KR101913537B1 - 신경섬유육종 예방 또는 치료용 항암제 조성물 - Google Patents

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정선용
박은국
안수용
김정현
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Abstract

본 발명은 신경섬유육종 예방 또는 치료용 항암제 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따르면, 제1형 신경섬유종증의 악성종양인 신경섬유육종에 본 발명의 3가지 항암제 조합인 ICE(이소파마이드, 에토포시드, 카보플라틴), CVM(시스플라틴, 빈블라스틴, 메토트렉세이트) 또는 CG(시스플라틴, 젬시타빈)의 처리 시, 신경섬유육종의 세포 증식이 억제되고, 세포 사멸을 증가되는 것을 확인한 바, 본 발명의 항암제 조합은 정상 세포에 부작용이 적으면서 신경섬유육종에 대해 우수한 치료 효과를 나타내는 최적의 항암제 조성물로 활용될 수 있다.

Description

신경섬유육종 예방 또는 치료용 항암제 조성물{Anti-cancer agents for preventing or treating of neurofibrosarcoma}
본 발명은 제1형 신경섬유종증의 악성종양 치료에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 제1형 신경섬유종증 환자에서 발생하는 악성종양인 신경섬유육종 치료를 위한 부작용이 적고, 가장 우수한 효과를 나타내는 최적의 항암제 조성물에 관한 것이다.
제1형 신경섬유종증(Neurofibromatosis Type1, NF1)은 1882년 Fredrich von Recklin-ghausen이 처음 기술하였으며, 말초신경을 따라 종양을 형성하는 상염색체 우성유전 질환으로 약 3,500명 중 1명의 비율로 발생한다. 종양은 신경이 있는 신체 어느 부위에나 발생할 수 있고, 그 수가 한 개 이상으로 생기는 다발성이기 때문에 '신경섬유종증'이라고 한다. 주된 증상은 신경이 있는 곳이면 어디서나 발생하는 신경섬유종(neurofibroma)과 밀크 커피색 반점(cafe-au-lait spots), 홍채 결절(Lisch nodules), 시신경교종(optic pathway glioma), 척추측만(scoliosis), 경골형성이상(tibial dysplasia), 총상신경섬유종(plexiform neurofibroma; PN), 교뇌신경교종(pontine glioma) 등이 있다(본원발명의 도 1 참조).
제1형 신경섬유종증 환자에서 가장 많이 발생하는 증상은 피부에 발생하는 양성종양인 신경섬유종이다. 제1형 신경섬유종증 환자의 약 30-40%에서는 피부 아래 또는 몸의 심부에 양성종양인 총상신경섬유종이 발생한다. 특히 총상신경섬유종의 경우, 다양한 신체 부위에서 옆으로 확산되며 자라서 자루처럼 늘어진 거대한 덩어리(혹) 모양을 나타내며(본원발명의 도 2 참조), 심부에 수많은 다발성 총상신경섬유종을 나타내기도 한다(본원발명의 도 3 참조). 이러한 총상신경섬유종은 비록 양성종양이지만 끊임없이 자라기 때문에 환자들에게 매우 심각한 증상을 발생시킨다. 또한, 제1형 신경섬유종증 환자의 약 10%에서 총상신경섬유종이 악성종양인 신경섬유육종(neurofibrosarcoma; malignant peripheral nerve sheath tumor, MPNST)으로 발전하는 것으로 알려져 있다(본원발명의 도 4 참조). 이러한 제1형 신경섬유종증 환자에서 양성종양의 악성전개(malignant progression)는 급속도로 전개되기 때문에 매우 높은 치사율을 나타낸다.
총상신경섬유종은 뼈와 주위 조직의 성장을 자극하여 거대한 크기로 자라나 추형의 외모를 나타내기도 하며, 총상신경섬유종 환자의 약 8~13%는 신경섬유육종(MPNSTs)으로 악성화 된다(본원발명의 도 5 참조). MPNST는 고도로 악성화된 전이암으로 높은 사망률을 나타내며, 화학 요법, 방사선 요법 등에 낮은 반응을 보이는 것으로 알려져 있다.
