KR102015452B1 - 섬기린초 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 조성물 및 여드름 예방, 개선 또는 치료용 조성물 - Google Patents

섬기린초 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 조성물 및 여드름 예방, 개선 또는 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 섬기린초 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 조성물 및 여드름 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 섬기린초 추출물; 또는 4,6-디-O-갈로일-알부틴(4,6-di-O-galloylarbutin), 2,4,6-트리-O-갈로일-베타-글루코스(2,4,6-tri-O-galloyl-β-glucose), 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스(1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-glucose) 및 이들의 염으로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물;을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 조성물 및 여드름 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 조성물은 섬기린초 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유함으로써 인체에 안전하게 적용할 수 있으며, 피부 세포의 콜라겐 생합성을 촉진하고, 콜라겐 분해에 관여하는 콜라게나제의 발현을 억제하며, 엘라스틴 분해에 관여하는 엘라스타제 활성을 억제할 뿐만 아니라, 피부 보습에 중요한 히알루론산 생합성 유전자 발현 및 히알루로니다제 억제에 우수한 효과가 있고, 에스트로겐 수용체 결합 활성이 있어 보다 우수한 피부 주름 개선 및 피부 탄력 증진 효과를 나타낼 수 있다. 또한 본 발명의 조성물은 우수한 항염증 및 여드름 원인균에 대한 항균 활성이 있어 여드름을 효과적으로 예방, 개선 또는 치료할 수 있다.

Description

섬기린초 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 조성물 및 여드름 예방, 개선 또는 치료용 조성물{Composition for improving skin winkle or enhancing skin elasticity and for preventing, improving or treating acne containing Sedum takesimense Nakai extract or compound isolated therefrom}
본 발명은 섬기린초 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 조성물 및 여드름 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 섬기린초 추출물; 또는 4,6-디-O-갈로일-알부틴(4,6-di-O-galloylarbutin), 2,4,6-트리-O-갈로일-베타-글루코스(2,4,6-tri-O-galloyl-β-glucose), 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스(1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-glucose) 및 이들의 염으로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물;을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 조성물 및 여드름 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
피부는 인체의 최외각에 존재하는 기관으로 성인의 경우, 몸무게의 약 7%를 차지하며, 온도 및 습도 변화와 자외선 등 인체를 외부의 환경으로부터 보호하는 역할을 한다. 그 외에도 면역세포를 이용하여 면역 반응을 수행, 수분의 증발 방지, 노폐물 분비 및 배설, 대사, 흡수 등의 다양한 기능을 가지고 있으므로 피부는 인체의 정상적인 생리활성을 유지하는데 핵심적 역할을 하고 있다.
그러나 피부는 우리 몸 중에서 노화 현상을 가장 쉽게 찾을 수 있는 부분이기도 하다. 스트레스, 햇빛, 대기오염, 담배 등의 외부환경에 노출되어 활성산소종(reactive oxygen species; ROS)이 발생하게 되고 이에 따라 과산화 지질이 생성되고 콜라겐, 탄력섬유(엘라스틴), 히알루론산(Hyaluronic acid), 섬유아세포의 감소를 야기하여 피부 노화가 촉진된다. 또한 나이가 들어감에 따라 피부 세포의 활성이 저하되면서 콜라겐과 엘라스틴의 생성 능력이 저하되고, 그 결과로 피부의 진피층이 파괴되면서 피부 내부 구조가 약해지고 피부가 얇아지게 되면서, 지방층이 엷은 얼굴에 주름의 형성이 촉진된다.
피부 노화에서 가장 두드러진 점은 피부 주름 생성이다. 피부 주름은 진피층과 관련이 깊으며, 특히 진피층에 존재하는 콜라겐(collagen)과 엘라스틴(elastin)이 중요한 인자로 알려져 있다. 따라서 주름 개선 문제에 가장 많이 이용되는 방법으로는 콜라겐 및 엘라스틴의 합성을 촉진하거나 또는 이들의 분해를 억제하여 주름 및 탄력을 개선하는 방법이 있다.
피부 주름 및 탄력 개선의 효과를 높이기 위해서는 피부 보습이 매우 중요하다. 피부의 보습이 적절히 유지될 경우 세포가 적절한 활성을 가지게 되는데, 이를 위해서 진피층의 수분량이 보존되어야 하며, 점다당질이 진피층 내 수분 보존의 중요한 역할을 수행하고 있다. 점다당질은 세포간질 부위에서 발견되며 자신의 부피보다 1000배나 많은 수분과 결합할 수 있는 능력이 있다. 진피층 내에서 가장 많은 점다당질은 히알루론산(Hyaluronic acid; HA), 헤파린(Heparin), 헤파린 설페이트(Heparin sulfate)와 콘드로이친 설페이트(Condroitin sulfate)가 있다.
현재까지 사용되고 있는 주름 예방 및 개선 화장료는 AHA(α-hydroxy aicd), 레티노익산(Retinoic Acid), 레티놀(Retinol), 비타민류 또는 그 유도체를 함유하는 제품이 대표적이었다. 그러나 진피층에서 피부 자체의 보습 능력을 회복시키면서 주름 개선을 촉진하여 피부 전반에 걸쳐 노화를 효과적으로 억제하기 위한 연구는 아직 미흡한 실정이다.
여드름 또한 피부에 발생하는 대표적인 문제 중 하나로 털을 만드는 모낭에 붙어있는 피지선에 염증이 발생하는 만성 염증성 질환이다. 면포, 구진, 고름물집, 결절, 거짓낭 등 다양한 피부 변화가 나타나며, 이의 후유증으로 흉터를 남기기도 한다. 호르몬의 불균형, 여드름균에 의한 모낭의 자극 또는 염증 반응 등 다양한 원인이 알려져 있다. 특히 외모에 민감한 사춘기에 주로 발생하며 자칫 흉터로 이어질 수도 있어 문제가 되고 있다.
