KR101817084B1

KR101817084B1 - 열처리에 의한 활성형 인삼류 및 참당귀추출정제물을 유효성분으로 함유하는 온도 변화에 따른 인체 스트레스 감소용 약학 조성물

Info

Publication number: KR101817084B1
Application number: KR1020140180298A
Authority: KR
Inventors: 강재선; 김보슬; 이서현; 스레스타 아마타 사밀라
Original assignee: 경성대학교 산학협력단
Priority date: 2014-12-15
Filing date: 2014-12-15
Publication date: 2018-01-11
Also published as: KR20160072539A

Abstract

본 발명은, 열처리에 의한 활성형 인삼류 및 참당귀추출정제물을 유효성분으로 함유하는 온도 변화에 따른 인체 스트레스 감소용 약학 조성물에 있어서, 활성형 인삼류 및 참당귀추출정제물을 유효성분으로 함유하는 온도 변화에 따른 세포자살유도효소 발현억제 및 항세포사멸효소의 발현증가에 의한 인체스트레스 감소용 약학 조성물에 있어서, 상기 활성형 인삼류는, 인삼, 산삼, 산양삼, 수인삼, 화기삼, 전칠삼, 홍삼 및 이의 혼합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 110 내지 125℃의 온도에서 10 내지 20분간 열처리가 이루어진 것이며, 상기 참당귀추출정제물은, 원료인 참당귀를 40메시(mesh) 이하로 잘게 분쇄하여 수분함량이 1 내지 10%가 되도록 건조하고, 참당귀 100중량부에 대해 200 내지 500중량부의 알코올을 첨가하여 진탕 하에서 추출한 것이고, 상기 열치리된 활성형 인삼류 100중량부에 대해 상기 참당귀추출정제물은 5 내지 20중량부로 혼합되어 이루어지는 열처리에 의한 활성형 인삼류 및 참당귀추출정제물을 유효성분으로 함유하는 것을 기술적 요지로 한다. 이에 의해 온도변화에 따른 스트레스에 의한 세포자살유도 효소의 발현을 감소시키고, 항세포사멸효소의 발현을 증가시킬 수 있는 효과를 제공한다.

Description

열처리에 의한 활성형 인삼류 및 참당귀추출정제물을 유효성분으로 함유하는 온도 변화에 따른 인체 스트레스 감소용 약학 조성물 {The phamaceutical compositions for decreased stress due to temperature changes which contain active ginseng and angelica gigas nakai extract}

본 발명은 활성형 인삼류 및 참당귀추출정제물을 유효성분으로 함유하는 인체스트레스 감소용 약학 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 열처리 된 활성형 인삼류 및 참당귀추출정제물이 혼합된 조성물을 이용하여 온도변화에 따른 스트레스 증가에 의한 세포자살유도 효소의 발현 증가 및 항세포사멸효소의 발현억제 현상을 변화시킴으로써 온도 변화에 따른 세포자살유도효소 발현억제 및 항세포사멸효소의 발현증가를 향상시키는 인체스트레스 감소용 약학 조성물에 관한 것이다.

지구온난화(Global warming)에 의해 지구의 연평균 기온이 지속적으로 상승하고 있으며, 기온 상승에 의해 노인 인구의 사망률이 증가하고 있는 추세이다. 이러한 지구온난화를 방지하기 위하여 다양한 노력을 하고 있음에도 불구하고 근본적인 해결책이 존재하지 않아 기온은 계속 상승할 것으로 보여지고 있다. 지구의 기온이 지속적으로 상승하게 되면 온도 스트레스에 의해 체력이 약한 노인의 세포자살이 유도되기 때문에 노인의 사망률이 증가하게 된다. 따라서 노인의 사망률을 감소시키기 위해서는 온도 스트레스에 의한 세포자살을 줄이는 것이 중요하다.

