테이트를 반응할 때, 칼슘 농도에 따라 생성된 탄산칼슘의 생성량을 비교한 실험결과 그래프이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따라 침전된 탄산칼슘으로 달걀껍질의 미세균열 충진 실험을 실시한 사진(a)과 균열 내 침전된 탄산칼슘을 주사전자현미경으로 관찰한 사진(b)이다.
이하, 첨부된 도면을 참고하여 본 발명에 의한 실시예를 상세히 설명한다.
본 발명이 여러 가지 수정 및 변형을 허용하면서도, 그 특정 실시예들이 도면들로 예시되어 나타내어지며, 이하에서 상세히 설명될 것이다. 그러나, 본 발명을 개시한 특별한 형태로 한정하려는 의도는 아니며, 오히려 본 발명은 청구항들에 의해 정의된 본 발명의 사상과 합치되는 모든 수정, 균등 및 대용을 포함한다.
1. 미생물 체외고분자물질(EPS)을 이용한 결정질 방해석의 제조 방법
본 발명에 따른 결정질 방해석의 제조 방법은
1) 요소 분해 미생물을 배양하는 단계;
2) 상기 요소 분해 미생물 배양액으로부터 미생물을 제거하여 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액을 제조하는 단계; 및
3) 상기 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액에 칼슘 이온을 반응시켜 결정질 방해석을 형성하는 단계를 포함한다.
먼저 단계 1)은 요소 분해 미생물을 배양하는 단계이다.
상기 단계 1)의 요소 분해 미생물을 배양하는 단계는
자연 환경 내 생물기원의 탄산염광물이 형성된 암석 또는 침전물을 채취하는 단계; 및 요소가 포함된 염기성 미생물 성장 배지(pH 8~9)에서 호기적으로 3일 이상 배양하는 단계를 포함한다.
구체적으로, 상기 요소 분해 미생물의 배양은 주로 자연 환경 내 생물기원의 탄산염광물이 형성된 암석 또는 침전물을 채취하여 토착 미생물을 배양하는 것이 바람직하다. 바람직하게는, 상기 요소 분해 미생물의 배양은 채취된 암석 또는 퇴적물 시료를 요소가 포함된 염기성 미생물 성장 배지(pH 8~9)에 넣어 호기적 환경에서 배양하는 단계를 포함하는 배양방법에 의해 수행된다.
상기 요소 분해 미생물은 프로테우스 미라빌리스(Proteus mirabilis), 마리노박테리움 코랄리이(Marinobacterium coralli) 및 스포로살시나 파스테우리(Sprosarcina pasteurii)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 미생물을 포함하나, 이에 한정되지 아니하며, 요소 분해 생장 및 호염기성(pH 8 이상) 중온균은 모두 포함될 수 있다.
상기 미생물 성장배지는 요소 분해 미생물을 농화배양하는데 이용되는 배지라면 제한되지 않고 이용될 수 있으며, 요소를 포함한 D-1 배지, MH 배지, 살린(saline) 배지 등이 이용될 수 있다. 상기와 같은 배지는 요소 분해 미생물의 성장에 필요한 효모추출물(yeast extract)과 프로테오스 펩톤(proteose-peptone) 또는 영양 배지(nutrient broth)를 포함하고 있기 때문에, 미생물의 성장에 적합하며, NaCl이 포함되어 있어 바다에서 서식하는 미생물이 성장하기에 적합하다. 또한, 상기 미생물 성장배지에는 요소 분해를 위해 요소를 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명의 구체적인 실시예에서는 해양환경에서 채취한 홍조단괴와 탄산염침전물로부터 미생물을 요소를 포함한 D-1 배지에 넣고 실온(약 25 내지 30℃)에서 150 rpm의 교반 속도로 3일 이상 농화배양하였다.
이때, 상기 D-1 배지(1L)의 조성은 NaCl 35g, 글루코스 1g, 프로테오스 펩톤(proteose peptone) 5g, 효모추출물(yeast extract) 10g, 요소(urea) 20g 이었다.
다음으로, 단계 2)는 상기 요소 분해 미생물 배양액으로부터 미생물을 제거하여 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액을 제조하는 단계이다.
상기 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액은 상기 단계 1)에서 배양된 요소 분해 미생물 배양액을 원심분리 및 필터링을 수행하여 얻을 수 있다. 바람직하게는 상기 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액은 상기 단계 1)에서 배양된 요소 분해 미생물 배양액을 원심분리한 후, 상층액을 0.2~0.45 ㎛ 크기의 필터로 필터링하여 수집하여 얻을 수 있다. 본 발명의 구체적인 실시예에서는 상기 요소 분해 미생물 배양액을 3000 rpm에서 10분간 원심분리한 후, 상층액을 0.45 ㎛ 시린지 필터(syringe filter)로 필터링하여 한 곳에 모았다. 이러한 방법으로 미생물이 제거된 체외고분자물질(EPS) 배양액이 제조될 수 있다.
상기 체외고분자물질(EPS) 배양액에는 미생물에 의한 요소 분해 과정을 통해 하기 반응식 1과 같이 탄산이온이 형성된다.
