KR101771219B1 - 야누스 키나제 1 선택적 억제제 및 그 의약 용도 - Google Patents

야누스 키나제 1 선택적 억제제 및 그 의약 용도 Download PDF

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Abstract

야누스 키나제 1 선택적 억제제 및 그 의약 용도를 제공한다.

Description

야누스 키나제 1 선택적 억제제 및 그 의약 용도{Janus kinase 1 selective inhibitors and their pharmaceutical use}
본 발명은 야누스 키나제 억제제에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 야누스 키나제 1 (Janus kinase 1) 억제제에 대한 선택성이 높은 화합물 및 그의 의약 용도에 관한 것이다.
T-세포는 세포 표면의 T-세포 수용체 (T-cell receptor; TCR)를 통해 항원 제시 세포 (antigen presenting cell)로부터 전달된 신호를 야누스 키나제 (Janus kinase)와 같은 세포내 다양한 단백질 키나제의 활성화에 의해 하위 효과기 (effector)에 전달하는 역할을 한다. 이때 T-세포는 여러 인터루킨 (interleukin; IL)이나 인터페론-γ (interferon; IFN)를 분비하여 다양한 백혈구들을 활성화시키는 것은 물론 B-세포를 활성화시킨다. T-세포에서 신호전달에 관여하는 단백질 키나제로는 대표적으로 4종의 야누스 키나제 이소자임, 즉 JAK1, JAK2, JAK3 및 TYK2 (tyrosine kinase 2)가 있다. 이하에서는 "야누스 키나제"를 "JAK"라고 약칭한다.
JAK는 자가면역 및/또는 염증성 질환의 표적으로 널리 연구되어 왔으며, JAK 저해제는 류마티스 관절염, 건선, 아토피성 피부염, 낭창, 다발성 경화증, 유형 I의 당뇨병 및 당뇨에 의한 합병증, 천식, 자가면역 갑상선 장애, 궤양성 대장염, 크론씨병 (Crohn's disease), 알쯔하이머병 (Alzheimer's disease), 암, 백혈병 및 장기이식 또는 이종이식 거부반응 등과 같은, 자가면역질환, 면역체계 기능장애, 바이러스성 질환, 및 암을 포함한 제증상의 치료에 유용한 것으로 보고되었다 (Immunol . Rev ., 2008, 223(1), 132-142; Proc . Natl . Acad. Sci . U. S. A., 1995, 92(19), 8724-8728; Science, 1995, 270(5237), 800-802; Trends Pharmacol. Sci ., 2004, 25(11), 558-562).
많은 제약회사들은 JAK 중에서도 JAK3의 선택적 저해활성에 의해 류마티스성 관절염 (Rheumatoid arthritis; RA)과 같은 자가면역질환 치료제를 개발할 수 있을 것으로 기대하고 경쟁적으로 JAK3 저해제 개발 연구를 진행하였으며, 그 결과 최근 Pfizer사의 Xeljanz®(성분명: 토파시티닙)가 류마티스성 관절염 치료제로서 FDA에 의해 승인되기에 이르렀다. 그러나 개발 초기에 JAK3 선택적 저해활성을 갖는 것으로 알려졌던 토파시티닙은 그 이후 JAK 키나제 패밀리 (JAK kinase family)에 대한 전반적인 저해활성을 갖는 pan-JAK 억제제임이 밝혀졌으며, 따라서 류마티스성 관절염 치료제로서의 효능에 어떠한 JAK 이소자임의 저해활성이 가장 중요한 요소인지에 대한 논란이 계속되어져 왔다.
또한, 최근 일련의 연구결과들을 종합하면 (Cell, 1998, 93(3), 373-383; Immunity, 2000, 13(4), 561-571; Cell, 1998, 93(3), 385-395; Lancet, 2008, 371(9617), 987-997; Chem . Biol., 2011, 18(3), 314-323), T-세포 수용체에 의한 신호전달 과정에 있어 핵심적인 역할을 수행하는 JAK 키나제는 JAK1이며 JAK3는 매우 보조적인 역할 밖에는 담당하지 않는 것으로 확인되었다. 따라서, 자가면역질환 및/또는 염증성 질환 치료제 분야에 있어 JAK 저해제 개발은 JAK3가 아닌 JAK1에 집중하고 있으며, 최근 JAK1 선택적인 활성을 갖는 물질들이 속속 발표 되어지고 있다 (J. Med . Chem ., 2012, 55(12), 5901-5921; J. Med . Chem ., 2012, 55(13), 6176-6193).
상기 pan-JAK 억제제로서 밝혀진 토파시티닙은 두통, 메스꺼움, 설사, 및 면역력 저하로 인한 감염, 고지혈증, 비인두염, ALT (alanine transaminase) 및 AST (aspartate transaminase)의 증가, 심각한 빈혈증, 호중구 감소 등의 부작용을 갖는 것으로 보고되었다 (Mod . Rheumatol ., 2013, 23(3), 415-424). 이에 반해, 필고티닙 (filgotinib)은 JAK1 선택적 억제제이며, 상기 토파시티닙이 갖는 부작용을 갖지 않는 것으로 보고되었다 (Arthritis Rheum., 2012, 64( Suppl . 10), 2489). 또한, JAK 억제제로서 공지된 여러가지 약물에 대한 임상시험 결과, JAK1 선택적 억제제에 해당하는 필고티닙 및 INCB-039110이 다른 JAK 이소자임 억제제 혹은 비선택적 억제제에 비해 치료한계가 현저히 높은 것으로 보고되었다 (Expert Opin . Investig . Drugs, 2014, 23(8), 1067-1077).
JAK1에 대한 선택적 억제제는 류마티스 관절염 치료에 효과가 있으며, JAK2는 적혈구 형성에 필수적인 EPO 신호전달 경로 (EPO signaling pathway)에서 필수적인 역할을 하므로, JAK2의 불활성화는 동물 모델에서 빈혈을 유발한다. 따라서, JAK2에 대한 JAK1의 효소 억제 비율이 높은 화합물이 JAK2 의존 빈혈에 대한 상대적인 치료계수 (therapeutic index)를 넓힐 수 있다. 그러므로, JAK2에 대한 JAK1의 선택적 억제제가 류마티스 관절염 및 다른 면역질환에 있어 효과적이면서 부작용이 낮은 치료제로서 가능성이 있다 (J. Med . Chem ., 2012, 55(13), 6176-6193).
특허문헌 1은 JAK 억제제로서 하기 화학식을 갖는 매우 광범위한 화합물을 개시하고 있다:
Figure 112015081486502-pat00001
상기 특허문헌 1은 JAK 1, 2, 및 3에 대한 억제활성 어세이 방법에 대한 기재는 있으나, 상기 화학식을 갖는 어떠한 화합물에 대해서도 구체적인 데이터를 제시하고 있지 않을 뿐만 아니라, JAK1의 선택적 억제활성에 대해서는 언급조차 없다.
또한, 특허문헌 2는 하기 화학식을 갖는 화합물이 JAK3에 대한 억제활성이 있음을 기재하고 있고, JAK3에 대한 억제활성 어세이 방법에 대한 기재는 있으나, 하기 화학식을 갖는 어떠한 화합물에 대해서도 구체적인 데이터를 제시하고 있지 않을 뿐만 아니라, JAK1의 선택적 억제활성에 대해서는 언급조차 없다:
Figure 112015081486502-pat00002
.
상기 특허문헌 2는 상기 언급한 FDA 승인 약물인 토파시티닙에 해당하는 3-{4-메틸-3-[메틸-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-아미노]-피페리딘-1-일}-3-옥소-프로피오니트릴을 개시하고 있다.
WO 2006/069080 US 6,956,041
일 양상은 화학식 1 또는 2의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체를 제공한다.
다른 양상은 화학식 1 또는 2의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
다른 양상은 화학식 1 또는 2의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체를 이용한 JAK의 활성을 억제하는 방법을 제공한다.
다른 양상은 화학식 1 또는 2의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체를 개체에 투여하여 개체에서 질병을 치료하는 방법을 제공한다.
다른 양상은 화학식 1 또는 2의 화합물을 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한, 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다. 본 명세서에 참고문헌으로 기재되는 모든 간행물의 내용은 전체가 본 명세서에 참고로 통합된다.
본 발명의 일 양상은 화학식 1의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체를 제공한다:
[화학식 1]
Figure 112017039453242-pat00076
상기 화학식 1에서,
R1은 수소, C1 -2 알킬, 또는 시클로프로필메틸이고;
R2는 2-시아노아세틸, 2-시아노에틸, 부틸, 2-아지도아세틸, 3-메틸부타노일, 이소부톡시카르보닐, 아닐리노카르보닐, 메틸설폰일, (트리플루오로메틸)설폰일, 에틸설폰일, 프로필설폰일, 이소프로필설폰일, (1-메틸-1H-이미다졸-4-일)설폰일, 페닐설폰일, (2-플루오로페닐)설폰일, (3-플루오로페닐)설폰일, (4-플루오로페닐)설폰일, (2-시아노페닐)설폰일, (3-시아노페닐)설폰일, (4-시아노페닐)설폰일, (2-니트로페닐)설폰일, (3-니트로페닐)설폰일, (4-니트로페닐)설폰일, m-톨릴설폰일, 토실, (4-메톡시페닐)설폰일, ((4-트리플루오로메틸)페닐)설폰일, 나프탈렌-2-일설폰일, 피페리딘-1-일설폰일, 또는 모폴리노설폰일이다.
