KR101966374B1 - Composition for accelerating wound healing comprising and Aquilaria crassna extract and β-Glucan - Google Patents

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Abstract

The present invention relates to a composition for accelerating wound healing containing an Aquilaria agallocha extract and β-glucan. More specifically, the present invention relates to the composition for accelerating wound healing, which is effective for skin damage, skin ulceration or wound healing by inducing regeneration of damaged skin in vivo.

Description

침향 추출물 및 베타글루칸(β-Glucan)을 포함하는 상처 치료 촉진용 조성물{Composition for accelerating wound healing comprising and Aquilaria crassna extract and β-Glucan}[0001] The present invention relates to a composition for accelerating wound healing, which comprises an acicular extract and beta-glucan,

본 발명은 침향 추출물 및 베타글루칸(β-Glucan)을 포함하는 상처 치료 촉진용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 생체내에서 손상된 피부의 재생을 유도하여, 피부 손상, 피부궤양 또는 상처 치료에 효과적인 상처 치료 촉진용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for accelerating wound healing comprising an oxidized extract and beta-glucan, and more particularly to a composition for stimulating wound healing in vivo, which is effective for skin damage, skin ulceration or wound healing And to compositions for promoting wound healing.

피부는 인체를 보호하거나 방어하는 1차적 기관이면서, 신체표면을 전체에 걸쳐 덮고 있는 가장 넓은 기관으로서, 표피, 진피 및 피하조직으로 구성된다. 이중에서도 표피 부분의 가장 바깥층에 위치하는 각질층은 각질과 지질로 구성되어 있으면서 유해물질 침투나, 수분증발을 억제하고, 박테리아나 외부 자극으로부터 인체를 보호한다. Skin is the primary organ that protects or defends the body, but it is the largest organ covering the entire body surface, consisting of epidermis, dermis and subcutaneous tissue. The stratum corneum, which is located on the outermost layer of the epidermis, is composed of keratin and lipid while inhibiting the infiltration of harmful substances and evaporation of water and protecting the body from bacteria or external stimuli.

그런데, 이러한 피부 표면은 자외선, 건조한 날씨, 차가운 바람, 잘못된 세안습관과 같이 외부의 유해 환경으로 인해 끊임없이 손상되고 있다. 이 때문에 피부를 구성하는 가장 바깥부부분인 외피세포는 끊임없이 벗겨져 제거되고, 그 밑에 자라나는 다른 세포들이 그 자리를 대신하는 과정이 계속 되고 있다.However, these skin surfaces are constantly damaged by external harmful environments such as ultraviolet rays, dry weather, cold winds, and incorrect washing habits. Because of this, the outermost part of the skin, which is the outer part of the skin, is constantly peeled off and the other cells that grow beneath it continue to take its place.

한편 상처 치유는 손상된 피부나 조직을 정상적인 상태로 복원하기 위한 과정으로 염증기(inflammatory phase), 증식기(proliferative phase), 재구성기(remodeling phase)의 3단계로 분류된다(Doaa Mohamed Hasan 등, 2012년. The Effect of Tamoxifen on Healing of Skin Wounds in Senile, Adult Ovariectomized and Adult Nonovariectomized Female Rats).On the other hand, wound healing is a process of restoring damaged skin or tissue to a normal state. It is divided into three phases: inflammatory phase, proliferative phase, and remodeling phase (Doaa Mohamed Hasan et al. The Effect of Tamoxifen on Healing of Skin Wounds in Senile, Adult Ovariectomized and Adult Nonovariectomized Female Rats).

염증기(inflammatory phase)는 혈액이 응고되어 지혈이 이루어지는 단계로 상처를 청소하는 단계이다. 증식기(proliferative phase)는 새로운 혈관 형성과 콜라겐 생성이 일어나 육아조직을 형성하는(granulation) 단계이다. 재구성기(remodeling phase)는 상처 치유의 마지막 단계로서, 증식된 상피세포들이 성숙해지고(maturation), 섬유조직형성, 혈관생성, 재상피화, 세포외기질 합성 등이 나타난다. 이와 같이 상처 치유는 항염, 상피세포 증식, 콜라겐 합성 등의 다양한 기능이 관여한다.The inflammatory phase is the stage where the blood coagulates and the hemostasis occurs, and the wound is cleaned. The proliferative phase is a stage in which new blood vessel formation and collagen production occur and granulation tissue is formed. The remodeling phase is the final stage of wound healing, with proliferating epithelial cells maturing, fibrous tissue formation, angiogenesis, re-epithelialization, and extracellular matrix synthesis. Thus, wound healing involves various functions such as anti-inflammation, epithelial cell proliferation, and collagen synthesis.

이러한 상처 치유 과정을 조절하는 대표적인 물질 중의 하나로 성장 인자(growth factor)를 들 수 있는데, 이들은 상처 치유 과정 전반에 걸쳐 세포의 성장, 분화, 대사 등을 조절하고 상처 주변 환경을 조절한다. 성장인자 중에서도 표피 성장 인자(epidermal growth factor: EGF)는 상처 치유에 있어 중요한 성장 인자이다.One of the typical materials that regulate the wound healing process is growth factors, which control the growth, differentiation, and metabolism of cells throughout the wound healing process and regulate the surrounding environment. Among growth factors, epidermal growth factor (EGF) is an important growth factor in wound healing.

EGF는 여러 연구를 통해서 피부, 각막, 점막 등의 상처 치유를 촉진한다는 보고가 있다. 또한, EGF는 임상적으로 조직이식부위, 당뇨성 족부괴양과 같은 만성 창상에 외용으로 도포할 경우 상피화가 촉진되어 상처회복 속도가 단축되는 것으로 알려져 있다(Barrientos S. et al. Growth factors and cytokines in wound healing. Wound Repair Regen. 2008 16(5):585-601). 또한 표피성장인자 수용체가 활성화되면, VEGF와 HGF와 같은 성장인자의 생성을 유도하여 각질세포와 섬유모세포의 성장을 촉진하며, 또한 섬유모세포에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 생성을 유도하는 것으로 알려져 있다. 예를 들면, TGF-β(transforming growth factor-β)가 있다. 상기 TGF-β는 여러 가지 세포들의 성장과 분화에 관여하는 물질로, 성장 조절, 면역반응의 조절, 골생성의 자극, 연골-특이적 고분자(cartilage-specific macromolecule)의 유도, 창상치유 촉진 등의 여러 가지 복잡한 기능을 한다고 보고된 바 있다(Bennett, N.T. et al., Am. J.Surg. 165: 728, 1993).EGF has been reported to promote wound healing in skin, cornea, and mucosa through various studies. In addition, it has been known that EGF is externally applied to chronic wounds such as a tissue transplantation site and a diabetic foot stalk to facilitate epithelialization, thereby shortening the wound restoration rate (Barrientos S. et al., Growth factors and cytokines in Wound Repair Regen 2008 16 (5): 585-601). In addition, when the epidermal growth factor receptor is activated, it induces the production of growth factors such as VEGF and HGF, promotes the growth of keratinocytes and fibroblasts, and induces the production of collagen-like extracellular matrix in fibroblasts. For example, there is TGF-beta (transforming growth factor-beta). TGF-beta is a substance involved in growth and differentiation of various cells, and is a substance which regulates growth, regulates immune response, stimulates bone formation, induces cartilage-specific macromolecule, (Bennett, NT et al., Am. J. Surg. 165: 728, 1993).

