KR101778436B1 - Acetobacter sp. SLV-7 as a novel strain with high acetic acid producing ability and use thereof - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 전통 발효 식초인 막걸리 식초로부터 분리한 아세토박터 속 균주에 관한 것으로, 상세하게는 초산 생성능(acetic acid production activity)이 우수한 아세토박터 속(Acetobacter sp .) SLV-7 균주(기탁번호 KACC 92002P)에 관한 것이다.The present invention relates to a strain of the genus Acetobacter isolated from a traditional fermented vinegar makgeolli vinegar. More particularly, the present invention relates to a strain of Acetobacter ( Acetobacter ) having excellent acetic acid production activity sp . ) SLV-7 strain (Accession No. KACC 92002P).
식초는 가장 오랜 역사를 가진 발효 식품 중 하나이다. 현재 양조식초는 건강용 식품으로 이용되며 의약품으로도 치료 효과가 있다고 보고되고 있다. 항생제 효과, 항산화 기능, 혈당을 낮춰주는 효과, 비만 방지, 콜레스테롤 저하, 동맥경화 및 고혈압의 예방 등의 다양한 생리 활성이 보고되고 있다. Vinegar is one of the oldest fermented foods. Currently, the vinegar is used as a health food and is reported to have therapeutic effect as a medicine. A variety of physiological activities such as antibiotic effect, antioxidant function, lowering of blood sugar, prevention of obesity, lowering of cholesterol, prevention of arteriosclerosis and hypertension have been reported.
기존의 연구는 초산 생성 수율을 높이는 방향으로 수행되었으나 현재는 독일의 Frings 사에서 심부발효법(submerged culture)을 개발하여 17% 이상의 고산도 식초를 만들어낼 수 있게 되면서 근래에는 연구 테마로 다루어지고 있지 않다. 전통발효 식초는 2단계 발효를 하는데, 먼저 당을 포함하고 있는 원재료에서 효모에 의해 알코올을 생성하고, 이어서 초산균에 의해 초산을 생성하게 된다. 전통발효 식초는 일반적으로 한 달 정도 긴 발효기간을 거친다. 자연적인 식초를 이용하여 종균 배양(start culture)을 한다.Previous studies have been carried out to increase the yield of acetic acid production. However, nowadays, Frings of Germany has developed a submerged culture to produce more than 17% of high acidity vinegar. . Traditional fermented vinegar is fermented in two stages. First, alcohol is produced by the yeast in the raw material containing sugar, followed by acetic acid to produce acetic acid. Traditional fermented vinegar generally has a long fermentation period of about one month. Start culture using natural vinegar.
식초 제조에 사용되는 균은 초산균과(Acetobacteraceae)에 속하며, 절대 호기성으로, 최적 성장 온도는 25 내지 30℃이고, 최적 pH는 5.0 내지 6.5이다. 초산균은 pH 5.0 이하의 산성 조건에서도 저항성을 가진다고 알려져 있으며, 보통 식초 생산에 이용하는 주요 초산균은 아세토박터(Acetobacter) 및 글루코노박터(Gluconobacter) 2가지 속이다.The bacteria used for vinegar production belong to Acetobacteraceae and are absolutely aerobic, with an optimum growth temperature of 25 to 30 ° C and an optimum pH of 5.0 to 6.5. Acetic acid bacteria are known to have resistance even under acidic conditions below pH 5.0, and the main acetic acid bacteria used for vinegar production are usually two genera of Acetobacter and Gluconobacter .
국내의 식초 산업은 대기업, 저가 제품 위주로 형성이 되어있으며, 전통 식초 개발에 대한 노력이 부족한 현황이다. 또한 국내 발효산업은 기술력의 내용이 현장을 바탕으로 한 경험위주의 노하우 축적이 대부분으로, 전문성을 갖춘 기술개발과정이 체계화되어 있지 않은 실정이므로, 생물 산업 소재의 신속한 산업화, 수출증대 등 경제가치 창출에 어려움을 겪는 경우가 많다. The domestic vinegar industry is mainly composed of large enterprises and low-priced products, and there is a lack of efforts to develop traditional vinegar. In the domestic fermentation industry, most of the accumulation of experience-oriented know-how based on the contents of technology is based on the field. Since the professional development process of the technology has not been systemized, rapid industrialization of the bio-industry material, There are many cases of difficulties.
이러한 문제점을 극복하고 생물 산업을 한 단계 도약시키기 위해서는 다양한 미생물 배양특성에 관한 데이터베이스 구축, 발효배양 공정 및 균주 개발 기술, 실용화 관련 스케일 업 기술 등 핵심 기술 분야를 집중 공략하여 기술수준을 더욱 전문화하고, 대상 미생물의 기능/특성을 기준으로 요소 기술들을 효율적으로 통합 체계화함으로써 고효율의 기술개발 체계를 확립해야 할 필요가 있다. 우리나라의 전통 발효식품 제조공정은 종균(스타터)을 첨가하지 않고 주원료에 부재료를 첨가, 혼합하여 원료나 공기 중에서 유입된 천연 미생물에 의한 자연발효 과정을 이용하고 있다. 따라서 발효에 참여하는 미생물이 균일하지 못하여 제조 공정의 표준화가 어려우며 이로 인하여 생산되는 발효식품의 품질 및 맛이 다양하게 형성된다.In order to overcome these problems and take a leap forward in the biotechnology industry, we will concentrate on core technologies such as database construction of various microbial characteristics, fermentation culture process and strain development technology, and scale-up technology related to practical application, It is necessary to establish a highly efficient technology development system by efficiently integrating the element technologies based on the function / characteristics of the target microorganisms. The traditional fermented food manufacturing process in Korea utilizes the natural fermentation process by natural microorganisms introduced from raw materials or air by adding and mixing the raw materials to the main raw materials without adding the seeds (starter). Therefore, since the microorganisms participating in the fermentation are not uniform, it is difficult to standardize the manufacturing process, and thus the quality and taste of the fermented food produced are variously formed.
본 발명의 일 양상은 에탄올 저항성을 가지며, 초산 생산능을 가지는 아세토박터 속(Acetobacter sp .) SLV-7 균주(기탁번호 KACC 92002P)를 제공하는 것이다.One aspect of the present invention is to provide a method of producing an Acetobacter sp . ) Strain SLV-7 (Accession No. KACC 92002P).
