KR101927732B1 - ＥｒｂＢ3에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 항암제 내성 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 이를 이용한 방법 - Google Patents

ＥｒｂＢ3에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 항암제 내성 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 이를 이용한 방법 Download PDF

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Abstract

일 양상에 따른 ErbB3에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 항암제 내성 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 이를 이용하여 항암제 내성 암을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 이에 따르면, 항암제 내성을 갖거나 가질 위험이 있는 암에서 항암제 내성을 극복하여 암을 치료할 수 있다.

Description

ＥｒｂＢ3에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 항암제 내성 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 이를 이용한 방법{Pharmaceutical composition including antibody specifically binding to ErbB3 for preventing or treating drug-resistance cancer and method using the same}
수용체 티로신 키나제 ErbB-3(Receptor tyrosine kinase erbB-3: ErbB3) 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 항암제 내성 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 및 이를 이용하여 항암제 내성 암을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이다.
상피 성장 인자 수용체(epidermal growth factor receptor: EGFR 또는 ErbB) 패밀리는 수용체 티로신 키나제로서, 상피 성장 인자 수용체(epidermal growth factor receptor: EGFR)로도 알려진 ErbB1, 인간 상피 성장 인자 수용체(human epidermal growth factor receptor: HER) 2로도 알려진 ErbB2, HER3로도 알려진 ErbB3, 및 HER4로도 알려진 ErbB4를 포함한다. ErbB 패밀리는 리간드와 결합에 의해 동형이량체 또는 이형이량체를 형성하고, 마이토겐 활성화 단백질 키나제 키나제(Mitogen-activated protein kinase kinase: MAP2K, MEK, 또는 MAPKK)/마이토겐 활성화 단백질 키나제(Mitogen-activated protein kinase: MAPK) 신호전달 경로, 또는 포스포이노시티드 3-키나제(phosphoinositide 3-kinase: PI3K)/단백질 키나제 B(Protein kinase B: PKB 또는 Akt) 신호전달 경로를 활성화시킬 수 있다. ErbB 패밀리의 단백질은 암의 발생, 진행 또는 예후와 관련된 것으로 보고되었다.
ErbB1을 저해하는 약물로서 세툭시맙(cetuximab) 또는 엘로티닙(erlotinib), 및 ErbB2를 저해하는 약물로서 트라스투주맙(trastuzumab) 또는 라파티닙(lapatinib)들이 항암제로서 개발되어 시판 중이다. 그러나, 이들 항암제에 대한 무반응 환자군이 크고, 내성을 동반하는 문제가 있다.
암치료 요법에 있어서 항암제 투여는 외과적으로 암 부위를 제거한 이후에 육안으로 관찰하기 어려운 아주 작은 암 조직이나 원발성 부위에서 타 조직으로 전이된 암세포를 제거하는 중요한 치료법이다. 그러나, 암종별로 특정한 항암제에 대하여 내성을 갖거나, 또는 장기적으로 특정 항암제를 투여할 때, 암세포가 약물내성을 획득하여 항암 효과를 제대로 볼 수 없게 되는 경우가 발생할 수 있다.
따라서, ErbB3 또는 ErbB4를 특이적으로 저해하는 항체를 이용하여 항암제 내성을 예방 또는 치료하는 방법을 개발하는 것이 필요하다.
ErbB3에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 항암제 내성 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
ErbB3에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 이용하여 항암제 내성 암을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.
일 양상은 ErbB3에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 항암제 내성 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은
서열번호 61 내지 85로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
서열번호 86 내지 101로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
또는 상기 중쇄 가변 영역 및 상기 경쇄 가변 영역을 포함하는 것을 제공한다.
상기 ErbB3는 ErbB3 폴리펩티드 또는 그의 단편일 수 있다. 상기 ErbB3 폴리펩티드는 GenBank Accession No. NP_001005915의 인간 아미노산 서열, 또는 GenBank Accession No. NP_034283의 마우스 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 상기 단편은 ErbB3 폴리펩티드의 일부 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드일 수 있다. 상기 ErbB3는 상피 성장 인자 수용체(epidermal growth factor receptor: EGFR 또는 ERbB) 패밀리에 속하는 수용체 티로신 키나제이고, HER3로도 알려져 있다.
상기 ErbB3에 특이적으로 결합하는 것은 ErbB3 폴리펩티드 또는 그의 단편에 친화도를 갖는 것일 수 있다.
상기 용어 "항체(antibody)"는 용어 "면역글로불린(immunoglobulin: Ig)"과 상호교환적으로 사용된다. 완전한 항체는 2개의 전장(full length) 경쇄 및 2개의 전장 중쇄를 가지는 구조이며 각각의 경쇄는 중쇄와 이황화 결합(disulfide bond: SS-bond)으로 결합한다. 항체는 예를 들면, IgA, IgD, IgE, IgG, 또는 IgM일 수 있다. 상기 항체는 모노클론 항체 또는 폴리클론 항체일 수 있다. 상기 항체는 동물 유래 항체, 마우스-인간 키메라 항체(chimeric antibody), 인간화 항체(humanized antibody), 또는 인간 항체일 수 있다. 상기 용어 "항원 결합 단편(antigen-binding fragment)"은 면역글로불린 전체 구조에 대한 그의 단편으로, 항원이 결합할 수 있는 부분을 포함하는 폴리펩티드의 일부를 말한다. 예를 들어, 항원 결합 단편은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, Fab', Fv F(ab')2, 또는 이들의 조합일 수 있다.
상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열번호 61 내지 85로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 86 내지 101로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 상기 중쇄 가변 영역 및 상기 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다.
