KR20200092178A - Acetobacter pasteurianus BGK2018 Strain having High Acetic acid Production Ability and Method for Producing Fermented Vinegar using the same - Google Patents

Acetobacter pasteurianus BGK2018 Strain having High Acetic acid Production Ability and Method for Producing Fermented Vinegar using the same Download PDF

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Abstract

The present invention relates to an Acetobacter pasterianus BGK2018 strain with excellent acetic acid production ability and a method for producing fermented vinegar using the same. The present invention ensures excellent flavor while shortening the alcohol fermentation period and the acetic acid fermentation period required during fermentation of fermented vinegar, thereby being usefully used in the manufacture of fermented vinegar.

Description

초산 생성 능력이 우수한 아세토박터 파스테리아너스 BGK2018 균주 및 이를 이용한 발효식초의 제조방법{Acetobacter pasteurianus BGK2018 Strain having High Acetic acid Production Ability and Method for Producing Fermented Vinegar using the same}Acetobacter pasteurianus BGK2018 Strain having High Acetic acid Production Ability and Method for Producing Fermented Vinegar using the same}

본 발명은 초산 생성 능력이 우수한 아세토박터 파스테리아너스 BGK2018 균주 및 이를 이용한 발효식초의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to an acetobacter pasterianus BGK2018 strain having excellent acetic acid production ability and a method for producing fermented vinegar using the same.

식초는 세계적으로 가장 오랜 역사를 가진 발효식품 중 하나로 조리시 조미료로 사용될 뿐만 아니라, 음용 목적의 건강용 식품 및 의약용으로도 다양하게 이용되고 있다. 일반적으로 식초는 알코올성 곡류 음료나 과실류 등을 원료로 하여 발효한 발효식초(일명 양조식초)와 빙초산 또는 초산을 원료로 하여 만든 합성식초로 구분된다.Vinegar is one of the most fermented foods with the longest history in the world. It is not only used as a seasoning for cooking, but is also widely used for health food and medicine for drinking purposes. In general, vinegar is divided into fermented vinegar (also known as brewed vinegar) fermented using alcoholic grain beverages or fruits as a raw material, and synthetic vinegar made from glacial acetic acid or acetic acid as a raw material.

합성식초는 빙초산을 물로 희석하고 조미료를 첨가한 것으로, 빙초산은 석유를 원료로 하여 아세트알데히드를 만든 후, 이것을 다시 화학적으로 산화시켜 초산을 만든 것이다. 따라서, 초산성분 이외에는 영양성분이 거의 없으며 발효식초와 달리 강산성이며 향기성분이 거의 없다. 그러나, 합성식초는 제조 공정이 짧고 제조 원가가 낮으며 대량생산이 가능해 저렴한 가격으로 판매 및 유통할 수 있으므로, 지금까지 국내 식초 시장의 대부분을 점유하여 왔다. 하지만, 근래에 식생활 수준 향상으로 발사믹식초와 같은 보다 풍미가 우수한 식초를 찾는 수요가 증가하고 있고, 방송과 언론을 통해 식초의 건강 기능성이 알려지며 건강용 식초 수요가 20~40대 여성과 직장인들을 중심으로 증가되어 국내 발효식초시장의 매출이 증가하고 있는 추세이다.Synthetic vinegar is made by diluting glacial acetic acid with water and adding seasoning. Glacial acetic acid is acetic acid made from petroleum, and then chemically oxidized to make acetic acid. Therefore, there are almost no nutrients other than acetic acid, and unlike fermented vinegar, it is strongly acidic and has little fragrance. However, synthetic vinegar has a short manufacturing process, low manufacturing cost, and mass production is possible, so it can be sold and distributed at an affordable price, so far it has occupied most of the domestic vinegar market. However, in recent years, the demand for vinegar with more flavor, such as balsamic vinegar, is increasing due to the improvement of dietary standards, and the health function of vinegar is known through broadcasting and the press. With the increase in the center, sales of the domestic fermented vinegar market are increasing.

발효식초는 원료로 사용되는 쌀 등의 곡물이나 포도 등의 과일의 향기, 및 발효과정에서 생성된 향기를 가지며, 초산 이외에 각종 휘발성 및 비휘발성 유기산류, 당류, 아미노산류 및 에스테르류 등을 함유하고 있다. 국내에서 생산되고 있는 발효식초에는 쌀을 원료로 술을 제조한 후 다시 초산 발효시킨 쌀 식초, 술 찌꺼기인 술지게미를 사용하여 주정을 첨가한 후 다시 초산 발효시킨 주박식초, 과일즙을 알코올 발효한 후 다시 초산 발효시킨 과일식초 및 맥아즙을 원료로 한 맥아식초 등이 있다. 발효식초는 일반적으로 효모(yeast)를 스타더(starter)로 이용하여 당을 알코올로 만들고, 다시 초산균(acetic acid bacteria)을 스타더로 이용하여 알코올을 초산(acetic acid)으로 변화시킨 다음, 숙성시켜 풍미를 증진시킨 후, 여과, 청징(clarification) 및 살균하여 유통된다. Fermented vinegar has the scent of fruits such as grains or grapes, such as rice used as a raw material, and the scent generated during the fermentation process, and contains various volatile and nonvolatile organic acids, sugars, amino acids, and esters in addition to acetic acid have. In the fermented vinegar produced in Korea, rice is used as a raw material, and then alcoholic fermentation is performed after adding acetone using rice vinegar that has been fermented in acetic acid and alcoholic liquor. Fruit vinegar fermented again and malt vinegar made from wort. Fermented vinegar generally uses yeast as a starter to make sugar into alcohol, and then uses acetic acid bacteria as a starter to convert alcohol to acetic acid, then matures it. After promoting the flavor by filtration, it is distributed by filtration, clarification and sterilization.

한편, 국내에서 막걸리나 약주 등의 전통주를 생산하는 중소규모의 많은 양조장은 전통주 시장 침체와 특히 국내 전통주의 대부분을 차지하고 있는 막걸리의 경우 계절적 요인에 의해 여름철과 겨울철의 수요가 큰 폭으로 줄어 경영상 곤란을 겪고 있다. 따라서, 식초를 발효하기 위해 필수적으로 필요한 사전 단계인 술을 제조하는 제조 설비와 공정을 보유하고 있다는 장점을 활용하여, 여름과 겨울 각각 약 2개월간의 계절적 비수기에 단기간 발효식초를 생산하여 숙성한 후 판매할 수 있다면 새로운 부가가치를 창출할 수 있을 것으로 기대된다. On the other hand, many small and medium sized breweries that produce traditional liquors such as rice wine and yakju in Korea have a large drop in demand in summer and winter due to seasonal factors, especially in the case of makgeolli, which occupies most of the domestic traditional liquor. I am having trouble. Therefore, utilizing the advantage of having a manufacturing facility and a process for manufacturing liquor, which is a necessary preliminary step for fermenting vinegar, after producing and fermenting fermented vinegar for a short period of time during the seasonal off-season for about two months in summer and winter, If it can be sold, it is expected to create new added value.

그러나, 전통주 양조장, 특히, 막걸리 양조장에서, 술 발효 및 식초 발효에 장기간이 소요되는 종래의 전통 발효식초 제조 방법을 사용할 경우, 계절적 비수기인 여름철 2개월과 겨울철 2개월이라는 단기간 동안 풍미가 우수한 식초를 제조하는 것은 어렵다는 문제점이 존재한다.However, in the case of using traditional traditional fermented vinegar production method that takes a long time for sake fermentation and vinegar fermentation in traditional breweries, especially makgeolli breweries, vinegar with excellent flavor for a short period of 2 months in summer and 2 months in winter There is a problem that it is difficult to manufacture.

이에, 본 발명자들은 초산 생성 능력이 우수한 균주를 발굴하기 위한 연구를 수행하여 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors completed the present invention by conducting a study to find a strain having excellent acetic acid production ability.

