KR101852336B1 - A feed additive composition comprising a mixture of lactic acid bacteria cultured with Industrial medium for shrimp and manufacturing method of thereof - Google Patents

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서주원
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명지대학교 산학협력단
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Abstract

The present invention relates to a feed additive composition comprising a lactic acid bacteria complex for shrimp, comprising: a first process of inoculating a lactic acid bacteria complex with whole milk powder and manufacturing a primary culturing solution; and a second process of inoculating the primary culturing solution in an industrial culture medium and manufacturing a secondary culturing solution. According to the present invention, provided are a feed additive composition comprising a lactic acid bacteria complex as an active ingredient or a manufacturing method thereof, thereby providing a feed additive composition for enhancing the immunity of cultured fish in an effective manner.

Description

산업배지로 배양된 유산균 복합체를 함유하는 새우용 사료 첨가제 조성물 및 그 제조방법. {A feed additive composition comprising a mixture of lactic acid bacteria cultured with Industrial medium for shrimp and manufacturing method of thereof}Feed additive composition for shrimp containing a lactic acid bacteria complex cultured in an industrial medium and method for producing the same. A feed additive composition comprising a mixture of lactic acid bacteria cultured with an industrial medium for shrimp and manufacturing method thereof,

본 발명은 산업배지로 배양된 유산균 복합체를 함유하는 새우용 사료 첨가제 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 산업배지로 배양된 유산균 복합체를 함유하며 새우의 면역 활성을 증진시키는 새우용 사료 첨가제 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다. The present invention relates to a feed additive composition for a shrimp containing a lactic acid bacteria complex cultured in an industrial medium, and more particularly, to a feed additive composition for shrimp containing a lactic acid bacterial complex cultured in an industrial medium and improving the immunological activity of the shrimp, And a manufacturing method thereof.

우리나라의 주요 양식 산업의 하나로 대하 양식이 시작되면서 지형적으로도 유리한 조건을 갖춘 서해안을 중심으로 새우 양식장이 개발되어 왔다. 그러나 양식장의 적정 수용 능력의 초과에 따른 양식 새우의 품질을 악화시켜왔고, 새우 폐사에 대한 심각한 피해가 발생되고 있는 실정이다. 현재 우리나라의 새우 양식장의 폐사율이 점차 증가되고 있는 것으로 분석되며, WSSV (White Spot Syndrome Virus, 흰 반점 증후군 바이러스), 높은 밀식 농도 및 양식장 저층부의 부영양화가 폐사의 주원인인 것으로 보고되고 있다. 특히 우리나라 새우 양식의 주종인 대하는 그 피해가 더욱 심각하며 이러한 새우의 폐사율을 낮추기 위해 축산용 약품, 항생제, 화학 소독제 등을 사용하고 있다. 그러나 이러한 화학 약품들의 과도한 사용은 최종 수확된 새우 내에 잔류하게 되어 상품가치가 떨어지게 하고, 새우 양식장에서 외부 바닷물(해수 순환 방식)로 위와 같은 화학약품 및 저층부의 부영양화 물질이 누출되어 새우 양식장 자체가 환경오염의 원인이 되게 한다. 이와 같은 문제를 해결하기 위해 현재 시판되고 있는 주요제품으로는 한약재 추출물 및 미생물에 의한 한약재 발효 산물 기반 제제가 있으나, 이는 새우 면역 증진 부분에 있어 기능이 매우 낮거나 단기적인 경우가 많고, 단독 미생물 생균제의 경우 새우 면역 증진에 관련된 부분 중 그 일부분에만 작용하여 효과가 일시적인 경우가 대부분이다. 또한, 사료에 첨가되는 유산균을 생균으로 적용하기 위해서는 열악한 환경 조건에서 가공 및 저장 중 발생하는 미생물의 사멸을 고려해야 하는 고질적인 문제점이 있어 저장되는 동안의 급격한 균수의 사멸로 보존 기간이 짧아 충분한 생균제를 섭취할 수 없다는 단점이 있다. As one of the major aquaculture industries in Korea, the shrimp farm has been developed around the west coast, which has favorable terrain conditions. However, the quality of the shrimp has been deteriorated due to the excess capacity of the shrimp farm, and serious damage has been caused to shrimp farmers. It is reported that the mortality rate of shrimp farms in Korea is gradually increasing. It is reported that WSSV (White spot syndrome virus, white spot syndrome virus), high concentration of wheat and eutrophication of the lower part of the farm are the main reasons of our company. Especially, the damage to the main species of shrimp farming in Korea is more severe and livestock chemicals, antibiotics and chemical disinfectants are used to lower the mortality rate of these shrimp. However, excessive use of these chemicals may result in residual value in the final harvested shrimp, and the chemicals and low-level eutrophication materials may leak out of the shrimp farm in the outer seawater (seawater circulation system) Cause pollution. In order to solve these problems, the main products currently marketed are herbal medicine extracts and herbal medicine fermented product-based preparations by microorganisms. However, in the shrimp immunization promotion part, functions are very low or short-term in many cases, In the case of shrimp immunity enhancement, only a part of the part related to promotion is most temporary. In addition, in order to apply the lactic acid bacteria added to the feed to the live bacteria, it is necessary to consider the microorganisms killed during processing and storage under harsh environmental conditions. Therefore, the probiotic bacteria are killed due to rapid bacterial death during storage, It can not be consumed.

