KR102025611B1 - A composition comprising a culture of Ceriporia lamaritus for preventing or treating of atopic dermatitis - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 세리포리아 라마리투스(Ceriporia lamaritus) 균주 배양물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a composition for preventing or treating atopic dermatitis comprising a culture medium of Ceriporia lamaritus strains as an active ingredient.
버섯은 탄수화물, 단백질, 지질, 무기질, 비타민 등이 풍부하고, 베타-글루칸(β-glucan)을 포함하는 생리활성물질이 다량으로 함유되어 있어 오랫동안 식용 및 약용 소재로 이용되고 있으며, 버섯의 성분 및 생리활성 기작의 상당 부분이 과학적으로 증명되고 있어 버섯의 인공재배 방법 개발, 대량 증식법 개발, 신규 버섯 발굴, 기능성 탐색 등의 연구가 필요시 되고 있다. Mushrooms are rich in carbohydrates, proteins, lipids, minerals, vitamins, etc., and have been used as food and medicinal materials for a long time because they contain a large amount of bioactive substances including beta-glucan. Many of the biologically active mechanisms have been scientifically proven, and research on the development of artificial cultivation methods for mushrooms, development of mass propagation methods, discovery of new mushrooms, and functional exploration is needed.
버섯은 균사체(mycellium)와 자실체(fruit body)로 분류할 수 있다. 버섯의 균사체는 자실체와 마찬가지로 여러 가지 유용한 물질을 함유하고 있으며, 특히 버섯 자실체와는 달리 안정적으로 용기 내 단기배양 및 생산이 가능하다는 장점이 있다. Mushrooms can be classified into mycellium and fruit body. Mushroom mycelium contains a number of useful materials as well as fruiting bodies, in particular unlike mushroom fruiting body has the advantage that it is possible to stably short-term culture and production in the container.
최근 대부분의 버섯 종균은 액체 배지에서 함유된 영양 성분을 이용한 생물 전환을 통해 다양한 생리활성물질을 포함하는 균사체 배양이 가능하게 되었다. 버섯 균사체는 배지 조성, 배양 조건 또는 버섯 균사체 종류에 따라 그 배양 특성이 다르므로 균사체의 액체 배양 효율을 증진시키기 위해서는 버섯별로 적합한 배양 조건이 구명되어야 하며, 버섯 균사체를 포함한 액체 배양물은 배지의 영양 성분 조성과 배양 조건에 따라 항암 및 항산화 등의 활성을 가지는 다양한 대사산물을 얻을 수 있다(이위영, et al., 2008). Recently, most mushroom spawns have been able to cultivate mycelia containing various bioactive substances through bioconversion using nutrients contained in liquid medium. Since mushroom mycelium has different culture characteristics depending on the medium composition, culture conditions, or mushroom mycelium, appropriate culture conditions must be determined for each mushroom in order to increase the liquid culture efficiency of the mycelium. Various metabolites with anticancer and anti-oxidant activities can be obtained depending on the composition and the culture conditions (Lee Wi-young, et al., 2008).
세리포리아 라마리투스(Ceriporia lamaritus)는 구멍장이버섯과(Polyporaceae) 구멍버섯속(Poria)에 속하는 신규한 균주(수탁번호 KACC 83018BP)로, 본 발명자가 형질이 우수한 2개의 구멍버섯속 균주를 이핵-단핵(di-mono) 교배법으로 교배 육종하여 얻었다. 세리포리아 라마리투스의 균사는 굵고 분화속도가 빨라 잡균의 오염에 강한 저온성 균주로서 유전적으로는 구멍버섯속으로 분류되지만 균사체의 생장 특성이 기존의 구멍버섯속과는 상이하고, 자실체의 색상과 형상 또한 상이하다는 것을 확인하였고, 신규 균주 및 이의 배양물을 포함하는 당뇨병 치료용 조성물에 대한 특허를 등록한 바 있다(한국등록특허 제1925890호; 한국등록특허 제1969433호). Ceriporia lamaritus ( Ceriporia lamaritus ) is a novel strain belonging to the Polypoaceae poria (Accession No. KACC 83018BP). Obtained by cross breeding by di-mono hybridization. Mycelia of Seriphoria lamaritus are low-temperature strains resistant to contamination of various bacteria because they are thick and have a high differentiation rate, but they are genetically classified as punctate. It was confirmed that the shape and also different, and has been registered for a patent for a composition for treating diabetes comprising a new strain and its culture (Korean Patent No. 1925890; Korean Patent No. 1969433).
이에, 본 발명자는 세리포리아 라마리투스 및 이의 배양물을 지속적으로 연구하는 과정에서, 세리포리아 라마리투스 배양물에서 피부 개선에 효과적인 복합다당체, 베타-글루칸 이외에도 아토피 피부염 치료 효과가 있다고 보고된 5-하이드록시-6,7-디메톡시프탈라이드 성분이 신규로 생성되고, 무기성분, 아미노산, 비타민 등의 유효성분들이 많이 함유되어 있음을 확인하였고, 이들 배양물이 피부 수분 손실 개선 및 아토피 피부염 치료 효과가 우수하다는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성할 수 있었다. Accordingly, the present inventors report that, in the course of continuous study of Seriphoria lamaritus and its culture, in addition to the complex polysaccharide, beta-glucan, which is effective for skin improvement in Seriphoria lamaritus culture, it is effective in treating atopic dermatitis. It was confirmed that the 5-hydroxy-6,7-dimethoxyphthalide component is newly generated and contains a lot of active ingredients such as inorganic components, amino acids, vitamins, etc., and these cultures improve skin moisture loss and The present invention was completed by confirming that the atopic dermatitis therapeutic effect is excellent.
종래 선행기술로서 한국등록특허 제1705482호 및 한국공개특허 제2017-0114574호에는 세리포리아 락세라타 균사체 배양물을 함유하는 아토피 피부염 개선용 조성물이 기재되어 있으나, 본 발명의 세리포리아 라마리투스와 그 구성이 차이가 있으며, 세리포리아 라마리투스가 신규로 생성하는 5-하이드록시-6,7-디메톡시프탈라이드 및 이를 포함하는 배양물의 증가된 아토피 피부염 개선 또는 치료 효과는 전혀 기재 및 암시되어 있지 않다. 또한, 한국등록특허 제1522415호에는 세리포리아 라세라타 추출물을 포함하는 조성물의 피부 자극도, 보습 효과가 기재되어 있으나, 아토피 치료 효과는 전혀 기재되어 있지 않으며, 본 발명의 세리포리아 라마리투스 배양물과 그 구성이 다르다. Conventional prior art, Korean Patent No. 1705482 and Korean Patent Publication No. 2017-0114574 discloses a composition for improving atopic dermatitis containing a culture medium of Seriphoria laccerata mycelium, but the Seriphoria lamari of the present invention There is a difference between Tooth and its composition, and there is no increase in atopic dermatitis improvement or treatment effect of 5-hydroxy-6,7-dimethoxyphthalide and a culture containing the same produced by Seriphoria lamaritus. It is not described and implied. In addition, Korean Patent No. 1522415 describes the skin irritation and moisturizing effect of the composition containing the extract of Seriphoria racerata, but the atopy treatment effect is not described at all, and the Seriphoria lamari of the present invention. Tooth cultures differ in composition.
본 발명의 목적은 세리포리아 라마리투스 균주(Ceriporia lamaritus) 배양물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 데 있다. An object of the present invention is to provide a composition for the prevention or treatment of atopic dermatitis, comprising a culture medium of Ceriporia lamaritus strain ( Ceriporia lamaritus ).