여드름을 위한 다양한 치료방법과 관련 제품들이 개발되어 왔으나, 보다 효과적인 방법 또는 제품의 개발이 필요한 실정이다.
한편, 섬기린초(Sedum takesimense Nakai)는 울릉도, 독도 자생식물로서 세덤속의 돌나무과에 속하며 다년생 초본식물로서 관목으로 자라는 다육식물이다. 줄기 밑 부분은 30㎝ 정도가 겨울에 살아 있다가 다음해 봄에 싹이 나오고 줄기는 옆으로 비스듬히 뻗는다. 야생에서 자랄 때 높이는 50㎝ 정도 되며, 황색의 꽃은 지름 13㎜ 정도이고, 20 ~ 30 개의 꽃이 산방상으로 7월경에 핀다. 세덤속의 식물은 민간요법에서 암, 염증, 상처 및 저혈압과 같은 병의 치료제로 사용되었으며, 방사선 방호 효과 및 혈관 확장 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
섬기린초에 관한 종래기술로는 섬기린초로부터 분리한 아폽토시스(apoptosis) 저해 활성을 가지는 화합물 및 이의 분리방법(등록특허 제10-0571582호), 어류의 세균성 병원균에 대한 항균 조성물(등록특허 제10-1298184호), 섬기린초류 추출물을 유효성분으로 하는 항균 및 항산화 조성물(등록특허 제10-1333516호), 섬기린초 추출물을 유효성분으로 하는 식물병원성 세균에 항균성을 가지는 조성물(등록특허 제10-1330591호), 섬기린초에서 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 또는 피부 과색소성 질환의 예방 및 개선용 조성물(등록특허 제10-1749497호) 등의 기술들이 알려져 있으나, 섬기린초 추출물 및 섬기린초 유래 단일 화합물들의 피부 주름 개선, 피부 탄력 증진 또는 여드름 예방, 개선 또는 치료에 대한 활성 보고는 전무하였다.
대한민국 등록특허 제10-0571582호 대한민국 등록특허 제10-1298184호 대한민국 등록특허 제10-1330591호 대한민국 등록특허 제10-1333516호 대한민국 등록특허 제10-1749497호
따라서 본 발명의 주된 목적은 섬기린초 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유함으로써 인체에 안전하며 콜라겐 및 엘라스틴 생성을 촉진하거나 분해를 억제할 수 있을 뿐만 아니라 피부 보습 유지에도 도움을 줄 수 있어 보다 효과적으로 피부 주름을 개선하고 피부 탄력을 증진시킬 수 있는 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 섬기린초 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유함으로써 인체에 안전하며 과도한 염증반응을 억제하고 여드름 원인균에 대한 항균력을 나타내어 여드름 예방, 개선 또는 치료에 효과적인 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 섬기린초 추출물; 또는 4,6-디-O-갈로일-알부틴(4,6-di-O-galloylarbutin), 2,4,6-트리-O-갈로일-베타-글루코스(2,4,6-tri-O-galloyl-β-glucose), 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스(1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-glucose) 및 이들의 염으로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물;을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 화장료 조성물에 있어서, 상기 섬기린초 추출물은 섬기린초를 20 내지 80%(w/w) 에탄올로 15 내지 30시간 추출하고 농축하여 수득되는 것으로, 4,6-디-O-갈로일-알부틴(4,6-di-O-galloylarbutin), 2,4,6-트리-O-갈로일-베타-글루코스(2,4,6-tri-O-galloyl-β-glucose) 및 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스(1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-glucose)로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물을 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 섬기린초 추출물; 또는 4,6-디-O-갈로일-알부틴(4,6-di-O-galloylarbutin), 2,4,6-트리-O-갈로일-베타-글루코스(2,4,6-tri-O-galloyl-β-glucose), 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스(1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-glucose) 및 이들의 염으로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물;을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 식품 조성물에 있어서, 상기 섬기린초 추출물은 섬기린초를 20 내지 80%(w/w) 에탄올로 15 내지 30시간 추출하고 농축하여 수득되는 것으로, 4,6-디-O-갈로일-알부틴(4,6-di-O-galloylarbutin), 2,4,6-트리-O-갈로일-베타-글루코스(2,4,6-tri-O-galloyl-β-glucose) 및 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스(1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-glucose)로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물을 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 섬기린초 추출물; 또는 4,6-디-O-갈로일-알부틴(4,6-di-O-galloylarbutin), 2,4,6-트리-O-갈로일-베타-글루코스(2,4,6-tri-O-galloyl-β-glucose), 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스(1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-glucose) 및 이들의 염으로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물;을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 여드름 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 있어서, 상기 섬기린초 추출물은 섬기린초를 20 내지 80%(w/w) 에탄올로 15 내지 30시간 추출하고 농축하여 수득되는 것으로, 4,6-디-O-갈로일-알부틴(4,6-di-O-galloylarbutin), 2,4,6-트리-O-갈로일-베타-글루코스(2,4,6-tri-O-galloyl-β-glucose) 및 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스(1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-glucose)로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물을 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 섬기린초 추출물; 또는 4,6-디-O-갈로일-알부틴(4,6-di-O-galloylarbutin), 2,4,6-트리-O-갈로일-베타-글루코스(2,4,6-tri-O-galloyl-β-glucose), 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스(1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-glucose) 및 이들의 염으로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물;을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 여드름 예방 또는 개선용 식품 조성물에 있어서, 상기 섬기린초 추출물은 섬기린초를 20 내지 80%(w/w) 에탄올로 15 내지 30시간 추출하고 농축하여 수득되는 것으로, 4,6-디-O-갈로일-알부틴(4,6-di-O-galloylarbutin), 2,4,6-트리-O-갈로일-베타-글루코스(2,4,6-tri-O-galloyl-β-glucose) 및 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스(1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-glucose)로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물을 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 섬기린초 추출물; 또는 4,6-디-O-갈로일-알부틴(4,6-di-O-galloylarbutin), 2,4,6-트리-O-갈로일-베타-글루코스(2,4,6-tri-O-galloyl-β-glucose), 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스(1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-glucose) 및 이들의 염으로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물;을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 여드름 예방 또는 치료용 약학 조성물에 있어서, 상기 섬기린초 추출물은 섬기린초를 20 내지 80%(w/w) 에탄올로 15 내지 30시간 추출하고 농축하여 수득되는 것으로, 4,6-디-O-갈로일-알부틴(4,6-di-O-galloylarbutin), 2,4,6-트리-O-갈로일-베타-글루코스(2,4,6-tri-O-galloyl-β-glucose) 및 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스(1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-glucose)로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물을 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명의 조성물은 섬기린초 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유함으로써 인체에 안전하게 적용할 수 있으며, 피부 세포의 콜라겐 생합성을 촉진하고, 콜라겐 분해에 관여하는 콜라게나제의 발현을 억제하며, 엘라스틴 분해에 관여하는 엘라스타제 활성을 억제할 뿐만 아니라, 피부 보습에 중요한 히알루론산 생합성 유전자 발현 및 히알루로니다제 억제에 우수한 효과가 있고, 에스트로겐 수용체 결합 활성이 있어 보다 우수한 피부 주름 개선 및 피부 탄력 증진 효과를 나타낼 수 있다. 또한 본 발명의 조성물은 우수한 항염증 및 여드름 원인균에 대한 항균 활성이 있어 여드름을 효과적으로 예방, 개선 또는 치료할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 섬기린초 추출물로부터 본 발명의 화합물을 분리하기 위하여 고속액체크로마토그래피를 수행한 크로마토그램이다.