유산균(lactic acid bacteria)은 기원전부터 인간이 이용하여 온 식품의 일종으로 영양적 가치뿐만 아니라 여러 가지 생리적인 효과가 있는 것으로 알려져 있으며, 장(腸)내의 상피세포에 부착하여 병원균 증식을 억제하고, 면역세포로 하여금 면역 능력을 조절하는 물질을 생성시키며, 병원균과 경합하여 병원균의 증식을 억제하고, 이차적으로는 항생제 치료나 외부환경 변화에 대해 장내 세균총의 항상성을 유지하게 하는 것으로 보고되어 있다. 그러나 이러한 유산균은 당질을 발효해 젖산(lactic acid)을 생성하는 세균으로서, 영양 요구성이 매우 까다롭고 각종 영양소를 배합하여 만든 인공 배지로 배양하여도 극미량의 한 가지 영양소만 결핍되어도 잘 자라지 않는다. 또한, 시판중인 젖산균 전용 배양 배지는 고가이어서 좀 더 저렴한 비용으로 제조가 가능하고, 균체의 회수가 용이할 뿐만 아니라 유산균 활성이 높은 균체를 얻을 수 있는 경제적으로 유리한 배양 배지가 필요하다. Lactic acid bacteria are known to have various physiological effects as well as nutritional value, which is a type of food that has been used by humans since BC. It is known to inhibit the growth of pathogens by attaching to epithelial cells in intestines, It has been reported that immune cells produce substances that regulate immune function, compete with pathogens to inhibit the growth of pathogens, and, secondarily, to maintain the homeostasis of bacterial flora for antibiotic treatment or external environmental changes. However, these lactic acid bacteria are lactic acid-producing bacteria that ferment carbohydrates and do not grow well even if they are cultured in an artificial medium made of various nutrients, even if only one trace nutrient is deficient. In addition, commercially available lactic acid bacteria-exclusive culture media are expensive, so that they can be manufactured at a lower cost and are economically advantageous in that they can not only recover the cells easily but also can obtain cells having high lactic acid bacterial activity.

이에 본 발명자는 새우의 면역 관련 단백질을 활성화 시켜 면역력을 증진시킬 수 있는 유산균 복합체와 산업 배지 등을 활용한 사료 첨가제 및 이의 제조 방법을 연구하였다.Accordingly, the present inventors have studied a feed additive utilizing a lactic acid bacterial complex and an industrial medium, which can enhance immunity by activating an immune-related protein of shrimp, and a preparation method thereof.

본 발명은 유산균 복합체를 특수 고안된 산업배지로 배양하여 새우의 면역력 증가에 효과가 있는 새우 사료 첨가제를 제조하는 것을 일 목적으로 한다. It is an object of the present invention to produce a shrimp feed additive which is effective in increasing the immunity of shrimp by cultivating a lactic acid bacteria complex with a specially designed industrial medium.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 산업배지로 배양된 유산균 복합체를 유효성분으로 함유하는 새우용 사료 첨가제 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a feed additive composition for shrimp comprising, as an active ingredient, a lactic acid bacteria complex cultured in an industrial medium.

바람직하게, 상기 유산균 복합체는 락토바실러스 락티스(Lactobacillus lactis), 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 플란타륨(Lactobacillus plantarum) 및 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroide)를 포함한다.Preferably, the lactic acid bacterial complex comprises Lactobacillus lactis , Lactobacillus acidophilus , Lactobacillus plantarum and Leuconostoc mesenteroide . The Lactobacillus lactis is preferably selected from the group consisting of Lactobacillus lactis , Lactobacillus acidophilus , Lactobacillus plantarum and Leuconostoc mesenteroide . .

또한, 상기 산업배지는 전체 중량을 기준으로, 글루코스　2 중량%, 락토오스 2 내지 10 중량 %, 유청단백질 4 내지 15 중량 %, 효모 추출물 2 중량 %, 암모늄 설페이트((NH4)2SO4) 0.1 내지 0.5 중량 %, 디포타슘 포스페이트(K2HPO4) 0.02 중량 %, 마그네슘 설페이트(MgSO4) 0.01 중량 %, 망가니즈 설페이트(MnO4S) 0.005 중량 %로 제조된다.The industrial culture medium may contain, based on the total weight, glucose 2 wt%, lactose 2 to 10 wt%, whey protein 4 to 15 wt%, yeast extract 2 wt%, ammonium sulfate ((NH 4 ) 2 SO 4 ) 0.1 to 0.5% by weight, di-potassium phosphate is made of a (K 2 HPO 4) 0.02% by weight, magnesium sulfate (MgSO 4) 0.01% by weight, 0.005% manganese sulfate (MnO 4 S).

