KR101816087B1 - 유류 분해능을 갖는 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주, 이를 이용한 유류 분해 방법 및 상기 균주의 선별 방법 - Google Patents

유류 분해능을 갖는 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주, 이를 이용한 유류 분해 방법 및 상기 균주의 선별 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 유류 분해능을 갖는 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주에 관한 것으로서, 상기 균주는 유류오염 토양에서 분리한 수많은 균주들을 대상으로 분리, 선별, 동정의 단계를 거쳐 얻어졌다. 상기 균주는 고농도 디젤에서도 분해속도가 빠르고, 우수한 분해능을 나타내는 것을 특징으로 한다. 상기 균주는 유류에 오염된 토양에서 안정적이며, 경제적이고, 2차 오염이 없는 환경 친화적인 방법으로 유류를 제거하는데 효과가 있다.

Description

유류 분해능을 갖는 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주, 이를 이용한 유류 분해 방법 및 상기 균주의 선별 방법 {Pseudomonas aeruginosa TSKW-U6 strain having oil resolution ability, a method of oil degradation using the same, and a method of selecting the strain}
본 발명은 유류 분해능을 갖는 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주, 이를 이용한 유류 분해 방법 및 상기 균주의 선별 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 유류에 오염된 토양으로부터 분리한 미생물 중 유류 분해능과 유류분해속도를 측정하여 가장 우수한 것으로 선별된 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주 및 상기 균주를 이용한 유류 분해 방법에 관한 것이다.
우리나라는 1960년대 초반만 해도 에너지원이 주로 석탄계통이었으나 제1차 경제개발 5개년 계획의 핵심 사업으로 정유공장을 최초로 건설하여 가동한 이후, 산업의 고도화와 생활수준의 향상에 따라 석유는 우리나라의 주종 에너지원의 위치를 고수하고 있다. 또한, 기계문명의 발달로 인하여 유류의 사용이 늘고 있고 유류저장고, 자동차등의 운반기기 및 주유소등의 확산에 따른 오염위험 요소가 늘어남에 따라, 유류에 의한 토양오염이 대랑 발생하고 있으며 최근에는 누적된 오염토양으로 인한 VOC 배출, 지하수오염 등으로 토양오염이 광역적으로 확산되는 추세에 있다.
유류는 생산과정, 운반, 저장 등의 경로뿐만 아니라 사고로 인한 유출 등으로 인하여 토양에 유입된다. 이러한 석유계 탄화수소 화합물(이하, 유류라고 함)이 환경을 오염시키는 주요 오염원이 되고 있다. 따라서 유류로 오염된 토양을 복원하기 위한 방법들이 제안되어 왔다. 상기 방법은 크게 물리적 및 화학적 처리기술, 열 처리기술 및 생물학적 처리기술의 세 가지로 나뉠 수 있다. 물리적 및 화학적 처리기술은 토양증기추출법, 토양세척법, 고형 및 안정화법 등이 있으며, 열처리기술은 소각, 열분해, 휘발, 열탈착법이 있다. 생물학적 처리기술은 토양경작법, 바이오파일(biofile), 생물반응법(bioreactor), 식물에 의한 복원법 등이 있다.
미생물의 분해 활성을 이용하여 유류로 오염된 토양을 비용이 적게 들면서 환경 친화적으로 복원시키는 생물복원법이 주목을 받고 있다. 유류 성분을 분해할 수 있는 세균, 곰팡이, 효모, 미세조류 등의 미생물을 이용한 생물복원법은 경제성과 효율성에서 이점이 있어 널리 사용되고 있다. 이에 따라, 유류 분해 능력이 우수한 새로운 미생물 균주를 탐색하여 유류로 오염된 토양을 정화하기 위한 시도가 계속되고 있다.
이러한 미생물을 이용한 생물학적인 처리방법에는 굴착 후 현지에서 생물분해로 처리하는 on-situ 방법과 굴착하지 않고 원위치에서 미생물 주입 또는 공기 주입으로 미생물을 활성화 시켜 오염물을 분해 제거하는 in-situ 방법이 있다. 미생물에 의한 유기물질 분해는 세포 내부에 존재하는 효소의 산화 또는 환원 반응에 의해 이루어지며 일반적으로 분자량이 적은 물질이 큰 물질에 비해 분해가 빨리 이루어진다. 그러나 유기물질의 특성에 따라 미생물에 의한 분해 정도가 달라지므로 생물학적 처리 방법을 모든 유기오염물질에 적용할 수 있는 것은 아니다. 현재로서는 휘발성 및 수용성이 큰 저분자 유기오염물에 제한적으로 적용되고 있는 실정이다.