대한민국 특허공개 제10-2015-0105117호Republic of Korea Patent Publication No. 10-2015-0105117

본 발명의 하나의 목적은 초산 생성 능력이 우수한 아세토박터 파스테리아너스(Acetobacter pasteurianus) BGK2018 균주(기탁번호 KFCC11818P)를 제공하는 것이다.One object of the present invention is to provide an acetobacter pasteurianus (Actobacter pasteurianus ) BGK2018 strain (Accession No. KFCC11818P) having excellent acetic acid production ability.

본 발명의 다른 목적은 초산 생성 능력이 우수한 아세토박터 파스테리아너스(Acetobacter pasteurianus) BGK2018 균주(기탁번호 KFCC11818P), 상기 균주의 배양물, 상기 균주 또는 배양액의 농축물 및 이들의 건조물로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 식품 발효용 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is selected from the group consisting of acetobacter pasteurianus BGK2018 strain (Accession No. KFCC11818P), culture of the strain, concentrate of the strain or culture medium, and dried products thereof having excellent acetic acid production ability It is to provide a composition for fermenting food containing at least one.

본 발명의 또 다른 목적은 초산 생성 능력이 우수한 아세토박터 파스테리아너스(Acetobacter pasteurianus) BGK2018 균주(기탁번호 KFCC11818P)를 배양하여 종초를 제조하는 단계; 상기 종초를 막걸리에 접종하는 단계; 및 종초가 접종된 막걸리를 발효하여 발효식초를 제조하는 단계를 포함하는 발효식초의 제조방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to produce acetobacter pasteurinus ( Acetobacter pasteurianus ) BGK2018 strain (Accession No. KFCC11818P) excellent in acetic acid production ability to prepare a seed; Inoculating the seed in rice wine; And it is to provide a method for producing fermented vinegar comprising the step of producing fermented vinegar by fermenting the rice wine inoculated with seed.

본 발명의 또 다른 목적은 초산 생성 능력이 우수한 아세토박터 파스테리아너스(Acetobacter pasteurianus) BGK2018 균주(기탁번호 KFCC11818P)를 배양하여 종초를 제조하는 단계; 상기 종초를 막걸리에 접종하는 단계; 및 종초가 접종된 막걸리를 발효하여 발효식초를 제조하는 단계를 포함하는 발효식초의 제조방법으로 제조된 발효식초를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to produce acetobacter pasteurinus ( Acetobacter pasteurianus ) BGK2018 strain (Accession No. KFCC11818P) excellent in acetic acid production ability to prepare a seed; Inoculating the seed in rice wine; And it is to provide a fermented vinegar prepared by a method of manufacturing a fermented vinegar comprising the step of fermenting a vinegar inoculated with seed vinegar.

본 발명의 일 양상은 초산 생성 능력이 우수한 아세토박터 파스테리아너스(Acetobacter pasteurianus) BGK2018 균주(기탁번호 KFCC11818P)를 제공한다.One aspect of the present invention provides acetobacter pasteurianus BGK2018 strain (Accession No. KFCC11818P) having excellent acetic acid production ability.

상기 아세토박터 파스테리아너스(Acetobacter pasteurianus) BGK2018 균주는 산야초식초에서 분리한 것으로, 상기 BGK2018 균주를 한국미생물보존센터에 2019년 01월 10일자로 기탁하였다(기탁번호 KFCC11818P).The Acetobacter pasteurianus BGK2018 strain was isolated from Sanya vinegar, and the BGK2018 strain was deposited with the Korea Microbial Conservation Center on January 10, 2019 (Accession No. KFCC11818P).

본 발명의 아세토박터 파스테리아너스 BGK2018 균주는 발효식품인 산야초식초에서 분리하여 동정하였으며, 상기 균주의 게놈 DNA를 분석한 결과, 아세토박터 파스테리아너스에 속하는 신규한 균주임을 확인하였다. Acetobacter pasterianus BGK2018 strain of the present invention was identified by separation from fermented food, Sanya vinegar, and as a result of analyzing the genomic DNA of the strain, it was confirmed that it is a new strain belonging to Acetobacter pasterianus.

종래의 발효식초 제조방법은 알코올 발효를 위해 알코올 내성이 강한 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 효모를 이용하여 에탄올 농도가 15%가 되도록 장기간 알코올 발효한 뒤, 물로 에탄올 함량 8%로 희석한 후, 초산발효를 진행하는 공정으로 수행되었다. 이와 같은 공정은 발효기간이 길고, 제조된 발효식초의 풍미가 낮아, 우수한 품질의 발효식초를 단기간에 제조하는데 적용하기에 미흡하였다.The conventional fermentation vinegar production method uses alcohol-resistant Saccharomyces cerevisiae yeast to ferment alcohol for a long period of time, followed by alcohol fermentation for 15% so that the ethanol content is 8% with water. After that, it was performed as a process to proceed with acetic acid fermentation. Such a process has a long fermentation period and low flavor of the produced fermented vinegar, which is insufficient to be applied to manufacture excellent quality fermented vinegar in a short period of time.

본 발명의 아세토박터 파스테리아너스 BGK2018 균주는 기존의 아세토박터 파스테리아너스 KACC 13994 균주 대비, 낮은 에탄올 함량에서도 우수한 초산 생성 능력을 나타내므로, 단기간에 풍미가 우수한 발효식초의 제조에 유용하게 활용될 수 있다.The acetobacter pasterianus BGK2018 strain of the present invention exhibits excellent acetic acid production ability even at low ethanol content, compared to the existing acetobacter pasterianus KACC 13994 strain, and thus can be usefully used in the preparation of fermented vinegar with excellent flavor in a short period of time. have.

본 발명의 아세토박터 파스테리아너스 BGK2018 균주를 배양하는 방법은 당업계에 알려진 통상의 방법을 이용할 수 있다.The method for culturing the acetobacter pasterianus BGK2018 strain of the present invention can use a conventional method known in the art.

본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 균주는 산야초식초 유래일 수 있다.According to one embodiment of the invention, the strain may be derived from Sanya vinegar.

본 발명의 다른 양상은 초산 생성 능력이 우수한 아세토박터 파스테리아너스(Acetobacter pasteurianus) BGK2018 균주(기탁번호 KFCC11818P), 상기 균주의 배양물, 상기 균주 또는 배양액의 농축물 및 이들의 건조물로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 식품 발효용 조성물을 제공한다.Another aspect of the present invention is selected from the group consisting of acetobacter pasteurianus BGK2018 strain (Accession No. KFCC11818P), culture of the strain, concentrate of the strain or culture medium, and dried products thereof having excellent acetic acid production ability It provides a composition for fermenting food comprising one or more.

본 발명에서 사용되는 용어, "배양물"은 배지에서 일정 기간 동안 배양하여 수득한 균주, 그의 대사물 또는 여분의 영양분 등을 포함하는 배지를 말하며, 균주를 배양한 후 균주를 제거한 배양액을 포함한다.As used in the present invention, the term "culture" refers to a medium obtained by culturing for a period of time in a medium, a medium containing metabolites or extra nutrients, etc., and includes a culture medium in which the strain is removed after culturing the strain. .

일 구체예에 따르면 본 발명의 아세토박터 파스테리아너스 BGK2018 균주의 배양물은 미생물 배양에 사용되는 배지 중에서 선택될 수 있으며, 당업자가 목적에 따라 용이하게 변경하여 사용할 수 있다.According to one embodiment, the culture of the acetobacter pasterianus BGK2018 strain of the present invention may be selected from a medium used for microbial culture, and can be easily changed and used according to the purpose by those skilled in the art.