또한, 상기 조성물은 새우의 면역 활성이 증진된다.In addition, the composition enhances the immunological activity of the shrimp.

또한, 본 발명은 새우용 사료첨가제 조성물의 제조방법으로서 유산균 복합체를 전지분유에 접종하여 1차 배양액을 제조하는 제1공정과, 상기 1차 배양액을 산업배지에 접종하여 2차 배양액을 제조하는 제2공정을 포함하는 것을 다른 특징으로 한다.The present invention also provides a method for producing a feed additive composition for shrimp comprising the steps of: a first step of inoculating a lactic acid bacteria complex into a whole milk powder to prepare a primary culture; and a step of inoculating the primary culture into an industrial culture to produce a secondary culture 2 process.

바람직하게 상기 2차 배양액에서 유산균체를 회수하여 탈지분유로 현탁액을 제조하는 제3공정과, 상기 현탁액을 동결건조하여 동결건조체를 제조하는 제4공정을 더 포함한다. A third step of recovering the lactic acid bacterium from the secondary culture liquid to prepare a suspension using skim milk, and a fourth step of lyophilizing the suspension to prepare a lyophilized product.

상기와 같은 본 발명에 따르면, 산업배지로 배양된 유산균 복합체를 유효성분으로 함유하는 새우용 사료첨가제 조성물 또는 이의 제조방법을 제공함으로써, 양식 새우들의 면역을 효과적으로 증진시키는 사료 첨가제 조성물을 제공할 수 있다.According to the present invention, it is possible to provide a feed additive composition for effectively enhancing the immunity of aquacultural shrimp by providing a feed additive composition for shrimp comprising a lactic acid bacteria complex cultured in an industrial medium as an active ingredient .

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 2차 배양액 내의 유산균 복합체 균 수를 측정한 것이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 동결건조체 내의 유산균 복합체 균 수를 측정한 것이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 흰다리 새우의 면역 유전자 발현량을 측정한 결과이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 흰다리 새우의 면역 증진 효과를 측정한 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 동결건조 분말이다. FIG. 1 is a graph showing the number of lactic acid bacteria-containing bacteria in a secondary culture according to an embodiment of the present invention.
2 is a graph showing the number of lactic acid bacteria-containing bacteria in a lyophilized product according to an embodiment of the present invention.
FIG. 3 shows the results of measurement of the amount of immunoglobulin expression of P. vannamei according to an embodiment of the present invention.
FIG. 4 is a graph illustrating the immunity enhancing effect of P. vannamei according to an embodiment of the present invention.
5 is a freeze-dried powder according to an embodiment of the present invention.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 일 실시예에 의한 산업배지로 배양된 유산균 복합체를 유효성분으로 함유하는 새우용 사료 첨가제 조성물을 제공할 수 있다.The present invention can provide a feed additive composition for shrimp comprising, as an active ingredient, a lactic acid bacteria complex cultured with an industrial medium according to an embodiment.

상기 유산균 복합체는 락토바실러스 락티스(Lactobacillus lactis), 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 플란타륨(Lactobacillus plantarum) 및 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroide)가 포함된 유산균 복합체 덩어리 일 수 있으며, 각 유산균이 1 : 1 : 1 : 1 로 혼합된 것일 수 있다. 새우 면역증진 기능에 있어, 유산균 종에 의해 크게 영향을 받을 수 있고, 각 유산균들의 비율도 새우 면역증진에 영향을 미칠 수 있다. 또한, 유산균 복합체의 동시 배양에 있어서, 한 종이 우점을 차지하게 되면 다른 종의 생장에 영향을 줄 수 있으므로, 산업배지의 조성이 매우 중요하다.Wherein the lactic acid bacteria complex is selected from the group consisting of Lactobacillus lactis , Lactobacillus acidophilus , Lactobacillus plantarum and Leuconostoc mesenteroide , , And each lactic acid bacterium may be mixed in a ratio of 1: 1: 1: 1. In the shrimp immunity enhancement function, it can be greatly influenced by the lactic acid bacteria species, and the proportion of each lactic acid bacteria may also affect the shrimp immunity enhancement. Also, in the co-culture of the lactic acid bacteria complex, the composition of the industrial culture medium is very important since one species dominates the growth of other species when one species is dominant.