도 2는 섬기린초에서 분리한 본 발명 화합물들의 1H-NMR 스펙트럼 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 섬기린초에서 분리한 본 발명 화합물들의 구조를 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 일실시예에 따른 섬기린초 추출물 및 섬기린초에서 분리한 화합물 1, 2, 3의 TNF-α, IL-1β, IL-8 저해활성을 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일실시예에 따른 섬기린초 추출물(a) 및 섬기린초에서 분리한 화합물 1(c), 2(d), 3(e)의 여드름 원인균에 대한 항균력 시험 결과를 나타낸 것이다. (b), 아젤라익산(대조구).
본 발명은 섬기린초 추출물과 섬기린초에서 분리한 화합물인 4,6-디-O-갈로일-알부틴(4,6-di-O-galloylarbutin), 2,4,6-트리-O-갈로일-베타-글루코스(2,4,6-tri-O- galloyl-β-glucose) 및 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스(1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-glucose)가 피부 세포의 콜라겐 생합성 촉진 효과, 피부 세포의 콜라게나제 발현 억제 효과, 엘라스타제 활성 억제 효과, 피부 세포의 히알루론산 생합성 유전자의 발현 촉진 효과, 히알루로니다제 활성 억제 효과, 에스트로겐 수용체에 대한 결합 활성, 염증 자극으로 인한 세포의 일산화질소 생성 억제 효과, 염증 자극으로 인한 세포의 염증성 사이토카인 생성 억제 효과 및 여드름 원인균에 대한 항균력을 나타낸다는 새로운 연구결과를 바탕으로 안출된 것이다.
본 발명의 섬기린초 추출물은 용매를 사용하는 당업계의 통상적인 식물추출방법으로 제조될 수 있다. 이때 용매로는 물, 탄소수 1 ~ 4의 알코올 중에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상이 혼합된 용매를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매를 사용하는 것이 좋고, 보다 바람직하게는 에탄올이 20 ~ 80%(w/w)인 물과 에탄올의 혼합용매, 보다 바람직하게는 에탄올이 30 ~ 60%(w/w)인 물과 에탄올의 혼합용매를 사용하는 것이 좋다. 용매의 양은 섬기린초 1kg당 0.1 ~ 100kg의 비율로 할 수 있으며, 바람직하게는 섬기린초 1kg당 1 ~ 50kg의 비율, 보다 바람직하게는 섬기린초 1kg당 5 ~ 12kg의 비율로 하는 것이 좋다. 추출온도는 0 ~ 100℃로 할 수 있으며, 바람직하게는 10 ~ 50℃로 하는 것이 좋고, 보다 바람직하게는 20 ~ 30℃로 하는 것이 좋다. 추출시간은 1시간 이상으로 할 수 있으며, 바람직하게는 12 ~ 48시간, 보다 바람직하게는 15 ~ 30시간이 좋다. 이에 따르면 상기와 같이 효과를 갖는 추출물을 제조할 수 있을 것이다.
상기 추출에 사용되는 섬기린초는 전초를 사용하는 것이 바람직하나 이에 제한되는 것은 아니다. 또한 재배한 것 또는 시판되는 것에 제한 없이 사용할 수 있으며, 건조된 것, 건조하지 않은 것에 제한 없이 사용할 수 있다.
본 발명의 섬기린초 화합물들은 상기와 같은 방법으로 제조된 섬기린초 추출물을 실리카겔(Kiesel gel 60) 수지를 이용하고 클로로포름(chloroform), 메탄올(methanol), 증류수(distilled water) 및 초산(acetic acid)의 혼합 용액을 용리 용매로 하여 1차 분취하고, Sephadex LH-20 수지를 이용하고 메탄올을 용리 용매로 하여 2차 분취한 후, 역상칼럼 및 물과 아세톤나이트릴 농도 구배를 이용한 고속액체크로마토그래피를 통해 수득할 수 있다.
본 발명의 섬기린초 추출물 및 화합물은 의약품, 식품, 화장품 등의 용도로 사용할 수 있다.
이때, 본 발명의 추출물 및 화합물은 식품의약안전처의 통상적인 약제학적 제제로의 제형화 기준 또는 식품이나 화장품의 제형 기준에 의거하여 제형화할 수 있다.