상기 중쇄(heavay chain)는 5가지(γ, δ, α, μ, ε) 종류가 있으며 중쇄가 항체의 종류를 결정짓는다. α와 γ는 약 450개, μ 와 ε는 약 550개의 아미노산으로 구성되어 있다. 중쇄는 두 영역 즉 가변 영역과 불변 영역이 있다.
상기 경쇄(light chain)는 λ, κ 2가지 종류가 있으며 대략 211 내지 217개의 아미노산으로 구성되어 있다. 사람의 항체 각각에는 모두 동일하게 1가지의 쇄만이 존재한다. 경쇄는 불변 영역과 가변 영역이 연속적으로 이루어져 있다.
상기 가변 영역(variable region)은 항체에서 항원이 결합하는 영역을 말한다.
상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 61 내지 68로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정 영역(complementarity determining region: CDR)-H1; 서열번호 69 내지 77로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호 78 내지 85로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 1 내지 30으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 용어 "상보성 결정 영역(Complementarity-determining region: CDR)"은 항체의 가변 부위 중에서 항원과의 결합 특이성을 부여하는 부위를 말한다.
상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 86 내지 87로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; 서열번호 88 내지 93으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 서열번호 94 내지 101로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 31 내지 60으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 ErbB3 단백질과 ErbB3 단백질에 특이적으로 결합하는 물질의 결합, ErbB1 단백질과 ErbB3 단백질의 이량체 형성, ErbB2 단백질과 ErbB3 단백질의 이량체 형성, ErbB3 또는 Akt의 인산화, 또는 이들의 조합을 저해할 수 있다. 상기 ErbB3 단백질에 특이적으로 결합하는 물질은 리간드(ligand)로도 지칭될 수 있고, 예를 들면 헤레굴린(heregulin: HRG)이다.
용어 "항암제 내성"의 "항암제(anticancer agent 또는 anticancer drug)"는 악성 종양의 축소, 억제, 및 제거를 포함한 치료를 위하여 사용되는 화학물질을 말한다.
상기 항암제는 예를 들어, 알킬화 약물(Alkylating agents), 항대사물질(Antimetabolites), 천연물질, 호르몬 및 그 길항 약물, 표적 치료제, 또는 이들의 조합이다. 상기 알킬화 약물은 예를 들어, 시스플라틴(Cisplatin), 카르보플라틴(Carboplatin), 옥살리플라틴(Oxaliplatin), 메클로레타민(Mechlorethamine), 사이클로포스파마이드(Cyclophosphamide), 이포스파마이드(Ifosfamide), 멜팔란(Melphalan), 클로람부실(Chlorambucil), 티오테파(Thiotepa), 알트레타민(Altretamine), 프로카바진(Procarbazine), 부술판(Busulfan), 카무스틴(Carmustine, BCNU), 로무스틴(Lomustine, CCNU), 다카르바진(Dacarbazine, DTIC), 또는 이들의 조합이다. 상기 항대사물질은 예를 들어, 플루오로우라실(Fluorouracil: 5-FU), 카페시타빈(Capecitabine), 시타라빈(Cytarabine), 젬시타빈(Gemcitabine), 메소트렉세이트(Methotrexate), 메르캅토퓨린(Mercaptopurine: 6-MP), 또는 이들의 조합이다. 상기 천연물질은 예를 들어, 빈블라스틴(Vinblastine), 빈크리스틴(Vincristine), 비노렐빈(Vinorelvine), 파클리탁셀(Paclitaxel), 도세탁셀(Docetaxel), 에토포사이드(Etoposide), 토포테칸(Topotecan), 이리노테칸(Irinotecan), 닥티노마이신(Dactinomycin), 독소루비신(Doxorubicin), 다우노루비신(Daunorubicin), 미토마이신(Mitomycin), 블레오마이신(Bleomycin), 아스파라기나제(L-Asparaginase), 또는 이들의 조합이다. 상기 호르몬 및 그 길항 약물은 예를 들어, 미토테인(Mitotane), 아미노글루테티미드(Aminoglutethimide), 프레드니손(Prednisone), 프레드니솔론(Prednisolone), 프로게스틴(Progestin), 에스트로겐(Estrogen), 안드로겐(Androgen), 타목시펜(Tamoxifen), 플루타마이드(Flutamide), 루프로라이드(Leuprolide), 또는 이들의 조합이다. 상기 표적 치료제는 예를 들어, 이마티닙(Imatinib), 게피티닙(Gefitinib), 엘로티닙(Erlotinib), 라파티닙(Lapatinib), 수니티닙(Sunitinib), 소라페닙(Sorafenib), 다사티닙(Dasatinib), 닐로티닙(Nilotinib), 토파시티닙(Tofacitinib), 크리조티닙(Crizotinib), 베무라페닙(Vemurafenib), 다브라페닙(Dabrafenib), 트라메티닙(Trametinib), 보르테조밉(Bortezomib), 오파투무맙(Ofatumumab), 알렘투주맙(Alemtuzumab), 트라스투주맙(Trastuzumab), 트라스투주맙 엠탄신(Trastuzumab emtansine, T-DM1), 세툭시맙(Cetuximab), 베바시주맙(Bevacizumab), 리툭시맙(Rituxomab), 파니투무맙(Panitumumab), 이필리무맙(Ipilimumab), 퍼투주맙(Pertuzumab), 또는 이들의 조합이다.