[반응식 1]
NH2-CO-NH2 + H2O → 2NH4 + + CO3 2-
다음으로, 단계 3)은 상기 체외고분자물질(EPS) 배양액에 칼슘 이온을 반응시켜 결정질 방해석을 형성하는 단계이다.
상기 체외고분자물질(EPS) 배양액에 칼슘 이온을 첨가하면, 하기 반응식 2와 같이 체외고분질물질(EPS) 배양액에 포함된 탄산 이온과 칼슘 이온이 반응하여 탄산칼슘이 침전된다.
[반응식 2]
Ca2 + + CO3 2- → CaCO3
상기 반응식 2에서 나타낸 바와 같이, 탄산이온과 칼슘의 혼합은 탄산칼슘이 석출되는 화학적 반응을 유도하며, 이때, 미생물 체외고분자물질(EPS)의 존재는 탄산염 광물화를 촉진시키는 역할을 한다.
이때, 형성된 탄산칼슘은 탄산칼슘 종류 중에서 가장 안정한 결정질의 방해석(calcite)이었다.
이때, 칼슘 이온으로는 칼슘 아세테이트(Ca-acetate), 칼슘 락테이트(Ca-lactate), 염화 칼슘(Ca-chloride), 칼슘 포름산염(Ca-formate) 등을 사용할 수 있으며, 이중 칼슘 아세테이트를 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 구체적인 실시예에서는 홍조단괴에서 유래한 미생물, 해안에서 채취한 석회질 침전물에서 유래한 미생물, 그리고 미생물자원센터에서 분양받은 분리종 스포로살시나 파스테우리(Sprosarcina pasteurii)를 이용하여 탄산칼슘 형성 실험을 실시한 결과, 미생물이 포함한 배양물에 칼슘 이온을 첨가한 경우에는 천천히 침전물이 생성되었고, 상기 침전물에는 방해석(calcite)과 바테라이트(vaterite)가 함께 형성되었으나, 본 발명에 따라 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액만을 회수하여 칼슘 이온을 주입한 경우에는 즉시 침전을 보였고, 방해석만이 형성되었다(도 3 및 4 참조).
따라서, 본 발명에 따라 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액만을 회수하여 탄산칼슘 반응액으로 이용한다면, 광물학적으로 가장 용해도가 낮고 안정한 방해석을 빠르게 침전시킬 수 있으며, 미생물 세포를 제거한 배양액이므로 미생물의 생장 조건과 시간을 고려하지 않아도 되며, 환경적 조건에 제한이 없으므로, 다양한 사업적 응용과 현장 적용이 가능하다. 또한, 산업적으로 이용하는 탄산칼슘 합성 시 대량생산이 가능하다.
이때, 첨가되는 칼슘 이온의 농도는 0.01~0.5 M인 것이 바람직하며, 0.3 M인 경우 더욱 바람직하다.
침전된 광물은 5~20 ㎛ 일정한 크기의 능면체 모양의 결정질 방해석이었으며, 성분은 Ca, C, O로 구성되었다(도 5 참조).
2. 미생물 체외고분자물질(EPS)을 이용한 이산화탄소 고정 방법
본 발명에 따른 이산화탄소 고정 방법은
1) 요소 분해 미생물을 배양하는 단계;
2) 상기 요소 분해 미생물 배양액으로부터 미생물을 제거하여 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액을 제조하는 단계; 및
3) 상기 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액을 오염수에 처리하고 반응시켜, 오염수 내의 용존 이산화탄소를 방해석으로 고정화시키는 단계를 포함한다.
본 발명에 따른 이산화탄소 고정 방법은 상기 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액에 포함된 탄산이온 및 오염수 내에 포함된 탄산이온이 오염수 내의 칼슘 이온과 반응하여 탄산염 광물의 형태로 고정되는 방법을 이용한 것으로, 이때, 상기 미생물 체외고분자물질(EPS)이 탄산염 광물화를 촉진시키는 역할을 한다.
상기 요소 분해 미생물 배양하는 단계 및 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액을 제조하는 단계는 전술한 바와 같으므로, 자세한 설명은 생략한다.
상기 단계 3)의 오염수는 인위적 산업활동에 의해 과다하게 유발된 이산화탄소 가스가 용해된 물을 의미하는 것으로, 고정 대상이 되는 이산화탄소가 용해되어 있는 해수 또는 담수이다. 상기 고정 대상이 되는 이산화탄소는 용해되어 상기 해수 또는 담수 중에서 탄산 음이온(CO3 2-) 또는 탄산수소 음이온(HCO3 -)의 형태로 존재할 수 있다. 상기 오염수에는 이산화탄소 외에도 금속 양이온이 존재할 수 있다. 상기 금속은 1족 또는 2족의 금속일 수 있으며, 상기 금속은 2족의 금속인 것이 더욱 바람직하며, 상기 금속은 칼슘인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 아니한다. 상기 탄산 음이온 또는 탄산수소 음이온은 상기 오염수 내에 존재하는 칼슘 양이온과 결합하여 탄산염광물의 형태로 고정되는데, 본 발명에서는 상기 음이온과 양이온의 결합이 미생물 체외고분자물질(EPS)에 의해서 촉진된다.