본 발명의 다른 양상은 본 발명의 아세토박터 속 SLV-7 균주(기탁번호 KACC 92002P), 상기 균주의 배양물, 상기 균주 또는 배양액의 농축물 및 이들의 건조물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 초산 발효용 조성물을 제공하는 것이다.Another aspect of the present invention is a culture medium containing at least one selected from the group consisting of the acetobacterium strain SLV-7 of the present invention (accession number KACC 92002P), the culture of the strain, the concentrate of the strain or the culture and the dried product thereof And to provide a composition for the fermentation of acetic acid.
본 발명의 또 다른 양상은 본 발명의 아세토박터 속 SLV-7 균주(기탁번호 KACC 92002P)를 배양하여 종초를 제조하는 단계; 제조된 종초를 에탄올을 포함하는 배지에 접종하여 발효하는 단계; 및 발효된 배지를 여과하는 단계를 포함하는 식초의 제조방법 및 상기 제조방법에 의하여 제조된 식초를 제공하는 것이다.Another aspect of the present invention is a method for producing a plant of the present invention comprising culturing the acetobacterium strain SLV-7 (Accession No. KACC 92002P) of the present invention to produce a herbaceous plant; Fermenting the prepared herbicide in a medium containing ethanol; And a step of filtering the fermented medium, and a vinegar produced by the method.
본 발명의 일 양상은 에탄올 저항성을 가지며, 초산 생산능을 가지는 아세토박터 속(Acetobacter sp .) SLV-7 균주(기탁번호 KACC 92002P)를 제공한다.One aspect of the present invention is to provide a method of producing an Acetobacter sp . ) Strain SLV-7 (Accession No. KACC 92002P).
본 발명의 용어 "아세토박터(Acetobacter)"는 그람 음성의 알파-프로테오박테리아(α-Proteobacteria) 강의 초산균과(Acetobacteraceae)에 속하는 절대호기성 세균으로, 에탄올을 발효하여 초산(acetic acid)을 생성한다. 단간 또는 타원형의 단독 또는 연쇄상으로 존재하며, 포자는 형성하지 않고, 운동성은 있는 것과 없는 것이 있으며, 생육 최적 pH는 3.5 내지 6.5이다.The term " Acetobacter " of the present invention is an absolute aerobic bacterium belonging to the gram-negative alpha- Proteobacteria river and belonging to Acetobacteraceae , and fermentation of ethanol produces acetic acid . It is present in a single or an oval or single-stranded form, does not form spores, has no motility, and has an optimal pH of 3.5 to 6.5.
일 구체예에 따르면 상기 아세토박터 속 SLV-7 균주는 본 발명자가 전통 발효식초인 막걸리 식초에서 분리하여 동정하였으며, 상기 균주의 16S rRNA 유전자 염기서열(서열번호 4)을 분석한 결과 아세토박터 파스테리아누스 아종 파스테리아누스(Acetobacter pasteurianus subsp . pasteurianus) LMG 1262T 균주와 99.9% 상동성이 있는 것을 확인하였으나, 전체 유전체로 평균 서열 동일성(Average nucleotide identity, ANI)을 분석한 결과 90.52%로 낮게 나타나 신규한 초산 균주인 것을 확인하였다. 따라서, 상기 균주를 국립농업과학원 농업유전자원센터에 기탁하여 KACC 92002P의 수탁번호를 부여받았다.According to one embodiment of the present invention, the isolate SLV-7 in the genus Acetobacter was identified by isolating it from the conventional fermented vinegar makgeolli vinegar, and the 16S rRNA gene sequence (SEQ ID NO: 4) of the strain was analyzed. As a result, Acetobacter pasteurianus subsp . pasteurianus ) LMG 1262T. However, as a result of analyzing the average nucleotide identity (ANI) of the whole genome, it was found to be 90.52%, which is a novel acetic acid strain. Therefore, the above strain was deposited with the National Institute of Agricultural Science and Technology, National Institute of Agricultural Science, and received the accession number of KACC 92002P.
일 구체예에 따르면 상기 아세토박터 속 SLV-7 균주는 10 내지 45℃의 온도 범위에서 생장하며, 바람직하게는 15 내지 40℃, 더욱 바람직하게는 20 내지 37℃의 온도에서 생장할 수 있다.According to one embodiment, the strain of the genus Acetobacter SLV-7 grows in a temperature range of 10 to 45 ° C, preferably 15 to 40 ° C, more preferably 20 to 37 ° C.
일 구체예에 따르면 상기 아세토박터 속 SLV-7 균주는 에탄올 농도가 0 내지 15%인 배지에서 생장하며, 바람직하게는 0 내지 10%, 더욱 바람직하게는 0 내지 8%의 에탄올 농도에서 생장할 수 있다.According to one embodiment, the strain of the genus SLV-7 in the genus Acetobacter is grown in a medium having an ethanol concentration of 0 to 15%, preferably 0 to 10%, more preferably 0 to 8% have.
일 구체예에 따르면 상기 아세토박터 속 SLV-7 균주는 초산 농도가 0 내지 8%인 배지에서 생장하며, 바람직하게는 0 내지 6%, 더욱 바람직하게는 0 내지 4%의 초산 농도에서 생장할 수 있다.According to one embodiment, the strain of the genus SLV-7 in the genus Acetobacter is grown in a medium having a nitric acid concentration of 0 to 8%, preferably 0 to 6%, more preferably 0 to 4% have.
또한 본 발명의 다른 양상은 본 발명의 아세토박터 속 SLV-7 균주(기탁번호 KACC 92002P), 상기 균주의 배양물, 상기 균주 또는 배양액의 농축물 및 이들의 건조물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 초산 발효용 조성물을 제공한다.Further, another aspect of the present invention includes at least one selected from the group consisting of the strain of the genus acetobacterium SLV-7 (Accession No. KACC 92002P) of the present invention, the culture of the strain, the concentrate of the strain or the culture and the dried product thereof The composition for fermentation with acetic acid.