상기 화학식 1의 화합물의 일 구체예는 하기 열거된 화합물로 구성된 군에서 선택된 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체이다:
(R)-3-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴;
(R)-3-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로판니트릴;
(R)-N-(1-부틸피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-2-아지도-1-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)에탄-1-온;
(R)-3-메틸-1-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)부탄-1-온;
이소부틸 (R)-3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-카르복실레이트;
(R)-3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)-N-페닐피롤리딘-1-카르복스아미드;
(R)-N-메틸-N-(1-(메틸설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-N-메틸-N-(1-((트리플루오로메틸)설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-N-(1-(에틸설폰일)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-N-메틸-N-(1-(프로필설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-N-(1-(이소프로필설폰일)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-N-메틸-N-(1-((1-메틸-1H-이미다졸-4-일)설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-N-메틸-N-(1-(페닐설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-N-(1-((2-플루오로페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-N-(1-((3-플루오로페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-N-(1-((4-플루오로페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-2-((3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴;
(R)-3-((3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴;
(R)-4-((3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴;
(R)-N-메틸-N-(1-((2-니트로페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-N-메틸-N-(1-((3-니트로페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-N-메틸-N-(1-((4-니트로페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-N-메틸-N-(1-(m-톨릴설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-N-메틸-N-(1-토실피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-N-(1-((4-메톡시페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-N-메틸-N-(1-((4-(트리플루오로메틸)페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-N-메틸-N-(1-(나프탈렌-2-일설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-N-메틸-N-(1-(피페리딘-1-일설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(R)-N-메틸-N-(1-(모폴리노설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
(S)-3-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴;
(R)-3-((3-((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴;
(R)-3-(3-(에틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴;
(R)-3-((3-(에틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴;
(R)-3-(3-((시클로프로필메틸)(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴; 및
(R)-3-((3-((시클로프로필메틸)(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴.
본 발명의 다른 일 양상은 하기 화학식 2의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체를 제공한다:
[화학식 2]
Figure 112017039453242-pat00077
상기 화학식 2에서,
X는 질소 또는 산소이고,
--- 은 상기 X가 질소일 경우 단일결합이고, 상기 X가 산소일 경우 존재하지 않고,
R1은 메틸이고;
R2는 1-(2-시아노아세틸)피페리딘-4-일, 1-(페닐설폰일)피페리딘-4-일, 1-(3-시아노페닐설폰일)피페리딘-4-일, 1-(2-시아노아세틸)피페리딘-3-일, 1-(3-시아노페닐설폰일)피페리딘-3-일, 1-(3-시아노페닐설폰일)-4-메틸-피페리딘-3-일, 1-(2-시아노아세틸)-3,3-디메틸피롤리딘-4-일, [1-(2-시아노아세틸)피페리딘-3-일]메틸, 또는 [1-(3-시아노페닐설폰일)피페리딘-3-일]메틸이고,
또는 R1 및 R2가 X와 함께 6-(2-시아노아세틸)옥타하이드로-6H-피롤로-[3,4-b]피리딘-1-일을 형성한다.
상기 화학식 2의 화합물의 일 구체예는 하기 열거된 화합물로 구성된 군에서 선택된 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체이다:
3-(4-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴;
N-메틸-N-(1-(페닐설폰일)피페리딘-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
3-((4-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴;
(R)-3-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴;
(R)-3-((3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴;
3-(((3R,4R)-4-메틸-3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴;
(R)-3-(3,3-디메틸-4-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴;
(S)-3-(3,3-디메틸-4-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴;
3-(4-((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)피페리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴;
3-((4-((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)피페리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴;
3-(3-(((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)메틸)피페리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴;
3-((3-(((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)메틸)피페리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴;
3-((4aR,7aR)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥타하이드로-6H-피롤로[3,4-b]피리딘-6-일)-3-옥소프로판니트릴; 또는
3-((4aS,7aS)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥타하이드로-6H-피롤로[3,4-b]피리딘-6-일)-3-옥소프로판니트릴.
이하에서는, 상기 화학식 1의 화합물, 상기 화학식 2의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체 모두를 포괄하여 "본 발명의 화합물"이라고 지칭한다.
본 발명의 화합물은 검출가능한 표지로 치환된 것일 수 있다. 상기 검출가능한 표지는 광학적 표지, 전기적 표지, 자기적 표지, 또는 간접 표지일 수 있다. 광학적 표지는 검출가능한 광학적 신호를 발생시키는 물질로서, 방사성 물질, 또는 형광 물질과 같은 발색 물질일 수 있다. 간접 표지는 기질을 발색 물질로 전환시키는 효소 또는 그 기질, 항체 또는 항원과 같이 특정 물질과 결합한 결과, 검출가능한 표지를 발생시킬 수 있는 물질을 나타낸다. 상기 광학적 표지는 본 발명의 화합물을 구성하는 원소의 동위원소일 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 그를 구성하는 원소 중 하나 이상이 그의 동위원소, 예를 들면 방사성 동위원소로 치환된 것일 수 있다. 상기 동위원소의 예는 2H (중수소를 의미하는 D로 나타낼 수 있음),　3H (삼중수소를 의미하는 T로 나타낼 수 있음), 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 18F, 35S, 36Cl, 82Br, 75Br, 76Br, 77Br, 123I, 124I, 125I, 131I 등을 포함한다. 검출가능한 표지로 치환된 본 발명의 화학식 1과 2의 화합물은 세포 또는 개체 중의 JAK의 위치를 확인하는데 사용될 수 있다. 그에 따라서, JAK 활성 증가와 관련된 질병 부위를 확인하고 치료하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물은 그의 약제학적으로 허용가능한 염 (salt)의 형태일 수 있다. 상기 염은 JAK 억제제 분야에서 사용되는 통상의 산 부가염, 예를 들면 염산, 브롬산, 황산, 설팜산, 인산 또는 질산과 같은 무기산으로부터 유도된 염 및 아세트산, 프로피온산, 숙신산, 글리콜산, 스테아르산, 시트르산, 말레산, 말론산, 메탄설폰산, 타르타르산, 말산, 페닐아세트산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 2-아세톡시벤조산, 푸마르산, 톨루엔설폰산, 옥살산 또는 트리플루오로아세트산과 같은 유기산으로부터 유도된 염을 포함한다. 또한, 상기 염은 통상의 금속 염 형태, 예를 들면 리튬, 소듐, 칼륨, 마그네슘, 또는 칼슘과 같은 금속으로부터 유도된 염을 포함한다. 상기 산 부가염 또는 금속염은 유기화학 분야에 공지되어 있는 통상의 방법에 따라 제조될 수 있다.
본 발명의 화합물은 또한 그의 용매화물 (solvate)의 형태일 수 있다.
용어 "용매화물"이란 하나 이상의 용질 분자, 즉 화학식 1 또는 2의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 및 하나 이상의 용매 분자에 의해 형성되는 복합체 또는 집합체를 의미한다. 용매화물은 예를 들면 물, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세트산과 형성된 복합체 또는 집합체일 수 있다.
본 발명의 화합물은 또한 그의 입체이성질체의 형태일 수 있다. 상기 입체이성질체는 거울상 이성질체 (enantiomer) 및 부분입체이성질체 (diastereomer)와 같은 모든 입체이성질체를 포함한다. 상기 화합물은 입체이성질체의 순수 형태 (stereoisomerically pure form) 또는 하나 이상의 입체이성질체의 혼합물, 예를 들면 라세미 혼합물일 수 있다. 특정 입체이성질체의 분리는 당해 분야에 공지된 통상의 방법 중 하나에 의해 수행될 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 양상은 치료학적 유효량의 화학식 1 또는 2의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
상기 화학식 1 또는 2의 화합물은 JAK 이소자임 중 하나 또는 2 이상의 활성을 억제하는 효과를 보일 수 있다. 여기서 "억제 (inhibition)"는 하나 또는 2 이상의 JAK 이소자임 활성을 감소시키는 것을 포함한다.
본 발명에서 사용된 "JAK"는 야누스 키나제 계열의 효소 모두를 포함한다. 본 발명의 일부 구체예의 화합물은 JAK1, JAK2, JAK3 및 TYK2의 활성을 억제할 수 있다. 본 발명의 일부 구체예의 화합물은 JAK1, JAK3 및 TYK2의 활성을 억제할 수 있다. 본 발명의 일부 구체예의 화합물은 JAK1만 주로 억제할 수 있다. 이러한 본 발명의 화합물의 JAK 억제 효과는 시험예 1에 의해 입증되었다. 또한, 본 발명의 화합물은 크로톤 오일-유도 염증 동물모델에서 실제 항염증 효과를 나타내었다.
상기 JAK 억제 효과는 상기 화합물의 존재 하에서 JAK가 ADP를 ATP로 전환하는 것을 억제하는 정도를 측정한 것으로서, 측정되는 흡광도 값이 표준 흡광도 곡선보다 낮게 측정되는 경우, 억제 효과가 음의 값을 갖는데 이는 공시험 (negative control) 값보다 낮게 측정된 것으로, 억제 효능을 전혀 보이지 않는 0%와 실질적으로 동일하다.
상기 약학적 조성물이 함유하는 화학식 1 또는 2의 화합물은 JAK 억제 활성을 가지므로 (시험예 1 참조), JAK 억제 활성에 의해 치료할 수 있는 것으로 공지된 임의의 질병 (이하, "JAK와 연관된 질병"이라고 함)의 치료를 위해 사용될 수 있다 (Immunol . Rev ., 2008, 223(1), 132-142; Proc . Natl . Acad . Sci . U. S. A., 1995, 92(19), 8724-8728; Science, 1995, 270(5237), 800-802; Trends Pharmacol . Sci., 2004, 25(11), 558-562). 상기 JAK와 연관된 질병은 자가면역질환, 면역체계 기능장애, 바이러스성 질환, 알러지 질환, 피부 질환, IL-6 경로와 연관된 질병, 면역반응, 과증식 장애, 또는 암을 포함한다. 상기 자가면역질환은 피부 질환, 다발성 경화증, 류마티스성 관절염, 소아 관절염, 유형 I 당뇨병, 루푸스, 건선, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 크론병 또는 자가면역 갑상선 질환을 포함하고, 상기 면역체계 기능장애는 동종이식거부, 대 숙주 질환, 동종 이식 거부 반응 또는 이식편대숙주병을 포함하고, 상기 바이러스성 질환은 엡스타인 바 바이러스 (EBV), B형 간염, C형 간염, HIV, HTLV 1, 수두, 대상포진 바이러스 (VZV) 또는 인간 유두종 바이러스 (HPV) 질환을 포함하고, 상기 암은 전립선암, 신장암, 간암, 췌장암, 위암, 유방암, 폐암, 머리와 목의 암, 교아종, 백혈병, 림프종, 또는 다발성 골수종을 포함하며, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 면역 반응은 설사, 피부자극, 피부 발진, 접촉성 피부염 또는 알러지성 접촉 과민반응을 포함하고, 상기 알러지 질환은 천식, 음식 알러지, 아토피성 피부염 또는 비염을 포함하고, 상기 IL-6 경로와 연관된 질병은 캐슬만 병 및 카포시 육종을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 화합물은 JAK2에 대해 JAK1을 선택적으로 억제할 수 있다 (시험예 1 참조). 여기서 "선택적으로(selectively)"라는 용어는 어떤 화합물이 적어도 하나 이상의 JAK에 비해서 특정 JAK에 보다 높은 억제 활성을 보이는 경우를 이른다. 본 발명의 화합물은 JAK2에 대해 JAK1을 선택적으로 적어도 1 배 이상, 1.1배, 1.2배, 5배, 10배, 20배, 40배, 100배, 200배, 500배, 1000배 이상, 또는 무한대 (∞)로 억제할 수 있다. 상기 JAK2에 대해 JAK1을 선택적으로 "무한대"로 억제한다는 것은 JAK2는 실질적으로 전혀 억제하지 않고, JAK1를 억제한다는 것을 의미한다.