용어 "항암제 내성(drug-resistance)"은 항암제 치료 요법에 대하여 극히 낮은 감수성을 나타내어 상기 치료 요법에 의하여 암의 증세가 호전, 완화, 경감 또는 치료증상을 나타내지 않는 증상을 말한다. 항암제 내성은 암이 특정 항암제 치료 요법에 대하여 처음부터 내성을 가질 수 있고, 최초에는 내성을 나타내지 않았으나 긴 시간의 치료로 인하여 암세포의 성질이 변하여 동일한 치료제에 대해 더이상 감수성을 나타내지 않게 되어 나타날 수 있다.
상기 암은 고형암 또는 비고형암일 수 있다. 고형암은 예를 들어 간, 폐, 유방, 피부 등 장기에 암 종양이 발생한 것을 말한다. 비고형암은 혈액 내에서 발생한 암이고, 혈액암으로도 불린다. 상기 암은 암종(carcinoma), 육종(sarcoma), 조혈세포 유래의 암, 배세포 종양(germ cell tumor), 또는 모세포종(blastoma)일 수 있다. 상기 암은 예를 들어 유방암, 결장직장암, 두경부암, 대장암, 피부암, 췌장암, 폐암, 위암, 난소암, 전립선암, 방광암, 요도암, 간암, 신장암, 투명세포 육종, 흑색종, 뇌척수종양, 뇌암, 흉선종, 중피종, 식도암, 담도암, 고환암, 생식세포종, 갑상선암, 부갑상선암, 자궁 경부암, 자궁 내막암, 림프종, 골수형성이상 증후군(myelodysplastic syndromes: MDS), 골수섬유증(myelofibrosis), 급성 백혈병, 만성 백혈병, 다발성 골수종, 호치킨병(Hodgkin's Disease), 내분비계암, 및 육종으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 항암제 내성 암은 항암제 내성을 갖는 암을 말한다.
상기 용어 "예방"은 상기 약학적 조성물의 투여에 의해 항암제 내성 암의 항암제 내성을 억제하거나 그 내성의 출현을 지연시키는 모든 행위를 말한다. 상기 용어 "치료"는 상기 약학적 조성물의 투여에 의해 암의 항암제 내성이 경감되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 말한다.
상기 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다. 상기 담체는 부형제, 희석제 또는 보조제를 포함하는 의미로 사용된다. 상기 담체는 예를 들면, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리트리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알기네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 생리식염수, PBS와 같은 완충액, 메틸히드록시 벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 및 미네랄 오일로 이루어진 군으로부터 선택된 것일 수 있다. 상기 조성물은 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 풍미제, 유화제, 보존제, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.
상기 약학적 조성물은 통상의 방법에 따라 임의의 제형으로 준비될 수 있다. 상기 조성물은 예를 들면, 경구 투여 제형(예를 들면, 분말, 정제, 캡슐, 시럽, 알약, 또는 과립), 또는 비경구 제형(예를 들면, 주사제)으로 제형화될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 전신 제형, 또는 국부 제형으로 제조될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 항암제를 더 포함할 수 있다. 상기 항암제는 예를 들어, 알킬화 약물(Alkylating agents), 항대사물질(Antimetabolites), 천연물질, 호르몬 및 그 길항 약물, 표적 치료제, 또는 이들의 조합이다. 상기 알킬화 약물은 예를 들어, 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 메클로레타민, 사이클로포스파마이드, 이포스파마이드, 멜팔란, 클로람부실, 티오테파, 알트레타민, 프로카바진, 부술판, 카무스틴, 로무스틴, 다카르바진, 또는 이들의 조합이다. 상기 항대사물질은 예를 들어, 플루오로우라실, 카페시타빈, 시타라빈, 젬시타빈, 메소트렉세이트, 메르캅토퓨린, 또는 이들의 조합이다. 상기 천연물질은 예를 들어, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 비노렐빈, 파클리탁셀, 도세탁셀, 에토포사이드, 토포테칸, 이리노테칸, 닥티노마이신, 독소루비신, 다우노루비신, 미토마이신, 블레오마이신, 아스파라기나제, 또는 이들의 조합이다. 상기 호르몬 및 그 길항 약물은 예를 들어, 미토테인, 아미노글루테티미드, 프레드니손, 프레드니솔론, 프로게스틴, 에스트로겐, 안드로겐, 타목시펜, 플루타마이드, 루프로라이드, 또는 이들의 조합이다. 상기 표적 치료제는 예를 들어, 이마티닙, 게피티닙, 엘로티닙, 라파티닙, 수니티닙, 소라페닙, 다사티닙, 닐로티닙, 토파시티닙, 크리조티닙, 베무라페닙, 다브라페닙, 트라메티닙, 보르테조밉, 오파투무맙, 알렘투주맙, 트라스투주맙, 트라스투주맙 엠탄신, 세툭시맙, 베바시주맙, 리툭시맙, 파니투무맙, 이필리무맙, 퍼투주맙, 또는 이들의 조합이다. 상기 약학적 조성물은 단일 조성물 또는 개별적인 조성물일 수 있다. 예를 들어, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 조성물은 비경구 투여 제형의 조성물이고, 항암제는 경구 투여 제형의 조성물일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항암제, 또는 이들의 조합을 유효한 양으로 포함할 수 있다. 용어 "유효한 양"은 예방 또는 치료를 필요로 하는 개체에게 투여되는 경우 예방 또는 치료의 효과를 나타내기에 충분한 양을 말한다. 상기 유효한 양은 당업자가 선택되는 세포 또는 개체에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 질환의 중증도, 환자의 연령, 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 사용된 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 상기 유효한 양은 상기 약학적 조성물 당 약 0.5 ㎍ 내지 약 2 g, 약 1 ㎍ 내지 약 1 g, 약 10 ㎍ 내지 약 500 mg, 약 100 ㎍ 내지 약 100 mg, 또는 약 1 mg 내지 약 50 mg일 수 있다.