본 발명의 화합물은 그 자체를 사용하거나 약제학적, 식품학적 또는 화장품학적으로 허용이 가능한 산부가염 또는 금속 복합체, 예를 들어 아연, 철 등과 같은 염의 형태로 사용할 수 있다. 좀더 구체적으로 산부가염은 염화수소, 브롬화수소, 황산염, 인산염, 말레산염, 아세트염, 시트로산염, 벤조산염, 숙신산염, 말린산염, 아스코로브산염, 타르탈산염을 사용할 수 있다.
본 발명의 추출물 또는 화합물을 유효성분으로 함유하는 약학 조성물은 통상적인 방법으로, 투여방법, 투여형태 및 치료목적에 따라 상기 유효성분을 약제학적으로 허용 가능한 담체와 함께 혼합하여 희석하거나, 용기 형태의 담체 내에 봉입시켜 제형화할 수 있다.
상기 담체가 희석제로 사용되는 경우에는 염수, 완충제, 덱스트로스, 물, 글리세롤, 링거액, 락토즈, 수크로즈, 칼슘 실리케이트, 메틸 셀룰로오즈 및 에탄올로 이루어진 군에서 선택된 적어도 1종 이상의 담체를 사용한 경구투여와 비경구투여용으로 분말, 과립, 주사액, 시럽, 용액제, 정제, 좌약, 페사리(pessaries), 연고, 크림 또는 에어로졸 등과 같은 제형으로 제조할 수 있다. 다만, 본 발명의 담체가 상기의 담체로 한정되는 것은 아니다. 이때, 비경구 투여는 경구 이외에 직장, 정맥, 복막, 근육, 동맥, 경피, 비강, 흡입 등을 통한 유효성분의 투여를 의미한다.
상기 제형에 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함하여 포유동물에 투여된 후 활성성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 제형화 할 수 있다. 그리고 본 발명의 투여량은 환자의 상태, 투여 경로 및 투여 형태에 따라 조절될 수 있어 한정되지 않으며 증상에 따라 본 발명의 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 자명하게 다양한 범위 내에서 사용할 수 있으나, 통상적으로 본 발명에서는 실험적인 유효량으로 체중 1㎏ 당 1 내지 100㎎을 하루에 연속적 또는 간헐적으로 투여가 가능할 것으로 판단된다.
상기 본 발명의 추출물 및 화합물의 유효량을 기준으로, 본 발명은 본 발명의 추출물 및 화합물 그 자체 또는 화장품학적으로 허용된 담체를 혼합한 화장료 조성물을 제공하는데, 상기 화장료 조성물은 화장수, 영양로션, 영양크림, 맛사지 크림, 팩 및 영양 에센스 등의 화장품 형태로 제조되어 사용될 수 있다.
또한, 상기 본 발명의 추출물 및 화합물의 유효량을 기준으로, 본 발명은 본 발명의 추출물 및 화합물 그 자체 또는 식품학적으로 허용된 담체를 포함하는 식품 조성물을 제공하는데, 상기 식품 조성물은 식육가공품, 어육제품, 두부, 묵, 죽, 라면이나 국수 등의 면류, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등의 조미식품, 소스, 과자, 발효유나 치즈 등의 유가공품, 김치나 장아찌 등의 절임식품, 과실, 채소, 두유, 발효음료 등의 음료수의 식품에 포함하여 사용할 수 있다. 식품학적으로 허용된 담체는 약제학적으로 허용된 담체도 사용할 수 있다.
이하, 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예 및 실험예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.
실시예 1. 섬기린초 추출물 제조 및 유효성분 동정
1-1. 섬기린초 추출물 제조
섬기린초 식물 전초를 70 ~ 90℃의 오븐에서 1 ~ 4일 동안 완전히 건조시킨 후, 상기 건조된 섬기린초 1kg당 5 ~ 12kg 비율의 20 ~ 80%(w/w) 에탄올 용액을 용매로 사용하여 15 ~ 30시간 동안 실온에서 추출하고, 생성된 추출물을 여과지로 거른 여액을 감압 농축하였다.
1-2. 유효성분 분리 및 구조 동정
상기 1-1에서 고형분 10g의 추출물 여과 여액에 실리카겔(Kiesel gel 60) 수지 150g을 첨가하고 용매가 완전히 제거되도록 감압 농축한 다음 오픈 컬럼(open column)에 채우고 클로로포름(chloroform), 메탄올(methanol), 증류수(distilled water) 및 초산(acetic acid)을 55 : 36 : 8 : 1의 부피비로 혼합한 용리 용매로 1차 분취하여 항염증, 피부 보습 및 피부 주름개선 활성을 나타내는 물질 3.5g을 분획하였다.
상기 1차 분취를 통해 수득한 분액을 Sephadex LH-20 수지 150g이 담긴 오픈 컬럼에 로딩한 다음 메탄올로 용리하는 2차 분취로 항염증, 피부 보습 및 피부 주름개선 활성을 나타내는 분획 1.5g을 획득하였다.
상기 2차 분취를 통해 수득한 분액을 분취용 YMC ODS-A (250 x 20mm, 5㎛) 역상칼럼을 장착한 Waters사의 고속액체크로마토그래피 시스템에 적용하여 물과 아세톤나이트릴 농도 구배로 분당 15㎖의 조건으로 용리하였다.
용리되는 물질을 자외선 파장 270㎚로 검출한 결과, 도 1에서와 같이 화합물 1은 14.33분, 화합물 2는 14.67분, 화합물 3은 15.12분에 용리되는 것을 확인하였고, 이들 피크(peak)들을 분취하여 각각 25㎎, 20㎎, 215㎎의 단일 화합물을 확보하였다.
상기와 같이 분리된 모든 화합물은 다음 실험을 위하여 냉장 보관하였다.
