KR101934552B1 - Method of Improving Survival Rate for Hatching Fry of Coldsea Fish - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 한해성 어류의 인공종묘를 생산하는 과정에서 수정란부터 치어기까지 폐사가 발생하는 원인을 파악하여 이에 대한 해결방안을 마련함으로써 부화 자어의 생존율을 높일 수 있는 한해성 어류의 부화 자어 생존율 향상방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for improving the survival rate of hatching fishes of marine fishes which can increase the survival rate of hatching fishes by identifying the cause of the occurrence of fish hatching from the fertilized eggs to the hatching stage in the process of producing artificial hatching of the marine fishes. ≪ / RTI >
한해성 어류는 주로 명태와 대구, 곰치 도루묵 등으로 대변되는데, 한해성 어류의 종묘생산을 위해서는 초기 영양요구에 맞는 먹이를 공급하고 수정란부터 치어기까지 폐사가 발생하는 원인 파악과 이에 대한 대책 수립이 매우 중요하다.In order to produce the seeds of the domesticated fish, we need to supply the food that meets the initial nutritional needs and identify the cause of the occurrence of our company from the fertilized eggs to the feathers. very important.
한해성 어류의 종묘생산 사례는 전 세계적으로 많지 않고 경험 있는 양식 어가 또는 연구자들이 드물어서, 일반적으로 한해성 어류의 종묘생산에는 종래의 온수성 어류에 적용되고 있는 먹이공급체계(feeding schedule)가 그대로 적용되고 있다.There are not many examples of the production of seedling seeds in the world, and there are few experienced fish farmers or researchers in the world. Generally, the feeding schedule that is applied to conventional warm water fish species .
종래의 먹이공급체계는 부화 후 2~3일에 DHA(docosahexaenoic acid)를 위주로 지질성분을 영양강화한 로티퍼(rotifer)를 공급하다가 자어가 성장하여 알테미아(artemia)를 먹을 수 있는 시기가 되면 2~3일 동안 로티퍼와 중복해서 공급한 후 DHA 위주로 영양강화를 한 알테미아를 공급하고 이후 코페포드(copepoda), 미립자사료(particle feed)로 넘어가는 체계를 갖는다.Conventional food supply system supplies DHA (docosahexaenoic acid) -like rotifer which is nutrition-strengthened rotifer in 2 ~ 3 days after hatching, and when it is time to eat artemia, After feeding for one day with the rotifers, they supply the nutritional fortified alteamia with DHA and then the copepoda and the particle feed.
명태(Theragra chalcogra㎜a)와 같은 한해성 어종의 인공양식에 많은 분야의 전문가들이 참여하여 번식, 사료, 먹이공급 등의 개발에 역점을 두어 연구와 생산을 병행하고 있으나, 종묘생산 초기에 발생하는 원인 모를 폐사에 대한 인식도 연구도 전무한 상태이다. Therapeutic chalcogra mma ), and many researchers and producers concentrate on the development of breeding, feed, food supply, etc. However, it is difficult to find the cause There is no research on the perception of.
어류의 종묘생산과정에서 발생하는 대량 폐사시기는 일반적으로 3단계로 구분되며, 1차 폐사 시기는 난황흡수 과정에서 친어(broodstock)의 영양적 결핍에 의해 난질이 불량한 수정란에서 부화한 자어들이 폐사하는 것이고, 2차 폐사 시기는 난황흡수 직후 첫 먹이로 주로 로티퍼가 공급되는데 부화 자어의 입이 작아서 공급되는 로티퍼를 정상적으로 섭취하지 못하거나 영양이 결핍된 로티퍼를 섭취하거나 섭취하여도 소화 흡수시키지 못하는 현상으로 인하여 결국 영양결핍에서 오는 폐사라고 할 수 있으며, 3차 폐사 시기는 살아있는 먹이생물에서 미립자사료로 전환하는 과정에서 전환시기가 잘못되었거나 입 크기에 맞지 않는 미립자 사료를 공급하거나 영양적 불균형 또는 발달단계에 맞지 않는 영양성분의 불합리한 사료를 공급받았을 경우 발생한다.The mass mortality occurred during the process of seed production of fish is generally divided into three stages. The first stage of death is due to nutritional deficiency of broodstock during egg yolk absorption process, The second mortal phase is the first food immediately after the absorption of yolk sac. It is mainly supplied with rotifers. Because the mouth of the hatchery is small, it can not digest and absorb the rotifers supplied or nutrient deficient. And the third stage of death is the transition from living food to particulate feed during the transition period is wrong or the mouth size does not meet the feed particle feed, or nutritional imbalance or developmental stage If you receive unreasonable food with inappropriate nutritional .
상기와 같은 일반 어류 종묘의 대량 폐사는 개략적인 원인이 파악되고 이의 해소방안이 각 어종별로 수립되어 있으나, 한해성 어류는 이러한 폐사 원인뿐만 아니라, 사육수온, 체강 내 가스발생 등 여러 가지 다른 요인에 의한 대량폐사가 발생하여 생존율이 온수성 어류에 비하여 낮은 문제가 있다.Although the cause of the massive death of the general fish seedlings as described above has been grasped and the measures for resolving the problem have been established for each fish species, the fishes of the year are not limited to these causes but also various other factors such as the temperature of the raising water, And the survival rate is lower than that of warm water fishes.
예를 들어, 10만 개체의 종묘생산을 위해서 넙치의 경우 15만 개 정도의 알을 이용하면 되나(생존율 67% 내외), 명태의 경우 부화 후 10일과 20일경 사이에 불분명한 이유로 대량 폐사가 발생하여 10만 개체의 종묘생산을 위해서 1000만 개 정도의 알을 사용해야 하는 문제가 있다(생존율 1% 이하).For example, in order to produce 100,000 individual seeds, the flounder may use about 150,000 eggs (about 67% of the survival rate), but in the case of pollinosis, it is unclear between 10 and 20 days after hatching, There is a problem that 10 million eggs should be used for the production of 100,000 seeds (survival rate is less than 1%).
따라서 명태와 같은 한해성 어종의 인공양식을 성공시키기 위해서는 종묘생산 과정에서 부화 자어의 대량폐사 원인을 규명하고 이에 대한 해소방안을 마련하여, 부화 자어의 사육과정에서 생존율을 향상시킬 수 있는 방법을 개발하는 것이 시급히 요구되고 있다.Therefore, in order to succeed in the artificial breeding of marine fish species such as pollack, the cause of mass mortality of the hatching larvae in the process of seedling production has been clarified and measures have been developed to improve the survival rate of the hatching larvae Is urgently required.
본 발명은 상기의 문제를 해결하기 위한 것으로서, 한해성 어류의 부화 자어가 폐사하는 원인을 파악하고 이의 해결방안을 제시하여 부화 자어의 생존율을 향상시킬 수 있는 방법을 제공하는 것이다.Disclosure of Invention Technical Problem [8] Accordingly, the present invention has been made in view of the above problems, and it is an object of the present invention to provide a method for identifying a cause of hatching of a hatching fish and proposing a solution thereof to improve the survival rate of the hatching fish.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 한해성 어류 친어의 성숙란과 정액을 수온 4~8 ℃에서 수정시켜 수정란을 얻는 단계; 상기 수정란을 수온 4.5~11.0 ℃에서 부화시키는 단계; 상기 부화 후 수온을 7~13 ℃로 유지하면서 자어에 EPA 향상 지질 영양강화 로티퍼를 공급하는 단계; 및 상기 사육수온을 점차 상승시켜 부화 후 150일째에 7~20 ℃로 유지하는 단계:를 포함하며, 상기 부화 전후의 사육수에 금속성 구리이온을 0.5~5 ppb의 농도로 첨가하고, 상기 영양강화 로티퍼는 시조카이트륨 5~15 중량%, 복합효소제 3~7 중량%, EPA 오일 0.5~5.0 중량%, 클로렐라 분말 0.1~3.0 중량%, 타우린 0.1~3.0 중량%, 유화제 0.1~3.0 중량%, 아스타잔틴 0.05~3.00 중량%, 아연 0.005~0.050 중량% 및 잔량의 물로 이루어진 영양강화제로 영양강화된 것을 특징으로 하는 한해성 어류의 부화 자어 생존율 향상방법을 제공한다.In order to solve the above-mentioned problems, the present invention provides a method for preparing a fertilized egg, Hatching the embryo at a temperature of 4.5 to 11.0 占 폚; Supplying EPA-enhanced lipid-enhanced nutrient-enriched rotifers to the frogs while maintaining the water temperature at 7 to 13 ° C after the incubation; And maintaining the temperature of the raising water gradually at 7 to 20 ° C after 150 days of hatching, wherein metallic copper ions are added at a concentration of 0.5 to 5 ppb to the raising water before and after the hatching, The rotifers are made up of 5 to 15% by weight of rhizothenate, 3 to 7% by weight of complex enzyme, 0.5 to 5.0% by weight of EPA oil, 0.1 to 3.0% by weight of chlorella powder, 0.1 to 3.0% by weight of taurine, 0.1 to 3.0% A nutritional fortification agent comprising 0.05 to 3.00% by weight of tarotin, 0.005 to 0.050% by weight of zinc and a residual amount of water.
이때, 상기 구리이온의 첨가는 구리이온을 0.5~1 ppb의 농도로 3~5회의 횟수로 첨가하거나, 부화 전 구리이온을 3~5 ppb의 농도로 1회 첨가하거나 또는 부화 후 구리이온을 2~4 ppb의 농도로 첨가하고 자어가 1~5일의 기간 동안 노출되도록 하는 것이 바람직하다.At this time, the addition of the copper ion may be performed by adding copper ions at a concentration of 0.5 to 1 ppb at a rate of 3 to 5 times, or adding copper ions at a concentration of 3 to 5 ppb once before hatching, To 4 ppb, and the hare is exposed for a period of 1 to 5 days.
또한, 상기 부화시키는 단계의 사육수에 산소를 공급하여 용존산소 10~14 ppm으로 유지하는 것이 바람직하다.In addition, it is preferable that oxygen is supplied to the breeding water in the incubation step to maintain the dissolved oxygen at 10 to 14 ppm.
또한, 상기 로티퍼 공급시 난노크로롭시스 오큘라타 또는 아이소크라이시스 갈바나를 추가 공급하는 것이 바람직하다.In addition, it is preferable to additionally supply noxious rotoscis ovalata or isocrysis galvanne when supplying the rotifers.
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또한, 상기 EPA 오일은 어류에서 추출한 EPA 함량 75~85 %의 정제 어유인 것이 바람직하고, 상기 유화제는 HLB 12~20의 유화제 30~50 중량%와 HLB 3~8의 유화제 50~70 중량%로 구성되는 것이 바람직하다.Preferably, the EPA oil is purified fish oil having an EPA content of 75 to 85% extracted from fish, and the emulsifying agent is 30 to 50% by weight of an emulsifier of
또한, 상기 영양강화 로티퍼는 수온 25~35 ℃에서 담수산 농축 클로렐라로 배양하고 자어 공급 2시간 이전에 수온 18~22℃에서 상기 영양강화제로 영양강화한 로티퍼인 것이 바람직하다.It is also preferable that the nutrition-enhancing rotifers are cultivated with chlorella concentrate at a water temperature of 25 to 35 DEG C and nutritionally enriched with the nutritional enhancer at a temperature of 18 to 22 DEG C two hours before the feeding of the ears.
본 발명에 따른 한해성 어류의 부화 자어 생존율 향상방법은 자어의 기형이나 폐사를 최소화하여 생존율을 높임으로써 한해성 어류의 인공양식을 성공적으로 수행할 수 있다.According to the present invention, the method of improving the hatching survival rate of a domesticated fish can successfully perform the artificial hatching of the limited hatching fish by increasing the survival rate by minimizing the malformation or mortality of the hatching fish.