제1형 신경섬유종증은 NF1 유전자의 돌연변이에 의해 발병하며, 환자의 약 50%는 유전이 아닌 자연발생적인 돌연변이에 의해 발생한다. NF1 유전자는 염색체 17q11.2에 위치하며, 350 kb의 genomic DNA, 57개의 엑손(exon)으로 구성되어 있고, mRNA는 11~13 Kb 정도이다. 종양억제유전자(tumor suppress gene) NF1은 ?320 kDa의 세포질에 존재하는 뉴로파이브로민(neurofibromin) 단백질을 암호화하는데, 아미노산 1125-1537 부위에 종양유전자(oncogene) Ras 신호를 하향 조절하는 GTPase-activating protein(GAP)-related domain(GRD) 영역을 가지고 있다. GAP는 Ras의 intrinsic GTPase를 자극하여 활성화 형태인 Ras-GTP에서 Ras-GDP 불활성화 형태로 전환시킴으로써 Ras의 활성을 조절한다. Ras에 의해 암호화되는 Ras 단백질은 신경능선세포와 내피세포 모두에서 발현되고, 그 신호는 여러 가지 하위 신호전달 경로로 전달된다. 증가된 GTP-Ras는 대표적 하위 신호전달 경로인 Raf 키나아제를 통해 신호전달을 유발하고, Raf는 MEK 키나아제와 MAP 키나아제의 Erk1과 Erk2 isoform을 포함한 키나아제 연쇄증폭(cascade)을 활성화시킴으로써 세포의 증식, 분화, 사멸 등에 관여한다(본원발명의 도 6 참조).
Ras 유전자는 크게 K-Ras, H-Ras, N-Ras의 3종류가 존재하며, 사람에게 발생하는 약 50% 암에서 Ras 유전자의 돌연변이가 발견된다. Ras 유전자의 돌연변이와 Ras 단백질의 과잉 활성은 세포의 암화에 관여하기 때문에 Ras 단백질의 세포 내 발현 억제를 통한 암 치료 연구가 활발히 진행되고 있다. NF1 유전자의 돌연변이에 의해 K-Ras, H-Ras, N-Ras의 3종류 Ras 단백질이 모두 과잉 활성화되는 것으로 알려져 왔으나, 최근의 연구에서 제1형 신경섬유종증 환자의 별아교세포(astrocytes)의 경우 H-Ras와 N-Ras는 활성화되지 않고 K-Ras만이 특이적으로 활성화되며, 조혈세포의 경우 H-Ras만이 활성화되는 것으로 보고된 바 있다.
뉴로파이브로민의 손실 혹은 기능이상(dysfunction)으로 인하여 RAS의 과잉 활성 및 축적에 의해 제1형 신경섬유종증이 발병하고, 환자의 약 20%에서는 생명을 위협하는 심한 합병증이 야기되며, 약 8?13%에서는 악성화가 나타나 예측이 불가능하고 심한 임상적 증상을 야기하지만 유전성으로 인하여 근본적인 치료가 불가능하다. 신경섬유육종으로 악성화가 전개된 경우, 종양의 절제 등의 대중요법만이 유일한 치료법이나, 종양의 위치에 따라 수술이 불가능한 경우가 많아 암의 진행 시기에 관계없이 신경섬유육종의 발생은 환자의 생명과 직결된다. 제1형 신경섬유종증의 임상적 표현형의 다양성과 악성화 과정에 대한 정확한 기전은 현재까지 명확하게 밝혀진 바가 없다. 대표적인 치료방법으로 방사선 요법, 외과적 수술 절제, 세포 독성약 등이 사용되고 있으나 장기간의 효과는 미비하여 새로운 치료법의 개발이 필요한 실정이다.