하지만, 지금까지 개발된 피부 재생 및 상처 치유를 위한 화장료 또는 의약품 대부분은 인위적으로 제조된 화합물 성분을 다량 함유하여 피부가 자극되는 부작용이 나타나거나 피부 재생 능력에 한계가 있는 실정이다. 그로 인해, 최근에는 부작용이 없고, 가격이 저렴한 천연물을 개발하여 창상을 치료하고자 하는 연구가 이루어지고 있다.However, most of the cosmetics or medicines for skin regeneration and wound healing developed until now contain a large amount of artificially produced compound components, resulting in side effects that are irritating to the skin or limit the ability to regenerate the skin. Therefore, recently, studies have been conducted to develop natural products which are free from side effects and which are inexpensive, and to treat wounds.

이에 따라, 천연물을 이용한 종래기술로는 대한민국 등록특허공보 제10-1372789호에는 장미 태좌 조직 배양물 또는 그 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물 및 기능성 식품이 공지되어 있으며, 대한민국 공개특허공보 제2016-0121847호에는 백미 추출물의 지표성분인 시나프산 또는 이를 함유하는 백미 추출물을 함유하는 피부재생용 화장료 조성물 및 상처 치료용 약학 조성물이 공지되어 있다.Accordingly, Korean Patent Registration No. 10-1372789 discloses a skin external composition composition and a functional food containing a rose terracotta tissue culture or an extract thereof, as disclosed in Korean Patent Laid-Open Publication No. 2016-0121847 There is known a cosmetic composition for skin regeneration and a pharmaceutical composition for treating wounds containing cinnamic acid or a white rice extract containing the same as an indicator component of white rice extract.

그러나, 앞서 상술한 종래기술에서는 단순히 피부의 표피층을 개선하여 피부 상처 치료 촉진 및 재생 효과를 나타내고 있으나 피부의 진피층으로 투과하여 피부 상처 치료를 촉진시키는 것에 대한 기재는 보고된 바 없다.However, in the above-mentioned prior arts described above, the skin layer of the skin is simply improved to promote the skin wound treatment and regenerating effect, but no description has been made on the promotion of skin wound treatment through permeation into the dermal layer of the skin.

대한민국등록특허공보 KR 10-1372789Korean Patent Publication No. 10-1372789 대한민국공개특허공보 KR 2016-0121847Korean Patent Publication No. 2016-0121847

전술한 문제점을 해소함에 있어, 본 발명의 목적은 피부 내 진피 회복을 유도하여 우수한 상처 치료효과를 나타내는 침향 추출물 및 베타글루칸(β-Glucan)을 포함하는 상처 치료 촉진용 조성물을 제공함에 있다.In solving the above-mentioned problems, an object of the present invention is to provide a composition for accelerating wound healing, which comprises an oxidized extract and beta-glucan, which induces recovery of dermis in the skin and exhibits excellent wound healing effects.

아울러, 천연물인 침향 추출물을 포함하여 가격이 저렴하면서 안정적으로 상처 치료를 촉진할 수 있는 상처 치료 촉진용 조성물을 제공함에 있다.It is another object of the present invention to provide a composition for accelerating wound healing, which can be used at low cost and stably including wounded extract as a natural product.

본 발명의 실시예에 따른 침향 추출물, 베타글루칸(ß-Glucan) 및 EGF 단백질을 유효성분으로 포함하는 상처 치료 촉진용 조성물을 제공한다.The present invention provides a composition for stimulating wound healing, which comprises an oxidized extract, beta-glucan and EGF protein according to an embodiment of the present invention as an active ingredient.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 베타글루칸은 식물로부터 유도된 베타-(1,3)-글루칸, 베타-(1,4)-글루칸, 베타-(1,6)-글루칸 또는 이들의 적어도 2 이상의 혼합물을 포함할 수 있다.In one embodiment of the invention, the beta glucan is selected from the group consisting of beta- (1,3) -glucan, beta- (1,4) -glucan, beta- (1,6) Or mixtures thereof.

또한, 상기 베타글루칸은 베타-(1,3)에 측쇄를 갖는 베타-(1,6) 글루칸을 포함할 수 있다.In addition, the beta-glucan may include beta- (1,6) glucan having a side chain in beta - (1,3).

상기 베타글루칸은 30,000 ~ 300,000 Da의 분자량을 갖을 수 있다.The beta-glucan may have a molecular weight of 30,000 to 300,000 Da.

상기 베타글루칸은 잎새버섯(Grifola frondosa) 균사체로부터 유도될 수 있다.The beta-glucan may be derived from mycelia of Grifola frondosa.

상기 침향 추출물이 전체 조성물에 대해 0.0001 ~ 20 중량%로 포함할 수 있다.The water-soluble extract may contain 0.0001 to 20% by weight of the total composition.

상기 EGF 단백질이 전체 조성물에 대해 0.0001 ~ 0.001 중량%로 포함할 수 있다.The EGF protein may be contained in an amount of 0.0001 to 0.001% by weight based on the total composition.

상기 베타글루칸이 전체 조성물에 대해 0.001 ~ 9 중량%로 포함할 수 있다.The beta-glucan may be contained in an amount of 0.001 to 9% by weight based on the total composition.

상기 조성물은 피부의 진피층까지 투과하여 피부 재생을 유도할 수 있다.The composition may penetrate to the dermal layer of the skin to induce skin regeneration.

상기 조성물은 화장품으로 사용되거나 피부 및 조직 충진제, 창상피복제 또는 약물 전달체로 사용될 수 있다.The compositions may be used as cosmetics or as skin and tissue fillers, wound epithelial replication or drug delivery vehicles.

상술한 바와 같이, 본 발명에 의한 침향 추출물 및 베타글루칸(β-Glucan)을 포함하는 상처 치료 촉진용 조성물은 피부 내 진피 회복을 유도하여 우수한 상처 치료효과를 나타낼 수 있다.As described above, the composition for accelerating wound healing, which comprises the intumescent extract and beta-glucan according to the present invention, can induce dermal restoration in the skin and exhibit an excellent wound healing effect.

아울러, 본 발명에 의한 상처 치료 촉진용 조성물은 천연물인 침향 추출물을 포함하여 가격이 저렴하면서 안정적으로 상처 치료를 촉진할 수 있다. In addition, the composition for promoting wound healing according to the present invention can promote wound healing at a low cost and stably, including a natural extract.

도 1은 하지궤양 (괴저성 농피증)에 본 발명의 일 실시예에 따른 상처 치료 촉진용 조성물로 3개월간 처치한 경과를 치료전과 치료후로 나누어 보여주는 사진이다.
도 2는 인간 진피 섬유아세포에 본 발명의 일 실시예에 따른 상처 치료 촉진용 조성물에 포함된 베타글루칸을 농도별로 처리하여 세포생존율을 측정한 그래프이다.
도 3은 인간 진피 섬유아세포에 본 발명의 일 실시예에 따른 상처 치료 촉진용 조성물에 포함된 베타글루칸을 농도별로 처리하여 콜라겐 유전자 발현량을 측정한 그래프이다.
도 4는 A431세포에 실시예 1 및 비교예 1을 농도별로 처리하여 세포증식 효과를 평가하여 나타낸 그래프이다.
도 5는 A431세포에 실시예 1 및 비교예 1을 농도별로 처리하여 타입 I 콜라겐의 합성정도를 측정하여 나타낸 그래프이다.
FIG. 1 is a photograph showing the progress of treatment for 3 months with a composition for promoting wound healing according to an embodiment of the present invention in a lower ulcer (gangrenous scarlet fever) before treatment and after treatment.
FIG. 2 is a graph showing the cell survival rate of human dermal fibroblast treated with beta-glucan contained in a composition for accelerating wound healing according to an embodiment of the present invention.
FIG. 3 is a graph showing the amount of collagen gene expression measured by treating beta-glucan contained in the composition for promoting wound healing according to an embodiment of the present invention with human dermal fibroblasts at different concentrations.
4 is a graph showing the cell proliferation effect of A431 cells treated with the concentration of Example 1 and Comparative Example 1 by concentration.
FIG. 5 is a graph showing the degree of synthesis of type I collagen by treating A431 cells by concentration in Example 1 and Comparative Example 1; FIG.