본 발명의 화합물은 JAK2에 대해 JAK1을 선택적으로 억제하므로, JAK2의 억제에 의해 발생될 수 있는 임의의 부작용을 경감 또는 회피하면서 상기 JAK와 연관된 질병을 치료하는데 사용될 수 있다. 상기 JAK2의 억제에 의해 발생될 수 있는 부작용은 예를 들어, 두통, 메스꺼움, 설사, 및 면역력 저하로 인한 감염, 고지혈증, 비인두염, ALT (alanine transaminase) 및 AST (aspartate transaminase)의 증가, 심각한 빈혈증, 호중구 감소 등을 포함하며, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 화합물은 종래 FDA 허가 JAK 억제제인 토파시티닙에 비해 약물의 반감기가 현저히 높으므로, 약물의 투여간격을 증가시킬 수 있다 (시험예 3 참조). 따라서, 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물은 약물의 투여 횟수를 줄일 수 있으므로 환자의 순응도를 증가시킬 수 있다는 장점이 있다.
상기 본 발명의 약학 조성물은 치료학적 유효량의 화학식 1 또는 2의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체를 포함할 수 있다.
상기 약학 조성물에 있어서, "치료학적 유효량"은 치료를 필요로 하는 개체에게 투여되는 경우 치료 효과를 나타내기에 충분한 양을 의미한다.
상기 용어 "치료"는 개체, 예를 들면 사람을 포함한 포유류에서 질환 또는 의학적 증상, 예를 들면 JAK와 연관된 질병을 치료함을 의미하고, 이는 다음을 포함한다: (a) 질환 또는 의학적 증상의 발생을 예방, 즉, 환자의 예방적 치료; (b) 질환 또는 의학적 증상의 완화, 즉, 환자에서 질환 또는 의학적 증상의 제거 또는 회복 야기; (c) 질환 또는 의학적 증상의 억제, 즉, 개체에서 질환 또는 의학적 증상의 진행을 늦춤 또는 정지; 또는 (d) 개체에서 질환 또는 의학적 증상을 경감.
상기 용어 "유효량"은 당업자가 적절하게 선택할 수 있다. 상기 "유효량"은 0.01 mg 내지 10,000 mg, 0.1 mg 내지 1,000 mg, 1 mg 내지 100 mg, 0.01 mg 내지 1,000 mg, 0.01 mg 내지 100 mg, 0.01 mg 내지 10 mg, 또는 0.01 mg 내지 1 mg일 수 있다.
본 발명의 약학 조성물에 있어서, 상기 화학식 1 또는 2의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체에 대하여는 위에서 설명한 바와 같다.
상기 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등을 포함한 각종 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있으며, 예를 들어 경구, 직장, 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다. 이에 따라, 상기 약학 조성물은 당해 기술분야에 공지되어 있는 통상적인 약제학적 제형으로 제제화될 수 있다. 상기 약학 조성물은 경구투여제제, 주사제, 좌제, 경피투여제제 및 경비투여제제를 포함하지만, 이에 한정되지 않는 임의의 제형으로 제제화되어 투여될 수도 있으나, 바람직하게는 액제, 현탁제, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 유제, 시럽제, 에어로졸, 또는 엑스제와 같은 경구 투여용 제형으로 제제화될 수 있다.
상기 각각의 제형으로 제제화 시, 각각의 제형의 제조에 필요한 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 부가하여 제조할 수 있다. 대표적으로 경구 투여용 제형으로 제제화 시 상기 첨가제로서 희석제, 활택제, 결합제, 붕해제, 감미제, 안정제 및 방부제 중에서 1종 이상을 선택하여 사용할 수 있으며, 선택적으로 향료, 비타민류 및 항산화제 중에서 1종 이상을 선택하여 사용할 수 있다.
상기 첨가제는 약제학적으로 허용 가능한 것은 모두 가능하며, 구체적으로 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 솔비톨, 자일리톨, 또는 만니톨, 활택제로는 스테아린산 마그네슘 또는 탈크, 결합제로는 폴리비닐피롤리돈 또는 히드록시프로필셀룰로오스가 바람직하다. 또한, 붕해제로는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산나트륨, 폴라크릴린칼륨, 또는 크로스포비돈, 감미제로는 백당, 과당, 솔비톨, 또는 아스파탐, 안정제로는 카르복시메틸셀룰로오스나트륨, 베타-사이클로덱스트린, 백납, 또는 잔탄검, 방부제로는 파라옥시안식향산메틸, 파라옥시안식향산프로필, 또는 솔빈산칼륨이 바람직하다.
또한, 상기 성분 이외에도 공지의 첨가제로서 미각을 돋구기 위하여, 매실향, 레몬향, 파인애플향, 허브향 등의 천연향료, 천연과즙, 클로로필린, 플라보노이드 등의 천연색소, 과당, 벌꿀, 당알코올, 설탕과 같은 감미성분, 또는 구연산, 구연산 나트륨과 같은 산미제를 혼합하여 사용할 수도 있다.
상기 제제 중 비경구투여를 위한 제제로는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제 등이 있다. 비수성용제, 현탁제의 제조를 위해서는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈61, 카카오지, 라우린지, 또는 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 JAK와 관련된 질환을 치료하기 위한 하나 이상의 다른 치료제와 함께 조합될 수 있다. 다른 치료제는 상기 JAK와 관련된 질환의 종류에 따라 달라질 수 있으며, 예를 들어 화학요법제, 항염증제, 면역억제제, 항암제, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 특히 다발성 골수종에 대한 치료제와의 병용은, 추가적인 독성 문제없이, JAK 억제제의 단독 처방보다 더욱 치료 반응을 증가시킬 수 있다. 다발성 골수종에 대한 치료에서 병용 치료를 위한 약제의 예는 멜팔란, 멜팔란과 프레드니손의 복합제, 독소루비신, 덱사메타손, 벨케이드 등이 있다. 병용치료는 상승효과를 발생시킬 수 있다. 게다가, 본 발명의 화합물의 처방은 다발성 골수종 치료에서 덱사메타손이 보여주는 것과 같은 약제에 대한 저항문제를 해결할 수 있다. 병용치료를 위한 약제는 JAK 억제제와 단회 투여 또는 연속적인 투여 형태로 병용할 수 있거나, 또는 동시에 또는 순차적으로 분리된 투여 형태로서 투여할 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 양상은 JAK와 연관된 질병의 치료에 있어서의 상기에서 정의된 화학식 1과 2의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체의 용도를 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 양상은 상기 JAK와 연관된 질병을 치료하는데 사용하기 위한, 상기에서 정의된 화학식 1과 2의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체의 용도를 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 양상은 상기에서 정의된 화학식 1과 2의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체를 JAK와 접촉시켜 JAK의 활성을 억제하는 단계를 포함하는 JAK의 활성을 억제하는 방법을 제공한다.
상기 방법에 있어서, 상기 접촉은 인 비트로 또는 인 비보에서 수행될 수 있다. 상기 방법에서, 상기 JAK는 세포 내에서 존재하는 것일 수 있다. 상기 JAK는 JAK1, JAK2, JAK3, 또는 TYK2일 수 있다.
상기 JAK 활성의 억제는 JAK 활성을 감소시키는 것일 수 있다. 상기 JAK 활성의 억제는 다른 JAK 타입에 비하여 특정 JAK 타입의 활성을 더 높은 정도로 억제시키는 것일 수 있다. 예를 들면, 상기 억제는 JAK1과, JAK2, JAK3, 및 TYK2 중 JAK1의 선택적 억제를 포함한다.
일 구체예에서, 상기 JAK의 활성을 억제하는 방법은 JAK1의 활성을 JAK2의 활성에 대해 선택적으로 억제하는 방법이다. 여기서 "선택적으로(selectively)"라는 용어는 어떤 화합물이 적어도 하나 이상의 JAK 이소자임에 비해서 특정 JAK에 보다 높은 억제 활성을 보이는 경우를 이른다. 본 발명의 화합물은 JAK2에 대해 JAK1을 선택적으로 적어도 1배 초과, 1.1배, 1.2배, 5배, 10배, 20배, 40배, 100배, 200배, 500배, 또는 1,000배 이상, 또는 무한대 (∞)로 억제할 수 있다.
본 발명의 다른 양상은 치료학적으로 유효량의 화학식 1과 2의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체를 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 질병을 치료하는 방법을 제공한다.
상기 방법에 있어서, 당업자는 투여시 투여경로를 환자의 상태에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 상기 투여는 경구, 비경구, 또는 국부 투여일 수 있다.
상기 방법에 있어서, 치료학적 유효량은 전술한 바와 같이 개체의 인종, 민족, 성별, 나이, 체중, 약물 감수성, 구체적인 질병의 종류, 질병의 증세 정도, 병용약물 등을 포함한 다양한 인자에 따라 전문의사가 적절히 가감할 수 있다. 치료학적 유효량은 체외 실험 또는 동물 모델 시험에서 얻어진 용량-반응곡선으로부터 추정할 수 있다. 투여되는 조성물에 존재하는 본 발명의 화합물의 비율 및 농도는 화학적 특성, 투여 경로, 치료적 투여량 등에 따라 결정될 수 있다. 상기 치료학적 유효량은 개체에게 약 1 ㎍/kg 내지 약 1 g/kg per day, 또는 약 0.1 mg/kg 내지 약 500 mg/kg per day일 수 있다.