즉, 수정란의 부화 전후 수조에 산소에 공급하여 용존산소를 조절하거나 금속 양이온을 공급하여 체강 내 가스발생을 억제하거나 자어에 공급하는 로피터를 DHA뿐만 아니라 EPA 함량을 높게 영영강화하여 수정란의 부화율과 자어의 생존율을 높일 수 있다.That is to say, the EPA content of DHA as well as DHA is strengthened by supplying the oxygen to the water tank before and after incubation of the embryo to control the dissolved oxygen or to supply metal cations to suppress the gas production in the body cavity or to supply the ears. The survival rate of the fish can be increased.
도 1은 명태 수정란의 2세포기부터 부화까지의 발달과정을 보여주는 사진이다.
도 2는 자연 채란된 명태 수정란의 수온별 부화율을 나타낸 그래프이고, 도 3은 수온별 부화일수를 보여주는 그래프이다.
도 4는 명태 수정란의 수온에 따른 부화일수별 부화율을 보여주는 그래프이다.
도 5는 명태 수정란의 수온에 따른 부화일수별 생존율과 생존 부화 자어의 비율을 보여주는 그래프이다.
도 6은 명태 수정란의 수온별 사란(死卵)과 부화 자어의 폐사율을 보여주는 그래프이다.
도 7은 부화 자어의 수온변화에 따른 생존율을 보여주는 그래프이다.
도 8은 부화 자어의 수온별 체장 성장을 비교한 그래프이다.
도 9는 공기 통기량을 달리한 명태 수정란의 부화율을 보여주는 그래프이고, 도 10은 부화 후 5일째의 생존율을 보여주는 그래프이다.
도 11과 도 12는 산소돌을 이용하여 용존산소를 높여준 수조에서 명태 수정란의 부화 및 부화 후 5일간의 폐사 경향을 보여주는 1차 및 2차 그래프이다.
도 13은 영양강화제를 공급한 자어의 체장 성장 결과를 비교한 그래프이다.
도 14는 명태 자어의 기포발생 여부에 따른 조직학적 변화를 관찰한 사진이다.
도 15는 사육수온에 따른 부화 자어의 체강 내 기포 발생 빈도를 보여주는 그래프이다.
도 16은 구리이온 노출에 따른 부화 자어의 누적 폐사율이고, 도 17은 이의 24시간 및 48시간에서의 반수치사농도(LC50)와 신뢰구간 변동을 보여주는 그래프이다.
도 18은 저농도 구리이온에 노출된 부화 자어의 노출일수에 따른 노출농도별 생존율 변화를 보여주는 그래프이고, 도 19는 이의 LC50 및 신뢰구간 변동을 보여주는 그래프이며, 도 20은 노출농도별 사육일수에 대한 LC50 및 신뢰구간 변동을 보여주는 그래프이다.
도 21은 구리이온 처리방식에 따른 체강 내 기포 발생 비율을 보여주는 그래프이고, 도 22는 부화 후 30일째의 생존율을 보여주는 그래프이다.Fig. 1 is a photograph showing the developmental process of the pollen graft from the second stage to the hatching stage.
FIG. 2 is a graph showing the hatching rates of natural pollinated embryos by water temperature, and FIG. 3 is a graph showing the number of hatching days by water temperature.
FIG. 4 is a graph showing the hatching rate by the number of hatching days according to the temperature of pollinated embryo.
FIG. 5 is a graph showing the survival rate and survival hatching rate of embryonic pollen embryos according to the temperature of the hatching days.
FIG. 6 is a graph showing the mortality rate of the dead eggs and hatching larvae of the pollinated embryo at different water temperatures.
FIG. 7 is a graph showing the survival rate of the hatching fish according to changes in water temperature.
FIG. 8 is a graph comparing growth of hatching fishes by water temperature.
FIG. 9 is a graph showing the hatching rate of a pollinated embryo of different air permeation amount, and FIG. 10 is a graph showing the survival rate at 5 days after hatching.
Figs. 11 and 12 are primary and secondary graphs showing the tendency of the pollen embryos to incubate for 5 days after hatching and hatching in a water tank in which dissolved oxygen is elevated using oxygen stones.
FIG. 13 is a graph comparing the growth of the body fat of the larvae fed with the nutritional enhancer.
14 is a photograph showing a histological change according to the occurrence of air bubbles in the barnyard larvae.
15 is a graph showing the frequency of bodily bubbles in the body cavity of the hatched fish according to the temperature of the breeding water.
FIG. 16 is a cumulative mortality rate of hatching larvae following exposure to copper ions, and FIG. 17 is a graph showing the half-life lethal concentration (LC 50 ) and the confidence interval variation at 24 hours and 48 hours thereof.
FIG. 18 is a graph showing the change in survival rate according to the exposure concentration according to the exposed days of hatching horses exposed to low-concentration copper ions, FIG. 19 is a graph showing the LC 50 and the confidence interval variation thereof, of a graph showing the LC 50, and the confidence interval variation.
FIG. 21 is a graph showing the rate of bubble generation in the body cavity according to the copper ion treatment method, and FIG. 22 is a graph showing the survival rate at 30 days after hatching.
부화 자어의 생존율을 향상시키기 위해서는 인공종묘 생산과정에서 자어의 폐사를 감소시키는 것이 가장 중요한데, 일반적으로 친어의 영양결핍에 따른 난질 불량 수정란에서 기인한 폐사, 소화흡수 불량에 따른 영양결핍에서 오는 폐사, 사료전환시기 및 사료종류의 부적합에 따른 폐사 등이 알려져 있으며, 이러한 폐사는 개략적인 원인이 파악되어 이에 대한 해결방안이 대체로 마련되어 있다.In order to improve the survival rate of the hatching larvae, it is most important to reduce the mortality of the larvae during the production of artificial hatchery. In general, the mortality caused by poor quality embryos due to malnutrition of broodstock, It is known that there are many cases of death due to incompatibility of feed type and feed conversion period.
그러나 한해성 어류는 상기 원인 외에도 대량 폐사가 발생하여 인공종묘 생산에 많은 어려움을 겪고 있으며, 특히 한해성 어류의 대표어종인 명태는 자어의 부화 후 10일과 20일경 사이에 대량 폐사가 발생하고 있으나 이에 대한 명확한 원인규명이 아직까지 정립되어 있지 않은 실정이다.However, in addition to the above-mentioned causes, there are massive deaths and serious difficulties in production of artificial seedlings. In particular, in the case of the marine fishes, The clear cause identification has yet to be established.
이에, 본 발명에서는 명태를 중심으로 한해성 어류의 10~20일경 대량 폐사 원인을 규명하고 이에 대한 해결방안을 마련하여 그 효과를 검증함으로써 한해성 어류 부화 자어의 생존율 향상방법을 제공하고자 한다.Accordingly, the present invention aims to provide a method for improving the survival rate of the hatching fishes of the Hanhyeong fishes by investigating the causes of mass mortality around 10 to 20 days of the domesticated fishes, and examining the effects thereof.
한해성 어류가 10~20일 사이에 폐사하는 원인으로서, 낮은 수온이나 낮은 용존산소로 인하여 절대적인 소화력이 낮은 경우, 영양요구가 DHA 영양강화로도 채워지지 않은 경우, 체강 내 가스발생으로 인하여 표층에 떠서 폐사하는 경우를 추정할 수 있다.In case the fish are dead in 10 to 20 days, if the absolute digestibility is low due to low water temperature or low dissolved oxygen, if nutritional requirement is not satisfied by DHA nutritional fortification, It is possible to estimate the case of death by hanging.
낮은 수온이나 낮은 용존산소로 인하여 소화력이 낮은 경우 사육수온을 높이거나 자어의 소화력을 높일 수 있는 방법을 연구하거나 간단한 소화기능만으로도 영양성분이 흡수될 수 있는 먹이를 공급하는 방안이 고려될 수 있고, 자어의 영양요구를 충족시키지 못하는 경우에는 한해성 어류의 자어 영양요구를 규명하고 필요로 하거나 부족한 영양성분을 파악하여 영양강화 방식을 개선해 줄 필요가 있으며, 체강 내 가스발생으로 인한 폐사의 경우 항생제를 먹이생물을 통해서 전달하거나 체내 가스가 발생하지 않도록 억제하는 방법이 있다.When the digestibility is low due to low water temperature or low dissolved oxygen, it may be considered to increase the temperature of the rearing water or to increase the digestive power of the eared fish, or to provide a food which can absorb the nutrients only with a simple digestion function, If the nutrient requirement of the fish is not satisfied, it is necessary to identify the nutritional requirements of the fish and to improve the nutritional fortification method by identifying the nutritional elements that are needed or lacked. There is a method of delivering it through food organisms or inhibiting the generation of gas in the body.
이하, 하기의 실시예에 의거하여 명태를 중심으로 한해성 어류의 폐사 원인을 규명하고 이에 대한 해결방안을 마련하여 그 효과를 검증함으로써 한해성 어류 부화 자어의 생존율을 향상시킬 수 있는 방법에 대하여 상세하게 설명한다.Based on the following examples, the cause of death of marine fishes based on pollocks was clarified, and a solution to this problem was established, and the effect thereof was verified to find out how to improve the survival rate of the marine fish hatching fishes .
단, 하기의 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것이 아니고, 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 치환 및 균등한 타 실시예로 변경할 수 있음은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 명백할 것이다.It is to be understood, however, that the invention is not to be construed as being limited to the embodiments set forth herein. Rather, these embodiments are provided so that this disclosure will be thorough and complete, and will fully convey the scope of the invention to those skilled in the art. Will be apparent to those skilled in the art to which the present invention pertains.
<실시예 1> 낮은 수온이나 낮은 용존산소로 인하여 소화력이 낮은 경우의 폐사율 감소 방법Example 1: Reduction of mortality when digestion power is low due to low water temperature or low dissolved oxygen
<1-1> 자치어의 수온 내성<1-1> Water tolerance of mullet
성숙한 명태 암컷으로부터 성숙란을 채란하고 성숙한 명태 수컷으로부터 정액을 채정한 후 수정시켜 수정란을 얻었으며, 수온 5.5±0.2 ℃에서 수정 후 6 시간 경과시 2세포기가 되었고 110시간 경과시 신경엽이 확인되었으며 340 시간 경과시 부화하기 시작하였다(도 1).At the temperature of 5.5 ± 0.2 ℃, 6 hours after the fertilization, 2 cells were observed. 110 hours after the fertilization, the neurons were observed at 340 hours And began to hatch at the time (Fig. 1).
명태 수정란은 수온 4.5~11.0 ℃에서 부화시까지의 생존율이 90 % 이상을 보였으나 13 ℃를 넘어가면 생존율이 급격히 낮아지는 것을 확인하였고 부화까지 걸리는 시간은 수온 4.5 ℃에서 약 14~16일이 소요되었으며 생존율은 낮으나 15 ℃에서는 수정 후 8일째부터 부화하기 시작하였다.Pollinated embryos showed a survival rate of more than 90% at hatching temperature of 4.5 ~ 11.0 ℃, but the survival rate decreased rapidly when the temperature exceeded 13 ℃. The incubation time was about 14 ~ 16 days at 4.5 ℃ And the survival rate was low. However, at 15 ℃, hatching began at 8 days after fertilization.