본 발명에 있어 첨부된 도면은 종래 기술과의 차별성 및 명료성, 그리고 기술 파악의 편의를 위해 과장된 표현으로 도시되어 있을 수 있다. 또한, 후술되는 용어들은 본 발명에서의 기능을 고려하여 정의된 용어로써, 사용자, 운용자의 의도 또는 관례에 따라 달라질 수 있으므로, 이러한 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 기술적 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 한편, 실시예는 본 발명의 청구범위에 제시된 구성요소의 예시적 사항에 불과하고, 본 발명의 권리범위를 한정하는 것이 아니며, 권리범위는 본 발명의 명세서 전반에 걸친 기술적 사상을 토대로 해석되어야 한다.The accompanying drawings in the present invention may be exaggerated for clarity, clarity, and descriptive convenience. In addition, since the following terms are defined in consideration of the functions of the present invention, they may vary depending on the intention or custom of the user or the operator, and therefore the definition of these terms should be based on the technical contents throughout this specification will be. On the contrary, the embodiments are merely illustrative of the constituent elements set forth in the claims of the present invention and do not limit the scope of the present invention, and the scope of the rights should be interpreted on the basis of technical ideas throughout the specification of the present invention .

본 발명은 침향 추출물, 베타글루칸(β-Glucan) 및 EGF 단백질을 유효성분으로 포함하는 상처 치료 촉진용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 피부의 진피층을 투과하여 피부의 재생을 유도하는 상처 치료 촉진용 조성물을 제공한다.The present invention relates to a composition for accelerating wound healing comprising an aerial extract, beta-glucan and EGF protein as an active ingredient, and more particularly to a composition for promoting wound healing which permeates the dermal layer of skin and induces regeneration of the skin Lt; / RTI >

여기서, 상기 베타글루칸은 포도당(glucose) 단량체가 글리코시드 결합(Glycosidic bond)으로 연결된 중합체의 형태를 갖는다. 베타글루칸은 자연의 식물로부터 유도할 수 있다. 예컨대, 베타글루칸은 버섯류, 호모의 세포벽, 곡류 등으로부터 추출하여 유도될 수 있다. 다만, 본 발명의 상처 치료 촉진용 조성물을 제조하기 위하여 사용될 수 있는 베타글루칸은 자연의 식물뿐만 아니라 화학적 합성 및 중합에 의하여도 유도될 수 있다. 바람직한 실시예로서, 다른 버섯류에 비하여 베타글루칸 함량이 높고 균사체 배양기간이 비교적 짧은 잎새버섯(Grifola frondosa) 균사체 배양액으로부터 베타글루칸을 추출하여 사용할 수 있다.Here, the beta-glucan has a form of a polymer in which a glucose monomer is linked by a glycosidic bond. Beta Glucan can be derived from natural plants. For example, beta-glucan can be derived from mushrooms, homo cell walls, cereals, and the like. However, the beta-glucan which can be used for preparing the composition for promoting wound healing of the present invention can be induced not only by natural plants but also by chemical synthesis and polymerization. As a preferred embodiment, beta-glucan can be extracted from a culture medium of Grifola frondosa mycelium having a relatively high content of beta-glucan and a relatively short period of mycelial cultivation, compared to other mushrooms.

베타글루칸의 생체에 대한 면역 증가 효과는 이미 보고된 바 있다(FEMS immunology and medical microbiology, 13 (1): 51~57; Vetvicka, V et al,(1996)). 일본에서는 베타글루칸이 항암용 의약품 또는 기능성 식품으로 판매되고 있으며, 미국 FDA는 베타글루칸의 안전기준을 확립하여 면역력 증가 효과 및 그 안정성을 인증하였다. 또한 베타글루칸은 피부 미용 관련 업계에서 점탄성, 보습 특성, 생체적합성, 콜라겐 합성 촉진 효과, 피부재생 및 보호 효과를 높이기 위하여 화장품 원료로 사용된다(Journal of Cosmetic Science, 27(5): 292). The effect of beta-glucan on the immune system has already been reported (FEMS immunology and medical microbiology, 13 (1): 51-57; Vetvicka, V et al, (1996)). In Japan, beta-glucan has been marketed as an anticancer drug or functional food, and the US FDA has established safety standards for beta-glucan to certify its immunity-increasing effect and its stability. Betaglucan is also used as a raw material for cosmetics in the skin care industry to enhance viscoelasticity, moisturizing properties, biocompatibility, promoting collagen synthesis, skin regeneration and protection (Journal of Cosmetic Science, 27 (5): 292).

베타글루칸은 포도당 단량체들이 연결되는 위치에 따라, 베타-(1,3)-글루칸, 베타-(1,4)-글루칸, 베타-(1,6)-글루칸으로 분류된다. 본 발명에 사용될 수 있는 베타글루칸은 베타-(1,3)-글루칸, 베타-(1,4)-글루칸, 베타-(1,6)-글루칸 또는 이들의 적어도 2 이상의 혼합을 포함하고, 각각이 측쇄를 갖는 베타-(1,3)-글루칸, 베타-(1,4)-글루칸, 베타-(1,6)-글루칸도 포함한다. 특히, 상기 베타글루칸 중 베타-(1,3)에 측쇄를 갖는 베타-(1,6)-글루칸을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 베타글루칸은 분자량이 30,000 ~ 300,000 Da인 베타글루칸을 분획하여 제조하는 것이 점도, 팽윤성, 주사기 압출성 향상에 바람직하다.Betaglucan is classified as beta - (1,3) - glucan, beta - (1,4) - glucan and beta - (1,6) - glucan depending on the position where glucose monomers are connected. Beta-glucans that can be used in the present invention include beta-1,3-glucans, beta- (1,4) -glucan, beta- (1,6) -glucan or a mixture of at least two of these, (1,3) -glucan, beta - (1,4) - glucan and beta - (1,6) - glucan having this side chain. Particularly, it is preferable to use beta - (1,6) - glucan having a side chain in the beta - (1,3) of the beta - glucans. The beta-glucan is preferably prepared by fractionating beta-glucan having a molecular weight of 30,000 to 300,000 Da to improve viscosity, swelling property, and extrudability of a syringe.

상기 베타글루칸의 분자량이 30,000 Da 미만일 경우, 저분자량의 베타글루칸을 회수함에 있어 경제적인 비용이 늘어나며, 상기 베타글루칸의 분자량이 300,000 Da 초과할 경우, 피부 진피층으로 투과하기 어려울 수 있다.If the molecular weight of the beta-glucan is less than 30,000 Da, the economic cost of recovering the low-molecular-weight beta-glucan is increased. If the molecular weight of the beta-glucan exceeds 300,000 Da, it may be difficult to permeate into the skin dermis.

또한, 상기 상처 치료 촉진용 조성물에 베타글루칸을 포함함으로써, 상기 조성물이 피부의 표피에만 전달되는 것이 아니라 피부의 진피층까지 전달되고 피부 내 진피 회복을 유도하여 피부 재생 효과를 나타낼 수 있다. 이로써, 상기 상처 치료 촉진용 조성물은 피부 재생을 촉진하여 상처 치유 및 개선 효과를 나타낼 수 있다.In addition, by containing beta-glucan in the composition for promoting wound healing, the composition can be delivered not only to the epidermis of the skin but also to the dermal layer of the skin, thereby inducing dermal restoration in the skin and exhibiting skin regeneration effect. Thus, the composition for promoting wound healing can promote skin regeneration and exhibit wound healing and improvement effects.

