KR101997836B1 - 백신 전달 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 하나의 성분으로서 실온에서 액체이고 생리적 염 농도 및/또는 생리적 온도에서 겔인 슬러리 기재, 및 제2 성분으로서 하나 이상의 항원을 포함하는 조성물을 포함한다. 또한 대상체에서 면역 반응을 유도하는 방법 및 이와 같은 조성물을 투여함으로써 대상체를 예방 접종하는 방법을 포함한다.

Description

백신 전달 방법{VACCINE DELIVERY METHOD}
연속 출원 데이터
본 출원은 2011년 4월 18일자로 출원된 미국 가출원 일련 번호 제61/476,431호의 이익을 주장하며, 이는 본원에 참조로 포함되어 있다.
정부의 재정 지원
본 발명은 미국 국립 보건원에 의해 수여된 인가 번호 AI071883호 및 AI036657호 하에서 정부 지원으로 이루어졌다. 정부는 본 발명에 일정한 권리를 가진다.
백신은 여전히 전염병을 퇴치하기 위한 단일의 가장 큰 공중 보건 자산이다. 백신 전달의 목표는 항원 제시 세포 활성화, 항원의 흡수 및 처리를 향상시키는 방식으로 백신 항원을 제시하는 것이다. 추가적인 목표는, 특히 백신의 단일 유효 용량이 이용가능하다면, 효과적인 백신 특이적 반응을 유도하는데 필요한 예방 접종의 수를 감소시키는 것이다. 현재, 종래 백신 전달 방법은 명반을 사용한다. 알루미늄 염, 예를 들어 명반은 처음에 1920년대에 사람 백신에서 아쥬반트로서의 사용을 위하여 허가되었다. 백신 제형에서의 사용을 위하여 안전한 아쥬반트 및 개선된 전달 방식에 대한 필요성이 존재한다.
백신 제형에서의 사용을 위하여 안전한 아쥬반트 및 개선된 전달 방식과 관련된 백신 제조물을 제공한다.
본 발명은 하나의 성분으로서 실온에서 액체이고 생리적 염 농도 및/또는 생리적 온도에서 겔인 슬러리 기재, 및 다른 성분으로서 하나 이상의 항원을 포함하는 조성물을 포함한다. 본 조성물의 일부 양태에서, 슬러리 기재는 펩티드 하이드로겔이다. 일부 양태에서, 펩티드 하이드로겔은 퓨라매트릭스(PURAMATRIX), 또는 이의 유도체를 포함한다. 일부 양태에서, 펩티드 하이드로겔은 펩티드 스캐폴드 RADARADARADARADA, 또는 이의 유도체를 포함한다. 본 조성물의 일부 양태에서, 슬러리 기재는 마트리겔(MATRIGEL), 또는 이의 유도체를 포함한다.
본 조성물의 일부 양태에서, 본 조성물은 더 많은 아쥬반트 중 하나를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 아쥬반트는 톨 유사 수용체(TLR) 작용제 및/또는 사이토카인을 포함한다. 일부 양태에서, TLR 작용제는 TLR4 작용제를 포함한다. 일부 양태에서, TLR 작용제는 TLR9 작용제를 포함한다. 일부 양태에서, TLR9 작용제는 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드(ODN)를 포함한다.
본 조성물의 일부 양태에서, 본 조성물은 톨 유사 수용체(TLR) 작용제 및/또는 사이토카인을 추가로 포함한다. 일부 양태에서, TLR 작용제는 TLR4 작용제를 포함한다. 일부 양태에서, TLR 작용제는 TLR9 작용제를 포함한다. 일부 양태에서, TLR9 작용제는 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드(ODN)를 포함한다.
본 조성물의 일부 양태에서, 항원은 간염 항원, 인플루엔자 항원, 주혈흡충병 항원, 및/또는 부르콜데리아(burkolderia) 항원, 또는 이의 항원성 단편을 포함한다.
본 발명은 대상체에서 면역 반응을 생성하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명은 대상체를 면역화시키는 방법을 포함하며, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명은 하나 이상의 면역원성 항원을 대상체에게 전달하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명은 하나 이상의 치료적 항원을 대상체에게 전달하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 방법의 일부 양태에서, 대상체는 가정용 가축 또는 반려 동물이다. 본 발명의 방법의 일부 양태에서, 대상체는 가금류이다. 본 발명의 방법의 일부 양태에서, 대상체는 사람이다.
본 발명의 방법의 일부 양태에서, 조성물의 투여는 피하(sc) 주사 또는 근육(im) 주사를 포함한다.
본 발명의 방법의 일부 양태에서, 본 조성물의 투여는 1차 예방 접종 및/또는 추가 접종으로서의 투여를 포함한다.
본 발명의 방법의 일부 양태에서, 본 조성물의 투여는 폴리펩티드 백신 또는 플라스미드 DNA 백신으로 1차 예방 접종 후 추가 접종으로서의 투여를 포함한다.
본 발명은 보보이드(bovoid)에서 항-주혈흡충 면역 반응을 생성하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 하나의 성분으로서 실온에서 액체이고 생리적 조건에서 겔인 슬러리 기재, 및 다른 성분으로서 하나 이상의 주혈흡충 항원을 포함하는 조성물을 보보이드에 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명은 보보이드에서 항-주혈흡충 면역 반응을 생성하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 조성물을 보보이드에 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 하나 이상의 항원은 주혈흡충 항원을 포함한다.
본 발명은 보보이드에서 주혈흡충병 예방 접종의 방법을 포함하며, 상기 방법은 하나의 성분으로서 실온에서 액체이고 생리적 조건에서 겔인 슬러리 기재, 및 다른 성분으로서 하나 이상의 주혈흡충 항원을 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명은 보보이드에서 주혈흡충병 예방 접종의 방법을 포함하며, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 조성물을 보보이드에 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 하나 이상의 항원은 주혈흡충 항원을 포함한다.
본 방법의 일부 양태에서, 본 조성물은 하나 이상의 아쥬반트를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 아쥬반트는 톨 유사 수용체(TLR) 작용제 및/또는 사이토카인을 포함한다. 일부 양태에서, TLR 작용제는 TLR4 및/또는 TLR9 작용제를 포함한다. 일부 양태에서, TLR9 작용제는 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드(ODN)를 포함한다. 일부 양태에서, CpG ODN은 소의 CpG를 포함한다. 일부 양태에서, 아쥬반트는 사이토카인 IL-12를 포함한다.
본 방법의 일부 양태에서, 본 조성물은 톨 유사 수용체(TLR) 작용제 및/또는 사이토카인을 추가로 포함한다. 일부 양태에서, TLR 작용제는 TLR4 및/또는 TLR9 작용제를 포함한다. 일부 양태에서, TLR9 작용제는 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드(ODN)를 포함한다. 본 방법의 일부 양태에서, CpG ODN은 소의 CpG를 포함한다.
본 방법의 일부 양태에서, 주혈흡충 항원은 시스토소마 자포니쿰(Schistosoma japonicum) 항원, 또는 이의 항원성 단편을 포함한다.
본 방법의 일부 양태에서, 주혈흡충 항원은 SjCTPI 폴리펩티드, SjCTPI-Hsp70 폴리펩티드, SjC23 폴리펩티드, 및/또는 SjC23-Hsp70 폴리펩티드, 또는 이의 항원성 단편을 포함한다.
본 방법의 일부 양태에서, 본 조성물의 투여는 1차 예방 접종 및/또는 추가 접종으로서의 투여를 포함한다.
본 방법의 일부 양태에서, 본 조성물의 투여는 SjCTPI-Hsp70 플라스미드 DNA 백신으로 1차 예방 접종 후 추가 접종으로서의 투여를 포함한다.
본 방법의 일부 양태에서, 본 방법은 하나 이상의 항-주혈흡충 화학치료제의 투여를 추가로 포함한다.
본 방법의 일부 양태에서, 본 방법은 주혈흡충 기생충에 의한 감염의 예방에서 적어도 45% 효능을 나타낸다.
본 발명은 본원에 기술된 조성물을 제조하는 방법을 포함한다.
용어 “및/또는”은 열거된 요소의 하나 또는 전부, 또는 열거된 요소의 임의의 2 이상의 조합을 의미한다.
단이 “바람직한” 및 “바람직하게”는 특정 상황 하에서, 특정한 이익을 줄 수 있는 본 발명의 실시형태를 말한다. 그러나, 다른 실시형태가 또한 동일 또는 기타 다른 상황 하에서 바람직할 수 있다. 또한, 하나 이상의 바람직한 실시형태의 열거는 다른 실시형태가 유용하지 않다는 것을 의미하는 것은 아니며, 본 발명의 범주로부터 다른 실시형태를 배제하는 것으로 의도되지 않는다.
용어 “포함하다” 및 이의 변형은 이들 용어가 설명 및 청구항에서 나타내는 제한적인 의미를 가지지 않는다.
달리 지정되지 않는다면, 단수형("a", "an", "the") 및 “적어도 하나”는 상호교환적으로 사용되며, 하나 이상을 의미한다.
또한 본원에서, 종점에 의한 수치 범위의 열거는 그 범위 내에 포섭되는 모든 숫자를 포함한다(예컨대, 1 내지 5는 1, 1.5, 2, 2.75, 3, 3.80, 4, 5 등을 포함함).
값의 범위가 제공되는 경우, 범위의 상한값 및 하한값 내지 언급된 임의의 다른 값 또는 언급된 범위에서 사이에 있는 값에서, 내용이 명확하게 달리 지시하지 않는다면 하한값 단위의 1/10까지, 각각의 사이에 있는 값이 본 발명에 포함되는 것으로 이해된다. 언급된 범위에서 임의의 구체적으로 배제되는 한계의 대상인 이들 더 작은 범위의 상한값 및 하한값은 독립적으로 더 작은 범위에 포함될 수 있으며, 또한 본 발명에 포함된다. 언급된 범위가 한계의 하나 또는 둘 다를 포함하는 경우, 포함되는 한계의 어느 하나 또는 둘 다를 배제하는 범위가 또한 본 발명에 포함된다.
별개의 단계를 포함하는 본원에 개시된 임의이 방법에 있어서, 단계는 임의의 실행 가능한 순서로 수행될 수 있다. 그리고, 적절하게, 2개 이상의 단계의 임의의 조합이 동시에 수행될 수 있다.
본 발명의 상기 개요는 본 발명의 각각의 개시된 실시형태 또는 모든 이행을 기술하는 것으로 의도되지 않는다. 하기 설명은 예시적인 실시형태를 더 구체적으로 예시한다. 본 출원 전체에 걸쳐 여러 부분에서, 실시예의 목록을 통하여 지침이 제공되며, 상기 실시예는 다양한 조합으로 사용될 수 있다. 각각의 경우에서, 열거된 목록은 단지 대표적인 그룹의 역할을 할 뿐 배타적인 목록으로서 해석되어서는 안된다.
안전하고 개선된 백신 제조물을 제공한다.
도 1은 IgA 항-HBsAg 항체 역가의 동역학을 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10에 대하여 수집한 것이다.
도 2는 IgM 항-HBsAg 항체 역가의 동역학을 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10에 대하여 수집한 것이다.
도 3은 IgG 항-HBsAg 항체 역가의 동역학을 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10에 대하여 수집한 것이다.
도 4는 IgG1 항-HBsAg 항체 역가의 동역학을 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10에 대하여 수집한 것이다.
도 5는 IgG2a 항-HBsAg 항체 역가의 동역학을 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10에 대하여 수집한 것이다.
도 6은 단일 예방 접종 후(21일) 더 높은 항-HBsAg 항체 역가를 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10에 대하여 수집한 것이다(본페로니 사후 검사로 이원분산분석(two-way ANOVA)을 사용하여 항원 단독에 비하여 *p<0.05, **p<0.01, **p<0.001, ****p<0.0001).
도 7은 단일 예방 접종 후(35일) 더 높은 항-HBsAg 항체 역가를 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10에 대하여 수집한 것이다(본페로니 사후 검사로 이원분산분석을 사용하여 항원 단독에 비하여 *p<0.05).
도 8은 지라세포의 HBsAg 재자극 후 24시간 경과시 사이토카인 프로파일을 나타낸다. 나타낸 데이터는 하나의 실험을 대표한다(n=5; 본페로니 사후 검사로 이원분산분석을 사용하여 항원 단독에 비하여 *p<0.05, ****p<0.0001).
도 9는 지라세포의 HBsAg 재자극 후 48시간 경과시 사이토카인 프로파일을 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10(아쥬반트 단독에 대하여는 n=5)에 대하여 수집한 것이다(본페로니 사후 검사로 이원분산분석을 사용하여 항원 단독에 비하여 통계적인 차이가 보이지 않음(p<0.05)).
도 10은 지라세포의 HBsAg 재자극 후 72시간 경과시 사이토카인 프로파일을 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10(아쥬반트 단독에 대하여는 n=5)에 대하여 수집한 것이다(본페로니 사후 검사로 이원분산분석을 사용하여 항원 단독에 비하여 **p<0.01).
도 11은 HbsAg 특이적 T 세포 반응에서 증가된 HBsAg 특이적 세포 매개 면역을 ELISpot에 의하여 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10에 대하여 수집한 것이다(본페로니 사후 검사로 이원분산분석을 사용하여 항원 단독에 비하여 *p<0.05).
도 12는 증가된 HBsAg 특이적 T 세포 매개 면역을 유동 세포 계수법에 의하여 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10에 대하여 수집한 것이다(본페로니 사후 검사로 이원분산분석을 사용하여 항원 단독에 비하여 *p<0.01).
도 13은 1차 접종 후 24시간 경과시 면역화된 마우스(n=10/그룹)로부터 세포 하위 세트의 범위에서 생체 외 사이토카인 균형의 출현율을 나타내는 레이더 그래프이다. 축의 값은 연결되어 일반적인 사이토카인 균형을 나타내는 중심 다각형 영역을 형성할 수 있다. 레이더 차트 축의 분석은 전반적인 사이토카인 균형에 대한 백혈구의 기여를 강조한다.
도 14a 및 도 14b는 1차 접종 후 48시간 경과시 면역화된 마우스(n=10/그룹)로부터 세포 하위 세트의 범위에서 생체 외 사이토카인 균형의 출현율을 나타내는 레이더 그래프이다. 도 14a는 TNF 및 IFN 감마를 제시한다. 도 14b는 IL-5 및 IlL-4를 나타낸다. 각각의 축은 각각의 사이토카인 균형 카테고리의 비율을 나타낸다. 각각의 축의 값은 연결되어 일반적인 사이토카인 균형을 나타내는 중심 다각형 영역을 형성할 수 있다. 중심 다각형 영역의 증가 또는 감소는 각각의 그룹에서 염증성 사이토카인 또는 조절 사이토카인 균형의 더 높거나 더 낮은 기여를 반영한다.