상기 질병은 JAK와 연관된 질병일 수 있다. 상기 JAK와 연관된 질병은 자가면역질환, 면역체계 기능장애, 바이러스성 질환, 알러지 질환, 피부 질환, IL-6 경로와 연관된 질병, 면역반응, 과증식 장애, 또는 암을 포함한다. 이들에 대하여는 상기한 바와 같다. 또한, 본 발명의 치료학적으로 유효량의 화학식 1 또는 2의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체는 JAK와 관련된 질환을 치료하기 위한 하나 이상의 다른 치료제와 함께 조합되어 투여될 수 있다. 다른 치료제에 대하여는 상기한 바와 같다.
본 발명의 화학식 1의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체는 하기 반응식 1에 따른 제조방법에 의하여 제조될 수 있다:
[반응식 1]
Figure 112015081486502-pat00005
반응식 1에서, 화학식 3, 4, 5, 6, 7, 및 8 중 L1과 L2는 각각 이탈기를 나타내고, Pr1과 Pr2는 아미노-보호기를 나타내고, X는 F, Cl, Br, 또는 I를 나타내고, R1 및 R2는 상기 화학식 1에서 정의된 바와 같다.
상기 방법은 (a) 화학식 3의 화합물 또는 그의 염을 R1-X1의 화합물과 반응시켜 화학식 4의 화합물을 생성하는 단계; 및 화학식 4의 화합물과 6-할로-7-데아자푸린과 반응시켜 화학식 6의 화합물을 생성하는 단계; 또는 (b) 화학식 3의 화합물 또는 그의 염을 6-할로-7-데아자푸린과 반응시켜 화학식 5의 화합물을 생성하는 단계; 및 화학식 5의 화합물과 R1-X1의 화합물과 반응시켜 화학식 6의 화합물을 생성하는 단계; (c) 화학식 6의 화합물의 피롤리딘 (pyrrolidine) 고리의 질소를 탈보호시켜 화학식 7의 화합물을 생성하는 단계; (d) 화학식 7의 화합물을 R4-X2와 반응시켜 화학식 8의 화합물을 생성하는 단계; 및 (e) 화학식 8의 화합물을 탈보호시켜 화학식 1의 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 화학식 1의 화합물을 제조하는 방법을 제공한다.
상기 방법에서, (a) 단계의 "화학식 3의 화합물 또는 그의 염을 R1-X1의 화합물과 반응시켜 화학식 4의 화합물을 생성하는 단계" 및 "화학식 5의 화합물과 R1-X1의 화합물과 반응시켜 화학식 6의 화합물을 생성하는 단계"는 알킬화 (예를 들면, 메틸화), 알케닐화, 또는 알키닐화를 포함한다.
상기 방법에서, (a) 단계의 "화학식 4의 화합물과 6-할로-7-데아자푸린과 반응시켜 화학식 6의 화합물을 생성하는 단계" 및 "화학식 3의 화합물 또는 그의 염을 6-할로-7-데아자푸린과 반응시켜 화학식 5의 화합물을 생성하는 단계"는 적절한 용매하에서 가열하면서 또는 환류 조건에서 수행될 수 있다. 상기 6-할로-7-데아자푸린은 상업적으로 구입할 수 있다. 상기 할로는 예를 들면 클로로일 수 있다.
상기 방법에서, (c) "화학식 6의 화합물의 피롤리딘 (pyrrolidine) 고리의 질소를 탈보호시켜 화학식 7의 화합물을 생성하는 단계"; 및 (e) "화학식 8의 화합물을 탈보호시켜 화학식 1의 화합물을 제조하는 단계"는 임의의 알려진 탈보호 방법에 의하여 수행될 수 있다.
또한, 상기 방법에서, (d) "화학식 7의 화합물을 R4-X2와 반응시켜 화학식 8의 화합물을 생성하는 단계"는 N에 의한 X2의 치환에 의하여 수행될 수 있다.
상기 방법에서, 용어 "이탈기 (leaving group)"는 치환 반응, 예를 들면 친핵성 치환 반응에서 다른 기능적 기 또는 원자에 의해 교체될 수 있는 기능적 기 또는 원자를 의미한다. 예컨대, 대표적인 이탈기는 클로로, 브로모 및 요오드 기; 설포닉 에스테르기, 예컨대 토실레이트, 브로실레이트 및 노실레이트 등; 및 알킬옥시 기, 예컨대 아세트옥시 및 트리플루오로아세트옥시 등을 포함한다.
용어 "보호된 (protected)"은 화합물의 하나 이상의 기능기가 보호기 또는 차단기를 이용하여 원하지 않는 반응으로부터 보호되는 것을 의미한다. 보호될 수 있는 기능기는, 예컨대, 아미노기를 위한 대표적인 보호기인 카르바메이트 (예컨대 tert-부톡시카르보닐)를 포함한다.
용어 "아미노-보호기 (amino-protecting group)"는 아미노기에서 원하지 않는 반응을 방지하는데 적합한 보호기를 의미한다. 대표적인 아미노-보호기는 tert-부톡시카르보닐 (BOC), 트리틸 (Tr), 벤질옥시카르보닐 (Cbz), 9-플루오렌일메톡시카르보닐 (Fmoc), 포르밀, 트리메틸실릴 (TMS) 및 tert-부틸디메틸실릴 (TBS) 등을 포함한다.
본 발명의 화학식 2의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체는 상기 반응식 1의 제조방법에서 화학식 3의 피롤리딘 구조의 화합물을 피페리딘 구조의 화합물로 변경하는 등의 상기 제조방법의 적절한 변경에 의해 유기화학분야에서의 통상의 기술자가 적절히 제조할 수 있다.
상기 방법에 있어서, 본 발명의 화합물은 일반적인 방법 및 과정을 이용하거나 당업자가 용이하게 입수할 수 있는 다른 정보를 이용하여 용이하게 입수할 수 있는 출발물질로부터 제조될 수 있다.
상기 본 발명의 화합물의 제조방법의 상세는 하기 실시예를 참조할 수 있다.
화합물의 염, 및 수화물을 포함한 용매화물을 포함하는, 본 발명의 화합물은 일반적으로 널리 알려진 유기 합성 기법을 사용하여 제조될 수 있고, 다수의 가능한 합성 경로 중 하나에 따라 합성될 수 있다.
본 발명의 화합물을 합성하기 위한 반응들은 유기 합성 분야의 당업자들이 쉽게 선택할 수 있는 적절한 용매에서 수행될 수 있다. 적절한 용매는 반응이 수행될 때의 온도, 즉, 용매의 어는점에서 용매의 끓는점까지의 범위의 온도에서 출발 물질 또는 반응물, 중간체 또는 반응결과물과 대체로 비 반응성이다. 주어진 반응은 하나의 용매 또는 둘 이상의 용매의 혼합물 중에서 수행될 수도 있다. 특정 반응 단계에 따라, 특정 반응 단계에 적합한 용매가 선택될 수 있다.
본 발명의 화합물의 합성은 다양한 화학 작용기의 보호 및 탈보호를 포함할 수 있다. 보호 및 탈보호의 필요성과 적절한 보호기의 선택은 당해 분야의 전문가에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
반응은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법에 따라 추적 관찰할 수 있다. 예를 들어, 반응 결과물의 형성은 핵자기 공명 분광학 (예를 들어,　1H or 13C), 적외선 분광학, 분광 광도 측정법 (예를 들어, UV-visible), 및 질량분석법 등의 분광학적 방법이나, 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 및 박층 크로마토그래피 (TLC)와 같은 크로마토그래피를 이용하여 추적 관찰할 수 있다. 본 발명의 화합물들은 문헌들에서 잘 알려진 수많은 합성 경로에 따라서 합성될 수 있다.
본 발명에 따른 화학식 1 또는 2의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체는 JAK 억제 활성을 가지므로 자가면역질환, 면역체계 기능장애, 바이러스성 질환, 또는 암과 같은 JAK와 연관된 질병의 치료에 사용될 수 있다. 더욱이, 상기 본 발명에 따른 화합물은 종래 FDA 허가 약물인 토파시티닙에 비해 JAK2에 대한 JAK1의 선택적 억제 활성이 높으므로, JAK2의 억제에 의해 발생 가능한 부작용을 회피할 수 있다는 장점이 있다. 또한, 상기 본 발명에 따른 화합물은 종래 FDA 허가 약물인 토파시티닙에 비해 약물의 반감기가 현저히 높으므로, 투여간격을 늘릴 수 있어 환자의 복약 순응도를 증가시킬 수 있는 장점이 있다.
도 1 및 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 화합물에 대한 크로톤 오일-유도 염증 모델에서의 항염증 시험 결과를 부종 억제율로서 나타낸 그래프이다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
본 실시예에서 달리 언급이 없으면, 시약, 출발 물질 및 용매는 상업적 공급자들 (예컨대 Aldrich, Fluka, Sigma, Acros, 대정화금, TCI 등)로부터 구입했고 추가 정제 없이 사용하였다. 합성과정에서 사용된 정제는 Merck사의 Silica gel 60 (0.040~0.063 mm)을 사용하여 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 통해 진행하였다.
1. 중간체 제조예
하기 실시예에서 제조된 화합물은 일부 하기 중간체를 사용하여 합성되었다.
(1.1) 중간체 1: 터트 -부틸 (R)-(1- 벤질피롤리딘 -3-일) 카바메이트
Figure 112015081486502-pat00006
500 mL 둥근바닥 플라스크에 5.000 g의 (3R)-(-)-1-벤질-3-아미노피롤리딘 염산염 (Hangzhou Tacon Co., Ltd.)을 넣고, 117.5 mL의 증류수 (deionized water)와 117.5 mL의 아세토니트릴 (acetonitrile)을 넣었다. 이후 5.924 g의 탄산수소 나트륨 (NaHCO3)을 넣었다. 그리고 6.218 g의 디-터트-부틸 디카바메이트 (Boc2O)를 넣었다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 격렬히 교반시켰다. 반응혼합물 중에서 유기층을 분리했다. 그리고 수용액층을 50 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 2회 추출하였다. 모아진 유기층을 감압증류했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 그 결과 4.235 g의 터트-부틸 (R)-(1-벤질피롤리딘-3-일)카바메이트를 65.2%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.36-7.26 (m, 5H), 4.86 (bs, 1H), 4.18 (bs, 1H), 3.61 (s, 2H), 2.79 (bs, 1H), 2.65-2.61 (m, 1H), 2.54 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 2.34-2.25 (m, 2H), 1.61-1.51 (m, 1H), 1.46 (s, 9H).