대한민국 공개특허 제10-2011-0025827호 (2011.03.11 공개)
본 발명의 목적은 신경섬유육종 예방 또는 치료용 항암제 조성물을 제공하는 데에 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 이리노테칸(Irinotecan)을 유효성분으로 함유하는 신경섬유육종(neurofibrosarcoma; malignant peripheral nerve sheath tumor, MPNST) 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 이포스파마이드(Ifosfamide), 카보플라틴(Carboplatin), 에토포시드(Etoposide), 시스플라틴(Cisplatin), 빈블라스틴(Vinblastine), 메토트렉세이트(Methotrexate) 및 젬시타빈(Gemcitabine)으로 이루어진 군에서 선택된 두 개 이상의 항암제를 유효성분으로 함유하는 신경섬유육종(neurofibrosarcoma; malignant peripheral nerve sheath tumor, MPNST) 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에 따르면, 제1형 신경섬유종증의 악성종양인 신경섬유육종에 본 발명의 3가지 항암제 조합인 ICE(이소파마이드, 에토포시드, 카보플라틴), CVM(시스플라틴, 빈블라스틴, 메토트렉세이트) 또는 CG(시스플라틴, 젬시타빈)의 처리 시, 신경섬유육종의 세포 증식이 억제되고, 세포 사멸을 증가되는 것을 확인한 바, 본 발명의 항암제 조합은 정상 세포에 부작용이 적으면서 신경섬유육종에 대해 우수한 치료 효과를 나타내는 최적의 항암제 조성물로 활용될 수 있다.
도 1은 제1형 신경섬유종증의 대표적인 증상을 나타낸 것이다((A) 밀크 커피색 반점(cafe-au-lait spots), (B) 피부신경섬유종(neurofibroma), (C) 홍채 결절(Lisch nodules), (D) 시신경교종(optic pathway glioma), (E) 척추측만(scoliosis), (F) 경골형성이상(tibial dysplasia), (G) 총상신경섬유종 (plexiform neurofibroma), (H) 교뇌신경교종(pontine glioma)).
도 2는 다양한 신체 부위에서 발생한 총상신경섬유종을 나타낸 것이다.
도 3은 심부에 발생한 총상신경섬유종을 나타낸 것이다.
도 4는 양성 총상신경섬유종에서 악성으로 전개된 신경섬유육종(neurofibrosarcoma; malignant peripheral nerve sheath tumor, MPNST)을 나타낸 것이다.
도 5는 제1형 신경섬유종증의 종양 형성 및 악성화 전개 과정을 도시하여 나타낸 것이다.
도 6은 뉴로파이브로민(neurofibromin)의 역할과 종양유전자(oncogene) Ras의 활성화 기전을 도시하여 나타낸 것이다.
도 7A 및 도 7B는 NF1 악성종양 세포주(S462) 및 정상 세포주(HSC)에 다양한 항암제를 단독 처리한 후, 세포 생존율을 확인한 것이다.
도 8은 상기 도 7의 결과로부터 최종적으로 선별된 ICE(이소파마이드, 에토포시드, 카보플라틴), CVM(시스플라틴, 빈블라스틴, 메토트렉세이트), CG(시스플라틴, 젬시타빈)의 3가지 항암제 조합 또는 이리노테칸을 NF1 악성종양 세포주(S462) 및 정상 세포주(HSC)에 처리한 후, 세포 생존율을 확인한 것이다.
도 9A 및 도 9B는 제1형 신경섬유종증 악성화 이종이식 동물모델에서 본 발명의 3가지 항암제 조합에 의한 악성종양 증식 억제 효과를 확인한 것이다.
본 발명의 발명자들은 제1형 신경섬유종증의 악성종양인 신경섬유육종에 본 발명의 3가지 항암제 조합(ICE, CVM 또는 CG)을 처리한 결과, 종양세포의 증식이 억제되고 악성종양 세포의 사멸이 증가되는 것을 확인함으로써, 본 발명의 3가지 항암제 조합이 신경섬유육종의 치료제로서 활용이 가능함을 밝혀내며 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 이리노테칸(Irinotecan)을 유효성분으로 함유하는 신경섬유육종(neurofibrosarcoma; malignant peripheral nerve sheath tumor, MPNST) 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 이포스파마이드(Ifosfamide), 카보플라틴(Carboplatin), 에토포시드(Etoposide), 시스플라틴(Cisplatin), 빈블라스틴(Vinblastine), 메토트렉세이트(Methotrexate) 및 젬시타빈(Gemcitabine)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 항암제를 더 함유할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다.