수온별 부화율은 4.5 ℃에서 65 %의 부화율을 보였고 7~11 ℃에서 85 % 이상의 높은 부화율을 보였으나 13 ℃ 이상에서는 급격하게 낮아져서 15 ℃에서는 23 %의 낮은 부화율을 보였으며(도 2), 수정 후 부화까지의 시간은 4.5 ℃에서 15 일 정도 소요되었으나 수온이 상승할수록 점점 빨라져서 15 ℃에서 7일 정도 소요되었다(도 3).The hatchability of each temperature showed a hatching rate of 65% at 4.5 ° C and a high hatching rate of more than 85% at 7 to 11 ° C, but was abruptly lowered at 13 ° C or higher and a low hatching rate of 23% at 15 ° C (FIG. 2) The time to post hatching was about 15 days at 4.5 ° C, but it was accelerated with increasing water temperature and took about 7 days at 15 ° C (FIG. 3).
부화 간격은 사육온도 4.5 ℃에서 약 8일간 지속적으로 부화하였고 11 ℃ 이상에서는 2일 또는 3일 정도 부화가 지속되었으며, 수온에 따른 일일 부화율은 4.5 ℃에서 1일 최대 35 %의 부화율을 보였고 7~11 ℃에서는 하루 최대 부화율이 60 % 이상을 보여 안정적인 부화를 확인할 수 있었으며, 15 ℃에서는 5일간 지속적으로 부화하였으나 1일 8 % 내외의 낮은 부화율을 보였다(도 4).The hatching interval was hatching continuously for about 8 days at 4.5 ℃, and hatching for 2 or 3 days at more than 11 ℃. The daily hatching rate at 4.5 ℃ was 35% At 11 ° C, the maximum hatching rate was 60% or more, indicating stable hatching. The hatching rate was constant for 5 days at 15 ° C, but the hatching rate was about 8% per day (FIG.
수정란의 수온에 따른 부화 일수별 생존율은 수온 4.5~11 ℃에서 77 % 이상이었으나 13 ℃ 이상에서는 부화하지 않은 수정란 대부분이 생존하지 못하였고, 정상 부화된 자어는 사육온도 4.5~7.0 ℃에서 부화 후 20일경까지 대부분 생존하였으나 9 ℃ 이상에서는 부화 후 시일이 경과할수록 생존율이 급격히 저하되었다(도 5).The survival rate of the embryo at the temperature of 4.5 ~ 11 ℃ was higher than that of the embryo at the temperature of 4.5 ~ 11 ℃, but most of the embryos not incubated above 13 ℃ were not viable. The survival rate was largely alleviated up to one day, but the survival rate was drastically deteriorated as the post hatching time elapsed above 9 ° C (FIG. 5).
부화과정에서 수정란의 폐사율은 4.5 ℃와 13 ℃ 이상에서 30 % 정도로 높게 조사되었고 7 ℃에서는 부화과정에서 폐사하는 수정란은 전혀 관찰되지 않았으며, 부화 자어의 폐사율은 4.5 ℃에서는 없었으나 수온이 상승할수록 증가하고 13 ℃ 이상에서는 65 % 이상으로 관측되었다(도 6).During the hatching process, the mortality rate of the embryo was higher than 4.5 ℃ and 13 ℃. The mortality rate of the hatching larvae at 4.5 ℃ was higher than that of the hatching larvae at 7 ℃. And more than 65% at temperatures above 13 ° C (Fig. 6).
따라서 부화율 면에서는 수온 4.5~11.0 ℃ 사이가 유리하나 폐사율을 감안하면 수온 7~11 ℃ 사이에서 부화시키는 것이 바람직하고 4.5~11.0 ℃ 사이에서 부화시킨 직후 바로 수온을 7 ℃ 이상으로 상승시키는 것이 가장 바람직할 것으로 판단된다.Therefore, in terms of hatching rate, it is preferable that the water temperature is 4.5 to 11.0 ° C, but considering the mortality rate, it is preferable to hatch at a water temperature of 7 to 11 ° C., and it is most preferable to raise the water temperature to 7 ° C. or more immediately after hatching at 4.5 to 11.0 ° C. .
또한, 수온 4.5 ℃에서 부화 전후 기형이 전혀 발생하지 않았으나 수온이 상승할수록 부화 전후 기형 발생이 증가하였으며, 부화 전 수정란 내 기형이 발생하는 고온에서는 대부분의 수정란의 폐사로 판단된다.At the temperature of 4.5 ℃, no anomalies occurred before and after hatching. However, as the temperature increased, the incidence of anomalies before and after hatching increased.
명태는 한해성 어종으로서 사육과정에서 이들의 온도내성에 대한 검토가 필요하며, 이를 위하여 부화 후 4일, 20일, 40일, 80일, 120일 및 150일이 경과되었을 때 각각의 자치어를 5 ℃, 10 ℃, 15 ℃, 20 ℃ 및 25 ℃에 각각 노출시키고 노출 후 6시간 경과 후의 생존율을 확인하였으며, 확인된 생존율을 이용하여 부화 후 일수와 수온에서의 생존율에 대한 반수치사농도(LC50)을 조사하였다.As a result, it is necessary to examine the temperature tolerance of these species during the rearing process. For 4, 20, 40, 80, 120 and 150 days after hatching, The survival rate after 6 hours of exposure to each of 10, 15, 20, and 25 ° C was confirmed, and the half life mortality (LC 50 ) Were investigated.
부화 후 4일째는 12.5 ℃ 부근에서 반 정도 생존할 수 있는 것으로 조사되었고 120일까지 꾸준하게 상승하여 120일째에 19.8 ℃, 150일째는 20.1 ℃ 부근에서 반 정도 생존할 수 있는 것으로 조사되어, 120일 이후에는 생존가능 수온이 거의 증가하지 않는 것으로 조사되었다.On the 4th day after hatching, it was found that it was able to survive about halfway around 12.5 ℃. It was found that it was able to survive about 120 days at 19.8 ℃ and 120 days at 20.1 ℃. It was found that the survivable water temperature hardly increased.
부화 후 경과일수에 따른 온도내성은 부화 초기 4일째는 12.5 ℃까지 반 정도 생존할 수 있었으며, 150일 경과시 개체 크기가 2.5~4 ㎝이고 20.1 ℃까지 반 정도 생존할 수 있는 것으로 조사되었다(도 7).The temperature tolerance according to the number of days after hatching was able to survive up to 12.5 ℃ at the 4th day of hatching, and it was found that the hatchability was 2.5 to 4 ㎝ at 150 days, 7).
종묘생산이 이루어지는 12~5월까지의 자연수온을 보면 12 ℃ 이하로 확인되기 때문에 해양심층수가 아니어도 종묘를 생산하여 5월에 방류하기까지 수온에 의한 영향은 없을 것으로 판단되며, 호르몬 처리 등의 조기산란 유도방법을 통하여 부화시기를 앞당기면 좀 더 큰 개체들을 방류할 수 있을 것으로 판단된다.The natural water temperature from December to May when seedling production is confirmed is below 12 ℃. Therefore, even if it is not deep seawater, it will produce seedling and will not be affected by water temperature until release in May. It can be concluded that the larger hatching stage can be achieved by accelerating the hatching stage through the early scattering induction method.
<1-2> 사육수온을 높이는 방법<1-2> How to raise water temperature
상기 실시예 <1-1>의 자치어의 수온 내성의 결과와 같이 부화시 가장 적합한 수온은 7 ℃이었으나 성장과정에서는 양식의 개념에서 한계수온까지 온도를 올려서 사육하는 것이 바람직하기 때문에 7 ℃ 전후(6.5 ℃)의 온도와 11 ℃ 정도(10 ℃)의 온도에서 성장시켜 자어의 성장률을 확인하였다.As shown in the results of the water temperature tolerance of the above-mentioned Example <1-1>, the most suitable water temperature during hatching was 7 ° C. However, since it is preferable to raise the temperature from the concept of culture to the limit water temperature during the growing process, ℃) and at a temperature of about 11 ℃ (10 ℃).
부화 후 31일까지 로티퍼를 정상 공급하면서 사육한 후 최종 성장 확인을 위하여 각 수조에서 명태 자어를 10 마리씩 측정하여 평균을 구하였으며, 사육온도 6.5 ℃에서의 자어는 체장 5.45±0.922 ㎜였으나 10 ℃에서 사육된 자어는 5.82±0.138 ㎜로서 6.5 ℃의 자어보다 유의적으로 높은 성장을 보였다(도 8).For the final growth confirmation after 10 h after the hatching, 10 roasted cod roots were measured in each tank, and the average length was 5.45 ± 0.922 ㎜ at 6.5 ℃, The breeding was 5.82 ± 0.138 ㎜, which was significantly higher than that of 6.5 ℃ (Fig. 8).
<1-3> 공기 통기량과 용존산소 농도의 증가<1-3> Increase in air permeation amount and dissolved oxygen concentration
공기 폭기량에 따른 수정란의 부화율와 부화 후 5일간의 생존율을 측정하였다.The hatchability of the embryo and the survival rate of the hatching after 5 days of hatching were measured.
250 ℓ의 사육수조에 200 ℓ의 사육수를 채우고 수온을 9.2±0.6 ℃로 조정한 후 수정란 200개씩 수용하였으며, 공기 통기량에 따른 부화율과 부화 후 5일째의 생존율을 확인하기 위하여 폭기량을 분당 200 ㎖, 500 ㎖ 및 1000 ㎖씩 폭기량을 달리하여 3회 반복실험하고 폭기는 수정란의 수용시부터 일정하게 공급하였다.200 ℓ of breeding water was filled in a 250 ℓ rearing water and the water temperature was adjusted to 9.2 ± 0.6 ℃ and 200 embryos were housed. To confirm the hatching rate according to the amount of air aeration and the survival rate on the fifth day after hatching, 200 ㎖, 500 ㎖ and 1000 ㎖, respectively. The aeration was repeatedly supplied from the time of embryo acceptance.
수용된 수정란은 신경엽이 발달한 후 수용되었기 때문에 수용 후 3일 이내에 부화가 시작되어 4일 이내에 모두 부화를 마쳤으며, 이후 난황을 흡수하는 동안에는 먹이를 공급하지 않다가 부화 후 3일째부터 먹이로서 지질 영양강화 로티퍼를 1일 2회 20 개체/㎖로 공급하였다.Since the embryos were housed after the development of the neurons, the hatching was started within 3 days after the embryo was completed, and they all hatch within 4 days. After that, the eggs were not fed during the absorption of the egg yolk, The fortified rotifers were fed twice daily at 20 individuals / ml.
수정란 입식 후 부화 종료시점과 실험 종료시인 부화 후 5일째에 각각 폭기를 중단하고 수표면에 떠 있는 개체들의 계수를 통해서 최종 부화율과 부화 후 5일째의 생존율을 계산하였다.At the end of hatching and at the end of hatching, 5 days after hatching, the aeration was stopped and the final hatching rate and the survival rate on the 5th day after hatching were calculated by counting floating individuals on the water surface.
부화율은 폭기량 200 ㎖/분 실험구에서 86.3±9.07 %로 가장 낮게 나타났으나 폭기량 1000 ㎖/분의 90.7±7.51 %와 유의적인 차이를 보이지 않았고(도 9), 부화 후 5일째의 생존율은 폭기량 200 ㎖/분 실험구에서 7.2 %로 조사되었으나 폭기량 1000 ㎖/분 실험구의 10.2 %와 유의적인 차이 없이 생존개체들이 확인되었다(도 10).The hatching rate was the lowest of 86.3 ± 9.07% at 200 ㎖ / min, but was not significantly different from 90.7 ± 7.51% at 1000 ㎖ / min (Fig. 9), and the survival rate at 5 days after hatching Was irradiated at a rate of 200 ml / min in the experimental group, but survival was confirmed without significant difference from 10.2% in the experimental group (Fig. 10).