본 발명의 용어 "배양물"은 배지에서 일정 기간 동안 배양하여 수득한 균주, 그의 대사물, 여분의 영양분 등을 포함하는 배지 또는 균주를 배양한 후 균주를 제거한 배양액을 포함하는 개념으로 해석된다.The term "culture product" of the present invention is interpreted as a concept including a culture medium obtained by culturing a medium or a strain containing the strain, its metabolites, extra nutrients, etc. obtained by culturing the medium for a certain period of time, and then removing the strain.
일 구체예에 따르면 본 발명의 아세토박터 속 SLV-7 균주의 배양물은 미생물 배양에 사용되는 배지 중에서 당업자가 목적에 따라 용이하게 선택한 배지를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 초산균 배양에 사용되는 배지, 보다 바람직하게는 하기 실시예 1에 기재된 YPGDE 배지를 선택하여 사용할 수 있다.According to one embodiment, the culture of the strain of the genus Acetobacterium SLV-7 of the present invention can be used in a culture medium used for culturing microorganisms, a medium easily selected by a person skilled in the art depending on the purpose, More preferably, the YPGDE medium described in Example 1 below can be selected and used.
일 구체예에 따르면 본 발명의 아세토박터 속 SLV-7 균주의 배양물은, 상기 미생물 배양 배지에 본 발명의 균주를 접종하고, 당업계에 공지된 미생물 배양 방법(예를 들어, 정치배양, 교반배양)에 따라, 바람직하게는 초산균 배양 방법에 따라, 보다 바람직하게는 10 중량%(배지 전체 중량 대비)로 접종하고 25 내지 37에서 2 내지 10일 동안 배양하여 제조할 수 있다. 보다 더 바람직하게는 본 발명의 균주를 10 중량%(배지 전체 중량 대비)로 배지에 접종하고 30℃에서 배양하여 제조할 수 있다.According to one embodiment, the culture of the strain of the genus Acetobacter SLV-7 of the present invention can be prepared by inoculating the strain of the present invention into the microorganism culture medium and culturing the microorganism in a microorganism culture method (for example, stationary culture, stirring Culturing, preferably in a cultivation method of acetic acid, more preferably 10% by weight (based on the total weight of the culture medium) and culturing at 25 to 37 for 2 to 10 days. More preferably, the strain of the present invention can be prepared by inoculating the culture medium with 10% by weight (based on the total weight of the culture medium) and culturing at 30 캜.
상기 아세토박터 속 SLV-7 균주 또는 배양액의 농축물 및 이들의 건조물은 당업계에 공지된 미생물 또는 배양액의 농축 또는 건조 방법에 따라 용이하게 제조될 수 있으며, 아세토박터 속 SLV-7 균주, 균주의 배양물, 균주 또는 배양액의 농축물 및 이들의 건조물은 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 본 발명의 초산 생산용 조성물에 1 내지 15 중량%로 함유될 수 있다.The strain of the genus Escherichia coli SLV-7 or the concentrate of the culture and the dried product thereof can be easily prepared according to the method of concentrating or drying the microorganism or the culture medium known in the art, and the strain of the genus SLV-7 of Acetobacter, The culture, the strain or the concentrate of the culture solution and the dried product thereof are not limited thereto, but they may be contained in the composition for producing acetic acid of the present invention in an amount of 1 to 15% by weight.
본 발명의 또 다른 양상은 아세토박터 속 SLV-7 균주(기탁번호 KACC 92002P)를 배양하여 종초를 제조하는 단계; 제조된 종초를 에탄올을 포함하는 배지에 접종하여 발효하는 단계; 및 상기 결과물을 여과하는 단계를 포함하는 식초의 제조방법 및 이에 의하여 제조된 식초를 제공한다.In another aspect of the present invention, there is provided a method for producing a plant, comprising culturing an acetobacterium strain SLV-7 (Accession No. KACC 92002P) to produce a herbaceous plant; Fermenting the prepared herbicide in a medium containing ethanol; And filtering the resultant, and a vinegar produced by the method.
본 발명의 용어 "배양"은 미생물을 적당히 인공적으로 조절한 환경조건에서 생육시키는 것을 의미한다. 구체적으로, 상기 배양방법의 예에는, 회분식 배양(batch culture), 연속식 배양(continuous culture) 및 유가식 배양(fed-batchculture)이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이러한 다양한 방법은, 예를 들면, "Biochemical Engineering" (James M. Lee, Prentice-Hall International Editions, pp138-176, 1991) 등에 개시되어 있다.The term "cultivation" of the present invention means that microorganisms are grown under moderately artificially controlled environmental conditions. Specifically, examples of the culture method include, but are not limited to, a batch culture, a continuous culture, and a fed-batch culture. These various methods are disclosed, for example, in "Biochemical Engineering" (James M. Lee, Prentice-Hall International Editions, pp. 138-176, 1991).
본 발명의 용어 "종초(vinegar starter)"란 새롭게 식초를 담글 때 쓰이는 종(種)이 되는 초를 말하며, 초산균이 활발하게 초산을 생성하는 능력이 있는 상태의 초를 의미한다. 일반적으로 발효 종료액의 일부를 남겨 종초로 하거나 또는 정상적인 발효를 하고 있는 발효액의 일부를 사용한다. 종초에 함유되어 있는 초산균은 균막을 빠르게 늘려 균막의 노화가 늦고 발효가 종료될 때까지 막을 보존함으로써 산 생성의 속도가 빠르며, 산 생성이 끝까지 진행되어 원하는 농도까지 산을 생산하고 생성된 초산을 산화하기 않고 발효액을 혼탁시키지 않는 것이 좋다.The term " vinegar starter "of the present invention means a candle which becomes a species used for soaking vinegar newly, and means a candle in which acetic acid bacteria actively produce acetic acid. Generally, a portion of the fermentation broth which has been partially fermented, or part of the fermentation broth which is normally fermenting, is used. The acetic acid bacteria contained in the herbaceous plants rapidly grow the bacterial membrane to slow the aging of the bacteria membrane and preserve the membrane until the end of fermentation. Thus, the rate of acid production is fast, and the acid production is continued until the end, It is preferable that the fermentation liquid is not turbid.