일반적으로 다양한 약리활성을 가진 것으로 알려진 생약 중 대표적인 것으로 활성형 인삼류(Active ginseng, Actigin)와 참당귀추출정제물(Angelica gigas Nakai Extract, Agnex)이 있다. 인삼류는 인삼, 산삼, 산양삼, 수인삼, 화기삼, 전칠삼, 홍삼 등이 있으며 이를 이용하여 제조된 활성 인삼류와, 참당귀추출정제물의 경우는 체내 흡수가 용이할 뿐만 아니라 운동수행능력을 강화시키는 데 뛰어난 효과가 있다. 특히 이러한 활성 인삼류와 참당귀추출정제물을 함께 투여하는 경우에는 운동수행능력이 매우 향상되는 효과를 얻을 수 있다.

따라서 이와 같이 활성형 인삼류인 액티진 및 참당귀추출정제물인 아그넥스의 혼합물을 이용하여 온도변화 스트레스에 의한 세포자살유도 방지용 약학 조성물을 제조할 경우 온도가 증가하더라도 세포자살유도를 최소화시키고, 항세포사멸효소의 발현을 증가할 것으로 기대된다.

대한민국 등록특허공보(등록번호: 10-1427571호) : 인삼열매 추출물을 함유하는 환경스트레스 저항성 증대식품 조성물 대한민국 등록특허공보(등록번호: 10-0475197호) : 스트레스 해소에 효과적인 건강보조식품 및 이의 제조방법. 대한민국 공개특허공보(공개번호: 10-2009-0123121호) : 고온 스트레스 방어용 조성물 및 이의 제조방법.

따라서 본 발명의 목적은 열처리된 활성형 인삼류 및 참당귀추출정제물을 포함한 조성물을 이용하여 온도변화에 따른 스트레스에 의한 세포자살유도 효소의 발현을 감소시키고, 항세포사멸효소의 발현을 증가시키는 열처리된 활성형 인삼류 및 참당귀추출정제물을 유효성분으로 함유하는 온도 변화에 따른 세포자살유도효소 발현억제 및 항세포사멸효소의 발현증가에 의한 인체스트레스 감소용 약학 조성물을 제공하는 것이다.

상기한 목적은, 활성형 인삼류 및 참당귀추출정제물을 유효성분으로 함유하는 온도 변화에 따른 세포자살유도효소 발현억제 및 항세포사멸효소의 발현증가에 의한 인체스트레스 감소용 약학 조성물에 있어서, 상기 활성형 인삼류는, 인삼, 산삼, 산양삼, 수인삼, 화기삼, 전칠삼, 홍삼 및 이의 혼합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 110 내지 125℃의 온도에서 10 내지 20분간 열처리가 이루어진 것이며, 상기 참당귀추출정제물은, 원료인 참당귀를 40메시(mesh) 이하로 잘게 분쇄하여 수분함량이 1 내지 10%가 되도록 건조하고, 참당귀 100중량부에 대해 200 내지 500중량부의 알코올을 첨가하여 진탕 하에서 추출한 것이고, 상기 열치리된 활성형 인삼류 100중량부에 대해 상기 참당귀추출정제물은 5 내지 20중량부로 혼합되어 이루어지는 열처리에 의한 활성형 인삼류 및 참당귀추출정제물을 유효성분으로 함유하는 온도 변화에 따른 인체 스트레스 감소용 약학 조성물을 제공하는데 그 기술적 특징이 있다.

여기서, 상기 활성형 인삼류는, 파쇄하고 알코올로 현탁 후, 구연산, 소금, 슈크랄로스, 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 만니톨, 전분을 더 포함하여 이루어지고, 상기 활성형인삼류 1000g에 대해 구연산 158g, 소금 114g, 슈크랄로스 1.99g, 스테아린산 마그네슘 152g, 이산화규소 76g, 만니톨 5045g, 전분 5286g을 포함하는 것이 바람직하다.

또한, 상기 약학 조성물은 경구투여제 형태이며, 상기 경구투여제는, 과립형, 제형, 가루형, 시럽형, 캡슐형 및 이의 혼합으로 이루어진 군으로 이루어지는 것이 바람직하다.

상술한 본 발명의 구성에 따르면 열처리된 활성형 인삼류 및 참당귀추출정제물을 포함한 조성물을 이용하여 온도변화에 따른 스트레스에 의한 세포자살유도 효소의 발현을 감소시키고, 항세포사멸효소의 발현을 증가시켜 인체 스트레스를 감소시킬 수 있는 효과를 제공한다.