상기 단계 3)의 처리는 상기 오염수에 상기 단계 2)의 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액과 함께 추가적으로 칼슘 양이온을 첨가할 수 있다. 특히, 오염수 내 칼슘 양이온의 농도가 낮은 경우, 오염수 내의 탄산 음이온 또는 탄산수소 음이온이 탄산염광물로 쉽게 고정되지 않기 때문에 이를 보다 원활하게 하기 위하여 상기 칼슘 양이온을 공급해 주는 것이다. 상기 칼슘 양이온의 공급은 칼슘 아세테이트(Ca-acetate), 칼슘 락테이트(Ca-lactate), 염화 칼슘(Ca-chloride) 및 칼슘 포름산염(Ca-formate)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상으로 처리함으로써 수행되는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 아니한다.
본 발명에 따른 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액은 미생물 세포를 제거한 배양액이므로 미생물의 생장 조건과 시간을 고려하지 않아도 되며, 환경적 조건에 제한 없이 빠르게 방해석의 형태로 탄산염광물을 형성하여 이를 통해 이산화탄소가 고정된다.
3. 미생물 체외고분자물질(EPS)을 이용한 미세균열 보수 방법
본 발명에 따른 미세균열 보수 방법은
1) 요소 분해 미생물을 배양하는 단계;
2) 상기 요소 분해 미생물 배양액으로부터 미생물을 제거하여 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액을 제조하는 단계; 및
3) 상기 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액과 칼슘 이온을 콘크리트 또는 암석의 미세균열 내에서 반응시켜 미세균열 내에 방해석이 충진되는 단계를 포함한다.
본 발명에 따른 미세균열 보수 방법은 본 발명에 따른 결정질 방해석의 제조 방법을 이용한 것으로, 구체적으로 상기 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액에 포함된 탄산이온이 칼슘 이온과 반응하여 마이크로미터 크기의 방해석을 석출시키는 특징을 이용한 것이다. 이때, 상기 미생물 체외고분자물질(EPS)이 탄산염 광물화를 촉진시키는 역할을 한다.
상기 요소 분해 미생물 배양하는 단계 및 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액을 제조하는 단계는 전술한 바와 같으므로, 자세한 설명은 생략한다.
콘크리트의 미세균열을 위한 다양한 화학적 보강재가 개발되고 있으나, 미세한 균열을 보강하기 위한 방법으로는 주사기로 주입되는 에폭시 주입 방법이 대표적이다. 그러나 에폭시는 점도가 높아 미세한 균열 내부로 침투되기 어려워 표면만 밀봉되는 한계가 있다. 최근에는 미생물을 이용하여 자기치유콘크리트를 개발하는 다양한 연구가 진행중이나, 대부분은 미생물의 생장을 유도하는 연구로써, 콘크리트 내부 환경(pH 11~13)에서 생존 가능한 미생물의 발굴과 생장 환경 유지 여부에 제한이 있다.
그러나, 본 발명은 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액을 미세한 균열 내부로 침투시켜 미립자의 탄산칼슘이 침전되도록 유도하므로, 균열의 표면과 내부의 충진이 가능하며, 미생물 배양산물인 체외고분자물질(EPS) 배양액만을 이용하므로 미생물의 생장 조건을 고려할 필요가 없다는 점에서 효용성을 가진다.
본 발명의 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액이 미세균열을 충진시킬 수 있는지 알아보기 위하여 달걀껍질에 인공적으로 미세균열을 만들어 상기 균열 위로 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액과 칼슘 아세테이트를 한 방울씩 연속적으로 떨어드린 결과, 미세균열 위로 흰색의 탄산칼슘 입자가 석출되어 침전되었으며, 약 18시간 후, 주사전자현미경(SEM)으로 관찰한 경과, 균열 내에 5~20 ㎛ 크기의 능면체 형태의 방해석이 침전되어 균열을 밀봉시킴을 확인하였다(도 7 참조).
따라서, 본 발명에 따른 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액은 미세균열 사이에서 칼슘 이온과 반응하여 방해석을 형성하여 균열을 충진하여 밀봉할 수 있다.
상기 미세균열은 폭이 100 ㎛ ~ 2 mm인 미세균열인 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명에 있어서, 상기 암석은 석조문화재를 포함한다. 따라서, 본 발명에 따른 미세균열 보수 방법은 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액을 이용함으로써, 빠르고 간결한 친환경적 및 비파괴적 방법으로 석조문화재 보존 처리에도 이용 가능하다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실험예(example)를 제시한다. 다만, 하기의 실험예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것일 뿐, 본 발명이 하기의 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
<
제조예
1 - 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액을 이용한 방해석 제조>
제주도 우도 서쪽 서광리 해빈 근처에서 해수 안에 존재하는 크기 5 ㎝ 내지 7 ㎝의 홍조단괴를 채취하여 Agate와 Mortar를 이용하여 분쇄하여 미생물 성장배지에 넣고 실온에서 150 rpm의 교반기에서 3일 배양하였다.
상기 미생물의 성장배지(1L)의 조성은 NaCl 35g, 글루코스 1g, 프로테오스 펩톤(proteose peptone) 5g, 효모추출물(yeast extract) 10g, 요소(urea) 20g 이었다.