본 발명은 세리포리아 라마리투스 균주(Ceriporia lamaritus, 수탁번호 KACC 83018BP) 배양물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학 조성물 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a pharmaceutical composition or cosmetic composition for improvement or prevention of atopic dermatitis comprising a culture medium of Ceriporia lamaritus ( Accession No. KACC 83018BP) as an active ingredient.
상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물은 모균주인 세리포리아 라세라타 균주 배양물 대비 5-하이드록시-6,7-디메톡시프탈라이드(5-hydroxy-6,7-dimethoxyphthalide), 글루타민 및 알루미늄으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상이 신규로 포함되어 있을 수 있다. The culture culture of Seriphoria lamaritus is 5-hydroxy-6,7-dimethoxyphthalide (5-hydroxy-6,7-dimethoxyphthalide), compared to the culture culture of Seriphoria racerata strain, the parent strain At least one selected from the group consisting of glutamine and aluminum may be newly included.
상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물은 모균주인 세리포리아 라세라타 균주 배양물 대비 비타민, 마그네슘 및 칼슘으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 함유량이 4배 이상 증가되어 있을 수 있다. The culture culture of Seriphoria lamaritus strain may be increased by at least four times the content of at least one selected from the group consisting of vitamins, magnesium and calcium as compared to the culture culture of Seriphoria racerata strain.
상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물은 피부의 경피수분 손실량 감소 또는 피부 수분도 증가 효과를 나타낼 수 있다. The culture culture of the three Seriporia lamaritus may exhibit an effect of reducing the transdermal moisture loss of the skin or increase the skin moisture.
상기 약학 조성물은 피부 외용제일 수 있다. The pharmaceutical composition may be an external preparation for skin.
또한, 본 발명은 상기 화장료 조성물을 포함하는 화장료에 관한 것이다. The present invention also relates to a cosmetic comprising the cosmetic composition.
이하 본 발명을 상세하게 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명은 세리포리아 라마리투스 균주(Ceriporia lamaritus, 수탁번호 KACC 83018BP) 배양물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a composition for the prevention or treatment of atopic dermatitis comprising a culture medium of Ceriporia lamaritus ( Accession No. KACC 83018BP) as an active ingredient.
상기 세리포리아 라마리투스 균주는 기존의 세리포리아 라세라타 균주들을 모균주로 이용하여 본 발명자가 교배 육종 방법을 통해 얻은 것으로, 국립농업과학원 미생물은행에 수탁번호 KACC 83018BP로 기탁한 신규한 균주(한국등록특허 제1925890호)이다. The Seriphoria lamaritus strain is obtained by the present breeder breeding method by using the existing Seriphoria racerata strain as a parent strain, a new deposited with the accession number KACC 83018BP to the National Academy of Agricultural Science Strain (Korean Patent No. 1925890).
상기 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata)는 2003년에 일본에서 처음으로 발견한 것으로, 참나무나 적송에 부생하는 백색 부후균의 일종으로, 목재의 셀룰로스, 헤미셀룰로스, 리그닌 등을 분해할 수 있다. The Ceriporia lacerata was first discovered in Japan in 2003, and is a kind of white fungus that is a by-product of oak or red pine, and can degrade cellulose, hemicellulose, and lignin of wood. .
상기 모균주로 이용한 세리포리아 라세라타 균주는 본 발명자가 기존에 경북 울진군 금강송면 소광리에서 채집한 CL-KU 및 경북 상주시 하동면 소곡리에서 채집한 CL-KS 외에도 경기도 과천, 전북 군산, 캐나다 또는 일본산의 세리포리아 라세라타일 수 있다. The seriphoria racerata strain used as the parent strain is the present inventors, in addition to the CL-KU collected at Sogwang-ri, Geumgangsong-myeon, Geumgang-myeon, Uljin-gun, Gyeongbuk, and CL-KS collected at Sogok-ri, Hadong-myeon, Sangju-si, Gyeongbuk, Gwacheon, Jeonbuk, Gunsan, Canada or Japan. It may be a mountain seriporia racerata.
상기 세리포리아 라마리투스 균주는 균사체의 생장 속도가 모균주 중 품성이 가장 우수한 경북 울진군 금강송면 소광리에서 채집한 세리포리아 라세라타 균주 (CL-KU) 보다 30% 이상 향상되었으며, 노화 속도가 2배 이상 느리다. 또한, 균주 배양 시 잡균의 오염에 강하여, 기존의 세리포리아 라세라타 균주 배양 시 나타나는 잡균에 의한 오염으로 인한 낮은 배양 성공률을 극복함으로써 경제성이 높은 산업화가 가능할 수 있다(한국등록특허 제1925890호).The growth rate of the mycelium spp. Was increased by more than 30% compared to the serifaria racerata strain (CL-KU) collected from Sogwang-ri, Kumgangsong-myeon, Uljin-gun, Uljin, Korea. Is more than twice as slow In addition, it is resistant to the contamination of various bacteria when culturing strains, it is possible to industrialize the high economic efficiency by overcoming the low cultivation success rate due to the contamination by the various bacteria appearing in conventional culture of Seriphoria racerata strain (Korea Patent No. 1925890) ).
상기 세리포리아 라마리투스 균주는 복합다당체 및 베타-글루칸뿐만 아니라, 5-디하이드로에르고스테롤(5-dihydroergosterol), DMC(2′,4′-dihyroxy-6′-methoxy-3′,5′-dimethylchalcone), 5-하이드록시-6,7-디메톡시프탈라이드(5-hydroxy-6,7-dimethoxyphthalide), 글루타민, 비타민, 알루미늄, 마그네슘, 칼슘 등을 생산할 수 있다. The Seriphoria lamaritus strains include 5-dihydroergosterol, DMC (2 ′, 4′-dihyroxy-6′-methoxy-3 ′, 5 ′, as well as complex polysaccharides and beta-glucans. -dimethylchalcone), 5-hydroxy-6,7-dimethoxyphthalide, glutamine, vitamins, aluminum, magnesium, calcium, and the like.
상기 세리포리아 라마리투스 균주가 생산하는 5-디하이드로에르고스테롤, 5-하이드록시-6,7-디메톡시프탈라이드, 글루타민 및 알루미늄은 모균주인 세리포리아 라세라타 균주(상기 CL-KU 외 5종, 바람직하게는 CL-KU)에서는 생성되지 않는 성분이고, 상기 DMC, 비타민, 마그네슘 또는 칼슘은 모균주인 세리포리아 라세라타 균주(상기 CL-KU 외 5종, 바람직하게는 CL-KU)에 비해 세리포리아 라마리투스 균주가 4배 이상 더 많이 생산할 수 있다. The 5-dihydroergosterol, 5-hydroxy-6,7-dimethoxyphthalide, glutamine and aluminum produced by the Seriphoria lamaritus strain are the parent strains of the Seriphoria racerata strain (the CL Five kinds other than -KU, preferably CL-KU, is a component that is not produced, and the DMC, vitamins, magnesium, or calcium are three strains of the three Seriphoria racerata strains (other than the CL-KU, preferably Is more than four times more Seriporia lamaritus strains than CL-KU).
상기 DMC는 수용(Cleistocalyx operculatus, Syzygium nervosum)의 싹(bud)의 주요 성분으로 신경보호, 항당뇨, 진경성(spasmolytic), 항암 및 항염증 효과가 있음이 알려져 있다(Yu, W.G., et al., 2011).The DMC is known to have neuroprotective, antidiabetic, spasmolytic, anticancer and anti-inflammatory effects as a major component of buds of Cleistocalyx operculatus (Syzygium nervosum ) (Yu, WG, et al. , 2011).