도 1은 본 발명의 실시예에 따른 조성물 제조방법의 순서도이고,
도 2는 Western blotting의 실험 순서도이고,
도 3 및 도 4는 Western blotting에 의한 실험결과를 나타낸 사진 및 그래프이다.

이하 도면을 참조하여 본 발명의 실시예에 따른 열처리에 의한 활성형 인삼류 및 참당귀추출정제물을 유효성분으로 함유하는 온도 변화에 따른 인체 스트레스 감소용 약학 조성물(이하, 'AGS'라 함)을 상세히 설명한다.

활성형 인삼류(Active ginseng)를 의미하는 액티진(Actigin)을 얻기 위해 인삼류를 세척한 후 고압증기멸균기로 멸균 및 열처리를 한다. 여기서 인삼류는 인삼, 산삼, 산양삼, 수인삼, 화기삼, 전칠삼, 홍삼 및 이의 혼합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것이 바람직하다.

열처리는 110 내지 125℃의 온도에서 10 내지 20분간 이루어지며, 3 내지 4회 반복 수행되는 것이 바람직하다. 열처리 온도가 110℃ 미만일 경우 열처리가 제대로 이루어지지 않으며, 125℃를 초과할 경우 인삼류의 변형이 발생할 수 있다. 또한 열처리를 반복 수행할 때 2회 미만 열처리를 할 경우 비교적 고가인 인삼류의 낭비가 발생할 수 있으며, 5회를 초과할 경우 활성성분의 분해로 이어져 활성성분의 함량이 낮아지는 문제점이 있다. 이와 같은 공정을 통해 얻어지는 것이 액티진(Actigin)이다.

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참당귀추출정제물(Angelica gigas Nakai Extract)을 의미하는 아그넥스(Agnex)는, 원료인 참당귀를 40메시(mesh) 이하로 잘게 분쇄하여 수분함량이 1 내지 10%가 되도록 건조한다. 수분함량이 1% 미만으로는 건조시키기 용이하지 못하며, 10%를 초과할 경우 이후의 단계에서 악영향을 미칠 수 있다. 분쇄한 참당귀에 참당귀 100중량부에 대해 200 내지 500중량부의 알코올을 첨가하여 진탕 하에서 추출하고, 이를 농축하여 점성이 높은 참당귀액을 얻는다. 여기에는 액뿐만 아니라 일부 잔여물이 포함되어 있다.

일차적으로 참당귀액 100중량부에 대해 알코올을 200 내지 500중량부를 다시 넣어 참당귀액 주성분을 용해시키고 이를 -10 내지 -30℃에서 10시간 정도 방치한다. 이와 같이 알코올에 참당귀액을 재용해하게 되면 주성분이 아닌 부성분이나 잔여물이 알코올에 용해되지 않고 따로 존재한다. 방치 온도가 -10℃보다 높을 경우 원하는 성분 이외의 다른 성분이 함께 녹을 우려가 있으며, -30℃보다 온도가 낮을 경우 주성분이 불순물과 함께 침전하는 문제가 발생할 수 있다. 여기서 참당귀액 주성분은 데커신(Decursin), 데커시놀(Decursinol), 데커시놀 안젤레이트(Decursinol angelate) 및 이의 혼합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것이 바람직하다.

방치를 통해 알코올에 용해되지 않고 침전된 침전물을 원심분리를 통해 제거한 후 상등액을 얻고, 상등액을 증발 건조하여 주성분 농축액을 얻는다. 이러한 주성분 농축액을 이전 단계인 알코올에 용해-원심분리-증발건조 과정을 반복 수행하여 순도 70% 이상의 참당귀 주성분을 포함하는 아그넥스를 얻는다.

여기서 알코올은 약전용 또는 주정 에탄올(Ethanol)인 것이 가장 바람직하다.

