KR101805015B1 - Skin external composition containing Citron Extract, Ulmus Davidiana root Extract, and Salicornia herbacea Extract - Google Patents

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Abstract

본 발명은 유자 추출물, 유근피 추출물 및 함초 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 2종 이상의 혼합성분을 유효성분으로 함유함으로써 인체 세포에 존재하는 히알루론산 합성효소(hyaluronic acid synthase2, HAS2)의 유전자 발현을 증가시켜 인체의 히알루론산 생성 작용을 활성화시키고, 버시칸의 합성을 촉진하며, 버시칸 분해를 담당하는 MMP-12의 생성을 억제함으로써 세포외 기질의 구조를 견고히 하여 피부 탄력 증가 및 피부 보습 효과가 우수한 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.The present invention increases the gene expression of hyaluronic acid synthase 2 (HAS2) present in human cells by containing two or more kinds of mixed components selected from the group consisting of citron extract, roots extract and green tea extract as an active ingredient Promoting the synthesis of hyaluronic acid in the human body, promoting the synthesis of Versican, and inhibiting the production of MMP-12 responsible for the degradation of Versican, thereby strengthening the structure of the extracellular matrix and improving skin elasticity and skin moisturizing effect And an external preparation composition.

Description

유자, 유근피 및 함초 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물{Skin external composition containing Citron Extract, Ulmus Davidiana root Extract, and Salicornia herbacea Extract}[0001] The present invention relates to a skin external composition containing citrus extract, Ulmus davidiana root extract, and Salicornia herbacea Extract,

본 발명은 유자 추출물, 유근피 추출물 및 함초 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 인체 세포에 존재하는 히알루론산 합성효소(hyaluronic acid synthase2, HAS2)의 유전자 발현을 증가시켜 인체의 히알루론산 생성 작용을 활성화시키고, 버시칸(versican)의 합성을 촉진하며, 버시칸 분해를 담당하는 MMP-12의 생성을 억제함으로써 세포외 기질의 구조를 견고히 하여 피부 탄력 증가 및 피부 보습 효과가 우수한 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.The present invention includes hyaluronic acid synthase 2 (HAS2) gene expression in human cells by containing citron extract, rhizome extract, and green tea extract as an active ingredient, thereby activating the hyaluronic acid producing action of the human body, The present invention relates to a composition for external application for skin, which promotes the synthesis of versican and inhibits the production of MMP-12 responsible for the degradation of versican, thereby strengthening the structure of the extracellular matrix, thereby improving skin elasticity and skin moisturizing effect.

느릅나무 뿌리의 껍질인 유근피(ULMUS DAVIDIANA)와 관련하여 종래의 연구들은 면역억제제나 식용 음료 등에 대한 사항이었으며, 대한민국 등록특허 제10-0439939호에서는 유근피 추출물을 함유하는 주름개선효과, 콜라겐 합성 촉진효과 그리고 보습효과가 우수한 화장료 조성물을 제시하고 있으나 유근피 추출물을 단독 사용하는 경우에는 그 효과가 미비하며, 저분자 및 고분자 히알루론산과 유근피로부터 분리된 다당체 추출물을 함유하는 노화방지용 조성물 역시 본 발명과 대비하여 그 효과가 미비하다.Conventional studies on ULMUS DAVIDIANA, which is the skin of elm roots, were about immunosuppressants and edible beverages. In Korean Patent No. 10-0439939, the effect of improving wrinkles, promoting collagen synthesis And an anti-aging composition containing a polysaccharide extract isolated from low molecular weight and high molecular weight hyaluronic acid and rhizome of the present invention is also excellent in comparison with the present invention. The effect is insufficient.

대한민국 특허등록 제10-0439939호Korean Patent Registration No. 10-0439939

이에, 본 발명자들은 세포 배양 상태에서의 실시간 DNA 연쇄 중합 반응 어세이, ELISA를 수행하여 유자추출물, 유근피추출물, 함초추출물 및 이들의 복합 추출물이 히알루론산 합성 효소 2 (HAS2) 유전자의 발현을 증가시키고 히알루론산의 합성을 증가시키고, 또한 히알루론산, 콜라젠 다발과 결합하여 세포외기질 구조를 강화하는 버시칸 유전자의 발현을 증가시키며, 버시칸의 분해를 야기하는 MMP-12 유전자의 감소를 유도하는 효과를 발견하고, 본 발명을 완성하였다.Thus, the inventors of the present invention conducted an ELISA in real-time DNA chain polymerization reaction in a cell culture state to increase the expression of the hyaluronic acid synthase 2 (HAS2) gene in citron extract, rhizome extract, green tea extract, Which increases the synthesis of hyaluronic acid and increases the expression of a virucan gene that enhances the extracellular matrix structure by binding to hyaluronic acid and collagen bundles and induces a decrease in the MMP-12 gene that causes the degradation of versican And completed the present invention.

따라서, 본 발명은 유자추출물, 유근피추출물, 함초추출물 또는 이들의 복합 추출물을 유효성분으로 함유하여 히알루론산 생성을 촉진하고 세포외기질 성분의 구조를 견고히 하여 노화로 인한 피부 탄력 저하를 억제하는 히알루론산 생성촉진용 외용제 또는 피부 보습 증진 및 노화 방지용 조성물을 제공한다.Accordingly, the present invention relates to a pharmaceutical composition containing as an active ingredient a citron extract, a radish extract, a radish extract, a green tea extract or a combination extract thereof, which promotes hyaluronic acid production and strengthens the structure of an extracellular matrix component, A composition for promoting the production, or a composition for skin moisturizing enhancement and anti-aging.

상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 유자추출물, 유근피추출물, 함초추출물 또는 이들의 복합성분을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 및 피부 노화 방지용 피부 외용제 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a composition for external application for skin moisturizing and skin aging, which comprises citron extract, roots extract, green tea extract or a complex component thereof as an active ingredient.