상기 5-하이드록시-6,7-디메톡시프탈라이드는 꽃송이버섯에 포함되어 있으며, 아토피 피부염 치료 효과가 있음이 알려져 있다(한국등록특허 제1736916호). The 5-hydroxy-6,7-dimethoxyphthalide is included in the flower mushroom, it is known that the effect of treating atopic dermatitis (Korean Patent No. 1736916).
상기 글루타민은 아미노산의 한 종류로, 염증 반응을 약화시켜 아토피 피부염 치료 효과 있음이 보고되었다(한국등록특허 제0883342호). The glutamine is a kind of amino acid, it has been reported to attenuate the inflammatory response to treat atopic dermatitis (Korean Patent No. 0883342).
상기 알루미늄, 마그네슘 및 칼슘은 무기원소로 피부 장벽을 강화하고, 피부재생을 촉진하며, 미용적으로는 피지, 여드름 등의 노폐물을 제거하고 잡티를 제거하는 효과가 있음이 알려져 있다. The aluminum, magnesium and calcium are known to have the effect of strengthening the skin barrier with inorganic elements, promoting skin regeneration, cosmetically removing wastes such as sebum and acne and removing blemishes.
상기 비타민은 항산화, 항염증, 피부 개선 등과 같은 다양한 효과가 있음이 알려져 있는 것으로, 바람직하게는 비타민 B, C, D 및 E이다.The vitamin is known to have a variety of effects, such as antioxidant, anti-inflammatory, skin improvement, preferably vitamins B, C, D and E.
상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물은 세리포리아 라마리투스 균주로부터 유래된 균사체 배양물일 수 있고, 상기 균사체 배양물은 액체 배양하여 얻을 수 있다. The Seriphoria lamaritus strain culture may be a mycelium culture derived from the Seriphoria lamaritus strain, and the mycelium culture may be obtained by liquid culture.
상기 배양물은 균사체 및 배양 배지가 모두 포함된 배양액이거나, 배양액에서 균사체 및 배양 배지를 각각 분리한 것일 수 있다. 바람직하게는 배양액에서 분리한 배양 배지이다. The culture may be a culture solution containing both a mycelium and a culture medium, or the mycelium and the culture medium may be separated from the culture medium, respectively. Preferably it is a culture medium separated from the culture solution.
상기 배양물은 액체 배양한 배양액, 배양액을 분말화한 배양액 분말을 물, C1~C4의 저급 알코올, 아세톤, n-헥산, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 용매를 가하여 추출한 추출물일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. The culture is extracted by adding a liquid culture medium, culture medium powdered culture medium by adding one or more solvents selected from the group consisting of water, C1 ~ C4 lower alcohol, acetone, n-hexane, dichloromethane and ethyl acetate The extract may be, but is not limited thereto.
상기 배양액 분말은 상기 액체 배양한 배양액을 통상의 건조 방법을 이용하여 분말화 할 수 있다. The culture solution powder can be powdered by using a common drying method of the liquid culture culture.
상기 C1~C4의 저급 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 분탄올 등일 수 있다. The lower alcohol of C1 ~ C4 may be methanol, ethanol, propanol, isopropanol, buntanol and the like.
상기 추출물의 추출 방법은 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있다. 또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다. Extraction method of the extract may be selected from any one of hot water extraction method, cold extraction method, reflux cooling extraction method, solvent extraction method, steam distillation method, ultrasonic extraction method, elution method, compression method. In addition, the desired extract may further be subjected to a conventional fractionation process, it may be purified using conventional purification methods.
상기 액체 배양시의 액체 배지의 성분은 균주의 생장 및 유효성분의 생성에 영향을 줄 수 있다. 따라서 본 발명의 세리포리아 라마리투스 균주 배양에 최적화된 액체 배지의 성분 및 함량 조건을 구축하는 것이 필요하다. Components of the liquid medium in the liquid culture may affect the growth of the strain and the production of the active ingredient. Therefore, it is necessary to establish the components and content conditions of the liquid medium optimized for culturing the Ceriporia lamaritus strain of the present invention.
상기 액체 배지는 탄소원으로 수크로스(sucrose), 글루코스(glucose), 락토스(lactose), 프룩토스(fructose) 및 갈락토스(galactose)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 바람직하게는 수크로스 및 글루코스를 포함하며, 더 바람직하게는 액체 배지를 기준으로 수크로스 0.5~3%(w/v) 및 글루코스 1~5%(w/v)를 포함하며, 더욱 더 바람직하게는 액체 배지를 기준으로 수크로스 0.5~2%(w/v) 및 글루코스 1~3%(w/v)를 포함하며, 가장 바람직하게는 액체 배지를 기준으로 수크로스 1%(w/v) 및 글루코스 2%(w/v)를 포함한다. The liquid medium may include one or more selected from the group consisting of sucrose, glucose, lactose, fructose and galactose as a carbon source, but is not limited thereto. Do not. Preferably sucrose and glucose, more preferably 0.5-3% (w / v) sucrose and 1-5% (w / v) glucose based on the liquid medium, even more preferably Comprises 0.5-2% (w / v) sucrose and 1-3% (w / v) glucose based on liquid medium, and most preferably 1% (w / v) sucrose based on liquid medium And 2% glucose (w / v).
상기 액체 배지는 질소원으로 트립톤(tryptone), 효모 추출물(yeast extract), 대두분말(soy flour), L-글루탐산(L-glutamic acid), 펩톤(peptone), 맥아 추출물(malt extract) 및 암모늄(ammonium)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 바람직하게는 대두분말 및 펩톤을 포함하며, 더 바람직하게는 액체 배지를 기준으로 대두분말 1~4%(w/v) 및 펩톤 0.3~1%(w/v)를 포함한다. 가장 바람직하게는 액체 배지를 기준으로 대두분말 1.5%(w/v) 및 펩톤 0.3%(w/v)를 포함한다. The liquid medium is a nitrogen source of tryptone, yeast extract, soy flour, L-glutamic acid, peptone, malt extract and ammonium ( ammonium) may include one or more selected from the group consisting of, but is not limited thereto. Preferably soybean powder and peptone are included, more preferably soybean powder 1-4% (w / v) and peptone 0.3-1% (w / v) based on the liquid medium. Most preferably it comprises 1.5% (w / v) soybean powder and 0.3% (w / v) peptone based on the liquid medium.
상기 액체 배지는 미량원소로 KH2PO4, ZnSO4, MgSO4, CuSO4, FeSO4 및 CaCl2로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 바람직하게는 FeSO4, KH2PO4, MgSO4 및 CaCl2를 포함하며, 더 바람직하게는 액체 배지를 기준으로 0.01~0.5%(w/v) FeSO4, 0.1~0.3%(w/v) KH2PO4, 0.1~0.3%(w/v) MgSO4 및 0.1~0.3%(w/v) CaCl2를 포함한다. 가장 바람직하게는 액체 배지를 기준으로 0.02%(w/v) FeSO4, 0.15%(w/v) KH2PO4, 0.15%(w/v) MgSO4 및 0.15%(w/v) CaCl2를 포함한다.The liquid medium may include one or more selected from the group consisting of KH 2 PO 4 , ZnSO 4 , MgSO 4 , CuSO 4 , FeSO 4 and CaCl 2 as trace elements, but is not limited thereto. Preferably FeSO 4 , KH 2 PO 4 , MgSO 4 and CaCl 2 , more preferably 0.01-0.5% (w / v) FeSO 4 , 0.1-0.3% (w / v) based on the liquid medium KH 2 PO 4 , 0.1-0.3% (w / v) MgSO 4 and 0.1-0.3% (w / v) CaCl 2 . Most preferably 0.02% (w / v) FeSO 4 , 0.15% (w / v) KH 2 PO 4 , 0.15% (w / v) MgSO 4 and 0.15% (w / v) CaCl 2 based on the liquid medium It includes.
