KR101966315B1 - 감태 추출물과 괭생이모자반 추출물을 이용한 면역억제용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 콘카나발린A(concanavalin A) 또는 난백알부민(ovalbumin)에 의해 자극된 마우스 비장세포에 대해 세포독성을 보이지 않으면서 그 증식을 억제하고 또한 면역세포로부터 분비되어 과면역 반응 또는 이로 인한 염증 반응 등에 관여하는 IL-1β, INF-γ, TNF-α, IL-5, IL-6, IL-13 등의 사이토카인 생성을 억제하는 활성을 가진 감태 추출물과 괭생이모자반 추출물을 이용한 면역억제용 조성물을 개시한다.
Description
본 발명은 감태 추출물(Ecklonia cava)과 괭생이모자반(Sargassum horneri) 추출물을 이용한 면역억제용 조성물에 관한 것이다.
현대를 살고 있는 현대인들은 면역력에 있어서 많은 문제점들을 안고 살아가고 있다. 스트레스는 면역 체계를 교란시켜 암과 아토피성 피부염 같은 질환을 유발한다. 면역 불균형을 초래하는 요인에는 대표적으로 노화, 식품, 환경 오염, 스트레스 등이 있다. 뿐만 아니라, 면역계는 꽃가루 입자, 먼지, 동물 비듬, 게살 등의 무해한 침입자를 위험한 적으로 오판하여 알레르기 반응을 일으키기도 한다. 알레르기 반응의 증상(숨가쁜 현상, 재채기, 코감기, 콧물, 눈물) 등이 극도에 달하면 아나필락시스라는 과민 충격 상태를 야기할 수 있으며 심지어 죽음을 초래할 수도 있다(장태종, 정명동, 이동욱, 최병인. 면역 질환치료 개발 현황과 동향, 2013, 한국과학기술정보연구원).
면역조절제는 면역 반응의 중추적 역할을 담당하는 T 세포와 B 세포의 면역 기능에 관여하는 여러 인자들을 컨트롤하여 관련된 질병들을 치료하거나 예방하는 의약품을 뜻한다. 여기에는 면역기능을 항진시키는 백신류, 항원의 자극에 대해 숙주의 면역반응을 저하시키는 면역억제제 등이 모두 포함된다(면역조절제 개발 기술 동향, 2005, 한국보건산업진흥원).
면역억제제는 크게 신체 구성 성분이 항원으로 작용하여 만성 질환을 유발하는 자가면역질환 치료제, 선택적 면역억제를 위한 치료제, 장기이식 거부 반응 방지를 위한 치료제로 나뉨. 화학적 면역억제제로 대표적인 것은 사이클로포스파미드(Cyclophosphamide), 사이클로스포린 A(Cyclosporin A), 스테로이드 호르몬(Steroid hormone), 아자씨오프린(azathioprine) 등이 있으며, 생물학적 면역억제제로서는 항대사물질과 단일클론항체, 항림프구혈청 등이 있다(면역조절제 개발 기술 동향, 2005, 한국보건산업진흥원).
아토피피부염 치료 시에도 스테로이드제의 부작용이 우려되는 경우 국소 면역조절제(topical immunomodulator)가 사용되며, 스테로이드제에 비비해 심각한 부작용 없이 효과적으로 사용될 수 있다고 알려져있다(김규한. 아토피피부염에서 국소 면역조절제의 역할, 2011, 대한면역학회대한천식알레르기학회 춘계공동학술대회).
한편 Th2 세포는 IL-4, IL-5, IL-13과 같은 사이토카인을 특이적으로 발현하며, 이러한 Th2 세포의 작용은 호산구(eosinophil)의 증식시키며 비만세포(mast cell)과 호염구(basophil)로 하여금 세포내에 수용성 물질의 방출을 유도하며, B 세포의 종류변환(isotype switching)을 유도하여 IgE나 IgG1과 같은 항체의 생산을 촉진한다. 이러한 Th2 세포는 즉시형 과민 반응(immediate hypersensitivity reaction)에 중요한 기능을 담당하며, 따라서 체액성 면역(humoral immunity)과 이로 인한 항염증 반응(anti-inflammatory response)를 담당한다(임신혁 면역학적 항상성과 염증성 면역질환, 한국분자세포생물학회 뉴스지 2008.4.3;Gor DO et al., Nat Immunol. 2003 Jun;4(6):503-5.; Holdsworth SR et al., Kidney Int. 1999 Apr;55(4):1198-216).