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

본 발명의 유효성분으로 사용되는 유자(citron)는 유자나무(Citrus Junos)의 과실로, 유자나무는 쌍떡잎식물 쥐손이풀목 운향과의 상록관으로 바닷가나 민가부근에서 자란다. 중국 원산이며 남쪽에서 과수로 심는다. 높이 약 4m이다. 가지에 뾰족한 가시가 있다. 잎은 어긋나고 달걀 모양 긴 타원형이며 가장자리에 둔한 톱니가 있고 잎자루에 날개가 있다. 꽃은 양성화이며 5∼6월에 흰색으로 피는데, 잎겨드랑이에 1개씩 달린다. 꽃받침조각과 꽃잎은 5개씩이고 수술은 20개가 통처럼 합쳐지거나 5개로 나누어진다. 열매는 장과로서 편구형이며 지름 4∼7cm이고 9∼10월에 익는다. 빛깔은 밝은 노란색이며 겉이 울퉁불퉁하고 향기가 있다. 번식은 종자나 접붙이기 등으로 한다. 열매인 유자는 부드럽고 즙이 많지만 신맛이 강하고 향기가 있으므로 요리에 다용하고, 익지 않은 것은 한방과 민간에서 건위·건담에 약용한다. 또한 유자를 설탕으로 재워 차로 마시면 추위를 잘 이길수 있는 것으로 알려져 있어 옛날에는 추위를 이기기 위해 동지에 유자를 목욕물에 넣어 목욕을 했다고 한다.The citron used as the active ingredient of the present invention is Citrus Junos ), and the citron is an evergreen tree of the mulberry tree with a diceyle plant. It is native to China and planted as a fruit tree in the south. It is about 4m high. There are pointed spines on branches. Leaves are alternate phyllotaxis, ovate long oval, dull serrate on edge, wings on petiole. The flowers are bisexual and bloom in May to June, and they run one on the axilla. There are 5 calyxes and petals, 20 of which are merged together or divided into five. Fruit is long-bellied, 4-7cm in diameter, ripened in September-October. Its color is bright yellow and its surface is rugged and fragrant. Reproduction is done by seeding or grafting. Yuzu, a fruit, is soft and juicy, but it is strong in sour taste and fragrant, so it is used for cooking. In addition, it is known that when you drink citron with sugar and drink tea, you can win the cold well. In the old days, to win the cold, I put the citron into the bath and put on the bath.

본 발명의 유효성분으로 사용되는 유근피는 느릅나무의 뿌리 껍질을 한방약재로 통칭하는 이름이다. 느릅나무는 쌍떡잎식물 쐐기풀목 느릅나무과의 낙엽활엽 교목으로 춘유(春楡) 또는 가유(家楡)라고도 하는데, 높이는 20m, 지름은 60cm이며, 나무 껍질은 회갈색이고, 작은 가지에 적갈색의 짧은 털이 있다. 목재는 건축재·기구재·선박재·세공재·땔감 등으로 쓰인다. 느릅나무의 뿌리 껍질을 유근피 혹은 유백피라 하여 한방에서 약재로 사용하는데, 그 맛은 달고 성질은 평하다. 붓기, 소변 불리, 변비, 기침, 옹종, 단독, 젖앓이 등에 쓰인다 Root bark used as an active ingredient of the present invention is a name collectively referred to as root bark of elm. Elm is a deciduous broad-leaved arboreous tree, with a length of 20m and a diameter of 60cm. The tree bark is gray-brown and the branch has a short brown hairs on reddish brown. . Wood is used for building materials, machinery materials, ship materials, construction materials, firewood. The root bark of elm is used as a medicinal material in oriental medicine, called oriental or milky, and its taste is sweet and its quality is fair. Swelling, urine discomfort, constipation, coughing, coughing, solitary,

본 발명에 사용되는 함초는 퉁퉁마디(Salicornia herbacea)의 한방학적 약재이름으로, 퉁퉁마디는 석죽목 명아주과에 속하는 식물로, 높이 10~30cm 정도로 길쭉하게 자라다가 가지가 마주나게 갈라진다. 줄기가 처음에는 짙은 녹색이나 노란빛을 띠다가 가을이 되면 붉은 색으로 변하며 작은 선인장처럼 퉁퉁한 다육질이며 비대하다. 잎은 퇴화하여 거의 보이지 않고 막질의 작은 비늘조각이 있다. 8~9월 가지의 위쪽 마디에서 꽃이 3개씩 핀다. 화피는 다육질로 통통하고 1~2개의 수술과 2개의 암술대가 있다. 열매는 포과로 화피에 싸이며 검은색의 종자가 있다. 바닷물이 드나드는 갯벌 근처나 내륙 염분지에서 무리지어 자라는 1년생 초본이다. 한방학적으로는 몸 안에 쌓인 독소와 숙변을 없애고, 암, 자궁근종, 축농증, 고혈압, 저혈압, 요통, 당뇨병, 기관지천식, 갑상선 기능저하, 갑상선 기능항진, 피부병, 관절염 등 갖가지 난치병에 탁월한 치료효과를 지니고 있다고 알려져 있다.Salicornia herbacea is a herbal medicine used in the present invention. The herbaceous plant is a plant belonging to the genus Liliaceae. It grows to a height of 10 to 30 cm and is divided into branches. The stem is dark green or yellow at first, then it turns red when it is autumn, and it is like a small cactus. Leaves are degenerate and almost invisible, with small scale scales of membrane. From August to September, three flowers bloom at the upper node of branches. The fur is fleshy and plump and has 1-2 stamens and 2 styles. Fruits are fleas and are wrapped in horns and have black seeds. Seawater is a one-year-old herb that grows near the tidal flats and inland saline areas. It is an excellent treatment for various intractable diseases such as cancer, myoma, sinusitis, hypertension, hypotension, back pain, diabetes, bronchial asthma, hypothyroidism, hyperthyroidism, skin disease and arthritis. It is known to carry.

본 발명에 사용되는 유자추출물, 유근피추출물 및 함초추출물은 상업적으로 구입하거나 통상 사용되는 제조 방법에 의해서 제조될 수 있으며, 그 제조방법이 특별히 한정되지는 않지만, 바람직하게는 하기와 같은 방법으로 제조될 수 있다.The citrus juice extract, rhizome extract and green tea extract used in the present invention can be prepared by a commercially available method or a commonly used method, and the production method thereof is not particularly limited, but is preferably prepared by the following method .

상기 추출물을 제조하는 방법으로는 열수 추출, 초임계 추출, 아임계 추출 등에 의할 수 있으며, 바람직하게는 초고압 추출에 의한다.The extract may be prepared by hot water extraction, supercritical extraction, subcritical extraction or the like, preferably by ultra-high pressure extraction.

본 발명에 사용되는 유자추출물, 유근피추출물 및 함초추출물은 각 한약재를 물 또는 유기용매로 추출물을 수득할 수 있다. 본 발명에서 사용하는 유기용매는 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트 및 클로로포름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으며, 바람직하게는 80% 에탄올을 사용할 수 있다. 또한 유기용매와 물과의 혼합용매를 사용할 수도 있으며, 바람직하게는 1:1 로 사용할 수 있다.The citron extract, roots extract and green tea extract used in the present invention can be obtained by extracting each medicinal material with water or an organic solvent. The organic solvent used in the present invention may be at least one selected from the group consisting of ethanol, methanol, butanol, ether, ethyl acetate and chloroform, preferably 80% ethanol. Further, a mixed solvent of an organic solvent and water may be used, and preferably 1: 1.

본 발명의 조성물은 유자추출물, 유근피추출물 및 함초추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~20 중량% 로 함유하는 것이 바람직하다. 상기 복합추출물의 함량이 0.0001중량% 미만이면 상기 추출물에 의한 히알루론산 생성 증가, 버시칸 생성 촉진, MMP-12 생성 억제 효과 등을 얻을 수 없고, 20 중량%를 초과하면 함량 증가에 비해 효과의 증가가 크지 않기 때문에 비효율적이기 때문이다.The composition of the present invention preferably contains at least two kinds selected from the group consisting of citron extract, roots extract and green tea extract in an amount of 0.0001 to 20% by weight based on the total weight of the composition. If the content of the complex extract is less than 0.0001% by weight, it is impossible to obtain an increase in hyaluronic acid production, acceleration of the production of versatile and inhibition of MMP-12 production by the extract, and if it exceeds 20% by weight, Because it is inefficient.