일 구체예에 따르면 상기 종초를 제조하는 단계는 초산을 함유하는 배지에서 배양하여 이루어질 수 있으며, 초산은 0.5 내지 5%, 더욱 바람직하게는 1 내지 4% 농도로 포함될 수 있다.According to one embodiment, the step of preparing the herbaceous plant may be carried out in a culture medium containing acetic acid, and the acetic acid may be contained at a concentration of 0.5 to 5%, more preferably 1 to 4%.
일 구체예에 따르면 상기 에탄올은 배지에 2 내지 10%의 농도로 포함될 수 있으며, 4 내지 8%인 것이 바람직하고, 5 내지 6%인 것이 더욱 바람직하다.According to one embodiment, the ethanol may be contained in the medium at a concentration of 2 to 10%, preferably 4 to 8%, more preferably 5 to 6%.
일 구체예에 따르면 상기 종초는 에탄올을 포함하는 배지에 1 내지 15%로 포함될 수 있으며, 10%로 포함되는 것이 바람직하다 또한, 상기 발효하는 단계는 10 내지 40℃의 온도에서 이루어질 수 있으며, 20 내지 40℃인 것이 바람직하고, 30 내지 37℃인 것이 더욱 바람직하다.According to one embodiment, the herbaceous plant may be contained in a medium containing ethanol in an amount of 1 to 15%, preferably 10%. The fermentation step may be performed at a temperature of 10 to 40 ° C, Deg.] C to 40 [deg.] C, and more preferably 30 to 37 [deg.] C.
본 발명의 아세토박터 속(Acetobacter sp .) SLV-7 균주(기탁번호 KACC 92002P)는 에탄올 저항성을 가지며, 넓은 온도 범위에서 생장할 수 있고, 우수한 초산 생산능을 가지고 있으므로 식초 제조에 유용하게 사용될 수 있다.The Acetobacter of the present invention sp . ) SLV-7 strain (Accession No. KACC 92002P) has ethanol resistance, can grow in a wide temperature range, and has excellent acetic acid producing ability, so it can be useful for vinegar production.
도 1은 아세토박터 속 SLV-7 균주의 rep-PCR 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 다른 농도의 에탄올을 함유한 배지에서 아세토박터 속 SLV-7 균주를 배양한 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 다른 농도의 초산을 함유한 배지에서 아세토박터 속 SLV-7 균주를 배양한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 다양한 온도 범위에서 아세토박터 속 SLV-7 균주를 배양한 결과를 나타낸 도이다.FIG. 1 shows the rep-PCR result of the strain SLV-7 in Acetobacter.
FIG. 2 is a graph showing the results of culturing the strain of the genus SLV-7 in Acetobacter in a medium containing ethanol at different concentrations. FIG.
Fig. 3 is a graph showing the results of incubation of the strain SLV-7 in Acetobacter in a medium containing acetic acid at different concentrations.
FIG. 4 shows the results of culturing the strain of the genus Acetobacter SLV-7 in various temperature ranges.
이하 하나 이상의 구체예를 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, one or more embodiments will be described in more detail by way of examples. However, these embodiments are intended to illustrate one or more embodiments, and the scope of the present invention is not limited to these embodiments.
실시예Example 1: 초산균주의 분리 1: Isolation of acetic acid bacteria
막걸리 38종을 30에서 4 내지 6주 정도 발효시켜 만든 막걸리 식초 및 10종의 종초에서 초산균을 분리하였다. Acetic acid bacteria were isolated from makgeolli vinegar and 10 kinds of herbaceous plants which were prepared by fermenting 38 kinds of rice wine from 30 to 4 to 6 weeks.
구체적으로 막걸리식초 및 종초를 10진 희석법(serial dilution)으로 희석하여 탄산칼슘(CaCO3)이 2% 함유되어 있는 YPGDE 아가배지(0.5% yeast extract, 0.5% peptone, 0.5% glycerol, 0.5% D-glucose, 1.5% agar 및 4% ethanol)에 도말하였다. 도말한 아가 배지(agar plate)를 30℃에서 5일 동안 배양한 후 투명환이 생성되는 균주 38개를 선발하였다.Specifically, the decimal dilution method and the rice wine vinegar jongcho (serial dilution) to calcium carbonate (CaCO 3) is 2% contained YPGDE agar medium (0.5% yeast extract is diluted, 0.5% peptone, 0.5% glycerol , 0.5% D- glucose, 1.5% agar and 4% ethanol). The agar plate was incubated at 30 ℃ for 5 days, and 38 isolates were selected.
이후 탄산칼슘 용해능이 확인되는 균주들만 GTG5 프라이머를 이용하여 rep-PCR(repetitive extragenic palindromic PCR)을 수행하였다. 구체적으로 주형 DNA를 얻기 위하여 선택한 콜로니만 취하여 Chelex-100 solution(Bio-rad, USA)에 넣고 100에서 10분 동안 끓여 세포벽을 분해시켰다. 주형 DNA 1.5 ㎕, GTG5(5'-GTGGTGGTGGTGGTG-3′') 프라이머(서열번호 1), 1.25 U Taq polymerase(solgent, Korea), dNTP mixute(solgent, Korea), 1X Taq buffer(solgent, Korea) 및 정제수(pure water)를 사용하여 총 부피를 50 ㎕로 맞춘 후, C1000 thermal cycler (Bio-Rad, USA)를 이용하여 증폭하였다. PCR 조건으로는 94℃ 5분(1 cycle); 94℃ 30초, 85℃ 1분 및 65℃ 8분(30 cycle); 65℃ 16분(1 cycle)을 설정하였다. Only repressive extragenic palindromic PCR (PCR) was performed using GTG5 primers. Specifically, only the selected colonies were taken to obtain the template DNA, and the cells were boiled at 100 for 10 minutes in a Chelex-100 solution (Bio-Rad, USA). (1.5 g), GTG5 (5'-GTGGTGGTGGTGGTTG-3 '') primer (SEQ ID NO: 1), 1.25 U Taq polymerase (solgent, Korea), dNTP mixute (solgent, Korea), 1X Taq buffer Total volume was adjusted to 50 μl using pure water and amplified using a C1000 thermal cycler (Bio-Rad, USA). PCR conditions were 94 ° C for 5 minutes (1 cycle); 94 ° C for 30 seconds, 85 ° C for 1 minute, and 65 ° C for 8 minutes (30 cycles); 65 ° C for 16 minutes (1 cycle) was set.