상기 베타글루칸은 전체 조성물에 대해 0.001 ~ 9중량%로 포함할 수 있으며, 상기 베타글루칸이 전체 조성물에 대해 0.1 중량% 미만으로 포함할 경우, 베타글루칸에 의한 피부의 진피층까지 전달하는 피부 침투 효과가 나타내기 어렵고, 상기 베타글루칸이 전체 조성물에 대해 0.5 중량% 초과로 포함할 경우, 피부 자극을 일으킬 수 있어 상처 치료 또는 개선에 대한 효과가 떨어질 수 있다. 바람직한 예로는 상기 베타글루칸이 전체 조성물에 대해 0.005 ~ 5 중량% 이며, 더 바람직한 예로는 0.01 ~ 2 중량% 이나, 이에 제한되지 않는다.The beta-glucan may be contained in an amount of 0.001 to 9% by weight based on the total composition. When the beta-glucan is contained in an amount of less than 0.1% by weight based on the total composition, the skin penetration effect of beta-glucan to the dermal layer of the skin And when the amount of the beta-glucan is more than 0.5% by weight based on the total composition, skin irritation may be caused, and the effect on wound healing or improvement may be deteriorated. As a preferable example, the amount of the beta-glucan is 0.005-5 wt%, more preferably 0.01-2 wt%, but not limited thereto.

한편, 침향은 오랫동안 약재나 향료로 사용되어 왔으며, 한방에서는 진정, 건위, 통기, 소화불량, 식욕부진, 구토, 기관지천식, 조루, 정력부족 등에 사용되어 왔다(본초강목). 침향은 인도, 베트남, 라오스, 중국 등 동남아시아 지역에 분포하는 팥꽃나무과(Thymelaeaceae) 아킬라리아속(Aquilaria)의 나무에 상처가 나거나 세균, 곰팡이가 침입하였을 때 방어 작용으로 나무 줄기나 뿌리의 내부에 수지가 침착되어 생긴다. 침향의 약리활성으로는 중추신경계에 대한 억제작용(Okugawa H. et.al. 1993)과 사하작용(Kakino M. et.al. 2010)이 보고되어 있으며, 이밖에 항균효과(Dash M. et.al. 2008), 항암효과(Gunasekera S.P. et.al. 1981), 항염증효과(Zhou MH et.al. 2008), 항알레르기 효과(Kim YC et.al. 1997)가 보고되어 있다.On the other hand, the acne has been used for a long time as a medicinal material or a spice, and it has been used for calming, dryness, aeration, indigestion, anorexia, vomiting, bronchial asthma, premature ejaculation, Dehydration is a defense function in case of injury, bacterium or fungus penetration into tree of Aquilaria of Thymelaeaceae distributed in Southeast Asia such as India, Vietnam, Laos and China, Is deposited. The inhibitory effects on the central nervous system (Okugawa H. et al. 1993) and the subcutaneous effects (Kakino M. et. Al. 2010) have been reported as the pharmacological activities of the immune system. 2008), anti-cancer effect (Gunasekera SP et al. 1981), anti-inflammatory effect (Zhou MH et al. 2008) and antiallergic effect (Kim YC et al.

본 발명의 상처 치료 촉진용 조성물에 침향 추출물을 포함함으로써, 외부로부터 이염 또는 2차 균에 의한 염증 유발을 억제할 수 있으며, 천연물인 침향 추출물을 포함하여 가격이 저렴하면서 안정적으로 상처 치료를 촉진시킬 수 있다.The composition for promoting wound healing according to the present invention can inhibit inflammation caused by external influx or secondary bacteria by including an extract from the outside, .

또한 상기 침향 추출물이 전체 조성물에 대해 0.0001 ~ 20 중량%로 포함할 수 있으며, 상기 침향 추출물이 전체 조성물에 대해 0.0001 중량% 미만으로 포함할 경우, 침향 추출물에 의한 상처 치료 또는 개선 효과가 나타내기 어렵고, 상기 침향 추출물이 전체 조성물에 대해 20 중량% 초과로 포함할 경우, 침향 추출물 내 포함된 유효성분 외의 물질에 의하여 상처 치료 또는 개선에 대한 효과가 떨어질 수 있다. 바람직한 예로는 상기 침향 추출물이 전체 조성물에 대해 0.0001 ~ 10 중량% 이며, 더 바람직한 예로는 0.0001 ~ 5.0 중량% 이나, 이에 제한되지 않는다.In addition, the above-mentioned intrusion extract may be contained in an amount of 0.0001 to 20% by weight with respect to the total composition, and when the above-mentioned intrusion extract is contained in an amount of less than 0.0001% by weight based on the total composition, If the above-mentioned intrusion extract contains more than 20% by weight based on the total composition, the effect on wound healing or improvement may be deteriorated by a substance other than the active ingredient contained in the aerated extract. A preferred example thereof is 0.0001 to 10% by weight, more preferably 0.0001 to 5.0% by weight, based on the whole composition of the above-mentioned ingress extract.

한편, EGF 단백질은 앞서 상술한 바와 같이, 여러 연구를 통해서 피부, 각막, 점막 등의 상처 치유를 촉진한다는 보고가 있다. 다만, 피부의 진피층까지 투과하지 못하여 상처 치유 또는 개선 효과가 미비하고, EGF 단백질 함유량을 높여 상처 치료 효과를 증대시킬 수 있으나 이는 경제적 비용이 매우 높아지는 문제점을 갖는다. 이에 따라 본 발명은 EGF 단백질을 전체 조성물에 대해 0.0001 ~ 0.001 중량%로 포함하고 있어 매우 미량으로 함유함으로써 가격이 저렴하고, 피부 진피층까지 전달되어 상처 치료 또는 개선에 탁월한 상처 치료 촉진용 조성물을 제공할 수 있다.On the other hand, it has been reported that EGF protein promotes wound healing of skin, cornea, mucous membrane and the like through various studies as described above. However, since it does not penetrate to the dermal layer of the skin, the wound healing or improving effect is insufficient, and the EGF protein content is increased to enhance the wound healing effect. However, this has a problem that the economic cost is very high. Accordingly, the present invention provides a composition for accelerating wound healing, which comprises EGF protein in an amount of 0.0001 to 0.001% by weight based on the total composition, .

여기서, 상기 EGF 단백질이 전체 조성물에 대해 0.0001 중량% 미만으로 함유할 경우 EGF 단백질에 의해 나타내는 상처 치유 효과가 발현될 수 없고, 상기 EGF 단백질이 전체 조성물에 대해 0.001 중량% 초과할 경우, 전체 조성물을 제조함에 있어 경제적 비용이 늘어날 수 있는 단점이 있다. 바람직한 예로는 상기 EGF 단백질이 전체 조성물에 대해 0.0001 ~ 0.008 중량% 이며, 더 바람직한 예로는 0.0001 ~ 0.0005 중량% 이나, 이에 제한되지 않는다.Here, when the EGF protein is contained in an amount less than 0.0001% by weight based on the total composition, a wound healing effect exhibited by the EGF protein can not be expressed. When the EGF protein is more than 0.001% by weight based on the total composition, There is a drawback that the manufacturing cost can be increased. As a preferred example, the EGF protein is 0.0001 to 0.008% by weight, more preferably 0.0001 to 0.0005% by weight, based on the total composition.