본 발명에 의한 조성물은 상기 추출물을 단독으로 사용할 때보다 2 종 이상을 혼합하여 사용할 때 그 효과가 더 우수하다. 바람직하게는 유자추출물과 유근피추출물 1:1의 중량비로 혼합한 유자추출물과 유근피추출물의 복합추추출물을 0.0001~20 중량% 로 사용할 수 있으나, 특별하게 한정하지 않고 제형 내에서 적절한 비율로 혼합하여 사용할 수 있다. 또한 유자추출물과 유근피추출물의 혼합추출물에 함초추출물을 혼합하여 사용할 때 그 효과가 더 우수하며, 바람직하게는 유자추출물과 유근피추출물, 함초추출물을 1:1:1의 중량비로 혼합하여 사용할 수 있으나, 특별하게 한정하지 않고 제형 내에서 적절한 비율로 혼합하여 사용할 수 있다.The composition according to the present invention is more effective when two or more kinds of the extracts are mixed and used than when the extracts are used alone. Preferably, the citrus extract and the mixture of citrus peel and citrus peony extracts are mixed at a weight ratio of 1: 1 to 1: 1, and the mixture is used in an amount of 0.0001 to 20% by weight, but not particularly limited thereto. . In addition, when the mixture of citron extract and rhizome extract is mixed with a green tea extract, the effect is more excellent. Preferably, citron extract, rhizome extract and green tea extract are mixed at a weight ratio of 1: 1: 1, They may be mixed and used in an appropriate ratio within the formulation.

본 발명의 피부 외용제 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤 또는 피부 점착타입의 화장료 제형을 가질 수 있으며, 또한 로션, 연고, 젤, 크림, 패취 또는 분무제와 같은 경피투여형의 제형일 수 있다.The composition for external application for skin of the present invention is not particularly limited in its formulation. For example, the external composition for skin of the present invention may have cosmetic formulations of softening agent, nutritional lotion, massage cream, nutritional cream, pack, gel or skin adhesive type, , Gel, cream, patch, or spray.

본 발명의 조성물은 HAS2 유전자의 발현을 증가시켜 히알루론산의 합성을 증가시킨다. 또한, 버시칸 유전자의 발현을 증가시켜 버시칸의 합성을 촉진시킬 뿐만 아니라 MMP-12 유전자의 발현을 감소시켜 버시칸의 분해를 담당하는 MMP-12의 생성을 억제한다. 따라서, 본 발명은 히알루론산의 생성을 촉진하고 세포외기질 성분의 구조를 견고히 하여 노화로 인한 피부 탄력 저하를 억제시키고 피부 보습을 증진시키는 효과를 가진다.The composition of the present invention increases the expression of the HAS2 gene, thereby increasing the synthesis of hyaluronic acid. In addition, it increases the expression of the versatile gene, which not only promotes the synthesis of versican, but also reduces the expression of the MMP-12 gene, thereby inhibiting the production of MMP-12, which is responsible for the degradation of versatile. Accordingly, the present invention has the effect of promoting the production of hyaluronic acid and strengthening the structure of extracellular matrix components, thereby suppressing skin elasticity deterioration due to aging and promoting skin moisturization.

본 발명의 피부 외용제 조성물은 단일 성분이 아닌 유자추출물과 유근피 추출물을 복합 함유하여 인체 세포에 존재하는 히알루론산 합성효소의 유전자 발현을 현저히 증가시킴으로써 인체의 히알루론산 생성 작용을 활성화시키는 히알루론산 생성촉진제로서의 효과를 가지고 동시에 세포외기질 구조를 견고히 하는 버시칸의 생성을 촉진하며, 버시칸의 분해를 담당하는 MMP-12의 생성을 억제하는 효과를 가지므로 피부 건조증 및 피부 노화 방지를 위해 이용될 수 있다.
The composition for external application for skin of the present invention contains a combination of citron extract and rhizome extract, which are not a single component, to significantly increase gene expression of a hyaluronic acid synthase present in human cells, thereby enhancing hyaluronic acid production promoting activity And at the same time, it promotes the production of vermiculite which strengthens the extracellular matrix structure, and inhibits the production of MMP-12 responsible for the degradation of versatil. Therefore, it can be used for preventing dryness of skin and aging of skin .

도 1은 유자추출물, 유근피 추출물, 함초 추출물을 HaCaT 세포에 처리한 후 mRNA수준에서의 히알루론산 합성효소의 발현을 나타낸 그래프이다.
도 2는 유자추출물, 유근피 추출물, 함초 추출물을 HaCaT 세포에 처리한 후 mRNA수준에서의 버시칸 유전자의 발현을 나타낸 그래프이다.
도 3은 유자추출물, 유근피 추출물, 함초 추출물을 HaCaT 세포에 처리한 후 mRNA수준에서의 UV에 의한 MMP-12 유전자의 발현을 나타낸 그래프이다.
도 4는 유자추출물, 유근피 추출물, 함초 추출물을 HaCaT 세포에 처리한 후 히알루론산의 양을 ELISA 방법으로 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
FIG. 1 is a graph showing the expression of hyaluronic acid synthase at the mRNA level after treatment of citron extract, rhizome extract, and green tea extract with HaCaT cells.
FIG. 2 is a graph showing the expression of a versatile gene at the level of mRNA after treatment of Haeca T cells with citron extract, yuukee extract, and green tea extract.
FIG. 3 is a graph showing the expression of MMP-12 gene by UV at the mRNA level after treatment of HaCaT cells with citron extract, root extract, and green tea extract.
FIG. 4 is a graph showing the results of measuring the amount of hyaluronic acid by the ELISA method after treating Haeca T cells with citron extract, Rootgrass bark extract, and green tea extract.

이하 실시예 및 시험예를 통하여 본 발명을 좀 더 상세히 설명하며, 본 발명이 이들 예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples and Test Examples. However, the present invention is not limited by these examples.

[제조예 1] 유자 추출물의 제조[Preparation Example 1] Preparation of citron extract

유자 10g 을 정제수 90 L를 용매로 하여 초고압장치로 1500기압에서 30℃이하의 저온을 유지하면서 3시간 추출하였다. 그 다음 원심분리(9000rpm, 15℃, 30min)로 이물질을 제거 후, 정제수, 부틸렌글라이콜, 페녹시에탄올 등의 희석용매를 사용하여 10배로 희석하여 유자 추출물을 제조하였다.
10 g of citron were extracted with 90 L of purified water as a solvent for 3 hours while maintaining a low temperature of below 30 캜 at 1500 atm using an ultra-high pressure apparatus. Then, the alien substance was removed by centrifugation (9000 rpm, 15 ° C, 30 min), and then diluted 10 times with a diluting solvent such as purified water, butyleneglycol, phenoxyethanol or the like to produce citron extract.