분리한 화합물들을 대상으로 LC-MS, 1H-NMR, 13C-NMR과 같은 스펙트럼 분석을 수행하였으며, 이 결과와 문헌자료에서 보고한 분석 값을 비교하여 구조를 확인한 결과, 도 3에서와 같이 분리된 화합물들은 갈릭산(gallic acid)과 그 유도체로서 가수분해 가능한 탄닌(tannin)류에 속하며, 유도체는 2 ~ 4개가 갈로일화(galloylation)된 갈로일알부틴(galloyarbutin)과 갈로일글루코스(galloylglucose)로 구성되는 것을 확인할 수 있었으며, 최종 표 1과 같은 화합물(도 3의 구조 참조)임을 확인하였다.
구분 화합물명
화합물 1 4,6-디-O-갈로일-알부틴(4,6-di-O-galloylarbutin)
화합물 2 2,4,6-트리-O-갈로일-베타-글루코스(2,4,6-tri-O-galloyl-β-glucose)
화합물 3 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스(1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-glucose)
실험예 1. 섬기린초 추출물의 세포독성 시험
안전성을 확인하기 위하여 성인 피부에서 유래한 피부 섬유아세포(human dermal fibroblast cell)와 쥐의 대식세포에서 유래한 RAW 264.7 cell line을 사용하였다. 사람 피부 섬유아세포의 경우 100㎟ culture dish에 1×106 cells/dish로 접종하였고 RAW 264.7 cell line은 3×106 cells/dish로 접종한 후, 페니실린(100 IU/㎖), 스트렙토마이신(100㎍/㎖), 10% fetal bovine serum(FBS)을 함유하는 Dulbecco's Modified Eagle's medium(DMEM) 배지를 넣고, 37℃, 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기에서 배양하였다. 세포독성은 water-soluble tetrazolium salts(WST-1) 분석법으로 측정하였다. WST-1 분석법은 세포 내 미토콘드리아의 전자전달계에 존재하는 탈수소효소인 succinatetetrazolium reductase에 의하여 얻은 붉은색을 띄는 수용성 기질인 WST-1을 적자색을 띄는 formazan(3-(4,5-dimethylthizol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)으로 환원시키는 능력을 측정하는 실험법이다.
본 실험은 3회 반복하였으며, 계산식 1을 이용하여 각 실험의 흡광도 감소율을 분석하였고, 세포독성이 50%일 때 시료의 농도(Lethal dose 50)값을 계산하였다.
[계산식 1]
Figure 112018071602122-pat00001
상기 실시예 1에서 40% 에탄올로 추출하고 추가로 탈색 및 탈향을 거쳐 화장품으로 제형화한 추출물을 PBS에 현탁하여 실험 샘플로 사용하였다. 이때 탈색 및 탈향은 실시예 1의 추출물에 40% 에탄올을 첨가하여 추출물의 농도가 20%가 되도록 한 다음 활성탄을 5%(w/w)로 첨가하고 30℃에서 1시간동안 진탕한 후 필터로 여과하여 활성탄을 제거하는 방법으로 수행하였다.
이의 결과, 표 2에서와 같이 human dermal fibroblast cell에 대해서 샘플 10㎎/㎖ 처리군에서 87.7%의 세포독성을 나타냈으며, 1㎍/㎖에서 13.78%의 세포독성을 나타내었다. LD50 값은 4.51㎎/㎖로 나타났다.
또한 쥐의 대식세포에서 유래한 RAW 264.7 cell에 대해서는 10㎎/㎖에서 93.11%의 세포독성을 나타냈으며, 1㎍/㎖에서 0.77%의 세포독성을 나타내었다. LD50값은 5.49㎎/㎖로 나타났다.
상기와 같이 두 가지 세포에 대한 LD50값이 모두 1% 이상의 농도이므로, 세포독성 면에서 매우 안전한 것으로 판단된다.
섬기린초 추출물의 세포독성테스트
cell line 샘플 농도
10㎎/㎖ 1㎎/㎖ 100㎍/㎖ 10㎍/㎖ 1㎍/㎖ 100ng/㎖ 10ng/㎖
Human dermal fibroblast 87.70% 25.85% 10.36% 9.37% 13.78% 12.02% 20.01%
RAW 264.7 93.11% 7.07% -7.61% 14.57% 0.77% -1.97% -3.02%
실험예 2. 세포내 콜라겐 생합성 촉진 효과 시험
세포내 콜라겐 생합성 시험의 주요 조작법은 식약청 가이드라인에 따라 실시하였다. 성인 피부에서 유래한 피부 섬유아세포(human fibroblast cell)를 96-well microplate에 분주한 후, 5% FBS(fetal bovine serum)를 함유하는 배지에 5% CO2, 37℃ 조건 하에 24시간 동안 배양하였다. 10% PBS(phosphate buffer saline)로 1회 세척하여 배양된 섬유아세포와 1% FBS를 함유하는 배지에 상기 실시예 1-1의 추출물(40% 에탄올 추출물) 또는 1-2의 화합물을 농도별로 처리한 후, 5% CO2, 37℃ 조건 하에 24시간 동안 배양하였다.
세포 배양액 내 콜라겐 합성량은 procollagen type I peptide EIA kit(Takara Biomedical Co.)를 사용하여 측정하였다. Antibody-POD conjugate solution 100㎕를 각 well에 넣은 다음 희석한 배양액 및 standard 20㎕를 넣고 37℃에서 3시간 배양하고 반응이 끝나면 각 well에 배양액을 제거한 뒤 400㎕ PBS 버퍼로 4회 세척하였으며, 기질용액 100㎕를 첨가하고 상온에서 15분간 반응시켰다. 1N H2SO4 100㎕를 첨가하여 반응을 중지시키고 ELISA reader로 450nm에서 흡광도를 측정하여 표준농도곡선과 콜라겐 양을 확인하였다. 이의 결과는 표 3과 같다.