상기 약학적 조성물의 투여량은 예를 들어, 성인 기준으로 약 0.001 ㎎/kg 내지 약 100 ㎎/kg, 약 0.01 ㎎/kg 내지 약 10 ㎎/kg, 또는 약 0.1 ㎎/kg 내지 약 1 ㎎/kg의 범위 내 일 수 있다. 상기 투여는 1일 1회, 1일 다회, 또는 1주일에 1회, 2주일에 1회, 3주일에 1회, 또는 4주일에 1회 내지 1년에 1회 투여될 수 있다.
다른 양상은 일 양상에 따른 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 항암제 내성을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.
상기 약학적 조성물, 항암제 내성, 예방, 및 치료는 전술한 바와 같다.
상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 인간, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 암, 예를 들어 항암제 내성 암을 앓거나 앓을 가능성이 큰 개체일 수 있다.
상기 방법은 상기 개체에게 항암제를 투여하는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 항암제는 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 동시, 개별, 또는 순차로 투여될 수 있다.
상기 약학적 조성물, 항암제, 또는 이들의 조합은 예를 들면, 경구, 정맥내, 근육내, 경구, 경피(transdermal), 점막, 코안(intranasal), 기관내(intratracheal), 종양내(intratumoral), 또는 피하 투여와 같은, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 약학적 조성물, 항암제, 또는 이들의 조합는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있고, 단독으로 또는 다른 약학적 활성 화합물과 함께 투여될 수 있다.
상기 약학적 조성물, 항암제, 또는 이들의 조합의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여 경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 상기 투여량은 예를 들어, 성인 기준으로 약 0.001 ㎎/kg 내지 약 100 ㎎/kg, 약 0.01 ㎎/kg 내지 약 10 ㎎/kg, 또는 약 0.1 ㎎/kg 내지 약 1 ㎎/kg의 범위 내 일 수 있다. 상기 투여는 1일 1회, 1일 다회, 또는 1주일에 1회, 2주일에 1회, 3주일에 1회, 또는 4주일에 1회 내지 1년에 1회 투여될 수 있다.
일 양상에 따른 ErbB3에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 항암제 내성 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 이를 이용하여 항암제 내성 암을 예방 또는 치료하는 방법에 따르면, 항암제 내성을 갖거나 가질 위험이 있는 암에서 항암제 내성을 극복하여 암을 치료할 수 있다.
도 1a 및 도 1b는 리드 항체 및 이로부터 변형된 항체의 가변 영역의 아미노산 서열 및 CDR을 나타내는 그림이다(도 1a: 중쇄, 도 1b: 경쇄).
도 2는 유방암 세포에서 파클리탁셀, HRG, 및 항-ErbB3 항체의 병용 투여 후 카스파아제 3/7의 활성(상대적 발광 단위(relative luminance units: RLU)을 나타내는 그래프이다.
도 3은 결장직장암 세포에서 세툭시맙, HRG, 및 항-ErbB3 항체의 병용 투여 후 암세포의 증식률(%)을 나타내는 그래프이다.
도 4는 세툭시맙-내성 종양이식 모델에서 세툭시맙과 항-ErbB3 항체의 병용 투여 후 종양 부피를 나타내는 그래프이다.
이하 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 항- ErbB3 항체의 항암제 내성 극복 효과
1. 항- ErbB3 항체의 준비
인간 항-ErbB3 항체를 얻기 위해, 인간 합성 scFv-파아지 라이브러리를 ErbB3 단백질(R&D systems)에 대해 스크리닝하여 ErbB3 에 결합하는 scFv 단편을 노출하는 파지를 수득하였다.
수득된 파지의 scFv 단편을 코딩하는 핵산 서열을 분석하고 이로부터 아미노산 서열을 분석하여, ErbB3에 결합하는 scFv 단편에서 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열을 확인하였다. ErbB3에 결합하는 scFv 서열을 확보 후 IgG1으로 발현되도록 하는 발현 벡터를 사용하여 VH 및 VL 부위를 재구성하여 전체 항체 유전자를 제작하였다. 재구성된 IgG1을 코딩하는 발현 벡터를 CHO 세포주에 형질전환시켜 소규모로 발현시켰다. 발현된 항-ErbB3 항체들을 ErbB3에 대한 결합력 및 세포 기반의 분석을 수행하여, 헤레굴린(heregulin: HRG)-의존적 ErbB3 신호의 전달을 억제하는 항-ErbB3 리드 항체를 선별하였다.
무작위 돌연변이 생성법을 이용하여, 선별된 항-ErbB3 리드 항체의 6개의 CDR 부위에 돌연변이를 도입한 Fab-파아지 라이브러리를 제작하였다. Fab-파아지 라이브러는 프라이머를 Integrated DNA Technologies, Inc.에 의뢰하여 제작하고 Phusion Polymerase(New England Biolabs)를 사용하여 PCR 방법으로 증폭하였다. 제작된 Fab-파아지 라이브러리를 재조합 인간 ErbB3 단백질(R&D systems)에 대해 스크리닝하여, 재조합 인간 ErbB3(R&D systems)에 대한 결합 친화력이 리드 항체에 비해 증가한 항체를 선별하였다.
선별된 항체에서 중쇄 및 경쇄의 가변 영역의 아미노산 서열을 도 1a 및 도 1b에 나타내고, 중쇄 및 경쇄의 CDR 아미노산 서열을 각각 표 1 및 표 2에 나타내었다.