본 발명에서 제공하는 상처 치료 촉진용 조성물은 상기와 같은 성분들을 모두 특정한 함량으로 포함함으로써, 피부 재생을 유도하여 상처 치료 또는 개선을 촉진하는 동시에 부작용 없이 안전하게 상처 치료 효과를 확보할 수 있다.The composition for accelerating wound healing provided by the present invention contains all of the above-mentioned ingredients in a specific amount, thereby inducing skin regeneration, promoting wound healing or improvement, and securing wound healing effect safely without side effects.

본 발명의 상처 치료 또는 개선을 제공하는 상처 치료 촉진용 조성물을 피부 외용제로 하는 경우, 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 로션, 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제의 제형으로 제조할 수 있다.In the case of using a composition for promoting wound healing that provides wound healing or improvement of the present invention as an external preparation for skin, there is no particular limitation on the formulation thereof. For example, a formulation for lotion, ointment, gel, cream, patch or spray Can be manufactured.

본 발명의 상기 상처 치료 촉진용 조성물은 화장품으로 사용되거나 피부 및 조직 충진제, 창상피복제 또는 약물 전달체로 사용될 수 있다. The composition for accelerating wound healing of the present invention may be used as a cosmetic product or as a skin and tissue filler, a wound epithelium or a drug delivery device.

본 발명의 상처 치료 촉진용 조성물을 단독 또는 중복 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 약학 또는 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 피부 상처 치료 촉진 효과가 우수한 조성물은 통상적인 사용 방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.The composition for accelerating wound healing of the present invention may be used alone or in combination, or may be used in combination with another pharmaceutical or cosmetic composition other than the present invention. In addition, the composition having excellent skin wrinkle treatment promoting effect according to the present invention can be used according to the usual use method, and the use frequency can be changed according to the skin condition of the user.

이하, 본 발명의 바람직한 실시 형태들을 설명한다. 그러나, 본 발명의 실시형태는 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 이하 설명하는 실시 형태로 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명의 실시형태는 당해 기술분야에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 더욱 완전하게 설명하기 위해서 제공되는 것이다.Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described. However, the embodiments of the present invention can be modified into various other forms, and the scope of the present invention is not limited to the embodiments described below. Further, the embodiments of the present invention are provided to more fully explain the present invention to those skilled in the art.

제조예Manufacturing example 1. 상처 치료 촉진용 조성물 1. Composition for accelerating wound healing

1) 베타-글루칸 제조1) Preparation of beta-glucan

β-(1,3),(1,6)-Glucan(잎새버섯 균사체 발효로 생산된 수용성 β-glucan)을 제조하여 본 실험의 재료로 사용하였다. 잎새버섯(Grifola frondosa) 균사체로부터 베타-1,6-분지-베타-1,3-글루칸을 제조하는 방법은 다음과 같다.β- (1,3), (1,6) -Glucan (water-soluble β-glucan produced by mycelial fermentation of leaf mushroom) was used as the material of this experiment. A method for preparing beta-1,6-branched-beta-1,3-glucan from mycelia of Grifola frondosa is as follows.

잎새버섯 균사체를 액체배지에 3%(v/v)되게 접종한다. 액체배지는 포도당 3%, 효모추출물 0.5%, 펩톤 0.1%, 이인산칼륨(K2HPO4) 0.05%, 일인산칼륨(KH2PO4) 0.05%, 황산마그네슘(MgSO4·7H2O) 0.01%를 함유하는 영양배지(pH 5.5로 조정)를 사용하며, 배양 온도 25, 회전수 200rpm, 통기량 1.0vvm의 조건으로 5일간 배양하였다. The mushroom mycelium is inoculated in liquid medium at 3% (v / v). Liquid medium is glucose 3%, yeast extract 0.5%, peptone 0.1%, a potassium phosphate (K2HPO4) 0.05%, one of potassium phosphate (KH2PO4) 0.05%, magnesium sulfate (MgSO 4 · 7H 2 O) nutrient containing 0.01% And cultured for 5 days using a medium (adjusted to pH 5.5) at a culture temperature of 25, a revolution of 200 rpm, and aeration amount of 1.0 vvm.

배양 종료 후 배양액에 규조토 3.0%와 활성탄 분말 1.0%를 첨가하고 교반하여 색소 및 단백질 성분 등의 불필요 성분을 흡착시켜 여과장치로 여과하여 베타-1,6-분지-베타-1,3-글루칸 용액을 얻었다. 상기 베타-1,6-분지-베타-1,3-글루칸 용액을 0.22㎛ 필터를 사용하여 재여과시킨 후 에틸알코올을 첨가하여 베타-1,6-분지-베타-1,3-글루칸을 침전시켜 회수하였다. 회수된 베타-1,6-분지-베타-1,3-글루칸은 60℃ 온도로 열풍건조하여 알코올성분을 휘발시킨 후 동결건조하였다. 건조된 베타-1,6-분지-베타-1,3-글루칸은 분쇄기로 분쇄하여 분말 시료를 제조하였다.After the completion of the culture, 3.0% of diatomaceous earth and 1.0% of activated carbon powder were added to the culture solution and the mixture was stirred to adsorb unnecessary components such as coloring matters and protein components, followed by filtration with a filter device to obtain a solution of beta-1,6-branched-beta-1,3- ≪ / RTI > The beta-1,6-branched-beta-1,3-glucan solution was re-filtered using a 0.22 mu m filter and then ethyl alcohol was added to precipitate beta-1,6-branched- beta-1,3- Respectively. The recovered beta-1,6-branched-beta-1,3-glucan was dried by hot air at 60 DEG C to volatilize the alcohol component and then lyophilized. The dried beta-1,6-branched-beta-1,3-glucan was pulverized with a pulverizer to prepare a powder sample.

2) 침향 추출물 제조2) Manufacture of the extract

베트남에서 수입한 침향(Aquilaria crassna)을 분쇄한 후 침향가루 20g에 정제수 30L를 넣고 121℃ 1.2기압에서 30분간 고온고압추출을 하였다. 그 다음 0.22㎛ 필터로 여과하여 불용성 물질을 제거하고 감압농축한 후 동결건조하여 분말 시료를 제조하였다.After crushing Aquilaria crassna imported from Vietnam, 30L of purified water was added to 20g of the aged powder, and the high temperature and high pressure was extracted at 121 캜 and 1.2 atm for 30 minutes. Then, the mixture was filtered with a 0.22 mu m filter to remove insoluble matter, concentrated under reduced pressure and lyophilized to prepare a powder sample.

3) 상처 치료 촉진용 조성물3) Composition for accelerating wound healing

하기 표 1와 같이, EGF 단백질, 베타글루칸 및 침향 추출물을 배합하고, 나머지는 정제수로 혼합하여 상처 치료 촉진용 조성물인 실시예 1을 제조 하였다. 또한, 비교예 1은 EGF 단백질만 포함한 조성물로 준비하였다.As shown in Table 1, Example 1, which is a composition for accelerating wound healing, was prepared by mixing EGF protein, beta-glucan, and ethanol extract and mixing the rest with purified water. In addition, Comparative Example 1 was prepared with a composition containing only EGF protein.

성분ingredient 실시예Example 1 One
(총 100ml)(Total 100ml)
비교예Comparative Example 1 One
(총 100ml)(Total 100ml)
베타-1,6-분지-베타-1,3-글루칸Beta-1,6-branched-beta-1,3-glucan 0.5g0.5 g -- 침향추출물Europium extract 0.0005g0.0005 g -- EGFEGF 0.0001g0.0001 g 0.0001g0.0001 g 정제수Purified water up to 100mlup to 100ml up to 100mlup to 100ml

여기서, EGF 단백질은 상용으로 시판되는 제품(케어젠, 한국)을 사용하였으며, 베타글루칸은 앞서 서술한 바와 같이 잎새버섯 균사체로부터 추출하였으며 침향 추출물 역시 앞서 서술한 바와 같이 제조된 것을 사용하였다.Here, the commercially available product (Caregen, Korea) was used as the EGF protein. Betaglucan was extracted from the mycelia of leaf mushroom as described above, and the edible extract was prepared as described above.