도 15는 1차 접종 후 72시간 경과시 면역화된 마우스(n=10/그룹)로부터 세포 하위 세트의 범위에서 생체 외 사이토카인 균형의 출현율을 나타내는 레이더 그래프이다. 축의 값은 연결되어 일반적인 사이토카인 균형을 나타내는 중심 다각형 영역을 형성할 수 있다. 레이더 차트 축의 분석은 전반적인 사이토카인 균형에 대한 백혈구의 기여를 강조한다.
도 16a 내지 도 16d는 1차 접종 후 14일 내지 35일 경과시 면역화된 마우스(n=10/그룹)에서 유도된 rHepBag 특이적 항체의 비교이다. 추가 접종은 1차 면역화 후 28일 경과시에 실행하였으며, rHepBag 특이적 항체 수준은 ELISA 분석법으로 측정하였다. 도 16a는 14일 경과시의 데이터를 제시하고, 도 16b는 21일 경과시의 데이터를 제시하며, 도 16c는 28일 경과시의 데이터를 제시하고, 도 16d는 35일 경과시의 데이터를 제시한다. P ≤ 0.05에서의 통계적 유의성은 rHepBag, 알하이드로겔(Alhydrogel)® 중 rHepBag 및 프로인트 중 rHepBag 각각과의 비교를 위하여 위첨자 'a', 'b' 및 'c'로 나타내어져 있다.
도 17a 내지 도 17d는 14일 내지 35일 경과시 rHepBag + 아쥬반트로 마우스(n=10/그룹)를 면역화시킨 후 IgG1:IgG2a 비율을 나타낸다. 추가 접종은 1차 면역화 후 28일 경과시에 실행하였으며, rHepBag 특이적 항체 수준은 ELISA 분석법으로 측정하였다. 도 17a는 14일 경과시의 데이터를 제시하고, 도 17b는 21일 경과시의 데이터를 제시하며, 도 17c는 28일 경과시의 데이터를 제시하고, 도 17d는 35일 경과시의 데이터를 제시한다.
도 18a 및 도 18b는 rNP로 예방 접종한 2종류 마우스의 증가된 항-NP IgG 역가를 나타낸다. 도 18a는 C57BL/6 마우스에서의 역가를 나타낸다. 도 18b는 Balb/c 마우스에서의 역가를 나타낸다. 예방 접종 후 4주 경과시(4wplv)에 혈청을 수집하였다.
도 19a 및 도 19b는 PR8 WIV로 예방 접종한 C57Bl/6 마우스의 증가된 항-인플루엔자 IgG 역가를 나타낸다. 도 19a 및 도 19b는 2개의 독립적인 실험의 결과를 나타낸다. 예방 접종 후 4주 경과시(4wplv)에 혈청을 수집하였다.
도 20a 및 도 20b는 PR8 WIV로 예방 접종한 C57Bl/6 마우스에서 치사 시험 접종(lethal challenge)으로부터의 증가된 방어를 나타낸다. 도 20a는 30 LD50으로 치사 시험 접종한 독립적인 실험의 결과를 나타낸다. 도 20b는 1000 LD50으로 치사 시험 접종한 독립적인 실험의 결과를 나타낸다.
도 21의 A 내지 C는 3가지 상이한 아쥬반트(명반, CFA, 또는 퓨람트릭스 겔)와 함께 3가지 재조합 부르크홀데리아(burkholderia) 단백질 항원의 혼합제로 면역화시킨 마우스에서 증가된 항-부르크홀데리아 IgG 역가를 나타낸다. 도 21의 A는 면역화시킨 마우스에서 항-부르크홀데리아 단백질 4-9 IgG 역가를 나타낸다. 도 21의 B는 면역화시킨 마우스에서 항-부르크홀데리아 단백질 22-11 IgG 역가를 나타낸다. 도 21의 C는 면역화시킨 마우스에서 항-부르크홀데리아 단백질 42 IgG 역가를 나타낸다.
도 22a 및 도 22b는 완전 프로인트 아쥬반트 중 CCA(도 22a) 및 마트리겔 + CpG 중 CCA(도 22b)로 면역화시킨 마우스에서 IgG 항-주혈흡충 CCA 단백질 항체 역가를 나타낸다.
본 발명은, 백신 투여의 위치에서 항원의 개선된 중점을 두는 지속적인 전달을 가능하게 하고, 항원 제시 세포 활성화 및 항원의 흡수 및 처리를 향상시킴으로써 개선된 백신 전달을 가능하게 하는 조성물 및 방법을 제공한다. 본 발명에 있어서, 실온 및/또는 낮은 염 농도에서 액체이고 생리적 염 농도 및/또는 생리적 온도에서 겔인 슬러리 기재 성분을 포함하는 조성물 중 하나 이상의 면역원성 제제가 투여된다. 겔화는 척추동물, 예를 들어 포유류 또는 조류의 생리적 체온에 의해 유도될 수 있다. 이와 같은 온도는 예를 들어 적어도 약 25℃, 적어도 약 30℃, 적어도 약 32℃, 적어도 약 35℃, 적어도 약 37℃, 적어도 약 39℃, 또는 적어도 약 40℃일 수 있다. 겔화는 생리적 염 농도에 의해 유도될 수 있다. 일부 실시형태에서, 겔화는 밀리몰 농도의 염의 존재 하에서, 예를 들어 약 0.05몰(M) 초과의 염 농도에 의해 유도될 수 있다.
따라서, 대상체에게 투여 후 백신 조성물은 겔화하거나 중합하여, 선천적인 항원 제시 세포가 귀환하고 백신 항원을 취하기 시작할 수 있는 단일 위치로 백신 항원을 편재화시킨다. 이상적으로, 슬러리 기재는, 체액 또는 조직과의 접촉의 결과로서 신체에서의 원하지 않는 반응, 예를 들어 조직 사멸, 종양 형성, 알레르기 반응, 이물 반응(거부), 염증성 반응, 항체 반응, 또는 혈액 응고와 같은 반응을 유도하지 않을 생체 적합 물질이다. 슬러리 기재는 또한 본원에서 “생물 의학 중합체 하이드로겔”, “생물 의학 하이드로겔”, “생물 의학 중합체”, “중합체 하이드로겔”, “생체 적합 중합체 하이드로겔”, “생체 적합 하이드로겔”, “생체 적합 중합체”, 또는 “하이드로겔”로 지칭될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같은 “하이드로겔”은 팽창하고 약 20중량% 내지 약 95중량%의 물을 포함할 수 있는 가교된 친수성 거대 분자의 3차원 네트워크이다. 본원에서 사용된 바와 같은 겔은 연질이고 약한 것 내지 경질이고 질긴 것의 범위에 있는 특성을 가질 수 있는 고체의 젤리형 물질이다. 겔은 실질적으로 희석된 가교 시스템이며, 상기 가교 시스템은 정상 상태(steady-state)에 있을 때 유동성을 나타내지 않는다. 중량으로, 겔은 대부분 액체이지만, 겔은 액체 내 3차원의 가교 네트워크로 인하여 고체와 같이 거동한다. 겔에게 자체의 구조(경도)를 제공하는 것은 유체 내 가교이다. 이러한 방법으로, 겔은 고체가 연속상이고 액체가 불연속상인 고체 내 액체의 분자의 분산물이다. 하이드로겔은 친수성인 중합체 사슬의 네트워크이며, 때때로 물이 분산 매질인 콜로이드 겔로서 발견된다. 하이드로겔은 매우 흡수성인(하이드로겔은 99.9% 초과의 물을 함유할 수 있음) 천연 또는 합성 중합체이다. 하이드로겔은 또한 자체의 상당한 수분 함량으로 인하여, 가요도가 천연 조직과 매우 유사하다.
의료 공학에서의 사용을 위하여 이용가능한 광범위하게 다양한 생물 의학 중합체 하이드로겔 중 임의의 것이 본원에 기술된 방법 및 조성물과 함께 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 슬러리 기재는, 예를 들어 피브린, 콜라겐, 엘라스틴, 아가로스, 메틸셀룰로스, 히알루로난, 및 기타 다른 자연적으로 유래한 중합체와 같은 자연적으로 생성되는 것이다. 일부 실시형태에서, 슬러리 기재는 마트리겔, 또는 이의 유도체이다. 마트리겔은 마우스 세포 유래의 기저막 추출물이며, 라미닌, 콜라겐 IV, 엔탁틴, 니도겐, 및 프로테오글리칸을 포함한다. 마트리겔로 종양 세포의 침입은 종양 진행 및 침입에서 기질 분해 효소 및 세포외 기질 수용체의 관여를 연구하는데 사용되어 왔으며, 메트리겔은 또한 시험관 내 및 생체 내 신생혈관형성 모델(마트리겔 플러그 분석법(MATRIGEL plug assay))로서 신생혈관형성 및 항-신생혈관형성 사이토카인 및 기타 다른 물질의 활성을 연구하는데 사용되어 왔다. 마트리겔은 BD 마트리겔™ 매트릭스(BD Matrigel™ Matrix)로서 상업적으로 입수가능하다. 월드와이드웹 bdbiosciences.com/cellculture/ecm/ ecmtypes/index.jsp를 참조한다.
일부 실시형태에서, 슬러리 기재는, 예를 들어 합성 펩티드 하이드로겔 또는 자가 조립 펩티드(사펩티드(sapeptide)) 스캐폴드와 같은 합성물이다. 사펩티드 스캐폴드는 생리적 조건 하에서 이온성 자가 보완성 베타-시트 올리고펩티드의 자발적인 조립을 통하여 하이드로겔 물질을 생성함으로써 형성된다. 이러한 짧은 펩티드(통상적으로, 내부 반복 서열을 가지는 약 8개, 약 12개, 약 16개, 약 24개, 또는 약 32개 아미노산 잔기)는 염 수용액 중에서 3차원 기질로 자가 조립한다. 펩티드는, 상호 보완적이고 구조적으로 양립 가능한 12개 아미노산 초과, 바람직하게는 적어도 16개 아미노산의 소수성 아미노산 잔기와 친수성 아미노산 잔기가 교대로 있는 양친매성인 것으로 특징지어진다. “상호 보완적”은 친수성 측쇄들 사이에서 형성하는 수소 결합 및/또는 이온화된 쌍을 통하여 상호작용하는 펩티드의 능력을 말하고, “구조적으로 양립 가능한”은 펩티드 골격 사이에서 일정한 거리를 유지하는 상호 보완적인 펩티드의 능력을 말한다. 이러한 특성을 가지는 펩티드는 분자간 상호 작용에 관여하며, 상기 상호 작용은 2차 구조 수준에서 베타-시트, 그리고 3차 구조 수준에서 섞어 짜이는 필라멘트의 형성 및 안정화를 가져온다. 예로는 이에 한정되는 것은 아니지만, 펩티드 패밀리 구성원인 RAD16-I((RADA)(4)), RAD16-II((RARADADA)(2)), KFE-8((FKFE)(2)), 또는 KLD-12((KLDL)(3))를 포함한다. 예를 들어, 미국 특허 제5,670,483호, 문헌[Holmes et al., 2000, Proc Natl Acad Sci USA; 97(12):6728-33]; [Yokoi et al., 2005, Proc Natl Acad Sci USA; 102(24):8414-9]; [Liu et al., 2012, Nanoscale; 4(8):2720-7], 및 BD 퓨라매트릭스TM 펩티드 하이드로겔의 사용지침서, 카탈로그 번호 354250(SPC-354250-G rev 2.0; BD Biosciences, 미국 매사추세츠주 베드퍼드 소재)을 참조한다. 일부 양태에서, 펩티드 하이드로겔은 아르기닌-알라닌-아스파테이트-알라닌(RADA)의 빌딩 블록(building block)을 자가 조립하는 펩티드 스캐폴드를 포함한다. 일부 양태에서, 펩티드 하이드로겔은 RADARADARADARADA, 또는 이의 유도체를 포함한다. 일부 양태에서, 펩티드 하이드로겔은 퓨라매트릭스, 또는 이의 유도체를 포함한다. 예를 들어, 미국 특허 제5,670,483호, 문헌[Holmes et al., 2000, Proc Natl Acad Sci USA; 97(12):6728-33]; [Yokoi et al., 2005, Proc Natl Acad Sci USA; 102(24):8414-9]; [Liu et al., 2012, Nanoscale; 4(8):2720-7], 및 BD 퓨라매트릭스TM 펩티드 하이드로겔의 사용지침서, 카탈로그 번호 354250(SPC-354250-G rev 2.0; BD Biosciences, 미국 매사추세츠주 베드퍼드 소재)을 참조하며, 이들 각각은 본원에 전체가 포함되어 있다.
일부 실시형태에서, 생물 의학 중합체 하이드로겔은 생체 내에서 자발적으로 중합하는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 하이드로겔일 수 있다.
일부 실시형태에서, 척추동물 또는 포유류 체온 및/또는 생리적 염 농도에서 겔화하는 것에 더하여, 슬러리 기재는 시간이 흐름에 따라 분해하고 용해되는 생체 재흡수성 합성 중합체이다. 이와 같은 화합물은 가수분해에 의해 체내에서 자연적으로 분해되고 수용성 단량체로서 흡수된다. 예로는 폴리락트산, 폴리락티드(PLA), 폴리(L-락트산), 폴리-D-락티드, 폴리글리콜산(PGA), 폴리글리콜리드 및 락트산과 이의 공중합체인 (폴리(락틱-코-글리콜산), 락트산 및 글리콜산의 동종중합체 및 공중합체, 폴리(DL-락트산/글리신) 공중합체, 폴리(DL-락틱-코-글리콜산)(PLGA), 폴리(DL-락틱-코-글리콜산)(PLGA), 다공성 폴리(DL-락틱-코-글리콜산) 포말, 폴리(아미노산) 폴리[옥스(1-옥소-1,2-에탄디일)]((C2H2O2)n; Biovek), 폴리(글리콜리드-코-카프로락톤), 폴리(글리콜리드-코-트리메틸렌 카르보네이트), 폴리디옥사논(PDO, PDS), 폴리-p-디옥사논, 카프로락톤(또한, 2-옥세파논으로도 지칭됨), 엡실론-카프로락톤, 6-헥사노락톤, 헥사노-6-락톤, 1-옥사-2-옥소사이클로헵탄 폴리글락틴 910, 폴리무수물, 및 폴리(D,L-락틱-코-글리콜산, 88:12)(PLGA)으로부터 또는 PLGA 및 폴리(L-락트산)(PLLA)의 50/50(w/w) 배합물로부터 형성된 폴리오르토에스테르 필름을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Schakenraad 및 Dijkstra, 1991, Clin Mater; 7(3):253-69]; [Mooney et al., 1997, J Biomed Mater Res; 37(3):413-20]; 및 [Lu et al., 2000, Biomaterials; 21(18):1837-45]을 참조한다.