PCR이 끝난 후 산물을 1.5%의 아가로스 겔(0.5% TBE buffer)을 사용하여 100 V에서 45분 동안 전기영동(electrophoresis)한 후 브롬화 에티듐(ethidium bromide, EtBr)으로 15분간 염색하여 PCR 산물의 염색 패턴을 확인하였다. 특정 패턴을 나타내는 시료만을 다시 선택하여 19개의 균주를 선별하였다.After the PCR was completed, the product was electrophoresed at 100 V for 45 minutes using 1.5% agarose gel (0.5% TBE buffer), stained with ethidium bromide (EtBr) for 15 minutes, Was confirmed. Nineteen strains were selected by re-selecting only the sample showing a specific pattern.
상기 선별된 19개의 균주를 다시 탄산칼슘이 2% 함유되어 있는 YPGDE 아가배지에 접종한 후 단일 콜로니에서 형성되는 투명환의 크기를 바탕으로 우수한 초산 생성능을 보이면서 성장속도가 빠른 균주 SLV-7를 선별하였다.The selected 19 strains were inoculated into a YPGDE agar medium containing 2% of calcium carbonate, and the strain SLV-7 having a high growth rate was selected based on the size of the transparent ring formed in a single colony .
실시예Example 2: 선별한 초산균주의 동정 2: Identification of selected acetic acid bacteria
16S rRNA 유전자를 통해 기존의 보고된 미생물과 상기 실시예 1에서 분리한 SLV-7 균주의 상동성을 비교하였다. The homology between the previously reported microorganisms and the SLV-7 strain isolated in Example 1 was compared through the 16S rRNA gene.
먼저 16S rRNA 유전자의 염기서열을 확인하기 위해 콜로니 PCR(colony polymerase chain reaction)을 수행하였다. 주형 DNA를 추출하기 위하여 선택한 콜로니를 취하여 Chelex-100 solution(Bio-rad, USA)에 넣고 100℃에서 10분 동안 끓여 세포벽을 분해시켰다. 주형 DNA 1 ㎕, F1(5'-AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG-3') 프라이머(서열번호 2), R13(5'-TAC GGY TAC CTT GTT ACG ACT T-3') 프라이머(서열번호 3), 1.25 U Taq polymerase, dNTP mixute, 1X Taq buffer 및 정제수를 사용하여 총 부피 50 ㎕를 맞춘 후, C1000 thermal cycler를 이용하여 증폭하였다. PCR 조건으로는 94 5분(1 cycle); 94℃ 45초, 60℃ 45초 및 72℃ 1분(30 cycle); 72℃ 10분(1 cycle)을 설정하였다. 증폭된 PCR 산물을 PCR product purification kit(Solgent, Korea)를 이용하여 정제하였고, Macrogen(Korea)을 통해 16S rRNA 유전자의 염기서열을 분석하였다.First, colony polymerase chain reaction (PCR) was performed to confirm the base sequence of the 16S rRNA gene. Selected colonies were extracted from the colonies in a Chelex-100 solution (Bio-rad, USA) and boiled for 10 minutes at 100 ° C to decompose the cell wall. Primer (SEQ ID NO: 2), F1 (5'-AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG-3 ') primer (SEQ ID NO: ), 1.25 U Taq polymerase, dNTP mixute, 1X Taq buffer, and purified water, and then amplified using a C1000 thermal cycler. PCR conditions were 94 5 min (1 cycle); 94 DEG C for 45 seconds, 60 DEG C for 45 seconds, and 72 DEG C for 1 minute (30 cycles); 72 ° C for 10 minutes (one cycle) was set. Amplified PCR products were purified using PCR product purification kit (Solgent, Korea) and analyzed for the base sequence of 16S rRNA gene through Macrogen (Korea).
이후 SLV-7 균주의 16S rRNA 염기서열(서열번호 4)을 국가생명연구자원정보센터(Korea bioinformation center, KOBIC)의 EzTaxon(Chun et al., 2007)을 이용하여 기존에 보고된 미생물의 16S rRNA 염기서열과 상동성(similarity)을 비교하였다. The 16S rRNA sequence (SEQ ID NO: 4) of the SLV-7 strain was amplified using EzTaxon (Chun et al., 2007) of the Korea Bioinformation Center (KOBIC) The nucleotide sequence was compared with similarity.
그 결과 본 발명의 아세토박터 속(Acetobacter sp.) SLV-7 균주는 아세토박터 파스테리아누스 아종 파스테리아누스(Acetobacter pasteurianus subsp . pasteurianus) LMG 1262T 균주와 99.9%, 아세토박터 파스테리아누스 아종 아센덴스(Acetobacter pasteurianus subsp . ascendens) LMG 1590T 균주와 99.8%, 아세토박터 파스테리아누스 아종 파라독수스(Acetobacter pasteurianus subsp . paradoxus) LMG 1591T 균주와 99.7%의 상동성이 있는 것을 확인하였다. As a result, the present inventive Acetobacter sp.) The strain SLV-7 is an Acetobacter pacificia subsp. pasteurianus subsp . pasteurianus ) LMG 1262T strain and 99.9%, Acetobacter pasteurianus subsp . ascendens ) with LMG 1590T strain, 99.8%, Acetobacter pacificianus paradoxus ( Acetobacter pasteurianus subsp . paradoxus LMG 1591T strain was 99.7% homologous.
그러나 도 1에 나타난 바와 같이 GTG5-PCR 패턴을 비교한 결과, 아세토박터 SLV-7 균주의 패턴은 Acetobacter pasteurianus subsp . ascendens LMG 1590T 균주 및 A. pasteurianus subsp . paradoxus LMG 1591T 균주와는 확연히 다르고, A. pasteurianus subsp . pasteurianus LMG 1262T(A. pasteurianus subsp . Pasteurianus KACC 13994T) 균주와는 패턴은 비슷하였지만, 전체 유전체로 평균 서열 동일성(Average nucleotide identity, ANI)을 분석한 결과 90.52%로 낮게 나타나 신규한 초산 균주임을 확인하였다(도 1).However, as shown in Fig. 1, the GTG5-PCR pattern was compared. As a result, the pattern of Acetobacter SLV-7 strain was Acetobacter pasteurianus subsp . ascendens LMG 1590T strain and A. pasteurianus subsp . paradoxus LMG 1591T strain, and A. pasteurianus subsp . pasteurianus LMG 1262T ( A. pasteurianus subsp . Pasteurianus KACC 13994T), but the average nucleotide identity (ANI) of the whole genome was analyzed to be 90.52%, which was a novel acetic acid strain (FIG. 1).