(1.2) 중간체 2: (R)-1-벤질-N- 메틸피롤리딘 -3-아민
Figure 112015081486502-pat00007
100 mL 둥근바닥 플라스크에 3.204 g의 터트-부틸 (R)-(1-벤질피롤리딘-3-일)카바메이트를 넣고, 58.0 mL의 테트라하이드로퓨란 (tetrahydrofuran)을 넣었다. 이후 2.639 g의 리튬 알루미늄 하이드라이드 (LiAlH4)를 넣었다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 환류시켰다. 0oC에서 냉각시켰다. 냉각시키면서 2.7 mL의 증류수 (deionized water)를 천천히 넣었다. 5분 동안 교반 후, 2.7 mL의 15% 수산화 나트륨 (NaOH) 수용액을 넣었다. 다시 5분 동안 교반 후, 8.1 mL의 증류수 (deionized water)를 넣어서 반응을 종료시켰다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) (대정화금) 층을 통해 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2:NH4OH=5:90:5). 그 결과 2.174 g의 (R)-1-벤질-N-메틸피롤리딘-3-아민을 98.6%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.34-7.24 (m, 5H), 3.62 (s, 2H), 3.25-3.19 (m, 1H), 2.74 (dd, J = 9.4, 6.8 Hz, 1H), 2.64 (dt, J = 8.6, 6.0 Hz, 1H), 2.52 (dt, J = 8.4, 6.0 Hz, 1H), 2.41-2.37 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.19-2.09 (m, 1H), 2.02 (bs, 1H), 1.63-1.56 (m, 1H).
(1.3) 중간체 3: (R)-N-(1- 벤질피롤리딘 -3-일)-N- 메틸 -7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00008
50 mL 둥근바닥 플라스크에 419.5 mg의 (R)-1-벤질-N-메틸피롤리딘-3-아민을 넣고, 11.0 mL의 증류수 (deionized water)를 넣었다. 이후 372.4 mg의 6-클로로-7-데아자퓨린 (6-chloro-7-deazapurine) (Acros)을 넣었다. 반응혼합물에 609.4 mg의 탄산 칼륨 (K2CO3)을 넣었다. 이 혼합물을 24시간 동안 환류시켰다. 24시간 이후 상온에서 냉각시켰다. 반응혼합물을 20.0 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 세 번 추출했다. 모아진 유기층을 감압농축했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 그 결과 506.9 mg의 (R)-N-(1-벤질피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 74.8%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.40 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.51-7.20 (m, 5H), 7.03 (s, 1H), 6.59 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 5.66 (s, 1H), 3.65 (dd, J = 62.5, 12.9 Hz, 2H), 3.42 (s, 3H), 2.98 (dd, J = 13.5, 7.8 Hz, 1H), 2.83 (dd, J = 10.3, 3.4 Hz, 1H), 2.69-2.53 (m, 1H), 2.44-2.21 (m, 2H), 1.96-1.83 (m, 1H).
(1.4) 중간체 4: (R)-N- 메틸 -N-( 피롤리딘 -3-일)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00009
100 mL 둥근바닥 플라스크에 638.1 mg의 (R)-N-(1-벤질피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 20.8 mL의 메탄올 (methanol)로 용해시켰다. 이후 638.1 mg의 10w/w% 팔라듐/탄소 (Pd/C) (Acros)를 넣고, 수소 풍선을 반응 플라스크 위에 장치하였다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 격렬히 교반했다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 필터한 용액을 감압농축했다. 잔류물을 컬럼으로 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 324.6 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 72.0%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ12.16 (bs, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.09 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 5.62-5.42 (m, 1H), 3.42-3.32 (m, 3H), 3.29 (dd, J = 11.5, 8.4 Hz, 1H), 3.24-3.12 (m, 1H), 3.10-3.01 (m, 1H), 2.98 (dd, J = 11.5, 6.2 Hz, 1H), 2.66 (bs, 1H), 2.26-2.10 (m, 1H), 1.91 (td, J = 14.9, 7.6 Hz, 1H).
실시예 1. (R)-3-(3-(메틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노) 피롤리딘 -1-일)-3-옥소프로판니트릴
Figure 112015081486502-pat00010
10 mL 둥근바닥 플라스크에 103 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 4.70 mL의 n-부탄올 (n-butanol)로 녹였다. 이 용액에 0.505 mL의 에틸 시아노아세테이트 (ethyl cyanoacetate)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0360 mL의 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 (DBU)으로 처리했다. 이후 24시간 동안 80oC로 가열했다. 반응을 끝낸 후 반응액을 감압증류하여 용매를 제거했다. 잔류물을 컬럼으로 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 101 mg의 (R)-3-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴을 74.8%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ11.48 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 5.74 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.87 (s, 2H), 3.79-3.57 (m, 2H), 3.48 (s, 2H), 3.34 (d, J = 14.9 Hz, 3H), 2.46-2.11 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C14H16N6O + H+) 285.2, found 285.2.
실시예 2. (R)-3-(3-(메틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노) 피롤리딘 -1-일) 프로판니트릴
Figure 112015081486502-pat00011
5 mL 둥근바닥 플라스크에 60.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0240 mL의 3-브로모프로피오니트릴 (3-bromopropionitrile)을 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0720 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 5시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 55.3 mg의 (R)-3-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로판니트릴을 74.7%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.65 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.05 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.62 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.75-5.73 (m, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.11-3.06 (m, 1H), 2.98-2.95 (m, 1H), 2.87-2.83 (m, 1H), 2.78-2.72 (m, 1H), 2.67 (dd, J = 8.8, 9.6 Hz, 1H), 2.60 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.41-2.30 (m, 2H), 1.99-1.90 (m, 1H).
LRMS (ESI) calcd for (C14H18N6 + H+) 271.2, found 271.1.
실시예 3. (R)-N-(1- 부틸피롤리딘 -3-일)-N- 메틸 -7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00012
5 mL 둥근바닥 플라스크에 80.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0420 mL의 1-브로모부탄 (1-bromobutane)을 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0960 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 이 혼합물에 20방울의 N,N-디메틸폼아미드 (N,N-dimethylformamide)를 넣었다. 반응혼합물을 5시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 90.0 mg의 (R)-N-(1-부틸피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 83.3%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.05 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.09 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.69 (s, 1H), 3.50 (d, J = 4.4 Hz, 4H), 2.92-2.85 (m, 3H), 2.39 (s, 2H), 1.76 (s, 4H), 1.48-1.44 (m, 2H), 0.99 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
LRMS (ESI) calcd for (C15H23N5 + H+) 274.2, found 274.2.
실시예 4. (R)-2- 아지도 -1-(3-(메틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노) 피롤리딘 -1-일)에탄-1-온
Figure 112015081486502-pat00013
25 mL 둥근바닥 플라스크에, 247 mg의 2-아지도아세트산 (2-azidoacetic acid)을 8.00 mL의 N,N-디메틸폼아미드 (N,N-dimethylformamide)로 녹인다. 그리고 503 mg의 디시클로헥실카보이미드 (dicyclohexylcarbodiimide)와 0.850 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)을 넣었다. 반응혼합물을 15분 동안 교반했다. 다른 25 mL 둥근바닥 플라스크에 265 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣었다. 2-아지도아세트산 혼합물을 다른 25 mL 둥근바닥 플라스크에 넣었다. 이 혼합물을 하룻밤 동안 환류시켰다. 상온으로 냉각 뒤, 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 얻어진 분액을 감압농축하고 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 19.3 mg의 (R)-2-아지도-1-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)에탄-1-온을 5.27%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.64 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.11-7.02 (m, 1H), 6.62-6.61 (m, 1H), 5.81-5.71 (m, 1H), 3.97-3.90 (m, 3H), 3.84-3.78 (m, 1H), 3.69-3.51 (m, 2H), 3.37-3.33 (m, 3H), 2.26-2.12 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C13H16N8O + H+) 301.2, found 301.1.
실시예 5. (R)-3- 메틸 -1-(3-(메틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노) 피롤리딘 -1-일)부탄-1-온
Figure 112015081486502-pat00014
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0390 mL의 이소발러릴 클로라이드 (isovaleryl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 66.7 mg의 (R)-3-메틸-1-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)부탄-1-온을 68.7%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.87 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 8.35 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.11-7.08 (m, 1H), 6.62-6.61 (m, 1H), 5.78-5.66 (m, 1H), 3.92-3.69 (m, 2H), 3.61-3.39 (m, 2H), 3.36 (d, J = 12.4 Hz, 3H), 2.33 (m, 5H), 1.03-0.99 (m, 6H).
LRMS (ESI) calcd for (C16H23N5O + H+) 302.2, found 302.2.
실시예 6. 이소부틸 (R)-3-(메틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노) 피롤리딘 -1-카 르복실레이 트
Figure 112015081486502-pat00015
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0420 mL의 이소부틸 클로로포메이트 (isobutyl chloroformate)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0560 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼으로 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 41.0 mg의 이소부틸 (R)-3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-카르복실레이트를 40.2%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.52 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 5.73-5.71 (m, 1H), 3.92 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 3.78-3.68 (m, 2H), 3.55-3.39 (m, 2H), 3.34 (s, 3H), 2.22-2.12 (m, 2H), 1.97-1.96 (m, 1H), 0.97-0.95(m, 6H). LRMS
(ESI) calcd for (C16H23N5O2 + H+) 318.2, found 318.2.
실시예 7. (R)-3-(메틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노)-N- 페닐피롤리딘 -1-카르복스아미드
Figure 112015081486502-pat00016
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0350 mL의 페닐 이소사이아네이트 (phenyl isocyanate)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 5시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 81.5 mg의 (R)-3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)-N-페닐피롤리딘-1-카르복스아미드를 75.4%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.61 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.45 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.33 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.12 (m, 1H), 7.05 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.62 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.25 (s, 1H), 5.83-5.72 (m, 1H), 3.90 (q, J = 8.4, 10 Hz, 1H), 3.83-3.77 (m, 1H), 3.61-3.54 (m, 1H), 3.52-3.47 (m, 1H), 3.38 (s, 3H), 2.35-2.20 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C18H20N6O + H+) 337.2, found 337.2.