본 발명의 조성물은 하나 이상의 항원성 제제(또한, 본원에서 면역원으로도 지칭됨)를 포함한다. 항원성 제제는 대상체에게 투여되어 대상체에서 면역 반응을 유도하는 매우 다양한 제제 중 임의의 것일 수 있다. 항원성 제제는 병원체로부터 유래한 면역원일 수 있다. 항원성 제제는 예를 들어 펩티드 또는 단백질 항원, 바이러스 항원 또는 폴리펩티드, 불활화 바이러스, 재조합 바이러스, 박테리아 또는 기생충 항원, 불활화 박테리아 또는 기생충, 전세포, 유전자 변형 세포, 종양 연관 항원 또는 종양 세포, 또는 탄수화물 항원일 수 있다. 일부 적용에서, 항원은 살아있는 세포가 아니다. 일부 실시형태에서, 항원성 제제는 가용성 항원이다.
본원에 기술된 바와 같은 조성물은 항원성 제제로서 백신 성분으로서 이용가능한 매우 다양한 면역원성 제제 중 임의의 것을 포함할 수 있다. 이와 같은 백신은 이에 한정되는 것은 아니지만, 다양한 전염성, 바이러스 및 기생병 및 항종양 백신 성분에 대한 항원성 백신 성분을 포함할 수 있다. 항종양 백신은 이에 한정되는 것은 아니지만, 펩티드 백신, 전세포 백신 유전자 변형 전세포 백신, 재조합 단백질 백신 또는 재조합 바이러스 벡터에 의한 종양 연관 항원의 발현을 기반으로 한 백신을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항원성 제제는 가용성 항원이다.
항원성 제제는, 예를 들어 해모폴리스 인플루엔자(Haemopholis influenza), 인플루엔자 바이러스 유형 A 또는 유형 B, 스트렙토코커스 뉴모니아(Streptococcus pneumonia), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis) 항원(예를 들어, PA) 유래의 박테리아 항원을 포함한다.
항원성 제제는, 예를 들어 말라리아 기생충 또는 주혈흡충 기생충 유래의 기생충 항원을 포함한다. 말라리아 항원은 이에 한정되는 것은 아니지만, 플라스모듐 종인 플라스모듐 비박스(Plasmodium vivax), 플라스모듐 팔시파룸(Plasmodium falciparum), 및 플라스모듐 노우레시(Plasmodium knowlesi), 플라스모듐 오발레앤드(Plasmodium ovaleand), 및 플라스모듐 말라리아에(Plasmodium malariae) 유래의 항원을 포함한다. 주혈흡충 기생충은 이에 한정되는 것은 아니지만, 시스토소마 자포니쿰, 시스토소마 만소니(Schistosoma mansoni), 및 시스토소마 해마토비움(Schistosoma haematobium)을 포함한다. 주혈흡충 항원은 주혈흡충 3탄당 인산 이성질체화 효소(CTPI) 단백질, 또는 이의 항원성 단편 또는 유도체, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 에스. 자포니쿰, 에스. 몬소니(S. monsoni), 또는 에스. 해마토비움 CTPI 단백질, 또는 이의 항원성 단편 또는 유도체일 수 있다. 주혈흡충 항원은 주혈흡충 테트라스핀 23kDa 내재 막 단백질(C23), 또는 이의 항원성 단편 또는 유도체, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 에스. 자포니쿰, 에스. 몬소니, 또는 에스. 해마토비움 C23 단백질, 또는 이의 항원성 단편 또는 유도체일 수 있다. 이와 같은 주혈흡충 항원은 하나 이상의 추가적인 항원성 결정 인자, 예를 들어 열 충격 단백질, 또는 이의 항원성 단편 또는 유도체, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 소의 열 충격 단백질 70(Hsp70)과 같은 항원성 결정 인자에 융합된 키메라 폴리펩티드일 수 있다. 주혈흡충 항원은 예를 들어 SjCTPI, SjCTPI-Hsp70, SjC23, 및 SjC23-Hsp70 폴리펩티드를 포함한다. 항원은 다양한 기타 다른 기생충, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만, 키네토플라스티드 원생동물, 예를 들어 블라스토크리티디아(Blastocrithidia), 크리티디아(Crithidia), 엔도트리파눔(Endotrypanum), 헤르페토모나스(Herpetomonas), 레이슈마니아(Leishmania), 렙토모나스(Leptomonas), 피토모나스(Phytomonas), 트리파노소마(Trypanosoma), 및 왈라세이나(Wallaceina) 속의 원생동물 중 임의의 형태일 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 원생동물은 트리파노소마 속, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만, 티. 크루지(T. cruzi), 티. 브루세이(T. brucei), 티.비. 감비엔스(T.b. gambiense), 및 티.비. 로데시엔스(T.b. rhodesiense)의 것이다. 일부 실시형태에서, 원생동물은 레이슈마니아 속, 예를 들어 레이슈마니아 메이저(Leishmania major)의 것이다. 주목할 만한 트리파노소마 질환은 트리파노소마증(트리파노소마 종에 의해 야기되는 아프리카 수면병 및 남아메리카 샤가스병) 및 레이슈마니아증(레이슈마니아 종에 의해 야기됨)을 포함한다.
항원성 제제는, 예를 들어 간염 예를 들어 간염 C, 간염 B, 또는 간염 A, 인플루엔자 예를 들어 인플루엔자 바이러스(예를 들어, 인플루엔자 A(이에 한정되는 것은 아니지만, H5N1 및 H1N1 아형을 포함함), 인플루엔자 B, 및 인플루엔자 C의 M2, 헤마글루티닌, 및/또는 뉴라미니다제 단백질, 호흡기세포융합 바이러스(RSV), 광견병, 우듀종 바이러스, 홍역, 풍진, 수두, 로타바이러스, 소아마비, 수두대상포진 바이러스(VZV), 및 음성 가닥 RNA 바이러스 예를 들어 파라믹소비리데 과의 바이러스 유래의 바이러스 항원을 포함한다. 파라믹소비리데 과의 바이러스의 예는 이에 한정되는 것은 아니지만, 사람 파라인플루엔자 바이러스 1, 사람 파라인플루엔자 바이러스 2, 사람 파라인플루엔자 바이러스 3, 사람 파라인플루엔자 바이러스 4, 파라인플루엔자 바이러스 5, 볼거리 바이러스, 홍역 바이러스, 사람 메타뉴모바이러스, 사람 호흡기세포융합 바이러스, 소 호흡기세포융합 바이러스, 우역 바이러스, 개홍역 바이러스, 물개 전염성 급성염증 바이러스, 뉴캐슬병 바이러스, 조류 뉴모바이러스, 가성우역 바이러스(PPRV), 센다이 바이러스, 메낭글 바이러스(Menangle virus), 투파이아 파라믹소바이러스(Tupaia paramyxovirus), 티오만 바이러스(Tioman virus), 투호코바이러스(Tuhokovirus) 1, 투호코바이러스 2, 투호코바이러스 3, 헨드라바이러스, 니파바이러스, 큰삼각머리독사 바이러스(Fer-de-Lance virus), 나리바 바이러스(Nariva virus), 살렘 바이러스(Salem virus), 제이 바이러스(J virus), 모스만 바이러스(Mossman virus), 및 베이롱 바이러스(Beilong virus)를 포함한다.
항원성 제제는 가금류에 대하여 전염성인 병원체로부터 유래한 하나 이상의 면역원을 포함할 수 있다. 이와 같은 면역원은 예를 들어 전염성 기관지염 바이러스(IBV), 뉴캐슬병 바이러스(NDV), 마레크병 바이러스(MDV), 전염성 F낭병(IBD) 바이러스, 전염성 후두기관염(ILT), 조류 레오바이러스, 콜레라, 계두, 마이코플라즈마증, 칠면조 및 닭 코리자, 조류 인플루엔자, 조류 뇌척수염(AE), 조류 비기관염(ART), 오리 바이러스성 간염, 출혈성 장염, 거위 파보바이러스, 파라믹소바이러스 3, 닭 빈혈 바이러스(CAV), 이. 콜라이(E. coli), 단독(Erysipelas), 레이메렐라(Reimerella), 마이코플라스마 갈리셉티쿰(Mycoplasma gallisepticum), 파스튜렐라 멀토시다(Pasteurella multocida), 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella enteritidis), 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium), 콕시듐증, 산란 저하 증후군(EDS) 바이러스, 칠면조 비기관염 바이러스(TRTV), 및 폭스바이러스로부터 유래할 수 있다.
항원성 제제는 보보이드에 대하여 전염성인 병원체로부터 유래한 하나 이상의 면역원, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만, 가정용 소, 물소, 아프리카 버팔로, 들소, 및 야크를 포함할 수 있다. 이와 같은 면역원은 예를 들어 소 호흡기 질환(BRD) 백신, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 BVDV 유형 I 및 유형 II, 소 헤르페스 바이러스 1(BHV-1) 백신, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 잠복성 바이러스를 생성하지 않을 아단위 백신, 해모필루스 솜누스(Haemophilus somnus) 백신, 맨헤이미아 해몰리티카(Mannheimia haemolytica) 백신, 마이코플라스마 보비스(Mycoplasma bovis) 백신, 소 로타바이러스 백신, 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) K99 백신, 소 코로나바이러스(BCV) 백신, 클로스트리듐 초베이(흑갈병(black leg)) 백신, 클로스트리듐 셉티쿰(Clostridium septicum) 백신, 클로스트리듐 소르델리(Clostridium sordelli)(악성 부종) 백신, 클로스트리듐 노비(Clostridium novyi)(전염성 회저성 간염) 백신, 클로스트리듐 페르프리젠스(Clostridium perfringens)(장독소혈증) 백신, 소 전염성 각막 결막염(홍안병) 백신, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 모락셀라 보비스(Moraxella bovis), 클라미디아(chlamydia), 마이코플라스마, 아콜레플라스마(acholeplasma), 또는 소 전염성 비기관염(IBR) 바이러스 백신, 유방염 백신, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 에스케리키아 콜라이 J5 백신으로부터 유래할 수 있다.
항원성 제제는 돼지에 대하여 전염성인 병원체, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 돼지 서코바이러스(porcine circovirus) 유형 2(PCV2), 돼지 생식기 호흡기 증후군(PRRSV), 호흡기 마이코플라스마, 스트렙토코커스 수이스(Streptococcus suis), 돼지 코로나바이러스, 로타바이러스, 독소원성 에스케리키아 콜라이(enterotoxigenic Escherichia coli)(K88), 악티노바실러스 플레우로뉴모니아(Actinobacillus pleuropneumonia; APP), 및 돼지 인플루엔자로부터 유래하는 하나 이상의 면역원을 포함할 수 있다.
항원성 제제는 사실상 편재하는 그람 음성이고, 운동성이며 편성 호기성인 간상 박테리아(동물/사람 및 식물 병원체를 모두 포함함)뿐만 아니라 일부 환경적으로 중요한 종의 군인 부르크홀데리아 속으로부터 유래한 하나 이상의 면역원을 포함할 수 있다. 부르크홀데리아는 자체의 병원체 구성원으로 가장 잘 알려져 있다. 부르크홀데리아 말레이(Burkholderia mallei)는 대부분 말과 관련 동물에서 발생하는 질환인 비저의 원인이다. 부르크홀데리아 슈도말레이(Burkholderia pseudomallei)는, 특히 동남아시아 및 북부 호주에서 사람 또는 동물을 감염시킬 수 있는 주로 열대성 기후의 전염병인 유비저(또한, 휘트모어병(Whitmore's disease)이라고도 불림)의 병인이다. 부르크홀데리아 세파시아(Burkholderia cepacia)는 낭포성 섬유증이 있는 사람에 있어서 폐 감염의 중요한 병원체이다. 이들의 연관된 질환에서 높은 사망률과 항생 물질 내성으로 인하여 부르크홀데리아 말레이 및 부르크홀데리아 슈도말레이는, 가축과 사람을 표적으로 하는 잠재적인 생물학적 무기(biological warfare agent)인 것으로 간주된다. 부르크홀데리아 항원은 예를 들어 3가지 부르크홀데리아 재조합 단백질(부르크홀데리아 4-9 단백질, 부르크홀데리아 22-11 단백질, 및 부르크홀데리아 42 단백질) 중 임의의 것을 포함한다. 이와 같은 부르콜데리아 항원은 개별적으로 또는 임의의 2가지 또는 3가지 항원의 혼합제로서 투여될 수 있다.
항원성 제제는 홍역-볼거리-풍진(MMR) 및 홍역-볼거리-풍진-수두(MMRV) 백신의 조합으로 현재 사용되는 것 중 하나 이상일 수 있다.
일부 실시형태에서, 항원성 제제는 폴리뉴클레오티드 백신으로서, 즉 항원성 제제는 벡터 구조체, 예를 들어 플라스미드로서 전달되며, 상기 벡터 구조체는 대상체로의 전달 시 폴리펩티드 항원의 발현이 일어난다. 본원에서 사용된 용어 “폴리뉴클레오티드”는 임의의 길이의 뉴클레오티드, 즉 리보뉴클레오티드 또는 데옥시뉴클레오티드의 중합체 형태를 말하며, 이중 가닥 및 단일 가닥 RNA 및 DNA를 둘 다 포함한다. 폴리뉴클레오티드는 자연적 공급원으로부터 직접적으로 얻을 수 있거나, 또는 재조합, 효소 또는 화학적 기술의 도움으로 제조할 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 토폴로지에 있어서 선형 또는 원형일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 예를 들어 벡터, 예를 들어 발현 벡터 또는 클로닝 벡터의 일부, 또는 단편일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 상이한 기능을 가지는 뉴클레오티드 서열, 예를 들어 암호화 영역, 및 비암호화 영역, 예를 들어 조절 영역을 포함할 수 있다. 임의의 적당한 벡터 또는 전달 운반체가 이용될 수 있다. 다양한 벡터가 공개적으로 입수가능하다. 벡터는 예를 들어 플라스미드, 코스미드, 바이러스 입자, 또는 파지의 형태일 수 있다. 벡터는 발현 벡터일 수 있다. 적절한 핵산 서열이 다양한 절차에 의해 벡터로 삽입될 수 있다. 일반적으로, DNA는 당업계에 공지된 기술을 사용하여 적절한 제한 효소 위치(들)로 삽입된다. 벡터 요소는 일반적으로 이에 한정되는 것은 아니지만 신호 서열, 복제 개시점, 하나 이상의 표지 유전자, 인핸서 요소, 프로모터, 및 전사 종결 서열 중 하나 이상을 포함한다. 이들 요소 중 하나 이상을 포함하는 적당한 벡터의 구성은 당업자에게 공지된 표준 결찰 기술을 이용한다.
본원에 기술된 바와 같은 조성물은 백신으로서 유용할 수 있다. 백신은 예방 백신 또는 방어 백신일 수 있다.