실시예Example 3: 아세토박터 3: Acetobacter SLVSLV -7 균주의 특성 분석-7 Characterization of strains
기존에 알려진 2종의 공시균주인 아세토박터 포모룸(Acetobacter pomorum) KCTC 22319T(와인, 사과식초에서의 분리균) 및 아세토박터 아세티(Acetobacter aceti) KCTC 12290T(=Acetobacter ATCC 15978T, 식초 생산을 위해 사용된 균주)를 선정하여 후보 균주인 와 함께 균주의 특성을 분석하였다.Two previously known isolates, Acetobacter pomorum)
3-1: 에탄올 저항성 확인3-1: Identification of ethanol resistance
YPGD 배지에 에탄올을 각 농도별(0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 및 14%)로 첨가하여 플레이트를 제조하였다. YPGDE 배지에서 OD600 값이 1이 될 때까지 Acetobacter sp. SLV-7 균주를 배양하고, 배양액을 10-3까지 희석하여 5 ㎕를 플레이트에 접종하여 30℃에서 48시간 동안 배양하였다.Ethanol was added to the YPGD medium at each concentration (0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 and 14%) to prepare plates. In the YPGDE medium, until an OD 600 value of 1 was reached, Acetobacter sp. The SLV-7 strain was cultured, and the culture was diluted to 10 < -3 > and 5 [mu] L of the strain was inoculated on the plate and cultured at 30 DEG C for 48 hours.
그 결과 Acetobacter sp. SLV-7 균주가 높은 에탄올 저항성을 나타내는 것을 확인하였다(도 2).As a result, Acetobacter sp. SLV-7 strain showed high ethanol resistance (Fig. 2).
3-2: 초산 저항성 확인3-2: Acid resistance confirmation
YPGDE 배지에 초산을 각 농도별(0, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4 및 4.5%)로 첨가하여 플레이트를 제조하였다. YPGDE 배지에서 OD600 값이 1이 될 때까지 Acetobacter sp. SLV-7 균주를 배양하고, 배양액을 10-3까지 희석하여 5 ㎕를 플레이트에 접종하여 30℃에서 48시간 동안 배양하였다.Plates were prepared by adding acetic acid to the YPGDE medium at various concentrations (0, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4 and 4.5%). In the YPGDE medium, until the OD 600 value reaches 1, the Acetobacter sp. The SLV-7 strain was cultured, and the culture was diluted to 10 < -3 > and 5 [mu] L of the strain was inoculated on the plate and cultured at 30 DEG C for 48 hours.
그 결과 Acetobacter sp. SLV-7 균주가 높은 초산 농도에서도 다른 균주에 비해 비교적 빠르게 성장하는 것을 확인하였다(도 3).As a result, Acetobacter sp. SLV-7 strains were found to grow relatively rapidly at higher acetic acid concentrations than other strains (FIG. 3).
3-3: 생장 온도 범위 확인3-3: Check the growth temperature range
YPGDE 배지에서 OD600 값이 1이 될 때까지 Acetobacter sp. SLV-7 균주를 배양하고, 배양액을 10-3까지 희석하여 5 ㎕를 YPGDE 배지 플레이트에 접종하였다. 접종 후 10, 15, 20, 25, 30, 37, 40 및 45℃에서 48시간 동안 배양하였다.In the YPGDE medium, until an OD 600 value of 1 was reached, Acetobacter sp. SLV-7 strain was cultured, and the culture solution was diluted to 10 < -3 > and 5 [mu] l was inoculated on a YPGDE medium plate. After inoculation, the cells were cultured at 10, 15, 20, 25, 30, 37, 40 and 45 캜 for 48 hours.
그 결과 모든 초산균의 최적 배양 온도는 30℃인 것을 확인하였으며, 특히 Acetobacter sp. SLV-7 균주는 20 내지 40℃까지 넓은 온도 범위에서 성장하는 것을 확인하였다(도 4).As a result, it was confirmed that the optimal culture temperature of all the acetic acid bacteria was 30 ℃. Especially, Acetobacter sp. The strain SLV-7 was found to grow in a wide temperature range from 20 to 40 DEG C (FIG. 4).
3-4: 초산 3-4: Acetic acid 생성능Generation 평가 evaluation
초산균을 발효기를 사용하여 배양하고, 성장곡선 및 초산 생산 수율을 확인하였다. 발효기 운전 조건은 하기 표 1과 같다.The acetic acid bacteria were cultured using a fermenter, and the growth curve and yield of acetic acid production were confirmed. The operating conditions of the fermenter are shown in Table 1 below.
잔여 에탄올 농도가 1% 이하로 감소하였을 때 에탄올 5%를 추가로 주입하였다. 발효 최고치일 때 초산 농도(%), 최저 pH, 초산 생산 수율을 확인하였고, 초산 생산 수율은 하기 수학식 1을 이용하여 계산하였다.When the residual ethanol concentration decreased to 1% or less, 5% ethanol was added. Acetic acid concentration (%), minimum pH and yield of acetic acid production were determined at the maximum fermentation value, and the yield of acetic acid production was calculated using the following equation (1).
초산균 발효기간 중 생성되는 초산의 양과 소모되는 에탄올의 양은 HPLC 정량분석 방법으로 RI(Refractive Index) detector를 사용하여 검출하였다(이동상: 1 mM sulfuric acid, 유속: 0.5 ㎖/min, 검출기: RI detector, 컬럼: Repromer H, 컬럼 온도: 50℃). The amount of acetic acid produced and the amount of ethanol consumed during the fermentation period were detected by HPLC quantitative analysis using a RI (Refractive Index) detector (mobile phase: 1 mM sulfuric acid, flow rate: 0.5 ml / min, detector: RI detector, Column: Repromer H, column temperature: 50 < 0 > C).