실시예 8. (R)-N- 메틸 -N-(1-( 메틸설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00017
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.0 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0250 mL의 메탄설포닐 클로라이드(methanesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 40.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(1-(메틸설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 42.1%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.63 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 6.62 (s, 1H), 5.85-5.77 (m, 1H), 3.80-3.69 (m, 1H), 3.66-3.61 (m, 1H), 3.44-3.30 (m, 5H), 2.93 (s, 3H), 2.36-2.17 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C12H17N5O2S + H+) 296.1, found 296.1.
실시예 9. (R)-N- 메틸 -N-(1-(( 트리플루오로메틸 ) 설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00018
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0340 mL의 트라이플루오로메탄설포닐 클로라이드 (trifluoromethanesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼으로 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 72.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(1-((트리플루오로메틸)설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 64.3%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.00 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.13-7.12 (m, 1H), 6.62-6.60 (m, 1H), 5.93-5.79 (m, 1H), 4.02-3.86 (m, 2H), 3.68-3.61 (m, 1H), 3.57 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 3.38 (s, 3H), 2.39-2.23 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C12H14F3N5O2S + H+) 350.1, found 350.1.
실시예 10. (R)-N-(1-( 에틸설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-N- 메틸 -7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00019
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0310 mL의 에탄설포닐 클로라이드 (ethanesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼으로 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 53.4 mg의 (R)-N-(1-(에틸설폰일)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 53.6%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.30 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.74 (s, 1H), 5.83-5.79 (m, 1H), 3.76-3.67 (m, 2H), 3.55-3.40 (m, 2H), 3.38 (s, 3H), 3.12-3.07 (m, 2H), 2.34-2.15 (m, 2H), 1.46 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
LRMS (ESI) calcd for (C13H19N5O2S + H+) 310.1, found 310.1.
실시예 11. (R)-N- 메틸 -N-(1-( 프로필설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00020
5 mL 둥근바닥 플라스크에 60.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 0.600 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0320 mL의 1-프로판설포닐 클로라이드 (1-propanesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0720 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 5시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 49.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(1-(프로필설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 54.9%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.64 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.09-7.08 (m, 1H), 6.62-6.61 (m, 1H), 5.83-5.77 (m, 1H), 3.74-3.65 (m, 2H), 3.44-3.38 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.04-3.00 (m, 2H), 2.40-2.25 (m, 1H), 2.24-2.12 (m, 1H), 1.97-1.87 (m, 2H), 1.13 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
LRMS (ESI) calcd for (C14H21N5O2S + H+) 324.1, found 324.1.
실시예 12. (R)-N-(1-( 이소프로필설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-N- 메틸 -7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00021
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0360 mL의 2-프로판설포닐 클로라이드 (2-propanesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 36.0 mg의 (R)-N-(1-(이소프로필설폰일)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 34.6%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.93 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.07-7.02 (m, 1H), 6.62-6.61 (m, 1H), 5.90-5.75 (m, 1H), 3.80-3.68 (m, 2H), 3.50-3.44 (m, 2H), 3.36 (s, 3H), 3.33-3.26 (m, 1H), 2.30-2.13 (m, 2H), 1.44 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
LRMS (ESI) calcd for (C14H21N5O2S + H+) 324.2, found 324.1.
실시예 13. (R)-N- 메틸 -N-(1-((1- 메틸 -1H- 이미다졸 -4-일) 설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-7H-피 롤로[2,3-d]피리미 딘-4-아민
Figure 112015081486502-pat00022
5 mL 둥근바닥 플라스크에 50.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 39.7 mg의 1-메틸-1H-이미다졸-4-설포닐 클로라이드 (1-methyl-1H-imidazole-4-sulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0370 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 17.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(1-((1-메틸-1H-이미다졸-4-일)설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 22.4%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.32 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.54 (dd, J = 11.2, 3.6 Hz, 2H), 7.06 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.36 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.71-5.63 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.78-3.67 (m, 2H), 3.50-3.42 (m, 2H), 3.34 (s, 3H), 2.22-2.09 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C15H19N7O2S + H+) 362.1, found 362.1.
실시예 14. (R)-N- 메틸 -N-(1-( 페닐설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00023
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0410 mL의 벤젠설포닐 클로라이드 (benzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 101 mg의 (R)-N-메틸-N-(1-(페닐설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 84.2%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.32 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.90 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.69-7.54 (m, 3H), 7.02 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 5.65-5.58 (m, 1H), 3.69-3.65 (m, 1H), 3.59-3.35 (m, 2H), 3.29 (s, 3H), 3.15-3.04 (m, 1H), 2.32-2.02 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C17H19N5O2S + H+) 358.1, found 358.1.
실시예 15. (R)-N-(1-((2- 플루오로페닐 ) 설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-N- 메틸 -7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00024
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.50 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0450 mL의 2-플루오로벤젠설포닐 클로라이드 (2-fluorobenzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 96.8 mg의 (R)-N-(1-((2-플루오로페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 80.6%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.71 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.97-7.93 (m, 1H), 7.67-7.61 (m, 1H), 7.35-7.27 (m, 2H), 7.08-7.02 (m, 1H), 6.58 (dd, J = 3.6, 2.0 Hz, 1H), 5.76-5.68 (m, 1H), 3.80-3.75 (m, 1H), 3.64 (dd, J = 10.4, 8.4 Hz, 1H), 3.45 (dd, J = 10.4, 6.8 Hz, 1H), 3.40-3.36 (m, 1H), 3.33 (s, 3H), 2.28-2.16 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C17H18FN5O2S + H+) 376.1, found 376.1.
실시예 16. (R)-N-(1-((3- 플루오로페닐 ) 설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-N- 메틸 -7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00025
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.50 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0450 mL의 3-플루오로벤젠설포닐 클로라이드 (3-fluorobenzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 101 mg의 (R)-N-(1-((3-플루오로페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 84.0%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.54 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62-7.57 (m, 2H), 7.38 (dt, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.67-5.59 (m, 1H), 3.72-3.67 (m, 1H), 3.47 (t, J = 10.4 Hz, 1H), 3.39 (dd, J = 10.4, 6.8 Hz, 1H), 3.32 (s, 3H), 3.18-3.11 (m, 1H), 2.25-2.10 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C17H18FN5O2S + H+) 376.1, found 376.1.
실시예 17. (R)-N-(1-((4- 플루오로페닐 ) 설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-N- 메틸 -7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00026
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.50 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 66.2 mg의 4-플루오로벤젠설포닐 클로라이드 (4-fluorobenzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 93.5 mg의 (R)-N-(1-((4-플루오로페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 77.8%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.35 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.91 (dd, J = 9.2, 5.2 Hz, 2H), 7.31-7.25 (m, 2H), 7.09 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.67-5.59 (m, 1H), 3.70-3.65 (m, 1H), 3.45 (dd, J = 10.4, 8.4 Hz, 1H), 3.37 (dd, J = 10.8, 6.8 Hz, 1H), 3.32 (s, 3H), 3.15-3.08 (m, 1H), 2.25-2.06 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C17H18FN5O2S + H+) 376.1, found 376.1.
실시예 18. (R)-2-((3-(메틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노) 피롤리딘 -1-일)설폰일) 벤조니트릴
Figure 112015081486502-pat00027
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.50 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 68.6 mg의 2-시아노벤젠설포닐 클로라이드 (2-cyanobenzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 68.8 mg의 (R)-2-((3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴을 56.0%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.70 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.14 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.82-7.73 (m, 2H), 7.08 (t, J = 3.2 Hz, 1H), 6.60 (dd, J = 3.2, 1.6 Hz, 1H), 5.82-5.74 (m, 1H), 3.87-3.82 (m, 1H), 3.68 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 3.52-3.41 (s, 2H), 3.35 (s, 3H), 2.33-2.23 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C18H18N6O2S + H+) 383.1, found 383.1.
실시예 19. (R)-3-((3-(메틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노) 피롤리딘 -1-일)설폰일) 벤조니트릴
Figure 112015081486502-pat00028
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.50 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 68.6 mg의 3-시아노벤젠설포닐 클로라이드 (3-cyanobenzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 88.6 mg의 (R)-3-((3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴을 72.4%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.04 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.11 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.75 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.10 (t, J = 3.2 Hz, 1H), 6.57 (t, J = 1.6 Hz, 1H), 5.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.75-3.70 (m, 1H), 3.51 (dd, J = 10.4, 8.4 Hz, 1H), 3.40 (dd, J = 10.4, 6.8 Hz, 1H), 3.33 (s, 3H), 3.20-3.13 (m, 1H), 2.27-2.14 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C18H18N6O2S + H+) 383.1, found 383.1.
실시예 20. (R)-4-((3-(메틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노) 피롤리딘 -1-일)설폰일) 벤조니트릴
Figure 112015081486502-pat00029
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.50 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 68.6 mg의 4-시아노벤젠설포닐 클로라이드 (4-cyanobenzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 80.5 mg의 (R)-4-((3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴을 65.8%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.72 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.00 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.90 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.09 (dd, J = 3.6, 2.4 Hz, 1H), 6.56 (dd, J = 3.6, 2.0 Hz, 1H), 5.66-5.58 (m, 1H), 3.74-3.68 (m, 1H), 3.50 (dd, J = 10.4, 8.4 Hz, 1H), 3.40 (dd, J = 10.4, 6.8 Hz, 1H), 3.31 (s, 3H), 3.20-3.14 (m, 1H), 2.26-2.09 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C18H18N6O2S + H+) 383.1, found 383.1.
실시예 21. (R)-N- 메틸 -N-(1-((2- 니트로페닐 ) 설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00030
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.50 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 75.4 mg의 2-니트로벤젠설포닐 클로라이드 (2-nitrobenzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 101 mg의 (R)-N-메틸-N-(1-((2-니트로페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 78.1%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.83 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.08 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.78-7.66 (m, 3H), 7.09 (s, 1H), 6.60 (s, 1H), 5.82-5.74 (m, 1H), 3.82-3.74 (m, 2H), 3.53-3.45 (m, 2H), 3.35 (s, 3H), 2.33-2.18 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C17H18N6O4S + H+) 403.1, found 403.1.