항체 CDR -H1 CDR - H2 CDR - H3
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항체 CDR - L1 CDR - L2 CDR - L3
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선별된 항체의 항원인 ErbB3 단백질에 대한 결합력은 재조합 인간 ErbB3 단백질(R&D systems)에 대해 항 ErbB3 항체들의 결합 친화성 및 상호작용 동역학을 Octet® QK384 시스템(Pall Life Sciences)을 사용하여 측정하고, 각 항체에 대한 흡착율 상수(association constant: ka), 분리율 상수(dissociation constant: kd) 및 평형 분리 상수(equilibrium dissociation constant: KD)를 결정하였다.
항체 KD (M) ka (1/Ms) kd(1/s)
442P 2.83E-10 1.25E+06 3.52E-04
442S1 <1.0E-12 5.22E+05 3.94E-07
442S2 7.11E-11 1.17E+06 8.28E-05
442S4 3.71E-11 1.48E+06 5.47E-05
442S5 1.75E-11 1.57E+06 2.74E-05
442S6 <1.0E-12 8.72E+05 <1.0E-07
442S9 7.16E-11 8.21E+05 5.87E-05
442S10 1.14E-10 8.14E+05 9.29E-05
442M3 3.40E-12 7.71E+05 2.62E-06
442M4 <1.0E-12 5.73E+05 <1.0E-07
442M5 <1.0E-12 6.65E+05 <1.0E-07
442M6 2.01E-11 9.69E+05 1.95E-05
442M7 2.91E-11 1.56E+06 4.55E-05
442M8 2.56E-12 8.70E+05 2.23E-06
442M10 <1.0E-12 4.71E+05 <1.0E-07
442M11 5.43E-12 1.49E+06 8.09E-06
472P 2.84E-10 1.79E+06 5.08E-04
472S1 <1.0E-12 6.49E+05 3.33E-07
472S2 <1.0E-12 1.07E+06 <1.0E-07
472S3 <1.0E-12 5.22E+05 1.43E-07
472S4 9.41E-12 1.15E+06 1.09E-05
472M1 1.25E-11 1.39E+06 1.74E-05
451P 5.35E-11 1.18E+06 6.33E-05
451M1 2.48E-11 1.24E+06 3.08E-05
451M2 1.26E-11 1.24E+06 1.56E-05
451M3 <1.0E-12 1.87E+06 2.30E-07
451M4 6.12E-12 2.01E+06 1.23E-05
451M5 2.17E-11 1.52E+06 3.29E-05
451M6 3.47E-12 1.20E+06 4.17E-06
451M7 4.92E-12 1.35E+06 6.63E-06
표 3에 나타난 바와 같이, 선별된 항체들은 약 0.28 nM 이하의 KD 값을 가지므로, 선별된 항체들이 인간 ErbB3 단백질에 대해 높은 결합력을 갖는 것을 확인하였다.
2. 항- ErbB3 항체의 항암제 내성 극복 효과
1) 유방암에서 파클리탁셀 저항성 극복 효과
유방암 세포주 ZR-75-30에서 파클리탁셀에 의한 세포 사멸 효과는 HRG 존재시 ErbB3 신호 전달 경로의 활성화에 의해 감소될 수 있다(Wang S et al., Oncogene, 29, 4225-4236, 2010). 선별된 항체가 항암제인 파클리탁셀의 저항성을 극복하고 다시 항암 효과를 나타내는지 여부를 확인하였다.
약 1x104 개의 ZR-75-30 세포(American Type Culture Collection)를 플레이트에 접종하고, 10%(v/v) 소태아혈청(FBS)을 포함하는 RPMI 1640 배지(Invitrogen)에서 37℃ 및 5% CO2의 조건 하에서 약 24 시간 동안 배양하였다. 그 후 0.1%(v/v) 소태아혈청을 포함하는 신선한 배지(100 ng/ml HRG 첨가)로 교환하고, 37℃ 및 5% CO2의 조건 하에서 약 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에 10 nM의 파클리탁셀(Bristol-Myers Squibb)과 25 ㎍/㎖의 442S1 항체를 가하고, 37℃ 및 5% CO2의 조건 하에서 약 72시간 동안 배양하였다. 그 후, 배양된 세포를 수득하고, 세포자살의 마커인 카스파아제 3/7의 활성을 Caspase3/7 Substrate Assay(Promega)를 사용하여 측정하였다. 측정된 카스파아제 3/7의 활성을 도 2에 나타내었고, 도 2에서 "RLU"는 상대적 형광 단위(relative luminescence units)를 표시하고, "**"는 t-test 결과(p < 0.01)를 표시한다.
도 2에 나타난 바와 같이, 카스파아제 3/7의 활성이 HRG의 존재 하에서 파클리탁셀에 의해 감소하였지만, 파클리탁셀 및 442S1 항체를 함께 처리한 경우 파클리탁셀 단독 처리보다 카스파아제 3/7의 활성이 더 증가하였다(n=3). 따라서, 파클리탁셀에 의한 세포 사멸 효과는 HRG 존재 시 감소하지만, 442S1 항체의 투여에 의해 다시 회복되었음을 확인하였다.
2) 결장직장암에서 세툭시맙 저항성 극복 효과
세툭시맙은 DiFi 결장직장암 세포에서 암세포 증식을 억제하는 효능을 갖지만, HRG 존재 시에는 ErbB3 신호전달 경로가 활성화되어 그 효능을 나타내지 못하게 된다. 선별된 항체가 세툭시맙에 대한 저항성을 복구하여 다시 암세포 증식 억제능을 보이는지를 확인하였다.