한국 특허 공개번호 제2002-0060009호는 슈도모나스 속 CU1 균주를 이용하여 원유 1%(v/w)로 오염된 토양을 7일간 처리한 결과 토양 내 57.17%의 원유를 분해했다고 기재하고 있고, 한국 특허 공개번호 제2004-0098213호는 TPH가 10,000ppm인 토양에서 67%의 디젤 분해율을 나타내는 슈도모나스 제네코-1 균주를 기재하고 있는 등 균주의 선별에 관한 연구가 활발히 이루어지고 있는 실정이다. 그러나 생물학적 처리방법에 있어서 보다 짧은 기간에 높은 유류분해효율을 취득하는 것이 중요한 과제임에도 불구하고 균주의 선별에 있어 유류분해속도에 관한 고려는 다소 부족하여 오염된 토양의 정화에 있어서 경제성의 문제가 대두되고 있다.
이에 따라, 본 발명자들은 실질적인 유류오염토양의 정화에 있어서 그 처리기간을 단축시키기 위해서는 유류 분해능과 유류 분해속도 및 산소요구도의 세 가지 성능을 감안해야 하는 사실에 착안하여, 유류에 오염된 토양으로부터 미생물을 분리하여 그로부터 유류 분해능과 유류 분해속도가 우수하고 산소요구도가 낮은 미생물을 찾고자 노력한 결과, 슈도모나스 속의 신규한 균주가 오염된 토양의 유류를 효과적으로 분해하는 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
KR 2002-0060009 A KR 2004-0098213 A
본 발명의 목적은 유류 분해능과 유류 분해 속도가 우수하고 산소요구도가 낮은 슈도모나스 아에루지노사 ( Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 균주를 이용하여 토양의 유류오염물질을 분해하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 유류에 오염된 토양으로부터 우수한 유류분해능을 갖는 미생물을 분리하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여 유류 분해능을 갖는 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주(수탁번호 KCTC18562P)를 제공한다.
상기 균주는 산소요구도가 낮은것을 특징으로 한다.
상기 유류는 디젤, 가솔린, 항공유, 등유 및 가황유로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 한다.
유류 오염 토양에 상기 슈도모나스 아에루지노사(Pseudomonas aeruginosa ) TSKW-U6 균주를 접종하여 유류 오염 토양의 유류를 분해하는 방법을 제공한다.
오염토양의 채집단계; 액체상 점증 농도 스크리닝 단계; 평판배양 단계; 액체 배지에 배양 후 디젤 분해효율을 확인하는 단계; 를 포함하는 것을 특징으로 하는, 상기 슈도모나스 아에루지노사 ( Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주를 선별하는 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주는 유류분해능과 유류분해속도가 우수하다.
상기 균주는 산소요구도가 낮아 정치배양 상태에서도 우수한 유류 분해능을 나타낸다.
상기 균주는 국내의 유류 오염된 토양에서 선별된 것으로서 국내의 토양에 접종할 경우 자생능력이 뛰어나며 생태계의 혼란을 야기하지 않는다.
도 1a 및 도 1b는 본 발명에서 선별된 균주의 16S rRNA 유전자 염기서열, 공지된 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) 균주의 16S rRNA 유전자 염기서열을 함께 배열하여 상동성 검사를 한 결과이다.
본 발명의 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주는 미생물 기탁에 관한 부다페스트조약에 의한 국제기탁기관인 생명공학연구소(KCTC:Korean Collection for Type Cultures)에 2017년 3월 30일에 제5799호로서 기탁하였으며 기탁번호는 KCTC18562P이다. 하기에 그 선별 방법 및 특징을 상세하게 설명한다.
1.슈도모나스 아에루지노사 ( Pseudomonas aeruginosa ) TSKW -U6 균주의 특성
본 발명의 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주는 도 1a 및 도 1b와 같은 16S rRNA 유전자 부분 염기서열을 갖는다. 또한, 하기의 표 1의 형태 및 생화학적 특성을 특징으로 한다.
Morphological and biochemical characteristics of marine bacterium Pseudomonas aeroginosa TSKW-U6.