액티진을 완전히 파쇄하여 알코올로 현탁하고, 구연산, 소금, 슈크랄로스, 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 만니톨 및 전분을 추가로 첨가하여 액티진혼합물을 제조한다. 여기에 에탄올에 아그넥스가 현탁된 아그넥스혼합물을 첨가하고, 이를 교반 등을 통해 균일하게 혼합한 AGS혼합물을 제조한다. 이후에, AGS혼합물을 건조한 후 과립기를 이용하여 과립을 제조하고, 제조된 과립은 60℃에서 10 내지 20시간 정도 거조한 후, 80℃에서 추가적으로 2시간 이상 건조하였다. 이렇게 제조된 액티진/아그넥스 혼합조성물을 AGS라 한다. 여기서 AGS는 경구투여제로 제조되며, 이러한 경구투여제는 과립형, 제형, 가루형, 시럽형, 캡슐형이 바람직하다.

경구투여제로 제조된 AGS는 액티진 100중량부에 대해 아그넥스가 5 내지 20중량부의 비율로 혼합된 것이 바람직하며, 투여용량은 25 내지 50mg/kg인 것이 바람직하다. 아그넥스가 5중량부 미만일 경우 아그넥스의 효과가 미미하며, 20중량부를 초과할 경우 건조가 잘 되지 않으며 또한 과립형성 등에 지장을 초래할 수 있다. 또한 투여용량이 25mg/kg 미만일 경우 약학 효능이 잘 나타나지 않으며, 50mg/kg를 초과할 경우 복용량이 많아 소비자의 불편을 초래할 수 있다.

<실시예 1> : AGS 제조

활성형 산양산삼 액티진 1000g을 완전히 파쇄하여 에탄올 1L에 현탁하였다. 여기에 구연산 158g, 소금 114g, 슈크랄로스 1.99g, 스테아린산 마그네슘 152g, 이산화규소 76g, 만니톨 5045g, 전분 5286g을 첨가하여 액티진혼합물을 제조하였다. 이와 같은 성분 함량은 다양한 실험을 통해 확인된 효능을 나타낼 수 있는 최적의 함량이다. 여기에 순도 72%인 아그넥스 167g을 에탄올 100ml에 녹여 첨가하여 액티진혼합물과 아그넥스를 교반을 통해 균일하게 혼합하고, 이를 건조한 후 과립기를 이용하여 과립기를 이용하여 과립을 제조하였다. 제조된 과립은 60℃에서 16시간 이상 건조한 후, 80℃에서 추가적으로 2시간 이상 건조하였다.

<실시예 2> : Western blotting

SD 랫(Spargue dawley rat)을 3그룹으로 나누어 실험을 실시하였고 각 그룹은 대조군(Control)은 4마리, 음성대조군(Negative control)은 5마리, 실험군인 AGS 치료군(Treatment control)은 5마리로 실험을 실시하였다. 실험은 SPF(Specific pyrogen free) 챔버에서 실시하였으며, 입수 1주일은 적응기간이었고 대조군은 온도 23℃, 상대습도 55%에서 5주간 생육하였고, 실험군 및 음성대조군은 오전 10시부터 오후 2시까지 온도 32℃, 상대습도 75%에서 실시하였고 자유식이를 하였다. 마지막주인 5주째에는 3군 모두 오전 10시부터 오후 2시까지 물의 복용을 제한하였다. 이와 같은 실험은 표 1에 정리되어 있다.

그룹	쥐(마리)	온도(℃)	습도(%)	복용
대조군	4	23	55	-
음성대조군	5	32	70	-
AGS 치료군	5	32	70	AGS

5주 후 SD 랫을 모두 안락사시킨 후 장기를 적출하였다. 도 2에 도시된 바와 같이 적출된 간을 이용하여 용해용 완충제인 라이시스 버퍼(Lysis buffer)에서 균질화하였으며 이후 10분동안 원심분리에 의하여 상등액을 분리하고 단백질의 분석을 실시하기 위해 96-well plate를 이용하여 단백질량을 측정하였다. 그 후 SDS-PAGE 전기영동 장치를 이용하여 단백질들을 분리하고 Western blotting을 통해 막(membrane)으로 단백질을 옮겨 1차항체(Primary antibody)를 통해 항체반응을 확인하는데, 막에 단백질을 옮긴 후 이를 각각 컨트롤인 Actin, 세포자살유도 효소인 Fas, Bax, Caspase-3 및 항세포사멸 효소인 Bcl-2에 반응시켰다. 그 후 이를 세척하고 2차항체(Secondary antibody)를 통해 항체반응을 각각 확인하였으며 그 결과는 도 3 및 도 4에 나타나 있다.