섬기린초 추출물과 유효성분의 세포내 콜라겐 생합성 촉진
무처리 Vitamin C 섬기린초 추출물 화합물 1 화합물 2 화합물 3
콜라겐 생성량(%) 100 140 162 183 204 220
※ 처리 시료 농도 : 100㎍/㎖
실험결과 섬기린초 추출물과 섬기린초에서 분리한 화합물 1, 2, 3을 처리한 실험군에서 무처리 대비 62 ~ 120%로 콜라겐 생성량이 증가한 것을 확인하였다. 이는 동일 농도의 vitamin C 보다 약 50 ~ 300% 이상 효과적인 것으로 섬기린초 추출물 및 섬기린초에서 분리한 화합물 1, 2, 3이 피부 콜라겐 생합성 촉진 소재로 우수하다는 것을 의미한다.
실험예 3. 콜라게나제(MMP-1) 발현 억제 효과 시험
세포내 콜라게나제(MMP-1; Matrix metalloproteinase-1) 발현 억제 시험의 주요 조작법은 식약청 가이드라인에 따라 실시하였다. 성인 피부에서 유래한 피부 섬유아세포(human fibroblast cell)를 96-well microplate에 분주한 후, 5% FBS(fetal bovine serum)를 함유하는 배지에 5% CO2, 37℃ 조건 하에 24시간 동안 배양하였다. 10% PBS로 1회 세척하여 배양된 섬유아세포와 1% FBS를 함유하는 배지에 상기 실시예 1-1의 추출물(40% 에탄올 추출물) 또는 1-2의 화합물을 농도별로 처리한 후, 5% CO2, 37℃ 조건 하에 24시간 동안 배양하였다. 50mM potassium phosphate액(pH 6.6) 100㎕를 각 well에 넣은 다음 1/5로 희석한 배양액 및 standard 각 100㎕를 넣고 상온에서 2시간 배양하였다. 각 well에서 배양액을 제거한 다음 세척용 완충액 400㎕로 3회 씻고 antiserum 100㎕를 넣어 상온에서 2시간 반응시킨 다음 세척용 완충액 400㎕로 3회 씻었다. Peroxidase conjugate solution 100㎕를 넣고 상온에서 2시간 반응시킨 다음 PBS 400㎕로 3회 씻고 TMB substrate 100㎕를 넣어 상온에서 30분간 반응시켰다. 1M H2SO4 100㎕를 첨가하여 반응을 중지하고 ELISA reader로 450nm에서 흡광도를 측정하여 표준농도곡선과 콜라게나제(MMP-1) 발현 억제를 확인하였다. 이의 결과는 표 4와 같다.
섬기린초 추출물 및 섬기린초 화합물 1, 2, 3의 콜라게나제(MMP-1) 발현 억제
무처리 EGCG 섬기린초 추출물 화합물 1 화합물 2 화합물 3
MMP-1 발현 억제(%) 0 45 90 82 92 98
※ 처리 시료 농도 : 100㎍/㎖ / EGCG(Epigallocatechin gallate) : 100㎍/㎖
섬기린초 추출물과 섬기린초에서 분리한 화합물 1, 2, 3을 섬유아세포에 처리한 결과, 무처리 대비 82 ~ 98% 콜라게나제(MMP-1) 발현이 억제되었다. 이는 기존에 알려진 콜라게나제(MMP-1) 저해제인 EGCG(epigallocatechin gallate) 보다 82 ~ 117% 더 효과적인 것이다.
실험예 4. 엘라스타제(MMP-12) 활성 억제 효과 시험
사용된 엘라스타제(MMP-12; Matrix metalloproteinase-12)는 돼지 췌장으로부터 추출된 것으로 시그마(Sigma)사에서 구매하였다. 이 시험법은 췌장 엘라스타제에 의한 합성 펩티드 기질(Sigma)의 가수분해에 기반을 둔 것으로, 단위 시간당 4-니트로아닐린(4-nitroanilide)의 방출량의 증가를 엘라스타제의 촉매 활성치로 하여 광파장 410nm에서 흡광도를 측정해 저해율을 구하였다.
상기 실시예 1-1의 추출물(40% 에탄올 추출물) 또는 1-2의 화합물을 1㎎/㎖의 농도가 되도록 조제한 후 40㎕씩 취하고 여기에 50mM Tris-HCl buffer(pH 8.6)에 녹인 proporcine pancreas elastase(2.5U/㎖)용액 40㎕를 첨가하였다. 50mM Tris-HCl buffer(pH 8.6)에 녹인 N-succinyl-tri-L-alanine-4-nitroanilide(0.5㎎/㎖)을 80㎕ 첨가하여 37℃에서 30분간 반응시키고 기질로부터 생성되는 4-니트로아닐린의 생성량은 410nm에서 흡광도를 측정하여 표준농도곡선과 엘라스타제(MMP-12) 활성 억제를 확인하였다. 계산식 2에 의해 엘라스타제 저해 정도를 계산하였다. 이의 결과는 표 5와 같다.
[계산식 2]
Figure 112018071602122-pat00002
섬기린초 추출물 및 섬기린초 화합물 1, 2, 3의 엘라스타제(MMP-12) 활성 억제
무처리 EGCG 섬기린초 추출물 화합물 1 화합물 2 화합물 3
엘라스타제 저해율(%) 0 32 52 62 73 82
※ 처리 시료 농도 : 100㎍/㎖ / EGCG(Epigallocatechin gallate) : 100㎍/㎖
엘라스타제(MMP-12) 활성 측정 결과, 섬기린초 추출물 및 섬기린초에 분리한 화합물 1, 2, 3은 무처리군 대비 52 ~ 82% 엘라스타제(MMP-12) 활성을 억제하였으며, 양성 대조군인 EGCG 보다 62 ~ 156% 강한 활성을 갖는 것으로 나타났다.