용존산소를 높여서 관리하는 산소돌(oxygen stone) 적용 실험을 500 ㎖ 비이커에서 3회 반복 진행하였으며, 비이커에 신경엽 발달단계의 수정란을 약 50개씩 수용하고 매일 아침 흰색으로 변한 폐사란과 부화 개체 및 부화 후 폐사 개체로 구분하여 확인하였으며, 용존산소는 아침 먹이공급 전 용존산소 측정기(YSI EcoSense DO200, YSI Environmental, Inc., 미국)로 측정하였다.Oxygen stone application experiments were carried out in 500 ml beakers three times with increasing dissolved oxygen. The beakers were housed in about 50 embryos at the development stage of the neural development, (YSI EcoSense DO200, YSI Environmental, Inc., USA) for the determination of dissolved oxygen.
먹이는 부화 후 3일부터 지질 영양강화한 로티퍼를 1일 2회 ㎖당 20 개체가 되도록 스포이드(spuit)로 넓게 펴서 공급하였고 매일 아침 먹이공급 전 바닥청소를 스포이드로 가볍게 해주었으며, 사육수온은 냉각기를 이용하여 7.5±0.3 ℃로 조절하였다.From 3 days after the hatching of the feed, a lipid-reinforced rotifers were spread out with a spit to 20 individuals per ml twice a day, and the floor cleaning before the feeding of the morning was lightened with a syringe. And adjusted to 7.5 ± 0.3 ° C.
실험은 1차 산소돌을 최초에만 넣어 준 경우와 2차 산소돌을 3일 간격으로 더 넣어 주었을 경우로 구분하였고, 2차 실험에서는 용존산소가 10 ppm 이상 유지되도록 하였다.Experiments were divided into two groups: first, first and second oxygen stones were added at intervals of 3 days, and in the second experiment, dissolved oxygen was kept above 10 ppm.
1차 산소돌 적용 실험에서 용존산소는 산소돌을 넣지 않은 대조구에서는 부화 전 2일째 8.4 ppm으로 유지되었으나 이후 급격하게 낮아져서 부화 당일(부화종료)에는 4.9 ppm으로 낮아져서 회복되지 않았고, 산소돌 실험구에서는 부화 2일전까지 10.5 ppm까지 상승하였으나 이후 감소하여 부화 후 3일째 6.9 ppm까지 감소하였다.In the first oxygen stones application, dissolved oxygen was maintained at 8.4 ppm on the 2nd day before hatching in the control without oxygen stones, but then rapidly decreased to 4.9 ppm on the hatching day (hatching end) Up to 10.5
부화 전까지 폐사란은 부화 당일까지 대조구에서 총 8개의 폐사란이 발생하였고 1차 산소돌 실험구에서도 6.7개로 낮았으나 부화 1일 전을 제외하고는 유의적인 차이는 없었고, 부화 후 자어의 폐사는 산소돌 실험구에서 부화종료일 1일 전에는 폐사가 없었고 부화 후 1일까지 유의적으로 낮은 폐사를 보였으나 부화 후 2일째 용존산소량이 줄어든 이후 급격한 폐사로 인하여 오히려 산소돌 적용 실험구에서 28.0±10.15 개체로 유의적으로 높게 나타났다.There was no significant difference except the one day before hatching, and the mortality of the eel after the hatching was lower than that of oxygen In the rock experiment, there was no mortal one day before the hatching end, and the mortality was significantly lower until
그러나 부화 후 4일째에 대조구는 생존개체가 없어서 폐사개체가 없었으나 산소돌 적용 실험구에서는 적지만 부화 후 4일째까지 1.3±1.15 개체의 폐사체가 확인되었고, 생존개체는 부화 종료 2일째부터 부화가 시작되었기 때문에 부화종료 1일전부터 산소돌 실험구에서 높았으며, 부화종료 당일에는 대조구에서 43.0±6.56 개체로 산소돌 실험구의 45.3±12.86 개체와 유의적인 차이는 없었으나 이후 대조구에서 생존개체가 급격히 적어져서 산소돌 실험구에서 상대적으로 높은 생존개체수를 보였다(도 11).However, on the 4th day after hatching, the control group had no survivors and no mortality. However, 1.3 ± 1.15 individuals were found in the oxygen - treated group, but the survival was not observed until the 4th day after hatching. , And it was higher in oxygenated rock samples from 1 day before hatching, and 43.0 ± 6.56 in control and 45.3 ± 12.86 in oxygenated rocks at the end of hatching. (Fig. 11). As shown in Fig.
2차 산소돌 적용 실험에서는 3일 간격으로 새로운 산소돌을 공급함에 따라 용존산소가 산소돌을 넣지 않은 대조구에서 1차와 같이 부화종료 2일 전까지 유지되던 용존산소가 부화종료 1일 전 5.7 ppm까지 떨어진 다음 회복하지 못한 채로 부화 후 5일째까지 유지된 반면에, 산소돌 실험구에서는 부화종료 4일 전에 8.6±0.10 ppm이었던 용존산소가 부화종료 2일 전에는 10.5±0.26 ppm으로서 대조구에 비해 높게 유지되었고 이후 10.2 ppm 이상의 높은 용존산소를 유지하는 것으로 조사되었다.In the second oxygen stones application, fresh oxygen stones were fed at intervals of 3 days, and the dissolved oxygen, which was maintained until 2 days before the end of hatching, was 5.7 ppm before the end of hatching In the oxygen - treated experimental group, dissolved oxygen, which was 8.6 ± 0.10
수조 내에서 폐사란의 관찰은 대조구에서 부화종료 2일전 1.0±1.00 개에서 부화종료 당일 7.0±1.73 개로 높아져 산소돌 실험구의 총 4.3개와 유의적인 차이를 보였으며, 부화 후 자어의 폐사는 부화종료 전일부터 진행되어 대조구에서는 부화종료 1일 전에 3.3±2.08 개체였던 것이 부화종료 당일 4.3±2.08 개체로 증가하였고 부화 후 1일째 25.3±1.53 개체로 모든 수조에서 많은 폐사를 보였고 이후 생존개체수가 줄어들면서 폐사개체수도 줄어들었다.In the control group, the number of dead birds increased from 1.0 ± 1.00 2 days before hatching to 7.0 ± 1.73 on the day of hatching, showing a significant difference from the total of 4.3 in the oxygenated rocks. After the hatching, . In the control, 3.3 ± 2.08 individuals increased to 4.3 ± 2.08 on the day of hatching, and 25.3 ± 1.53 on the first day after hatching. The number of survivors decreased in all the tanks after the hatching, Also decreased.
반면에, 산소돌 적용 실험구에서는 부화종료 후 1일까지 1.0~2.0 개체로 적은 폐사개체를 보였고 부화종료 후 2일째 5.0±1.00 개체로 증가하였으나 이후에도 하루 1.0 개체를 초과하지는 않았다.On the other hand, in the experiment with oxygen stones, the number of dead organisms was 1.0 ~ 2.0 individuals on
부화 후 생존개체의 수에서 대조구의 경우 부화종료 당일 31.7±4.93 개체로 가장 높았으나 이후 급격하게 줄어서 부화종료 후 2일째 1.0 개체로 다음날 모두 폐사한 반면에, 산소돌 적용 실험구에서는 부화종료 당일 36.0±7.94 개체까지 증가한 이후 조금씩 감소하여 부화 후 5일째 18.7±7.51 개체까지 감소하여 산소돌에 의한 생존개체는 대조구와 비교하여 유의적으로 월등히 많았다(도 12).The number of surviving individuals after hatching was the highest in the control group (31.7 ± 4.93) on the day of hatching, but then decreased sharply to 1.0 on the 2nd day after hatching and died on the following day. On the other hand, And decreased to 18.7 ± 7.51 on the 5th day after hatching. The survival rate by oxygen stones was significantly higher than that of the control (FIG. 12).
따라서 부화 전후 사육수의 용존산소를 10 ppm 이상 유지하는 것이 수정란과 부화 자어의 폐사율을 감소시켜 생존율을 높이는데 바람직하고, 경제성 면에서 10~14 ppm을 유지하는 것이 가장 바람직한 것으로 판단된다.Therefore, it is desirable to maintain more than 10 ppm of dissolved oxygen before and after hatching in order to reduce the mortality rate of embryo and hatching larvae to increase the survival rate.
<실시예 2> 자어의 영양요구를 충족시키지 못하는 경우의 폐사율 감소 방법Example 2: Mortality reduction method when the nutritional requirement of the fish is not satisfied
<2-1> 한해성 어류의 자어 영양요구 규명<2-1> Identification of nutritional nutritional requirements of Korean seafood
부화 전후 수정란과 자어의 영양상태를 통해 자어의 영양요구 경향을 분석하였다.The nutritional needs of the larvae were analyzed by the nutritional status of embryos and ears before and after hatching.
부화 전, 부화 직후 난황을 매달고 있는 전기 자어, 부화 후 난황흡수를 마친 후기 자어 및 난황흡수 후 2일간 굶긴 기아상태의 자어로 구분하여 자어를 채취하였고 채취한 자어는 100~200 마리를 깨끗한 증류수에 세척하고 수분을 최대한 제거한 후 동결건조하였으며, 동결건조된 시료를 1~2 ㎎씩 채취하여 아미노산과 지방산을 분석하고 분석된 아미노산과 지방산 함량을 시료 중량(㎎)당 ㎍으로 계산하여 함량 변화를 하기 표 1 및 표 2에 나타내었다.Before and after hatching, the eggs were harvested by electrical eardrill hanging from egg yolk, egg yolks after hatching, and frogs starved for 2 days after egg yolk absorption. 100 ~ 200 eggs were collected from clean distilled water After 1 ~ 2 ㎎ of lyophilized samples were taken, the amino acids and fatty acids were analyzed and the contents of amino acids and fatty acids analyzed were calculated as ㎍ per sample weight (mg) The results are shown in Table 1 and Table 2.
부화 전후 영양조성을 보면, 부화와 함께 구성아미노산은 감소하고 지방산과 지질함량은 변함이 없으며, 이 결과로부터 원형질 성분은 대부분 아미노산과 단백질이고 지질은 난황성분으로 이미 합성되었다고 판단된다.As a result, it was concluded that the amino acid and protein content of the protoplasm were almost the same as the egg yolk content of the lipid, and the fatty acid and lipid content did not change with the hatching.
필수아미노산에서 발린(valine), 아이소류신(isoleucine), 류신(leucine)의 경우 난황흡수와 함께 급격히 감소하였고 난황흡수 후 감소된 이들 아미노산 함량은 이후 변화가 없었으며, 이외의 개개 필수아미노산과 필수아미노산 총량의 유의적인 변화는 보이지 않았다.Valine, isoleucine and leucine in the essential amino acids decreased rapidly with the absorption of egg yolk. After the absorption of egg yolk, these amino acid contents were not changed, and the other essential amino acids and essential amino acids There was no significant change in total amount.
비필수아미노산에서 시스테인(cystein)과 티로신(tyrosine)은 부화 후 난황흡수 그리고 기아상태로 이어지는 과정에서 지속적으로 감소하였으나 다른 아미노산의 경우 오히려 증가하는 경향을 보였으며, 부화와 동시에 단백질 함량이 줄어드는 것은 원형질에 포함되어 있는 핵염기들에 의한 단백질의 유출로 판단되고 이후 유의적으로 증가하는 경향을 보였다.In the non-essential amino acids, cysteine and tyrosine were continuously decreased in the process of egg yolk absorption and starvation after hatching, but the other amino acids showed a tendency to increase, while the decrease in protein content at the same time as hatching And it was found to be significantly increased thereafter.