실시예 22. (R)-N- 메틸 -N-(1-((3- 니트로페닐 ) 설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00031
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.50 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 75.4 mg의 3-니트로벤젠설포닐 클로라이드 (3-nitrobenzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 104 mg의 (R)-N-메틸-N-(1-((3-니트로페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 81.0%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.51 (s, 1H), 8.73 (t, J = 1.6 Hz, 1H), 8.52 (dd, J = 8.0, 1.6 Hz, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.83 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.10 (dd, J = 3.6, 2.0 Hz, 1H), 6.56 (dd, J = 3.2, 1.6 Hz, 1H), 5.67-5.61 (m, 1H), 3.78-3.73 (m, 1H), 3.54 (dd, J = 10.4, 8.4 Hz, 1H), 3.43 (dd, J = 10.4, 6.8 Hz, 1H), 3.33 (s, 3H), 3.23-3.17 (m, 1H), 2.27-2.14 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C17H18N6O4S + H+) 403.1, found 403.1.
실시예 23. (R)-N- 메틸 -N-(1-((4- 니트로페닐 ) 설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00032
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.50 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 75.4 mg의 4-니트로벤젠설포닐 클로라이드 (4-nitrobenzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 95.3 mg의 (R)-N-메틸-N-(1-((4-니트로페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 74.0%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.10 (s, 1H), 8.44 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.25 (s, 1H), 8.08 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.09 (s, 1H), 6.55 (t, J = 1.6 Hz, 1H), 5.65-5.57 (m, 1H), 3.76-3.70 (m, 1H), 3.53 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 3.41 (dd, J = 10.0, 6.8 Hz, 1H), 3.32 (s, 3H), 3.23-3.17 (m, 1H), 2.27-2.11 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C17H18N6O4S + H+) 403.1, found 403.0.
실시예 24. (R)-N- 메틸 -N-(1-(m- 톨릴설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00033
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 2.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0470 mL의 3-톨루엔설포닐 클로라이드 (3-toluenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 101 mg의 (R)-N-메틸-N-(1-(m-톨릴설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 84.9%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.33 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.69 (s, 2H), 7.47 (s, 2H), 7.06 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.63-5.58 (m, 1H), 3.69-3.65 (m, 1H), 3.48-3.35 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.13-3.06 (m, 1H), 2.48 (s, 3H), 2.19-2.02 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C18H21N5O2S + H+) 372.2, found 372.1.
실시예 25. (R)-N- 메틸 -N-(1- 토실피롤리딘 -3-일)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00034
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.50 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 64.8 mg의 p-톨루엔설포닐 클로라이드 (p-toluenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 87.4 mg의 (R)-N-메틸-N-(1-토실피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 73.5%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.94 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.07 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.66-5.58 (m, 1H), 3.68-3.63 (m, 1H), 3.43-3.34 (m, 2H), 3.31 (s, 3H), 3.11-3.05 (m, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.22-2.02(m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C18H21N5O2S + H+) 372.2, found 372.1.
실시예 26. (R)-N-(1-((4- 메톡시페닐 ) 설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-N- 메틸 -7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00035
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.50 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 70.3 mg의 4-메톡시벤젠설포닐 클로라이드 (4-methoxybenzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼으로 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 107 mg의 (R)-N-(1-((4-메톡시페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 86.2%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.82 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.83 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.06 (d, J = 8.4 Hz, 3H), 6.55 (s, 1H), 5.66-5.58 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.67-3.62 (m, 1H), 3.42-3.34 (m, 2H), 3.31 (s, 3H), 3.11-3.04 (m, 1H), 2.23-2.04 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C18H21N5O3S + H+) 388.1, found 388.1.
실시예 27. (R)-N- 메틸 -N-(1-((4-( 트리플루오로메틸 ) 페닐 ) 설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-7H-피 롤로[2,3-d]피리미 딘-4-아민
Figure 112015081486502-pat00036
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.50 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 83.2 mg의 4-(트리플루오루메틸)벤젠설포닐 클로라이드 (4-(trifluoromethyl)benzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 99.2 mg의 (R)-N-메틸-N-(1-((4-(트리플루오로메틸)페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 72.9%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.24 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.87 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.09 (dd, J = 3.6, 2.4 Hz, 1H), 6.55 (dd, J = 3.6, 2.4 Hz, 1H), 5.66-5.58 (m, 1H), 3.74-3.68 (m, 1H), 3.49 (dd, J = 10.4, 8.4 Hz, 1H), 3.40 (dd, J = 10.4, 6.8 Hz, 1H), 3.32 (s, 3H), 3.19-3.12 (m, 1H), 2.26-2.08 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C18H18F3N5O2S + H+) 426.1, found 426.1.
실시예 28. (R)-N- 메틸 -N-(1-(나프탈렌-2- 일설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00037
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 2.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 73.0 mg의 2-나프탈렌설포닐 클로라이드 (2-naphthalenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 112 mg의 (R)-N-메틸-N-(1-(나프탈렌-2-일설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 84.7%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.51 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.04-7.97 (m, 3H), 7.90 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.73-7.53 (m, 2H), 7.00-6.99 (m, 1H), 6.49-6.48 (m, 1H), 5.59-5.50 (m, 1H), 3.74-3.71 (m, 1H), 3.53-3.49 (m, 1H), 3.44-3.40 (m, 1H), 3.28 (s, 3H), 3.22-3.11 (m, 1H), 2.21-2.11 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C21H21N5O2S + H+) 408.2, found 408.1.
실시예 29. (R)-N- 메틸 -N-(1-(피페리딘-1- 일설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00038
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0450 mL의 피페리딘-1-설포닐 클로라이드 (piperidine-1-sulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼으로 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 91.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(1-(피페리딘-1-일설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 77.8%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.57 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.61 (s, 1H), 5.87-5.81 (m, 1H), 3.65-3.59 (m, 2H), 3.40-3.33 (m, 5H), 3.31-3.27 (m, 4H), 2.33-2.10 (m, 2H), 1.69-1.58 (m, 6H).
LRMS (ESI) calcd for (C16H24N6O2S + H+) 365.2, found 365.2.
실시예 30. (R)-N- 메틸 -N-(1-( 모폴리노설폰일 ) 피롤리딘 -3-일)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00039
50 mL 둥근바닥 플라스크에 10.0 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)을 넣고 얼음 저온조에서 냉각시켰다. 0.300 mL의 설푸릴 클로라이드 (SO2Cl2)를 넣었다. 얼음 저온조에서 냉각하면서, 3.0 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)에 213 mg의 모폴린 (morpholine)을 녹인 용액을 천천히 넣었다. 반응혼합물을 520 mg의 트리에틸아민 (trimethylamine)으로 처리했다. 2시간 동안 교반했다. 반응물을 20.0 mL의 클로로폼 (chloroform)에 녹이고, 20.0 mL의 얼음물로 세척했다. 클로로폼 (chloroform) 층을 분리하여 황산 마그네슘 (MgSO4)으로 건조시키고, 필터했다. 필터된 용액을 감압증류했다. 그 결과 160 mg의 모폴린-4-설포닐 클로라이드를 23.3%의 수율로 얻었다.
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0390 mL의 모폴린-4-설포닐 클로라이드 (morpholine-4-sulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0590 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 47.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(1-(모폴리노설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 40.2%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.06 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.11-7.10 (m, 1H), 6.62-6.61 (m, 1H), 5.84-5.76 (m, 1H), 3.78-3.77 (m, 4H), 3.70-3.64 (m, 2H), 3.45-3.29 (m, 9H), 2.36-2.17 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C15H22N6O3S + H+) 367.2, found 367.1.
실시예 31. (S)-3-(3-(메틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노) 피롤리딘 -1-일)-3-옥 소프로판니트 릴
Figure 112015081486502-pat00040
100 mL 둥근바닥 플라스크에 720 mg의 터트-부틸 (S)-(1-벤질피롤리딘-3-일)카바메이트를 넣고, 11.5 mL의 테트라하이드로퓨란 (tetrahydrofuran)을 넣었다. 이후 623 mg의 리튬 알루미늄 하이드라이드 (LiAlH4)를 넣었다. 반응혼합물을 4시간 동안 환류시켰다. 0oC에서 냉각시켰다. 냉각시키면서 1.16 mL의 증류수 (deionized water)를 천천히 넣었다. 5분 동안 교반 후, 1.16 mL의 15% 수산화 나트륨 (NaOH) 수용액을 넣었다. 다시 5분 동안 교반 후, 3.80 mL의 증류수 (deionized water)를 넣어서 반응을 종료시켰다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2:NH4OH=5:90:5). 그 결과 440 mg의 (S)-1-벤질-N-메틸피롤리딘-3-아민을 89.9%의 수율로 얻었다.
25 mL 둥근바닥 플라스크에 440 mg의 (S)-1-벤질-N-메틸피롤리딘-3-아민을 넣고, 9.00 mL의 증류수 (deionized water)를 넣었다. 이후 373 mg의 6-클로로-7-데아자퓨린 (6-chloro-7-deazapurine)을 넣었다. 반응혼합물에 639 mg의 탄산 칼륨 (K2CO3)을 넣었다. 이 혼합물을 36시간 동안 환류시켰다. 36시간 이후 상온에서 냉각시켰다. 반응혼합물을 40.0 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 세 번 추출했다. 모아진 유기층을 감압농축했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 그 결과 544 mg의 (S)-N-(1-벤질피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 76.6%의 수율로 얻었다.
25 mL 둥근바닥 플라스크에 534 mg의 (S)-N-(1-벤질피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 5.00 mL의 메탄올 (methanol)로 용해시켰다. 이후 534 mg의 10w/w% 팔라듐/탄소 (Pd/C)를 넣고, 수소 풍선을 반응 플라스크 위에 장치하였다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 격렬히 교반했다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 필터한 용액을 감압농축했다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 250 mg의 (S)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 66.1%의 수율로 얻었다.
5 mL 둥근바닥 플라스크에 150 mg의 (S)-N-메틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 2.25 mL의 n-부탄올 (n-butanol)로 녹였다. 이 용액에 0.0730 mL의 에틸 시아노아세테이트 (ethyl cyanoacetate)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0520 mL의 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 (DBU)으로 처리했다. 이후 24시간 동안 80oC로 가열했다. 반응을 끝낸 후 반응액을 감압증류하여 용매를 제거했다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 140 mg의 (S)-3-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴을 71.4%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.39 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.12 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 6.60 (s, 1H), 5.89-5.56 (m, 1H), 3.96-3.72 (m, 2H), 3.69-3.49 (m, 2H), 3.46 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.35 (d, J = 14.9 Hz, 3H), 2.40-2.13 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C14H16N6O + H+) 285.2, found 285.1.