본 발명의 아세토박터 파스테리아너스 BGK2018 균주의 배양물은 상기 미생물 배양 배지에 본 발명의 균주를 접종하고, 당업계에 공지된 미생물 배양 방법(예를 들어, 정치배양, 교반배양)에 따라 제조할 수 있다.Cultures of the acetobacter pasterianus BGK2018 strain of the present invention are inoculated with the strain of the present invention in the microbial culture medium, and can be prepared according to a microbial culture method known in the art (e.g., static culture, stirred culture). Can.

상기 아세토박터 파스테리아너스 BGK2018 균주 또는 배양액의 농축물 및 이들의 건조물은 당업계에 공지된 미생물 또는 배양액의 농축 또는 건조 방법에 따라 용이하게 제조될 수 있으며, 아세토박터 파스테리아너스 BGK2018 균주, 균주의 배양물, 균주 또는 배양액의 농축물 및 이들의 건조물은 식품 발효용 조성물에 1 내지 15중량%로 함유될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The acetobacter pasterianus BGK2018 strain or a concentrate of the culture medium and dried products thereof can be easily prepared according to a method of concentrating or drying a microorganism or culture medium known in the art, and the acetobacter pasterianus BGK2018 strain, strain Concentrates of cultures, strains or cultures and dried products thereof may be contained in food fermentation compositions in an amount of 1 to 15% by weight, but are not limited thereto.

본 발명의 아세토박터 파스테리아너스 BGK2018 균주를 종균으로 사용하여 제조한 발효식품의 종류는 장류로써, 메주, 한식된장, 된장, 조미된장, 고추장, 조미고추장, 춘장, 청국장, 혼합장, 한식간장, 양조간장 또는 혼합간장 등일 수 있고, 김치류 사용하는 주원료의 종류나 형태, 담그는 방법, 시기, 지방 등에 따라 그 종류가 다양하여 통배추, 김치, 깍뚜기, 동치미, 총각김치, 무우짠지, 보쌈김치, 석박지, 오이소배기, 오이지 등일 수 있으며, 젓갈류로는 멸치, 까나리, 조기, 황석어, 갈치, 밴댕이, 고등어, 꽁치, 가오리, 가자미, 넙치, 농어, 대구, 돔, 명태, 방어, 병어, 전어, 삼치, 임연수어, 쥐치, 민어, 숭어, 조개, 바지락, 홍합, 소라, 전복, 굴, 대합, 꼬막 또는 성게를 원료로 한 젓갈일 수 있으나, 바람직하게는 식초일 수 있다.The types of fermented foods prepared using the acetobacter pasterianus BGK2018 strain of the present invention as a seed germ are meju, Korean miso, miso, seasoned miso, red pepper paste, seasoned red pepper paste, chunjang, cheonggukjang, mixed soy sauce, Korean soy sauce, It can be brewed soy sauce or mixed soy sauce, and the types and types of main ingredients used in kimchi vary depending on the type, dipping method, time, fat, etc., and the whole cabbage, kimchi, kkakdugi, dongchimi, bachelor kimchi, radish salty, bosam kimchi, seokbakji, It can be oisobaegi, oiji, etc., and salted anchovies include anchovy, canary, early, yellowfish, shrike, bandangi, mackerel, saury, stingray, flounder, flounder, sea bass, cod, dome, pollack, defence, bottlefish, trout, samchi, Imyeonsui fish, squid, mullet, mullet, shellfish, clams, mussels, turban shells, abalone, oysters, clams, sea urchin or sea urchin can be used as a raw material, but preferably vinegar.

상기 식품 첨가용 조성물은 고형상 또는 액상 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 증량제를 첨가하여 가루분말의 형태로 이용하거나, 또는 이를 제형화하여 과립화시켜 제조될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.The composition for adding food may be prepared in a solid or liquid form, and may be prepared by adding a bulking agent to use in the form of a powdery powder, or by granulating it by formulating it.

상기 식품은 발효식품인 것이 바람직하며, 초산 생성 능력을 감소시키지 않는 범위 내에서, 당업계에서 발효식품에 통상적으로 사용하는 1종 이상의 식품 첨가제를 더 포함할 수 있다.The food is preferably a fermented food, and within a range that does not reduce the ability to produce acetic acid, may further include one or more food additives commonly used in fermented foods in the art.

본 발명의 또 다른 양상은 초산 생성 능력이 우수한 아세토박터 파스테리아너스(Acetobacter pasteurianus) BGK2018 균주(기탁번호 KFCC11818P)를 배양하여 종초를 제조하는 단계; 상기 종초를 막걸리에 접종하는 단계; 및 종초가 접종된 막걸리를 발효하여 발효식초를 제조하는 단계를 포함하는 발효식초의 제조방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, acetobacter pasteurianus ( Acetobacter pasteurianus ) BGK2018 strain (Accession No. KFCC11818P) having excellent acetic acid production ability is cultivated to prepare a seed; Inoculating the seed in rice wine; And it provides a method for producing fermented vinegar comprising the step of producing fermented vinegar by fermenting the rice wine inoculated with seed.

구체적으로, 상기 발효식초의 제조방법은 다음과 같은 단계로 이루어질 수 있다.Specifically, the method of manufacturing the fermented vinegar can be made in the following steps.

첫 번째 단계는 아세토박터 파스테리아너스 BGK2018 균주(기탁번호 KFCC11818P)를 산을 포함하는 배지에서 배양하여 종초를 제조하는 단계이다.The first step is to prepare the seed by culturing the acetobacter pasterianus BGK2018 strain (Accession No. KFCC11818P) in a medium containing acid.

본 발명에서 사용되는 용어, "종초(vinegar starter)"는 새롭게 식초덧을 담글 때 쓰이는 종(種)이 되는 초를 말한다.The term used in the present invention, "vinegar (vinegar starter)" refers to a candle that becomes a species (種) used when dipping the vinegar.

아세토박터 파스테리아너스 BGK2018 균주는 이미 및 이취가 없고, 우수한 풍미를 나타낼 뿐만 아니라, 낮은 에탄올 농도에서도 초산 생산 능력이 우수하므로, 발효식초를 제조하기 위하여 사용하는 종초의 제조에 적합하다.Acetobacter Pasterianus BGK2018 strain is already and odorless, and not only exhibits excellent flavor, but also has excellent acetic acid production capacity even at low ethanol concentrations, and is therefore suitable for the production of seed used to produce fermented vinegar.

두 번째 단계는 백국균(Aspergillus luchuensis)을 접종하여 배양한 입국 10kg에 입국 중량의 110 내지 120%의 양조용수를 첨가한 후, 에탄올 농도 10% 이상에서 알코올 발효가 곤란한 효모인 Pichia anomala, Pichia fabiani, Pichia kudriavzevii, Wickerhamomyces anomalus Hanseniaspora uvarum으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 효모를 사용하여 20 내지 25℃의 품온에서 3일간 주모(yeast starter)를 제조하는 단계이다.The second step is to add brewing water of 110 to 120% of the entry weight to 10 kg of inoculation cultured by inoculating Baekgukgyun ( Aspergillus luchuensis ), and then yeast Pichia anomala, Pichia fabiani, which is difficult to ferment alcohol at concentrations above 10% , Pichia kudriavzevii, Wickerhamomyces anomalus and Hanseniaspora uvarum is a step of preparing a yeast starter for 3 days at a temperature of 20 to 25°C using any yeast selected from the group consisting of.