포화지방산(saturated fatty acid, SFA), 고도불포화지방산(highly unsaturated fatty acid, HUFA), 총지질(total lipid, TL)의 변화는 부화와는 유의적인 관계는 없었으나 난황을 흡수하는 동안 증가하였고 난황흡수 후 기아상태에서 급격하게 감소하였으며, 단불포화지방산(monounsaturated fatty acid, MFA)은 난황흡수과정에서 총량 변화가 없고 기아상태에서 급격히 감소하는 경향을 보였다.Changes in saturated fatty acid (SFA), highly unsaturated fatty acid (HUFA) and total lipid (TL) were not significantly associated with hatching, but increased during yolk absorption Monounsaturated fatty acid (MFA) tended to decrease rapidly in the hunger condition with no change in total amount during yolk absorption process.
결과적으로 난황흡수과정에서는 큰 변화는 없으나 난황흡수 후 기아상태에서 지방산 함량이 급격히 감소하는 것으로 조사되어 난황흡수 후 지방산의 보충이 필요한 것으로 판단된다.As a result, there was no significant change in egg yolk absorption process, but the fatty acid content in the starvation state rapidly decreased after egg yolk absorption, suggesting that supplementation of fatty acid is necessary after egg yolk absorption.
<2-2> 그린워터(green water) 실시에 따른 생존율 향상<2-2> Improvement of Survival Rate by Green Water
30 ℓ의 수조(사육수 25 ℓ)에 명태 수정란을 넣고 수온을 5±0.5 ℃로 유지하였으며, 이 온도에서 14~17일 사이에 수정란이 부화되었는데 부화율과 난황흡수 직후 생존율을 96 well plate 3개를 통하여 확인한 결과 각각 94.8±2.4 %, 75±6.3 %로 조사되었다.The embryos were hatchlings between 14 and 17 days at this temperature. The hatching rate and the survival rate after the yolk absorption were measured in 3 - well plates (25 ℓ) , Respectively. The results were 94.8 ± 2.4% and 75 ± 6.3%, respectively.
난황흡수 후 초기 감모(대량 폐사)가 심하여 영양강화 로티퍼를 공급한 후 부화 후 7일째 300 마리의 자어를 30 ℓ의 원형수조(사육수 25 ℓ)에 수용하고 매일 싸이폰(siphon)으로 바닥을 청소하면서 폐사체들을 확인하여 누적 폐사율로 나타내었다.On the 7th day after hatching, 300 horses were housed in a 30 ℓ round water tank (25 liters of breeding water), and the soil was siphoned every day. During the cleaning, the dead bodies were identified and expressed as cumulative mortality.
사육수조의 통기는 200 ㎖/분의 양으로 공급하였고 자연조명(0~5000 lx, L:D=16:8) 하에서 실험이 이루어졌으며, 실험 전후 자어들을 격자 위에서 현미경(Olympus CH40, Olympus Corporation, 일본) 사진을 촬영한 후 ImageJ program(NIH, 미국)을 이용하여 체장을 0.01 ㎜까지 측정하고 3마리씩 알루미늄 평량병(aluminium dish)에 올리고 담수로 세척 후 60 ℃에서 6시간 건조 후 마이크로 분석저울(XPE26DR, METTLER TOLEDO, 미국)을 이용하여 자어 마리당 2 ㎍ 단위로 나타내었다.Experiments were carried out under natural lighting (0-5000 lx, L: D = 16: 8) and before and after the experiment, the animals were placed under a microscope (Olympus CH40, Olympus Corporation, Japan). After photographing, the size was measured to 0.01 ㎜ using ImageJ program (NIH, USA), and 3 animals were placed on an aluminum dish, washed with fresh water, dried at 60 ℃ for 6 hours, XPE26DR, METTLER TOLEDO, USA).
모든 자어의 사육은 5 ℃에서 31일 동안 3회 반복실험하였고 자어의 먹이는 S-type 로티퍼(Brachionus rotundiformis)를 공급하였으며, 자어 부화 후 사육일수(days after hatching, DAH)(3~6, 7~10, 11~15, 16~30 DAH)에 따른 자어의 운동력을 고려하여 로티퍼의 공급밀도(30, 20, 10, 20 개체/㎖)를 달리하여 공급하였다.Breeding of all the larvae was repeated 3 times for 31 days at 5 ° C, and the feeding of S-type rotifer ( Brachionus After rotundiformis) a was supplied, the larvae hatching Breeding Days (days after hatching, DAH) ( 3 ~ 6, 7 ~ 10, 11 ~ 15, 16 ~ 30 DAH) in consideration of the locomotion of the larvae fed density of rotifers in accordance with (30 , 20, 10, 20 individuals / ml).
로티퍼는 수온 28 ℃에서 담수산 농축 클로렐라(chlorella, 대상, 한국)로 연속배양하고, 자어 공급 2시간 전에 2000 개체/㎖의 밀도에서 영양강화제(Aquarich, AquaNet Co., 한국)로 20 ℃, 100 % 해수에서 지질 영양강화하여 자어에 1일 2회(09:00, 17:00) 급여하였다.The rotifers were continuously cultured in
그린워터는 식물플랑크톤이 어류의 사육수조에 인위적으로 공급되어 있는 상태를 말하며, 실험에 사용된 그린워터용 조류(algae)는 녹조류인 난노크로롭시스 오큘라타(Nannochloropsis oculata, LIMS-PS-0046), 황갈편모류인 아이소크라이시스 갈바나(Isochrysis galbana, LIMS-PS-0012) 및 규조류인 파이오덱틸룸 트리코뉴툼(Phaeodactylum tricornutum, LIMS-PS-0014)을 250 ㎖ 삼각 플라스크(triangle-flask, medium 200 ㎖)에 20 ℃, 2500 lx에서 콘웨이 배지(Conway medium, Walne, 1966)로 배양하였다.Green water refers to a state in which phytoplankton is artificially supplied to fish breeding tanks. The green water algae used in the experiment is Nannochloropsis oculata (LIMS-PS-0046 ), Isochrysis galvana ( Isochrysis galbana , LIMS-PS-0012) And diatoms in payioh deck tilrum tricot in nyutum (Phaeodactylum tricornutum, LIMS-PS- 0014) to 250 ㎖ Erlenmeyer flask Conway medium at 20 ℃, 2500 lx to (triangle-flask, medium 200 ㎖ ) (Conway medium, Walne, 1966) Lt; / RTI >
각 조류는 1개의 플라스크에 매일 접종하여 총 7개의 플라스크를 사용하였고 배양 개시 5~7일 된 조류를 그린워터용으로 공급하였으며, 공급시 사육수에서의 조류 농도는 미리 계수하여 5~10×104 cell/㎖의 밀도를 1일 1회 사육수조의 농도에 비례하여 공급하였다.Each algae was inoculated daily into a single flask and used in a total of 7 flasks. The algae were fed for 5 to 7 days at the start of the culture. The algae concentration in the feed water at the time of feeding was previously estimated to be 5 to 10 × 10 The density of 4 cells / ml was supplied once a day in proportion to the concentration of the feeding tank.
자어의 소화효소 분석을 위한 시료는 31 DAH 아침 먹이를 공급하기 전 수조별로 자어를 5마리씩 튜브(tube)에 담고 차가운 얼음 담수(chilled ice fresh water)로 세척한 후 물을 제거하고 분석시까지 -70 ℃ 냉동고에 보관하였다.For the analysis of digestive enzymes of the larvae, samples were taken in a tube (5 tubes each), washed with chilled ice fresh water before the feeding of 31 DAH morning food, 70 < [deg.] ≫ C freezer.
α-아밀라아제(α-amylase, EC 3.2.1.1), 트립신(trypsin, EC 3.4.21.4) 및 TG-리파아제(TG-lipase, EC 3.1.1.3)의 활성측정은 각각 가용성 전분(soluble starch), BAPNA(α-N-Benzoyl-L-arginine p-nitroanilide hydrochlorid), PNPP(p-nitrophenyl palmitate)를 기질로 하는 Bernfeld(1955), Erlanger et al.(1961) and Hung et al.(2003)의 방법을 따라 U/larvae와 가용성 단백질(soluble protein)을 Lowry et al.(1951)의 방법으로 측정하여 U/mg protein으로 나타내었다.Activity measurements of α-amylase (EC 3.2.1.1), trypsin (EC 3.4.21.4) and TG-lipase (TG-lipase, EC 3.1.1.3) were performed using soluble starch, BAPNA (α-N-Benzoyl-L -arginine p -nitroanilide hydrochlorid), Bernfeld (1955) for the PNPP (p -nitrophenyl palmitate) as a substrate, Erlanger et al. (1961) and Hung et al. (2003) how a U / larvae and soluble protein were measured by the method of Lowry et al. (1951) and expressed as U / mg protein.
지방산 분석을 위하여 영양강화 후의 로티퍼, 그린워터용 식물플랑크톤(phytoplankton) 및 31 DAH 자어를 차가운 얼음 담수로 세척한 후 동결건조하였으며, 이들의 지방산 함량을 총 지방산 피크(peak)의 백분율로 표시하여 표 3(영양강화 로티퍼와 그린워터용 식물플랑크톤) 및 표 5(그린워터로 사육한 명태 자어)에 나타내었고 자어의 성장과 생존율을 표 4에 나타내었으며, 로티퍼와 그린워터로 사육한 명태 자어의 소화효소 활성을 표 6에 표시하였다.For the analysis of fatty acids, the rotifers after nutrition fortification, phytoplankton for green water and 31 DAH fish were washed with cold ice water and lyophilized. Their fatty acid contents were expressed as percentage of total fatty acid peak 3 (vegetation strengthening rotifer and phytoplankton for green water) and Table 5 (polished shrimp raised by green water), and the growth and survival rate of the shrimp are shown in Table 4, and the digestion of the pollock shrimp reared in rotifers and green water Enzyme activity is shown in Table 6.
(㎜)body length
(Mm)
(㎍ dry matter)body weight
(Dry dry matter)
(43.8±10.88b)* 678.0 ± 150.23 ab
(43.8 ± 10.88 b ) *
(24.9±0.47a)526.0 + - 107.01 a
(24.9 + 0.47 a )
(37.0±4.50b)687.9 ± 139.71 ab
(37.0 + - 4.50 b )
(44.9±2.26b)1145.0 + - 354.74 b
(44.9 ± 2.26 b )
(0.33±0.192)4.90 ± 1.073
(0.33 + 0.192)
(0.40±0.101)8.65 ± 1.008 b
(0.40 + - 0.101)
(0.35±0.032)6.49 + 0.580 a
(0.35 + 0.032)
(0.36±0.116)9.34 ± 1.602 b
(0.36 + 0.116)
(2.4±0.07a)37.9 ± 8.35 a
(2.4 ± 0.07 a )
(6.3±0.05b)133.8 ± 30.72 b
(6.3 ± 0.05 b )
2.6±0.05a 47.5 ± 2.96 a
2.6 ± 0.05 a
(2.5±0.29a)62.8 ± 22.05 a
(2.5 ± 0.29 a )
(㎍/larvae)Protein
(/ / Larvae)
상기 표 3을 보면, 먹이로 사용된 영양강화 로티퍼(Non)는 6.5±0.43 %의 DHA(C22:6n3) 함량을 보였고 전체 지방산 중 HUFA는 67.2±2.69 %이었으나, 그린워터로 사용된 3종류의 식물플랑크톤에서 아이소크라이시스 갈바나는 EPA(eicosapentaenoic acid, C20:5n3)와 DHA가 각각 1.7±0.19 %와 17.7±1.40 %이고 파이오덱틸룸 트리코뉴툼의 경우 각각 11.6±0.73 %와 0.7±0.28 %로 DHA 함량이 낮았으며, 난노크로롭시스 오큘라타의 경우 DHA는 전혀 검출이 되지 않고 EPA만 22.1±3.41 %를 보유하였다.As shown in Table 3, the nutrient-enriched rotifers (Non) used for food showed 6.5 ± 0.43% DHA (C22: 6n3) and the total fatty acids were 67.2 ± 2.69% In the phytoplankton, the concentrations of isocrysis galvanic EPA (eicosapentaenoic acid, C20: 5n3) and DHA were 1.7 ± 0.19% and 17.7 ± 1.40%, respectively, and that of Pseudomonas tricornitum was 11.6 ± 0.73% and 0.7 ± 0.28% DHA was not detected at all in the case of egg yolk lobocis oculi, and EPA alone had 22.1 ± 3.41%.