3일 후, 상기 요소 분해 미생물 배양액을 3000 rpm에서 10분간 원심분리한 후, 상층액을 0.45 ㎛ 시린지 필터(syringe filter)로 필터링하여 한 곳에 모아 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액을 수집하였다.
수집된 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액을 튜브에 넣고 30 mM의 저농도 칼슘 아세테이트를 첨가하였다. 그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 즉시 탄산칼슘이 침전되었다.
상기 탄산칼슘을 분리하여 건조시킨 후, 광물 동정을 위해 X-선 회절 분석(XRD)을 실시한 결과, 침전된 탄산칼슘은 방해석인 것으로 확인되었다.
<
비교예
1>
EPS가 포함되지 않는 조건으로서, 미생물을 주입하지 않고, 요소가 포함된 D-1 배지에서 0.1 M의 고농도 칼슘 아세테이트를 첨가하였다.
그 결과, 탄산칼슘은 침전되지 않았다.
<
비교예
2>
EPS가 포함되지 않는 화학적 반응 조건으로서 0.05 M의 NaHCO3 수용액에 0.1 M의 고농도 칼슘 아세테이트를 첨가하였다.
그 결과, 탄산칼슘은 침전되지 않았다.
<
비교예
3>
EPS가 포함되지 않는 화학적 반응 조건으로서 0.1 M의 NaHCO3 수용액에 0.1 M의 고농도 칼슘 아세테이트를 첨가하였다.
그 결과, 소량의 탄산칼슘이 침전되었다.
<
실험예
1 - EPS의 존재가 탄산칼슘 침전에 미치는 영향>
미생물 체외고분자물질(EPS)은 미생물의 생장 중에 생성된다. 상기 미생물 체외고분자물질(EPS)의 존재가 탄산칼슘 침전에 미치는 영향을 알아보기 위하여 다음과 같은 실험을 수행하였다.
제조예 및 비교예 1~3의 시료에 대하여 칼슘 아세테이트를 반응시켜 탄산칼슘 침전여부를 관찰하였다. 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
| 제조예 1 | 비교예 1 | 비교예 2 | 비교예 3 | |
| 생장배지 (반응용액) |
D-1(요소 포함) 배지 |
D-1(요소 포함) 배지 |
0.05 M의 NaHCO3 수용액 |
0.1 M의 NaHCO3 수용액 |
| 미생물존재 유무 |
무 | 무 | 무 | 무 |
| EPS존재 유무 |
유 | 무 | 무 | 무 |
| 형성광물 | 방해석 | 무 | 무 | 소량의 방해석 |
표 1에 나타낸 바와 같이, 미생물이 존재하지 않은 요소 포함 배지(비교예 1)에는 0.1 M의 고농도 칼슘 이온을 첨가하더라도 탄산칼슘이 형성되지 않았다.
또한, EPS를 포함하지 않는 화학적 반응 조건으로 탄산칼슘을 합성한 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 0.05 M의 NaHCO3 수용액(비교예 2)에서는 0.1 M의 고농도 칼슘 이온을 주입하더라도 탄산칼슘이 침전되지 않았고, 0.1 M의 고농도 NaHCO3 수용액(비교예 3)에서 0.1 M의 고농도 칼슘 이온 주입시 소량의 방해석이 침전됨을 확인하였다.
반면, 이러한 화학적 조건에 비해 탄산염 농도가 낮을 것으로 예상되는 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액(제조예 1)에는 0.03 M의 저농도 칼슘 이온 첨가시에도 즉시 방해석이 형성되는 것으로 나타났다.
이로부터, 탄산칼슘의 광물결정화에 있어서, 미생물 배양액 내의 탄산염 이온의 농도뿐만 아니라, EPS의 존재가 중요하게 작용함을 알 수 있으며, 상기 EPS는 탄산칼슘의 광물결정화를 촉진시키는 역할을 하는 것을 알 수 있다.
<
실험예
2 - 미생물의 존재가 탄산칼슘 침전에 미치는 영향>
본 발명에 따른 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액을 이용한 방해석의 제조에 있어서, 미생물의 존재가 탄산칼슘 침전에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 다음과 같은 실험을 수행하였다.
홍조단괴에서 유래한 미생물(WD-1), 해안에서 채취한 석회질 침전물에서 유래한 미생물(GP-1), 그리고 미생물자원센터에서 분양받은 분리 종 스포로살시나 파스테우리(Sprosarcina pasteurii KCTC 3558)를 이용하여 탄산칼슘을 형성시켰다.
구체적으로, (a) 상기 미생물을 배양하기 시작했을 때 칼슘 이온을 주입한 경우, (b) 포화배양된 미생물 배양액에 칼슘 이온을 주입한 경우, (c) 포화배양된 미생물 배양액에서 미생물을 제거한 체외고분자물질(EPS) 배양액에 칼슘 이온을 주입한 경우를 비교 관찰하였다.
(a), (b), (c)의 경우, 결과적으로 탄산칼슘이 침전되었으나, 침전이 일어난 시간은 (c)의 경우가 가장 빨랐다.