구체적으로, DiFi 대장암 세포(American Type Culture Collection)를 항생제 (PPenicillin-Streptomycin, Invitrogen)와 10%(v/v) FBS를 포함하는 RPMI-1640 배지(Invitrogen)에서 배양하였다. 약 1x104 개의 DiFi 세포를 96-웰 플레이트에 접종하고, 37℃ 및 5% CO2의 조건 하에서 약 24 시간 동안 배양하였다. 세툭시맙과 항-ErbB3 항체는 200 ㎍/ml로 동량 섞은 후, 세툭시맙/항-ErbB3 항체 용액을 40 ng/㎖의 HRG와 동량 섞었다. 96-웰 플레이트에 세툭시맙/항-ErbB3 항체/HRG 용액을 넣고 37℃ 및 5% CO2의 조건 하에서 약 72 시간 동안 배양하였다. 항체와 HRG를 포함하지 않고 배양한 세포를 음성 대조군으로 이용하였다. 살아있는 세포의 수를 셀타이터-글루(Celltiter-Glo) 발광 세포 생존능 분석법(Promega)으로 측정하였다. 측정된 결과로부터 세포의 증식률을 산출하고, 그 결과를 도 3에 나타내었고, 도 3에서"***"는 t-test 결과(p<0.001)를 표시한다.
도 3에 나타낸 바와 같이, 세툭시맙에 의한 세포증식 억제 효과는 HRG 존재하에서 감소되지만, 세툭시맙과 442S1 항체를 함께 처리한 군에서 다시 암세포 증식이 억제되었다. 따라서, 세툭시맙에 의한 세포 증식 억제능은 ErbB3 리간드인 HRG 존재 시 감소하지만, HRG-ErbB3 신호전달 경로를 차단하는 442S1 항체에 의해 다시 그 효능이 복구됨을 확인하였다.
3) 세툭시맙 내성-이종이식 모델에서 세툭시맙 저항성 극복 효과
인간 두경부암 FaDu 세포(Shanghai Institutes of Biological Sciences)를 10% FBS(Invitrogen), 0.01 mM NEAA(Non-Essential Amino Acid, Hyclone), 및 2 mM L-글루타민(Invitrogen)을 포함하는 EMEM 배지 (Hyclone)에서 배양하였다.
약 5x106 개의 암세포를 100 ㎕의 PBS에 현탁시키고, 암컷 NOD SCID 생쥐 (HFK Bio-Technology Co. Ltd.)의 옆구리 피하에 접종하였다. 주 당 2회씩 생쥐의 무게를 측정하고, "0.5 a × b2"의 식을 이용하여 종양 부피를 계산하였고, 상기 식에서 a 및 b는 각각 종양의 긴 직경 및 짧은 직경이다.
암세포 접종 8일 후 종양 부피가 약 165 ㎣에 도달하였을 때, 생쥐를 무작위 선별하였다. PBS (음성 대조군) 또는 세툭시맙을 각 군의 생쥐의 꼬리 정맥에 주 2회 5 mg/kg의 용량으로 6.5주 동안 투여하였다. 세툭시맙의 종양성장 억제능이 유지되지 않고 종양 부피가 약 840 ㎣로 증가하였을 때, 각 군 당 10마리의 생쥐를 무작위 선별하고, 5 mg/kg의 세툭시맙, 10 mg/kg의 442S1 항체, 또는 5 mg/kg의 세툭시맙과 10 mg/kg의 442S1 항체의 조합을 선별된 생쥐에 주 2회씩 2주 동안 투여하였다. 주 2회씩 종양부피를 산출하고, 그 결과를 도 4에 나타내었다.
도 4에 나타난 바와 같이, 현저한 종양 억제 효과가 세툭시맙 단독 투여군에 비해442S1 항체 단독 투여군 또는 442S1 항체와 세툭시맙의 병용 투여군에서 확인되었다. 따라서, 442S1 항체는 세툭시맙에 대한 내성을 극복하고 종양 성장을 억제할 수 있음을 확인되었다.
<110> ISU ABXIS <120> Pharmaceutical composition including antibody specifically binding to ErbB3 for preventing or treating drug-resistance cancer and method using the same <130> GN-117848-KR <160> 101 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region of antibody 442P <400> 1 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Tyr Pro Asp Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Leu His Met Gly Pro Glu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region 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Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Tyr Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ala Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 60 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain variable region of antibody 451M7 <400> 60 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Pro Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Ser Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Tyr Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ala Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 61 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR1 <400> 61 Asp Tyr Asp Met Ser 1 5 <210> 62 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR1 <400> 62 Trp Tyr Asp Met Thr 1 5 <210> 63 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR1 <400> 63 Trp Tyr Asp Leu Ala 1 5 <210> 64 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR1 <400> 64 Trp Tyr Asp Met Ser 1 5 <210> 65 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR1 <400> 65 Trp Tyr Asp Ile Ala 1 5 <210> 66 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR1 <400> 66 Trp Tyr Asp Leu Ser 1 5 <210> 67 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR1 <400> 67 His Tyr Asp Met Ser 1 5 <210> 68 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR1 <400> 68 Tyr Tyr Asp Met Ser 1 5 <210> 69 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR2 <400> 69 Ser Ile Tyr Pro Asp Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Gln 1 5 10 15 Gly <210> 70 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR2 <400> 70 Thr Ile Asp Leu Asp Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Gln 1 5 10 15 Gly <210> 71 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR2 <400> 71 Ser Ile Tyr Pro Asp Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Gln 1 5 10 15 Gly <210> 72 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR2 <400> 72 Ser Ile Glu Pro Asp Phe Gly Ser Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Arg 1 5 10 15 Gly <210> 73 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR2 <400> 73 Ile Ile Glu Pro Asp Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Gln 1 5 10 15 Gly <210> 74 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR2 <400> 74 Ser Ile Glu Pro Asp Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Gln 1 5 10 15 Gly <210> 75 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR2 <400> 75 Thr Ile Glu Pro Asp Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Gln 1 5 10 15 Ser <210> 76 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR2 <400> 76 