Th1 세포는 TNF-α, IL-1β, IFN-γ와 같은 염증성 사이토카인 및 케모카인을 분비하여 대식세포(macrophage),호중구( neutrophil)과 같은 면역세포들을 유인하는 동시에 활성을 높여줌으로서 아토피와 같은 자가 면역 질환 병리기작을 더욱 진행시키게 된다(Nat Rev Immunol. 2007 Jan;7(1):52-63).
IFN-γ나 TNF-α와 같은 사이토카인의 증가가 수반되는 면역반응의 경우 Th1형 면역반응이라 하며, 그와 반대로 IL-4, IL-5와 같은 사이토카인의 발현 증가가 수반되는 면역반응의 경우 Th2형 면역반응이라 한다. 이렇게 정의되는 Th1형 면역반응과 Th2형 면역반응은 균형을 이루어 면역학적 항상성을 유지하게 된다(Gor DO et al., Nat Immunol. 2003 Jun;4(6):503-5).
감태는 갈조식물 다시마목 미역과의 해조류로 제주도 일대 및 일부 남해안에 분포하며 다년생 식물이다. 요오드, 철분, 칼륨 등의 미네랄, 식이섬유인 알긴산과 후코이단, 비타민 A 등이 함유되어있으며, 특히 폴리페놀(플로로탄닌 등)이 풍부해 불면증 개선 등의 효능을 보인다. 그 외에도 혈관 기능 개선, 장 운동 개선, 동맥경화 예방, 피부 개선, 변비 예방, 중금속 배출 등의 효능이 보고되어 있다.
괭생이모자반은 갈조식물 모자반목 모자반과의 여러해살이 해조류로 남해안과 일본에 분포한다. 후코이단과 알긴산을 비롯하여 미네랄과 폴리페놀비타민K 등 다양한 성분이 함유되어있다.
감태와 괭생이모자반에 함유된 후코이단은 최근 세계적으로 연구가 활발히 이루어져 미용이나 건강에 도움이 되는 여러 가지 약리효과와 생리기능이 있다는 것이 알려져있다.
본 발명은 감태와 괭생이모자반 추출물의 면역억제 활성을 개시한다.
본 발명의 목적은 감태 추출물과 괭생이모자반 추출물을 이용한 면역억제용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.
본 발명자들은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 감태 추출물과 괭생이모자반 추출물 그리고 이들이 혼합물이 콘카나발린A(concanavalin A)에 의해 자극된 마우스 비장세포에 대해 세포독성을 보이지 않으면서 그 증식을 억제하고 또한 면역세포로부터 분비되어 과면역 반응 또는 이로 인한 염증 반응 등에 관여하는 IL-1β, INF-γ, TNF-α, IL-5, IL-6, IL-13 등의 사이토카인 생성을 억제함을 확인하였으며, 나아가 난백알부민(ovalbumin)에 의해 자극된 마우스 비장세포에 대해서도 세포독성을 보이지 않으면서 그 증식을 억제함을 확인하였다. 여기서 콘카나발린 A는 T 세포를 활성화 시키는 인자로 알레르기성 천식, 알레르기성 비염, 아토피성 피부염, 자가면역성 간염(autoimmune hepatitis) 등 T 세포가 관여하는 다양한 과면역 질환 또는 비정상적 면역질환의 연구에 사용되어져 왔으며(JM Dwyer and C Johnson. Clin Exp Immunol. 1981 Nov; 46(2): 237249.; Clin Allergy. 1985 Jan;15(1):67-72.;Wang HX et al., World J Gastroenterol. 2012 Jan 14;18(2):119-25), 난백알부민도 면역세포의 활성화 인자로서 식품 알레르기 모델, 알레르기성 비염 동물 모델, 천식을 비롯한 호흡기 질환 모델, 아토피성 피부염 등 다양한 과면역 질환 또는 비정상적 면역질환 연구에 항원으로 사용되어졌다(Thom R et al., Cell Immunol. 2012 Nov;280(1):113-23; Zhou E et al., Food Funct. 2014 Sep;5(9):2106-12; Shershakova N et al., PLoS One. 2015 Aug 14;10(8):e0135070).