침전된 탄산칼슘을 분리하여 건조시킨 후, 광물 동정을 위해 X-선 회절 분석(XRD)을 실시하여, 도 3에 나타내었고, 주사전자현미경(SEM)으로 관찰하여 도 4에 나타내었다. 또한 X-선 분광분석기(EDX)를 이용하여 탄산칼슘의 성분을 확인하여 도 5에 나타내었다.
도 3 및 도 4에 나타낸 바와 같이, (a) 및 (b)의 미생물이 존재하는 경우에는 침전된 탄산칼슘에서 방해석과 바테라이트가 함께 형성되었으나, (c)의 체외고분자물질(EPS) 배양액만을 사용한 경우에는 침전된 탄산칼슘이 방해석만으로 이루어짐을 알 수 있었다. 또한, 상기 침전된 탄산칼슘의 형태적 특징에 있어서, (c)의 체외고분자물질(EPS) 배양액만을 사용한 경우에서 크기와 모양이 일정한 능면체의 광물이 침전됨을 확인하였다.
침전된 탄산칼슘의 성분은 도 5에 나타낸 바와 같이, Ca, C 및 O로 구성되어 있음을 확인하였다.
따라서, 본 발명에 따른 방해석 제조방법은 미생물을 제외한 체외고분자물질(EPS) 배양액만을 사용하여, 빠르게 크기와 모양이 일정한 능면체의 방해석의 형태로 탄산염광물을 형성할 수 있다.
<
실험예
3 - 칼슘 이온의 농도에 따른 탄산칼슘 침전량 측정>
본 발명에 따른 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액을 이용한 방해석의 제조에 있어서, 칼슘 이온의 농도가 탄산칼슘 침전량에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 다음과 같은 실험을 수행하였다.
제조예 1에서 칼슘 아세테이트 농도를 0.01~0.5 M의 다양한 농도로 변화시켜 첨가하면서 침전된 탄산칼슘 양을 측정하여, 표 2 및 도 6에 나타내었다.
| 칼슘 아세테이트의 농도(M) | 침전된 탄산칼슘 양(g/L) |
| 0 | 0 |
| 0.01 | 0.93 |
| 0.03 | 2.97 |
| 0.05 | 5.23 |
| 0.1 | 11.43 |
| 0.2 | 17.62 |
| 0.3 | 22.82 |
| 0.4 | 13.69 |
| 0.5 | 10.27 |
표 2 및 도 6에 나타낸 바와 같이, 상기 침전된 탄산칼슘 양은 칼슘 아세테이트의 농도에 영향을 받으며, 상기 칼슘 아세테이트 농도가 0.3 M일 때, 22.82 g/L로 가장 많은 탄산칼슘이 침전되는 것을 확인하였다.
<
실험예
4 - 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액을 이용한 미세균열 보수>
본 발명에 따른 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액을 이용한 방해석 제조방법을 미세균열 보수에 응용할 수 있을지 알아보기 위해 다음과 같은 실험을 수행하였다.
폭 100 ㎛ 내외의 인공 미세 균열을 조성하기 위해 달걀껍질을 이용하였다. 상기 달걀껍질을 인공적으로 미세 균열을 만들고 탄소 테이프(carbon tape)가 부착된 유리판 위에 고정하였다. 현미경으로 미세균열의 위치와 균열 상태를 관찰한 후, 균열 위로 20 mL의 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액과 30 mM의 칼슘 아세테이트 용액을 한 방울씩 중력의 힘으로 떨어지도록 주사기로 고정하였다.
그 결과 도 7(a)에 나타낸 바와 같이, 미세균열 위로 흰색의 탄산칼슘 입자가 석출되어 침전되는 것이 관찰되었으며, 약 18시간 후, 균열 내에 상당량의 탄산칼슘이 침전된 것을 확인하였다.
주사전자현미경(SEM)으로 미세균열을 관찰한 결과, 도 7(b)에 나타낸 바와 같이, 달걀껍질의 미세균열 내부와 표면에 5~20 ㎛ 크기의 능면체의 탄산칼슘이 침전되어 미세균열이 충진되어 밀봉됨으로써 보수된 것을 확인하였다.
이로부터, 본 발명에 따른 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액을 이용한 방해석 제조방법을 이용한다면, 콘크리트 미세균열 사이 또는 석조문화제의 미세 균열 사이에 탄산염광물을 침전시켜 미세균열을 보수할 수 있으며, 이러한 기술은 빠르고 간결한 친환경적 및 비파괴적 공법으로 석조문화재 보존 처리에도 이용할 수 있다.
한편, 본 명세서와 도면에 개시된 본 발명의 실시 예들은 이해를 돕기 위해 특정 예를 제시한 것에 지나지 않으며, 본 발명의 범위를 한정하고자 하는 것은 아니다. 여기에 개시된 실시 예들 이외에도 본 발명의 기술적 사상에 바탕을 둔 다른 변형 예들이 실시 가능하다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 자명한 것이다.