실험예 5. 히알루론산 생합성 유전자 발현 촉진 효과 시험
성인 피부에서 유래한 피부 섬유아세포(human dermal fibroblast cell)를 10% FBS을 포함한 DMEM 배지에서 24시간 배양 후, FBS가 포함되지 않은 DMEM 배지로 2회 세척하고 다시 12시간 동안 배양하여 우혈청의 영향을 제거하였다. FBS를 포함하지 않은 DMEM 배지로 상기 배지의 배양액을 교체하고 12시간 동안 상기 실시예 1-1의 추출물(40% 에탄올 추출물) 또는 1-2의 화합물을 처리하였다.
12시간 경과 후 세포를 회수하여 냉각된 PBS 용액으로 세척하고 RNA 분리 키트(Tri-reagent, Gibco BRL) 1㎖을 첨가하여 총 RNA를 추출한 후, GoScriptTM kit (Promega)를 이용하여 cDNA를 얻었다. Taqmanㄾ Gene Expression Assay kit (Thermo Fisher)와 합성된 cDNA를 이용하여, 히알루론산(hyaluronic acid) 생합성 유전자인 HAS-2(Hyaluronan synthase 2) 유전자 발현량을 측정하였고, GAPDH (Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) 유전자를 대조군으로 사용하였다. GAPDH의 발현량에 대한 HAS-2 유전자의 상대적 발현량을 표준화한 결과를 표 6에 종합하여 나타내었다.
섬기린초 추출물 및 섬기린초 화합물 1, 2, 3에 의한 HAS-2 발현량 변화
무처리 섬기린초 추출물 화합물 1 화합물 2 화합물 3
HAS-2(%) 100 131 150 165 179
※ 처리 시료 농도 : 100㎍/㎖
섬기린초 추출물 및 섬기린초에서 분리한 화합물 1, 2, 3 처리 후 섬유아세포에서 히알루론산 생합성 유전자 HAS-2가 무처리군 대비 31 ~ 79% 더 많이 발현되는 것으로 나타났다.
실험예 6. 히알루로니다제 억제 활성 시험
히알루로니다제(Hyaluronidase)의 억제 활성은 Morgan-Elson method에 의거하여 시험하였다. Bovine Hyaluronidase 50㎕(8㎎/㎖, 0.1M acetate buffer, pH 3.6)와 각각 상기 실시예 1-1의 추출물(40% 에탄올 추출물) 또는 1-2의 화합물 시료 50㎕를 섞은 후에 37℃에서 20분간 반응시키고 CaCl2 200㎕(12.5mM)를 넣어주고 다시 37℃에서 20분간 반응시켰다. Acetate buffer에 2.4㎎/㎖로 녹인 sodium hyaluronate를 250㎕ 넣어주고 다시 37℃에서 40분간 방치한 후 0.4M NaOH 100㎕와 0.4M potassium tetraborate 100㎕를 넣어주었다. 끓는 물에 3분간 담가둔 후 실온에 방치한 후에 DMAB 용액 1.5㎖를 첨가하고 다시 37℃에서 20분간 넣어두었다. 585nm에서 흡광도를 측정하여 히알루로니다제 저해제로 알려진 sodium cromoglycate(SCG)와 비교하였다. [계산식 3]에 의해 히알루로니다제의 억제 활성 정도를 계산하였다. 이의 결과는 표 7과 같다.
[계산식 3]
Figure 112018071602122-pat00003
섬기린초 추출물 및 섬기린초 화합물 1, 2, 3의 히알루로니다제 억제 활성
무처리 SCG 섬기린초 추출물 화합물 1 화합물 2 화합물 3
히알루로니다제
억제 활성(%)
0 15 35 55 59 72
※ 처리 시료 농도 : 100㎍/㎖
섬기린초 추출물 및 섬기린초에서 분리한 화합물 1, 2, 3은 무처리군 대비 35 ~ 72% 히알루로니다제 활성을 억제하며 이 활성은 히알루로니다제 저해제로 알려진 sodium cromoglycate 보다 2.3배 ~ 4.8배 더 높은 것으로 확인되었다.
실험예 7. 에스트로겐 수용체 결합 활성 시험
에스트로겐 수용체 결합 활성을 확인하기 위하여 Sandwich ELISA kit (Cloud-clone corp.)를 사용하여 에스트로겐 유사활성을 분석하였다. Estrogen capture antibody가 코팅된 96 well plate에 상기 실시예 1-1의 추출물(40% 에탄올 추출물) 또는 1-2의 화합물 시료와 detection antibody A를 각각 50㎕ 처리하여 37℃에서 1시간 배양하였다. 이후, 상층을 제거하고 wash solution으로 세척한 다음, 위와 동일한 방법으로 detection antibody B 100㎕ 처리하고, 세척하였다. TMB substrate 90㎕ 첨가하고 37℃에서 10분 반응한 후에 stop solution 50㎕ 처리하여 450nm에서 흡광도를 측정하여 에스트로겐의 결합 활성에 대한 상대적 결합력을 표준화하여 표 8에 나타내었다.
섬기린초 추출물 및 섬기린초 화합물 1, 2, 3의 에스트로겐 수용체 결합 활성
에스트로겐 섬기린초 추출물 화합물 1 화합물 2 화합물 3
에스트로겐 수용체
결합활성(%)
100 20 35 51 55
※ 처리 시료 농도 : 100㎍/㎖ / 에스트로겐 : 20ng/㎖
섬기린초 추출물 및 섬기린초에서 분리한 화합물 1, 2, 3의 에스트로겐 수용체 결합 활성을 측정한 결과, 20ng/㎖의 에스트로겐과 비교하였을 때 20 ~ 55% 정도 결합 활성이 있는 것으로 확인되었다.