Characteristics
Result
Gram stain
Cell size
Cell shape
Oxidase
Rhamnose
N-acetylglucosamine
D-ribose
Inositol
Sucrose
Maltose
Itaconate
Suberate
Malonate
Acetate
D, L-lactate
L-alanine
5-ketogluconate
Glycogen
3-hydroxy-benzoate
L-serine
Mannitol
D-glucose
Salicine
D-melibiose
L-fucose
D-sorbitol
L-arabinose
propionate
Caprate
Valerate
Citrate
Histidine
2-ketogluconate
3-hydroxy-butylrate
p-4-hydroxy-benzoate
L-proline 		(-)
0.5 x 1.75 ㎛
Coccobacilli
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슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주는 우수한 유류분해능을 나타내는 것으로, 상기 유류는 디젤, 가솔린, 항공유, 등유 및 가황유로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다. 더욱 바람직하게는 상기 균주는 디젤에 대하여 우수한 분해능을 나타낸다. 구체적으로, 상기 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주를 20,000ppm 디젤이 함유된 최소배지에 3%(w/w)의 농도로 접종하여 30℃, 150rpm으로 96시간 배양한 후의 디젤 분해율은 90~94%이다. 또한, 각각 5,000ppm, 10,000ppm, 15,000ppm, 20,000ppm의 디젤로 오염시킨 토양에서 상기 균주의 유류 분해율은 4주 경과 후 각각 96%, 93%, 95%, 94%로 분해능이 우수하다.
또한, 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주는 통성혐기성균의 성질을 가져 산소요구도가 낮은 상태에서도 우수한 유류 분해능을 나타낸다. 구체적으로, 상기 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주를 20,000ppm 디젤이 함유된 최소배지에 3%(w/w)의 농도로 접종하여 30℃에서 96시간 정치배양한 후의 디젤분해율은 68-72%이다.
2. 슈도모나스 아에루지노사 ( Pseudomonas aeruginosa ) TSKW -U6 균주의 선별 및 동정
상기 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주를 선별, 동정하고 그 유류분해능을 확인하는 과정은 바람직하게는 (1) 유류에 오염된 지역으로부터 오염된 토양을 채취하는 단계, (2) 액체상 점증농도 스크리닝법으로 유류분해 균주를 선별하는 단계, (3) 고형화 배지에 평판배양하여 유류분해 균주를 선별하는 단계, (4) 디젤포함 액체배지에서 배양 후 디젤 분해효율을 확인하는 단계, (5) 최종적으로 선발된 우수 균주를 선별하여 동정하는 단계를 포함한다. 다만, 본 발명은 이에 한정되는 것은 아니며 예컨대, 상기 각 단계 중 일부는 경우에 따라 생략될 수도 있고, 각 단계의 세세한 방법은 변동이 가능하며, 본 특허에 제한을 받지는 않는다. 상기 본 발명의 구성을 구체적으로 설명하면 다음과 같다.
첫 번째 단계는 유류분해 효율이 높은 미생물을 분리하기 위해 주유소 주변이나 유류저장고 주변과 같이 유출된 유류에 오염된 토양을 채취하는 단계를 포함한다. 바람직하게는 오랜기간 동안 유류 오염에 노출되어 있는 폐쇄된 주유소 저장탱크 주변과 군부대의 오래된 유류저장고 주변의 토양에서 채취된 것으로서 오염원의 주성분으로 디젤을 포함하는 것으로 할 수 있다.
두 번째 단계는 액체상 점증농도 스크리닝법으로 유류분해 균주를 선별하는 단계를 포함한다. 상기의 유류오염 토양을 디젤이 함유된 최소영양 액체 배지에 일정시간 배양 후, 그 배양액 일부를 더 높은 농도의 디젤이 함유된 다른 최소영양 액체 배지에 접종 후 배양한다. 이런 과정을 디젤의 농도를 높여가며 반복한다.
세 번째 단계는 상기 두 번째 단계에서 최종 배양한 배양액 일부를 고형화 배지에 도말하여 평판배양을하며 유류분해 균주를 선별하는 단계를 포함한다.
네 번째 단계는 상기 세 번째 단계에서 선별된 균주를 디젤을 포함하는 액체 배지에 접종 후 디젤 분해효율을 확인하는 단계를 포함한다.
다섯 번째 단계는 상기 네 번째 단계에서 분해효율이 우수한 것으로 확인된 균주를 선별하여 동정하는 단계로서 16S rRNA 시퀀싱(sequencing) 단계를 포함한다.
3. 슈도모나스 아에루지노사 ( Pseudomonas aeruginosa ) TSKW -U6 균주를 오염토양에 접종하여 정화하는 방법.