전술한 바를 고려할 때, 본 발명의 면역억제용 조성물은 감태 추출물, 괭생이모자반 추출물 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 면역억제용 조성물로 파악할 수 있다.
본 명세서에서, "감태 또는 괭생이모자반 추출물"은 추출 대상인 감태 또는 괭생이모자반 줄기, 잎, 뿌리, 전초 또는 이들의 혼합물 등을 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜(메탄올, 에탄올, 부탄올 등), 메틸렌클로라이드, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, N,N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 침출하여 얻어진 추출물, 이산화탄소, 펜탄 등 초임계 추출 용매를 사용하여 얻어진 추출물 또는 그 추출물을 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 추출 방법은 활성물질의 극성, 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출 등 임의의 방법을 적용할 수 있다. 분획된 추출물의 경우 추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합·정치시켜 얻은 분획물, 상기 조추출물을 실리카겔 등이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 소수성 용매, 친수성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다. 또한 상기 추출물의 의미에는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 등의 방식으로 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물이 포함된다. 바람직하게는 추출용매로서 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물, 더 바람직하게는 추출용매로서 물과 에탄올의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물을 의미한다.
또 본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.
또 본 명세서에서, "면역억제"란 과면역 반응 또는 비정상적 면역 반응으로 인한 면역질환의 개선(증상의 경감), 치료, 그러한 질환의 예방, 발병 억제 또는 지연을 포함하는 의미이다.
또 본 명세서에서, "면역질환"이란 이식편 숙주반응 질환, 자가면역질환(류마티스 관절염 등), 과증식성 피부질환(아토피성 피부염, 접촉성 피부염 등), 만성 폐색성 호흡기 질환(chronic obstructive pulmonary disease; COPD), 알레르기성 천식 천식, 기관지염(bronchitis), 알레르기성 비염, 자가면역성 간염(autoimmune hepatitis)을 포함하는 의미이나, 이에 한정되는 것은 아니다.
특히 상기 면역질환은 아래의 실시예 등에서 확인되는 바와 같이, 본 발명의 유효성분인 감태 추출물과 괭생이모자반 추출물의 혼합물 등이 마우스 비장세포에서 IL-1β, INF-γ, TNF-α, IL-5, IL-6, IL-13 등의 사이토카인 생성을 억제한다는 점에서 피부 과면역 질환(또는 아토피성 피부염)으로 이해되는 것이 바람직하다. 그것은, 식약처에서 발간한 생약·한약 제제의 효력시험 가이드라인(아토피피부염. 2010.6)이 난백알부민을 이용한 피부자극 모델 등을 아토피 피부염의 동물모델로 사용될 수 있음을 제안하고 있고 또한 아토피의 생물학적 특성 평가를 위하여 마우스의 비장을 적출하여 비장세포를 분리한 후 T 세포 활성화 인자인 콘카나발린과 함께 일정시간 배양한 후 세포에서 IFN-γ, IL-5, IL-13 등의 사이토카인 발현 변화에 대한 분석 평가를 제안하고 있다는 점 등에서 그러하다.
본 발명의 조성물은 그 유효성분을 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 치료를 의도하는 면역 억제 활성 등을 나타낼 수 있는 한 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 15 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 그 적용 대상인 포유동물 바람직하게는 사람에게 의료 전문가 등의 제언에 의한 투여 기간 동안 본 발명의 조성물이 투여될 때, 과면역 등에 의한 면역질환의 개선 효과 등 의도한 의료적·약리학적 효과를 나타낼 수 있는, 본 발명의 조성물에 포함되는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.
본 발명의 면역억제 조성물은 유효성분 이외에, 면역억제 효과의 상승·보강 등을 위하여 또는 항염증 활성, 피부 보호 활성(자외선에 의한 피부 손상 억제, 피부 보습 등) 등 유사활성의 부가를 통한 복용이나 섭취의 편리성을 증진시키기 위하여, 당업계에서 이미 안전성이 검증되고 해당 활성을 갖는 것으로 공지된 임의의 화합물이나 천연 추출물을 추가로 포함할 수 있다.