제 11st 실험예Experimental Example 하지궤양Ulcer ulcer 상처 치료 효과 확인 Check wound treatment effect

하지궤양(괴저성 농피증)을 가진 환자는 상기 제조예 1에 따라 제조된 상처 치료 촉진용 조성물인 실시예 1을 3개월 동안 1일 1회 3ml씩 환부에 도포하였다. 이후, 하지궤양이 호전된 것을 확인하기 위해, 치료전과 후의 사진을 촬영하여 도 1에 나타냈다.Patients with lower limb ulceration (gangrenous gonadosomiasis) were coated with 3 ml of the wound healing composition, Example 1, prepared according to Preparation Example 1, once every day for 3 months. Then, in order to confirm that the lower limb ulcer improved, photographs before and after the treatment were taken and shown in Fig.

상기 도 1에 나타낸 바와 같이, 하지궤양을 가진 환자는 상기 상처 치료 촉진용 조성물에 의해 상처가 80% 이상 아물어 하지궤양이 많이 호전됨을 확인하였다.As shown in Fig. 1, the wound-healing composition of the present invention showed that the wounds healed 80% or more and the ulcers were much improved.

제 2Second 실험예Experimental Example : 베타글루칸 농도에 따른 인간 진피 섬유아세포의 생존율 확인 : Determination of survival rate of human dermal fibroblasts by beta-glucan concentration

베타글루칸 농도에 따른 인간 진피 섬유아세포(normal human dermal fibroblasts, nHDFs; Lonza, Basel, Switzerland)의 성장을 확인하기 위해, 인간 진피 섬유아세포를 Fibroblast basal medium(cc-381, Lonza, Walkersvile, MD, USA)에 FGMTM-2 singleQuotsTM(hGFG, insulin, FBS and gentamicin/amphotericin-B; cc-4126, Walkersvile, MD, USA)을 함유한 배지를 사용하여 5% CO2 세포배양기 내에서 37℃의 온도 조건하에 배양하였다.Human dermal fibroblasts were suspended in Fibroblast basal medium (cc-381, Lonza, Walkersvile, MD, USA) to confirm the growth of human dermal fibroblasts (nHDFs; Lonza, Basel, Switzerland) ) In a 5% CO 2 cell incubator using a medium containing FGM TM -2 singleQuots (hGFG, insulin, FBS and gentamicin / amphotericin-B; cc-4126, Walkersvile, MD, USA) Lt; / RTI >

96웰 접시에 각 웰당 3 x 103 수의 인간 진피 섬유아세포를 분주하고 24시간 배양후에 베타글루칸을 각각 농도별로 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 3 x 10 3 human dermal fibroblasts were dispensed into each well of a 96-well plate and cultured for 24 hours. Then, beta-glucan was treated for each concentration and cultured for 24 hours.

이후 WST-assay solution을 배지양의 10%씩 처리하여 추가적으로 30분~1시간 37℃에서 반응시킨 뒤, Microplate reader system(SpectraMax® i3x Multi-Mode Detection Platform, Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다. Reference 흡광도는 650nm에서 측정하여 결과값을 보정하였다. 결과값은 세 번의 독립적 실험으로부터 평균값±표준편차로 나타냈다. 이때, P<0.05는 Student's t-test를 통해 검증하였으며, 결과값의 유의성을 나타냈으며, 이의 결과는 도 2에 나타냈다. After incubation for 30 minutes to 1 hour at 37 ° C, the microplate reader system (SpectraMax® i3x Multi-Mode Detection Platform, Molecular Devices, Sunnyvale, Calif., USA) Absorbance at 450 nm. The reference absorbance was measured at 650 nm and the result was corrected. The results were expressed as means ± standard deviation from three independent experiments. At this time, P <0.05 was verified by Student's t-test, and the results were significant, and the results are shown in FIG.

상기 인간 진피 섬유아세포의 생존율 실험의 대조군은 비히클(vehicle)인 디메틸설폭시드(DMSO)가 포함된 배지에서 배양하였다. The control group of the human dermal fibroblast survival rate experiment was cultured in a medium containing dimethyl sulfoxide (DMSO) as a vehicle.

상기 도 2에서 보는 바와 같이, 베타글루칸을 1 내지 5%로 처리된 인간 진피 섬유아세포에서 개체 증식이 활발하였고, 세포의 생존율이 거의 100%이었으나, 베타글루칸을 10%로 처리된 인간 진피 섬유아세포에서는 생존율이 낮아지는 것을 확인했다. 이에 따라 베타글루칸은 10% 이상으로 포함될 경우 인간 진피 섬유아세포의 생존을 저해할 수 있음을 확인했다.As shown in FIG. 2, in the human dermal fibroblast treated with 1 to 5% of beta-glucan, the proliferation of the human dermal fibroblast was active and the survival rate of the cells was almost 100%. However, The survival rate was lowered. Thus, it was confirmed that the presence of beta-glucan in an amount of 10% or more can inhibit the survival of human dermal fibroblasts.

제 3Third 실험예Experimental Example : 베타글루칸 농도별 콜라겐 유전자 발현량 평가 : Assessment of Collagen Gene Expression by Beta Glucan Concentration

베타글루칸의 인간 진피 섬유아세포(normal human dermal fibroblasts, nHDFs; Lonza, Basel, Switzerland)로부터 발현되는 콜라겐 유전자 발현량을 측정하기 위해, type 1 콜라겐의 대표적 구성 요소인 COL1A1 유전자의 발현수준을 Quantitative real-time PCR(qRT-PCR) 분석법을 통해 확인하여 도 3에 나타냈다.The level of expression of COL1A1 gene, a representative component of type 1 collagen, was measured by quantitative real-time PCR to determine the expression level of collagen gene expressed from beta-glucan human dermal fibroblasts (nHDFs; Lonza, Basel, Switzerland) time PCR (qRT-PCR) assay.

먼저, 인간 진피 섬유아세포를 Fibroblast basal medium(cc-381, Lonza, Walkersvile, MD, USA)에 FGMTM-2 singleQuotsTM(hGFG, insulin, FBS and gentamicin/amphotericin-B; cc-4126, Walkersvile, MD, USA)을 함유한 배지를 사용하여 5% CO2 세포배양기 내에서 37℃의 온도 조건하에 배양하였다.Human dermal fibroblasts were transfected into Fibroblast basal medium (cc-381, Lonza, Walkersvile, MD, USA) with FGM -2 singleQuots (hGFG, insulin, FBS and gentamicin / amphotericin-B; cc-4126, Walkersvile, MD , USA) in a 5% CO 2 cell incubator at 37 ° C.