본 발명은 상기 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주를 유류 오염토양에 접종함으로써 오염토양의 유류를 분해하는 방법을 제공한다. 상기 유류는 특별히 한정되지 않으나 디젤, 가솔린, 항공유, 등유, 가황유를 포함할 수 있다. 본 발명의 실험예 3에 따르면 각각 5,000ppm, 10,000ppm, 15,000ppm, 20,000ppm의 디젤로 오염된 토양에서 상기 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa)TSKW-U6 균주의 유류 분해율은 4주 경과 후 각각 96%, 93%, 95%, 94%로 빠른 속도의 우수한 디젤 분해능을 나타낸다.
이하 실시예를 통하여 본 발명은 더욱 상세하게 설명한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> 오염토양의 채취 및 균주 분리
경기도 안양시, 군포시, 의왕시의 오랜기간 동안 유류 오염에 노출된 토양인 폐쇄된 주유소 저장탱크 주변과 군부대의 오래된 유류저장고 주변에서 토양시료를 채취하여 체로 곱게 쳐서 4℃ 냉장고에 보관하였다.
그 후, 우수한 유류분해균을 신속하게 선별하기 위하여 액체상 점증 농도 스크리닝법을 개발하여 시행하였다. 첫째, 상기에서 냉장고에 보관된 유류 오염토양의 시료 10g을 500mL 플라스크에 넣은 후 최소배지(Yeast extract 0.1g/L, (NH4)2SO4 1g/L, NaH2PO4 0.2g/L, MgSO4·7H2O 0.25g/L, MnSO4·H2O 0.02g/L, CaCl2 0.05g/L) 200mL에 디젤을 5,000ppm을 넣고 30℃, 180rpm으로 24시간 배양 후 1일간 정치시켰다. 둘째, 상기 1차 배양액을 흔들어 혼화시킨 후 20mL을 취하여 10,000ppm의 디젤을 넣은 최소배지 200mL에 접종을 하고 30℃, 180rpm으로 24시간 배양 후 1일간 정치시켰다. 셋째, 이러한 반복적인 과정을 디젤농도 15,000ppm, 20,000ppm에서 순차적으로 하여 30℃, 180rpm으로 24시간 배양하였다.
상기의 최종 배양액 0.3 mL을 취하여 디젤 20,000ppm을 넣은 1.5% 한천 최소배지(agar 15g/L, Yeast extract 0.1g/L, (NH4)2SO4 1g/L NaH2PO4 0.2g/L, MgSO4·7H2O 0.25g/L, MnSO4·H2O 0.02g/L, CaCl2 0.05g/L)에 도말하였다. 균주가 도말 된 한천배지 페트리디쉬를 30℃ 인큐베이터에서 배양하면서 시간별로 콜로니를 형성하면서 계속 성장하는 균주를 관찰하며 3종(U6, G3, G6)을 선별하였다.
균주 24hr 48hr 72hr 96hr 120hr 144hr 168hr
U2 - - + ++ ++ + +
U6 + ++ +++ ++++
A5 - + + ++ ++ + +
A8 - - + ++ + + +
A9 - - + ++ + + +
G3 + ++ +++ +++
G6 - ++ +++ +++
G8 - - + ++ + + +
상기 표 2에서 +는 성장성을 의미하고, +++ 이상을 선별하였다.
< 실험예 1> 액체배양을 통한 균주의 유류분해능 측정
500mL 플라스크에 최소배지(Yeast extract 0.1g/L, (NH4)2SO4 1g/L, NaH2PO4 0.2g/L, MgSO4·7H2O 0.25g/L, MnSO4·H2O 0.02g/L, CaCl2 0.05g/L) 200mL을 채우고 디젤을 20,000ppm 넣은 후 종배양한 균주를 3% (w/w)로 접종하였고, 30℃, 150rpm으로 96시간 배양 후 잔존하는 디젤을 분석함으로써 각 균주의 분해효율을 하기의 표3에 나타내었다.
균주 균주명 분해효율 (%)
U6 Pseudomonas aeruginosa TSKW-U6 90~94
G3 TSKW-G3 78~82
G6 TSKW-G6 71~76
상기 표에서 알 수 있듯이 U6 균주의 분해효율이 최고 94%로 제일 우수하였고 이에 따라 균주 명칭을 TSKW-U6로 명명하고 16S rRNA sequencing에 의해 Pseudomonas aeruginosa 로 동정 되어 균주를 Pseudomonas aeruginosa TSKW-U6로 명명하였다.