본 발명의 조성물은 아쥬반트 활성을 가지는 하나 이상의 화합물을 포함할 수 있다. 이와 같은 아쥬반트는 그 자체가 임의의 특이적 항원 효과가 없으면서 면역계를 자극하고 백신 항원에 대한 반응을 증가시킨다. 아쥬반트는 특이적 백신 항원과 조합하여 사용될 때 항원 특이적 면역 반응을 가속화시키거나, 연장하거나, 향상시키도록 작용한다. 이러한 목적을 위하여 적당한 화합물 또는 조성물은 이에 한정되는 것은 아니지만 알루미늄계 아쥬반트, 예를 들어 알루미늄 포스페이트, 알루미늄 하이드록시드(또한, 명반으로도 지칭됨), 알루미늄 하이드록실-포스페이트, 및 알루미늄 하이드록실-포스페이트-설페이트, 및 비 알루미늄 아쥬반트, 예를 들어 QS21, MF59, 지질-A, 중성 리포좀, 마이크로입자, 사이토카인, 예를 들어 IL-12, 식물성유, 동물성유, 예를 들어 미네랄 오일(예를 들어, Bayol F™ 또는 Marcol 52™)을 기반으로 하는 수중유 또는 유중수 에멀젼, 완전 프로인트 아쥬반트, 불완전 프로인트 아쥬반트, 식물성 기름 예를 들어 비타민 E 아세테이트, 사포닌, 스쿠알렌, 지질화 아미노산(“LAA”), 및/또는 TLR 작용제를 포함한다.
일부 실시형태에서, 아쥬반트 요소는 톨 유사 수용체(TLR) 리간드이다. 동물에서 TLR은 1997년에 처음 동정되었다. TLR은 다수의 병원체에 대하여 제1 방어선을 구성하며, 내재 면역계의 기능에서 중대한 역할을 한다. 톨 유사 수용체의 다수의 공지된 하위 부류로서, 예를 들어 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TLR12, TLR13, TLR14, TLR15, 및 TLR16이 있으며, 이들의 리간드는 상당한 구조적 변형을 나타낸다. TLR 작용제는 다양한 톨 유사 수용체(TLR) 중 하나에 대한 분자 리간드이다. 공지된 TLR은 TLR1(TLR1 리간드는 트리아실 리포단백질을 포함함); TLR2(TLR2 리간드는 리포단백질, 그람 양성 펩티도글리칸, 리포테이코산, 진균, 및 바이러스 당단백질을 포함함); TLR3(TLR3 리간드는, 특정 바이러스, 및 폴리 I:C에서 발견되는 바와 같은 이중 가닥 RNA를 포함함); TLR4(TLR4 리간드는 리포다당류 및 바이러스 당단백질을 포함함); TLR5(TLR5 리간드는 플라젤린을 포함함); TLR6(TLR6 리간드는 디아실 리포단백질을 포함함); TLR7(TLR7 리간드는 작은 합성 면역 조정제(예를 들어, 이미퀴모드, R-848, 록소리빈 및 브로피리민) 및 단일 가닥 RNA를 포함함); TLR8(TLR8 리간드는 작은 합성 화합물 및 단일 가닥 RNA를 포함함); 및 TLR9(TLR9 리간드는 비메틸화 CpG DNA 모티프를 포함함)를 포함한다. 일부 TLR 리간드는 본원에 기술되어 있으나, 이와 같은 목록이 임의의 방법으로 본 발명을 한정하지 않음이 이해되어야 한다. TLR 리간드는 광범위하게 상업적으로 입수가능하다.
바람직한 TLR 작용제는 TLR2 작용제, TLR4 작용제, TLR7 작용제, TLR8 작용제, 및 TLR9 작용제를 포함한다. LR2는 그람 양성 및 그람 음성 박테리아뿐만 아니라 마이코플라스마 및 효모 유래의 다수의 미생물 분자의 인식에 관련된다. TLR2 리간드는 리포글리칸, 리포다당류, 리포테이코산 및 펩티도글리칸을 포함한다.
TLR4는 그람 음성 리포다당류(LPS) 및 지질 A, 이의 독성 모이어티를 인식한다. TLR4 작용제는 이에 한정되는 것은 아니지만 리포다당류(LPS), 바이러스 당단백질, 모노포스포릴 지질 A(MPL)(Anderson et al., 2010, Colloids Surf B Biointerfaces; 75(1):123-32), 글루코피라노실 지질 아쥬반트-안정화 에멀젼(Glucopyranosyl Lipid Adjuvant-Stable Emulsion, GLA-SE)(Coler et al., 2010, PLoS One; 5(10):e13677), 및 합성 헥사아실화 지질 A 유도체(글루코피라노실 지질 아쥬반트(glucopyranosyl lipid adjuvant, GLA)로 나타내어짐)(Coler et al., 2011, PLoS One; 6(1):e16333)를 포함한다.
TLR9는 비메틸화 CpG 포함 서열, 예를 들어 박테리아 DNA 또는 합성 올리고뉴클레오티드(ODN)에서 발견되는 서열에 의해 활성화된다. 이와 같은 비메틸화 CpG 포함 서열은 박테리아 DNA에서 매우 빈번하게 존재하지만, 포유류 DNA에서는 드문 것이다. 따라서, 비메틸화 CpG 서열은 미생물 DNA와 포유류 DNA의 차이점이다. TLR9 작용제는 미생물 DNA, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 이. 콜라이 DNA, 내독소가 없는 이. 콜라이 DNA, 또는 이. 콜라이 K12 유래의 내독소가 없는 박테리아 DNA의 제조물일 수 있다. TLR9 작용제는 비메틸화 CpG 모티프(또한, “CpG-올리고데옥시뉴클레오티드”, “CpGODN”, “ODN” 또는 “CpG”로도 지칭됨)를 포함하는 합성 올리고뉴클레오티드일 수 있다. CpG ODN은 시토신(“C” 뉴클레오티드) 다음에 구아닌(“G” 뉴클레오티드)를 포함하는 짧은 단일 가닥 DNA 분자이다. “p”는 통상적으로 DNA의 인산디에스테르 골격을 말한다. 본 발명의 TLR9 작용제는 기술된 적어도 3가지 유형, 즉 유형 A, 유형 B, 및 유형 C의 자극성 ODN 중 임의의 것을 포함할 수 있다. CpG-올리고데옥시뉴클레오티드는 폴리뉴클레오티드의 화학적 합성을 위한 표준 방법에 의해 생성하거나 상업적으로 구입할 수 있다. 예를 들어, CPG ODN은 InvitroGen(미국 캘리포니아주 샌디에이고 소재)을 통해 구입할 수 있다.
본원에 기술된 바와 같은 조성물은 하나 이상의 사이토카인을 포함할 수있다. 사이토카인은 이에 한정되는 것은 아니지만 IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-18, IL-19, IL-20, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, 종양 괴사 인자(TNF), 형질전환 성장 인자-β(TGF-β), 과립구 집락 자극 인자(G-CSF), 대식세포 집락 자극 인자(M-CSF), 과립구- 대식세포 집락 자극 인자(GM-CSF), 및/또는 Flt-3 리간드를 포함할 수 있다. 일부 적용에서, 하나 이상의 사이토카인은 아쥬반트의 역할을 할 수 있다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 바와 같은 조성물을 대상체에게 투여함으로써 대상체에서 면역 반응을 유도하는 방법을 포함한다. 면역 반응은 방어 면역을 수여할 수 있거나 수여하지 않을 수 있다. 면역 반응은 예를 들어 체액성 반응 및/또는 세포 매개 면역 반응을 포함할 수 있다. 체액성 면역 반응은 IgG(예를 들어, IgG1, IgG2(iIgG2a 및/또는 IgG2b를 포함함), IgG3, 및/또는 IgG4), IgM, IgA, IgD, IgE, 및/또는 IgY 반응을 포함할 수 있다. 세포성 면역 반응은 T 세포 활성화 및/또는 사이토카인 생성을 포함할 수 있다. 체액성 또는 세포성 면역 반응의 결정은 면역학 업계에서 공지된 다양한 방법 중 임의의 것, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 본원 기술된 것 중 임의의 것에 의하여 결정될 수 있다. 면역 반응의 유도는 감염원에 의한 장래의 시험 감염에 대하여 면역계의 자극 및/또는 프라이밍을 포함하여 장래의 감염에 대하여 면역력을 제공할 수 있다. 이와 같은 면역 반응의 유도는 방어 반응의 역할을 하여, 일반적으로 증상의 감소를 가져올 수 있다. 면역 반응은 선천적 및/또는 후천적 면역 반응을 향상시킬 수 있다. 면역 반응은 단일의 1차 면역화로 더 높은 농도의 항체를 나타낼 수 있다. 면역 반응은 슬러리 기재를 이용하지 않은 면역화에 비하여 면역원성 사이토카인, 유형 I 인터페론, 및/또는 케모카인의 변경된 유도 및/또는 변경된 면역글로불린 비율을 나타낼 수 있다. 이와 같은 변경은 증가 또는 감소일 수 있다. 예를 들어, 다른 면역글로불린 이소타입에 비하여 면역글로불린의 하나의 이소타입(예를 들어, IgM, IgA, IgD, IgG, 또는 IgE 중 임의의 하나에 비하여 IgM, IgA, IgD, IgG, 또는 IgE 중 임의의 하나)의 더 높은 비율, 또는 다른 IgG 하위 부류에 비하여 하나의 IgG 하위 부류(예를 들어, IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, 또는 IgG4 중 임의의 하나에 비하여 IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, 또는 IgG4 중 임의의 하나)의 더 높은 비율이 얻어질 수 있다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 바와 같은 조성물을 대상체에게 투여함으로써 대상체를 예방 접종하는 방법을 포함한다. 이와 같은 예방 접종은 미래의 감염의 증상의 감소 또는 완화를 가져올 수 있고, 미래의 감염을 예방할 수 있다. 본원에 기술된 조성물은 감염의 예방 및/또는 개선에 있어서 면역원성 조성물로서 치료적 및/또는 예방적 적용을 가질 수 있어, 새로운 감염에 대한 내성이 향상되고/향상되거나 질환의 임상 중증도가 감소될 것이다. 이와 같은 방어는 RSS와 연관된 증상, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 본원에 기술된 것 중 임의의 것의 감소 또는 결여로 나타날 수 있다. 광범위하게 다양한 이용가능한 분석법 중 임의의 것은 본 발명의 예방 접종 방법, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 본원에 기술된 것 중 임의의 것의 유효성을 측정하는데 사용될 수 있다.
일부 적용에서, 적어도 하나의 면역원의 면역학적으로 유효한 양은 보통 감염 동안 상당한 감소를 야기하는 양으로 이용된다. 면역원성 및 유효성은 다양한 공지된 실험 시스템 중 임의의 것, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 본원에 기술된 것 중 임의의 것으로 분석될 수 있다.
본원에 기술된 조성물 및 방법은 하나 이상의 면역원의 투여가 치료적으로 요구되는 바이러스 질환, 전염병 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 박테리아, 진균 및 기생충 감염, 암, 및 기타 다른 질환의 치료 및/또는 예방을 위하여 대상체에게 투여될 수 있다. 본 개시 내용의 방법으로, 하나 이상의 제제의 투여의 효능이 당업계에 공지된 다양한 파라미터 중 임의의 것, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 본원에 기술된 것 중 임의의 것에 의해 평가될 수 있다. 이는, 다수의 방법, 예를 들어 ELISPOT, FACS 분석, 사이토카인 방출, 또는 T 세포 증식 분석법에 의한, 예를 들어 종양 항원에 대하여 지연된 유형의 과민 반응에서 증가의 측정, 치료 후 악성 종양의 재발까지 시간에 있어서 지연의 측정, 재발이 없는 생존 시간에 있어서 증가의 측정, 치료 후 생존에 있어서 증가의 측정, 종양 크기의 측정, 예방 접종하는 항원에 대한 노출시 활성화되는 반응성 T 세포의 수의 측정을 포함한다.
예를 들어, 본원에 기술된 조성물 및 방법은 암의 치료를 위하여 환자에게 투여될 수 있다. 항종양 백신은 이에 한정되는 것은 아니지만, 펩티드 백신, 전세포 백신, 유전자 변형 전세포 백신, 재조합 단백질 백신 또는 재조합 바이러스 벡터에 의한 종양 연관 항원의 발현을 기반으로 한 백신을 포함한다. 치료될 암으로는 이에 한정되는 것은 아니지만, 흑색종, 기저세포암, 대장직장암, 췌장암, 유방암, 전립선암, 폐암(소세포 폐암 및 비소세포 폐암을 포함함), 백혈병, 림프종, 육종, 난소암, 카포시 육종, 호지킨병, 비호지킨 림프종, 다발성 골수종, 신경아세포종, 횡문근육종, 원발성 혈소판 증가증, 원발성 고분자글로불린혈증, 소세포 폐 종양, 원발성 뇌종양, 위암, 악성 췌장 인슐린종, 악성 유암종, 방광암, 전암성 피부 병소, 고환암, 림프종, 갑상선암, 신경아세포종, 식도암, 비뇨생식관 암, 악성 고칼슘혈증, 자궁경부암, 자궁내막암, 악성 뇌교종, 및 부신피질 암을 포함한다. 일부 양태에서, 암은 원발성 암이다. 일부 양태에서, 암은 전이성이다. 본원에서 사용된 “종양”은 포유류에서 발견되는 모든 유형의 암, 신생 세포, 또는 악성 종양을 말한다.
암의 치료의 효능은 당업계에 익히 공지된 다양한 파라미터 중 임의의 것에 의해 평가될 수 있다. 이는 이에 한정되는 것은 아니지만, 종양 크기에 있어서 감소의 측정, 종양의 성장, 확산, 침입, 혈관 신생, 신생혈관형성 및/또는 전이의 억제의 측정, 임의의 전이성 병변의 성장, 확산, 침입 및/또는 혈관 신생의 억제의 측정, 면역계 세포에 의한 종양 침윤의 측정, 및/또는 종양 항원에 대한 증가된 지연 유형의 과민 반응의 측정을 포함한다. 치료의 효능은 또한 대상체에서 종양 진행의 지연 또는 재발의 지연의 측정에 의해, 또는 대상체의 생존율, 예를 들어 치료 후 1년 또는 5년 경과시 증가된 생존율의 측정에 의해 평가될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 재발은 치료의 명백한 중단 후 종양 또는 신생 세포로 되돌아간 것이다.
본원에 사용된 바와 같이, 문맥이 달리 명백하게 하지 않는다면, “치료” 및 유사한 단어, 예를 들어 “치료된”, “치료하는” 등은 유리하거나 원하는 결과, 예를 들어 바람직한 임상 결과를 얻기 위한 접근법이다. 치료는 치료적 및/또는 예방적 치료를 포함할 수 있다. 치료의 바람직한 효과는 질환의 발생 또는 재발의 예방, 증상의 완화, 질환의 하나 이상의 직접 또는 간접적인 병리학적 결과의 감소, 질환 진행의 속도의 감소, 질환 상태의 개선 또는 일시적 완화, 및 관해 또는 개선된 예후를 포함한다. 일부 적용에서, 기술된 바와 같은 조성물은 하나 이상의 원하는 결과의 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 또는 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 95%로 개선을 나타낼 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 물질의 “효과적인 양” 또는 “치료적으로 효과적인 양”은 원하는 생물학적 효과, 예를 들어 이로운 결과(임상 결과를 포함함)에 영향을 미치는데 충분한 양이다. 치료적으로 효과적인 농도 및 양은 공지된 시험관 내 및 생체 내 시스템, 예를 들어 본원에 기술된 것 중 임의의 것에서 화합물을 시험함으로써 본원에서 경험적으로 각각의 적용에 대하여 결정될 수 있다. 그 다음 사람 또는 기타 다른 동물에 대한 투약이 그로부터 추론될 수 있다. 본 발명의 방법으로, 하나 이상의 개입의 투여의 효능이 당업계에 익히 공지된 다양한 파라미터 중 임의의 것에 의해 평가될 수 있다.