6웰 접시에 각 웰당 1 x 105 수의 인간 진피 섬유아세포를 분주하고 24시간 배양후에 베타글루칸을 각각 농도별로 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포를 수확한 후, 1ml TRIzol reagent(Life Technologies)을 첨가하여 세포용해 및 Total mRNA 추출을 수행하였다. Total mRNA의 농도 및 순도(A260/A280 and A260/A320 ratio)는 MaestroNano® microvolume spectrophotometer(Maestrogen, Las Vegas, NV, USA)를 이용하여 검증하였으며, 2.0 이상의 순도가 높은 Total mRNA만을 선별하였다. Total mRNA는 M-MLV reverse transcriptase(Life Technologies)를 이용하여 cDNA로 치환하여 qRT-PCR에 사용하였다. qRT-PCR은 HOT FIREPOL Evagreen PCR Mix Plus(Solis BioDyne, Estonia)를 이용하여 수행하였으며, StepOnePlusTM Systems software(Applied Biosystems, USA)를 이용하여 해당 유전자의 발현을 분석하였다. 콜라겐 유전자 발현량 평가에 대한 대조군은 아무것도 처리하지 않은 배지를 이용하였다. 1 x 10 &lt; 5 &gt; human dermal fibroblasts were dispensed into each well of a 6-well dish and cultured for 24 hours, followed by beta-glucan treatment for each concentration. After harvesting the cultured cells, cell lysis and total mRNA extraction were performed by adding 1 ml TRIzol reagent (Life Technologies). Total mRNA concentration and purity (A260 / A280 and A260 / A320 ratio) were verified using a MaestroNano® microvolume spectrophotometer (Maestrogen, Las Vegas, NV, USA) and only total mRNA with a purity of 2.0 or higher was selected. Total mRNA was replaced with cDNA using M-MLV reverse transcriptase (Life Technologies) and used for qRT-PCR. qRT-PCR was performed using HOT FIREPOL Evagreen PCR Mix Plus (Solis BioDyne, Estonia) and expression of the gene was analyzed using StepOnePlus TM Systems software (Applied Biosystems, USA). As a control for evaluation of the amount of collagen gene expression, a medium in which nothing was treated was used.

PCR 반응 조건은 94℃에서 15분간 denaturation 시킨 후 denaturation(94℃, 30초), annealing(60℃, 30초), polymerization(72℃, 30초)과정을 40번의 cycle동안 진행하였다. 유전자 발현변화는 β-ACTIN 대조군 유전자 발현량과 비교하여 측정하였다. COL1A1의 CT값을 β-ACTIN의 CT값으로 정규화(normalization)하였으며, 2-CT법을 통해 COL1A1의 상대적인 발현 정도를 계산하였다. 결과값은 세 번의 독립적 실험으로부터 평균값±표준편차로 나타냈다. 이때, P<0.05는 Student's t-test를 통해 검증하였으며, 결과값의 유의성을 나타냈으며, 이의 결과는 도 3에 나타냈다. qRT-PCR 시험에 사용된 primer 서열정보는 하기 표 2와 같다.The PCR reaction conditions were denaturation at 94 ° C for 15 minutes, denaturation at 94 ° C for 30 seconds, annealing at 60 ° C for 30 seconds, and polymerization at 72 ° C for 30 seconds. Changes in gene expression were measured relative to the amount of β-ACTIN control gene expression. The C T value of the COL1A1 was normalized (normalization) to the C T values of the β-ACTIN, the relative expression of COL1A1 was calculated over the 2 -CT method. The results were expressed as means ± standard deviation from three independent experiments. At this time, P <0.05 was verified by Student's t-test, and the results were significant, and the results are shown in FIG. The primer sequence information used in the qRT-PCR test is shown in Table 2 below.

구분division Forward primersForward primers Reverse primersReverse primers COL1A1COL1A1 5'-AGGGCCAAGACGAAGACATC-3'5'-AGGGCCAAGACGAAGACATC-3 ' 5'- AGATCACGTCATCGCACAACA-3'5'-AGATCACGTCATCGCACAACA-3 ' β-ACTINβ-ACTIN 5'-GGATTCCTATGTGGGCGACGA-3'5'-GGATTCCTATGTGGGCGACGA-3 ' 5'-CGCTCGGTGAGGATCTTCATG-3'5'-CGCTCGGTGAGGATCTTCATG-3 '

상기 도 3에서 보는 바와 같이, 베타글루칸에 대하여 Type 1 콜라겐의 대표적 유전자인 COL1A1의 mRNA 발현량 변화를 측정한 결과로 농도의존적으로 COL1A1의 mRNA 발현량이 증가하였다. 특히, 베타글루칸을 5% 농도로 처리시 COL1A1의 mRNA 발현량이 대조군에 비해 70.62±16.57% 증가됨을 나타냈다. 이에 따라 본 발명에 의한 상처 치료 촉진용 조성물에 포함된 베타글루칸은 인간 진피 섬유아세포 내 콜라겐 유전자 발현을 증가시켜 콜라겐 생성을 촉진시킬 수 있음을 확인하였다.As shown in FIG. 3, the amount of COL1A1 mRNA expression was increased in a concentration-dependent manner as a result of measuring the amount of mRNA expression of COL1A1, a representative gene of Type 1 collagen against beta-glucan. In particular, treatment with beta-glucan at 5% concentration showed an increase in mRNA expression of COL1A1 by 70.62 ± 16.57% compared to the control group. Accordingly, it was confirmed that beta-glucan contained in the composition for promoting wound healing according to the present invention can promote collagen production by increasing collagen gene expression in human dermal fibroblasts.

제 4Fourth 실험예Experimental Example : 상처 치료 촉진용 조성물의 농도별  : By concentration of composition for promoting wound healing 세포증식에 대한 평가Assessment of cell proliferation

먼저, A431 cell을 10% fetal bovine serum (FBS, WelGENE Inc., 한국)과 100unit/ml의 penicillin/streptomycin (WelGENE Inc., 한국)이 첨가된 Dulbecco's modified Eagle's minimal medium (DMEM, WelGENE Inc., 한국)를 이용하여 5% CO2, 37℃에서 배양하였다.First, A431 cells were cultured in Dulbecco's modified Eagle's minimal medium supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS, WelGENE Inc., Korea) and 100 units / ml penicillin / streptomycin (WelGENE Inc., Korea) ) Were cultured at 37 ° C in 5% CO 2 .

A431 세포배양액을 1×103/250㎕씩 48well에 분주하여 CO2 incubator에 24시간 배양한 후 상기 실시예 1 및 비교예 1를 각각 0.1배와 0.3배의 비율로 희석하여 2.5㎕씩 처리하였으며, 이틀간격으로 3번, 총 6일간 처리하였다. 각 well에 1mg/ml 농도의 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, Duchefa, Netherlands) 시약을 250㎕씩 분주하고 37℃에서 3~4시간 반응시킨 후 상등액을 제거하고 생성된 formazan을 DMSO(Junsei, Japan) 250㎕에 녹여 그 중 100㎕를 96well plate에 옮겨 마이크로플레이트 리더(Molecular Devices, Toronto, Canada)로 570nm에서 흡광도를 측정하였다. The A431 cell culture 1 × 10 3 / and by 250㎕ dispensed into 48well then cultured for 24 hours in CO 2 incubator and diluted to the above Example 1 and Comparative Example 1 to 0.1 times and 0.3 times the percentage of each were treated in 2.5㎕ , Three times for two days, for a total of six days. 250 μl of MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide, Duchefa, Netherlands) was added to each well and incubated at 37 ° C for 3 to 4 hours The supernatant was removed and the generated formazan was dissolved in 250 μl of DMSO (Junsei, Japan). 100 μl of the solution was transferred to a 96-well plate and absorbance was measured at 570 nm using a microplate reader (Molecular Devices, Toronto, Canada).

상기 과정의 시험 결과를 하기 계산식으로부터 세포증식 효과를 구해 그 결과를 도 4에 나타냈다.The cell proliferation effect was determined from the following equation, and the results are shown in Fig.