Claims (13)
1) 요소 분해 미생물을 배양하는 단계;
2) 상기 요소 분해 미생물 배양액으로부터 미생물을 제거하여 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액을 제조하는 단계; 및
3) 상기 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액을 오염수에 처리하고 반응시켜, 오염수 내의 용존 이산화탄소를 방해석으로 고정화시키는 단계를 포함하며,
상기 이산화탄소를 방해석으로 고정화시키는 단계는 체외고분자물질(EPS) 배양액에 포함된 탄산이온 및 오염수 내에 포함된 탄산이온이 오염수 내의 칼슘 이온과 반응하여 탄산염 광물의 형태로 고정되고, 상기 미생물의 체외고분자물질이 탄산염 광물화를 촉진시키는 것을 특징으로 하는,
미생물의 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법.
2) 상기 요소 분해 미생물 배양액으로부터 미생물을 제거하여 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액을 제조하는 단계; 및
3) 상기 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액을 오염수에 처리하고 반응시켜, 오염수 내의 용존 이산화탄소를 방해석으로 고정화시키는 단계를 포함하며,
상기 이산화탄소를 방해석으로 고정화시키는 단계는 체외고분자물질(EPS) 배양액에 포함된 탄산이온 및 오염수 내에 포함된 탄산이온이 오염수 내의 칼슘 이온과 반응하여 탄산염 광물의 형태로 고정되고, 상기 미생물의 체외고분자물질이 탄산염 광물화를 촉진시키는 것을 특징으로 하는,
미생물의 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법.
제1항에 있어서,
상기 단계 1)의 요소 분해 미생물을 배양하는 단계는
자연 환경 내 생물기원의 탄산염광물이 형성된 암석 또는 침전물을 채취하는 단계; 및 요소가 포함된 염기성 미생물 성장 배지(pH 8~9)에서 호기적으로 3일 이상 배양하는 단계를 포함하는, 미생물의 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법.
상기 단계 1)의 요소 분해 미생물을 배양하는 단계는
자연 환경 내 생물기원의 탄산염광물이 형성된 암석 또는 침전물을 채취하는 단계; 및 요소가 포함된 염기성 미생물 성장 배지(pH 8~9)에서 호기적으로 3일 이상 배양하는 단계를 포함하는, 미생물의 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법.
제1항에 있어서,
상기 요소 분해 미생물은 프로테우스 미라빌리스(Proteus mirabilis), 마리노박테리움 코랄리이(Marinobacterium coralli) 및 스포로살시나 파스테우리(Sprosarcina pasteurii)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 미생물의 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법.
상기 요소 분해 미생물은 프로테우스 미라빌리스(Proteus mirabilis), 마리노박테리움 코랄리이(Marinobacterium coralli) 및 스포로살시나 파스테우리(Sprosarcina pasteurii)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 미생물의 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법.
제2항에 있어서,
상기 요소가 포함된 염기성 미생물 성장 배지는 요소를 포함한 D-1 배지, MH 배지 또는 살린(saline) 배지인 것을 특징으로 하는, 미생물의 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법.
상기 요소가 포함된 염기성 미생물 성장 배지는 요소를 포함한 D-1 배지, MH 배지 또는 살린(saline) 배지인 것을 특징으로 하는, 미생물의 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법.
제1항에 있어서,
상기 단계 2)의 상기 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액은 상기 단계 1)에서 배양된 요소 분해 미생물 배양액을 원심분리한 후, 상층액을 0.2~0.45 ㎛ 크기의 필터로 필터링하여 수집하여 얻는 것을 특징으로 하는, 미생물의 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법.
상기 단계 2)의 상기 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액은 상기 단계 1)에서 배양된 요소 분해 미생물 배양액을 원심분리한 후, 상층액을 0.2~0.45 ㎛ 크기의 필터로 필터링하여 수집하여 얻는 것을 특징으로 하는, 미생물의 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법.
제1항에 있어서,
상기 단계 3)에서 오염수에 칼슘 이온을 더 첨가하는 것을 특징으로 하는, 미생물의 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법.
상기 단계 3)에서 오염수에 칼슘 이온을 더 첨가하는 것을 특징으로 하는, 미생물의 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법.
제6항에 있어서,
상기 칼슘 이온은 칼슘 아세테이트, 칼슘 락테이트, 염화 칼슘 및 칼슘 포름산염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 미생물의 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법.
상기 칼슘 이온은 칼슘 아세테이트, 칼슘 락테이트, 염화 칼슘 및 칼슘 포름산염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 미생물의 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법.
제1항에 있어서,
제조된 방해석은 5~20 ㎛ 크기의 능면체 모양인 것을 특징으로 하는, 미생물의 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법.
제조된 방해석은 5~20 ㎛ 크기의 능면체 모양인 것을 특징으로 하는, 미생물의 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법.
삭제
삭제
1) 요소 분해 미생물을 배양하는 단계;
2) 상기 요소 분해 미생물 배양액으로부터 미생물을 제거하여 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액을 제조하는 단계; 및
3) 상기 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액과 칼슘 이온 용액을 콘크리트 또는 암석의 미세균열 내에 한 방울씩 연속적으로 떨어뜨려서 반응시켜 미세균열 내에 방해석이 충진되는 단계를 포함하고,
상기 미세균열 내에 방해석이 충진되는 단계는 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액에 포함된 탄산이온이 칼슘 이온과 반응하여 마이크로미터 크기의 결정질 방해석을 석출시키고, 상기 미생물의 체외고분자물질이 탄산염 광물화를 촉진시키는 것을 특징으로 하는,
미생물의 체외고분자물질을 이용한 미세균열 보수 방법.