이러한 화합물 또는 추출물에는 각국 약전(한국에서는 "대한민국약전"), 각국 건강기능식품공전(한국에서는 식약처 고시인 "건강기능식품 기준 및 규격"임) 등의 공정서에 실려 있는 화합물 또는 추출물, 의약품의 제조·판매를 규율하는 각국의 법률(한국에서는 "약사법"임)에 따라 품목 허가를 받은 화합물 또는 추출물, 건강기능식품의 제조·판매를 규율하는 각국 법률(한국에서는 「건강기능식품에관한법률」임)에 따라 기능성이 인정된 화합물 또는 추출물이 포함된다. 예컨대 한국 「건강기능식품에관한법률」에 따라 '과민 면역반응 완화'로 개별적으로 기능성을 인정받은 Enterococcus faecalis 가열 처리 건조 분말, 구아바 잎 추출물 등의 복합물, 다래 추출물, 소엽 추출물, 피카오프레토 분말 등의 복합물, PLAG(1-palmitoyl-2-linoleoyl-3-acetyl-rac-glycerol) 등과, '과민피부상태 개선'으로 개별적으로 기능성을 인정받은 L. sakei Probio 65, 감마리놀렌산 함유 유지, 과채 유래 유산균인 L.plantarum CJLP133, 프로바이오틱스 ATP 등이 이러한 화합물 또는 추출물에 해당할 것이다.
이러한 화합물 또는 천연 추출물은 본 발명의 면억억제용 조성물에 그 유효성분과 함께 하나 이상 포함될 수 있다.
본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 식품 조성물로서 파악할 수 있다. 본 발명의 조성물이 식품 조성물로 파악될 경우 그 용도는 피부 과민 반응 억제 또는 과민 반응 억제로 이해될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 어떠한 형태로도 제조될 수 있으며, 예컨대 차, 쥬스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구르트 등의 가공 유류, 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 정제, 캡슐, 환, 과립, 액상, 분말, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리, 바 등의 건강기능식품 제제류 등으로 제조될 수 있다.
또 본 발명의 식품 조성물은 법률상·기능상의 구분에 있어서 제조·유통 시점의 시행 법규에 부합하는 한 임의의 제품 구분을 띨 수 있다. 예컨대 한국 「건강기능식품에관한법률」에 따른 건강기능식품이거나, 한국 「식품위생법」의 식품공전(식약처 고시 「식품의 기준 및 규격」)상 각 식품유형에 따른 과자류, 두류, 다류, 음료류, 특수용도식품 등일 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 식품첨가물이 포함될 수 있다. 식품첨가물은 일반적으로 식품을 제조, 가공 또는 보존함에 있어 식품에 첨가되어 혼합되거나 침윤되는 물질로서 이해될 수 있는데, 식품과 함께 매일 그리고 장기간 섭취되므로 그 안전성이 보장되어야 한다. 식품의 제조·유통을 규율하는 각국 법률(한국에서는 「식품위생법」임)에 따른 식품첨가물공전에는 안전성이 보장된 식품첨가물이 성분 면에서 또는 기능 면에서 한정적으로 규정되어 있다. 한국 식품첨가물공전(식약처 고시 「식품첨가물 기준 및 규격」)에서는 식품첨가물이 성분 면에서 화학적 합성품, 천연 첨가물 및 혼합 제제류로 구분되어 규정되어 있는데, 이러한 식품첨가물은 기능 면에 있어서는 감미제, 풍미제, 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등으로 구분된다.
감미제는 식품에 적당한 단맛을 부여하기 위하여 사용되는 것으로, 천연의 것이거나 합성된 것 모두 본 발명의 조성물에 사용할 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.
풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.
보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등이 사용될 수 있고, 또 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있으며, 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등이 사용될 수 있다. 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.
점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 전술한 바의 식품첨가물 이외에, 기능성과 영양성을 보충, 보강할 목적으로 당업계에 공지되고 식품첨가물로서 안정성이 보장된 생리활성 물질이나 미네랄류를 포함할 수 있다.