그린워터 종류별로 자어의 체장은 상기 표 4의 무처리구(Non)에서 유의적으로 낮은 성장을 보였으나(P<0.05) 그린워터 실험구에서는 7.14-7.80 ㎜로 실험구 간에 성장의 차이를 보이지 않았으며(P>0.05), 체중 성장은 아이소크라이시스 갈바나 그린워터 실험구에서 7.33±0.582 ㎍으로 높았으나 다른 그린워터 실험구들과 유의적인 차이 없이 무처리구보다 높았다(P<0.05).The length of the larvae of green water was significantly lower than that of non-treated water of Table 4 (P <0.05), but it was 7.14-7.80 ㎜ in green water, (P> 0.05). Body weight gain was higher in Isocrysis galvanic green water group than in other green water groups (7.33 ± 0.582 ㎍) (P <0.05).
반면에, 생존율은 난노크로롭시스 오큘라타에서 91.3±9.45 %로 유의적으로 가장 높은 생존율을 보였고(P<0.05), 파이오덱틸룸 트리코뉴툼 실험구에서는 대조구의 46.0±10.54 %보다 낮은 29.7±12.58 %의 낮은 생존율을 보였다(P>0.05).On the other hand, the survival rate was significantly higher (91.3 ± 9.45%) in the nanocholesteric oocyte (P <0.05), and the Pseudodylium trichomonatum The survival rate of the experimental group was 29.7 ± 12.58% lower than that of the control (46.0 ± 10.54%) (P> 0.05).
상기 표 5에서, 31일간 사육한 명태 자어의 지방산 조성은 체중 성장이 양호했던 아이소크라이시스 갈바나와 난노크로롭시스 오큘라타에서 특히 DHA 함량이 11.8 % 이상으로 대조구(Non)의 5.8 %와 파이오덱틸룸 트리코뉴툼의 0 %와 대조적이었고, 자어 지방산 불포화도(larval fatty acid unsaturated index, UI)에서 DHA 함량이 높았던 아이소크라이시스 갈바나와 난노크로롭시스 오큘라타 실험구에서 130.1 이상의 수치가 측정되어 대조구와 파이오덱틸룸 트리코뉴툼의 69.2, 37.6과 유의적인 차이를 보였다(P<0.05).In the above Table 5, the fatty acid composition of the radish sprouts raised for 31 days showed that DHA content was higher than 11.8% in Isoproterozoic acid galactomannans with good weight gain and 5.8% of the control (Non) In contrast to 0% of tilum tricornitum, the iso-crys- tis galvannanum nucrolo- sis oculata, which had high DHA content in the larval fatty acid unsaturated index (UI), was measured to be higher than 130.1. Pythodeilum tricornitum showed a significant difference from 69.2 and 37.6 (P <0.05).
소화효소 활성은 표 6과 같이 아밀라아제 활성이 난노크로롭시스 오큘라타에서 유의적으로 높았고(P<0.05), 트립신 활성은 아이소크라이시스 갈바나와 난노크로롭시스 오큘라타에서 높았으나 리파아제 활성은 아이소크라이시스 갈바나에서 유의적으로 높게 나타났다(P<0.05).As shown in Table 6, digestive enzyme activity was significantly higher (P <0.05) in nocrolobacillus oculata than in amylase activity, and trypsin activity was higher in isocrysis galvannanum nucroloxys oculata, Were significantly higher in Crysis Galvana (P <0.05).
따라서 자어의 성장과 생존율을 향상시키기 위하여 먹이로서 지질 영양강화 로티퍼와 함께 난노크로롭시스 오큘라타 또는 아이소크라이시스 갈바나를 더 공급하는 것이 바람직함을 알 수 있다.Therefore, it is desirable to supply nocrolobate osculata or iso crysis galvanase together with a lipid-supplementation rotifer as a food in order to improve the growth and survival rate of the larvae.
<2-3> 신규 영양강화제의 제조<2-3> Preparation of new nutritional fortification agent
종래의 자치어 사료 급여는 초기 로티퍼와 알테미아를 공급하는 단계에서 로티퍼와 알테미아가 가지고 있는 영양으로는 자어 성장에 부족하여 DHA, 단백질 등과 같은 성분을 위주로 로티퍼와 알테미아를 배양/부화 후 2~24시간 동안 영양강화제 희석액에 보관하였다가 세척하여 자치어에 공급하는 방식을 택하고 있다.The conventional feeding of mackerel in the feeding of the initial rotifer and the alfamia is not enough for the nutrition of the rotifers and the alfamia, and the growth of the rotifers and the alfamia is promoted for 2 ~ 24 hours It is stored in diluent of nutrient enrichment agent, and it is washed and supplied to mackerel.
이러한 종래의 영양강화제는 주로 시조카이트륨(Schizochytrium sp.)으로 DHA 위주의 영양을 강화시켜주었으나 한해성 어류의 경우 EPA 요구량이 높은 것으로 알려져 있기 때문에 EPA를 별도로 보충해줄 필요가 있으며, 이에 본 발명에서는 종래의 상용 영양강화제 대신에 하기 표 7과 같은 배합비로 한해성 어류용 EPA 강화 신규 영양강화제를 개발하였다.These conventional nutritional enhancers strengthen DHA-based nutrition mainly with Schizochytrium sp., But it is necessary to separately supplement EPA because it is known that the marine fish have high EPA requirement, , A new nutritional fortification agent fortified with EPA for fish was developed at a blending ratio shown in Table 7 instead of the conventional nutritional fortifier.
시조카이트륨, 복합효소제 및 EPA 오일을 기본 원료로 하고 아스타잔틴(astaxanthin), 타우린(taurine), 아연(zinc), 클로렐라 분말을 보충제로 사용하였으며, 복합효소제는 아밀라아제, 트립신, 리파아제 등 탄수화물, 단백질, 지방을 분해하는 효소가 복합적으로 혼합된 분말이고 EPA 오일은 연어, 송어, 고등어, 청어, 멸치 등의 어류에서 추출한 정제기름으로서 EPA 함량이 75 % 이상으로 높은 어유(fish oil)이며, EPA 오일을 유화시키기 위해 HLB(hydrophile-lipophile balance) 값이 큰 유화제와 HLB 값이 작은 유화제를 함께 사용하였다.A mixture of astaxanthin, taurine, zinc and chlorella powder was used as a basic raw material, and the complex enzyme was a mixture of carbohydrates such as amylase, trypsin and lipase, Protein and fat-degrading enzymes. EPA oil is a refined oil extracted from fish such as salmon, trout, mackerel, herring and anchovy and has a high EPA content of more than 75% In order to emulsify the oil, an emulsifier having a large HLB (hydrophile-lipophile balance) value and an emulsifier having a small HLB value were used together.
종래의 시조카이트륨을 주원료로 제조된 Aqua-RichTM(아쿠아넷, 한국) 영양강화제를 대조구로 하여, 상기 표 7의 본 발명에 따른 EPA 강화 영양강화제로 로티퍼를 영양강화한 후 명태의 부화 자어에 급여하여 신규 영양강화제의 EPA를 로티퍼를 통하여 부화 자어에 공급하였으며, 1차 실험(배합비-1차)은 부화 후 6일차까지 진행하였고 2차 실험(배합비-2차)은 부화 후 7일까지 먹이를 공급하여 성장률을 확인하였다.The nutrient enrichment agent of the EPA fortified nutritional fortifier according to the present invention shown in Table 7 above was used as a control, using Aqua-Rich TM (Aquanet, Korea) The EPA of the new nutritional enhancer was supplied to the hatching larvae through the rotifers. The first experiment (compounding ratio -1) was carried out until the 6th day after hatching. The second experiment (compounding ratio -2) And the growth rate was confirmed.
부화 후 자어의 크기는 4.49±0.347 ㎜에서 20일간 6.02±0.363 ㎜까지 성장하였는데, 본 발명의 신규 영양강화제(new)를 급여한 자어는 부화 후 6일 및 7일에 4.94±0.132 ㎜, 4.96±0.225 ㎜로 성장하여 종래의 영양강화제(aqua)를 급여한 자어의 4.87±0.111 ㎜, 4.55±0.253 ㎜보다 높은 성장을 보였다(도 13).The size of the larvae after hatching grew from 4.49 ± 0.347 ㎜ to 6.02 ± 0.363 ㎜ for 20 days. The larvae fed with the new nutritional fortifier (new) of the present invention showed 4.94 ± 0.132 ㎜ and 4.96 ± 0.12 ㎜ at 6 and 7 days after hatching, 0.225 ㎜ and showed growth higher than 4.87 ą 0.111 ㎜ and 4.55 짹 0.253 ㎜ of the larvae fed with conventional nutritional fortifier (aqua) (Fig. 13).
이와 같이, 신규 영양강화제는 종래의 영양강화제에 비하여 자어의 체장 성장에 효과가 있고 회귀분석 결과에서도 높은 체장 성장값을 갖는 것으로 분석되었다.In this way, the new nutritional fortification agent has an effect on the growth of the body of the cod and has a higher growth rate than the conventional nutritional fortification agent.
<실시예 3> 체강 내 발생하는 기포(gas syndrome)로 인한 폐사Example 3: Mortality due to gas syndrome in the body cavity
<3-1> 사육 수온 변화에 따른 체강 내 가스 발생 비율 저감<3-1> Reduction of the incidence of gas in the body cavity due to changes in water temperature
사육과정에서 기포가 발생한 개체들을 상대로 정상개체와 비교하였으며, 이를 위하여 조직학적으로 부레와의 상관관계를 확인하였다.The bubbles were compared with the normal individuals in the breeding process, and the correlation between the bubbles was confirmed histologically.
조직학적으로 정상개체의 부레막이 척추골과 신장(kidney) 쪽에 있는 것이 확인되었고, 기포 발생 증상을 보이는 개체에서도 부레막이 같은 위치에 있으나 체강 내 공간이 만들어진 것이 확인되었으며, 이는 부레의 부풀림에 의한 것이 아닌 체강 내 가스 발생에 의한 것으로 확인되었고 발생한 가스는 자어의 척추 만곡현상을 유발하여 자어의 외형을 변화시키며, 최종적으로 생식공으로 배출되는 것으로 추정된다(도 14).Histologically, it was confirmed that the biceps of the normal subjects were located on the vertebra and kidney side, and in the bubble-forming individuals, the biceps were located at the same position but the cavity was formed, It was confirmed that the gas was caused by the gas in the body cavity, and the generated gas caused the curvature of the spinal cord to change the external shape of the body, and finally it was estimated to be discharged to the reproductive tract (Fig. 14).
또한, 사육수온에 따른 기포 발생 증상을 분석하였으며, 수온 4.5 ℃, 6.5 ℃, 9.5 ℃ 및 11.5 ℃으로 구분하여 각 수온대별로 매일 표층에 뜨는 기포 발생 증상을 나타내는 개체들을 수거하면서 계수하였고 기포 발생 없이 폐사한 개체들은 다른 원인에 의한 것으로 판단되어 계수하지 않았다.In addition, the symptoms of bubbles were analyzed according to the temperature of the rearing water. The water temperature was 4.5 ℃, 6.5 ℃, 9.5 ℃ and 11.5 ℃. The dead individuals were not counted because they were judged to be due to other causes.