그 결과 초기 산도 및 pH는 3개의 균주 모두 비슷하였으나, 최저 pH는 A. aceti KCTC 12290T 균주가 가장 낮았고, Acetobacter sp. SLV-7, A. pomorum KCTC 22319T 균주 순서로 낮은 것으로 나타났다. 발효 최고치일 때 초산 농도는 Acetobacter sp. SLV-7 균주가 가장 높았으며, 따라서 초산 수율도 Acetobacter sp. SLV-7 균주가 가장 우수한 것을 확인할 수 있었다(표 2).As a result, the initial pH and pH were similar for all three strains, but the lowest pH was lowest for A. aceti KCTC 12290T strain, Acetobacter sp. SLV-7, and
sp. SLV-7 Acetobacter
sp. SLV-7
KCTC 12290T A. aceti
KCTC 12290T
KCTC 22319T A. pomorum
초산 농도(%)Fermentation peak
Acetic Acid Concentration (%)
실시예Example 4: 아세토박터 4: Acetobacter SLVSLV -7 균주를 이용한 막걸리 식초의 제조Production of rice wine vinegar using -7 strain
시중에서 유통되고 있는 막걸리(당 0.5% 및 알코올 6%)를 반응기에 주입한 후, 초산 1%가 함유된 YPGDE 배지에서 48시간 배양한 Acetobacter sp . SLV-7 균주 배양액을 10% 접종하였다. 반응기 온도는 30℃로 유지하고 250 rpm으로 10일 동안 초산 발효를 진행하였다. A. aceti KCTC 12290T 균주를 이용하여 같은 조건으로 식초를 제조하여 비교하였다. Acetobacter (0.5%) and alcohol (6%) were injected into the reactor and incubated in YPGDE medium containing 1% of acetic acid for 48 hours. sp . SLV-7 strain was inoculated 10%. The reactor temperature was maintained at 30 ° C and acetic acid fermentation was carried out at 250 rpm for 10 days. A. using aceti strain KCTC 12290T were compared to produce a vinegar in the same conditions.
그 결과 A. aceti 12290T 균주는 총산 함량 3%이고, Acetobacter sp. SLV-7 균주는 총산 함량이 5.4%로 우수한 것을 확인하였다.As a result, A. aceti 12290T strain is 3% acidity content, Acetobacter sp. The SLV-7 strain was found to have an excellent total acid content of 5.4%.
실시예Example 5: 아세토박터 5: Acetobacter SLVSLV -7 균주를 이용한 감식초의 제조Preparation of persimmon vinegar using -7 strain
시중에서 판매되는 감을 세척한 후 물기를 제거하여 10일 정도 방치한 후, 꼭지와 씨를 제거하여 30℃에서 10일 동안 알코올 발효를 시켰다. 알코올 발효가 끝난 후, 초산이 1% 함유된 YPGDE 배지에서 48시간 배양한 Acetobacter sp. SLV-7 균주 배양액을 접종하여 초산 발효를 진행하였다. A. aceti KCTC 12290T 균주를 이용하여 같은 조건으로 식초를 제조하여 비교하였다. After washing the commercially available senses, the water was removed and left for about 10 days. Then, the faeces and seeds were removed and the alcohol fermentation was performed at 30 ° C for 10 days. After alcohol fermentation, the cells were cultured in YPGDE medium containing 1% of acetic acid for 48 hours. Acetobacter sp. SLV-7 culture broth was inoculated to conduct acetic acid fermentation. A. using aceti strain KCTC 12290T were compared to produce a vinegar in the same conditions.
그 결과 A. aceti 12290T 균주는 총산 함량 2%, Acetobacter sp. SLV-7 균주는 총산 함량 3.8%로 우수한 것을 확인하였다.As a result, A. aceti 12290T strain acidity content of 2%, Acetobacter sp. The SLV-7 strain was found to be excellent in total acid content of 3.8%.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.The present invention has been described with reference to the preferred embodiments. It will be understood by those skilled in the art that various changes in form and details may be made therein without departing from the spirit and scope of the invention as defined by the appended claims. Therefore, the disclosed embodiments should be considered in an illustrative rather than a restrictive sense. The scope of the present invention is defined by the appended claims rather than by the foregoing description, and all differences within the scope of equivalents thereof should be construed as being included in the present invention.