상기 산업배지는 전체 중량을 기준으로, 글루코스　2 중량 %, 락토오스 2 내지 10 중량 %, 유청단백질 4 내지 15 중량 %, 효모 추출물 2 중량 %, (NH4)2SO4 0.1 내지 0.5 중량 %, K2HPO4 0.02 중량 %, MgSO4 0.01 중량 %, MnO4S 0.005 중량 %를 포함하여 제조되는 것이 바람직하다. 상기 산업배지 제조의 각 조성 범위를 벗어나게 될 경우, 유산균 복합체의 동시 배양을 실시함에 있어서 한 종이 우점을 차지하게 될 수 있고, 다른 종의 생장에 영향을 줄 수 있으며, 유산균 복합체내의 각 유산균들의 비율이 변동될 수 있다. The industrial culture medium contains 2% by weight of glucose, 2 to 10% by weight of lactose, 4 to 15% by weight of whey protein, 2% by weight of yeast extract, 0.1 to 0.5% by weight of (NH 4 ) 2 SO 4 , 2 HPO 4 0.02 wt%, MgSO 4 0.01 wt%, and MnO 4 S 0.005 wt%. When the composition of the industrial medium is deviated from the respective composition ranges, it may be one of the dominant factors in the co-cultivation of the lactic acid bacteria complex, may affect the growth of other species, and the ratio of each lactic acid bacterium May vary.

상기 조성물은 새우의 면역 활성이 증진되는 것일 수 있으며, 새우의 면역 관련 단백질로 BGBP(beta-glucan binding protein), proPO(Prophenoloxidase), Crustin, Penaeidin 3a, Lysozyme 및 SOD (Superoxide dismuatase)등이 있으나 이에 한정하는 않는다. 새우의 면역은 척추동물과는 달리 항체가 없어, 혈액에 존재하는 다양한 면역 관련 단백질에 의해 조절되므로, 새우의 면역 관련 단백질이 활성 됨에 따라 새우의 면역 활성이 증진됨을 확인 할 수 있다. The composition may be one which promotes the immune activity of shrimp. Examples of the immunological proteins of shrimp include BGBP (beta-glucan binding protein), proPO (prophenoloxidase), Crustin, Penaeidin 3a, Lysozyme and SOD (superoxide dismutase) Do not limit. Unlike vertebrate animals, shrimp immunity is controlled by various immune - related proteins present in the blood without antibodies. Therefore, it can be confirmed that the immunological activity of shrimp improves the immunological activity of shrimp.

또한, 본 발명의 일 실시예에 의한 유산균 복합체를 전지분유에 접종하여 1차 배양액을 제조하는 제1공정과, 상기 1차 배양액을 산업배지에 접종하여 2차 배양액을 제조하는 제2공정을 포함하는 새우용 사료첨가제 조성물의 제조방법을 제공할 수 있다.  In addition, the method includes a first step of inoculating a lactic acid bacteria complex according to an embodiment of the present invention into a powdered milk to prepare a primary culture liquid, and a second step of inoculating the industrial culture medium into a secondary culture liquid The present invention provides a method for producing a feed additive composition for shrimp.

상기 조성물의 제조 방법은 상기 2차 배양액에서 유산균체를 회수하여 탈지분유로 현탁액을 제조하는 제3공정과, 상기 현탁액을 동결건조하여 동결건조체를 제조하는 제4공정을 더 포함할 수 있다. The method may further include a third step of recovering the lactic acid bacterium from the secondary culture liquid to prepare a suspension using skim milk, and a fourth step of lyophilizing the suspension to prepare a lyophilized product.

본 발명의 일 실시예에 의한 조성물의 제조방법을 더 구체적으로 설명하면, 제 1공정은 유산균 복합체를 멸균된 전지분유에 접종하여 1차 배양을 실시하는 단계로, 바람직하게 1차 배양 완료는 전지분유의 단백질 성분이 응고된 상태인 것으로서, 단백질 성분이 분리되어 배양액 상층부에 떠오르게 되었을 때 1차 배양이 완료된 것일 수 있다. The method for producing the composition according to one embodiment of the present invention will be described in more detail. In the first step, the lactic acid bacteria complex is inoculated into sterilized whole milk powder, and the primary culture is performed. Preferably, The protein component of the powdered milk is in a solidified state. When the protein component is separated and floated on the upper part of the culture liquid, the primary culture may be completed.

제 2공정은 1차 배양된 유산균 복합체를 특수 고안된 산업배지에 접종하여 2차 배양을 실시하는 단계로, 1차 배양이 완료되어 전지분유의 단백질 성분이 응고된 상태가 되면 특수하게 고안된 산업배지에 이를 접종하고 공기를 주입하며 2차 배양을 완료하는 것일 수 있다. The second step is a step of inoculating the primary cultured lactic acid bacteria complex into a specially designed industrial culture medium and performing a secondary culture. When the primary culture is completed and the protein component of the whole powdered milk is in a solidified state, a specially designed industrial culture medium It may be to inoculate it, inject air and complete the secondary culture.