기포 발생 증상은 사육수온에 따라 다른 경향을 보였는데 4.5 ℃에서는 부화 후 5일째부터 체강 내 기포가 발생하였고 8일째와 25일째 기포가 대량으로 발생하여 부화 후 27일째 전량 폐사하였으며, 사육수온 6.5 ℃에서는 4.5 ℃와 유사한 경향을 보이면서 기포 발생 개체수가 좀 더 적었다.At 4.5 ℃, air bubbles were formed on the 5th day after hatching. On the 8th day and 25th day, large amounts of air bubbles were formed and died on the 27th day after hatching. Showed a tendency similar to 4.5 ℃ and the number of bubbles was smaller.
9.5 ℃에서는 기포발생 경향이 달라서 초기 20일 이내에는 극소량 발생하다가 30일 전후에 약 5 % 가량 기포가 발생하는 것으로 조사되었고 11.5 ℃에서는 50일째까지 기포 발생을 하지 않다가 56일경 처음 발생하여 가장 적은 폐사 개체수를 보였다.At 9.5 ℃, the tendency of bubble formation was very small, and it was observed that about 5% of the bubbles were generated within 30 days after the initial 20 days. At 11.5 ℃, bubbles were not formed until 50 days, We showed the number of our dead.
사육수온에 따른 체강 기포 발생은 기간별 순차적으로 진행되었으며, 4.5 ℃에서는 전량 폐사하였고 6.5 ℃에서도 최소 67.5 %에서 최대 93.5 %로 체강 내 기포가 발생하였으나 9.5 ℃ 이상의 사육수온에서는 50 % 이하의 기포 발생 개체가 출현하였고 특히 11.5 ℃에서는 최소 10 %, 최대 40 %의 낮은 기포 발생률을 나타내었다(도 15).Bacterial bubbles occurred at a temperature of 4.5 ℃, and at the temperature of 6.5 ℃, air bubbles were formed from at least 67.5% to a maximum of 93.5%. In case of temperature above 9.5 ℃, , And a low bubble generation rate of at least 10% and a maximum of 40% at 11.5 ° C (FIG. 15).
상기 결과는 사육수온뿐만 아니라 수질이나 수중 용존가스 등 다른 원인에 의해서도 영향을 받는 것으로 추정되므로, 사육수온 관리와 함께 수조의 환경 관리를 통하여 자어의 기포 발생 증상을 감소시킬 수 있을 것으로 판단된다.These results are considered to be influenced not only by the temperature of the reared water but also by other causes such as water quality and dissolved water in the water.
<3-2> 중금속 양이온 처리에 의한 가스 발생 저감<3-2> Reduction of gas generation by heavy metal cation treatment
어체의 주성분은 단백질이고 단백질은 미생물의 작용으로 분해되기 쉬우며 단백질 분해에 의해 체강 내 가스 발생 가능성이 크므로, 본 발명에서는 유기물을 발효 또는 분해하는 세균의 활동을 억제하는 효능이 있는 금속성 구리이온을 이용하여 자어의 가스 발생을 억제하고자 한다.Since the main component of the fish body is protein, the protein is easily decomposed by the action of microorganisms, and the possibility of generating gas in the body cavity due to proteolysis is high. Therefore, in the present invention, metallic copper ions having the effect of inhibiting the activity of bacteria that ferment or decompose organic matter To suppress the generation of gas in the ears.
그런데 금속성 양이온 구리성분은 모든 생명체에게 필수적인 원소이고 생체독성은 거의 없으나 고농도로 존재하면 세포대사(cell metabolism)를 억제하고 세포단백질 또는 효소를 손상시켜 생체에 독성으로 작용하므로 구리이온 농도를 적정수준 이하로 관리하여야 한다.However, metallic cationic copper is an essential element in all living organisms, and it has little bio-toxicity. However, if it is present at a high concentration, it inhibits cell metabolism and damages cellular proteins or enzymes and acts toxic to living organisms. .
따라서 자어의 체강 내에서 발생하는 가스를 억제하기 위하여 구리이온(Cu+, Cu++) 농도를 일시적으로 높여주어 기포 발생을 억제한 후 점차 낮추어 주는 방법이 바람직하고 이를 위하여 하기와 같이 구리이온에 대한 급성독성 실험과 만성독성 실험을 통해 자어에게 영향이 적은 농도를 조사하였으며, 기포 발생 억제 실험은 in situ로 진행하였다.Therefore, it is desirable to temporarily increase the concentration of copper ions (Cu + , Cu ++ ) in order to suppress the gas generated in the body cavity of the jellyfish, thereby suppressing the occurrence of bubbles and gradually lowering the concentration of copper ions. The acute toxicity test and the chronic toxicity test were conducted to investigate the effect of low concentration on the larvae and the inhibition of bubble formation proceeded in situ.
1) 명태 자어를 대상으로 구리이온에 대한 고농도 급성독성 실험을 하였으며, 실험을 위한 구리이온 농도는 황산구리(Ⅱ)(CuSO4, 구리 양이온)로 양을 조절하였고 구리이온 농도 0~20 ㎍/ℓ에서 24시간과 48시간의 폐사경향을 파악하여 반수치사농도(LC50)를 계산하였으며, 황산구리 농도는 사육수의 부피를 기준으로 질량으로 나타내었다(w/v, 이하 동일).1) The acute toxicity test for copper ions was carried out at the high concentration of copper ions. The copper ion concentration was controlled by copper sulfate (Ⅱ) (CuSO 4 , copper cation) and the copper ion concentration was 0 ~ 20 ㎍ / ℓ (LC 50 ), and the concentration of copper sulfate was expressed as mass based on the volume of the reared water (w / v, the same shall apply hereinafter).
2) 명태 자어를 대상으로 구리이온에 대한 저농도 만성독성 실험을 하였으며, 설정된 저영향농도인 0~4.0 ㎍/ℓ의 농도에서 5일간 노출 실험을 통해 자어의 폐사 경향과 LC50을 구한 다음 이를 바탕으로 각 농도에 다른 일수별 LC50을 구하여 최종실험에 적용할 농도를 정하였다.2) Low - level chronic toxicity test for copper ion was carried out on pollinated mackerel fish, and the mortality and LC 50 were determined by exposure experiment for 5 days at a set concentration of 0 ~ 4.0 ㎍ / ℓ. to obtain a different number of days by LC 50 was determined for each concentration of the concentration to be applied to the final experiment.
3) 상기 급성독성과 만성독성 실험을 바탕으로 하는 In situ 방법으로서, 사육 현장에서의 적용은 2가지 방법을 택하였으며, 첫번째 실험은 무처리 대조구를 포함하여 부화 직전 저농도(1 ㎍/ℓ) 1회 처리, 부화 직전 고농도(5 ㎍/ℓ) 1회 처리 및 부화 직전부터 저농도(1 ㎍/ℓ)를 5일 동안 1일 1회 처리 실험구로 설정하였으며, 실험은 각각 250 ℓ의 사육수조(사육수 200 ℓ)에 200개씩의 수정란을 수용하고 3회 반복으로 13일 후의 수용 수정란 대비 기포 발생 개체수를 계수하여 결과를 도출하고, 먹이공급은 다른 실험들과 같은 방법으로 진행하였다.3) In situ method based on the above acute toxicity and chronic toxicity test. Two methods were adopted for the application in the field of breeding. The first experiment was performed with the low concentration (1 ㎍ / ℓ) immediately before hatching (5 ㎍ / ℓ) treatment immediately before hatching and low concentration (1 ㎍ / ℓ) from immediately before hatching were performed for 5 days once a day. Experiments were carried out in 250 ℓ raising tanks 200 ℓ), 200 embryos were housed and the number of bubble - forming population was counted against the number of embryos after 13 days in three replicates, and the results were derived. Feeding was carried out in the same manner as other experiments.
두번째 실험은 25000~35000개의 수정란을 6톤 수조에 수용하고 저농도의 구리이온 1 ㎍/ℓ를 부화 직전 1회 처리, 부화 후 10일째 1회 처리 및 부화 직전과 부화 후 매 10일 간격으로 처리하여 30일간의 사육과정에서 생존한 개체수를 바탕으로 생존율을 계산하여 결과를 도출하였다.In the second experiment, 25000 ~ 35000 embryos were housed in a 6-ton water tank, treated with 1 ㎍ / ℓ of low-concentration copper ions one time before hatching, one time at 10 days after hatching and every 10 days after hatching and incubation Survival rates were calculated on the basis of the survival rate in 30 - day rearing.
상기 1)의 고농도 급성독성 실험은 만성독성 실험에서의 폐사율에 영향을 받지 않는 농도를 산출하기 위한 것으로서, 구리이온 0~20 ㎍/ℓ의 농도로 실험한 결과 1.0 ppb(㎍/ℓ)에서는 48시간 누적 폐사율이 0 %로 측정되어 자어의 생존에 영향을 주지 않았고 5 ppb 실험구에서는 24시간 경과시 1 % 미만의 영향을 받았으나 48시간 경과시에는 20 % 정도 영향을 미쳤으며, 20 ppb 실험구에서는 24시간 경과시 66.7 %의 폐사가 확인되었다(도 16).The acute toxicity test of 1) above was conducted to calculate the concentration which is not influenced by the mortality in the chronic toxicity test. As a result, the concentration of copper ion of 0 ~ 20 ㎍ / ℓ was found to be 48 The cumulative mortality rate was 0%, which did not affect the survival of the larvae. In the 5 ppb experimental group, the effect was less than 1% at 24 hours, but at 48 hours, the effect was 20% , 66.7% of the dead plants were confirmed after 24 hours (FIG. 16).
결과적으로 24시간 LC50은 21.47 ppb이고 48시간 LC50의 경우 5.13 ppb로 급격히 낮아져(도 17), 만성독성 실험은 5 ppb 이내의 범위로 설정하여 진행하였다.As a result, the 24-hour LC 50 was 21.47 ppb and the 48-hour LC 50 rapidly decreased to 5.13 ppb (FIG. 17), and the chronic toxicity test was conducted within the range of 5 ppb.
상기 2)의 저농도 급성독성 실험은 0.5-4.0 ppb 농도의 구리이온 노출에 따른 일수별 누적 생존율을 계수하였는데, 0.5 ppb 처리에 따른 부화 자어는 2일째 생존율이 감소하는 경향은 보였으나 이후 93.3 %의 높은 생존율을 유지하였고, 1.0 ppb 실험구에서는 노출 1일째부터 감소하였으나 5일 이후에 86.7 %의 높은 생존율을 보였으며, 2.0 ppb 실험구에서도 노출 2일째부터 생존율이 감소하여 5일째에는 73.3 %의 생존율을 보이고 가장 높은 농도였던 4.0 ppb 실험구에서는 5일째까지 60.0 %의 생존율을 보였다(도 18)The low-concentration acute toxicity test in 2) above counted the cumulative survival rate by days of exposure to copper ions of 0.5-4.0 ppb. After 0.5 ppb treatment, the survival rate of the hatching larvae tended to decrease at 2 days, but 93.3% In the 1.0 ppb experimental group, the survival rate decreased from
금속성 양이온 노출 일수에 따른 LC50은 2일째 20.34 ppb(P=0.225)에서 5일째 8.28 ppb(P=0.003)까지 낮아지는 경향을 보였고(도 19), 금속성 양이온 노출 농도에 따른 LC50은 0.5 ppb에서 21.83일(P=0.07)로 길게 나왔고 1.0 ppb에서는 10.17일(P=0.00)로 나타나서 1.0 ppb에서는 노출된 지 10일 이상에서 생존할 수 있는 것으로 조사되었으며, 구리이온 4.0 ppb에서 6일 이상의 노출은 50 % 이하의 생존율이 예상되기 때문에 피해야 할 것으로 판단된다(도 20).LC 50 of the metallic cation exposure days is
상기 3)의 In situ 실험에서는 무처리구인 대조구에서는 13일 동안 36.0±1.80 %의 기포 증상 개체가 발생하였고 부화 직전 저농도(1 ppb) 1회 처리구에서는 27.7±3.33 %로 나타났으나 저농도(1 ppb) 5회 처리와 부화 직전 고농도(5 ppb) 1회 처리 실험구에서는 각각 8.7±2.57 %와 9.2±2.47 %로 유의적으로 낮은 기포 증상 개체 발생비율을 보였다(도 21).In the in situ experiment of the above 3), 36.0 ± 1.80% of bubble symptoms occurred in the untreated control group for 13 days and 27.7 ± 3.33% in the low treatment group (1 ppb) (5 ppb) and 5.7% (9.2 ± 2.47%), respectively (FIG. 21).