[세포증식 효과 계산식][Cell proliferation effect calculation formula]

세포증식효과(%) = (시료 처리군 흡광도 - 시료 비처리군 흡광도)/대조군 흡광도 X 100Cell proliferation effect (%) = (sample treated group absorbance - sample treated group absorbance) / control absorbance X 100

상기 도 4에 나타낸 바와 같이, 실시예 1이 A431 세포의 증식을 촉진하는 결과를 보였으며, 낮은 농도에서도 세포증식 촉진효과가 우수하였다. 반면, 비교예 1은 농도가 증가할수록 세포증식 효과가 낮아지는 결과를 보여주었다. 이에 따라 베타-1,6-분지-베타-1,3-글루칸과 침향추출물이 들어있는 실시예 1이 세포 증식 효과가 우수함을 확인하였으며, 본 발명의 상처 치료 촉진용 조성물이 낮은 농도에서도 세포 증식 효과를 나타낼 뿐만 아니라 이보다 높은 농도에서도 세포독성이 없으며 세포 증식을 촉진하는 것을 확인하였다.As shown in FIG. 4, Example 1 promoted the proliferation of A431 cells, and the cell proliferation promoting effect was excellent even at low concentrations. On the other hand, in Comparative Example 1, as the concentration was increased, the cell proliferation effect was lowered. Thus, it was confirmed that the cell proliferation effect of Example 1 containing beta-1,6-branched-beta-1,3-glucan and the ethanol extract was excellent, and that the composition for promoting wound healing of the present invention exhibited cell proliferation Not only showed the effect but also cytotoxicity at higher concentrations and promoted cell proliferation.

제 5Fifth 실험예Experimental Example : 상처 치료 촉진용 조성물의 타입 I 콜라겐  : Type I collagen composition for promoting wound healing 합성에 대한 평가Evaluation of synthesis

상기 제 4 실험예의 세포증식 효과를 측정한 후, 남은 시료의 상등액을 이용하여 프로콜라겐 타입 I-펩타이드(PICP, Type-I C-peptide)양을 키트(Kit, Takara, Japan)를 이용하여 실시예 1 및 비교예 1의 콜라겐 합성 정도를 측정하였다.After measuring the cell proliferation effect of the fourth experimental example, the amount of procollagen type I-peptide (PICP, Type-I C-peptide) was measured using a kit (Kit, Takara, Japan) using the supernatant of the remaining sample The degree of collagen synthesis in Example 1 and Comparative Example 1 was measured.

먼저, 96well plate에 100㎕의 Antibody-POD confugate solution을 넣고 서로다른 각 웰에 실시예 1 및 비교예 1를 처리한 세포 상등액을 20㎕씩 넣어줬다. 이를 37에서 3시간 반응시킨 후에 1% Tween-20 (BioSesang, Korea)이 첨가된 PBS 300㎕로 4번 세척하였다. Substrate soluton (TMBZ) 100㎕를 넣고 실온에서 15분간 반응시킨 후 100㎕ stop solution을 넣어 반응을 정지 시키고, 마이크로플레이트 리더(Molecular Devices, Toronto, Canada)로 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 이의 결과를 도 5에 나타냈다.First, 100 占 퐇 of Antibody-POD confugate solution was added to a 96-well plate, and 20 占 퐇 of a cell supernatant prepared in Example 1 and Comparative Example 1 was added to each well. This was reacted for 3 hours at 37 ° C and then washed 4 times with 300 μl of PBS containing 1% Tween-20 (BioSesang, Korea). Substrate soluton (TMBZ) (100 μl) was added and reacted at room temperature for 15 minutes. Then, 100 μl stop solution was added to stop the reaction and absorbance was measured at 450 nm with a microplate reader (Molecular Devices, Toronto, Canada). The results are shown in Fig.

상기 도 5에서 확인할 수 있는 바와 같이, 타입 I 프로콜라겐의 양은 실시예 1에 의하여 증가하였다. 이에 따라, 본 발명의 상처 치료 촉진용 조성물은 베타글루칸, 침향추출물 및 EGF 단백질을 포함함으로써, 각질세포에서 타입 I 콜라겐과 같은 세포외기질 단백질의 발현을 촉진함으로써 효과적으로 피부 상처를 치유할 수 있음을 확인하였다.As can be seen from FIG. 5, the amount of type I procollagen was increased by Example 1. Accordingly, the composition for accelerating wound healing of the present invention contains betaglucan, an aqueous extract, and EGF protein, thereby promoting the expression of extracellular matrix proteins such as type I collagen in keratinocytes, thereby effectively healing skin wounds Respectively.

따라서, 본 발명에 의한 상처 치료 촉진용 조성물은, 특히, 손상된 피부, 피부궤양 또는 상처난 피부에 적용될 경우, 해당 피부의 콜라겐 합성 및 세포 재생을 유도하여 피부 상처 촉진에 효과적으로 활용될 수 있을 것이다.Accordingly, the composition for promoting wound healing according to the present invention can be effectively used for promoting skin wounds by inducing collagen synthesis and cell regeneration of the skin, particularly when applied to damaged skin, skin ulcer or scarred skin.

상술한 바와 같이, 본 발명은 도면에 도시된 실시예를 참고로 하여 설명되었으나 이는 예시적인 것에 불과하며, 당해 기술이 속하는 분야에서 통상의 지식을 기초로 다양한 변형 및 균등한 타 실시예가 가능하다는 점을 이해해야 한다. 따라서 본 발명의 진정한 기술적 보호범위는 이하 기술할 청구범위에 의하며, 상술한 발명의 구체적 내용을 토대로 정해져야 할 것이다.As described above, the present invention has been described with reference to the embodiments shown in the drawings. However, it should be understood that the present invention is by way of example only and that various modifications and equivalent embodiments are possible on the basis of common knowledge in the art . Therefore, the true technical protection scope of the present invention should be determined based on the detailed contents of the above-mentioned invention in accordance with the claims to be described below.

Claims (9)

침향 추출물, 베타글루칸(β-Glucan) 및 EGF 단백질을 유효성분으로 포함하고,
상기 베타글루칸이 전체 조성물에 대해 0.001 ~ 9 중량%로 포함하며,
상기 베타글루칸은 잎새버섯(Grifola frondosa) 균사체로부터 제조된 베타-1,6-분지-베타-1,3-글루칸인 상처 치료 촉진용 조성물.
(EGF) protein as an active ingredient,
Wherein said beta-glucan is contained in an amount of 0.001 to 9% by weight based on the total composition,
Wherein said beta-glucan is beta-1,6-branched-beta-1,3-glucan prepared from mycelia of Grifola frondosa.
삭제delete 삭제delete 제 1 항에 있어서,
상기 베타글루칸은 30,000 ~ 300,000 Da의 분자량을 갖는 것을 특징으로 하는 상처 치료 촉진용 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the beta-glucan has a molecular weight of 30,000 to 300,000 Da.
제 1 항에 있어서,
상기 침향 추출물이 전체 조성물에 대해 0.0001 ~ 20 중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는 상처 치료 촉진용 조성물.
The method according to claim 1,
The composition for accelerating wound healing according to any one of claims 1 to 3, wherein the water-soluble extract comprises 0.0001 to 20% by weight of the total composition.
제 1 항에 있어서,
상기 EGF 단백질이 전체 조성물에 대해 0.0001 ~ 0.001 중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는 상처 치료 촉진용 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the EGF protein is contained in an amount of 0.0001 to 0.001% by weight based on the total composition.
삭제delete 제 1 항에 있어서,
상기 조성물은 피부의 진피층까지 투과하여 피부 재생을 유도하는 것을 특징으로 하는 상처 치료 촉진용 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the composition penetrates to the dermal layer of the skin to induce skin regeneration.
제 1 항에 있어서,
상기 조성물은 화장품으로 사용되거나 피부 및 조직 충진제, 창상피복제 또는 약물 전달체로 사용되는 것을 특징으로 하는 상처 치료 촉진용 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the composition is used as a cosmetic product or as a skin and tissue filler, a wound epithelium replica or a drug delivery device.
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