Gly Ile Ser Tyr Asp Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 77 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR2 <400> 77 Ala Ile Tyr Tyr Asp Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Ala Lys 1 5 10 15 Gly <210> 78 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR3 <400> 78 Asp Leu His Met Gly Pro Glu Gly Pro Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 79 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR3 <400> 79 Asp Arg His Met Trp Pro Glu Gly Pro Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 80 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR3 <400> 80 Asp Leu His Met Trp Pro Glu Gly Pro Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 81 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR3 <400> 81 Asp Pro Ser Trp Cys Leu Gln Asp Leu Cys Tyr Tyr Ala Asp Gly Met 1 5 10 15 Asp Val <210> 82 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR3 <400> 82 Asp Arg Leu Phe Val Ser Asp Ser Thr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 83 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR3 <400> 83 Asp Arg Leu Phe Met Ser Asp Ser Thr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 84 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR3 <400> 84 Asp Arg Leu Phe Ala Ser Asp Ser Thr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 85 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR3 <400> 85 Asp Arg Leu Phe Glu Ser Asp Ser Thr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 86 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain CDR1 <400> 86 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ser Val Ser 1 5 10 <210> 87 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain CDR1 <400> 87 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ser Gly Ser 1 5 10 <210> 88 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain CDR2 <400> 88 Ser Asp Asn His Arg Pro Ser 1 5 <210> 89 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain CDR2 <400> 89 Ala Asp Asn Trp Arg Pro Ser 1 5 <210> 90 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain CDR2 <400> 90 Ala Asp Asn His Arg Pro Ser 1 5 <210> 91 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain CDR2 <400> 91 Ala Asp Asn Phe Arg Pro Ser 1 5 <210> 92 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain CDR2 <400> 92 Ala Asp Ser Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 93 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain CDR2 <400> 93 Tyr Asp Ser His Arg Pro Ser 1 5 <210> 94 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain CDR3 <400> 94 Ala Ala Trp Asp Ser Ser Leu Ser Gly Tyr Val 1 5 10 <210> 95 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain CDR3 <400> 95 Gln Gly Trp Asp Thr Ser Leu Ser Gly His Val 1 5 10 <210> 96 <211> 11 <212> PRT 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Claims (15)

  1. ErbB3에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 항암제 내성 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서,
    상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은
    하기 표 4의 중쇄 상보성 결정 영역(Heavy chain complementarity determining region: CDR-H) 및 경쇄 상보성 결정 영역(Light chain complementarity determining region: CDR-L)을 포함하는 것인 약학적 조성물: 번호 CDR-H1 CDR-H2 CDR-H3 CDR-L1 CDR-L2 CDR-L3 1 서열번호 61 서열번호 69 서열번호 78 서열번호 86 서열번호 88 서열번호 94 2 서열번호 61 서열번호 70 서열번호 78 서열번호 86 서열번호 88 서열번호 95 3 서열번호 61 서열번호 71 서열번호 78 서열번호 86 서열번호 88 서열번호 94 4 서열번호 61 서열번호 72 서열번호 78 서열번호 86 서열번호 88 서열번호 94 5 서열번호 61 서열번호 73 서열번호 78 서열번호 86 서열번호 88 서열번호 94 6 서열번호 61 서열번호 71 서열번호 79 서열번호 87 서열번호 89 서열번호 94 7 서열번호 61 서열번호 69 서열번호 79 서열번호 87 서열번호 90 서열번호 94 8 서열번호 61 서열번호 69 서열번호 79 서열번호 86 서열번호 88 서열번호 94 9 서열번호 61 서열번호 69 서열번호 79 서열번호 87 서열번호 89 서열번호 94 10 서열번호 61 서열번호 70 서열번호 78 서열번호 86 서열번호 88 서열번호 96 11 서열번호 61 서열번호 70 서열번호 78 서열번호 86 서열번호 88 서열번호 97 12 서열번호 61 서열번호 74 서열번호 79 서열번호 87 서열번호 89 서열번호 94 13 서열번호 61 서열번호 75 서열번호 78 서열번호 86 서열번호 88 서열번호 94 14 서열번호 61 서열번호 69 서열번호 78 서열번호 86 서열번호 88 서열번호 98 15 서열번호 61 서열번호 70 서열번호 80 서열번호 86 서열번호 91 서열번호 94 16 서열번호 61 서열번호 75 서열번호 78 서열번호 86 서열번호 88 서열번호 99 17 서열번호 61 서열번호 76 서열번호 81 서열번호 86 서열번호 92 서열번호 100 18 서열번호 62 서열번호 76 서열번호 81 서열번호 86 서열번호 92 서열번호 100 19 서열번호 63 서열번호 76 서열번호 81 서열번호 86 서열번호 92 서열번호 100 20 서열번호 64 서열번호 76 서열번호 81 서열번호 86 서열번호 92 서열번호 100 21 서열번호 65 서열번호 76 서열번호 81 서열번호 86 서열번호 92 서열번호 100 22 서열번호 66 서열번호 76 서열번호 81 서열번호 86 서열번호 92 서열번호 100 23 서열번호 61 서열번호 77 서열번호 82 서열번호 87 서열번호 93 서열번호 101 24 서열번호 61 서열번호 77 서열번호 83 서열번호 87 서열번호 93 서열번호 101 25 서열번호 61 서열번호 77 서열번호 84 서열번호 87 서열번호 93 서열번호 101 26 서열번호 67 서열번호 77 서열번호 84 서열번호 87 서열번호 93 서열번호 101 27 서열번호 68 서열번호 77 서열번호 84 서열번호 87 서열번호 93 서열번호 101 28 서열번호 61 서열번호 77 서열번호 85 서열번호 87 서열번호 93 서열번호 101 29 서열번호 67 서열번호 77 서열번호 85 서열번호 87 서열번호 93 서열번호 101 30 서열번호 68 서열번호 77 서열번호 85 서열번호 87 서열번호 93 서열번호 101

    .