또한, 6톤 수조에서 25000~35000개의 수정란을 수용하고 금속성 양이온을 처리하는 실험은 부화 직전 1회 처리한 실험구의 경우(Cu-0) 0.6 % 이상의 생존율을 보였고 부화 직전과 부화 후 매 10일 간격으로 처리하였을 경우(Cu-Cu) 1.3 %까지 높아지는 생존율을 확인하였으나, 부화 후 10일째 1회 처리한 경우(0-Cu)는 0.2 %의 매우 낮은 생존율을 보였으며, 이때의 사육수온은 6.5~7.0 ℃이었다(도 22).Experiments to treat 25,000 ~ 35,000 fertilized eggs in a 6-ton water tank and to treat metallic cations showed a survival rate of 0.6% or more (Cu-0) in the experimental group treated once before hatching, (Cu-Cu) increased to 1.3%. However, the survival rate was 0.2% (0-Cu) when treated for 10 days after hatching, 7.0 DEG C (Fig. 22).
상기에서 살펴본 바와 같이, 명태와 같은 한해성 어류의 종묘생산을 위해서는 초기 영양요구에 맞는 먹이를 공급하고 수정란부터 치어기까지 대량 폐사가 발생하는 원인 파악과 이에 대한 해결방안 마련이 매우 중요하다.As described above, it is very important to supply the food suitable for the initial nutritional needs and to find out the cause of the mass death from fertilized eggs to fertilization and to find a solution for the production of the seeds of the marine fish such as pollack.
실시예 1에서는 용존산소량을 10 ppm 이상으로 인위적으로 높여서 부화 후 5일 이내에 오는 초기 폐사는 50 % 이상 막을 수 있었고, 실시예 2에서는 자어의 영양강화 방식을 개선하여 영양요구를 충족시킴으로써 폐사를 줄일 수 있었다.In Example 1, the amount of dissolved oxygen was artificially increased to 10 ppm or more, so that the initial mortality within 5 days after hatching could be blocked by 50% or more. In Example 2, I could.
단백질의 아미노산은 대부분 세포 내 핵산 전구물질로서 필수아미노산에서 발린(valine), 아이소류신(isoleucine), 류신(leucine)의 경우 난황흡수와 함께 급격히 감소하였고, 지질의 지방산은 자어의 성장에 따라 대부분 함량이 낮아지고 특히 EPA 함량의 감소폭이 가장 크게 나타난다.Protein amino acids were mostly intracellular nucleic acid precursors. In the essential amino acids, valine, isoleucine and leucine decreased rapidly with the absorption of yolk. And the decrease in EPA content is the largest.
일반적인 온수성 어류의 경우 DHA 함량의 감소가 가장 커서 온수성 어류용 영양강화제는 DHA 성분 강화에 중점을 두고 있으나 한해성 어류는 낮아지는 DHA뿐만 아니라 EPA도 적극적으로 보충할 수 있는 영양강화제를 공급할 필요가 있으며, 이에 실시예 2에서 EPA 함량이 높은 신규 영양강화제를 개발하여 영양의 불균형에서 오는 폐사 또는 저성장을 예방하는 방법을 모색하였으며, 이와 함께 신규 영양강화제 제조시 DHA를 보충해 주는 원료인 시조카이트륨의 배합비율을 좀 더 높여주어 체장 성장뿐만 아니라 생존율도 함께 향상시킬 수 있을 것으로 판단된다.In the case of normal warm water fish species, the decrease of DHA content is the greatest, so the nutrient fortification agent for hot water fishes is focused on strengthening the DHA component, but it is necessary to supply the nutrient strengthening agent which can positively supplement EPA as well as low DHA , And a new nutritional enhancer having a high EPA content was developed in Example 2 to find a method of preventing mortality or low growth from nutrient imbalance. In addition, a raw material for supplementing DHA It is considered that the yttrium compounding ratio can be increased to improve not only the growth of the body but also the survival rate.
실시예 3에서는 저온에서 체강 내 기포가 발생하므로 자어가 생존할 수 있는 수온 범위 내에서 고수온을 유지하고 사육수에 구리이온을 첨가하여 기포 발생 증상에 따른 폐사개체 비율을 줄일 수 있었다.In Example 3, bubbles were formed in the body cavity at a low temperature, so that a high water temperature was maintained within the temperature range at which the frogs could survive, and copper ions were added to the breeding water, thereby reducing the proportion of dead animals according to the symptoms of bubbles.
상기와 같이, 본 발명의 한해성 어류의 부화 자어 생존율 향상방법은 종묘생산 과정에서 가장 중요한 시기인 첫 먹이 공급시기의 폐사와 기포 발생에 의한 대량 폐사를 방지할 수 있으며, 영양강화제의 DHA, EPA 함량을 높이고 사육수온을 적정하게 관리하며 사육수의 중금속 양이온 처리에 의한 기포 발생 억제 효과를 통하여 한해성 어류 종묘의 높은 생존율을 달성할 수 있다.As described above, the method of improving the hatching survival rate of marine fishes of the present invention can prevent mass mortality caused by dead and bubbles during the first feeding period, which is the most important period in the seedling production process, The high survival rate of the marine fish seedlings can be achieved by increasing the content, controlling the temperature of the rearing water, and suppressing the bubble formation by the heavy metal cation treatment of the rearing water.
Claims (10)
상기 수정란을 수온 4.5~11.0 ℃에서 부화시키는 단계;
상기 부화 후 수온을 7~13 ℃로 유지하면서 자어에 EPA 향상 지질 영양강화 로티퍼를 공급하는 단계; 및
사육수온을 점차 상승시켜 부화 후 150일째에 7~20 ℃로 유지하는 단계:를 포함하며,
상기 부화 전후의 사육수에 금속성 구리이온을 0.5~5 ppb의 농도로 첨가하고,
상기 영양강화 로티퍼는 시조카이트륨 5~15 중량%, 복합효소제 3~7 중량%, EPA 오일 0.5~5.0 중량%, 클로렐라 분말 0.1~3.0 중량%, 타우린 0.1~3.0 중량%, 유화제 0.1~3.0 중량%, 아스타잔틴 0.05~3.00 중량%, 아연 0.005~0.050 중량% 및 잔량의 물로 이루어진 영양강화제로 영양강화된 것을 특징으로 하는 한해성 어류의 부화 자어 생존율 향상방법.Obtaining fertilized eggs by modifying mature eggs and semen of adult fishes at 4 ~ 8 ℃ in water temperature;
Hatching the embryo at a temperature of 4.5 to 11.0 占 폚;
Supplying EPA-enhanced lipid-enhanced nutrient-enriched rotifers to the frogs while maintaining the water temperature at 7 to 13 ° C after the incubation; And
Maintaining the temperature of the raising water gradually at 7 to 20 캜 for 150 days after hatching,
Metallic copper ions are added to the raising water before and after the incubation at a concentration of 0.5 to 5 ppb,
Wherein the nutrient enrichment rotifers are selected from the group consisting of 5-15% by weight of epoxidized roots, 3-7% by weight of complex enzyme, 0.5-5.0% by weight EPA oil, 0.1-3.0% by weight of chlorella powder, 0.1-3.0% by weight of taurine, Wherein the nutrient-enriched nutrient is fortified with a nutrient-enriching agent comprising 0.05% to 3.00% by weight of astaxanthin, 0.005% to 0.050% by weight of zinc and a residual amount of water.
상기 구리이온의 첨가는 부화 후 구리이온을 2~4 ppb의 농도로 첨가하고 자어가 1~5일의 기간 동안 노출되도록 하는 것을 특징으로 하는 한해성 어류의 부화 자어 생존율 향상방법.The method according to claim 1,
Wherein the copper ion is added after the hatching, wherein copper ions are added at a concentration of 2 to 4 ppb and the hare is exposed for a period of 1 to 5 days.
상기 구리이온의 첨가는 부화 전 구리이온을 3~5 ppb의 농도로 1회 첨가하는 것을 특징으로 하는 한해성 어류의 부화 자어 생존율 향상방법.The method according to claim 1,
Wherein the addition of the copper ion is performed by adding copper ions at a concentration of 3 to 5 ppb once before the hatching to the hatching fish.
상기 구리이온의 첨가는 구리이온을 0.5~1 ppb의 농도로 3~5회의 횟수로 첨가하는 것을 특징으로 하는 한해성 어류의 부화 자어 생존율 향상방법.The method according to claim 1,
Wherein the copper ions are added at a concentration of 0.5 to 1 ppb at a rate of 3 to 5 times.
상기 부화시키는 단계의 사육수에 산소를 공급하여 용존산소 10~14 ppm으로 유지하는 것을 특징으로 하는 한해성 어류의 부화 자어 생존율 향상방법.The method according to claim 1,
Wherein oxygen is supplied to the breeding water in the hatching step to maintain the dissolved oxygen at 10 to 14 ppm.
상기 로티퍼 공급시 난노크로롭시스 오큘라타 또는 아이소크라이시스 갈바나를 추가 공급하는 것을 특징으로 하는 한해성 어류의 부화 자어 생존율 향상방법.The method according to claim 1,
The method of claim 1, further comprising supplying noxious cockroach osculata or iso crysis galvane when the rotifers are supplied.
상기 EPA 오일은 어류에서 추출한 EPA 함량 75~85 %의 정제 어유인 것을 특징으로 하는 한해성 어류의 부화 자어 생존율 향상방법.The method according to claim 1,
Wherein the EPA oil is purified fish oil having an EPA content of 75 to 85% extracted from fish.
상기 유화제는 HLB 12~20의 유화제 30~50 중량%와 HLB 3~8의 유화제 50~70 중량%로 구성되는 것을 특징으로 하는 한해성 어류의 부화 자어 생존율 향상방법.The method according to claim 1,
Wherein the emulsifier comprises 30 to 50% by weight of an emulsifier of HLB 12 to 20 and 50 to 70% by weight of an emulsifier of HLB 3 to 8.
상기 영양강화 로티퍼는 수온 25~35 ℃에서 담수산 농축 클로렐라로 배양하고 자어 공급 2시간 이전에 수온 18~22℃에서 상기 영양강화제로 영양강화한 로티퍼인 것을 특징으로 하는 한해성 어류의 부화 자어 생존율 향상방법.The method according to claim 1,
Characterized in that the nutrient-enriched rotifers are cultivated with chlorella concentrated in fresh water at a temperature of 25 to 35 ° C and nutrient-enriched with the nutrient-enriching agent at a temperature of 18 to 22 ° C 2 hours before the feeding of the eel Way.
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