일부 실시형태에서, “효과적인 양”은 적어도 하나의 병리학적 파라미터의 감소를 가져오는 양이다. 따라서, 예를 들어 치료를 받지 않은 개체에서의 파라미터에 있어서 예상되는 감소에 비하여 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 또는 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 95%의 감소를 달성하는데 효과적인 양이다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 백신 조성물을 제조하고 사용하는 방법을 포함한다. 본 개시 내용의 조성물은 선택된 투여 경로에 적합화된 다양한 형태의 약학 제조물로 제형화될 수 있다. 다양한 투여 방식 중 임의의 것이 사용될 수 있다. 예를 들어, 투여는 정맥내, 국소, 경구, 비강내, 피하, 복강내, 근육내, 또는 종양내일 수 있다.
본원에 기술된 바와 같은 백신 조성물은 임플란트의 형태를 취할 수 있다. 이와 같은 임플란트는 종양 내에 삽입될 수 있다. 전달은 다양한 이용가능한 기술, 예를 들어 주사, 주입, 점적, 국소 도포, 바늘에 의한 전달, 및/또는 카테터에 의한 전달에 의해 달성될 수 있다. 전달은 전달 장치 또는 도구, 예를 들어 바늘 또는 카테터의 사용에 의한 것일 수 있다. 이와 같은 전달 장치는 본 발명에 포함된다.
본 발명의 조성물은 하나 이상의 추가적인 치료적 개입으로 투여될 수 있다. 추가적인 치료적 처치는 이에 한정되는 것은 아니지만 수술적 절제, 방사선 치료, 화학 요법, 호르몬 요법, 항암 백신, 항체 기반 치료법, 전신 조사, 골수 이식, 말초혈 줄기세포 이식, 사이토카인, 항생제, 항균제, 항바이러스제, 예를 들어 AZT, ddI 또는 ddC의 투여, 화학치료제, 예를 들어 사이클로포스파미드, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실, 독소루비신, 빈크리스틴, 이포스파미드, 시스플라틴, 젬시타빈, 부설판, 아라-C, 아드리아미신, 미토마이신, 사이톡산, 메토트렉세이트의 투여, 및 이의 조합을 포함한다. 이와 같은 투여는 기술된 바와 같은 백신 조성물의 투여 전, 동안 및/또는 후에 일어날 수 있다.
본원에서 사용된, 용어 “대상체”는 이에 한정되는 것은 아니지만 사람 및 사람이 아닌 척추동물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 대상체는 포유류, 특히 사람이다. 대상체는 “개체”, “환자”, 또는 “숙주”일 수 있다. 대상체는, 예를 들어 사람, 고등 영장류, 사람이 아닌 영장류, 가정용 가축 및 가정용 애완동물(예를 들어, 개, 고양기, 소, 말, 돼지, 양, 염소, 노새, 당나귀, 밍크 및 가금류), 실험용 동물(예를 들어, 마우스, 래트, 햄스터, 기니아피그, 및 토끼), 및 야생 동물을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본원에 기술된 바와 같은 백신 조성물은 소, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 가정용 소, 물소, 아프리카 버팔로, 들소, 및 야크에게 투여된다.
본원에 기술된 백신 조성물은 가금류, 예를 들어 닭, 칠면조, 호로새, 자고새, 및 물새, 예를 들어 오리와 거위에게 투여될 수 있다. 닭은 이에 한정되는 것은 아니지만 암탉, 수탉, 영계, 병아리, 종축, 종계 암탉의 새끼, 및 알을 낳는 닭을 포함한다. 본 발명의 백신은 부화 전 또는 후에 가금류에게 투여될 수 있다. 가금류는 다양한 연령에서 백신을 맞을 수 있다. 예를 들어, 영계는 알, 1일령, 알, 또는 2주 내지 3주령에 예방 접종될 수 있다. 알을 낳는 가축 또는 생식용 가축은 예를 들어 약 6주령 내지 12주령에 예방 접종되고 약 16주령 내지 20주령에 추가 접종될 수 있다. 이와 같은 알을 낳는 가축 또는 생식용 가축은 약 6주령, 약 7주령, 약 8주령, 약 9주령, 약 10주령, 약 11주령, 또는 약 12주령에 예방 접종될 수 있다. 이와 같은 알을 낳는 가축 또는 생식용 가축은 약 16주령, 약 17주령, 약 18주령, 약 19주령, 또는 약 20주령에 추가 접종될 수 있다. 이와 같은 알을 낳는 가축 또는 생식용 가축의 새끼는 투여된 면역원(들)에 대한 항체 역가를 나타날 수 있으며, 상기 투여된 면역원은 새끼에 있어서 감염의 증상을 예방 또는 완화될 수 있다.
본 발명의 조성물은 당업계에서 공지되어 있고 사용되는 방법에 따라서 제형화될 수 있다. 본 발명의 백신 조성물은 염, 완충제, 방부제, 또는 조성물을 개선 또는 안정화시키기 위해 고안된 기타 다른 물질을 포함할 수 있다. 백신 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제 또는 담체를 포함할 수 있다. 본원에서 사용된 용어 “약학적으로 허용가능한 담체”는 사람 또는 기타 다른 척추동물의 동물에 대한 투여에 적당한 물질을 말한다. 투여를 위하여, 본원에 기술된 바와 같은 조성물은 필요하다면 적절하게 완충될 수 있고, 조성물은 충분한 염분 또는 글루코스를 이용하여 등장성으로 만들 수 있다. 이러한 연유로, 이용될 수 있는 멸균 수성 매질은 당업자에게 잘 알려져 있을 것이다. 게다가, 사람 투여를 위하여, 제조물은 FDA에 의해 요구되는 바와 같은 멸균, 발열, 및 일반 안전 및 순도 기준을 충족해야 한다. 이와 같은 제조물은 발열원이 없을 수 있으며, 멸균일 수 있고/있거나 내독소가 없을 수 있다.
본 발명의 조성물은 또한 하나 이상의 안정화제를 함유할 수 있다. 임의의 적당한 안정화제, 예를 들어 탄수화물, 예를 들어 소르비톨, 만니톨, 전분, 수크로스, 덱스트린, 또는 글루코스; 단백질, 예를 들어 알부민 또는 카제인; 및 완충제, 예를 들어 알칼리 금속 포스페이트 등이 사용될 수 있다. 건조 백신 제조물이 동결건조에 의해 제조될 때, 안정화제는 특히 유리하다. 이와 같은 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함할 수 있다. 담체는 예를 들어 안정화제, 방부제 및 완충제를 포함한다. 적당한 안정화제는 예를 들어 SPGA, 탄수화물(예를 들어, 소르비톨, 만니톨, 전분, 수크로스, 덱스트란, 글루타메이트 또는 글루코스), 단백질(예를 들어, 건조 유청, 알부민 또는 카제인) 또는 이의 분해 생성물을 포함한다. 적당한 완충제는 예를 들어 알칼리 금속 포스페이트를 포함한다. 적당한 방부제는 예를 들어 티메로살, 메르티올레이트 및 겐타마이신을 포함한다. 희석제는 이에 한정되는 것은 아니지만 물, 수성 완충제(예를 들어, 완충 식염수), 알코올, 및 폴리올(예를 들어, 글리세롤)을 포함한다.
광범위하게 다양한 조절제 중 임의의 것은 본원에 기술된 방법 및 조성물에 포함될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, “조절제”는 살아 있는 조직에 대하여 치료적 효과를 나타내는 제제이다. 조절제는 예를 들어 질환의 예방 및/또는 극복 및/또는 회복 촉진에 효과적인 치료제를 포함한다.
본 발명의 백신은 다수의 상이한 경로 중 임의의 것에 의해 개체에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 백신은 정맥내, 복강내, 피하, 비강, 경구, 경진피 및/또는 근육내로 투여될 수 있다. 당업계에 익히 공지된 인자, 예를 들어 대상체의 연령, 체중, 성별 및 질병; 투여 경로; 원하는 효과; 및 이용되는 특정 컨쥬게이트 및 제형을 고려함으로써 적당한 투약 요법이 결정될 수 있다. 백신은 단일 용량 또는 다회 용량으로서 투여될 수 있다. 다회 용량 예방 접종 형식으로 투여될 때, 투약의 시기는 당업계에 공지된 스케쥴을 따를 수 있다. 예를 들어, 초기 투여 후, 추후 하나 이상의 추가 접종 용량이 투여되어 항체 역가 및/또는 면역 기억을 유지할 수 있다.
본 발명의 방법은 시험관 내, 생체 외 또는 생체 내 방법을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, “시험관 내”는 세포 배양물 내이고, “생체 내”는 대상체의 신체 내이다. 본 발명으로, 분리된 면역원 또는 제제가 전달될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, “분리된”은 자연 환경으로부터 제거되거나, 재조합 기술을 사용하여 생성되거나, 화학적으로 또는 효소로 합성되고, 따라서 자연 상태로부터 “사람의 손에 의해” 변경된 물질을 말한다.
본 발명은 본원에 기술된 조성물 중 하나 이상을 이용하는 키트를 포함한다. 이와 같은 키트는 면역 반응을 유도하기 위하여 개체에게 면역원의 투여를 가능하게 할 수 있다. 본 발명의 키트는 기타 다른 시약, 예를 들어 완충제를 포함할 수 있으며, 본 발명을 실시하는데 필요한 용액이 또한 포함된다. 선택적으로 이와 같은 용기(들)와 관련된 통지문 또는 인쇄된 설명서가 있을 수 있다. 본원에서 사용된, 어구 “포장 재료”는 키트의 내용물을 수용하는데 사용된 하나 이상의 물리적 구조를 말한다. 포장 재료는 공지된 방법에 의해 구성되어, 바람직하게 멸균의 오염 물질이 없는 환경을 제공한다. 본원에 사용된, 용어 “포장”은, 한정 사항 내에서 폴리펩티드를 유지시킬 수 있는 고체 기질 또는 재료, 예를 들어 유리, 플라스틱, 종이, 포일 등을 말한다. 본 발명의 키트는 또한 사용을 위한 설명서를 포함할 수 있다. 사용을 위한 설명서는 통상적으로 시약 농도 또는 적어도 하나의 분석 방법 파라미터, 예를 들어 시약 및 혼합될 샘플의 상대적인 양, 시약/샘플 혼합물을 위한 유지 시간, 온도, 완충 조건 등을 설명하는 가시적인 표현을 포함한다
달리 지시되지 않는다면, 명세서 및 청구항에서 사용되는 요소, 분자량 등의 양을 표현하는 모든 숫자는 모든 경우에 있어서 용어 “약”으로 변형되는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 달리 반대로 지시되지 않는다면, 명세서 및 청구항에 제시된 수치 파라미터는 본 발명에 의해 얻고자 하는 원하는 특성에 따라서 달라질 수 있는 근사치이다. 적어도, 청구항의 범주에 대한 균등론을 한정하는 시도로서는 아니지만, 각각의 수치 파라미터는 적어도 기록된 유효 자릿수의 개수를 고려하여, 그리고 일반 라운딩(rounding) 기법을 적용함으로써 해석되어야 한다.
본 발명의 넓은 범주를 제시하는 수치 범위 및 파라미터가 근사치임에도 불구하고, 구체적인 실시예에 제시된 수치 값은 가능한한 정확하게 기록되어 있다. 그러나, 모든 수치 값은 본질적으로 각각의 시험 측정에서 발견된 표준 편차에서 필연적으로 생기는 범위를 포함한다.
설명은 예시적인 실시형태를 예시한다. 본 출원 전체에 걸쳐 여러 부분에서, 실시예의 목록을 통하여 지침이 제공되며, 상기 실시예는 다양한 조합으로 사용될 수 있다. 각각의 경우에서, 열거된 목록은 단지 대표적인 그룹의 역할을 할 뿐 배타적인 목록으로서 해석되어서는 안된다.
본 발명은 하기 실시예에 의해 설명된다. 특정 실시예, 재료, 양, 및 절차는 본원에 제시된 바와 같은 본 발명의 범주 및 사상에 따라서 광범위하게 해석되어야 하는 것으로 이해되어야 한다. 모든 표제는 독자의 편의를 위한 것이고, 그래서 명시되어 있지 않은 한, 표제를 따르는 본문의 의미를 한정하는데 사용되어서는 안 된다.
실시예
실시예 1
새로운 예방 접종 전달 요법은 향상된 백신 특이적 면역 반응을 만든다
종래 전달 방법이 사용될 때 보여진 것 보다 백신 전달을 향상시키기 위해, 본 실시예는 CpG 아쥬반트와 함께 또는 CpG 아쥬반트 없이 항원을, 실온에서 액체 상태이지만, 35℃에서 주사 후 생리적 조건 하에서는 겔 데포(gel-depot)를 형성하는 요소와 함께 제공하는 것에 초점을 맞추었다. 이는 항원 및 아쥬반트가 농축된 형태로 전달될 수 있게 하여, 항원 제시 세포 활성을 향상시키고 염증전의 백신 특이적인 반응을 초래한다. 재조합 간염 B 항원(rHepBag)은 예방 접종을 위한 항원으로서 사용되었고, 전달 방법은 간염 B 특이적 항체 및 사이토카인을 유도하는 능력에 대하여 7가지의 상이한 백신 전달 기법에 따라 평가되었다. 마우스를 2가지 상이한 유형의 겔 슬러리(퓨라매트릭스(또한 본원에서 “P1”으로도 지칭됨) 및 마트리겔(또한 본원에서 “P2”로도 지칭됨)) 중 rHepBag, 알하이드로겔(알루미늄 염) 중 rHepBag, 또는 완전 프로인트 아쥬반트(CFA)와 혼합된 rHepBAg으로 예방 접종하였다. 겔 슬러리 및 알하이드로겔은 뮤린 CpG ODN 1826과 혼합하거나 혼합하지 않았다.
결과는 겔 슬러리 + ODN으로 예방 접종한 마우스가 1차 접종 후 24시간 내지 48시간 경과시 TNF 생성이 상당히 더 높은 한편, P1은 24시간 경과시에 알하이드로겔보다 상당히 더 우수하였음을 나타내었다. 아쥬반트 P2는, 혈청에서 항원 특이적 IgG2a 생성의 증가와 동시에 IL-4, IL-5 및 IL-10 수준의 감소가 있어 48시간 후 유망한 Th2 억제를 제시하였다.