[제조예 2] 유근피 추출물의 제조[Production Example 2] Preparation of extracts of Root Root Extract

유근피 100g 을 정제수 1000L 를 용매로 하여 초고압장치로 1500기압에서 30℃이하의 저온을 유지하면서 3시간 추출하였다. 그 다음 원심분리(9000rpm, 15℃, 30min)로 이물질을 제거 후 여과포로 여과하고, 정제수, 부틸렌글라이콜, 페녹시에탄올 등의 희석용매를 사용하여 10배로 희석하여 유근피 추출물을 제조하였다.
100 g of yugaekpyu was extracted with 1000 L of purified water for 3 hours while maintaining a low temperature of 30 캜 or less at 1500 atm using an ultra high pressure apparatus. Then, the foreign material was removed by centrifugation (9000 rpm, 15 ° C, 30 min), filtered with a filter cloth, and diluted 10 times with a diluting solvent such as purified water, butyleneglycol, phenoxyethanol or the like.

[제조예 3] 함초 추출물의 제조[Production Example 3] Preparation of Leeky Leaf Extract

함초 100g 을 정제수 1000L 를 용매로 하여 초고압장치로 1500기압에서 30℃이하의 저온을 유지하면서 3시간 추출하였다. 그 다음 원심분리(9000rpm, 15℃, 30min)로 이물질을 제거 후 여과포로 여과하고, 정제수, 부틸렌글라이콜, 페녹시에탄올 등의 희석용매를 사용하여 10배로 희석하여 유근피 추출물을 제조하였다.
100 g of green tea was extracted with 1000 L of purified water for 3 hours while maintaining a low temperature of 30 캜 or less at 1500 atm using an ultra high pressure apparatus. Then, the foreign material was removed by centrifugation (9000 rpm, 15 ° C, 30 min), filtered with a filter cloth, and diluted 10 times with a diluting solvent such as purified water, butyleneglycol, phenoxyethanol or the like.

[시험예 1] 세포주 및 세포배양 [Test Example 1] Cell line and cell culture

인체 각질형성 세포주 (human keratinocyte)인 HaCaT 세포(상품명: Human keratinocyte cell line, 판매처: cell lines service)를 10% 우혈청 (fetal bovin serum)을 포함한 DMEM 배지 (Dulbecco's modified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038)에서 37℃, 5% CO2 배양기로 18 시간 동안 배양하였다.
HaCaT cells (human keratinocyte cell line, cell line service), a human keratinocyte, were cultured in DMEM medium (Dulbecco's modified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038) containing 10% fetal bovine serum, At 37 ° C in a 5% CO 2 incubator for 18 hours.

[시험예 2] 유자, 유근피, 함초 추출물 처리에 의한 HaCaT 세포에서의 HAS2, 버시칸의 발현 증가[Test Example 2] Expression of HAS2 and Versican in HaCaT Cells by Treatment with Yuza, Yugenmei and Green Tea Extracts

본 발명의 조성물에 의한 히알루론산 및 버시칸의 합성촉진 효과를 확인하기 위하여, 본 발명의 추출물을 처리하여 세포에서의 히알루론산 합성효소인 HAS2 유전자 및 버시칸 유전자의 발현 양상을 mRNA 양에 의해 측정하였다.In order to confirm the effect of promoting the synthesis of hyaluronic acid and versatile by the composition of the present invention, the extract of the present invention is treated to measure the expression pattern of the hyaluronic acid synthase hAS2 gene and the versatile gene in the cells by the amount of mRNA Respectively.

단계 1. 세포주에 추출물 처리Step 1. Extract treatment of cell line

상기 시험예 1에서 배양된 세포주에 트립신 처리하여 단일세포 현탁액을 만들고, T75 플라스크에 세포 1x106 개의 밀도로 분주하여, 37℃, 5% CO2 배양기로 24시간 동안 배양하였다.The cell line cultured in Test Example 1 was treated with trypsin to prepare a single cell suspension. The cell suspension was dispensed into a T75 flask at a density of 1 × 10 6 cells and cultured in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator for 24 hours.

상기 분주하여 배양된 세포를 디메틸설폭시드(Dimethylsulfoxide;DMSO)를 처리한 배지(비교예 1), 상기 제조예 1~3의 추출물들을 디메틸설폭시드에 녹인 상태로 유자추출물(비교예 2), 유근피추출물(비교예 3), 함초추출물(비교예 4)을 각각 10ppm씩 처리한 배지, 상기 제조예 1,2의 추출물들을 디메틸설폭시드에 녹인 상태로 유자추출물 및 유근피추출물 1:1 을 혼합하여 총 5ppm 의 복합추출물을 처리한 배지(실시예 1), 유자추출물, 유근피추출물 및 함초추출물 1:1:1 을 혼합하여 5 ppm 의 복합추출물을 처리한 배지(실시예 2)에서 37℃에서 24시간 동안 배양하였다.The cultured cells were cultured in dimethylsulfoxide (DMSO) -treated medium (Comparative Example 1), the extracts of Preparation Examples 1 to 3 were dissolved in dimethylsulfoxide and citron extract (Comparative Example 2) (Comparative Example 3) and green tea extract (Comparative Example 4) were each treated at 10 ppm each. The extracts of Preparation Examples 1 and 2 were dissolved in dimethylsulfoxide and 1: 1 of yuzu (Example 2) treated with 5 ppm of the combined extract (Example 1), yuza extract, rhizome extract and green tea extract 1: 1: 1 were mixed and cultured in a medium (Example 2) Lt; / RTI >

단계 2. 정량적인 Step 2. Quantitative 역전사Reverse transcription PCRPCR 을 통한 through HAS2HAS2 , , 버시칸Varsikan 유전자의  Gene mRNAmRNA 합성 증가 확인 Confirmation of increased synthesis

상기 세포를 회수하여 냉각된 4℃인산완충용액(PBS)으로 세척하고, TRIzol™ 시약 (Life Technologies, Inc.) 1 ml을 첨가하여 총 RNA를 추출하여 정량적인 실시간 DNA 연쇄중합반응을 수행하였다. 실시간 DNA 연쇄중합반응 수행을 위한 HAS2, 버시칸, MMP-12의 프라이머 서열은 하기 표 1과 같다.
The cells were collected, washed with cold 4 ° C phosphate buffered saline (PBS), and 1 ml of TRIzol ™ reagent (Life Technologies, Inc.) was added to extract the total RNA to perform quantitative real-time DNA chain polymerization. Primer sequences of HAS2, versatile, and MMP-12 for real-time DNA chain polymerization reaction are shown in Table 1 below.