또한, 본 발명은 이포스파마이드(Ifosfamide), 카보플라틴(Carboplatin), 에토포시드(Etoposide), 시스플라틴(Cisplatin), 빈블라스틴(Vinblastine), 메토트렉세이트(Methotrexate) 및 젬시타빈(Gemcitabine)으로 이루어진 군에서 선택된 두 개 이상의 항암제를 유효성분으로 함유하는 신경섬유육종(neurofibrosarcoma; malignant peripheral nerve sheath tumor, MPNST) 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
바람직하게는, 상기 조성물은 이포스파마이드(Ifosfamide), 카보플라틴(Carboplatin) 및 에토포시드(Etoposide)를 유효성분으로 함유할 수 있으며, 상기 조성물은 이포스파마이드 1.8 mM, 카보플라틴 90 μM 및 에토포시드 30 μM을 함유할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다.
바람직하게는, 상기 조성물은 시스플라틴(Cisplatin), 빈블라스틴(Vinblastine) 및 메토트렉세이트(Methotrexate)를 유효성분으로 함유할 수 있으며, 상기 조성물은 시스플라틴 3 μg/ml, 빈블라스틴 10 nM 및 메토트렉세이트 300 nM을 함유할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다.
바람직하게는, 상기 조성물은 시스플라틴(Cisplatin) 및 젬시타빈(Gemcitabine)을 유효성분으로 함유할 수 있으며, 상기 조성물은 시스플라틴 1 μg/ml 및 젬시타빈 2.5 μM을 함유할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다.
상기 신경섬유육종은 총상신경섬유종 환자의 약 8~13%에서 악성화가 전개되어 유발되는 것으로 알려져 있다.
상기 항암제 조합은 신경섬유육종의 세포 증식을 억제하고, 세포의 사멸을 증가시키며, 정상 세포에 세포 독성을 야기하지 않아 부작용이 적고 신경섬유육종에 대해 우수한 치료 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명의 조성물이 약학 조성물인 경우, 투여를 위하여, 상기 기재한 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용할 수 있다. 상세하게는 제형화할 경우 통상 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형 제제로는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 이러한 고형 제제는 상기 유효성분 외에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 첨가하여 조제될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 과제를 포함한다. 비수성 용제 및 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 오일, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로솔, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 적합한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 시간에 따라 다르지만, 당 업자에 의해 적절하게 선택될 수 있는 바, 상기 조성물의 일일 투여량은 바람직하게는 0.001 mg/kg 내지 50 mg/kg이며, 필요에 따라 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다.
이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 세포 배양
정상 세포인 인간 슈반 세포(human schwann cell; HSC) (ScienCell Research Laboratories)와 신경섬유육종(neurofibrosarcoma; malignant peripheral nerve sheath tumor, MPNST) 세포인 S462 세포(American Type culture Collection, USA)는 10% 우태아혈청(fetal bovine serum; FBS, Hyclone Laboratories, Logan, USA), 페니실린(penicillin, 100 U/ml) 및 스트렙토마이신(streptomycin, 100 μg/ml)이 함유된 DEME 배지(Hyclone Laboratories, Logan, USA)를 이용하여 37℃, CO2 배양기에서 배양하였다.
실시예 2: 세포 생존율 분석
세포 생존율은 D-Plus™ CCK cell viability assay kit(DonglinLS, Korea)를 사용하여 분석하였다. 96 웰 플레이트에 세포를 웰 당 7×10³세포 농도로 접종하고 항암제 처리 후 24시간 동안 배양하였다. 이후 배지를 CCK 시약(10 μl)이 첨가된 배지(100 μl)로 교체하고 2시간 추가 배양하였다. ELISA 플레이트 리더기(Bio-Rad Model 680)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하여 세포 생존율을 분석하였다.