2) 상기 요소 분해 미생물 배양액으로부터 미생물을 제거하여 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액을 제조하는 단계; 및
3) 상기 미생물의 체외고분자물질(EPS) 배양액과 칼슘 이온 용액을 콘크리트 또는 암석의 미세균열 내에 한 방울씩 연속적으로 떨어뜨려서 반응시켜 미세균열 내에 방해석이 충진되는 단계를 포함하고,
상기 미세균열 내에 방해석이 충진되는 단계는 미생물 체외고분자물질(EPS) 배양액에 포함된 탄산이온이 칼슘 이온과 반응하여 마이크로미터 크기의 결정질 방해석을 석출시키고, 상기 미생물의 체외고분자물질이 탄산염 광물화를 촉진시키는 것을 특징으로 하는,
미생물의 체외고분자물질을 이용한 미세균열 보수 방법.
제11항에 있어서, 상기 미세균열은 폭이 100 ㎛ ~ 2 mm인 미세균열인 것을 특징으로 하는, 미생물의 체외고분자물질을 이용한 미세균열 보수 방법.
제11항에 있어서, 상기 암석은 석조문화재인 것을 특징으로 하는, 미생물의 체외고분자물질을 이용한 미세균열 보수 방법.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020180055736A KR102028285B1 (ko) | 2018-05-16 | 2018-05-16 | 미생물 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법, 및 상기 미생물 체외고분자물질을 이용한 미세 균열 보수 방법 |
| PCT/KR2019/003276 WO2019221379A1 (ko) | 2018-05-16 | 2019-03-21 | 미생물 체외고분자물질을 이용한 결정질 방해석의 제조 방법, 및 상기 미생물 체외고분자물질을 이용한 미세 균열 보수 방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020180055736A KR102028285B1 (ko) | 2018-05-16 | 2018-05-16 | 미생물 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법, 및 상기 미생물 체외고분자물질을 이용한 미세 균열 보수 방법 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR102028285B1 true KR102028285B1 (ko) | 2019-10-02 |
Family
ID=68422914
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020180055736A Active KR102028285B1 (ko) | 2018-05-16 | 2018-05-16 | 미생물 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법, 및 상기 미생물 체외고분자물질을 이용한 미세 균열 보수 방법 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR102028285B1 (ko) |
| WO (1) | WO2019221379A1 (ko) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102293741B1 (ko) * | 2021-03-22 | 2021-08-26 | (주)썬시카방수 | 건축 구조물의 외벽 균열 보수 방법 |
| KR102412745B1 (ko) * | 2021-07-26 | 2022-06-24 | 갈렙이엔씨 주식회사 | 친환경 침투식 무기계 구체 강화 및 보호제 조성물 및 친환경 무기계 코팅제 조성물을 이용한 구조물의 친환경 표면 강화 및 보호 방법 |
| CN120004553A (zh) * | 2025-04-21 | 2025-05-16 | 黄山学院 | 一种用于石质文物修复的生物基修复材料及其制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20130093418A (ko) * | 2012-02-14 | 2013-08-22 | 전남대학교산학협력단 | 이산화탄소 고정 방법 및 이를 위한 조성물 |
| KR20140117023A (ko) * | 2013-03-25 | 2014-10-07 | 인하대학교 산학협력단 | 콘크리트에서 분리된 스포로살시나 파스테우리 wj-5 균주 및 이를 이용한 탄산칼슘의 제조 방법 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101240240B1 (ko) * | 2010-12-22 | 2013-03-07 | 한국과학기술원 | 칼슘아세테이트를 함유하는 미생물 배양액을 이용한 콘크리트 표면 수밀화 처리방법 |
| KR101448157B1 (ko) * | 2013-03-25 | 2014-10-08 | 인하대학교 산학협력단 | 콘크리트에서 분리된 스포로살시나 파스테우리 wj-4 균주 및 이를 이용한 탄산칼슘의 제조 방법 |
-
2018
- 2018-05-16 KR KR1020180055736A patent/KR102028285B1/ko active Active
-
2019
- 2019-03-21 WO PCT/KR2019/003276 patent/WO2019221379A1/ko active Application Filing
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20130093418A (ko) * | 2012-02-14 | 2013-08-22 | 전남대학교산학협력단 | 이산화탄소 고정 방법 및 이를 위한 조성물 |
| KR20140117023A (ko) * | 2013-03-25 | 2014-10-07 | 인하대학교 산학협력단 | 콘크리트에서 분리된 스포로살시나 파스테우리 wj-5 균주 및 이를 이용한 탄산칼슘의 제조 방법 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 1. Journal of the Korea concrete Institute, Vol.22, No.4, pp.547~557, August, 2010 |
| 2. Geochimica et Cosmochimica Acta, Vol.73, Issue 14, 15 July 2009, pages 4180-4198 |
| Environ. Sci. Technol. Vol. 39, No. 22, pp.8770-8775 (2005.10.06.)* * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102293741B1 (ko) * | 2021-03-22 | 2021-08-26 | (주)썬시카방수 | 건축 구조물의 외벽 균열 보수 방법 |
| KR102412745B1 (ko) * | 2021-07-26 | 2022-06-24 | 갈렙이엔씨 주식회사 | 친환경 침투식 무기계 구체 강화 및 보호제 조성물 및 친환경 무기계 코팅제 조성물을 이용한 구조물의 친환경 표면 강화 및 보호 방법 |
| CN120004553A (zh) * | 2025-04-21 | 2025-05-16 | 黄山学院 | 一种用于石质文物修复的生物基修复材料及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2019221379A1 (ko) | 2019-11-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Liu et al. | Bio-mineralisation, characterization, and stability of calcium carbonate containing organic matter | |
| Li et al. | Calcite precipitation induced by bacteria and bacterially produced carbonic anhydrase | |