프라이머 이름Name of the primer 서열order HAS-2 정방향 프라이머HAS-2 forward primer 5'-TTTCTTTATGTGACTCATCTGTCTCACCGG-3'5'-TTTCTTTATGTGACTCATCTGTCTCACCGG-3 ' HAS-2 역방향 프라이머
버시칸 정방향 프라이머
버시칸 역방향 프라이머
MMP-12 정방향 프라이머
MMP-12 역방향 프라이머
HAS-2 reverse primer
VersiChan forward primer
Versican Reverse primer
MMP-12 forward primer
MMP-12 reverse primer
5'-ATTGTTGGCTACCAGTTTATCCAAAGGG-3'
5'-GTCACCTTCCAACTATCCGGT-3'
5'-AGCACGGTAGTCCATTCTTTCT-3'
5'-GGAGTCCCCGATCTCCATCAT-3'
5'-ACGGTTCATGTCAGGTGTGTA-3'
5'-ATTGTTGGCTACCAGTTTATCCAAAGGG-3 '
5'-GTCACCTTCCAACTATCCGGT-3 '
5'-AGCACGGTAGTCCATTCTTTCT-3 '
5'-GGAGTCCCCGATCTCCATCAT-3 '
5'-ACGGTTCATGTCAGGTGTGTA-3 '
GAPDH 정방향 프라이머GAPDH forward primer 5'-CAACTACATGGTTTACATGTTCC-3'5'-CAACTACATGGTTTACATGTTCC-3 ' GAPDH 역방향 프라이머GAPDH reverse primer 5'-GGACTGTGGTCATGAGTCCT-3'5'-GGACTGTGGTCATGAGTCCT-3 '

상기 프라이머는 SCI급 논문들을 토대로 제작하였다.The primers were based on SCI-grade papers.

상기 추출된 총 RNA 1μg을 50mM 트리스-HCl(Tris-HCl, pH 8.3), 75mM KCl, 3mM MgCl2, 0.1M DTT, 10mM dNTP 및 40 유닛/μl RNase 저해제가 함유된 역전사 반응 완충액 25μl에 넣고, 0.5μg/μl 올리고(dT)16의 프라이머와 200 유닛 수퍼스크립트 II[SuperScript II, GiboBRL]의 역전사 중합효소를 첨가하여 42℃에서 1시간 반응시킨 후, 역전사 반응 용액 2.5μl를 엠플리택(AmpliTaq) DNA 중합효소[0.04U; Perkin Elmer, Shelton, CT], 50mM 트리스(pH 8.3), 0.25mg/ml 우혈청알부민, 3mM MgCl2, 0.25mM dNTPs, SYBR 그린 I의 1/50,000 희석액[Molecular Probes, Eugene, OR]이 함유된 PCR 반응 완충액 50 리터에 섞고, 10μM의 프라이머를 첨가하여 94℃에서 30초간 변성, 53℃에서 30초간 어닐링 및 72℃에서 1분간 확장하는 사이클을 30회 수행하였다. 상대적인 mRNA 레벨은 아이사이클러(ICycler) 소프트웨어를 이용하여 SYBR 그린 I 형광 변화를 측정함으로써 분석하였다. 내부 표준물질로 GAPDH(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)를 사용하여 유전자의 정량적 발현 수준을 보정하였다. HAS2 유전자의 mRNA 발현량은 도 1에 나타내었고, 버시칸 유전자의 mRNA 발현량을 도 2에 나타내었다.1 μg of the extracted total RNA was added to 25 μl of a reaction buffer containing 50 mM Tris-HCl (pH 8.3), 75 mM KCl, 3 mM MgCl 2 , 0.1 M DTT, 10 mM dNTP and 40 units / μl RNase inhibitor, A primer of 0.5 μg / μl oligo (dT) 16 and a reverse transcription polymerase of 200 units SuperScript II (SuperScript II, GiboBRL) were added and reacted at 42 ° C. for 1 hour. Then, 2.5 μl of the reverse reaction solution was added to AmpliTaq DNA polymerase [0.04 U; Perkin Elmer, Shelton, CT], 50 mM Tris (pH 8.3), 0.25 mg / ml Bovine Serum Albumin, 3 mM MgCl 2 , 0.25 mM dNTPs, 1 / 50,000 dilution of SYBR Green I [Molecular Probes, Eugene, OR] PCR reaction buffer, 10 μM of primer was added, and 30 cycles of denaturation at 94 ° C. for 30 seconds, annealing at 53 ° C. for 30 seconds, and extension at 72 ° C. for 1 minute were carried out 30 times. Relative mRNA levels were analyzed by measuring SYBR Green I fluorescence changes using ICycler software. Quantitative expression levels of genes were corrected using GAPDH (glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase) as an internal standard. The mRNA expression level of the HAS2 gene is shown in Fig. 1 and the mRNA expression level of the versatile gene is shown in Fig.

도 1~2에서 보여지는 바와 같이, 유자, 유근피, 함초 추출물을 단독 처리한 경우(비교예 2~4), 상기 추출물을 처리하지 않은 비교예 1에 비하여 HAS2 유전자 및 버시칸 유전자의 발현량이 어느 정도 증가하였으나, 유자추출물과 유근피 추출물의 복합 처방을 사용한 실험군(실시예 1)의 경우에는 단독 처리군보다 소량을 사용했음에도 불구하고 HAS2 유전자 및 버시칸 유전자의 발현량이 유의하게 증가하였으며, 유자 유근피 및 함초 추출물의 복합 처방을 사용한 실험군(실시예 2)의 경우 역시 단독 처리군보다 소량을 사용했음에 도 불구하고 HAS2 유전자 및 버시칸 유전자의 발현량이 현저하게 증가하였고, 2종 복합추출물에 비하여도 현저한 효과를 보임을 알 수 있다.As shown in Figs. 1 and 2, when the extracts of yuzu, yugenmei and green tea were treated alone (Comparative Examples 2 to 4), the expression amounts of the HAS2 gene and the versatile gene were higher than those of Comparative Example 1 However, the expression level of the HAS2 gene and the vasicococcal gene was significantly increased in the experimental group (Example 1) using the combined prescription of the citron extract and the rhizome extract, compared with the single treatment group, The expression level of the HAS2 gene and the versatile gene was significantly increased in the experimental group (Example 2) using the combined formulation of the green tea extract and the small amount of the HAS2 gene and the versatile gene, The effect is shown.

따라서, 본 발명에 따라 유자추출물과 유근피 추출물을 복합 사용하면 히알루론산의 합성을 효과적으로 증가시킬 수 있으며, 상기 복합 추출물에 함초추출물을 더 함유하는 경우에는 히알루론산 합성을 보다 현저하게 증가시킬 수 있고, 이로써 세포외기질 구조를 강화시킬 수 있음을 알 수 있다.
Therefore, according to the present invention, the combined use of citron extract and rhizome extract can effectively increase the synthesis of hyaluronic acid, and when the complex extract further contains a green tea extract, the synthesis of hyaluronic acid can be remarkably increased, Thereby enhancing the extracellular matrix structure.