백신 특이적 항체의 분석은 ODN을 함께 사용하거나 ODN을 사용하지 않으면서 1차 접종 후 14일 경과시에 P1이 높은 백신 특이적 IgA, IgM 및 IgG 역가를 만들고, 높은 IgA 및 IgG 역가를 35일 동안 유지하였음을 나타내었다. 본 연구에서 시험된 겔 슬러리 시스템 둘 다는 종래의 아쥬반트보다 우수하였으므로, 이러한 새로운 겔 슬러리 백신 전달 시스템은 현재 미미하게 기능하는 현재의 수많은 백신에 대한 반응을 향상시키기 위해 폭넓은 유용성을 가질 것이다. 이러한 새로운 백신 전달 시스템의 사용은 기생충 감염 내지 바이러스 감염에서 광범위하게 다양한 전염병 중 임의의 것에 대한 백신의 개발에 있어서 추가로 조사될 것이다.
재료 및 방법
백신 및 투여 경로. 본 연구에서 사용된 실험 백신은 재조합 간염 B 항원, 즉 rHepBag(Fitzgerald Industries, Inc. 미국 매사추세츠주 소재)로부터 생성하였다. 90마리의 6주령 내지 8주령 암컷 BALB/c 마우스를 9개의 그룹으로 균등하게 나누고, 5μg rHepBag를 함유하는 용액 0.1ml, 50μg ODN 1826(InvivoGen, Inc. 미국 캘리포니아주 소재)과 5μg rHepBag의 용액 0.1ml, ODN 1826과 함께 또는 ODN 1826 없이 퓨라매트릭스(P1)와 5μg rHepBag의 용액 0.4ml, ODN 1826과 함께 또는 ODN 1826 없이 마트리겔(P2)과 5μg rHepBag의 용액 0.4ml, ODN 1826과 함께 또는 ODN 1826 없이 250μg 명반(Thermo Fisher Scientific, Inc. 미국 펜실베아니아주 소재)과 5μg rHepBag의 용액 0.1ml, 및 완전 프로인트 아쥬반트(Sigma-Aldrich Co. 미국 미주리주 소재)와 5μg rHepBag(1:2)의 용액 0.1ml를 각각 등에 1차 피하 주사(sc)하고 4주 후에 추가 접종을 하였다. 슬러리의 1회 용량을 제조하기 위하여, 50μg CpG와 사전 혼합하거나 또는 사전 혼합 없이 5μg rHBsAg 항원은 마트리겔 또는 퓨라매트릭스를 이용하여 최종 부피 400μl로 만들었고, 피하 주사 전에 철저하게 혼합하였다. 필요한 투약 수에 따라서 양을 늘렸다. 마트리겔과 퓨라매트릭스는 BD(미국 뉴저지주 프랭클린 레이크스 소재)에서 구입하였다.
사이토카인 및 항체 평가. 사이토카인 평가를 위하여 추가 접종 후 1주일 경과시 지라세포를 분리하였다. 단일 세포 현탁액(1.5 × 106/ml)을 제조하고, 페니실린-스트렙토마이신(각각 최종 농도 100U/ml 및 100μg/ml)(Sigma-Aldrich. 미국 미주리주 세인트루이스 소재)을 포함하는 1640 배지(RPMI 1640 Thermo Scientific Hyclone, 미국 유타주 소재) 중에 현탁시켰다. 단일 세포 현탁액 0.5ml를 배지 0.5ml, 1μg/ml의 콘칸나발린 A(ConA) 0.5ml 또는 5μg/ml의 rHepBag 0.5ml를 포함하는 48-웰 플레이트(Sigma-Aldrich. 미국 마주리주 세인트루이스 소재)에 첨가하고, 37℃에서 5% CO2와 함께 배양하였다. TNF 수준은 24시간 및 48시간 배양 후, IL-4 및 IL-5는 48시간 배양 후에, IL-4 및 IL-10 72시간 배양 후에 정량화하였으며, 각각은 3회씩 하였다. 사이토카인-양성 마우스의 백분율은, (1) 각각의 그룹에 대하여 얻은 값의 전체 범위를 고려하여 각각의 사이토카인에 대하여 전체 중간값을 계산하는 단계; 및 (2) 컷오프 경계선으로서 사이토카인-양성 세포의 전체 중간값 백분율을 사용하여 각각의 그룹에 대하여 ‘낮은’ 사이토카인 생성자 및 ‘높은’ 사이토카인 생성자의 개념을 확립하여 개체를 2개의 카테고리(‘낮은’ 사이토카인 생성자 및 ‘높은’ 사이토카인 생성자로 명명됨)로 분리하는 단계로 이루어진 2단계 플랫폼을 사용하여 추가로 바꾸었다. 모든 사이토카인에 대하여 동일한 가중치를 부여하고 세포 집단을 생성함으로써 각각의 그룹에 대한 전반적인 사이토카인 프로파일을 구성하였다는 것을 강조하는 것이 중요하다.
IFN 감마 ELISpot은 또한 제조자(BD Biosciences, 미국 캘리포니아주 샌프란시스코 소재)에 의해 기술된 바와 같이 양성 대조군으로서 1μg/ml의 ConA를 사용하여, 배양 24시간 후 3 x 105 및 1.5 x 105 지라세포로 실행하였다. 반점 형성 단위(SFU) 값은 3개 배양물의 평균값에서 개별적인 배경의 평균 값을 뺀 값으로서 표현하였다.
1차 면역화 전 날을 포함하여 1주 내지 6주에 마우스 유래의 혈액 샘플을 매주 수집하였다. 이들 혈액으로부터 수집한 혈청을 항체의 검출 및 정량화를 위한 ULISA 분석법에서 사용하였다.
유동 세포 계수법에 있어서 T-세포 분석을 위한 합성 펩티드. 합성 펩티드를 Biosynthesis, Inc.에 의해 합성하고, 관련 문헌을 근거로 하여 선택하였다. S 228-39 펩티드(IPQSLDSWWTSL)는 H2-Ld가 제한된 것이며 Balb/c 마우스에서 우세한 에피토프이다. 그룹 당 5마리 마우스 유래의 지라세포는 유동 세포 계수법을 위하여 5μM 펩티드 및 40U/ml IL-2로 개별적으로 자극하였다.
통계적 분석. 항체 평가를 위하여, 비교는 콜모고로브-스미르노브 정규성 검정(Kolmogorov-Smirnov normality test) 후 GraphPad PRISM 소프트웨어 버전 4.0(GraphPad Software, 미국 캘리포니아주 소재)을 사용하여 만-휘트니(Mann-Whitney) 또는 스튜던트 t 검정(Student's t test)에 의해 분석하였다. P-값이 ≤ 0.05일 때, 차이가 통계적으로 유의한 것으로 간주하였다. 그룹 사이에서 ‘낮은’ 사이토카인 생성자 및 ‘높은’ 사이토카인 생성자 빈도의 비교를 위해 카이 제곱 검정(Chi squared-test)을 사용하였다. 레이더 그래프 축과 다각형 영역의 비교는 규모로 2배 더 낮은 비율에 있어서 유의한 것으로 고려되었다. 레이터 차트 형식으로 제시된 결과에 대한 데이터 분석은 그룹 내부 및 그룹 간 사이토카인 생성자 카테고리 사이에서 중심 다각형 영역을 비교함으로써 실행하였다. 크기로 2배 더 작거나 더 큰 축 및 다각형 영역을 나타내는 비율에 있어서 유의한 차이가 고려되었다.
결과
초기 결과는 겔 슬러리 + CpG들 중 어느 하나로 예방 접종한 마우스가 명반 또는 DFA로 예방 접종한 마우스보다 1차 접종 후 14일 경과시 백신 특이적 IgG2a, 접종 후 28일 경과시 백신 특이적 IgA, IgM가 상당히 더 높았음을 나타내었다. 하나의 겔 슬러리 전달은 기타 다른 전달 방법이 추가 접종 후 보다 1차 접종 후 14일 경과시 백신 특이적 IgG 역가를 상당히 더 높게 만들었으며, 이는 추가 접종이 불필요하다는 것을 시사한다. 분석법은 겔-슬러리 + CpG 로 예방 접종한 마우스 유래의 세포에 비하여 알하이드로겔 또는 CFA로 예방 접종한 마우스의 지라세포 유래의 상향 조절된 IL-10 및 IL-4를 나타냄을 상기한다. CpG 사용은 CFA에서의 상승된 수준에 비하여 모든 그룹에서 배경에 대하여 IL-5의 수준을 감소시켰다. IFN 또는 TNF의 수준에서 차이점은 보이지 않았다.
도 1은 IgA 항-HBsAg 항체 역가의 동역학을 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10에 대하여 수집한 것이다.
도 2는 IgM 항-HBsAg 항체 역가의 동역학을 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10에 대하여 수집한 것이다.
도 3은 IgG 항-HBsAg 항체 역가의 동역학을 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10에 대하여 수집한 것이다.
도 4는 IgG1 항-HBsAg 항체 역가의 동역학을 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10에 대하여 수집한 것이다.
도 5는 IgG2a 항-HBsAg 항체 역가의 동역학을 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10에 대하여 수집한 것이다.
도 6은 단일 예방 접종 후(21일) 더 높은 항-HBsAg 항체 역가를 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10에 대하여 수집한 것이다(본페로니 사후 검사로 이원분산분석을 사용하여 항원 단독에 비하여 *p<0.05, **p<0.01, **p<0.001, ****p<0.0001).
도 7은 단일 예방 접종 후(35일) 더 높은 항-HBsAg 항체 역가를 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10에 대하여 수집한 것이다(본페로니 사후 검사로 이원분산분석을 사용하여 항원 단독에 비하여 *p<0.05).
도 8은 지라세포의 HBsAg 재자극 후 24시간 경과시 사이토카인 프로파일을 나타낸다. 나타낸 데이터는 하나의 실험을 대표한다(n=5; 본페로니 사후 검사로 이원분산분석을 사용하여 항원 단독에 비하여 *p<0.05, ****p<0.0001).
도 9는 지라세포의 HBsAg 재자극 후 48시간 경과시 사이토카인 프로파일을 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10(아쥬반트 단독에 대하여는 n=5)에 대하여 수집한 것이다(본페로니 사후 검사로 이원분산분석을 사용하여 항원 단독에 비하여 통계적인 차이가 보이지 않음(p<0.05)).
도 10은 지라세포의 HBsAg 재자극 후 72시간 경과시 사이토카인 프로파일을 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10(아쥬반트 단독에 대하여는 n=5)에 대하여 수집한 것이다(본페로니 사후 검사로 이원분산분석을 사용하여 항원 단독에 비하여 **p<0.01).
도 11은 HbsAg 특이적 T 세포 반응에서 증가된 HBsAg 특이적 세포 매개 면역을 ELISpot에 의하여 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10에 대하여 수집한 것이다(본페로니 사후 검사로 이원분산분석을 사용하여 항원 단독에 비하여 *p<0.05).
도 12는 증가된 HBsAg 특이적 T 세포 매개 면역을 유동 세포 계수법에 의하여 나타낸다. 나타낸 데이터는 2개의 독립적인 실험으로부터 전체 n=10에 대하여 수집한 것이다(본페로니 사후 검사로 이원분산분석을 사용하여 항원 단독에 비하여 *p<0.01).
rHepBag의 자극으로 지라세포에 의한 사이토카인 분비의 증가. 백신에 의해 유도되는 세포성 면역 반응을 측정하기 위하여, 마우스를 추가 접종 후 1주일 경과시에 희생시키고, 5μg/ml 최종 농도의 rHepBag와 함께 또는 rHepBag 없이 지라세포를 배양하였다. 사이토카인 수준을 ELISA에 의해 측정하였다. 낮은 생성자 및 높은 생성자의 개념을 적용하여 더 광범위한 범위의 사이토카인을 조사하고 순환하는 백혈구의 생체 외 사이토카인 프로파일을 평가하였다. 이러한 목적을 위하여, 다른 곳(Vitelli-Avelar et al., 2008, Scand J Immunol; 68(5):516-25)에 기술된 바와 같이 각각의 그룹에 대하여 얻어진 전체 범위의 값을 취함으로써, 각각의 사이토카인-양성 세포 하위 세트에 대한 전체 중간값을 계산하였다. 표 1에 나타낸 바와 같이, 각각의 사이토카인-양성 세포 집단의 전체 중간값 백분율은 컷오프 경계선으로서 사용하여 개체를 2개의 카테고리(‘낮은’ 사이토카인 생성자 및 ‘높은’ 사이토카인 생성자로 명명됨)로 분리하였다.
데이터는, ODN 1826을 함께 접종한 마우스 중 어느 것도 24시간 내에 TNF 생성을 나타내지 않았으나, ODN 1826이 아쥬반트 P1 또는 P2와 연관되어 있을 때 마우스의 상당한 비율은 도 13에 나타낸 바와 같이 컷오프 경계선을 초과하는 TNF의 값을 나타냄을 입증하였다(P < 0.011). ODN 1826과 연관되어 있거나 연관되어 있지 않을 때 알하이드로겔이 상당한 양의 ‘높은’ TNF 생성자를 유도하였지만, CpG 없이 아쥬반트 P1이 접종된 마우스 모두 컷오프 초과의 값을 나타내었으며, 이 값은 모든 알하이드로겔 그룹보다 상당히 더 높았다(P < 0.001). 아쥬반트 P1, P2, 알하이드로겔 및 프로인트가 유사한 양의 ‘높은’ TNF 생성자를 나타낼 때, 이러한 동일 결과는 48시간 후에 관찰되지 않았다(P < 0.001) (도 14a 및 도 14b).
게다가, 아쥬반트 P2로 면역화된 마우스의 대부분이 ‘낮은’ Il-4 및 Il-5 생성자의 영역으로 분류될 때 48시간 후 Il-4 및 Il-5 생성에 대하여 흥미로운 데이터가 발견되었다(P < 0.05). 상이하게, 아쥬반트 P1이 접종된 마우스의 대부분은 사이토카인 둘 다의 높은 생성을 나타내었다(P < 0.002). 도 15에 나타낸 바와 같이, ODN 1826과 연관되어 있거나 또는 ODN 1826과 연관되지 않고 아쥬반트 P1은 72시간 후에 ‘높은’ Il-4 생성자를 계속 제시하였으며, 동일한 결과가 알하이드로겔 또는 프로인트 면역화 후에 발견되었다(P < 0.001). 또한, 데이터는 아쥬반트 P2 또는 아쥬반트 P2 + ODN 1826으로 이전에 면역화된 마우스의 대부분이 컷오프 경계선 미만으로, 즉 ODN 1826과 연관되어 있거나 또는 ODN 1826과 연관되지 않은 rHepBag로 면역화된 마우스보다 상당히 더 낮은 IL-10의 값을 나타내었음을 입증하였다(P < 0.05).