제 3공정은 2차 배양액에서 회수한 유산균 복합체를 멸균 탈지 분유에 현탁하는 단계로, 산업 배지로 2차 배양된 유산균 복합체를 원심분리를 통해 회수하고, 멸균 탈지분유에 회수한 유산균을 현탁하는 것일 수 있다. 바람직하게 멸균 탈지분유는 유산균체의 무게와 동일하게 첨가하여 현탁 할 수 있다.The third step is a step of suspending the lactic acid bacteria complex recovered in the secondary culture in a sterilized skim milk powder. The lactic acid bacteria complex, which has been secondary cultured with the industrial medium, is recovered by centrifugation and the recovered lactobacillus is suspended in the sterilized skim milk . Preferably, the sterilized skim milk powder may be added in the same amount as the weight of the lactic acid bacterium and suspended therein.

제 4공정은 제 3공정에서 제조된 현탁액을 동결건조체로 제조하는 것으로, 유산균체가 현탁된 멸균 탈지분유 현탁액을 70 ℃에서 1차 동결건조를 실시하고, 진공상태에서 2차 동결건조를 실시하는 것일 수 있다. 바람직하게, 1차 동결건조는 70 ℃에서 1일간 동결하는 것일 수 있으며, 2차 동결건조는 진공상태에서 6일 동안 실시 할 수 있으며, 더욱 바람직하게 2차 동결건조는 -20 ℃에서 1일, -10 ℃에서 1일, 0 ℃에서 1일, 10 ℃에서 1일, 20 ℃에서 2일간 실시 할 수 있다. 이는 미생물이 동결건조가 실시되는 동안 사멸하는 것을 최대한 막기 위한 최적의 조건일 수 있다. 또한, 상기 본 발명의 일 실시예에 의한 조성물의 형태를 한정하지 않으나, 액상 형태의 조성물일 경우 새우 양식장에 투입이 되었을 때 새우가 관련 미생물을 섭취할 가능성이 매우 낮아져, 관련 기능을 발휘하기가 어려울 수 있는 반면, 동결건조체의 경우 새우 양식장에서 사용하는 주요 분말 형태의 사료와 혼합이 비교적 자유로운 형태로 제조되어 바람직하다.In the fourth step, the suspension prepared in the third step is prepared as a lyophilized product, and the sterilized skim milk suspension in which the lactic acid bacteria are suspended is subjected to first lyophilization at 70 ° C and second lyophilization in a vacuum state . Preferably, the first lyophilization may be for 1 day at 70 ° C, the second lyophilization may be for 6 days in vacuum, more preferably the second lyophilization is carried out at -20 ° C for 1 day, At -10 ° C for 1 day, at 0 ° C for 1 day, at 10 ° C for 1 day, and at 20 ° C for 2 days. This may be an optimal condition for preventing microorganisms from being killed to the greatest extent during the lyophilization. In addition, although the form of the composition according to one embodiment of the present invention is not limited, when the composition is in a liquid form, the possibility that the microorganism is consumed by the shrimp is very low when put into a shrimp farm, On the other hand, in the case of lyophilized product, it is preferable that the main powder type feed used in the shrimp farm is mixed with a relatively free form.

이하 본 발명의 실시예에 대하여 첨부된 도면을 참조하여 그 구성 및 작용을 설명한다. 이 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.DETAILED DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS The present invention will now be described in detail with reference to the accompanying drawings. It will be apparent to those skilled in the art that this embodiment is for illustrative purposes only and that the scope of the present invention is not construed as being limited by these embodiments.

실시예Example 1.  One. 산업배지를Industrial badge 이용한 유산균 복합체의 배양 Culture of lactic acid bacteria complex used

유산균 복합체를 포함하는 발효 마유 1 g (wet weight)을 1 L의 멸균된 15% 전지분유(w/v)에 접종을 하고 2일간 상온에서 1차 배양을 실시하고 완료한다. 하기 [표 1]의 성분 표로 제조된 10 L 멸균 산업배지에 1차 배양액을 접종한 후, 에어펌프를 이용하여 0.3 vvm으로 공기필터를 거친 공기를 주입하면서, 3일간 상온에서 2차 배양을 실시하여 완료한다.1 g of fermented horse milk containing lactic acid bacteria complex is inoculated into 1 L of sterilized 15% whole milk powder (w / v) and primary cultivation is carried out at room temperature for 2 days. The primary cultures were inoculated in a 10 L sterile industrial medium prepared from the composition table shown in [Table 1], followed by secondary culturing at room temperature for 3 days while air was passed through the air filter at 0.3 vvm using an air pump .