<110> CHUNG ANG University industry Academic Cooperation Foundation <120> Acetobacter sp. SLV-7 as a novel strain with high acetic acid producing ability and use thereof <130> PN160068 <160> 4 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthesized nucleotide <400> 1 gtggtggtgg tggtg 15 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthesized nucleotide <400> 2 agagtttgat cmtggctcag 20 <210> 3 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthesized nucleotide <400> 3 tacggytacc ttgttacgac tt 22 <210> 4 <211> 1476 <212> RNA <213> Acetobacter sp. <400> 4 agagtttgat cctggctcag agcgaacgct ggcggcatgc ttaacacatg caagtcgcac 60 gaaggtttcg gccttagtgg cggacgggtg agtaacgcgt aggtatctat ccatgggtgg 120 gggataacac tgggaaactg gtgctaatac cgcatgacac ctgagggtca aaggcgtaag 180 tcgcctgtgg aggagcctgc gtttgattag ctagttggtg gggtaaaggc ctaccaaggc 240 gatgatcaat agctggtttg agaggatgat cagccacact gggactgaga cacggcccag 300 actcctacgg gaggcagcag tggggaatat tggacaatgg gggcaaccct gatccagcaa 360 tgccgcgtgt gtgaagaagg tcttcggatt gtaaagcact ttcgacgggg acgatgatga 420 cggtacccgt agaagaagcc ccggctaact tcgtgccagc agccgcggta atacgaaggg 480 ggctagcgtt gctcggaatg actgggcgta aagggcgtgt aggcggtttg tacagtcaga 540 tgtgaaatcc ccgggcttaa cctgggagct gcatttgata cgtgcagact agagtgtgag 600 agagggttgt ggaattccca gtgtagaggt gaaattcgta gatattggga agaacaccgg 660 tggcgaaggc ggcaacctgg ctcattactg acgctgaggc gcgaaagcgt ggggagcaaa 720 caggattaga taccctggta gtccacgctg taaacgatgt gtgctagatg ttgggtgact 780 tagtcattca gtgtcgcagt taacgcgtta agcacaccgc ctggggagta cggccgcaag 840 gttgaaactc aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc 900 gaagcaacgc gcagaacctt accagggctt gaatgtagag gctgcaagca gagatgtttg 960 tttcccgcaa gggacctcta acacaggtgc tgcatggctg tcgtcagctc gtgtcgtgag 1020 atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccctatctt tagttgccat caggttgggc 1080 tgggcactct agagagactg ccggtgacaa gccggaggaa ggtggggatg acgtcaagtc 1140 ctcatggccc ttatgtcctg ggctacacac gtgctacaat ggcggtgaca gtgggaagct 1200 aggtggtgac accatgctga tctctaaaag ccgtctcagt tcggattgca ctctgcaact 1260 cgagtgcatg aaggtggaat cgctagtaat cgcggatcag catgccgcgg tgaatacgtt 1320 cccgggcctt gtacacaccg cccgtcacac catgggagtt ggtttgacct taagccggtg 1380 agcgaaccgc aaggacgcag ccgaccacgg tcgggtcagc gactggggtg aagtcgtaac 1440 aaggtagccg taggggaacc tgcggctgga tcacct 1476 <110> CHUNG ANG University industry Academic Cooperation Foundation <120> Acetobacter sp. SLV-7 as a novel strain with high acetic acid producing ability and use thereof <130> PN160068 <160> 4 <170> KoPatentin 3.0 <210> 1 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthesized nucleotide <400> 1 gtggtggtgg tggtg 15 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthesized nucleotide <400> 2 agagtttgat cmtggctcag 20 <210> 3 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthesized nucleotide <400> 3 tacggytacc ttgttacgac tt 22 <210> 4 <211> 1476 <212> RNA <213> Acetobacter sp. <400> 4 agagtttgat cctggctcag agcgaacgct ggcggcatgc ttaacacatg caagtcgcac 60 gaaggtttcg gccttagtgg cggacgggtg agtaacgcgt aggtatctat ccatgggtgg 120 gggataacac tgggaaactg gtgctaatac cgcatgacac ctgagggtca aaggcgtaag 180 tcgcctgtgg aggagcctgc gtttgattag ctagttggtg gggtaaaggc ctaccaaggc 240 gatgatcaat agctggtttg agaggatgat cagccacact gggactgaga cacggcccag 300 actcctacgg gaggcagcag tggggaatat tggacaatgg gggcaaccct gatccagcaa 360 tgccgcgtgt gtgaagaagg tcttcggatt gtaaagcact ttcgacgggg acgatgatga 420 cggtacccgt agaagaagcc ccggctaact tcgtgccagc agccgcggta atacgaaggg 480 ggctagcgtt gctcggaatg actgggcgta aagggcgtgt aggcggtttg tacagtcaga 540 tgtgaaatcc ccgggcttaa cctgggagct gcatttgata cgtgcagact agagtgtgag 600 agagggttgt ggaattccca gtgtagaggt gaaattcgta gatattggga agaacaccgg 660 tggcgaaggc ggcaacctgg ctcattactg acgctgaggc gcgaaagcgt ggggagcaaa 720 caggattaga taccctggta gtccacgctg taaacgatgt gtgctagatg ttgggtgact 780 tagtcattca gtgtcgcagt taacgcgtta agcacaccgc ctggggagta cggccgcaag 840 gttgaaactc aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc 900 gaagcaacgc gcagaacctt accagggctt gaatgtagag gctgcaagca gagatgtttg 960 tttcccgcaa gggacctcta acacaggtgc tgcatggctg tcgtcagctc gtgtcgtgag 1020 atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccctatctt tagttgccat caggttgggc 1080 tgggcactct agagagactg ccggtgacaa gccggaggaa ggtggggatg acgtcaagtc 1140 ctcatggccc ttatgtcctg ggctacacac gtgctacaat ggcggtgaca gtgggaagct 1200 aggtggtgac accatgctga tctctaaaag ccgtctcagt tcggattgca ctctgcaact 1260 cgagtgcatg aaggtggaat cgctagtaat cgcggatcag catgccgcgg tgaatacgtt 1320 cccgggcctt gtacacaccg cccgtcacac catgggagtt ggtttgacct taagccggtg 1380 agcgaaccgc aaggacgcag ccgaccacgg tcgggtcagc gactggggtg aagtcgtaac 1440 aaggtagccg taggggaacc tgcggctgga tcacct 1476
Claims (10)
Acetobacter sp. Strain SLV-7 (Accession No. KACC 92002P), which has ethanol resistance, ability to produce acetic acid, and which can grow at 20 to 37 占 폚.
The strain according to claim 1, wherein the strain grows at an ethanol concentration of 0 to 8%.
The strain according to claim 1, wherein the strain grows at an acetic acid concentration of 0 to 4.5%.
A composition for fermentation with acetic acid comprising at least one selected from the group consisting of the strain of the genus Escherichia coli SLV-7 (Accession No. KACC 92002P), the culture of the strain, the concentrate of the strain or the culture and the dried product thereof.
(b) 상기 제조된 종초를 막걸리를 포함하는 배지에 접종하여 발효시키는 단계; 및
(c) 상기 단계 (b)의 결과물을 여과하는 단계를 포함하는 막걸리 식초의 제조방법.
(a) culturing the strain of the genus acetobacterium SLV-7 of claim 1 (accession number KACC 92002P) in a medium containing acetic acid to produce a herbaceous plant;
(b) fermenting the prepared herbaceous plant by inoculating the medium containing rice wine; And
(c) filtering the resultant of step (b).
[7] The method of claim 6, wherein the fermenting step is performed at 20 to 37 [deg.] C.
9. A makgeolli vinegar produced by the method of any one of claims 6 to 9.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020160044776A KR101778436B1 (en) | 2016-04-12 | 2016-04-12 | Acetobacter sp. SLV-7 as a novel strain with high acetic acid producing ability and use thereof |
Applications Claiming Priority (1)
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---|---|---|---|
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2016
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