Figure 112019039067885-pat00001
*데이터는 후천적 면역 세포 내 각각의 세포 집단에 대하여 계산된 전체 중간 컷오프보다 높거나 같은 사이토카인+ 세포의 백분율을 나타내는 마우스의 백분율로서 표현된다. P < 0.05 (x 2)에서 통계적 유의성은 rHepBag, rHepBag + ODN, 알하이드로겔 중 rHepBag, 알하이드로겔 + ODN 중 rHepBag, 및 프로인트 중 rHepBag 각각과의 비교를 위하여, 위첨자 문자 ‘a’, ‘b’, ‘c’, ‘d’ 및 ‘e’로 표시되어 있다. 퓨라매트릭스 (P1) 및 마트리겔 (P2).
rHepBag 및 아쥬반트 P1과 P2로 예방 접종한 마우스에서의 지속적인 체액성 반응. 면역화 전과 후에 매주 혈청을 수집하여, ELISA에 의해 특이적 이소타입의 항체 역가를 시험하였다. 아쥬반트 P1 및 P2 둘 다로 예방 접종한 마우스는 1차 접종 후 2주 이내에 항-rHepBag IgG 항체를 발현시켰다(P < 0.002). ODN과 연관이 되거나 연관되어 있지 않은 P1로 예방 접종한 마우스에서 가장 높은 항-rHepBag 항체 역가가 도달되었고, 이들 반응은 ODN, 명반 또는 프로인트 아쥬반트로의 면역화보다 상당히 더 높았다(P < 0.001). 생체 내에서 유도된 IgG1:IgG2a 비율은 아쥬반트 둘 다에 대하여 상이한 패턴을 나타낸다. 아쥬반트 P1은 1차 접종 후 14일 내지 35일 이내에 IgG1의 수준이 높은 Th2 반응으로 이어진다. 반면, P2 + ODN에 의해 유도된 반응은 순수한 Th1 또는 Th2반응보다는 혼합된 시스템이며, 여기서 IgG1 및 IgG2a 수준은 모든 시간대 동안 상향조절되었다. 도 17a 내지 도 17d를 참조한다.
아쥬반트 P1 +/- ODN의 조합은 1차 접종 후 14일 경과시 IgA 및 IgM 역가의 상향조절을 유도하였고, 이러한 체액성 반응은 각각 35일 및 21일까지 유지되었다(P < 0.04). 이러한 아쥬반트는 14일 및 35일 동안 프로인트보다 더 우수하였고, IgA, IgM 및 IgG의 생성을 위한 처음 3주 동안 알하이드로겔보다 더 우수하였다(P < 0.02). 추가적으로, 아쥬반트 P1 및 P2 둘 다 추가 접종 후 모든 Ig의 생성에 대하여 프로인트 아쥬반트보다 더 우수함을 입증하였다(P < 0.02). 도 16a 내지 도 16d를 참조한다.
논의
본 실시예는 P1 또는 P2 겔 슬러리 + ODN으로 예방 접종한 마우스는 1차 접종 후 24시간 내지 48시간 경과시 TNF 생성이 상당하게 더 높은 반면, P1은 24시간 경과시에 알하이드로겔보다 상당하게 우수하였음을 나타내었다. 아쥬반트 P2는 혈청 중 항원 특이적 IgG2a 생성이 증가함과 동시에 IL-4, IL-5 및 IL-10 수준이 감소하면서 48시간 후에 유망한 Th2 억제를 제시하였다.
백신 특이적 항체의 분석은 ODN을 함께 사용하거나 ODN을 사용하지 않으면서 1차 접종 후 14일 경과시에 P1이 높은 백신 특이적 IgA, IgM 및 IgG 역가를 만들고, 높은 IgA 및 IgG 역가를 35일 동안 유지하였음을 나타내었다. 본 연구에서 시험된 겔 슬러리 시스템 둘 다는 종래의 아쥬반트보다 우수하였으므로, 이러한 새로운 겔 슬러리 백신 전달 시스템은 현재 미미하게 기능하는 현재의 수많은 백신에 대한 반응을 향상시키기 위해 폭넓은 유용성을 가질 것이다. 이러한 새로운 백신 전달 시스템의 사용은 기생충 감염 내지 바이러스 감염에서 임의의 종류의 전염병에 대한 백신의 개발에 있어서 추가로 조사될 것이다.
실시예 2
인플루엔자 예방 접종
이전 실시예에서 더 상세하게 기술된 방법에 따라서, C57/BL 및 Balb/c 마우스는 명반, CpG, 또는 퓨라매트릭스 및 CpG의 슬러리와 함께 투여되는 재조합 핵단백질(rNP) 인플루엔자 바이러스 항원으로 면역화시켰다. 슬러리의 1회 용량을 제조하기 위하여, 50μg CpG와 사전 혼합하거나 또는 사전 혼합 없이 10μg rNP 항원은 퓨라매트릭스를 이용하여 최종 부피 200μl로 만들었고, 피하 주사 전에 철저하게 혼합하였다. 필요한 투약 수에 따라서 양을 늘렸다. 도 18b에 나타낸 바와 같이, 항-인플루엔자 IgG 역가는, 아쥬반트 명반 또는 CpG와 함께 투여되는 rNP로 예방 접종한 마우스에 비하여 슬러리로서 퓨라매트릭스 및 CpG와 함께 투여되는 rNP로 예방 접종한 Balb/c 마우스에서 증가하였다. 도 18a는 C57BL/6 마우스 중 항-인플루엔자 IgG 역가를 나타낸다. 항-인플루엔자 IgG 역가는 마지막 예방 접종 후 4주 경과시(wplv)에 측정하였다.
다시, 이전 실시예에서 더 상세하게 기술된 방법에 따라서, 퓨라매트릭스 슬러리로서, 또는 퓨라매트릭스 및 CpG의 슬러리로서 명반과 함께 투여되는 전체 불활화 인플루엔자 A 바이러스(H1N1) PR8 주로 C57Bl/6 마우스를 면역화시켰다. 대조군으로서, 추가적인 마우스를 PR8 전체 불활화 바이러스(WIV) 단독으로 면역화시켰다. 슬러리의 1회 용량을 제조하기 위하여, 50μg CpG와 사전 혼합하거나 또는 사전 혼합 없이 15μg PR8 항원은 퓨라매트릭스를 이용하여 최종 부피 200μl로 만들었고, 피하 주사 전에 철저하게 혼합하였다. 필요한 투약 수에 따라서 양을 늘렸다. PR8(WIV)은 Charles River rNP 유래의 포르말린 불활화 인플루엔자 A/PR/8/34(H1N1)이며, 상기 Charles River rNP는 Imgenex 사의 재조합 사람 인플루엔자 A(A/PR/8/34/Mount Sinai (H1N1) 분절 5) 핵 단백질 NP이다.
도 19에 나타낸 바와 같이, 혈청 항-인플루엔자 IgG 역가는, 아쥬반트 명반 또는 슬러리로서 CpG 없이 퓨라매트릭스만으로 투여되는 PR8 WIV으로 예방 접종한 마우스에 비하여, 퓨라매트릭스 및 CpG의 슬러리로서 투여되는 PR8 WIV로 예방 접종한 C57Bl/6 마우스에서 증가하였다. 항-인플루엔자 IgG 역가는 마지막 예방 접종 후 4주 경과시(wplv) 측정하였다. 도 19는 2개의 독립적인 실험의 결과를 나타낸다.
도 20에 나타낸 바와 같이, 치사 시험 접종으로부터의 향상된 방어가 PR8 WIV로 예방 접종한 C57Bl/6 마우스에서 관찰되었다. 도 20a는 30 LD50으로 치사 시험 접종한 독립적인 실험의 결과를 나타내고, 도 20b는 1000 LD50으로 치사 시험 접종한 독립적인 실험의 결과를 나타낸다.
실시예 3
부르크홀데리아 예방 접종
이전 실시예에서 더 상세하게 기술된 방법에 따라서, 3가지의 상이한 아쥬반트 제조물, 즉, 명반, 완전 프로인트 아쥬반트(CFA), 또는 퓨라매트릭스 및 CpG의 슬러리 중 하나와 함께 투여되는 3가지의 상이한 부르크홀데리아 재조합 단백질(부르크홀데리아 4-9 단백질, 부르크홀데리아 22-11 단백질, 및 부르크홀데리아 42 단백질)의 혼합제로 마우스를 면역화시켰다. 퓨라매트릭스 + CpG 슬러리의 1회 용량을 제조하기 위하여, 50μg CpG와 사전 혼합하거나 또는 사전 혼합 없이 75μg 부르크홀데리아 단백질 항원 은 퓨라매트릭스를 이용하여 최종 부피 200μl로 만들었고, 피하 주사 전에 철저하게 혼합하였다. 필요한 투약 수에 따라서 양을 늘렸다. 대조군으로서, 추가적인 마우스를 항원 없이 명반 단독, CFA 단독, 또는 퓨라매트릭스 + CpG 슬러리로 면역화시켰다.
부르크홀데리아(이전에 슈도모나스(Pseudomonas)의 일부이었음) 속 이름은 사실상 편재하는 그람 음성이고, 운동성이며 편성 호기성인 간상 박테리아(동물/사람 및 식물 병원체를 모두 포함함)뿐만 아니라 일부 환경적으로 중요한 종의 군을 말한다. 부르크홀데리아는 자체의 병원체 구성원으로 가장 잘 알려져 있다. 부르크홀데리아 말레이는 대부분 말과 관련 동물에서 발생하는 질환인 비저의 원인이다. 부르크홀데리아 슈도말레이는, 특히 동남아시아 및 북부 호주에서 사람 또는 동물을 감염시킬 수 있는 주로 열대성 기후의 전염병인 유비저(또한, 휘트모어병이라고도 불림)의 병인이다. 부르크홀데리아 세파시아는 낭포성 섬유증이 있는 사람에 있어서 폐 감염의 중요한 병원체이다. 이들의 연관된 질환에서 높은 사망률과 항생 물질 내성으로 인하여 부르크홀데리아 말레이 및 부르크홀데리아 슈도말레이는, 가축과 사람을 표적으로 하는 잠재적인 생물학적 무기인 것으로 간주된다.
도 21은 3가지 부르크홀데리아 재조합 단백질(부르크홀데리아 4-9 단백질, 부르크홀데리아 22-11 단백질, 및 부르크홀데리아 42 단백질)의 혼합제로 면역화시킨 마우스에서의 항-부르크홀데리아 IgG 역가를 나타낸다. 도 21의 B는 면역화시킨 마우스에서 항-부르크홀데리아 단백질 4-9 IgG 역가를 나타낸다. 도 21의 A는 면역화시킨 마우스에서 항-부르크홀데리아 단백질 22-11 IgG 역가를 나타낸다. 도 21의 C는 면역화시킨 마우스에서 항-부르크홀데리아 단백질 42 IgG 역가를 나타낸다. 명반 단독, 명반 + 단백질 혼합제, 완전 프로인트 아쥬반트(CFA) 단독, CFA + 단백질 혼합제, 퓨라매트릭스 + CpG 슬러리 단독, 및 퓨라매트릭스 겔 + 단백질 혼합제로 면역화시킨 후 항체 역가가 나타내어져 있다. 특이적인 혈청 항체 수준에 의해 측정된 바와 같이, 명반 또는 CFA로 예방 접종한 것에 비하여 겔 백신 조성물로서 퓨라매트릭스와 함께 투여되는 3가지 단백질 중 2가지에 대하여 증가된 면역 반응이 관찰되었다. 구체적으로, 명반 또는 CFA로 예방 접종한 것에 비하여 겔 백신으로서 퓨라매트릭스와 함께 투여된 때 부르크홀데리아 4-9 단백질(도 21의 B) 및 부르크홀데리아 22-11 단백질(도 21의 ab)에 대하여 증가된 항-부르크홀데리아 IgG 역가가 관찰되었다. 시험 접종 데이터가 분석되어 있다.
실시예 4
수의과용 백신
이전 실시예에서 더 상세하게 기술된 방법에 따라서, 본 발명은 다양한 수의과용 백신 중 임의의 것과 함께 사용될 수 있다. 본 발명의 백신 조성물, 전달 방법, 및 전달 시스템은 상업적인 축산업, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만, 개선된 효능, 생산 주기에 있어서 조기 전달, 및 오직 단일 용량의 투여를 이용한 효능에 대하여 다수의 이점 및 더 우수한 가치를 제공하여, 생산 주기에 걸쳐서 방어를 제공할 것이다.
본 발명의 조성물, 전달 방법, 및 전달 시스템은 돼지의 면역화에 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물, 방법 및 시스템을 사용하여 돼지에 투여될 수 있는 백신은 이에 한정되는 것은 아니지만 돼지 서코바이러스 유형 2(PCV2) 백신, 돼지 생식기 호흡기 증후군(PRRSV), 호흡기 마이코플라스마 백신, 스트렙토코커스 수이스 백신, 돼지 코로나바이러스 백신, 로타바이러스 백신, 독소원성 에스케리키아 콜라이(K88) 백신, 악티노바실러스 플레우로뉴모니아(APP) 백신, 및 돼지 인플루엔자 백신을 포함한다. 이용가능한 백신 및 돼지에게 이와 같은 백신의 투여에 대한 더 상세한 정보에 있어서는, 예를 들어 월드와이드웹 merck-animal-health.com/species/pigs/vaccines.aspx, 문헌[“Vaccinations for the Swine Herd,” Alabama Cooperative Extension System Publication ANR-902, Alabama A&M and Auburn Universities(월드와이드웹 aces.edu/pubs/docs/A/ANR-0902/ ANR-0902.pdf에서 이용가능함)], 및 [“Pig vaccination programs,” PRIME FACT publication 944, September 2009(월드와이드웹 dpi.nsw.gov.au/__data/assets/pdf_file/0009 /301500/Pig-vaccination-programs.pdf에서 이용가능함)을 참조한다.
본 발명의 조성물, 전달 방법, 및 전달 시스템은 소, 예를 들어 가정용 소, 물소, 아프리카 버팔로, 들소, 및 야크의 면역화에 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물, 방법 및 시스템을 사용하여 소에 투여될 수 있는 백신은 이에 한정되는 것은 아니지만 소 호흡기 질환(BRD) 백신, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 BVDV 유형 I 및 유형 II, 소 헤르페스 바이러스 1(BHV-1) 백신, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 잠복성 바이러스를 생성하지 않을 아단위 백신, 해모필루스 솜누스 백신, 맨헤이미아 해몰리티카 백신, 마이코플라스마 보비스 백신, 소 로타바이러스 백신, 에스케리키아 콜라이 K99 백신, 소 코로나바이러스(BCV) 백신, 클로스트리듐 초베이(흑갈병) 백신, 클로스트리듐 셉티쿰 백신, 클로스트리듐 소르델리(악성 부종) 백신, 클로스트리듐 노비(전염성 회저성 간염) 백신, 클로스트리듐 페르프리젠스(장독소혈증) 백신, 소 전염성 각막 결막염(홍안병) 백신, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 모락셀라 보비스, 클라미디아, 마이코플라스마, 아콜레플라스마, 또는 소 전염성 비기관염(IBR) 바이러스 백신, 유방염 백신, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 에스케리키아 콜라이 J5 백신을 포함한다.