그러한 생리활성 물질로서는 녹차 등에 포함된 카테킨류, 비타민 B1, 비타민 C, 비타민 E, 비타민 B12 등의 비타민류, 토코페롤, 디벤조일티아민 등을 들 수 있으며, 미네랄류로서는 구연산 칼슘 등의 칼슘 제제, 스테아린산마그네슘 등의 마그네슘 제제, 구연산철 등의 철 제제, 염화 크롬, 요오드칼륨, 셀레늄, 게르마늄, 바나듐, 아연 등을 들 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 전술한 바의 식품첨가물이 제품 유형에 따라 그 첨가 목적을 달성할 수 있는 적량으로 포함될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에 포함될 수 있는 기타의 식품첨가물과 관련하여서는 각국 식품공전이나 식품첨가물 공전을 참조할 수 있다.
본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서는 약제학적 조성물로 파악될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 당업계에 공지된 통상의 방법으로 투여 경로에 따라 경구용 제형 또는 비경구용 제형으로 제조될 수 있다. 여기서 투여 경로는 국소 경로, 경구 경로, 정맥 내 경로, 근육 내 경로, 및 점막 조직을 통한 직접 흡수를 포함하는 임의의 적절한 경로일 수 있으며, 두 가지 이상의 경로를 조합하여 사용할 수도 있다. 두 가지 이상 경로의 조합의 예는 투여 경로에 따른 두 가지 이상의 제형의 약물이 조합된 경우로서 예컨대 1차로 어느 한 약물은 정맥 내 경로로 투여하고 2차로 다른 약물은 국소 경로로 투여하는 경우이다.
약학적으로 허용되는 담체는 투여 경로나 제형에 따라 당업계에 주지되어 있으며, 구체적으로는 "대한민국약전"을 포함한 각국의 약전을 참조할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물이 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 제형으로 제조될 수 있다. 이때 적합한 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 덱스트로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨 등의 당류, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분 등의 전분류, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 맥아, 젤라틴, 탈크, 폴리올, 식물성유, 에탄올, 그리세롤 등을 들 수 있다. 제제화활 경우 필요에 따라적절한 결합제, 윤활제, 붕해제, 착색제, 희석제 등을 포함시킬 수 있다. 적절한 결합제로서는 전분, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분페리스트, 젤라틴, 메틸셀룰로스, 소듐 카복시메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 글루코스, 옥수수 감미제, 소듐 알지네이트, 폴리에틸렌 글리콜, 왁스 등을 들 수 있고, 윤활제로서는 올레산나트륨, 스테아르산나트륨, 스테아르산마그네슘, 벤조산나트륨, 초산나트륨, 염화나트륨, 실리카, 탈쿰, 스테아르산, 그것의 마그네슘염과 칼슘염, 폴리데틸렌글리콜 등을 들 수 있으며, 붕해제로서는 전분, 메틸 셀룰로스, 아가(agar), 벤토나이트, 잔탄 검, 전분, 알긴산 또는 그것의 소듐 염 등을 들 수 있다. 또 희석제로서는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 소비톨, 셀룰로스, 글라이신 등을 들 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물이 비경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제 및 좌제의 형태로 제제화될 수 있다. 주사제로 제제화할 경우 적합한 담체로서는 수성 등장 용액 또는 현탁액을 사용할 수 있으며, 구체적으로는 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화할 수 있다. 비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화할 수 있으며, 좌제로 제제화할 경우 그 담체로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등을 사용할 수 있다.
약제학적 조성물의 구체적인 제제화와 관련하여서는 당업계에 공지되어 있으며, 예컨대 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)] 등을 참조할 수 있다. 상기 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주 된다.
본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 성별, 연령, 환자의 중증도, 투여 경로에 따라 1일 0.001mg/kg ~ 10g/kg 범위, 바람직하게는 0.001mg/kg ~ 1g/kg 범위일 수 있다. 투여는 1일 1회 또는 수회로 나누어 이루어질 수 있다. 이러한 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.
본 발명의 조성물은 또 다른 구체적인 양태에 있어서, 화장료 조성물로 파악할 수 있다. 본 발명의 조성물이 화장품 조성물로 파악될 경우 그 용도는 과면역 또는 비정상 면역에 의한 피부 트러블 억제 등의 용도로 이해될 수 있다.