실시예 3: 제1형 신경섬유종증 악성화 이종이식 마우스 모델 제작 및 항암제 투여
3-1. 제1형 신경섬유종증 악성화 이종이식 마우스 모델 제작
신경섬유육종 S462 세포를 1,000 rpm으로 5분 동안 원심분리하여 상층액을 제거한 후 인산완충식염수(PBS)에 1×107 세포/ml 농도로 준비한 후, 8주령 누드 마우스 우측 등 부위의 피하에 0.1 ml씩 투여하여 신경섬유육종을 이식하였다. 종양의 부피를 측정하여 약 80~120 mm3에 도달한 개체들을 선별하고, 종양의 부피 및 체중을 기초로 하여 균등하게 군 분리(대조군, 실험군)를 수행하였다.
3-2. 항암제 투여
항암제는 하기와 같이 3가지 조합의 항암제를 사용하였다.
항암제 조합 ICE의 경우, 이포스파마이드(Ifosfamide), 카보플라틴(Carboplatin), 에토포시드(Etoposide)의 원액을 각각 취하고, 최종 농도가 이포스파마이드는 4 mg/ml, 카보플라틴은 1.33 mg/ml, 에토포시드는 0.33 mg/ml이 되도록 주사용수를 첨가하여 규정 농도로 조제하였다.
항암제 조합 CVM의 경우, 시스플라틴(Cisplatin)을 정밀 전자저울(CPA224S, Sartorius, Germany)로 칭량하여 조제병에 넣고, 최종 농도가 1 mg/ml이 되도록 주사용수를 첨가하여 조제하였다. 조제된 시스플라틴 및 메토트렉세이트(Methotrexate)를 일부 취하여 조제병에 넣고, 최종 농도가 시스플라틴은 0.15 mg/ml, 메토트렉세이트는 0.1 mg/ml이 되도록 주사용수를 첨가하여 규정 농도로 조제하였다. 빈블라스틴(Vinblastine)은 원액을 취하고, 최종 농도가 0.013 mg/ml이 되도록 주사용수를 첨가하여 규정 농도로 조제하였다.
항암제 조합 CG의 경우, 시스플라틴을 정밀 전자저울로 칭량하여 조제병에 넣고, 최종 농도가 1mg/ml이 되도록 주사용수를 첨가하여 조제하였다. 조제된 시스플라틴 및 젬시타빈(Gemcitabine)을 일부 취하여 조제병에 넣고, 최종 농도가 시스플라틴은 0.13 mg/ml, 젬시타빈은 3.33 mg/ml이 되도록 주사용수를 첨가하여 규정 농도로 조제하였다.
항암제 조합 ICE의 경우, 이포스파마이드(40 mg/kg)와 에토포시드(3.3 mg/kg)는 첫 주 5일간(월~금) 복강 투여하였고, 카보플라틴(13.3 mg/kg)은 첫 주 2일 간(월, 화) 복강 투여하였다.
항암제 조합 CVM의 경우, 시스플라틴(1.5 mg/kg)은 첫 주 화요일 1회 복강 투여하였고, 빈블라스틴(0.13 mg/kg)은 첫 주와 둘째 주 화요일 총 2회 복강 투여하였고, 메토트렉세이트(1 mg/kg)는 복강 투여 시, 근육 괴사 등의 부작용이 있기 때문에 첫 주와 둘째 주 화요일 총 2회 정맥 투여하였다.
항암제 조합 CG의 경우, 시스플라틴(1.3 mg/kg)은 첫 주 월요일 1회 복강 투여하였고, 젬시타빈(33.3 mg/kg) 첫 주와 둘째 주 월요일 총 2회 복강 투여하였다.
3-3. 종양 부피 분석
43일의 관찰 기간 동안 캘리퍼스(caliper)를 사용하여 종양의 장축(maximum length, L)과 단축(perpendicular width, W)을 주 2회 측정하고, 하기의 계산식 1에 대입하여 종양의 부피(tumor volume, TV)를 계산하였다.