상기 액체 배지는 비타민을 포함할 수 있다. 바람직하게는 비타민 B, C 및 E이나, 이에 한정되지 않는다. 더 바람직하게는 액체 배지를 기준으로 각각의 비타민을 0.1~0.5%(w/v)씩 포함한다. 가장 바람직하게는 액체 배지를 기준으로 0.2%(w/v)씩 포함한다. The liquid medium may comprise vitamins. Preferably vitamins B, C and E, but is not limited thereto. More preferably 0.1 to 0.5% (w / v) of each vitamin based on the liquid medium. Most preferably 0.2% (w / v) based on the liquid medium.
상기 액체 배지는 pH가 5~7일 수 있다. 바람직하게는 pH 6이다. pH는 세포 대사에 중요한 효소 단백질의 단위체인 아미노산의 아민 그룹(amino group)이나 카르복실 그룹(carboxyl group)의 전하를 변화시켜 단백질의 형태와 활성에 영향을 미칠 수 있다. 또한, 외부 환경에서 pH의 변화는 미생물 영양분의 이온화에 영향을 주어 미생물이 영양분을 섭취하는 데 영향을 줄 수 있다. 이에, 상기 액체 배지의 pH가 5 미만이면 호기성이며 산성계인 조류(algae)나 고균(archaea)이 번식하기 쉬우며, pH가 7 초과하면 알칼리계 방선균(actinomyces)과 사상균(mold fungi)이 번식하기 쉽고 균사가 성장하지 못해 바람직하지 못하다. The liquid medium may have a pH of 5-7. Preferably pH 6. pH can affect the shape and activity of proteins by changing the charge of the amine group or carboxyl group of amino acids, which are units of enzyme proteins that are important for cellular metabolism. In addition, the change in pH in the external environment may affect the ionization of microbial nutrients, which may affect the microbial intake of nutrients. Therefore, when the pH of the liquid medium is less than 5, it is easy to breed aerobic algae or archae, and when the pH exceeds 7, alkaline actinomyces and mold fungi breed. It is not easy because it is not easy to grow mycelia.
상기 액체 배지는 액체 배지를 기준으로 수크로스 1%(w/v), 글루코스 2%(w/v), 대두분말 1.5%(w/v), 펩톤 0.3%(w/v), FeSO4 0.02%(w/v), KH2PO4 0.15%(w/v), MgSO4 0.15%(w/v), CaCl2 0.15%(w/v), 비타민 B 0.2%(w/v), 비타민 C 0.2%(w/v) 및 비타민 E 0.2%(w/v)를 포함하며, pH가 6.0인 것이 가장 바람직하다. The liquid medium is 1% (w / v) sucrose, 2% (w / v) glucose, 1.5% (w / v) soybean powder, 0.3% (w / v) peptone, FeSO 4 0.02 % (w / v), KH 2 PO 4 0.15% (w / v), MgSO 4 0.15% (w / v), CaCl 2 0.15% (w / v), Vitamin B 0.2% (w / v), Vitamin C 0.2% (w / v) and Vitamin E 0.2% (w / v), with a pH of 6.0 being most preferred.
상기 배양은 교반형 생물반응기를 이용할 수 있으며, 공기 공급량, 교반 속도, 용존 산소량, 배양 온도 및 배양 시간 따라 균주의 생장이 영향을 받을 수 있어, 본 발명의 세리포리아 라마리투스 균주의 최적의 배양 조건을 확립하는 것이 중요하다. The culture may use a stirred bioreactor, the growth of the strain may be affected according to the air supply amount, stirring speed, dissolved oxygen amount, incubation temperature and incubation time, the optimum of the Seriporia lamaritus strain of the present invention It is important to establish culture conditions.
상기 공기 공급량은 0.02~1vvm일 수 있고, 바람직하게는 0.1~0.5vvm이며, 더 바람직하게는 0.2vvm이다. The air supply may be 0.02 ~ 1vvm, preferably 0.1 ~ 0.5vvm, more preferably 0.2vvm.
상기 교반 속도는 25~125rpm일 수 있고, 바람직하게는 50~125rpm이며, 더 바람직하게는 85rpm이다. The stirring speed may be 25 ~ 125rpm, preferably 50 ~ 125rpm, more preferably 85rpm.
상기 용존 산소량은 5~40%일 수 있고, 바람직하게는 10~40%이며, 더 바람직하게는 20%이다. The dissolved oxygen amount may be 5 to 40%, preferably 10 to 40%, and more preferably 20%.
상기 배양 온도는 20~25℃일 수 있고, 바람직하게는 22℃이다. 온도가 20℃ 미만일 경우에는 균사체의 활성이 둔화되어 배양 기간이 길어져 생산성이 낮아지고 생산비가 급상승하게 되며, 25℃ 초과일 경우에는 균사체가 비대 생장하여 균사체양은 급속도로 증가하지만 유효성분의 생성이 극도로 낮아져 바람직하지 못하다. The culture temperature may be 20 ~ 25 ℃, preferably 22 ℃. If the temperature is less than 20 ℃, the activity of the mycelium is slowed down, the incubation period is long, the productivity is lowered, the production cost is rapidly increased. If the temperature is above 25 ℃, the mycelium is enlarged, the mycelial amount increases rapidly, but the production of the active ingredient is extremely high. It is lowered, which is not preferable.
상기 배양 시간은 6~15일 수 있으며, 바람직하게는 7~10일이며, 더 바람직하게는 10일이다. 배양 시간이 6일 미만일 경우에는 유효성분의 함량이 낮으며, 10일 초과일 경우에는 유효성분의 함량이 더 이상 증가하지 않거나 서서히 감소되고, 15일 초과일 경우에는 유효성분의 함량이 급격히 감소되므로 바람직하지 못하다. The incubation time may be 6 to 15, preferably 7 to 10 days, more preferably 10 days. If the incubation time is less than 6 days, the content of the active ingredient is low, if it is more than 10 days, the content of the active ingredient is no longer increased or gradually decreased, and if more than 15 days, the content of the active ingredient is sharply reduced. Not desirable
상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물은 배양액을 원심 분리하여 얻은 상층액 상태에서는 당도 0.5~1brix, 점도 2~10Cp, 함수율이 95~98%일 수 있다. The culture culture of the three strains of Seriphoria lamaritus may have a sugar content of 0.5 to 1 brix, a viscosity of 2 to 10 Cp, and a water content of 95 to 98% in the supernatant obtained by centrifuging the culture solution.
상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물은 배양물이 지닌 기능성을 유지하고 약학 또는 화장료 조성물의 물성을 저해하지 않도록 당도 45~55brix, 점도 4,500~5,500Cp, 함수율 10~15%로 농축 또는 추출하여 사용할 수 있다. 바람직하게는 당도 48~52brix, 점도 4,800~5,200Cp, 함수율 12~13%로 농축 또는 추출한다.The culture culture of the S. liporia Ramaritus strain is concentrated or extracted with a sugar content of 45 ~ 55brix, viscosity 4,500 ~ 5,500Cp, water content 10 ~ 15% to maintain the functionality of the culture and not impair the physical properties of the pharmaceutical or cosmetic composition Can be used. Preferably, the sugar content is concentrated or extracted at 48-52 brix, viscosity 4,800-5,200 Cp, water content 12-13%.