상기 효모는 과일이나 꽃과 같은 향기 생성 능력과 말산(malic acid)과 같은 유기산 생성 능력이 뛰어난 반면, 에탄올 내성이 약하여, 에탄올 농도 10% 이상에서 발효가 어렵기 때문에, 상업적인 발효식초의 제조에 적용하기 어렵다. 다만, 본 발명의 아세토박터 파스테리아너스 BGK2018 균주는 에탄올 농도 8%에서도 초산 생성 능력이 우수하므로, 이와 같은 우수한 풍미를 나타내는 효모를 상업적인 발효식초의 제조에 적용할 수 있도록 할 수 있어, 풍미가 우수한 발효식초의 제조가 가능하다.The yeast is excellent in the ability to produce scents such as fruits and flowers and the ability to produce organic acids such as malic acid, whereas it has weak ethanol resistance and is difficult to ferment at ethanol concentrations of 10% or more, so it is applied to the production of commercial fermented vinegar. It is difficult to do. However, since the acetobacter pasterianus BGK2018 strain of the present invention has excellent acetic acid generation ability even at an ethanol concentration of 8%, it is possible to apply yeast exhibiting such excellent flavor to commercial fermented vinegar production, which has excellent flavor. It is possible to manufacture fermented vinegar.

세 번째 단계는 고두밥용 쌀 중량의 30 내지 40%의 입국에 입국 중량의 130 내지150%의 양조용수를 첨가하고, 상기 주모와 섞은 다음, 발효조의 뚜껑을 덥지 않고 개방형으로 20 내지 25℃의 품온에서 3 내지 5일간 1단 담금하여 알코올 발효액을 제조하는 단계이다.The third step is to add brewing water of 130 to 150% of the entry weight to the entry of 30 to 40% of the weight of rice for godubap, mix it with the main mother, and then open the lid of the fermenter without opening the lid at a temperature of 20 to 25℃ It is a step of preparing an alcoholic fermentation broth by immersing in 1 step for 3 to 5 days.

네 번째 단계는 쌀 중량의 150 내지 200%인 양조용수에 쌀 중량의 0.1%인 정제효소(1g당 15,000SP 이상)를 섞고, 쌀을 증자한 고두밥을 냉각하지 않고 그대로 넣어 초기 55 내지 65℃의 온도에서 약 15브릭스(°Brix)가 될 때까지 10 내지 20시간 당화시킨 후, 발효조 내부의 냉각사관을 사용해 15℃까지 냉각시키고, 냉각 즉시, 1단 담금하여 제조한 알코올 발효액과 섞은 후, 발효조의 뚜껑을 덥고 밀폐형으로 15℃의 품온에서 5~8일간 2단 담금하여 에탄올 발효액을 제조하는 단계이다.The fourth step is to mix the purified enzyme (15,000 SP or more per 1 g) of 0.1% of the weight of rice with brewing water, which is 150 to 200% of the weight of the rice, and put the godubap with rice as it is without cooling to the initial temperature of 55 to 65℃. After saccharification for 10 to 20 hours at a temperature of about 15 Brix (°Brix), cooled to 15°C using a cooling tube inside the fermenter, and immediately after cooling, mixed with the alcohol fermentation solution prepared by dipping in 1 step, and then fermented It is a step of preparing the ethanol fermentation broth by heating the lid of the lid and immersing it in two stages at a product temperature of 15°C for 5-8 days.

다섯 번째 단계는 2단 담금하여 제조한 에탄올 발효액의 에탄올 농도가 8%에 도달하는 즉시 상기 종초를 투입하여 20 내지 30℃도의 품온에서 12 내지 14일간 발효시켜 초산 발효물을 제조하는 초산 발효 단계이다.The fifth step is an acetic acid fermentation step in which the ethanol concentration of the ethanol fermentation solution prepared by two-stage dipping is reached to 8%, and then the seed is introduced to ferment it at a temperature of 20 to 30°C for 12 to 14 days to produce acetic acid fermentation products. .

마지막 단계는 상기 초산 발효물의 총 산 함량이 6%에 도달하는 즉시 발효식초를 여과 및 살균하는 단계이다.The final step is to filter and sterilize the fermented vinegar as soon as the total acid content of the acetic acid fermentation reaches 6%.

이와 같은 발효식초 제조방법을 통하여, 단기간에 발효식초를 제조할 수 있을 뿐만 아니라, 맛과 향기 측면에서도 우수한 식초를 제조할 수 있다.Through this fermentation vinegar manufacturing method, it is possible to manufacture fermented vinegar in a short period of time, as well as to produce excellent vinegar in terms of taste and aroma.

본 발명의 또 다른 양상은 초산 생성 능력이 우수한 아세토박터 파스테리아너스(Acetobacter pasteurianus) BGK2018 균주(기탁번호 KFCC11818P)를 배양하여 종초를 제조하는 단계; 상기 종초를 막걸리에 접종하는 단계; 및 종초가 접종된 막걸리를 발효하여 발효식초를 제조하는 단계를 포함하는 발효식초의 제조방법으로 제조된 발효식초를 제공한다.In another aspect of the present invention, acetobacter pasteurianus ( Acetobacter pasteurianus ) BGK2018 strain (Accession No. KFCC11818P) having excellent acetic acid production ability is cultivated to prepare a seed; Inoculating the seed in rice wine; And it provides a fermented vinegar prepared by a method of manufacturing a fermented vinegar comprising the step of fermenting a makgeolli inoculated with seed vinegar.

본 발명의 제조방법으로 제조된 발효식초는 전세계의 모든 식음료 제품을 전문적으로 심사, 평가, 인증하는 세계적인 품평 기관인 벨기에 소재 국제식음료품평원(The International Taste & Quality Institute - iTQi)에서 매년 개최되는 2018년 The Superior Taste Award에서 2 Star를 수상하여 국제적으로도 그 풍미가 확인되었다.The fermented vinegar produced by the manufacturing method of the present invention is held annually at The International Taste & Quality Institute (iTQi) in Belgium, a world-class evaluation agency that professionally evaluates, evaluates, and certifies all food and beverage products worldwide. It won the 2 Star Award in the Superior Taste Award, and its flavor has been confirmed internationally.

본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 발효식초는 아로니아 추출물, 다시마 추출물 및 현미 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 추출물을 더 포함할 수 있다.According to one embodiment of the present invention, the fermented vinegar may further include any one extract selected from the group consisting of aronia extract, kelp extract and brown rice extract.

본 발명의 발효식초의 기능성과 풍미를 향상시키기 위하여, 발효식초의 제조 과정 중, 종초를 투입하기 직전에 아로니아, 다시마 및 현미 등의 기능성 농수산물의 즙이나 분말 등의 추출물이 첨가될 수 있다.In order to improve the functionality and flavor of fermented vinegar of the present invention, during the manufacturing process of fermented vinegar, extracts such as juices or powders of functional agricultural and marine products such as aronia, kelp and brown rice may be added immediately prior to the introduction of the vinegar.

초산 생성 능력이 우수한 아세토박터 파스테리아너스 BGK2018 균주 및 이를 이용한 발효식초의 제조방법에 따르면, 발효식초의 발효시 소요되는 알코올 발효 기간 및 초산 발효 기간을 단축하면서도 우수한 풍미를 나타내므로, 발효식초의 제조에 유용하게 활용할 수 있다.According to the acetobacter pasterianus BGK2018 strain having excellent acetic acid production ability and a method of manufacturing fermented vinegar using the same, it exhibits excellent flavor while shortening the alcohol fermentation period and acetic acid fermentation period required for fermentation of fermented vinegar, thereby producing fermented vinegar It can be useful.