< 실험예 2> 정치배양을 통한 균주의 유류분해능 측정
500mL 플라스크에 최소배지(Yeast extract 0.1g/L, (NH4)2SO4 1g/L, NaH2PO4 0.2g/L, MgSO4·7H2O 0.25g/L, MnSO4·H2O 0.02g/L, CaCl2 0.05g/L) 200mL을 채우고 디젤을 20,000ppm 넣은 후 종배양한 균주를 3% (w/w) 접종하였고, 30℃에서 정치배양(2시간간격으로 2~3회 흔들기)하면서 96시간 후에 잔존하는 디젤을 분석함으로써 각 균주의 분해효율을 하기의 표4 에 나타내었다.
균주 균주명 분해효율 (%)
U6 Pseudomonas aeruginosa TSKW-U6 68~72
G3 TSKW-G3 49~54
G6 TSKW-G6 51~55
상기 표에서 알 수 있듯이 정치배양 상태에서 Pseudomonas aeruginosa TSKW-U6 균주의 분해효율이 68~72% 로 제일 우수하였다.
< 실험예 3> 디젤오염토양에서 Pseudomonas aeruginosa TSKW -U6 균주의 유류분해능
경기도 의왕시의 야산에서 마사토 토양을 채취한 뒤 체로 고르고 오토클레이브에서 습열멸균(121℃, 30분)하고 열풍건조기에서 80℃로 건조시킨 후, 500g x 4개로 나누어 4각 플라스틱상자(14cm x 14cm x 5cm)에 넣고 시료토양을 준비하였다. 상기의 시료토양에 디젤 5,000ppm, 10,000ppm, 15,000ppm, 20,000ppm을 고르게 오염시키고 배양된 Pseudomonas aeruginosa TSKW-U6 균주를 3% (w/w)로 접종 후 최소배지를 토양에 적당량 분무하고 고루 섞이도록 하여 토양의 수분 보유능이 35~40%를 유지하도록 하였다. 총 4주간 진행하였으며 1주일 간격으로 10g의 시료를 채취하여 잔존디젤의 농도를 측정하였다. 디젤분해율에 대한 실험결과를 하기의 표 5에 표시하였다.
초기농도 1주 2주 3주 4주
5,000ppm 2,400
(52.0%)		 760
(84.8%)		 250
(95.0%)		 200
(96.0%)
10,000ppm 5,600
(46.0%)		 2,850
(71.5%)		 1,150
(88.5%)		 700
(93.0%)
15,000ppm 7,100
(52.7%)		 3,500
(76.7%)		 1,650
(89.0%)		 750
(95.0%)
20,000ppm 8,500
(57.5%)		 3,950
(80.2%)		 2,100
(89.5%)		 1,200
(94.0%)
(단위: ppm, 분해율%)
상기 표에서 알 수 있듯이, 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주의 실제 토양에서의 디젤 분해율은 여러 디젤 초기 농도에서 4주 이내에 90%이상으로, 빠른 분해속도와 우수한 분해능을 나타낸다.
한국생명공학연구원 KCTC18562P 20170330

Claims (5)

  1. 유류 분해능을 갖는 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주 (수탁번호 KCTC18562P).
  2. 삭제
  3. 제 1항에 있어서, 상기 유류는 디젤, 가솔린, 항공유, 등유 및 가황유로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 슈도모나스 아에루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주.
  4. 유류 오염 토양에 제 1항의 슈도모나스 아에루지노사 ( Pseudomonas aeruginosa) TSKW-U6 균주를 접종하여 유류 오염 토양의 유류를 분해하는 방법.
  5. 삭제
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100481700B1 (ko) 2002-06-04 2005-04-11 동명산업 주식회사 유류 분해 균에 의한 유류 오염토양의 호기성 처리 방법
KR101710044B1 (ko) 2015-06-22 2017-02-24 (주)신대양 유류 분해능을 가지는 신규 슈도모나스 속 sdy3 균주 및 이를 이용한 유류 분해 방법

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100481700B1 (ko) 2002-06-04 2005-04-11 동명산업 주식회사 유류 분해 균에 의한 유류 오염토양의 호기성 처리 방법
KR101710044B1 (ko) 2015-06-22 2017-02-24 (주)신대양 유류 분해능을 가지는 신규 슈도모나스 속 sdy3 균주 및 이를 이용한 유류 분해 방법

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102320530B1 (ko) * 2021-01-14 2021-11-03 측천산업(주) 유류 분해능을 나타내는 슈도모나스 아에루지노사 균주 및 이를 이용한 유류 오염 토양의 정화 방법

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