[시험예 3] 유자, 유근피, 함초 추출물 처리에 의한 HaCaT 세포에서의 MMP-12의 발현 감소[Test Example 3] Reduction of expression of MMP-12 in HaCaT cells by treatment with yuza, yugenmei and green tea extract

본 발명의 조성물에 의한 버시칸의 분해저하 효과를 확인하기 위하여, 본 발명의 추출물을 처리하여 버시칸 분해를 담당하는 MMP-12 유전자의 발현양상을 mRNA 양에 의해 측정하였다.In order to confirm the degradation effect of the degradation of versatile by the composition of the present invention, the expression pattern of the MMP-12 gene responsible for the degradation of vernig cell was treated by the amount of mRNA by treating the extract of the present invention.

단계 1. 세포주에 Step 1. To the cell line UVUV 및 추출물 처리 And extract treatment

상기 시험예 1에서 배양된 HaCaT 세포를 1x106개의 밀도로 100mm 세포 배양 접시에 분주하여 배양하였고, FS40 램프[Westinghouse, Pittsburgh, PA, USA]를 이용하여 자외선 B를 10mJ/cm2로 조사한 후, 상기 분주하여 배양된 세포를 디메틸설폭시드(Dimethylsulfoxide;DMSO)를 처리한 배지(비교예 6), 상기 제조예 1~3의 추출물들을 디메틸설폭시드에 녹인 상태로 유자추출물(비교예 7), 유근피추출물(비교예 8), 함초추출물(비교예 9)을 각각 10ppm씩 처리한 배지, 상기 제조예 1,2의 추출물들을 디메틸설폭시드에 녹인 상태로 유자추출물 및 유근피추출물을 혼합하여 총 5ppm 의 복합추출물을 처리한 배지(실시예 3), 유자추출물, 유근피추출물 및 함초추출물을 혼합하여 총 5ppm 의 복합추출물을 처리한 배지(실시예 4)에서 37℃, 5% CO2 배양기로 24시간 동안 배양하였다. 이 때, 대조군은 UV를 조사하지 않은 샘플을 사용하였다(비교예 5). HaCaT cells cultured in Test Example 1 were cultured in a 100 mm cell culture dish at a density of 1 × 10 6 cells, irradiated with ultraviolet ray B at 10 mJ / cm 2 using an FS40 lamp (Westinghouse, Pittsburgh, Pa., USA) (Comparative Example 6) treated with dimethylsulfoxide (DMSO), the citron extract (Comparative Example 7) in the form of dissolving the extracts of Preparation Examples 1 to 3 in dimethylsulfoxide, (Comparative Example 8) and green tea extract (Comparative Example 9) were each treated at 10 ppm each. The extracts of Preparation Examples 1 and 2 were dissolved in dimethylsulfoxide, and the citron extract and the extracts were mixed to obtain a total extract of 5 ppm (Example 3), a citron extract, a yucca extract, a yuukee extract and a green tea extract were mixed and cultured in a medium (Example 4) in which a total of 5 ppm of the extract was treated (Example 4) for 24 hours in a 5% CO 2 incubator . At this time, the control group was a sample not irradiated with UV (Comparative Example 5).

단계 2. 정량적인 Step 2. Quantitative 역전사Reverse transcription PCRPCR 을 통한 through MMPMMP -12 유전자의 -12 gene mRNAmRNA 합성 감소 확인 Confirm synthesis reduction

상기 세포를 회수하여 냉각된 4℃인산완충용액(PBS)으로 세척하고, TRIzol™ 시약 (Life Technologies, Inc.) 1 ml을 첨가하여 총 RNA를 추출하여 정량적인 실시간 DNA 연쇄중합반응을 수행하였다.The cells were collected, washed with cold 4 ° C phosphate buffered saline (PBS), and 1 ml of TRIzol ™ reagent (Life Technologies, Inc.) was added to extract the total RNA to perform quantitative real-time DNA chain polymerization.

상기 추출된 총 RNA 1μg을 50mM 트리스-HCl(Tris-HCl, pH 8.3), 75mM KCl, 3mM MgCl2, 0.1M DTT, 10mM dNTP 및 40 유닛/μl RNase 저해제가 함유된 역전사 반응 완충액 25μl에 넣고, 0.5μg/μl 올리고(dT)16의 프라이머와 200 유닛 수퍼스크립트 II[SuperScript II, GiboBRL]의 역전사 중합효소를 첨가하여 42℃에서 1시간 반응시킨 후, 역전사 반응 용액 2.5μl를 엠플리택(AmpliTaq) DNA 중합효소[0.04U; Perkin Elmer, Shelton, CT], 50mM 트리스(pH 8.3), 0.25mg/ml 우혈청알부민, 3mM MgCl2, 0.25mM dNTPs, SYBR 그린 I의 1/50,000 희석액[Molecular Probes, Eugene, OR]이 함유된 PCR 반응 완충액 50 리터에 섞고, 10μM의 프라이머를 첨가하여 94℃에서 30초간 변성, 53℃에서 30초간 어닐링 및 72℃에서 1분간 확장하는 사이클을 30회 수행하였다. 상대적인 mRNA 레벨은 아이사이클러(ICycler) 소프트웨어를 이용하여 SYBR 그린 I 형광 변화를 측정함으로써 분석하였다. 내부 표준물질로 GAPDH(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)를 사용하여 유전자의 정량적 발현 수준을 보정하였다. 결과로서 MMP-12 유전자의 mRNA 발현량을 도 3에 나타내었다.1 μg of the extracted total RNA was added to 25 μl of a reaction buffer containing 50 mM Tris-HCl (pH 8.3), 75 mM KCl, 3 mM MgCl 2 , 0.1 M DTT, 10 mM dNTP and 40 units / μl RNase inhibitor, A primer of 0.5 μg / μl oligo (dT) 16 and a reverse transcription polymerase of 200 units SuperScript II (SuperScript II, GiboBRL) were added and reacted at 42 ° C. for 1 hour. Then, 2.5 μl of the reverse reaction solution was added to AmpliTaq DNA polymerase [0.04 U; Perkin Elmer, Shelton, CT], 50 mM Tris (pH 8.3), 0.25 mg / ml Bovine Serum Albumin, 3 mM MgCl 2 , 0.25 mM dNTPs, 1 / 50,000 dilution of SYBR Green I [Molecular Probes, Eugene, OR] PCR reaction buffer, 10 μM of primer was added, and 30 cycles of denaturation at 94 ° C. for 30 seconds, annealing at 53 ° C. for 30 seconds, and extension at 72 ° C. for 1 minute were carried out 30 times. Relative mRNA levels were analyzed by measuring SYBR Green I fluorescence changes using ICycler software. Quantitative expression levels of genes were corrected using GAPDH (glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase) as an internal standard. As a result, the mRNA expression level of the MMP-12 gene is shown in Fig.