도 1은 SM 배지에서 배양한 초산균 중, 투명환의 크기가 큰 5종의 초산균(acetic acid bacteria)을 1차적으로 선별한 사진이다.
도 2는 선별한 5종의 초산균의 배양에 따른 LM 배지의 일자별 총 산 함량을 나타낸 그래프이다.
도 3은 LM 배지에서 초산 생성 능력이 가장 우수한 산야초식초2에서 분리한 초산균 사진이다.
도 4는 최종 선별된 초산균 아세토박터 파스테리아너스(Acetobacter pasteurianus) BGK2018 균주(기탁번호 KFCC11818P)에 대한 파이로제닉 트리이다.
도 5는 아세토박터 파스테리아너스(Acetobacter pasteurianus) BGK2018 균주(기탁번호 KFCC11818P)를 사용하여 제조한 발효식초의 발효시간에 따른 총 산 함량을 아세토박터 파스테리아너스 KACC 13994 균주와 비교하여 나타낸 그래프이다.
도 6은 아세토박터 파스테리아너스(Acetobacter pasteurianus) BGK2018 균주(기탁번호 KFCC11818P)를 사용하여 제조한 발효식초에, 아로니아, 다시마 또는 현미를 첨가하여 제조한 발효식초 시제품 사진이다.
도 7은 아세토박터 파스테리아너스(Acetobacter pasteurianus) BGK2018 균주(기탁번호 KFCC11818P)와 아로니아즙을 첨가한 발효식초 시제품으로 The International Taste & Quality Institute - iTQi 2018 The Superior Taste Award에서 2 Star를 수상한 인증서이다.
1 is a photograph of the primary selection of five acetic acid bacteria (acetic acid bacteria) having a large transparent ring size among acetic acid bacteria cultured in SM medium.
Figure 2 is a graph showing the total acid content of each LM medium according to the culture of the selected five acetic acid bacteria.
3 is a picture of acetic acid bacteria isolated from Sanya vinegar 2, which has the best ability to produce acetic acid in LM medium.
FIG. 4 is a pyrogenic tree for the finally selected acetobacter pasteurianus BGK2018 strain (Accession No. KFCC11818P).
5 is a graph showing the total acid content according to the fermentation time of fermented vinegar prepared using the Acetobacter pasteurianus BGK2018 strain (Accession No. KFCC11818P) compared to the acetobacter pasterianus KACC 13994 strain.
Figure 6 is a picture of a prototype fermented vinegar prepared by adding Aronia, kelp or brown rice to fermented vinegar prepared using the Acetobacter pasteurianus BGK2018 strain (Accession No. KFCC11818P).
FIG. 7 is a certificate that received 2 Stars from The International Taste & Quality Institute-iTQi 2018 The Superior Taste Award as a prototype of fermented vinegar added with Acetobacter pasteurianus BGK2018 strain (Accession No. KFCC11818P) and aronia juice. .

이하 본 발명을 하나 이상의 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through one or more embodiments. However, these examples are for illustrative purposes only, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

실시예 1. 초산균의 분리 및 동정Example 1. Isolation and identification of acetic acid bacteria

1-1. 발효식초 수집1-1. Fermented vinegar collection

초산 생성 능력이 우수한 균주의 선별 및 동정을 위하여, 전라남도 장성군 및 화순군 지역 농가에서 전통방식으로 제조되는 발효식초를 수집하였다. 돼지감자식초, 산야초식초, 커리식초, 커피식초, 포도식초, 울금식초, 현미식초, 자두식초, 감식초, 흑마늘식초 및 파인애플식초 등 과일식초, 및 쌀 등의 곡물에 기능성 농수산물을 첨가한 식초로써, 총 산 함량이 높다고 알려져 있는 식초를 수집하였다.For the selection and identification of strains with excellent acetic acid production ability, fermented vinegars prepared in a traditional manner were collected from farms in Jangseong-gun and Hwasun-gun, Jeollanam-do. As a fruit vinegar such as pork potato vinegar, sanya vinegar, curry vinegar, coffee vinegar, grape vinegar, turmeric vinegar, brown rice vinegar, plum vinegar, persimmon vinegar, black garlic vinegar and pineapple vinegar, and vinegar added with functional agricultural and marine products to grains such as rice, Vinegar, which is known to have a high total acid content, was collected.

1-2. 균주의 분리 및 초산 생성 능력이 우수한 균주의 선별1-2. Separation of strains and selection of strains with excellent acetic acid production capacity

실시예 1-1에서 수집한 발효식초로부터 초산 생성 능력이 우수한 균주를 선별하였다.Strains having excellent acetic acid production ability were selected from the fermented vinegar collected in Example 1-1.

구체적으로, 초산 생성 균주의 분리를 위한 평판배지로써, SM 배지(효모 추출물 0.5%, 글루코오스 3.0%, CaCO3 1.0%, 아가 2.0% 및 에탄올 5.0%, w/v)를 사용하였으며, 초산 생성 균주의 배양을 위한 액체배지로써, LM 배지(효모 추출물 0.5%, 글루코오스 0.5%, 글리세롤 1.0%, MgSO4·7H2O 0.02%, 에탄올 5.0%, 아세트산 1.0%, w/v)를 사용하였다.Specifically, SM plate (yeast extract 0.5%, glucose 3.0%, CaCO 3 1.0%, agar 2.0% and ethanol 5.0%, w/v) was used as a plate medium for separation of acetic acid-producing strains, and acetic acid-producing strains As a liquid medium for the culture of, LM medium (yeast extract 0.5%, glucose 0.5%, glycerol 1.0%, MgSO4·7H2O 0.02%, ethanol 5.0%, acetic acid 1.0%, w/v) was used.

실시예 1-1에서 수집하여 적정배수로 희석한 발효식초 100㎕를 SM 배지에 도말하고, 30℃에서 3일 동안 배양하여 생성된 초산 생성 균주의 단일 집락(colony)을 동일한 배지에 계대 배양하여 순수 분리한 뒤, 동일한 배지에 점적하고, 30℃에서 7일간 배양한 후, 생성된 투명환(clear zone)의 크기를 비교하여 초산 생성 능력이 우수한 균주 5종을 1차 선별하였다(도 1). 이때, 선별된 5종의 초산 생성 능력이 우수한 균주의 투명환 크기는 하기 표 1과 같이 확인되었다.100 μl of fermented vinegar collected in Example 1-1 and diluted with appropriate multiples was smeared on SM medium, and a single colony of the acetic acid-producing strain produced by incubating at 30° C. for 3 days was subcultured in the same medium and purified. After separation, after dropping on the same medium and incubating at 30°C for 7 days, the size of the resulting clear zone was compared and 5 strains having excellent acetic acid production ability were first screened (FIG. 1). At this time, the size of the transparent ring of the strain having excellent acetic acid production ability of the selected 5 species was confirmed as shown in Table 1 below.

구분division 투명환 크기(㎝)Transparent ring size (cm) 돼지감자식초1Pork Potato Vinegar 1 2.72.7 돼지감자식초2Pork Potato Vinegar 2 2.52.5 산야초식초1Sanya Vinegar 1 2.72.7 산야초식초2Sanya Vinegar 2 2.42.4 감식초Persimmon vinegar 2.72.7

1차적으로 선별된 5종 균주의 생육특성을 파악하기 위하여, LM 배지에 균주를 각각 접종한 후 30℃에서 13일 동안 배양하면서 초산 생성 능력을 매일 조사하였다. In order to determine the growth characteristics of the first five strains, the ability to generate acetic acid was examined daily while inoculating the strains in LM medium and incubating at 30°C for 13 days.

그 결과, 각 균주에 따른 초산의 함량 변화는 도 2와 같이 확인되었으며, 초산발효 13일차의 총 산 함량(%)은 하기 표 2와 같이 확인되었다.As a result, the change in the content of acetic acid according to each strain was confirmed as shown in FIG. 2, and the total acid content (%) of the 13th day of fermentation was confirmed as shown in Table 2 below.

구분division 초산 함량(%)Acetic acid content (%) 돼지감자식초1Pork Potato Vinegar 1 1.71.7 돼지감자식초2Pork Potato Vinegar 2 1.51.5 산야초식초1Sanya Vinegar 1 5.35.3 산야초식초2Sanya Vinegar 2 6.56.5 감식초Persimmon vinegar 2.02.0

이와 같은 결과를 통하여, 산야초식초에서 분리된 2종의 균주의 초산 생성능력이 우수한 것으로 확인되었으며, 특히, 산야초식초2 균주의 초산 생성 능력이 가장 우수한 것으로 확인되어 최종적으로 선별하였다(도 3).Through these results, it was confirmed that the ability to produce acetic acid of two strains isolated from Sanya vinegar was excellent, and in particular, it was confirmed that the ability to produce acetic acid of the two strains of Sanya vinegar was the best (FIG. 3).