유산균 복합체 배양을 위한 산업배지 성분표 Ingredient of industrial medium for culture of lactic acid bacteria complex 성분ingredient 함유량 (%, w/v)Content (%, w / v) GlucoseGlucose 22 LactoseLactose 88 Whey ProteinWhey Protein 1010 Yeast ExtractYeast Extract 22 Ammonium SulfateAmmonium Sulfate 0.20.2 Dipotassium PhosphateDipotassium Phosphate 0.020.02 Magnesium SulfateMagnesium Sulfate 0.010.01 Manganese SulfateManganese Sulfate 0.0050.005

2차 배양액 내의 유산균 복합체 균수를 측정하기 위하여 배양액을 멸균된 0.85% NaCl에 희석하고 MRS 한천배지에 도말 후 37 ℃에서 2일간 배양하여 유산균수를 측정하고, 3.5X109 C.F.U./ml으로 분석된 것으로 실시한다. (도 1 참조)The culture broth was diluted in 0.85% NaCl, sterilized in MRS agar medium, and cultured at 37 ° C for 2 days. The number of lactic acid bacteria was measured and assayed at 3.5 × 10 9 CFU / ml Conduct. (See Fig. 1)

실시예Example 2. 사료 첨가제 조성물 제조  2. Preparation of feed additive composition

산업배지 내에 2차 배양이 완료된 유산균 복합체를 30분 동안 4 ℃에서 원심분리(6,000 g)를 실시하여 유산균 복합체를 회수하고, 회수된 유산균 복합체를 동일한 무게의 멸균된 10% 탈지분유로 현탁한다. 10% 탈지분유와 유산균 복합체가 현탁된 현탁액을 -70 ℃에서 1일간 동결하고, 진공상태에서 20 ℃에서 1일, -10 ℃에서 1일, 0 ℃에서 1일, 10 ℃에서 1일, 20 ℃에서 2일을 조건으로 하여 동결건조기에 넣어 동결건조체를 확보한다. 동결건조체 내의 유산균 복합체의 균 수를 측정하기 위하여 동결건조체를 멸균된 0.85% NaCl에 넣어 현탁 또는 희석하고 MRS 한천배지에 도말 후 37 ℃에서 2일간 배양한다. 그 후 유산균수를 측정하며, 6X1010 C.F.U./ml으로 분석된 것으로 실시한다. (도 2 참조)The lactic acid bacteria complex is centrifuged (6,000 g) at 4 ° C for 30 minutes in the industrial medium, and the recovered lactic acid bacteria complex is suspended in sterilized 10% non-fat dry powder of the same weight. The suspensions in which the 10% skim milk powder and the lactic acid bacteria complex were suspended were frozen at -70 ° C for 1 day and stored in a vacuum for 1 day at 20 ° C, 1 day at -10 ° C, 1 day at 0 ° C, 1 day at 10 ° C, 20 Lt; 0 > C for 2 days to obtain a lyophilized product. In order to measure the number of bacteria in the lyophilized bacterial complex in the lyophilized product, the lyophilized product is suspended or diluted in sterilized 0.85% NaCl, and the product is stained on MRS agar medium and cultured at 37 ° C for 2 days. After that, the number of lactic acid bacteria is measured and analyzed with 6 × 10 10 CFU / ml. (See Fig. 2)

실시예Example 3.  3. 흰다리White leg 새우의 면역 증진 효과 분석 Analysis of immunity enhancement effect of shrimp

본 발명의 일 실시예에 의해 제조한 새우용 사료 첨가제 조성물로 흰다리 새우의 면역증진 효과를 측정하기 위해서 다음과 같이 실시한다. 새우용 사료 첨가제 조성물인 동결건조체를 분말화 하여 사용하고, 무처리군과 급여사료의 0.2, 0.4 및 0.8% 동결건조 분말를 처리한 처리군으로 총 4개의 그룹으로 구분하고, 각 군은 2개의 그룹으로 구성하여 한 그룹당 15 마리의 흰다리 새우를 배치한다. 각 그룹마다 1달 동안, 15마리의 흰다리 새우 총 무게에서 3%의 해당하는 사료의 양을 상기에 언급한 본 발명의 동결건조체 분말과 혼합하여 하루에 3번씩 나누어 급여한다.In order to measure the immunity enhancing effect of P. vannamei shrimp with the feed additive composition for shrimp prepared according to one embodiment of the present invention, the following procedure is carried out. The lyophilized composition of the feed additive composition for shrimp was powdered, treated, treated with 0.2, 0.4 and 0.8% freeze-dried powder of the untreated group and the feed, and each group was divided into 4 groups, And place 15 white shrimp per group. For one month for each group, an amount of 3% of the corresponding feed in the total weight of 15 P. vannamei is mixed with the lyophilized powder of the present invention mentioned above and divided into three times a day.

1달 후, 새우 회수하여 면역 증진 효과를 측정하고(표 2 참고), 새우 간??장을 액체질소를 부어 얼린 후 호모게나이저(homogenizer)로 분쇄하여, 트리졸(Trizol) 용액으로 토탈 RNA를 추출하고 클로로폼(Chloroform)을 이용하여 순도 높은 토탈 RNA를 최종 확보한다. 새우 면역지표 인 BGBP, proPO, Crustin, Penaeidin-3a, Lysozyme 및 SOD의 유전자를 RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reation)로 [표 2]의 DNA 프라이머로 증폭하여 아가로스 겔 전기영동 (Agarose gel electrophoresis)을 통해 위 유전자 발현량을 최종 분석한다.After 1 month, the shrimp was collected to measure the immunity-enhancing effect (see Table 2), and the shrimp liver was poured with liquid nitrogen, frozen, homogenized with a homogenizer, and the total RNA And the total RNA of high purity is finally obtained by using chloroform (Chloroform). The genes of BGBP, proPO, Crustin, Penaeidin-3a, Lysozyme and SOD, which are shrimp immunity indicators, were amplified by RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reation) using the DNA primers shown in Table 2 and subjected to agarose gel electrophoresis ) To analyze the expression level of the gastric gene.