본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 파악될 경우에도 그 화장료 조성물은 그 용도상, 법률상 임의의 제품 구분을 띨 수 있으며, 구체적으로 피부 트러블 개선, 아토피 피부염 개선 등의 용도를 가진 기능성 화장품, 비기능성 일반 화장품 등일 수 있다. 제품 형태에 있어서도 임의의 제품 형태를 띨 수 있는데, 구체적으로 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 등의 제품 형태를 띨 수 있다. 구체적인 제품 형태에 있어서는 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형 등일 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 그 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 예컨대, 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 비타민, 색소 및 항료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되는데, 구체적으로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 면역억제 활성을 나타내는 그 유효성분을 포함하는 것을 제외하고는 당업계에 통상적으로 행하여지는 화장료 조성물의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 감태 추출물과 괭생이모자반 추출물을 이용한 면역억제용 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명의 면역억제용 조성물은 과면역 또는 비정상적 면역에 의한 질환의 개선 등의 용도, 과면역 또는 비정상적 면역에 의한 피부 트러블의 완화 용도 등으로 식품, 화장품, 약품 등으로 제품화될 수 있다.
도 1과 도 9는 세포독성 실험 결과이다.
도 2와 도 10은 세포증식 실험 결과이다.
도 3 내지 도 8는 사이토카인의 RT-RCR 결과이다.
도 2와 도 10은 세포증식 실험 결과이다.
도 3 내지 도 8는 사이토카인의 RT-RCR 결과이다.
이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예> 감태 추출물, 괭생이모자반 추출물 및 이들 혼합물의 제조
<실시예 1> 감태 추출물의 제조
감태 (Ecklonia cava)(전초)는 2016년 7월 ~ 8월 사이에 한국 제주도 연안에서 채집하였고, 염분과 기타 불순물을 제거하기 위하여 수세하였다. 수세한 감태는 동결 건조한 후 곱게 갈아 20 g을 취한 후 70% 에탄올을 가하여 24시간 동안 추출하여 여과하였다. 여과액을 감압농축하고 동결건조하여 분말상의 감태 추출물(ECE, Ecklonia cava ethanol extract)를 제조하였다.
<실시예 2> 괭생이모자반 추출물의 제조
상기 <실시예 1>과 동일하게, 괭생이모자반(전초)을 70% 에탄올로 추출하여 분말상의 괭생이모자반 추출물(SHE, Sargassum horneri ethanol extract)을 제조하였다.
<실시예 3> 혼합물의 제조
상기 <실시예 1>의 ECE와 상기 <실시예 2>의 SHE를 0:10(SHE 단독), 2:8, 4:6, 5:5, 6:4, 8:2, 10:0(ECE 단독)의 중량비(ECE:SHE)로 혼합한 후 각각 62.5 ㎍/mL 농도와 125 ㎍/mL 농도로 제조하여 아래 실험에 사용였다.
<실험예> 면역 억제 활성 실험
<실험예 1> 콘카나발린 A 자극 인자에 대한 감태와 괭생이모자반 혼합 복합물의 면역 조절 활성 평가
1. 실험 방법.
1.1 마우스 비장 세포의 준비
8~10 주령의 C57BL/6 마우스의 비장을 적출하여 세포 여과기를 통해 얻은 단일 세포 부유액을 염화 암모늄(ammonium chloride, ACK) 용액과 함께 10분간 실온에서 배양하여 적혈구를 제거하였다. 그 후, 인산완충용액(Dulbeccos phosphate-buffered saline, DPBS, Gibco BRL, UK)으로 씻어내고, 10% 소태아혈청(Gibco BRL)와 1% Penicillin/Streptomycin (Gibco BRL)이 함유된 RPMI-1640 (Gibco BRL) 배지에 현탁하여 사용하였다.
1.2 콘카나발린 A 인자에 대한 세포독성 평가
상기의 방법으로 얻은 비장세포를 96-well plate에 1×105개씩 분주한 후 실시예의 시료를 처리하여 2시간 동안 배양하고, 자극 인자인 콘카나발린 A(Concanavalin A, 이하 ConA) 5 ㎍/ml의 농도로 처리하여 70시간 동안 배양하여 총 배양시간이 72시간이 되도록 하였다. 이후 상층액을 취하여 LDH cytotoxicity detection kit (TAKARA, Japan)를 이용하여 LDH의 활성 정도를 측정하였다.