상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물은 복합다당체 및 베타-글루칸을 포함하고 있을 뿐만 아니라, 모균주인 세리포리아 라세라타 균주 배양물에 포함되어 있지 않는 5-하이드록시-6,7-디메톡시프탈라이드, 글루타민 및 알루미늄으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상이 신규로 포함되어 있을 수 있다. 또한, 모균주인 세리포리아 라세라타 균주 배양물 대비 비타민이 5.5배, 마그네슘이 8배, 칼슘이 4.2배 정도 현저히 많이 포함되어 있을 수 있다. The culture culture of S. aureus not only contains complex polysaccharide and beta-glucan, but also 5-hydroxy-6,7- which is not included in the cultivar of S. aureus Serrata strain. One or more selected from the group consisting of dimethoxyphthalide, glutamine and aluminum may be newly included. In addition, compared to the culture culture of the mother strain of Seriporia racerata strain may contain 5.5 times more vitamins, 8 times magnesium, 4.2 times calcium.
상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물은 피부의 경피수분 손실량 감소 또는 피부 수분도 증가를 통해 피부 수분 손실을 방지할 수 있다. The culture culture of the three Seriporia lamaritus can prevent skin moisture loss by reducing the transdermal moisture loss of the skin or increase the skin moisture.
상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물은 아토피 피부염 개선, 예방 또는 치료 효과가 있을 수 있다. The culture culture of Seriporia lamaritus may have an atopic dermatitis improvement, prevention or treatment effect.
또한, 본 발명은 세리포리아 라마리투스 균주 배양물을 포함하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다. In addition, the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating atopic dermatitis, comprising a culture of Seriporia lamaritus strain.
상기 약학 조성물은 상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함할 수 있다. The pharmaceutical composition may comprise the Ceriporia lamaritus strain culture and a pharmaceutically acceptable excipient.
상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물은 전체 약학 조성물 총 중량에 대하여 바람직하게는 0.001 내지 50중량%, 더 바람직하게는 0.001 내지 40중량%, 가장 바람직하게는 0.001 내지 30중량%로 하여 첨가될 수 있다. The Seriphoria lamaritus strain culture is preferably added in an amount of 0.001 to 50% by weight, more preferably 0.001 to 40% by weight, and most preferably 0.001 to 30% by weight based on the total weight of the pharmaceutical composition. Can be.
상기 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균주사용액의 형태로 제형화 하여 사용될 수 있다. 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 세리포리아 라마리투스 균주 배양물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토즈, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween)-61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. The pharmaceutical compositions may be used in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols and the like, oral formulations, suppositories, and sterile injectable solutions according to conventional methods. Carriers, excipients and diluents that may be included in the pharmaceutical composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose , Methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. When formulated, diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents and surfactants are usually used. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and such solid preparations include at least one excipient such as starch, It is prepared by mixing calcium carbonate, sucrose or lactose, gelatin and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used. Oral liquid preparations include suspensions, solvents, emulsions, and syrups, and may include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin. . Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories. As the non-aqueous solvent and suspending agent, propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate and the like can be used. As the base of the suppository, witepsol, macrogol, tween-61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
상기 약학 조성물은 피부 외용제 제형이 바람직하다. 상기 피부 외용제는 스프레이제, 겔제, 연고제, 크림제 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. The pharmaceutical composition is preferably a topical skin formulation. The external preparation for the skin may be a spray, gel, ointment, cream, etc., but is not limited thereto.
본 발명의 약학 조성물의 투여량은 치료 받을 대상의 연령, 성별, 체중, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 약 0.1㎎/일 내지 약 2000㎎/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 0.1㎎/일 내지 1000㎎/일이다. 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수 회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. The dosage of the pharmaceutical composition of the present invention will vary depending on the age, sex, weight of the subject to be treated, the specific disease or pathology to be treated, the severity of the disease or pathology, the route of administration and the judgment of the prescriber. Dosage determination based on these factors is within the level of those skilled in the art and generally dosages range from about 0.1 mg / day to about 2000 mg / day. More preferred dosage is 0.1 mg / day to 1000 mg / day. Administration may be once a day or may be divided several times. The dosage does not limit the scope of the invention in any aspect.
본 발명의 약학 조성물은 쥐, 가축, 반려동물, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 복강, 근육, 피하, 피부, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있다. The pharmaceutical composition of the present invention can be administered to mammals such as rats, livestock, pets, humans and the like by various routes. All modes of administration can be expected, for example, by oral, rectal or intravenous, abdominal, muscle, subcutaneous, skin, intrauterine dural or cerebrovascular injections.
상기 약학 조성물은 아토피 피부염 개선 효과가 있다고 알려진 공지된 화합물이나 식물 추출물을 추가로 포함할 수 있다. The pharmaceutical composition may further include a known compound or plant extract known to have an atopic dermatitis improving effect.
본 발명은 또한, 상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물을 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. The present invention also relates to a cosmetic composition for improving atopic dermatitis comprising the culture culture of the three Seriporia lamaritus.
상기 화장료 조성물은 상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물 및 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제, 예컨대 친수성 또는 친유성 겔화제, 친수성 또는 친유성 활성제, 보존제, 항산화제, 용매, 방향제, 충전제, 차단제, 안료, 흡취제 또는 염료를 함유할 수 있다. The cosmetic composition is an auxiliary agent commonly used in the culture of Seriphoria lamaritus strains and cosmetics, such as hydrophilic or lipophilic gelling agents, hydrophilic or lipophilic active agents, preservatives, antioxidants, solvents, fragrances, fillers, blockers , Pigments, odorants or dyes.
상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물은 화장료 조성물 총 중량을 기준으로 0.001~50중량%, 바람직하게는 0.001~30중량%가 함유될 수 있다. The culture culture of the three Seriporia lamaritus may be contained 0.001 to 50% by weight, preferably 0.001 to 30% by weight based on the total weight of the cosmetic composition.
상기 보조제의 양은 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 양이며, 예컨대 화장료 조성물 총 중량에 대해 0.001~50중량%, 바람직하게는 0.001~70중량%이다. 다만, 어떠한 경우라도 보조제 및 그 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 악영향을 미치지 않도록 선택될 수 있다. The amount of the adjuvant is an amount conventionally used in the art, such as 0.001 to 50% by weight, preferably 0.001 to 70% by weight based on the total weight of the cosmetic composition. However, in any case, the adjuvant and the ratio thereof may be selected so as not to adversely affect the desirable properties of the cosmetic composition according to the present invention.
상기 화장료 조성물은 세리포리아 라마리투스 균주 배양물 이외에 아토피 피부염 개선 효과가 있다고 알려진 공지된 화합물이나 식물 추출물을 추가로 포함할 수 있다. The cosmetic composition may further comprise a known compound or plant extract known to have an effect of improving atopic dermatitis in addition to the culture culture of Seriporia lamaritus.
상기 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있다. 바람직하게는 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤, 피부 점착 타입의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. The cosmetic composition may be prepared in any formulation commonly prepared in the art, for example, solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, surfactant-containing cleansing, oils , Powder foundations, emulsion foundations, wax foundations, sprays, and the like. Preferably, the flexible cosmetics, nourishing cosmetics, massage cream, nourishing cream, pack, gel, can be prepared in the formulation of the skin adhesive type, but is not limited thereto.
본 발명은 상기 화장료 조성물을 포함하는 화장료를 제공한다. The present invention provides a cosmetic comprising the cosmetic composition.
상기 화장료는 로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트리젠트, 크림, 파운데이션, 에센스, 팩, 비누, 클렌징폼 및 바디클린저로 이루어지 군에서 선택되는 하나 이상의 제형으로 이루어질 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. The cosmetic may be composed of one or more formulations selected from the group consisting of lotion, skin softener, skin toner, astringent, cream, foundation, essence, pack, soap, cleansing foam and body cleanser, but is not limited thereto.