1-3. 초산 생성 능력이 우수한 균주의 동정1-3. Identification of strains with excellent acetic acid production capacity

실시예 1-2에서 최종적으로 선별한 초산 생성 능력이 우수한 균주에 대하여 분자생물학적 동정을 수행하였다.Molecular biological identification was performed on the strain having excellent acetic acid production ability finally selected in Example 1-2.

구체적으로, 산야초식초2 균주 배양액으로부터 염색체(chromosomal) DNA를 분리한 후, 상기 균주의 16S rRNA(표 3)를 세균의 유니버셜 프라이머(표 4)를 사용하여 증폭하고, 마크로젠(한국)에 의뢰하여 염기서열을 분석하였다.Specifically, after chromosomal DNA was isolated from the culture of Sanya vinegar 2 strain, the 16S rRNA (Table 3) of the strain was amplified using a bacterial universal primer (Table 4), and commissioned by Macrogen (Korea). The base sequence was analyzed.

구분division 염기서열(5'→3')Base sequence (5'→3') 서열번호Sequence number 16S rRNA16S rRNA CGTAAAAATGTGTGCTAGATGTTGGGTGACTTAGTCATTCAGTGTCGCAGTTAACGCGTTAAGCACACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAGGGCTTGAATGTAGAGGCTGCAAGCAGAGATGTTTGTTTCCCGCAAGGGACCTCTAACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTATCTTTAGTTGCCATCAGGTTGGGCTGGGCACTCTAGAGAGACTGCCGGTGACAAGCCGGAAGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGTCCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGGTGACAGTGGGAAGCTAGGTGGTGACACCATGCTGATCTCTAAAAGCCGTCTCAGTTCGGATTGCACTCTGCAACTCGAGTGCATGAAGGTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTGGTTTGACCTTAAGCCGGTGAGCGAACCGCAAGGACGCAGCCGACCACGGTCGGGTCAGCGACTGGGGTGAAGTCGTAAAAGGGTAGCCACCAATGATATCCTCCGCCCATGGATAGATACCCCCCCCTTCCTCACCCGTCCGCCGCTATTGCCGATACCTTCGTGCGACTTGCGTGTGTTAAGCACGCCGTCACCAGTCTCTCTAGCGCGATGGTTCCACTAAAAAAAGTTATGTCTGTCCCGCTCGTTAAGCTAAATATTATGAATTTCAAACGTAAAAATGTGTGCTAGATGTTGGGTGACTTAGTCATTCAGTGTCGCAGTTAACGCGTTAAGCACACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAGGGCTTGAATGTAGAGGCTGCAAGCAGAGATGTTTGTTTCCCGCAAGGGACCTCTAACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTATCTTTAGTTGCCATCAGGTTGGGCTGGGCACTCTAGAGAGACTGCCGGTGACAAGCCGGAAGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGTCCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGGTGACAGTGGGAAGCTAGGTGGTGACACCATGCTGATCTCTAAAAGCCGTCTCAGTTCGGATTGCACTCTGCAACTCGAGTGCATGAAGGTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTGGTTTGACCTTAAGCCGGTGAGCGAACCGCAAGGACGCAGCCGACCACGGTCGGGTCAGCGACTGGGGTGAAGTCGTAAAAGGGTAGCCACCAATGATATCCTCCGCCCATGGATAGATACCCCCCCCTTCCTCACCCGTCCGCCGCTATTGCCGATACCTTCGTGCGACTTGCGTGTGTTAAGCACGCCGTCACCAGTCTCTCTAGCGCGATGGTTCCACTAAAAAAAGTTATGTCTGTCCCGCTCGTTAAGCTAAATATTATGAATTTCAAA 서열번호 1SEQ ID NO: 1

프라이머primer 프라이머 염기서열(5'→3')Primer sequence (5'→3') 서열번호Sequence number universal primeruniversal primer forward(27F)forward(27F) AGAGTTTGATCCTGGCTCAGAGAGTTTGATCCTGGCTCAG 서열번호 2SEQ ID NO: 2 reverse(1492R)reverse(1492R) GGTTACCTTACGACTTGGTTACCTTACGACTT 서열번호 3SEQ ID NO: 3

젠뱅크(GenBank) 염기서열 데이터베이스를 이용하여 16S rRNA 염기서열의 상동성(homology)을 분석한 결과, 최종 선별된 초산 생성 능력이 우수한 균주는 아세토박터 파스테리아너스(Acetobacter pasteurianus)와 99% 상동성을 보이는 것으로 확인되어, 아세토박터 파스테리아너스 BGK2018로 명명하였으며, 2019년 01월 10일자로 한국미생물보존센터에 미생물 기탁번호 KFCC11818P로 기탁하였다. 최종 선별된 균주에 대한 파이로제닉 트리는 도 4에 나타내었다.As a result of analyzing the homology of the 16S rRNA sequencing using the GenBank sequencing database, the strains with excellent acetic acid production ability are 99% homologous to Acetobacter pasteurianus . It was confirmed that, and was named Acetobacter pasterianus BGK2018, and deposited with the microbial deposit number KFCC11818P at the Korea Microbial Conservation Center on January 10, 2019. The pyrogenic tree for the final selected strain is shown in FIG. 4.

실시예 2. 최종 선별 균주의 우수한 초산 생성 능력 확인Example 2. Confirmation of excellent acetic acid generation ability of the final selection strain

실시예 1에서 선별한 아세토박터 파스테리아너스 BGK2018 균주의 우수한 초산 생성 능력을 확인하기 위하여, 아세토박터 파스테리아너스 KACC 13994 균주와 초산 생성 능력을 비교하였다.To confirm the excellent acetic acid producing ability of the acetobacter pasterianus BGK2018 strain selected in Example 1, the acetobacter pasterianus KACC 13994 strain was compared with the acetic acid generating ability.

구체적으로, LM 배지에 아세토박터 파스테리아너스 BGK2018 균주 및 아세토박터 파스테리아너스 KACC 13994 균주를 각각 접종한 후 30℃에서 12일 동안 배양하면서 초산 생성 능력을 매일 조사하였다. Specifically, acetobacter pasterianus BGK2018 strain and acetobacter pasterianus KACC 13994 strain were inoculated into LM medium, respectively, and the ability to produce acetic acid was examined daily while incubating at 30°C for 12 days.

그 결과, 초산 발효 12일차에서, 아세토박터 파스테리아너스 BGK2018 균주를 사용하여 발효한 발효물의 총 산 함량은 6% 이상인 것으로 나타나, 아세토박터 파스테리아너스 KACC 13994 균주를 사용하여 발효한 발효물의 총 산 함량인 4.9% 대비 총 산 함량이 현저히 높은 것으로 확인되었다(도 5).As a result, on the 12th day of acetic acid fermentation, the total acid content of the fermentation product fermented using the Acetobacter Pasterianus BGK2018 strain was 6% or more, and the total acid of the fermentation product fermented using the Acetobacter Pasterianus KACC 13994 strain It was confirmed that the total acid content was significantly higher than the content of 4.9% (FIG. 5).

실시예 3. 발효식초의 제조Example 3. Preparation of fermented vinegar

실시예 1에서 최종 선별된 초산 생성 능력이 우수한 균주를 이용하여 발효식초를 제조하였다.Fermented vinegar was prepared using the strain having the best ability to produce acetic acid finally selected in Example 1.