1.3 ConA 자극 인자에 대한 세포 증식능 평가
상기의 방법으로 얻은 비장세포를 96-well plate에 4×105개씩 분주한 후 실시예의 시료를 처리하여 2시간동안 배양하고, 자극 인자인 ConA 5 ㎍/ml의 농도로 처리하여 52시간 동안 배양하였다. 이후 각 well에 3H-thymidine (42 Ci/mmol; Amersham, USA)을 1 Ci를 처리한 후 18시간 동안 배양하였다. 총 72시간의 배양 후, 유리 섬유에 세포를 포획하고 건조하여 방사선 측정기(TriLux, USA)를 이용하여 방사선 동위 원소 양을 측정하였다.
1.4 ConA 자극 인자에 대한 cytokine 생성 평가
상기의 방법으로 얻은 비장세포를 6-well plate에 1×107개씩 분주한 후 시료를 처리하여 2시간동안 배양하고, 자극 인자인 ConA 5 ㎍/ml의 농도로 처리하여 46시간 동안 배양함. 총 48시간의 배양 후, 세포를 수확하여 Trizol Reagent (Ambion, USA)를 이용해 RNA를 분리하고, 얻어진 RNA는 2 ㎍/ml이 되도록 하여 Reverse Transcription System (Promega, USA)를 이용하여 cDNA를 합성하였다. 그 후 합성된 cDNA를 SYBR master mix (Applied Biosystems, USA), Primer, DEPC 등과 혼합하여 real-time PCR을 수행하였다(Step One Plus, Applied Biosystems). 실험 후 각 cytokine의 값을 GAPDH를 이용해 보정하여 비교하였으며, 사용한 Primer는 아래의 표 1과 같다.
2. 실험 결과
2.1 ConA 자극 인자에 대한 세포독성 평가
젖산 탈수소효소(Lactose dehydrogenase, LDH) 활성 정도를 통해 세포독성을 봤을 때, 도 1에서 확인되듯이 실시예 시료 처리군의 경우 모두 ConA 단독 처리군과 비교했을 때 유의성 있게 낮거나 유사하게 나타나 세포독성이 없는 것으로 확인되었다. LDH는 세포가 손상되었을 경우 외부로 방출되므로 LDH 활성이 낮다는 것은 세포가 덜 손상되었음을 의미한다.
2.2 ConA 자극 인자에 대한 세포 증식능 평가
마우스 비장세포의 배지에 방사성 동위원소가 표지된 3H-thymidine을 처리하여 함께 배양할 경우, 새로운 세포의 증식을 위한 DNA 복제 시 방사성 동위원소가 포함된 thymidine이 사용되므로 방사성 동위원소의 양을 측정하면 세포의 증식능을 판단할 수 있다.
도 2에서 확인되듯이, 실시예의 시료 처리군은 추출물 단독이나 혼합물 모두 면역세포의 증식을 억제함을 알 수 있으며, 도 1의 결과와 종합할 때, 실시예의 시료는 모두 면역원(ConA)에 의해 자극된 면역세포의 증식을 세포독성 없이 억제함을알 수 있다.
2.3 ConA 자극 인자에 대한 cytokine 생성 평가
면역세포로부터 분비되어 과면역 반응 또는 이로 인한 염증 반응 등에 관여하는 상기 표 1의 IL-1β, INF-γ, TNF-α, IL-5, IL-6, IL-13 등의 사이토카인 생성 억제 정도를 평가하였을 때, 도 3 내지 도 8에서 확인되듯이, 실시예의 시료는 대체로 농도 의존적으로 유의성 있게 이들 사이토카인의 생성을 억제하였다.