본 발명은 상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물을 포함하는 아토피 피부염 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다. The present invention provides a health functional food composition for improving atopic dermatitis comprising the culture culture of the three Seriporia lamaritus.
상기 건강기능식품 조성물은 세리포리아 라마리투스 균주 배양물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함할 수 있다. The dietary supplement composition may comprise a culture culture Seriporia lamaritus strain and food supplements additives.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 등의 형태를 포함하며, 본 발명의 배양물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강기능성식품류 등이 있다.The dietary supplement composition of the present invention includes the form of tablets, capsules, pills or liquids, and the food to which the culture of the present invention may be added, for example, various foods, beverages, gums, teas, Vitamin complexes and health functional foods.
본 발명은 세리포리아 라마리투스(Ceriporia lamaritus) 균주 배양물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 세리포리아 라마리투스 배양물에 아토피 피부염 개선 효과가 있다고 알려진 복합다당체, 베타-글루칸 이외에도 5-하이드록시-6,7-디메톡시프탈라이드 성분이 신규로 생성되고, 무기성분, 아미노산, 비타민 등의 유효성분들이 많이 함유되어 있음을 확인하였고, 이들 배양물이 피부 수분 손실 개선 및 아토피 피부염 치료 효과가 우수하다는 것을 확인하였다. The present invention relates to a composition for improving or treating atopic dermatitis comprising a culture medium of Ceriporia lamaritus ( Ceriporia lamaritus ) strain as an active ingredient, and a complex known to improve atopic dermatitis in a culture medium of Seriporia lamaritus . In addition to polysaccharides and beta-glucans, 5-hydroxy-6,7-dimethoxyphthalide was newly generated, and it was confirmed that it contained many active ingredients such as inorganic components, amino acids, and vitamins. It was confirmed that the skin moisture loss improvement and atopic dermatitis treatment effect is excellent.
이를 통해, 본 발명의 세리포리아 라마리투스 배양물을 아토피 피부염 치료제 또는 개선용 화장품 개발에 유용하게 이용할 수 있을 것으로 기대된다. Through this, it is expected that the Ceriporia lamaritus culture of the present invention can be usefully used for developing atopic dermatitis therapeutics or cosmetics for improvement.
이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지고, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.Hereinafter, a preferred embodiment of the present invention will be described in detail. However, the present invention is not limited to the embodiments described herein and may be embodied in other forms. Rather, the information provided herein is to be thorough and complete, and to fully convey the spirit of the present invention to those skilled in the art.
<실시예 1. 세리포리아 라마리투스 배양물 제조>Example 1 Preparation of Ceriporia Lamaritus Culture
본 발명의 신규한 세리포리아 라마리투스(Ceriporia lamaritus)는 본 발명자가 기존에 경북 울진군 금강송면 소광리에서 채집한 CL-KU 및 경북 상주시 하동면 소곡리에서 채집한 CL-KS, 경기도 과천, 전북 군산, 캐나다 및 일본산의 세리포리아 라세라타 균주를 모균주로 이용하여 이핵-단핵(di-mono) 교배법으로 교배 육종한 신규 균주로서 균주 수탁(수탁번호 KACC 83018BP) 및 특허 등록(한국등록특허 제1925890호)한 바 있다.Novel Ceriporia Lamaritus of the Invention lamaritus ) is the present inventors CL-KU collected from Sogwang-ri, Geumgang-myeon, Uljin-gun, Gyeongbuk, and CL-KS collected from Sogok-ri, Hadong-myeon, Sangju-si, Gyeongsangbuk-do, Korea. As a new strain breeding and breeding by dinuclear mononuclear (di-mono) breeding method using a parent strain strains (accession number KACC 83018BP) and patent registration (Korean Patent No. 1925890).
세리포리아 라마리투스 균주를 배양하기 위해 4,000ℓ 배양액을 기준으로 수크로스 1%(w/v), 글루코스 2%(w/v), 대두분말 1.5%(w/v), 펩톤 0.3%(w/v), FeSO4 0.02%(w/v), KH2PO4 0.15%(w/v), MgSO4 0.15%(w/v), CaCl2 0.15%(w/v), 및 비타민 B, C, E를 각각 0.2%(w/v)가 되도록 개량하여 정제수에 넣어 녹이고, pH가 6.0이 되도록 한 후, 121℃, 압력 1.5㎏f/㎝2 조건으로 20분간 살균하고 22℃로 냉각하여 배양 배지를 준비하였다. To cultivate Seriaporia lamaritus strains, 1% (w / v) sucrose, 2% (w / v) glucose, 1.5% (w / v) soybean powder, 0.3% peptone, based on 4,000 liters of culture. w / v), FeSO 4 0.02% (w / v), KH 2 PO 4 0.15% (w / v), MgSO 4 0.15% (w / v), CaCl 2 0.15% (w / v), and vitamin B , C, E is dissolved into the purified water to each improved to be 0.2% (w / v), after that the pH of the slurry reached 6.0, 121 ℃, pressure 1.5㎏f / ㎝ 2 cooling conditions in the sterilization and 22 ℃ 20 bungan Culture medium was prepared.
상기에서 준비한 배양 배지를 5,000ℓ용 생물배양기에 넣고, 세리포리아 라마리투스의 접종용 균주 30ℓ를 접종하여 공기 공급량 0.2vvm, 교반속도 85rpm, 용존산소량 20%, 배양온도 22℃, pH 6.0의 조건하에서 10일간 배양하였다. 이후에 배양액을 원심 분리하여 상층액을 분리하고, 분리한 상층액 중 3000ℓ를 감압농축기를 이용하여 55℃에서 100ℓ가 될 때가지 농축하여 세리포리아 라마리투스 배양물을 제조하였다. The culture medium prepared above was placed in a 5,000-l bioincubator, inoculated with 30 l of the strain for inoculation of Seriaporia lamaritus, with an air supply of 0.2vvm, agitation speed of 85rpm, dissolved oxygen of 20%, culture temperature of 22 ° C, pH 6.0 Incubated for 10 days under conditions. Subsequently, the culture solution was centrifuged to separate the supernatant, and 3000 L of the separated supernatant was concentrated using a reduced pressure concentrator until it became 100 L at 55 ° C., thereby preparing a culture culture of Saliforia lamaritus.
상기에서 제조한 세리포리아 라마리투스 배양물의 특성을 확인한 결과, 당도 50Brix, 점도 5,000Cp, 함수율 12.5%임을 확인하였다. As a result of confirming the characteristics of the culture medium of the above-mentioned Seriphoria lamaritus, it was confirmed that the sugar content of 50Brix, viscosity 5,000Cp, water content of 12.5%.
<실시예 2. 세리포리아 라마리투스 배양물의 성분 분석>Example 2. Component Analysis of Ceriforia Lamaritus Culture
상기 실시예 1에서 제조한 세리포리아 라마리투스 배양물에 포함되어 있는 유효성분 및 이들의 함량 확인하기 위해 김천대학교 향토식품연구소에 분석 의뢰하였다. 분석 항목은 버섯 추출물로서 피부 염증 개선 및 아토피 피부염 치료에 효과적인 성분이라고 알려진 복합다당체, 베타-글루칸, 5-하이드록시-6,7-디메톡시프탈라이드(5-hydroxy-6,7-dimethoxy phthalide), 글루타민, 비타민, 알루미늄, 마그네슘, 칼슘을 분석하였고, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다. 이때, 본 발명자가 세리포리아 라마리투스 균주 육종시 모균주로 사용한 균주 중에서 경북 울진군 금강송면 소광리가 원산지인 세리포리아 라세라타 균주(CL-KU) 배양물을 비교 물질로 이용하였다.In order to confirm the active ingredients and their contents contained in the culture medium of Seriphoria lamaritus prepared in Example 1, the analysis was requested to the local food research institute. Analysis items are mushroom extracts, polysaccharides, beta-glucan, 5-hydroxy-6,7-dimethoxy phthalide, which are known to be effective in improving skin inflammation and treating atopic dermatitis. ), Glutamine, vitamins, aluminum, magnesium, calcium were analyzed, and the results are shown in Table 1 below. At this time, the present inventors used a culture medium of the seriporia racerata strain (CL-KU), the origin of Sogwang-ri, Kumgangsong-myeon, Uljin-gun, Uljin-gun, among the strains used as a parent strain when breeding the seriporia lamaritus strain.