실험예 8. NO(Nitric oxide) 생성 저해 활성 시험
RAW 264.7 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 1.5×105 cells/㎖로 조절한 후 24 well plate 에 접종하고, 상기 실시예 1-1의 추출물(40% 에탄올 추출물) 또는 1-2의 화합물 시료와 LPS(Lipopolysaccharide)(1㎍/㎖)를 동시에 처리하여 24시간 배양하였다. 생성된 NO의 양은 Griess 시약 (1%(v/v) sulfanilamide, 0.1%(v/v) naphylethylenediamine와 2.5%(v/v) phosphoric acid)을 이용하여 세포배양액 중에 존재하는 NO2-의 형태로 측정하였다. 세포배양 상등액 100㎕와 Griess 시약 100㎕를 혼합하여 96 well plates에서 10분 동안 반응시킨 후 540nm에서 흡광도를 측정하였고 생성된 NO의 양은 sodium nitrite(NaNO2)를 standard로 표준 농도 곡선을 작성하여 비교하였다. 이의 결과는 표 9와 같다.
섬기린초 추출물 및 섬기린초 화합물 1, 2, 3의 NO 생성 저해 활성
무처리 섬기린초 추출물 화합물 1 화합물 2 화합물 3
NO 저해 활성(%) 0 81 85 93 95
※ 처리 시료 농도 : 100㎍/㎖
LPS로 유도된 염증 반응에서 섬기린초 추출물 및 섬기린초에서 분리한 화합물 1, 2, 3은 무처리군 대비 NO 생성량을 81 ~ 95% 감소시키는 것으로 확인되었다.
실험예 9. 염증성 사이토카인(TNF-α, IL-1β, IL-8) 생성 억제 효과 시험
항염증 효과를 평가하기 위해 RAW 264.7 세포(1.5×105 cells/㎖)를 DMEM 배지를 이용하여 24 well plate 에 접종하고, 5% CO2 항온기에서 24시간 전배양한 후, 배지를 제거하고 상기 실시예 1-1의 추출물(40% 에탄올 추출물) 또는 1-2의 화합물 시료를 첨가하여 2시간 동안 처리한 후, LPS(1㎍/㎖)를 첨가하여 6시간 동안 염증반응을 유도하였다. 원심분리 후 상등액을 TNF-α, IL-1β, IL-8 ELISA kit(Abcam)를 이용하여 생성된 사이토카인의 양을 측정하여 표 10, 11, 12와 도 4에 나타내었다.
섬기린초 추출물 및 섬기린초 화합물 1, 2, 3에 의한 TNF-α 억제 활성
무처리 섬기린초 추출물 화합물 1 화합물 2 화합물 3
TNF-α 억제 활성(%) 0 75 87 89 90
※ 처리 시료 농도 : 100㎍/㎖
섬기린초 추출물 및 섬기린초 화합물 1, 2, 3에 의한 IL-1β 억제 활성
무처리 섬기린초 추출물 화합물 1 화합물 2 화합물 3
IL-1β 억제 활성(%) 0 82 86 87 87
※ 처리 시료 농도 : 100㎍/㎖
섬기린초 추출물 및 섬기린초 화합물 1, 2, 3에 의한 IL-8 억제 활성
무처리 섬기린초 추출물 화합물 1 화합물 2 화합물 3
IL-8 억제 활성(%) 0 80 85 88 86
※ 처리 시료 농도 : 100㎍/㎖
섬기린초 추출물 및 섬기린초에서 분리한 화합물 1, 2, 3은 LPS로 유도된 염증 모델에서 염증 지표 사이토카인인 TNF-α, IL-1β와 IL-8의 생성을 75 ~ 90% 억제하여 항염 효과를 발휘하는 것으로 나타났다.
실험예 10. 여드름 원인균에 대한 항균 효과 시험
섬기린초 추출물에 의한 여드름 원인균 항균 활성을 입증하기 위하여, 여드름 원인균에 대한 최소 저해농도 MIC(minimal inhibitory concentration) 측정 시험을 진행하였다.
실험에 사용한 여드름 원인균은 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acnes)로 Tryptic soy agar(TSA, Difco)에서 37℃, 72시간 전배양 하고 이를 105-6 CFU/㎖ 농도가 되도록 희석하여 접종균액으로 준비하였다.
멸균한 Tryptic soy broth(TSB, Difco)를 액체배지로 사용하여 96 well plate의 각 well에 100㎕씩 넣고, 상기 실시예 1-1의 추출물(40% 에탄올 추출물) 또는 1-2의 화합물 시료를 96 well plate의 첫 번째 well에 200㎕ 넣은 후, 두 번째 well부터 2배 희석 방법으로 연속희석하여 적용하였다. 그 다음 각 well에 있는 시료 희석액에 위와 같이 제조한 균액 100㎕씩 접종한 후, 37℃ 배양기에서 72시간 혐기배양하였다. 배양 후, 육안으로 관찰하여 항균 물질의 최소생육저해농도(MIC)를 측정하였다. 이의 결과는 표 13 및 도 5와 같다.
섬기린초 추출물 및 섬기린초 화합물 1, 2, 3에 의한 여드름 원인균 항균 활성
검정군 최소 생육저해농도 (MIC, ppm)
프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acnes)
섬기린초 추출물 150
화합물 1 1000
화합물 2 12.5
화합물 3 3.2
대조구(아젤라익산) 2000
프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acnes)에 대한 섬기린초 추출물 및 섬기린초에서 분리한 화합물 1, 2, 3의 최소생육저해농도는 각각 150ppm, 1000ppm, 12.5ppm, 3.2ppm으로 나타났으며, 대조구인 아젤라익산보다 13배, 2배, 160배, 625배 우수한 항균력을 나타내었다.

Claims (10)

  1. 4,6-디-O-갈로일-알부틴(4,6-di-O-galloylarbutin), 2,4,6-트리-O-갈로일-베타-글루코스(2,4,6-tri-O-galloyl-β-glucose), 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스(1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-glucose) 및 이들의 염으로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물;을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 화장료 조성물.
  2. 삭제
  3. 4,6-디-O-갈로일-알부틴(4,6-di-O-galloylarbutin), 2,4,6-트리-O-갈로일-베타-글루코스(2,4,6-tri-O-galloyl-β-glucose), 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스(1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-glucose) 및 이들의 염으로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물;을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 식품 조성물.
  4. 삭제
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