새우 면역 유전자 증폭을 위한 DNA primerDNA primer for shrimp immunogen gene amplification 유전자gene DNA primerDNA primer BGBPBGBP 5'-CGTGAGGTTCCCCAGTATGG-3'5'-CGTGAGGTTCCCCAGTATGG-3 '
5'-TTCGGTTTGGATGGCTAAAG-3'5'-TTCGGTTTGGATGGCTAAAG-3 ' proPOproPO 5‘-GGAATTGTTTTACTACATGCATCAGC-3’
5‘-GGAACAAGTCATCCACGAGCTT-3’5'-GGAATTGTTTTACTACATGCATCAGC-3 '
5'-GGAACAAGTCATCCACGAGCTT-3 ' CrustinCrustin 5'-ATTCTGTGCGGCCTCTTTAC-3'
5'-ATCGGTCGTTCTTCAGATGG-3'5'-ATTCTGTGCGGCCTCTTTAC-3 '
5'-ATCGGTCGTTCTTCAGATGG-3 ' Penaeidin-3aPenaeidin-3a 5'-AGCCTCACCTGCAGAGACCA-3'5'-AGCCTCACCTGCAGAGACCA-3 '
5'-AATCAGGATCRCAGKCTCTTCAC-3'5'-AATCAGGATCRCAGKCTCTTCAC-3 ' LysozymeLysozyme 5'-TTCGGGAAGTGCGAATTCG-3'
5'-AATGGAAACCCTTGGTGAC-3' 5'-TTCGGGAAGTGCGAATTCG-3 '
5'-AATGGAAACCCTTGGTGAC-3 ' SODSOD 5'-GAGAAGAAGTTGGCTGAGCT-3'
5'-ATGTTGGGTCCAGAAGATGG-3'5'-GAGAAGAAGTTGGCTGAGCT-3 '
5'-ATGTTGGGTCCAGAAGATGG-3 '

그 결과, 도 1을 참고하여, 6개의 유전자 모두 본 실시예에 의한 새우용 사료 첨가제 조성물의 동결건조 분말 처리 농도에 따라 유의성있게 증가하는 것을 확인하였다. As a result, with reference to FIG. 1, it was confirmed that all six genes were significantly increased according to the concentration of the freeze-dried powder of the feed additive composition for shrimp according to the present example.

이상, 본 발명내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 정의된다고 할 것이다.Having described specific portions of the present invention in detail, it will be apparent to those skilled in the art that this specific description is only a preferred embodiment and that the scope of the present invention is not limited thereby. It will be obvious. Accordingly, the actual scope of the present invention will be defined by the appended claims and their equivalents.

Claims (7)