상기 표 1에서 보듯이, 복합다당체 및 베타-글루칸의 함량은 세리포리아 라마리투스 배양물과 세리포리아 라세라타 배양물이 유사한 반면에, 아토피 피부염 개선 효과가 있다고 알려진 5-하이드록시-6,7-디메톡시프탈라이드는 세리포리아 라마리투스 배양물에만 함유되어 있는 것을 확인하였다. 또한, 비타민, 마그네슘, 칼슘과 같은 무기성분, 글루타민 및 비타민의 경우에는 세리포리아 라세라타 배양물에 비해 세리포리아 라마리투스 배양물에 현저히 많이 함유되어 있는 것을 확인하였다. As shown in Table 1, the content of the complex polysaccharide and beta-glucan is similar to that of the culture medium of Ceriporia lamaritus and Ceriporia racerata, while 5-hydroxy- is known to improve atopic dermatitis. It was confirmed that 6,7-dimethoxyphthalide was contained only in Ceriporia lamaritus culture. In addition, it was confirmed that the inorganic components such as vitamins, magnesium, and calcium, glutamine and vitamins were significantly contained in the Ceriporia lamaritus culture as compared to the Ceriporia racerata culture.
이를 통해, 본 발명의 세리포리아 라마리투스 배양물에는 아토피 피부염 개선 또는 치료에 효과적인 다양한 유효성분들이 다량으로 함유되어 있음을 알 수 있었다. Through this, it was found that the Ceriporia lamaritus culture of the present invention contains a large amount of various effective ingredients effective for improving or treating atopic dermatitis.
<실시예 3. 세리포리아 라마리투스 배양물의 피부 수분 손실 개선 효과 확인><Example 3. Confirmation of the improvement effect of skin moisture loss of the culture of Seriphoria lamaritus>
일반적으로 아토피 피부염은 피부 장벽이 무너져 보습이 잘 되지 않고, 수분이 손실되는 특징을 가진다. 이에, 본 발명의 세리포리아 라마리투스 배양물의 경피수분 손실량(trans epidermal water loss, TEWL) 및 피부 수분도(stratum corneum hydration, SCH) 측정을 통해 피부의 수분 손실 정도를 분석함으로써 아토피 피부염 치료 효과를 확인하였다.In general, atopic dermatitis is characterized by a loss of moisture due to the collapse of the skin barrier and poor moisturization. Accordingly, the effect of treating atopic dermatitis by analyzing the degree of water loss of the skin by measuring trans epidermal water loss (TEWL) and stratum corneum hydration (SCH) of the culture of the Seriporia lamaritus culture of the present invention It was confirmed.
피부 타입이 중성인 5명의 여성 피험자를 대상으로 시험을 실시하였다. 시판 중인 한국산 A사의 바디로션을 구입하여, 바디로션 100㎖ 당 상기 실시예 1에서 제조한 세리포리아 라마리투스 배양물 또는 세리포리아 라세라타 배양물을 각각 5㎖씩을 첨가하여 혼합한 후, 피험자들에게 20㎖씩 지급하였고, 아무것도 첨가하지 않은 바디로션 20㎖씩을 함께 지급하였다. 사용 방법은 1일 2회, 아침과 저녁에 손 세척 후, 손등과 팔뚝에 1회에 0.5㎖씩 도포하도록 하였다. 오른쪽 팔뚝에는 아무것도 도포하지 않고, 왼쪽 팔뚝에는 바디로션을, 오른쪽 손등에는 세리포리아 라세라타 배양물이 포함된 바디로션을, 왼쪽 손등에는 세리포리아 라마리투스 배양물이 포함된 바디로션을 도포하였다. The test was conducted on five female subjects of neutral skin type. Purchasing a body lotion of a commercially available A company in Korea, and after mixing each of the culture lotion culture medium prepared in Example 1 or 5 ml each of the Ceriporia las cerata culture prepared in Example 1 per 100 ml The subjects were given 20 ml each, and 20 ml of body lotion was added. The method was used twice a day, after washing hands in the morning and evening, 0.5ml each time applied to the back of the hand and forearm. Apply nothing to the right forearm, the body lotion to the left forearm, the body lotion containing the Seriphoria racerata culture on the back of the right hand, and the body lotion containing the culture of Seriphoria lamaritus on the back of the left hand. Applied.
피부 수분 손실 개선 효과를 확인하기 위해, 상기 각각의 바디로션을 5일 동안 도포하고, 6일째 바디로션을 도포하지 않은 상태에서 피부장벽 측정기인 지피스킨 베리어(gpskin barrier)(지파워사, 한국)를 이용해 경피수분 손실량(TEWL) 및 피부 수분도(SCH)를 측정하였고, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다. In order to confirm the effect of improving skin moisture loss, each of the body lotion was applied for 5 days, and the body barrier measuring device was applied without a skin lotion on the 6th day, a gpskin barrier (gppower barrier, Korea) Transdermal moisture loss (TEWL) and skin moisture content (SCH) were measured using the results, and the results are shown in Table 2 below.
상기 표 2에서 보듯이, 모든 피험자들에서 바디로션 또는 세리포리아 라세라타 배양물이 포함된 바디로션을 도포한 경우에 비해, 세리포리아 라마리투스 배양물이 포함된 바디로션을 도포한 경우에 경피수분 손실량이 낮고, 피부 수분도는 높게 유지되는 것을 확인하였다. As shown in Table 2, compared to the case of applying a body lotion or a body lotion containing a Ceriporia racerata culture in all subjects, a body lotion containing a Ceriporia lamaritus culture was applied. In this case, the amount of transdermal moisture loss was low, and the skin moisture content was maintained to be high.
이를 통해, 본 발명의 세리포리아 라마리투스 배양물이 기존에 보습 효과가 있다고 알려진 세리포리아 라세라타 배양물에 비해 현저히 우수한 피부 수분 손실 개선 효과를 가짐으로써 우수한 아토피 피부염 개선 또는 치료 효과가 있음을 알 수 있었다. Through this, the Ceriporia lamaritus culture of the present invention has a remarkably superior skin moisture loss improvement effect compared to the Ceriporia racerata culture known to have a moisturizing effect, thereby improving or treating atopic dermatitis. I could see that.
<실시예 4. 세리포리아 라마리투스 배양물의 아토피 피부염 개선 효과 확인><Example 4. Confirmation of atopic dermatitis improvement effect of Ceriporia lamaritus culture>
아토피 피부염 모델인 NC/Nga 마우스를 이용하여 본 발명의 세리포리아 라마리투스 배양물의 아토피 피부염 치료 또는 개선 효과를 확인하였다. NC / Nga mice, which are atopic dermatitis models, were used to confirm the atopic dermatitis treatment or amelioration effect of the culture of the present invention.