도 3에서 보여지는 바와 같이, 유자, 유근피, 함초 추출물을 단독 처리한 경우(비교예 7~9), 상기 추출물을 처리하지 않은 비교예 6 에 비하여 MMP-12 유전자의 발현량이 어느 정도 감소하였으나, 유자추출물과 유근피 추출물의 복합 처방을 사용한 실험군(실시예 3)의 경우에는 단독 처리군보다 소량을 사용했음에도 불구하고 MMP-12 유전자의 발현량이 유의하게 감소하였으며, 유자 유근피 및 함초 추출물의 복합 처방을 사용한 실험군(실시예 4)의 경우 역시 단독 처리군보다 소량을 사용했음에도 불구하고 MMP-12 유전자의 발현량이 현저하게 감소하였고, 2종 복합추출물에 비하여도 현저한 효과를 보임을 알 수 있다.As shown in Fig. 3, when the extracts of yuzu, yugenmei and green tea were treated alone (Comparative Examples 7 to 9), the expression level of MMP-12 gene was decreased to some extent as compared with Comparative Example 6, The expression level of the MMP-12 gene was significantly decreased in the experimental group (Example 3) using the combination of citron extract and guinea pig extract, compared to the single treatment group. In the case of the experimental group used (Example 4), the expression level of MMP-12 gene was remarkably decreased even though it was used in a smaller amount than that of the single treatment group, and it is also remarkable that the effect was remarkable compared with the two kinds of compound extracts.

따라서, 본 발명에 따라 유자추출물과 유근피 추출물을 복합 사용하면 MMP-12 유전자의 발현량을 감소시킴으로써 세포외기질 구조를 강화하는 버시칸의 분해를 억제할 수 있으며, 상기 복합 추출물에 함초추출물을 더 함유하는 경우에는 버시칸의 분해를 보다 현저하게 감소시킬 수 있고, 이로써 세포외기질 구조를 강화시킬 수 있음을 알 수 있다.
Therefore, according to the present invention, when the citron extract and the rhizome extract are used in combination, the degradation of the extracellular matrix structure can be inhibited by decreasing the expression level of the MMP-12 gene. In addition, It is possible to remarkably reduce the degradation of virucan, thereby enhancing the extracellular matrix structure.

[시험예 4] 유자 추출물, 유근피 추출물 및 함초 추출물에 의한 HaCaT 세포에서의 히알루론산 생성 증가[Test Example 4] Increase of hyaluronic acid production in HaCaT cells by citron extract, Rootgrass extract and green tea extract

상기 시험예 1에서 배양된 세포주에 트립신을 처리하여 단일세포 현탁액을 만들고, T75 플라스크에 세포 1x106 개의 밀도로 분주하여, 37℃, 5% CO2 배양기로 24시간 동안 배양하였다.The cell line cultured in Test Example 1 was treated with trypsin to prepare a single cell suspension. The cell suspension was dispensed into a T75 flask at a density of 1 × 10 6 cells and cultured in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C. for 24 hours.

상기 분주하여 배양된 세포를 디메틸설폭시드(Dimethylsulfoxide;DMSO)를 처리한 배지(비교예 10), 상기 제조예 1~3의 추출물들을 디메틸설폭시드에 녹인 상태로 유자추출물(비교예 11), 유근피추출물(비교예 12), 함초추출물(비교예 13)을 각각 10ppm씩 처리한 배지, 상기 제조예 1, 2의 추출물들을 디메틸설폭시드에 녹인 상태로 유자추출물 및 유근피추출물을 혼합하여 총 5ppm 의 복합추출물을 처리한 배지(실시예 5), 유자추출물, 유근피추출물 및 함초추출물을 혼합하여 총 5ppm 의 복합추출물을 처리한 배지(실시예 6)에서 37℃, 5% CO2 배양기로 24시간 동안 배양하였다.The cultured cells were cultured in dimethylsulfoxide (DMSO) -treated medium (Comparative Example 10), the extracts of Preparation Examples 1 to 3 were dissolved in dimethylsulfoxide and citron extract (Comparative Example 11) (Comparative Example 12) and Green tea extract (Comparative Example 13) were each treated at 10 ppm each. The extracts of Preparation Examples 1 and 2 were dissolved in dimethylsulfoxide, and the citron extract and the extracts were mixed to obtain a total of 5 ppm Cultured in a medium (Example 6) treated with a total of 5 ppm of the extract (Example 5), Yuza extract, Rootgrass extract, and Hamcho extract, at 37 ° C in a total of 5 ppm, for 24 hours in a 5% CO 2 incubator Respectively.

24 시간 경과 시점에서 상기 세포 배양액을 회수하여 15,000g에서 5분간 원심분리하여 침강된 세포를 제거하고 상층액을 얻어 에첼론 생명과학 회사 (Echelon Bioscience, Salt Lake, UT)회사의 ELISA 키트를 이용하여 히알루론산 양을 측정하여 그 결과를 도 4에 나타냈다.After 24 hours, the cell culture medium was recovered and centrifuged at 15,000 g for 5 minutes to remove the precipitated cells. The supernatant was collected and analyzed using an ELISA kit (Echelon Bioscience, Salt Lake, UT) The amount of hyaluronic acid was measured and the results are shown in Fig.

도 4에서 보여지는 바와 같이, 유자, 유근피, 함초 추출물을 단독 처리한 경우(비교예 11~13), 상기 추출물을 처리하지 않은 비교예 10 에 비하여 히알루론산의 양이 어느 정도 증가하였으나, 유자추출물과 유근피 추출물의 복합 처방을 사용한 실험군(실시예 5)의 경우에는 단독 처리군보다 소량을 사용했음에도 불구하고 히알루론산의 양이 유의하게 증가하였으며, 유자 유근피 및 함초 추출물의 복합 처방을 사용한 실험군(실시예 6)의 경우 역시 단독 처리군보다 소량을 사용했음에도 히알루론산의 양이 현저하게 증가하였고, 2종 복합추출물에 비하여도 현저한 효과를 보임을 알 수 있다.As shown in Fig. 4, the amount of hyaluronic acid was slightly increased compared to Comparative Example 10 in which yuzu, yugenmei and green tea extracts were treated alone (Comparative Examples 11 to 13) (Example 5), which was a combination of the extract of yuukee and green tea extracts, showed a significant increase in the amount of hyaluronic acid even though a small amount was used, In the case of Example 6), the amount of hyaluronic acid was remarkably increased even though it was used in a smaller amount than that of the single treatment group.

따라서, 본 발명에 따라 유자추출물과 유근피 추출물을 복합 사용하면 히알루론산의 합성을 효과적으로 증가시킬 수 있으며, 상기 복합 추출물에 함초추출물을 더 함유하는 경우에는 히알루론산 합성을 보다 현저하게 증가시킬 수 있고, 이로써 세포외기질 구조를 강화시킬 수 있으며, 히알루론산 감소로 인한 피부 탄력 저하 및 수분 함유량 감소를 예방할 수 있다.
Therefore, according to the present invention, the combined use of citron extract and rhizome extract can effectively increase the synthesis of hyaluronic acid, and when the complex extract further contains a green tea extract, the synthesis of hyaluronic acid can be remarkably increased, This can reinforce the extracellular matrix structure and prevent skin elasticity loss and moisture content reduction due to reduction of hyaluronic acid.