구체적으로, 400㎖ 증류수에 효모 추출물 2.5g, 글루코오스 2.5g, 글리세롤 5㎖, MgSO4·7H2O 0.1g, 에탄올 25㎖ 및 아세트산 5㎖를 넣고 교반한 후, 총 500㎖가 될 때까지 증류수를 첨가하여 배지를 제조하였다. 제조한 배지에 실시예 1에서 최종 선별한 균주를 접종하여, 30℃에서 3일 동안 진탕배양기에서 본 배양(main culture)한 후, 에탄올 함량 8%의 막걸리 200ℓ를 첨가하고, 30℃에서 8일 동안 배양하여 종초(vinegar starter)를 제조하였다.Specifically, 2.5 g of yeast extract, 2.5 g of glucose, 5 ml of glycerol, 0.1 g of MgSO 4 ·7H 2 O, 25 ml of ethanol, and 5 ml of acetic acid were added to 400 ml of distilled water, stirred, and distilled water until a total of 500 ml was added. Was added to prepare a medium. After inoculating the strains finally selected in Example 1 on the prepared medium, and main culture in a shake incubator for 3 days at 30°C, 200ℓ of makgeolli with an ethanol content of 8% was added, and 8 days at 30°C During incubation, a vinegar starter was prepared.

한편, 에탄올 농도 10% 이상의 알코올 발효가 곤란한 피키아 아노말라(Pichia anomala) 효모를 500㎖의 LB배지에 접종한 후, 25℃에서 2일 동안 배양하고, 백국균(Aspergillus luchuensis)을 접종하여 배양한 입국(粒麴) 10kg에 12ℓ의 양조용수를 첨가하였다. 그 후, 배양한 효모를 넣어 교반하고, 25℃의 품온(temperature of fermenting material)에서 3일 동안 배양하여 주모(yeast starter)를 제조하였다. 80kg의 입국에 120ℓ의 양조용수를 첨가하고, 주모와 충분히 섞은 후, 발효조의 뚜껑을 덮지 않고 개방형으로 25℃의 품온에서 3일 동안 1단 담금하여 1단 담금 배양액을 제조하였다. On the other hand, after inoculating Pichia anomala yeast with 500 ml of LB medium, which is difficult to ferment alcohol with an ethanol concentration of 10% or more, incubate for 2 days at 25°C and inoculate Baekgukgyun ( Aspergillus luchuensis ). 12 l of brewing water was added to 10 kg of one entry. Thereafter, the cultured yeast was added and stirred, and cultured for 3 days at a temperature of fermenting material at 25°C to prepare a yeast starter. After adding 120 liter of brewing water to the 80 kg of entry, and thoroughly mixing with the main mother, a single stage immersion culture was prepared by immersing in a single stage for 3 days at a temperature of 25° C. in an open type without covering the lid of the fermenter.

1단 담금이 완료되면, 240kg의 쌀을 깨끗이 세척하고, 물에 6시간 담가 충분히 불린 후, 스팀으로 1시간 동안 증자하였다. 증자가 완료된 고두밥을 냉각하지 않고 뜨거운 상태 그대로 240g의 정제효소가 혼합된 400ℓ의 물에 투입한 후, 초기 온도 65℃에서 10시간 동안 천천히 자연적으로 식혀가며 15브릭스(°Brix)가될 때까지 발효조 내부에 설치된 냉각사관을 통해 15℃까지 냉각시켰다. 냉각 후, 1단 담금 배양액과 혼합 및 교반하고, 발효조의 뚜껑을 덮고 밀폐형으로 15℃의 품온에서 5일 동암 담금하여 2단 담금 배양액을 제조하였다.When the first stage immersion was completed, 240 kg of rice was washed thoroughly, soaked in water for 6 hours, sufficiently soaked, and then steamed for 1 hour. After cooling the godubap, which has not been cooled, it is added to 400 liter of water mixed with 240 g of purified enzyme as it is in a hot state, and then slowly cooled naturally at an initial temperature of 65° C. for 10 hours until 15 brix (°Brix). Cooled to 15 ℃ through a cooling pipe installed inside. After cooling, the mixture was stirred and mixed with a single-stage immersion culture, the lid of the fermenter was sealed, and immersed in Dongam for 5 days at a product temperature of 15°C to prepare a 2-stage immersion culture.

그 후, 본격적인 초산발효를 위하여, 2단 담금 배양액의 에탄놀 농도가 8%에 도달하는 즉시, 종초 200ℓ를 넣고 30℃의 품온에서 12일간 발효시킨 후, 발효물의 총 산 함량이 6%에 도달하는 즉시 발효식초를 여과하고, 65℃에서 30분간 저온살균하여 발효식초를 완성하였다.Thereafter, for full-scale acetic fermentation, immediately after the ethanol concentration of the two-stage immersion culture medium reaches 8%, 200 liters of the beginning are added and fermented for 12 days at a temperature of 30°C, and the total acid content of the fermentation reaches 6% As soon as possible, the fermented vinegar was filtered and pasteurized at 65°C for 30 minutes to complete the fermented vinegar.

실시예 4. 아로니아즙을 첨가한 발효식초의 제조Example 4. Preparation of fermented vinegar with the addition of aronia juice

실시예 1에서 최종 선별된 초산 생성 능력이 우수한 균주 및 아로니아 즙을 사용하여 발효식초를 제조하였다.The fermented vinegar was prepared using the strain and aronia juice excellent in acetic acid production ability finally selected in Example 1.

구체적으로, 발효식초의 제조는 실시예 2와 동일한 방법으로 수행하였으며, 실시예 2의 2단 담금 배양액의 에탄놀 농도가 8%에 도달하는 즉시, 착즙한 아로니아즙 100ℓ 및 종초 200ℓ를 넣고 30℃의 품온에서 12일간 발효시킨 후, 발효물의 총 산 함량이 6%에 도달하는 즉시 발효식초를 여과하고, 65℃에서 30분간 저온살균하여 아로니아즙이 첨가된 발효식초를 제조하였다(도 6).Specifically, the preparation of fermented vinegar was performed in the same manner as in Example 2, and immediately after the ethanol concentration of the two-stage immersion culture medium of Example 2 reached 8%, 100 l of juiced aronia juice and 200 l of seed were added and 30 After fermentation for 12 days at a product temperature of ℃, the fermented vinegar was filtered as soon as the total acid content of the fermentation reached 6%, and pasteurized at 65°C for 30 minutes to prepare fermented vinegar to which Aaronia juice was added (FIG. 6). ).

이와 같이 제조된 아로니아즙이 첨가된 발효식초는 The International Taste & Quality Institute - iTQi 2018 The Superior Taste Award에서 2 Star를 수상하여, 그 품질을 인증받았다(도 7)The fermented vinegar added with the prepared aronia juice was awarded the 2 Star at The International Taste & Quality Institute-iTQi 2018 The Superior Taste Award and was certified for its quality (Fig. 7).

이제까지 본 발명에 대하여 그 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.So far, the present invention has been focused on the embodiments. Those skilled in the art to which the present invention pertains will understand that the present invention can be implemented in a modified form without departing from the essential characteristics of the present invention. Therefore, the disclosed embodiments should be considered in terms of explanation, not limitation. The scope of the present invention is shown in the claims rather than the foregoing description, and all differences within the equivalent range should be construed as being included in the present invention.