일부 적용에서, 본 발명의 조성물, 전달 방법, 및 전달 시스템은 보보이드로 하나 이상의 주혈흡충병 항원의 투여에 사용될 수 있다. 이와 같은 주혈흡충 항원은 예를 들어 시스토소마 자포니쿰, 시스토소마 몬소니, 및 시스토소마 해마토비움으로부터 유래할 수 있다. 주혈흡충 항원은 주혈흡충 3탄당 인산 이성질체화 효소(CTPI) 단백질, 또는 이의 항원성 단편 또는 유도체, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 에스. 자포니쿰, 에스. 몬소니, 또는 에스. 해마토비움 CTPI 단백질, 또는 이의 항원성 단편 또는 유도체일 수 있다. 주혈흡충 항원은 주혈흡충 테트라스핀 23kDa 내재 막 단백질(C23), 또는 이의 항원성 단편 또는 유도체, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 에스. 자포니쿰, 에스. 몬소니, 또는 에스. 해마토비움 C23 단백질, 또는 이의 항원성 단편 또는 유도체일 수 있다. 이와 같은 주혈흡충 항원은 하나 이상의 추가적인 항원성 결정 인자, 예를 들어 열 충격 단백질, 또는 이의 항원성 단편 또는 유도체, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 소의 열 충격 단백질 70(Hsp70)과 같은 항원성 결정 인자에 융합된 키메라 폴리펩티드일 수 있다.
이용가능한 백신 및 소에게 이와 같은 백신의 투여에 대한 더 상세한 정보에 있어서는, 예를 들어 문헌[“Beef Cattle Herd Health Vaccination Schedule” Powell et al., University of Arkansas, Division of Agriculture, Agriculture and Natural Resources publication FSA3009(월드와이드웹 uaex.edu/Other_Areas/publications/PDF/FSA-3009.pdf에서 이용가능함)], [“How to Vaccinate,” Oklahoma Cooperative Extension Service, Division of Agricultural Sciences and Natural Resources, Publication No. 350(월드와이드웹 ansci.colostate.edu/pdf_files/YLE/Dairy7_vaccinate.pdf에서 이용가능함)], 및 [“Cattle Vaccines and Their Use,” Beef Cattle Handbook publication BCH-3015(월드와이드웹 iowabeefcenter.org/Beef%20Cattle%20Handbook/Vaccines_Cattle.pdf에서 이용가능함)]을 참조한다.
본 발명의 백신 조성물, 전달 방법, 및 전달 시스템은 또한 반려 동물, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 고양이 및 개의 예방 접종, 예를 들어 모성 면역의 전달을 위한 파보바이러스를 이용한 개의 면역화를 위해 사용될 수 있다.
투여 경로는 이에 한정되는 것은 아니지만 피하(sc) 또는 근육내(im) 주사를 포함한다. 본 발명의 조성물, 방법, 및 전달 시스템을 이용한 예방 접종으로 단일 용량의 투여 후 빠르고, 더 오래 지속하는 방어를 가져올 것이다.
실시예 5
가금류 백신
이전 실시예에서 더 상세하게 기술된 방법에 따라서, 본 발명은 다양한 가금류 백신, 예를 들어 이에 한정되는 것은 아니지만 전염성 기관지염(IB), 뉴캐슬병(ND), 마레크병 바이러스, 전염성 F낭병(IBD) 바이러스, 전염성 후두기관염(ILT), 조류 레오바이러스, 콜레라, 계두, 마이코플라즈마증, 칠면조 및 닭 코리자, 조류 인플루엔자, 조류 뇌척수염(AE), 조류 비기관염(ART), 오리 바이러스성 간염, 출혈성 장염, 거위 파보바이러스, 파라믹소바이러스 3, 닭 빈혈 바이러스(CAV), 이. 콜라이, 단독, 레이메렐라, 마이코플라스마 갈리셉티컴, 파스튜렐라 멀토시다, 살모넬라 엔테리티디스, 살모넬라 티피뮤리움, 및 콕시듐증을 위한 백신 중 임의의 것을 위한 전달 시스템으로서 사용될 수 있다.
투여 경로는 이에 한정되는 것은 아니지만 피하(sc) 또는 근육내(im) 주사를 포함한다. 피하 주사로, 백신은 피부와 내부 조직 사이의 공간으로 주사된다. 통상적으로 가금류에서 사용되는 적용 위치는 목 뒤에서 늘어진 피부이다. 근육내 주사로, 백신 제조물은 많은 근육 내에 침착된다. 통상적으로, 가슴 근육 또는 대퇴부 근육이 이러한 목적을 위해 사용된다. 예방 접종은 갓 부화한 새, 어린 암탉, 알을 낳는 닭, 종축, 영계, 및/또는 쇼를 위한 새의 예방 접종을 포함할 수 있다. 통상적으로 알을 낳는 닭 및 종축은 산란 기간 전에 예방 접종하고, 그 다음 산란 기간 동안 6주 내지 8주 마다 불활화 백신으로 예방 접종한다. 이는 질환으로부터 가금류를 보호할 뿐만 아니라, 자손에게 모체 이행 항체를 전달한다. 예방 접종할 수 있는 가금류는 이에 한정되는 것은 아니지만, 닭, 칠면조, 및 물새, 예를 들어 오리 및 거위를 포함한다.
실시예 6
주혈흡충병 면역화
*완전 프로인트 아쥬반트 중 또는 마트리겔 + CpG 중 주혈흡충 단백질 항원 CCA로 마우스를 면역화시켰다. 항-CCA IgG 항체 역가는 ELISA에 의해 측정하였다. 데이터는 도 22a(완전 프로인트 아쥬반트 중 CCA) 및 도 22b(마트리겔 + CpG 중 CCA)에 나타내어져 있다. 각각의 항원 제조물에 대하여 2마리 마우스를 면역화시켰다. 완전 프로인트 아쥬반트 중 CCA로 면역화시킨 마우스에 대하여 면역화 후 0일, 8일, 16일, 및 19일 경과시에, 그리고 마트리겔 + CpG 중 CCA로 면역화시킨 마우스에 대하여 면역화 후 0일, 8일, 16일, 24일, 32일, 및 40일 경과시에 혈청 샘플을 수집하였다. ELISA 데이터는 마트리겔 + CpG로 면역화시킨 마우스 중 CCA 특이적 항체의 더 높은 역가를 분명하게 나타낸다.
실시예 7
물소의 주혈흡충병 예방 접종
주혈흡충병은 전세계 2억명 초과의 사람을 감염시키는 기생병이다. 주혈흡충 감염의 전체적 유병률에 대한 최근 정보와 결합되어 주혈흡충병 관련 장애의 재평가는, 주혈흡충병의 진정한 부담이 이전에 평가된 것보다 상당히 더 크다는 것을 나타낸다. 아시아, 특히 중국에서, 병인은 시스토소마 자포니쿰이다. 아프리카 종인 에스. 만소니 및 에스. 해마토비움과 달리, 에스. 자포니쿰은, 중국에서 사람에게 주혈흡충 전염의 약 75%를 차지하는 소, 특히 물소와 인수 공통 기생충이다. 물소에서 주혈흡충 감염을 감소시키는 개입은 물소의 건강 상태를 향상시키면서 동시에 사람에게의 질환 전염을 감소시킬 것이다. 중국 다수 지역에서의 현재 방제 프로그램은 사람 및 물소의 동시 프라지콴텔(PZQ) 처치를 포함하며, 이는 전반적인 유병률에서 감소를 나타내었지만, 반면 이는 시간이 걸리면서 비용이 많이 드는 지속적인 대량 처치를 필요로 한다. 더 지속가능한 선택은 소 유래의 에스. 자포니쿰의 전염을 감소시켜 소의 화학 요법을 대체하는 백신의 개발일 것이다. 실제로 수학적 모델링(Williams et al., 2002, Acta Trop; 82(2):253-262)은 단독으로 45% 효능을 나타내는, 또는 PZQ와의 조합으로 예방 백신을 사용하여 소과 보유 숙주에서 에스. 자포니쿰 감염을 감소키는 것은 시간의 경과에 따라 평형 상태의 유병률을 감소시키고 잠재적으로 주혈흡충병의 장기적으로 지속가능한 방제로 이어질 것임을 입증하였다. 이는 2갈래의 베이스 개입이 장기간 동안 주혈흡충병의 전염을 상당히 감소시키고, 소의 건강 상태 및 성장을 증가시킬 것이며, 마을 인구에서 전반적인 이환율을 감소시킬 가능성이 있을 것이다. 문헌[Da'Dara et al., 2008, Vaccine; 26(29-30):3617-3625]을 참조하며, 이는 본원에 전체가 참조로 포함되어 있다.
본원에 기술된 바와 같은 항원-퓨라매트릭스는 에스. 자포니쿰 항원과 함께 가축을 면역화시키는데 사용될 것이다. 이러한 시험을 위하여, 모든 동물은 SjCTPI-Hsp70 플라스미드 DNA 백신으로 1차 예방 접종할 것이다(문헌[Da'Dara et al., 2008, Vaccine; 26(29-30):3617-3625]에 더 상세히 기술된 바와 같음). 물소는 재조합 SjCTPI 단백질, 퓨라매트릭스 및 소 CpG의 조성물로 추가 접종시킬 것이다. 구체적으로, 재조합 SjCTPI + 소 CpG의 100μg은 전제 주사 부피를 대략 0.50ml/동물로 하기 위하여 퓨라매트릭스 중에서 혼합될 것이다. 이는 버팔로/및 소의 어깨에 주사할 것이다. 단지 1회의 추가 접종이 동물에게 투여될 것이다.
체액성 및 세포성 면역 반응, 예를 들어 항-SjCTPI IgG 항체 반응의 유도가 측정될 것이다. 추가 접종 후, 동물은 유미유충(cercariae)으로 시험 접종하고, 백신 효능은 배설물 그램 당 알 수의 감소, 간 조직에서 알의 감소, 주혈흡충 유충 부화(miracidial hatching)의 감소, 및 부하충체수의 감소를 측정함으로써 결정될 것이다. 이들 측정을 위한 방법은 문헌[Da'Dara et al., 2008, Vaccine; 26(29-30):3617-3625]에 더 상세히 기술되어 있다.
필리핀에서의 첫번째 시험은 필리핀에서, 상기 기술된 바와 같이 400마리의 물소 또는 소가 추가 접종되고 이미 2년차에 있다. 필리핀 사마르에서 두번째 시험은 1500마리의 물소 또는 소를 포함할 것이다. 중국에서의 세번째 시험은 600마리의 물소 또는 소를 포함할 것이다.
아쥬반트, 예를 들어 CpG 또는 IL-12와 함께 또는 이러한 아쥬반트 없이 퓨라매트릭스 조성물 중 주혈흡충 폴리펩티드, 예를 들어 SjCTPI, SjCTPI-Hsp70, SjC23, 또는 SjC23-Hsp70 폴리펩티드의 조성물을 이용한 물소 및 소의 면역화는 아시아에서 주혈흡충병에 대한 새로운 방제 프로그램을 위한 기초로서의 역할을 할 수 있다. 프라지콴텔(PZQ)을 이용한 처치에 더하여 이와 같은 프로그램은, 가축 중 산란 기생충의 수를 감소시키는 수단으로서 부분적으로 방어 백신, 예를 들어 SjC23-Hsp70 및 SjCTPI-Hsp70을 이용한 물소의 예방 접종을 포함할 것이며, 이는 에스. 자포니쿰의 유병률, 강도 및 전염에 있어서 측정가능한 감소로 이어질 것이다.
모든 특허, 특허 출원, 및 간행물의 완전한 개시 내용, 및 본원에 언급된 전자적으로 이용가능한 자료(예를 들어, 예컨대 GenBank 및 RefSeq에서 뉴클레오티드 서열 제출, 및 예컨대 GenBank 및 RefSeq에서 주석이 달린 암호화 영역으로부터의 번역물, 및 SwissProt, PIR, PRF, PDB 중 아미노산 서열 제출을 포함함)가 참조로 포함되어 있다. 본 출원의 개시 내용과 본원에 참조로 포함된 임의의 문헌의 개시 내용(들) 사이에 임의의 불일치가 존재하는 경우, 본 출원의 개시 내용이 우선할 것이다. 상기 상세한 설명 및 실시예는 단지 이해를 명확하게 하기 위하여 제공되었다. 어떠한 불필요한 제한도 이로부터 이해되어서는 안된다. 당업자에게 자명한 변화가 청구항에 정의된 발명 내에 포함될 것이므로, 본 발명은 나타내어 지고 기술된 정확한 상세 내용으로 한정되지 않는다. 모든 표제는 독자의 편의를 위한 것이고, 그래서 명시되어 있지 않은 한, 표제를 따르는 본문의 의미를 한정하는데 사용되어서는 안 된다.
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Claims (37)

  1. 하나의 성분으로서 펩티드 스캐폴드 RADARADARADARADA의 펩티드 하이드로겔, 및 다른 성분으로서 하나 이상의 항원을 포함하는 동결건조된 제조물.
  2. 제1항에 있어서, 항원은 박테리아 항원, 바이러스 항원, 기생충 항원, 및/또는 종양 연관 항원을 포함하는 동결건조된 제조물.
  3. 제1항에 있어서, 항원은 간염 항원, 인플루엔자 항원, 주혈흡충 항원, 부르콜데리아(burkholderia) 항원, 및/또는 말라리아 항원, 또는 이의 항원성 단편을 포함하는 동결건조된 제조물.
  4. 제3항에 있어서, 주혈흡충 항원은 시스토소마 자포니쿰 (Schistosoma japonicum) 항원, 또는 이의 항원성 단편을 포함하는 동결건조된 제조물.
  5. 제3항에 있어서, 주혈흡충 항원은 SjCTPI 폴리펩티드, SjCTPI-Hsp70 폴리펩티드, SjC23 폴리펩티드, 및/또는 SjC23-Hsp70 폴리펩티드, 또는 이의 항원성 단편을 포함하는 동결건조된 제조물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 아쥬반트를 추가로 포함하는 동결건조된 제조물.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 톨 유사 수용체(TLR) 작용제 및/또는 사이토카인을 추가로 포함하는 동결건조된 제조물.
  8. 제7항에 있어서, TLR 작용제는 TLR4 및/또는 TLR9 작용제를 포함하는 동결건조된 제조물.
  9. 제8항에 있어서, TLR9 작용제는 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드(ODN)를 포함하는 동결건조된 제조물.
  10. 제1항에 있어서, 펩티드 하이드로겔은 퓨라매트릭스(PURAMATRIX)를 포함하는 동결건조된 제조물.
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