중앙실험동물에서 구입한 5중령의 암컷 NC/Nga 마우스는 처리 그룹당 3마리씩 무작위적으로 배정하였다. 마우스를 제모 크림을 사용하여 털을 제거한 후 5일 동안 안정화시켰다. 이후, 아무것도 처리하지 않은 처리그룹은 정상군으로 하고, 나머지 처리그룹에는 주 당 3회씩 2주 동안 아세톤 및 올리브오일이 3:1 부피비로 혼합된 용매에 녹인 1% DNCB(dinitrochlorobenzene)를 200㎕씩 도포하여 아토피 피부염을 유발하였다. 아토피 피부염 유도 후, 1일 1회씩 2주 동안 세리포리아 라세라타 배양물 10㎎/㎏(실험군-1) 또는 상기 실시예 1에서 제조한 세리포리아 라마리투스 배양물 5㎎/㎏(실험군-2) 또는 10㎎/㎏(실험군-3)을 각각 도포하였다. 양성대조군은 아토피 피부염 치료제로 사용 중인 타크로리무스(tacrolimus)을 10㎎/㎏로 도포하였고, 음성대조군은 아토피 피부염 유발 후 아무것도 도포하지 않았다. 처리가 끝난 후 희생시킨 마우스의 심장에서 혈액을 채취하여 혈청을 분리하고, IgE ELISA kit(BD Biosceinces사, 미국)를 이용하여 제조사의 매뉴얼에 따라 혈청 내 IgE를 측정하였다. DNCB를 처리하여 아토피 피부염을 유발한 음성대조군의 IgE를 100% 기준으로 하여 각각의 처리그룹의 상대적인 IgE 비율(%)을 계산하였고, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다. Five NC female N / Nga mice purchased from the central experimental animals were randomly assigned to three rats per treatment group. Mice were stabilized for 5 days after hair removal using hair removal cream. Thereafter, the treated group treated with nothing was treated as a normal group, and 200 µl of 1% DNCB (dinitrochlorobenzene) dissolved in a solvent mixed with acetone and olive oil in a volume ratio of 3: 1 for two weeks, three times a week. Application resulted in atopic dermatitis. After induction of atopic dermatitis, Ceriporia racerata culture 10 mg / kg (Experimental Group-1) or Ceriporia lamaritus culture prepared in Example 1 5 mg / kg ( Experimental Group-2) or 10 mg / kg (Experimental Group-3) were applied respectively. The positive control group applied tacrolimus (10 mg / kg) used as atopic dermatitis treatment, and the negative control group applied nothing after induction of atopic dermatitis. After treatment, blood was collected from the heart of the sacrificed mice to separate serum, and serum IgE was measured according to the manufacturer's manual using an IgE ELISA kit (BD Biosceinces, USA). The relative IgE ratio (%) of each treatment group was calculated based on the IgE of the negative control group that induced atopic dermatitis by DNCB treatment, and the results are shown in Table 3 below.
상기 표 3에서 보듯이, DNCB만을 도포한 음성대조군에 비해 아토피 피부염 치료제인 타크로리무스를 도포한 양성대조군의 혈청 내 IgE가 67%로 감소하였다. 또한, 세리포리아 라세라타 배양물 또는 세리포리아 라마리투스 배양물을 도포한 실험군-1 내지 실험군-3의 혈청 내 IgE도 각각 36%, 32%, 26%로 감소하였고, 이는 음성대조군에 비해 2.5배 이상 낮은 수치임을 확인하였다. 특히나, 세리포리아 라마리투스 배양물 10㎎/㎏을 도포한 실험군-3의 혈청 내 IgE는 26%로 동일한 양의 세리포리아 라세타라 배양물을 도포한 실험군-1의 36%에 비해서도 혈청 내 IgE가 더 많이 감소하는 것을 확인하였다. As shown in Table 3, the serum IgE of the positive control group coated with tacrolimus, a therapeutic agent for atopic dermatitis, was reduced to 67% compared to the negative control group coated with DNCB only. In addition, serum IgE of Experimental Group-1 to Experiment-3, which was coated with either Ceriporia racerata culture or Ceriporia lamaritus culture, was reduced to 36%, 32% and 26%, respectively, which was negative control. It was confirmed that the value is more than 2.5 times lower than. In particular, the serum IgE of Test Group-3, which was coated with Ceriporia lamaritus culture 10 mg / kg, was 26%, compared to 36% of Test Group-1, which was applied with the same amount of Ceriporia Lacetara culture. I found that my IgE decreased more.
이를 통해, 본 발명의 세리포리아 라마리투스 배양물이 세리포리아 라세라타 배양물에 비해 현저히 우수한 아토피 피부염 치료 또는 개선 효과가 있음을 알 수 있었고, 이는 세리포리아 라마리투스 배양물에 포함되어 있는 아토피 피부염 개선 효과가 있는 5-하이드록시-6,7-디메톡시프탈라이드에 의한 영향임을 예측할 수 있었다. Through this, it can be seen that the seriporia lamaritus culture of the present invention has a remarkably superior atopic dermatitis treatment or improvement effect than the seriporia laseriata culture, It can be predicted that the effect of the included 5-hydroxy-6,7-dimethoxyphthalide to improve atopic dermatitis.
Claims (10)
상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물은 모균주인 세리포리아 라세라타 균주 배양물 대비 글루타민 및 알루미늄으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 신규로 포함하는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학 조성물. The method of claim 1,
Said Seriphoria lamaritus strain culture is prevented or treated for atopic dermatitis, characterized in that it comprises one or more selected from the group consisting of glutamine and aluminum compared to the Seriphoria racerata strain culture as a parent strain Pharmaceutical composition for.
상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물은 모균주인 세리포리아 라세라타 균주 배양물 대비 비타민, 마그네슘 및 칼슘으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 함유량이 4배 이상 증가되어 있는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학 조성물. The method of claim 1,
The culture culture of Seriphoria lamaritus is characterized in that the content of at least one species selected from the group consisting of vitamins, magnesium and calcium compared to the culture culture of Seriphoria racerata strains of the parent strain four times or more. Pharmaceutical composition for preventing or treating atopic dermatitis.
상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물은 피부의 경피수분 손실량 감소 또는 피부 수분도 증가 효과가 있는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학 조성물. The method according to any one of claims 1 to 3,
Said Seriphoria lamaritus strain culture is a pharmaceutical composition for preventing or treating atopic dermatitis, characterized in that the effect of reducing the transdermal moisture loss of the skin or increase the skin moisture.
상기 약학 조성물은 피부 외용제인 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학 조성물. The method according to any one of claims 1 to 3,
The pharmaceutical composition is a pharmaceutical composition for preventing or treating atopic dermatitis, characterized in that the external preparation for the skin.
상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물은 모균주인 세리포리아 라세라타 균주 배양물 대비 글루타민 및 알루미늄으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 신규로 포함하는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물. The method of claim 6,
Said Seriphoria lamaritus strain culture is a cosmetics for improving atopic dermatitis, characterized in that it comprises a new strain at least one selected from the group consisting of glutamine and aluminum compared to the culture strain of Seriphoria racerata strain Composition.
상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물은 모균주인 세리포리아 라세라타 균주 배양물 대비 비타민, 마그네슘 및 칼슘으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 함유량이 4배 이상 증가되어 있는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물. The method of claim 6,
The culture culture of Seriphoria lamaritus is characterized in that the content of at least one species selected from the group consisting of vitamins, magnesium and calcium compared to the culture culture of Seriphoria racerata strains of the parent strain four times or more. Cosmetic composition for improving atopic dermatitis.
상기 세리포리아 라마리투스 균주 배양물은 피부의 경피수분 손실량 감소 또는 피부 수분도 증가 효과가 있는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물.The method according to any one of claims 6 to 8,
Said Seriphoria lamaritus strain culture is a cosmetic composition for improving atopic dermatitis, characterized in that the effect of reducing the transdermal moisture loss of the skin or increase the skin moisture.
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