<110> INDUSTRY FOUNDATION OF CHONNAM NATIONAL UNIVERSITY Bluegreenkorea <120> Acetobacter pasteurianus BGK2018 Strain having High Acetic acid Production Ability and Method for Producing Fermented Vinegar using the same <130> PN190022 <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 885 <212> DNA <213> Acetobacter pasteurianus <400> 1 cgtaaaaatg tgtgctagat gttgggtgac ttagtcattc agtgtcgcag ttaacgcgtt 60 aagcacaccg cctggggagt acggccgcaa ggttgaaact caaaggaatt gacgggggcc 120 cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt cgaagcaacg cgcagaacct taccagggct 180 tgaatgtaga ggctgcaagc agagatgttt gtttcccgca agggacctct aacacaggtg 240 ctgcatggct gtcgtcagct cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccgc aacgagcgca 300 acccctatct ttagttgcca tcaggttggg ctgggcactc tagagagact gccggtgaca 360 agccggaaga aggtggggat gacgtcaagt cctcatggcc cttatgtcct gggctacaca 420 cgtgctacaa tggcggtgac agtgggaagc taggtggtga caccatgctg atctctaaaa 480 gccgtctcag ttcggattgc actctgcaac tcgagtgcat gaaggtggaa tcgctagtaa 540 tcgcggatca gcatgccgcg gtgaatacgt tcccgggcct tgtacacacc gcccgtcaca 600 ccatgggagt tggtttgacc ttaagccggt gagcgaaccg caaggacgca gccgaccacg 660 gtcgggtcag cgactggggt gaagtcgtaa aagggtagcc accaatgata tcctccgccc 720 atggatagat acccccccct tcctcacccg tccgccgcta ttgccgatac cttcgtgcga 780 cttgcgtgtg ttaagcacgc cgtcaccagt ctctctagcg cgatggttcc actaaaaaaa 840 gttatgtctg tcccgctcgt taagctaaat attatgaatt tcaaa 885 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> universal primer_forward(27F) <400> 2 agagtttgat cctggctcag 20 <210> 3 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> universal primer_reverse(1492R) <400> 3 ggttacctta cgactt 16 <110> INDUSTRY FOUNDATION OF CHONNAM NATIONAL UNIVERSITY Bluegreenkorea <120> Acetobacter pasteurianus BGK2018 Strain having High Acetic acid Production Ability and Method for Producing Fermented Vinegar using the same <130> PN190022 <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 885 <212> DNA <213> Acetobacter pasteurianus <400> 1 cgtaaaaatg tgtgctagat gttgggtgac ttagtcattc agtgtcgcag ttaacgcgtt 60 aagcacaccg cctggggagt acggccgcaa ggttgaaact caaaggaatt gacgggggcc 120 cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt cgaagcaacg cgcagaacct taccagggct 180 tgaatgtaga ggctgcaagc agagatgttt gtttcccgca agggacctct aacacaggtg 240 ctgcatggct gtcgtcagct cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccgc aacgagcgca 300 acccctatct ttagttgcca tcaggttggg ctgggcactc tagagagact gccggtgaca 360 agccggaaga aggtggggat gacgtcaagt cctcatggcc cttatgtcct gggctacaca 420 cgtgctacaa tggcggtgac agtgggaagc taggtggtga caccatgctg atctctaaaa 480 gccgtctcag ttcggattgc actctgcaac tcgagtgcat gaaggtggaa tcgctagtaa 540 tcgcggatca gcatgccgcg gtgaatacgt tcccgggcct tgtacacacc gcccgtcaca 600 ccatgggagt tggtttgacc ttaagccggt gagcgaaccg caaggacgca gccgaccacg 660 gtcgggtcag cgactggggt gaagtcgtaa aagggtagcc accaatgata tcctccgccc 720 atggatagat acccccccct tcctcacccg tccgccgcta ttgccgatac cttcgtgcga 780 cttgcgtgtg ttaagcacgc cgtcaccagt ctctctagcg cgatggttcc actaaaaaaa 840 gttatgtctg tcccgctcgt taagctaaat attatgaatt tcaaa 885 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> universal primer_forward(27F) <400> 2 agagtttgat cctggctcag 20 <210> 3 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> universal primer_reverse(1492R) <400> 3 ggttacctta cgactt 16

Claims (6)

초산 생성 능력이 우수한 아세토박터 파스테리아너스(Acetobacter pasteurianus) BGK2018 균주(기탁번호 KFCC11818P).
Acetobacter pasteurianus BGK2018 strain with excellent acetic acid production ability (Accession No. KFCC11818P).
제 1 항에 있어서, 상기 균주는 산야초식초 유래인 것인 균주.
The strain of claim 1, wherein the strain is derived from Sanya vinegar.
제 1 항의 아세토박터 파스테리아너스(Acetobacter pasteurianus) BGK2018 균주(기탁번호 KFCC11818P), 상기 균주의 배양물, 상기 균주 또는 배양액의 농축물 및 이들의 건조물로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 식품 발효용 조성물.
Food fermentation comprising at least one selected from the group consisting of acetobacter pasteurianus BGK2018 strain (Accession No. KFCC11818P) of claim 1, culture of the strain, concentrate of the strain or culture medium, and dried products thereof. Dragon composition.
제 1 항의 아세토박터 파스테리아너스(Acetobacter pasteurianus) BGK2018 균주(기탁번호 KFCC11818P)를 배양하여 종초를 제조하는 단계;
상기 종초를 막걸리에 접종하는 단계; 및
종초가 접종된 막걸리를 발효하여 발효식초를 제조하는 단계
를 포함하는 발효식초의 제조방법.
Preparing a seed by culturing the acetobacter pasteurianus BGK2018 strain (Accession No. KFCC11818P) of claim 1;
Inoculating the seed in rice wine; And
Manufacturing fermented vinegar by fermenting rice wine inoculated with seed
Method of manufacturing fermented vinegar comprising a.
제 4 항의 제조방법으로 제조된 발효식초.
Fermented vinegar prepared by the method of claim 4.
제 5 항에 있어서, 상기 발효식초는 아로니아 추출물, 다시마 추출물 및 현미 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 추출물을 더 포함하는 것인 발효식초.The fermented vinegar of claim 5, wherein the fermented vinegar further comprises any one extract selected from the group consisting of aronia extract, kelp extract and brown rice extract.
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220076708A (en) * 2020-12-01 2022-06-08 재단법인 베리앤바이오식품연구소 Manufacturing method of complex fermented vinegar using black barley and barries
CN116286559A (en) * 2023-05-10 2023-06-23 阳西美味鲜食品有限公司 High-yield high-temperature-resistant acetobacter pasteurii M112 and application thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20150105117A (en) 2014-03-07 2015-09-16 대한민국(농촌진흥청장) Novel Gluconacetobacter saccharivorans sp. CV1 having Alcohol-Resistance and the Producing Method of a Brewing Vinegar using the Same
KR101778436B1 (en) * 2016-04-12 2017-09-14 중앙대학교 산학협력단 Acetobacter sp. SLV-7 as a novel strain with high acetic acid producing ability and use thereof
KR101774912B1 (en) * 2015-09-11 2017-09-19 충청북도 (관리부서:충청북도 농업기술원) Strain with high hydrolyzing activity of alcohol from Aronia melanocarpa and method for vinegar of Aronia melanocarpa using the same

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20150105117A (en) 2014-03-07 2015-09-16 대한민국(농촌진흥청장) Novel Gluconacetobacter saccharivorans sp. CV1 having Alcohol-Resistance and the Producing Method of a Brewing Vinegar using the Same
KR101774912B1 (en) * 2015-09-11 2017-09-19 충청북도 (관리부서:충청북도 농업기술원) Strain with high hydrolyzing activity of alcohol from Aronia melanocarpa and method for vinegar of Aronia melanocarpa using the same
KR101778436B1 (en) * 2016-04-12 2017-09-14 중앙대학교 산학협력단 Acetobacter sp. SLV-7 as a novel strain with high acetic acid producing ability and use thereof

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220076708A (en) * 2020-12-01 2022-06-08 재단법인 베리앤바이오식품연구소 Manufacturing method of complex fermented vinegar using black barley and barries
CN116286559A (en) * 2023-05-10 2023-06-23 阳西美味鲜食品有限公司 High-yield high-temperature-resistant acetobacter pasteurii M112 and application thereof
CN116286559B (en) * 2023-05-10 2023-09-05 阳西美味鲜食品有限公司 High-yield high-temperature-resistant acetobacter pasteurii M112 and application thereof

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