| Bai et al. | Microbially-induced calcium carbonate precipitation by a halophilic ureolytic bacterium and its potential for remediation of heavy metal-contaminated saline environments | |
| Sánchez-Román et al. | Aerobic biomineralization of Mg-rich carbonates: Implications for natural environments | |
| Rivadeneyra et al. | Precipitation of carbonates by Bacillus sp. isolated from saline soils | |
| Dhami et al. | Biomineralization of calcium carbonate polymorphs by the bacterial strains isolated from calcareous sites | |
| KR102028285B1 (ko) | 미생물 체외고분자물질을 이용한 이산화탄소 고정 방법, 및 상기 미생물 체외고분자물질을 이용한 미세 균열 보수 방법 | |
| Anitha et al. | Bacillus cereus KLUVAA mediated biocement production using hard water and urea | |
| Cao et al. | Carbonate mineral formation under the influence of limestone-colonizing actinobacteria: morphology and polymorphism | |
| KR101438380B1 (ko) | 수질정화용 콘크리트 블록 | |
| Park et al. | Enzyme-mediated biocalcification by a novel alkaliphilic Bacillus psychrodurans LC40 and its eco-friendly application as a biosealant for crack healing | |
| Abe et al. | Removal of inorganic nitrogen sources from water by the algal biofilm of the aerial microalga Trentepohlia aurea | |
| Omoregie et al. | Insect frass as a substrate to stimulate native ureolytic bacteria for microbial-induced carbonate precipitation in soil biocementation | |
| Hatayama et al. | Calcite formation induced by Ensifer adhaerens, Microbacterium testaceum, Paeniglutamicibacter kerguelensis, Pseudomonas protegens and Rheinheimera texasensis | |
| Ibrahim et al. | A Literature Review of Bio-cement: Microorganisms, Production, Properties, and Potential Applications. | |
| KR20200086936A (ko) | 미생물을 이용한 규조토 고결화 기술 | |
| CN108841742B (zh) | 一种耐盐碱芽孢杆菌属菌株zh-1及其制备方法和应用 | |
| Hu et al. | Medium optimization and dust suppression performance analysis of microbial-based dust suppressant compound by response surface curve method | |
| Ercole et al. | Deposition of calcium carbonate in karst caves: role of bacteria in Stiffe's cave | |
| Bin Mansoor et al. | A review on role of bacillus species in bio-calcification: a way forward in carbonate precipitation | |
| Khadim et al. | Sand bioconsolidation/biosolidification by microbially induced carbonate precipitation using ureolytic bacteria | |
| KR101480590B1 (ko) | 호압성 황산화 화학독립영양미생물을 이용하여 고압 이산화탄소를 바이오매스로 고정 또는 전환하는 방법 | |
| Azmi et al. | Characterisation of Calcium Carbonate Formed by Bacillus sphaericus Using Urea | |
| TWI788271B (zh) | 利用微生物誘導碳酸鈣沉澱使砂土顆粒膠結的方法 | |
| Shanmugam et al. | IDENTIFICATION OF CALCIUM CARBONATE PRODUCING NOVEL Bacillus cereus KOV15 ISOLATED FROM SOIL MICROBIAL COMMUNITIES TOWARDS GREENER CONSTRUCTION MATERIALS. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PA0109 | Patent application |
Patent event code: PA01091R01D Comment text: Patent Application Patent event date: 20180516 |
|
| PA0201 | Request for examination | ||
| PE0902 | Notice of grounds for rejection |
Comment text: Notification of reason for refusal Patent event date: 20190328 Patent event code: PE09021S01D |
|
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| PE0701 | Decision of registration |
Patent event code: PE07011S01D Comment text: Decision to Grant Registration Patent event date: 20190923 |
|
| GRNT | Written decision to grant | ||
| PR0701 | Registration of establishment |
Comment text: Registration of Establishment Patent event date: 20190926 Patent event code: PR07011E01D |
|
| PR1002 | Payment of registration fee |
Payment date: 20190926 End annual number: 3 Start annual number: 1 |
|
| PG1601 | Publication of registration | ||
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20220825 Start annual number: 4 End annual number: 4 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20240620 Start annual number: 6 End annual number: 6 |