산업배지로 배양된 유산균 복합체를 유효성분으로 함유하고,
상기 산업배지는 전제 중량을 기준으로, 글루코스 2 중량%, 락토오스 2 내지 10 중량 %, 유청 단백질 4 내지 15 중량 %, 효모 추출물 2 중량 %, 암모늄 설페이트 0.1 내지 0.5 중량 %, 디포타슘 포스페이트 0.02 중량%, 마그네슘 설페이트 0.01 중량 %, 망가니즈 설페이트 0.005 중량 %를 포함하고,
상기 유산균 복합체는 락토바실러스 락티스, 락토바실러스 아시도필루스, 락토바실러스 플란타륨 및 류코노스톡 메센테로이데스의 복합체 이고,
상기 락토바실러스 락티스, 락토바실러스 아시도필루스, 락토바실러스 플란타륨 및 류코노스톡 메센테로이데스의 비율은 1:1:1:1인 것을 특징으로 하는 새우용 사료 첨가제 조성물.
Which comprises as an active ingredient a lactic acid bacteria complex cultured in an industrial medium,
The industrial culture medium contains 2 wt% of glucose, 2 to 10 wt% of lactose, 4 to 15 wt% of whey protein, 2 wt% of yeast extract, 0.1 to 0.5 wt% of ammonium sulfate, 0.02 wt% of diphosphate phosphate, 0.01% by weight of magnesium sulfate, and 0.005% by weight of manganese sulfate,
Wherein said lactic acid bacterial complex is a complex of Lactobacillus lactis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum and Leuconostoc mesenteroides,
Wherein the ratio of Lactobacillus lactis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, and Leuconostomercenteroids is 1: 1: 1: 1.
삭제delete 삭제delete 제 1항에 있어서,
상기 조성물은 새우의 면역 활성이 증진되는 것을 특징으로 하는 새우용 사료 첨가제 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the composition enhances the immunological activity of the shrimp.
유산균 복합체를 전지분유에 접종하여 1차 배양액을 제조하는 제1공정과 상기 1차 배양액을 산업배지에 접종하여 2차 배양액을 제조하는 제2공정을 포함 하고,
상기 산업배지는 전제 중량을 기준으로, 글루코스　2 중량 %, 락토오스 2 내지 10 중량 %, 유청 단백질 4 내지 15 중량 %, 효모 추출물 2 중량 %, 암모늄 설페이트 0.1 내지 0.5 중량 %, 디포타슘 포스페이트 0.02 중량 %, 마그네슘 설페이트0.01 중량 %, 망가니즈 설페이트 0.005 중량 %를 포함하고,
상기 유산균 복합체는 락토바실러스 락티스, 락토바실러스 아시도필루스, 락토바실러스 플란타륨 및 류코노스톡 메센테로이데스의 복합체 이고 ,
상기 락토바실러스 락티스, 락토바실러스 아시도필루스, 락토바실러스 플란타륨 및 류코노스톡 메센테로이데스의 비율은 1:1:1:1인 것을 특징으로 하는 새우용 사료 첨가제 조성물의 제조방법.
A first step of producing a primary culture solution by inoculating a lactic acid bacteria complex into a whole milk powder, and a second step of preparing a secondary culture solution by inoculating the primary culture with an industrial culture medium,
The industrial culture medium contains 2 wt% of glucose, 2 to 10 wt% of lactose, 4 to 15 wt% of whey protein, 2 wt% of yeast extract, 0.1 to 0.5 wt% of ammonium sulfate, 0.02 wt% of diphosphate phosphate, 0.01% by weight of magnesium sulfate, and 0.005% by weight of manganese sulfate,
Wherein said lactic acid bacterial complex is a complex of Lactobacillus lactis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum and Leuconostoc mesenteroides,
Wherein the ratio of Lactobacillus lactis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, and Leuconostocce tendonide is 1: 1: 1: 1.
제 5항에 있어서,
상기 2차 배양액에서 유산균체를 회수하여 탈지분유로 현탁액을 제조하는 제3공정과,
상기 현탁액을 동결건조하여 동결건조체를 제조하는 제4공정을 더 포함하는 새우용 사료첨가제 조성물의 제조방법.
6. The method of claim 5,
A third step of recovering the lactic acid bacterium from the secondary culture to prepare a suspension with skim milk powder,
And a fourth step of lyophilizing the suspension to prepare a lyophilized product.
제 5항 내지 제 6항 중 어느 한 항의 방법에 의하여 제조된 새우사료 첨가제.A shrimp feed additive prepared by the method of any one of claims 5 to 6.
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102161025B1 (en) 2020-05-04 2020-09-29 신안꾸지뽕나무 영농조합법인 Shrimp feed composition comprising Leaves and Steams of Cudrania tricuspidata ferment liquids and powder
KR20210051420A (en) * 2019-10-30 2021-05-10 명지대학교 산학협력단 Functional feed additive for enhancement of piglet immunity comprising kefir cultured with industrial medium

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20060113150A (en) * 2005-04-29 2006-11-02 (주)바이오벤 Media for culturing lactic acid bacteria used for preparing high concentrated gaba
KR101604633B1 (en) * 2015-08-28 2016-03-18 주식회사 락토메이슨 Medium composition for culturing lactic acid bacteria and producing method of powder of lactic acid bacteria using the same
KR20160096876A (en) * 2015-02-06 2016-08-17 한국해양자원연구소 주식회사 어업회사법인 Microorganism agent for crustacea aquaculture and a method for improving productivity of crustacea aquaculture using the same

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20060113150A (en) * 2005-04-29 2006-11-02 (주)바이오벤 Media for culturing lactic acid bacteria used for preparing high concentrated gaba
KR20160096876A (en) * 2015-02-06 2016-08-17 한국해양자원연구소 주식회사 어업회사법인 Microorganism agent for crustacea aquaculture and a method for improving productivity of crustacea aquaculture using the same
KR101604633B1 (en) * 2015-08-28 2016-03-18 주식회사 락토메이슨 Medium composition for culturing lactic acid bacteria and producing method of powder of lactic acid bacteria using the same

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20210051420A (en) * 2019-10-30 2021-05-10 명지대학교 산학협력단 Functional feed additive for enhancement of piglet immunity comprising kefir cultured with industrial medium
KR102393420B1 (en) * 2019-10-30 2022-05-02 명지대학교 산학협력단 Functional feed additive for enhancement of piglet immunity comprising kefir cultured with industrial medium
KR102161025B1 (en) 2020-05-04 2020-09-29 신안꾸지뽕나무 영농조합법인 Shrimp feed composition comprising Leaves and Steams of Cudrania tricuspidata ferment liquids and powder

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