도 3 및 도 4에 나타난 결과와 같이, 대조군(CON)을 100%으로 하였을 때 대조군에 비하여 고온처리된 음성대조군(NC)은 세포자살유도 효소인 Fas, Bax, Caspase-3가 각각 175%, 290%, 120%가 증가하는 결과를 보였으며, 항세포사멸 효소인 Bcl-2는 90% 수준으로 감소하는 결과를 보여주었다. 그러나 AGS 처리군에서는 음성대조군에 비하여 Fas 60%, Bax 160%, Caspase-3 80%로 큰 폭으로 감소하였고 Bcl-2는 130%로 증가하였다.

이러한 결과는 AGS가 기후변화로 인한 생체 내 변화에서 세포자살유도 효소의 발현을 낮추고, 항세포사멸 효소의 발현을 높임으로써 세포의 생존을 높이는 것을 확인할 수 있다. 나아가 온도 상승에 의한 기후변화에 기인한 사망률을 감소시키는 데 기여할 수 있다.

Claims

활성형 인삼류 및 참당귀추출정제물을 유효성분으로 함유하는 온도 변화에 따른 세포자살유도효소 발현억제 및 항세포사멸효소의 발현증가에 의한 인체스트레스 감소용 약학 조성물에 있어서,
상기 활성형 인삼류는,
인삼, 산삼, 산양삼, 수인삼, 화기삼, 전칠삼, 홍삼 및 이의 혼합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 110 내지 125℃의 온도에서 10 내지 20분간 열처리가 3 내지 4회 반복 수행되어 이루어진 것이며,
상기 참당귀추출정제물은,
원료인 참당귀를 40메시(mesh) 이하로 잘게 분쇄하여 수분함량이 1 내지 10%가 되도록 건조하고, 참당귀 100중량부에 대해 200 내지 500중량부의 알코올을 첨가하여 진탕 하에서 추출한 것이고,
상기 열처리된 활성형 인삼류 100중량부에 대해 상기 참당귀추출정제물은 5 내지 20중량부로 혼합되어 이루어지며,
상기 참당귀추출정제물은,
추출한 것을 농축하여 점성이 높은 참당귀액을 일차로 수득하고, 다시 일차적으로 추출된 참당귀액 100중량부에 대해 알코올을 200 내지 500중량부를 다시 넣어 참당귀액 주성분을 용해시키고 이를 -10 내지 -30℃에서 방치하여 얻어진 용액으로써 주성분은 데커신(Decursin), 데커시놀(Decursinol), 데커시놀 안젤레이트(Decursinol angelate) 및 이의 혼합으로 이루어진 것을 특징으로 하는 열처리에 의한 활성형 인삼류 및 참당귀추출정제물을 유효성분으로 함유하는 온도 변화에 따른 인체 스트레스 감소용 약학 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 활성형 인삼류는,
파쇄하고 알코올로 현탁 후, 구연산, 소금, 슈크랄로스, 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 만니톨, 전분을 더 포함하여 이루어지는 혼합물인 것을 특징으로 하는 열처리에 의한 활성형 인삼류 및 참당귀추출정제물을 유효성분으로 함유하는 온도 변화에 따른 인체 스트레스 감소용 약학 조성물.
제 2항에 있어서,
상기 혼합물은,
상기 활성형인삼류 1000g에 대해 구연산 158g, 소금 114g, 슈크랄로스 1.99g, 스테아린산 마그네슘 152g, 이산화규소 76g, 만니톨 5045g, 전분 5286g을 포함하는 것을 특징으로 하는 열처리에 의한 활성형 인삼류 및 참당귀추출정제물을 유효성분으로 함유하는 온도 변화에 따른 인체 스트레스 감소용 약학 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 조성물은 경구투여제 형태이며,
상기 경구투여제는, 과립형, 제형, 가루형, 시럽형, 캡슐형 및 이의 혼합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 열처리에 의한 활성형 인삼류 및 참당귀추출정제물을 유효성분으로 함유하는 온도 변화에 따른 인체 스트레스 감소용 약학 조성물.
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