<실험예 2> 난백알부민 자극 인자에 대한 감태와 괭생이모자반 혼합 복합물의 면역 조절 활성 평가
1. 실험 방법
1.1 난백알부민 감작 마우스 및 비장 세포의 준비
6~8주령의 BALB/c 마우스 1마리 당 난백알부민(Ovalbumin, OVA) (Sigma-Aldrich, USA, 이하 OVA) 20g, Imject Alum Adjuvant (Thermo Fisher Scientific Inc.) 2mg를 혼화한 후 실험 1일과 14일에 복강 주사하였다. 실험 15일째에 부검하여 비장을 적출하였으며, 적출한 비장을 마쇄한 후 세포 여과기를 통해 얻은 단일 세포 부유액을 염화 암모늄(ammonium chloride, ACK) 용액과 함께 10분간 실온에서 배양하여 적혈구를 제거하였다. 그 후 인산완충용액(Dulbeccos phosphate-buffered saline, DPBS, Gibco BRL, UK)으로 씻어내고, 10% 소태아혈청(Gibco BRL)와 1% Penicillin/Streptomycin (Gibco BRL)이 함유된 RPMI-1640 (Gibco BRL) 배지에 현탁하여 사용하였다.
1.2 OVA 자극 인자에 대한 세포 독성 평가
상기의 방법으로 얻은 비장세포를 96-well plate에 1×105개씩 분주한 후 실시예의 시료를 처리하여 2시간동안 배양하고, OVA 100 ㎍/ml의 농도로 처리하여 70시간 동안 배양하여 총 배양시간이 72시간이 되도록 하였다. 이후 상층액을 취하여 LDH cytotoxicity detection kit (TAKARA)를 이용하여 LDH의 활성 정도를 측정하였음.
1.3 OVA 자극 인자에 대한 세포 증식능 평가
상기의 방법으로 얻은 비장세포를 96-well plate에 4×105개씩 분주한 후 실시예의 시료를 처리하여 2시간동안 배양하고, OVA 100 ㎍/ml의 농도로 처리하여 52시간 동안 배양하였다. 이후 각 well에 3H-thymidine (42 Ci/mmol; Amersham)을 1 Ci를 처리한 후 18시간동안 배양하였다. 총 72시간의 배양 후, 유리 섬유에 세포를 포획하고 건조하여 방사선 측정기(TriLux)를 이용하여 방사선 동위 원소 양을 측정하였다.
2. 실험 결과
2.1 OVA 자극 인자에 대한 세포독성 평가
LDH 활성 정도를 통해 세포독성을 봤을 때, 도 9에서 확인되듯이 실시예 시료(혼합물, 활성이 우수한 온합물만을 시료로 사용하였음) 처리군의 경우 모두 OVA 단독 처리군과 비교했을 때 유의성 있게 낮거나 유사하게 나타나 세포독성이 없는 것으로 확인되었다.
2.2 OVA 자극 인자에 대한 세포 증식능 평가
3H-thymidine의 사용에 따른 방사성 동위원소의 양을 측정하여 도 10에 나타내었는데, 도 11에서 확인되듯이, 사용된 실시예의 시료는 모두 뚜렷하게 OVA에 의해 자극된 면역세포의 증식을 억제함을 보여준다.
Claims (7)
- 감태 추출물 또는 감태 추출물과 괭생이모자반 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 면역억제용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 추출물은 물과 에탄올의 혼합용매 추출물이고,
상기 혼합물은 감태 추출물과 괭생이모자반 추출물의 5:5 내지 8:2 중량비의 혼합물인 것을 특징으로 하는 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 면역억제는 과면역 또는 비정상적 면역에 의한 면역질환의 개선, 예방 또는 치료이고,
상기 면역질환은 이식편 숙주반응 질환, 자가면역질환(류마티스 관절염 등), 과증식성 피부질환(아토피성 피부염, 접촉성 피부염 등), 만성 폐색성 호흡기 질환(chronic obstructive pulmonary disease; COPD), 알레르기성 천식 천식, 기관지염(bronchitis), 알레르기성 비염 및 자가면역성 간염(autoimmune hepatitis) 중 하나인 것을 특징으로 하는 면역억제용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 면역억제는 과면역 또는 비정상적 면역에 의한 면역질환의 개선, 예방 또는 치료이고,
상기 면역질환은 아토피성 피부염인 것을 특징으로 하는 면역억제용 조성물.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는 면역억제용 조성물.
- 감태 추출물 또는 감태 추출물과 괭생이모자반 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 과면역 반응 또는 비정상적 면역 반응 완화용 식품 조성물.
- 감태 추출물 또는 감태 추출물과 괭생이모자반 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는,
과면역 또는 비정상 면역에 의한 피부 트러블 억제용 화장품 조성물.
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