[제형예 1] 영양화장수 [Formulation Example 1] Nutritional lotion

하기 표 2에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양화장수를 제조하였다.Nutrition lotion was prepared according to a conventional method according to the composition shown in Table 2 below.

성분ingredient 함량 (중량%)Content (% by weight) 유자 추출물Citron extract 1010 유근피 추출물Acne extract 1010 함초 추출물Green tea extract 1010 스쿠알란Squalane 5.05.0 밀납Wax 4.04.0 폴리솔베이트 60Polysorbate 60 1.51.5 솔비탄세스퀴올레이트Sorbitan sesquioleate 1.51.5 유동파라핀Liquid paraffin 0.50.5 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드Caprylic / capric triglyceride 5.05.0 글리세린glycerin 3.03.0 부틸렌글리콜Butylene glycol 3.03.0 프로필렌글리콜Propylene glycol 3.03.0 카르복시비닐폴리머Carboxyvinyl polymer 0.10.1 트리에탄올아민Triethanolamine 0.20.2 방부제, 색소, 향료Preservative, coloring, fragrance 적량Suitable amount 정제수Purified water 잔량Balance 합계Sum 100100

[제형예 2] 영양크림[Formulation Example 2] Nourishing cream

하기 표 3에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양크림을 제조하였다.Nutrition creams were prepared according to the compositions shown in Table 3 below in a conventional manner.

성분ingredient 함량 (중량%)Content (% by weight) 유자 추출물Citron extract 1010 유근피 추출물Acne extract 1010 함초 추출물Green tea extract 1010 폴리솔베이트 60Polysorbate 60 1.51.5 솔비탄세스퀴올레이트Sorbitan sesquioleate 0.50.5 PEG60 경화피마자유PEG60 hardened castor oil 2.02.0 유동파라핀Liquid paraffin 10.010.0 스쿠알란Squalane 5.05.0 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드Caprylic / capric triglyceride 5.05.0 글리세린glycerin 5.05.0 부틸렌글리콜Butylene glycol 3.03.0 프로필렌글리콜Propylene glycol 3.03.0 트리에탄올아민Triethanolamine 0.20.2 방부제, 색소, 향료Preservative, coloring, fragrance 적량Suitable amount 정제수Purified water 잔량Balance 합계Sum 100100

[제형예 3] 팩 [Formulation Example 3] Pack

하기 표 4에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 팩을 제조하였다.Packs were prepared in a conventional manner according to the composition shown in Table 4 below.

성분ingredient 함량 (중량%)Content (% by weight) 유자 추출물Citron extract 1010 유근피 추출물Acne extract 1010 함초 추출물Green tea extract 1010 폴리비닐알콜Polyvinyl alcohol 13.013.0 소듐카르복시메틸셀룰로오스Sodium carboxymethylcellulose 0.20.2 글리세린glycerin 5.05.0 알란토인Allantoin 0.10.1 에탄올ethanol 6.06.0 PEG 12 노닐페닐에테르PEG 12 nonyl phenyl ether 0.30.3 폴리솔베이트 60Polysorbate 60 0.30.3 방부제, 색소, 향료Preservative, coloring, fragrance 적량Suitable amount 정제수Purified water 잔량Balance 합계Sum 100100

[제형예 4] 연고[Formulation Example 4] ointment

하기 표 5에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 연고를 제조하였다.Ointments were prepared in a conventional manner according to the compositions shown in Table 5 below.

성분ingredient 함량 (중량%)Content (% by weight) 유자 추출물Citron extract 1010 유근피추출물Acne extract 1010 함초 추출물Green tea extract 1010 정제수Purified water 잔량Balance 글리세린glycerin 8.08.0 부틸렌글리콜Butylene glycol 4.04.0 유동파라핀Liquid paraffin 15.015.0 베타글루칸Beta Glucan 7.07.0 카보머Carbomer 0.10.1 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드Caprylic / capric triglyceride 3.03.0 스쿠알란Squalane 1.01.0 세테아릴 글루코사이드Cetearyl glucoside 1.51.5 솔비탄 스테아레이트Sorbitan stearate 0.40.4 스테아릴 알코올Stearyl alcohol 1.01.0 방부제antiseptic 적량Suitable amount incense 적량Suitable amount 색소Pigment 잔량Balance 밀랍beeswax 4.14.1 합계Sum 100100

Claims (10)

유자 추출물, 유근피 추출물 및 함초 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 화장료 조성물.A cosmetic composition for moisturizing skin, comprising as an active ingredient, a mixture of citron extract, yuukee extract, and green tea extract. 제 1항에 있어서, 상기 유효성분이 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~20 중량% 로 함유되는 화장료 조성물.The cosmetic composition according to claim 1, wherein the effective ingredient is contained in an amount of 0.0001 to 20% by weight based on the total weight of the composition. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 조성물은 히알루론산 생성을 촉진시킴을 특징으로 하는 화장료 조성물.The cosmetic composition according to claim 1 or 2, wherein the composition promotes hyaluronic acid production. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 조성물은 히알루론산 합성 효소 유전자의 발현을 증가시킴을 특징으로 하는 화장료 조성물.The cosmetic composition according to claim 1 or 2, wherein the composition increases expression of a hyaluronic acid synthase gene. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 조성물은 버시칸 유전자의 발현을 증가시킴을 특징으로 하는 화장료 조성물.3. The cosmetic composition according to claim 1 or 2, wherein the composition increases the expression of a versatile gene. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 조성물은 MMP-12 유전자의 발현을 감소시킴을 특징으로 하는 화장료 조성물.3. The cosmetic composition according to claim 1 or 2, wherein the composition reduces the expression of the MMP-12 gene. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 유자 추출물, 유근피 추출물 및 함초 추출물은 혼합 중량비가 1:1:1임을 특징으로 하는 화장료 조성물.The cosmetic composition according to claim 1, wherein the composition is a mixture of citron extract, rhizome extract, and green tea extract in a weight ratio of 1: 1: 1. 유자 추출물, 유근피 추출물 및 함초 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 탄력 증진용 화장료 조성물.A cosmetic composition for promoting skin elasticity comprising a mixture of citron extract, citron extract, yuukee extract and green tea extract as an active ingredient. 제 8항에 있어서, 상기 유효성분이 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~20 중량%로 함유되는 화장료 조성물.The cosmetic composition according to claim 8, wherein the effective ingredient is contained in an amount of 0.0001 to 20% by weight based on the total weight of the composition. 제 8항에 있어서, 상기 조성물은 유자 추출물, 유근피 추출물 및 함초 추출물은 혼합 중량비가 1:1:1임을 특징으로 하는 화장료 조성물.[Claim 9] The cosmetic composition according to claim 8, wherein the composition comprises citron extract, rhizome extract and green tea extract at a weight ratio of 1: 1: 1.
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