[계산식 1]
TV(mm3)=L(mm)×W2(mm2)×1/2
실시예 4: 통계 분석
In vitro 그래프의 유의성 검증을 위해 Student's t-test를 사용하였다. In vivo 실험에서 얻어진 종양의 부피는 SAS(Version 9.3, SAS Institute Inc., USA)를 사용하여 검정하였다. 체중, 종양의 부피 및 종양의 중량은 Bartlett test를 실시하여 등분산성을 검정하였다(유의수준: < 0.05). 음성 대조군에 대한 각 시험군의 유의성을 확인하기 위해 Dunnett's t-test의 다중검정을 실시하였다(유의수준: 단측 < 0.05 및 < 0.01). 등분산성이 기각되면 Kruskal-Wallis test를 실시(유의수준: < 0.05)하여 유의성이 관찰되면 음성 대조군에 대한 각 시험군의 유의성을 확인하기 위해 Steel's test의 다중검정을 실시하였다.
실험예 1: NF1 악성종양 세포에서 항암제 조합에 의한 종양세포 사멸 효과
NF1 악성종양 세포(S462: 신경섬유육종 세포)와 정상 세포(HSC: 인간 슈반 세포)에 다양한 항암제를 단독 처리하여 24시간 동안 배양한 후 악성종양 세포의 생존율을 분석하였다.
그 결과, 도 7A 및 도 7B를 참조하여 보면, 정상 세포인 HSC 세포 보다 NF1 악성종양 세포에서 항암제에 의한 세포사멸이 더 민감하게 관찰되었으며, 이중 NF1 악성종양 세포의 생존율을 많은 감소시킨 항암제로서 시스플라틴(Cisplatin), 카보플라틴(Carboplatin), 에토포시드(Etoposide), 젬시타빈(Gemcitabine), 이리노테칸(Irinotecan)을 선별하였다.
상기 항암제 및 현재 다른 악성종양에서 임상적으로 많이 사용되고 있는 항암제들을 포함하여 ICE(이포스파마이드, 에토포시드, 카보플라틴), CVM(시스플라틴, 빈블라스틴, 메토트렉세이트), CG(시스플라틴, 젬시타빈)의 3가지 항암제 조합을 선별하였으며, NF1 악성종양 세포(S462)에서 세포 증식 억제 효과를 분석하였다.
그 결과, 도 8을 참조하여 보면, S462 세포에 이리노테칸 90 ㎍/ml 처리 시 또는 ICE(이포스파마이드 1.8 mM, 카보플라틴 90 μM, 에토포시드 30 μM), CVM(시스플라틴 3 μg/ml, 빈블라스틴 10 nM, 메토트렉세이트 300 nM), CG(시스플라틴 1 μg/ml, 젬시타빈 2.5 μM) 처리 시에 정상 세포인 HSC 세포에서 세포 독성을 나타내지 않아 부작용이 적은 반면, NF1 악성종양 세포에서 세포 증식을 효과적으로 저해하는 것을 확인하였다.
실험예 2: 제1형 신경섬유종증 악성화 이종이식 마우스 모델에서 항암제 조합에 의한 악성종양 억제 효과
상기 항암제 조합의 in vivo 효능을 확인하기 위해, NF1 악성종양 세포(S462)를 누드 마우스에 접종하여 발암을 유도시킨 제1형 신경섬유종증 악성화 이종이식 마우스 모델을 제작하였으며, 본 발명의 3가지 항암제 조합을 각각 복강 투여(메토트렉세이트는 정맥 투여)하고, 43일 동안 종양의 크기를 관찰하였다.
그 결과, 도 9A를 참조하여 보면, 3가지 항암제 조합(ICE, CVM 또는 CG)을 처리 시, 악성종양 조직의 증식이 억제되는 것을 확인함으로써 항암 효과의 증가를 확인할 수 있었다.
또한, 9B를 참조하여 보면, 43일째 적출한 종양의 부피 분석에서도 3가지 항암제 조합을 처리 시, 대조군과 비교하였을 때 유의하게 악성종양의 부피가 억제되는 것을 확인할 수 있었다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술한 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
본 발명의 범위는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (7)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 이포스파마이드(Ifosfamide), 카보플라틴(Carboplatin) 및 에토포시드(Etoposide)를 유효성분으로 함유하는 악성말초신경초종양(malignant peripheral nerve sheath tumor, MPNST) 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 제 3항에 있어서, 상기 악성말초신경초종양은 총상신경섬유종의 악성화로 유발되는 것을 특징으로 하는 악성말초신경초종양 예방 또는 치료용 약학 조성물.
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