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 항암제는 알킬화 약물(Alkylating agents), 항대사물질(Antimetabolites), 천연물질, 호르몬 및 그 길항 약물, 표적 치료제, 또는 이들의 조합인 것인 약학적 조성물.
  5. 청구항 4에 있어서, 상기 알킬화 약물은 시스플라틴(Cisplatin), 카르보플라틴(Carboplatin), 옥살리플라틴(Oxaliplatin), 메클로레타민(Mechlorethamine), 사이클로포스파마이드(Cyclophosphamide), 이포스파마이드(Ifosfamide), 멜팔란(Melphalan), 클로람부실(Chlorambucil), 티오테파(Thiotepa), 알트레타민(Altretamine), 프로카바진(Procarbazine), 부술판(Busulfan), 카무스틴(Carmustine, BCNU), 로무스틴(Lomustine, CCNU), 다카르바진(Dacarbazine, DTIC), 또는 이들의 조합인 것인 약학적 조성물.
  6. 청구항 4에 있어서, 상기 항대사물질은 플루오로우라실(Fluorouracil: 5-FU), 카페시타빈(Capecitabine), 시타라빈(Cytarabine), 젬시타빈(Gemcitabine), 메소트렉세이트(Methotrexate), 메르캅토퓨린(Mercaptopurine: 6-MP), 또는 이들의 조합인 것인 약학적 조성물.
  7. 청구항 4에 있어서, 상기 천연물질은 빈블라스틴(Vinblastine), 빈크리스틴(Vincristine), 비노렐빈(Vinorelvine), 파클리탁셀(Paclitaxel), 도세탁셀(Docetaxel), 에토포사이드(Etoposide), 토포테칸(Topotecan), 이리노테칸(Irinotecan), 닥티노마이신(Dactinomycin), 독소루비신(Doxorubicin), 다우노루비신(Daunorubicin), 미토마이신(Mitomycin), 블레오마이신(Bleomycin), 아스파라기나제(L-Asparaginase), 또는 이들의 조합인 것인 약학적 조성물.
  8. 청구항 4에 있어서, 상기 호르몬 및 그 길항 약물은 미토테인(Mitotane), 아미노글루테티미드(Aminoglutethimide), 프레드니손(Prednisone), 프레드니솔론(Prednisolone), 프로게스틴(Progestin), 에스트로겐(Estrogen), 안드로겐(Androgen), 타목시펜(Tamoxifen), 플루타마이드(Flutamide), 루프로라이드(Leuprolide), 또는 이들의 조합인 것인 약학적 조성물.
  9. 청구항 4에 있어서, 상기 표적 치료제는 이마티닙(Imatinib), 게피티닙 (Gefitinib), 엘로티닙(Erlotinib), 라파티닙(Lapatinib), 수니티닙(Sunitinib), 소라페닙(Sorafenib), 다사티닙(Dasatinib), 닐로티닙(Nilotinib), 토파시티닙(Tofacitinib), 크리조티닙(Crizotinib), 베무라페닙(Vemurafenib), 다브라페닙(Dabrafenib), 트라메티닙(Trametinib), 보르테조밉(Bortezomib), 오파투무맙(Ofatumumab), 알렘투주맙(Alemtuzumab), 트라스투주맙(Trastuzumab), 트라스투주맙 엠탄신(Trastuzumab emtansine, T-DM1), 세툭시맙(Cetuximab), 베바시주맙(Bevacizumab), 리툭시맙(Rituxomab), 파니투무맙(Panitumumab), 이필리무맙(Ipilimumab), 퍼투주맙(Pertuzumab), 또는 이들의 조합인 것인 약학적 조성물.
  10. 청구항 1에 있어서, 상기 암은 유방암, 결장직장암, 두경부암, 대장암, 피부암, 췌장암, 폐암, 위암, 난소암, 전립선암, 방광암, 요도암, 간암, 신장암, 투명세포 육종, 흑색종, 뇌척수종양, 뇌암, 흉선종, 중피종, 식도암, 담도암, 고환암, 생식세포종, 갑상선암, 부갑상선암, 자궁 경부암, 자궁 내막암, 림프종, 골수형성이상 증후군(myelodysplastic syndromes: MDS), 골수섬유증(myelofibrosis), 급성 백혈병, 만성 백혈병, 다발성 골수종, 호치킨병(Hodgkin's Disease), 내분비계암, 및 육종으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 약학적 조성물.
  11. 청구항 1에 있어서, 항암제를 더 포함하는 것인 약학적 조성물.
  12. 청구항 11에 있어서, 상기 약학적 조성물은 단일 조성물 또는 개별적인 조성물인 것인 약학적 조성물.
  13. 청구항 1의 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 항암제 내성 암을 예방 또는 치료하는 방법으로서,
    상기 개체는 인간을 제외한 포유동물인 것인 방법.
  14. 청구항 13에 있어서, 상기 개체에게 항암제를 투여하는 단계를 더 포함하는 것인 방법.
  15. 청구항 14에 있어서, 상기 투여하는 단계는 동시, 개별, 또는 순차로 투여하는 것인 방법.
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