실시예 32. (R)-3-((3-((7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노) 피롤리딘 -1-일) 설폰일 ) 벤조니트릴
Figure 112015081486502-pat00041
25 mL 둥근바닥 플라스크에 300 mg의 (3R)-(+)-1-벤질-3-아미노피롤리딘을 넣고, 6.00 mL의 증류수 (deionized water)를 넣었다. 이후 274 mg의 6-클로로-7-데아자퓨린 (6-chloro-7-deazapurine)을 넣었다. 반응혼합물에 470 mg의 탄산 칼륨 (K2CO3)을 넣었다. 이 혼합물을 24시간 동안 환류시켰다. 24시간 이후 상온에서 냉각시켰다. 반응혼합물을 10.0 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 세 번 추출했다. 모아진 유기층을 감압농축했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 그 결과 292 mg의 (R)-N-(1-벤질피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 58.5%의 수율로 얻었다.
25 mL 둥근바닥 플라스크에 294 mg의 (R)-N-(1-벤질피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 4.00 mL의 메탄올 (methanol)로 용해시켰다. 이후 280 mg의 10w/w% 팔라듐/탄소 (Pd/C)를 넣고, 수소 풍선을 반응 플라스크 위에 장치하였다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 격렬히 교반했다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 필터한 용액을 감압농축했다. 잔류물을 컬럼으로 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 191 mg의 (R)-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 94.8%의 수율로 얻었다.
25 mL 둥근바닥 플라스크에 60.0 mg의 (R)-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.50 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 59.6 mg의 3-시아노벤젠설포닐 클로라이드 (3-cyanobenzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0770 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 42.0 mg의 (R)-3-((3-((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴을 38.2%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ11.51 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 8.03 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.06(s, 1H), 6.40 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 4.43-4.39 (m, 1H), 3.53-3.47 (m, 2H), 3.39-3.26 (m, 2H), 2.14-2.05 (m, 1H), 1.96-1.88 (m, 1H).
LRMS (ESI) calcd for (C17H16N6O2S + H+) 369.1, found 369.1.
실시예 33. (R)-3-(3-(에틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노) 피롤리딘 -1-일)-3-옥 소프로판니트 릴
Figure 112015081486502-pat00042
50 mL 둥근바닥 플라스크에 2.00 g의 (R)-1-벤질피롤리딘-3-아민을 넣고, 14.7 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 1.07 mL의 아세트산무수물 (acetic anhydride)을 넣고 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 정제 과정없이 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 2.12 g의 (R)-N-(1-벤질피롤리딘-3-일)아세트아미드를 85.0%의 수율로 얻었다.
100 mL 둥근바닥 플라스크에 2.11 g의 (R)-N-(1-벤질피롤리딘-3-일)아세트아미드를 넣고, 47.6 mL의 테트라하이드로퓨란 (tetrahydrofuran)을 넣었다. 이후 1.61 g의 리튬 알루미늄 하이드라이드 (LiAlH4)를 넣었다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 환류시켰다. 0oC에서 냉각시켰다. 냉각시키면서 2.00 mL의 증류수 (deionized water)를 천천히 넣었다. 5분 동안 교반 후, 1.50 mL의 15% 수산화 나트륨 (NaOH) 수용액을 넣었다. 다시 5분 동안 교반 후, 3.80 mL의 증류수 (deionized water)를 넣어서 반응을 종료시켰다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 그 결과 1.85 g의 (R)-1-벤질-N-에틸피롤리딘-3-아민을 94.0%의 수율로 얻었다.
100 mL 둥근바닥 플라스크에 1.85 g의 (R)-1-벤질-N-에틸피롤리딘-3-아민을 넣고, 46.0 mL의 증류수 (deionized water)를 넣었다. 이후 1.46 g의 6-클로로-7-데아자퓨린 (6-chloro-7-deazapurine)을 넣었다. 반응혼합물에 1.56 g의 탄산 칼륨 (K2CO3)을 넣었다. 이 혼합물을 18시간 동안 환류시켰다. 18시간 이후 상온에서 냉각시켰다. 반응혼합물을 10.0 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 세 번 추출했다. 모아진 유기층을 감압농축했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 그 결과 296 mg의 (R)-N-(1-벤질피롤리딘-3-일)-N-에틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 10.0%의 수율로 얻었다.
25 mL 둥근바닥 플라스크에 296 mg의 (R)-N-(1-벤질피롤리딘-3-일)-N-에틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 9.20 mL의 메탄올 (methanol)로 용해시켰다. 이후 330 mg의 10w/w% 팔라듐/탄소 (Pd/C)를 넣고, 수소 풍선을 반응 플라스크 위에 장치하였다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 격렬히 교반했다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 필터한 용액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 189 mg의 (R)-N-에틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 88.8%의 수율로 얻었다.
5 mL 둥근바닥 플라스크에 117 mg의 (R)-N-에틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 2.10 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0610 mL의 클로로아세틸 클로라이드 (chloroacetyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.223 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼으로 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 96.0 mg의 (R)-2-클로로-1-(3-(에틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)에탄-1-온을 61.0%의 수율로 얻었다.
5 mL 둥근바닥 플라스크에 96.0 mg의 (R)-2-클로로-1-(3-(에틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)에탄-1-온을 넣고, 2.00 mL의 N,N-디메틸폼아미드 (N,N-dimethylformamide)로 녹였다. 이 용액에 40.4 mg의 청산 칼륨 (potassium cyanide)을 넣었다. 그리고 반응혼합물을 1시간 동안 30~40℃에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물에 10.0 mL의 증류수 (deionized water)와 10.0 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)을 넣고 5분간 교반했다. 유기층을 분리하여 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 50.9 mg의 (R)-3-(3-(에틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴을 55.0%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.47 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.15 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 6.53 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.55-5.53 (m, 1H), 4.05-3.90 (m, 2H), 3.83-3.63 (m, 2H), 3.55-3.44 (m, 3H), 2.42-2.27 (m, 3H), 1.42 (q, J = 6.8 Hz, 3H).
LRMS (ESI) calcd for (C15H18N6O + H+) 299.2, found 299.1.
실시예 34. (R)-3-((3-(에틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노) 피롤리딘 -1-일)설폰일) 벤조니트릴
Figure 112015081486502-pat00043
5 mL 둥근바닥 플라스크에 67.0 mg의 (R)-N-에틸-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.45 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 60.5 mg의 3-시아노벤젠설포닐 클로라이드 (3-cyanobenzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0500 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼으로 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 84.3 mg의 (R)-3-((3-(에틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴을 73.3%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.34 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.12 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 7.94 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.45 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.32-5.24 (m, 1H), 3.81-3.63 (m, 4H), 3.38-3.27 (m, 2H), 3.27-2.19 (m, 3H), 1.37 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
LRMS (ESI) calcd for (C19H20N6O2S + H+) 397.1, found 397.1.
실시예 35. (R)-3-(3-(( 시클로프로필메틸 )(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3- 옥소프로판니트릴
Figure 112015081486502-pat00044
100 mL 둥근바닥 플라스크에 2.00 g의 (R)-1-벤질피롤리딘-3-아민을 넣고, 54.0 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.890 mL의 싸이클로프로판카보닐 클로라이드 (cyclopropanecarbonyl chloride)를 넣고 1시간 동안 상온에서 교반했다. 정제 과정없이 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 3.02 g의 (R)-N-(1-벤질피롤리딘-3-일)싸이클로프로판카르복스아미드를 정량적인(quantitative) 수율로 얻었다.
100 mL 둥근바닥 플라스크에 2.77 g의 (R)-N-(1-벤질피롤리딘-3-일)싸이클로프로판카르복스아미드를 넣고, 57.0 mL의 테트라하이드로퓨란 (tetrahydrofuran)을 넣었다. 이후 1.90 g의 리튬 알루미늄 하이드라이드 (LiAlH4)를 넣었다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 환류시켰다. 0oC에서 냉각시켰다. 냉각시키면서 10.0 mL의 증류수 (deionized water)를 천천히 넣었다. 5분 동안 교반 후, 2.00 mL의 15% 수산화 나트륨 (NaOH) 수용액을 넣었다. 다시 5분 동안 교반 후, 10.0 mL의 증류수 (deionized water)를 넣어서 반응을 종료시켰다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 그 결과 1.68 g의 (R)-1-벤질-N-(싸이클로프로필메틸)피롤리딘-3-아민을 64.0%의 수율로 얻었다.
100 mL 둥근바닥 플라스크에 1.68 g의 (R)-1-벤질-N-(싸이클로프로필메틸)피롤리딘-3-아민을 넣고, 40.0 mL의 증류수 (deionized water)를 넣었다. 이후 1.17 g의 6-클로로-7-데아자퓨린 (6-chloro-7-deazapurine)을 넣었다. 반응혼합물에 1.26 g의 탄산 칼륨 (K2CO3)을 넣었다. 이 혼합물을 18시간 동안 환류시켰다. 18시간 이후 상온에서 냉각시켰다. 반응혼합물을 40.0 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 세 번 추출했다. 모아진 유기층을 감압농축했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 그 결과 313 mg의 (R)-N-(1-벤질피롤리딘-3-일)-N-(싸이클로프로필메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 12.4%의 수율로 얻었다.
25 mL 둥근바닥 플라스크에 310 mg의 (R)-N-(1-벤질피롤리딘-3-일)-N-(싸이클로프로필메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 8.90 mL의 메탄올 (methanol)로 용해시켰다. 이후 310 mg의 10w/w% 팔라듐/탄소 (Pd/C)를 넣고, 수소 풍선을 반응 플라스크 위에 장치하였다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 격렬히 교반했다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 필터한 용액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 162 mg의 (R)-N-(싸이클로프로필메틸)-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 70.7%의 수율로 얻었다.
5 mL 둥근바닥 플라스크에 100 mg의 (R)-N-(싸이클로프로필메틸)-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.60 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0470 mL의 클로로아세틸 클로라이드 (chloroacetyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0170 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 72.6 mg의 (R)-2-클로로-1-(3-((싸이클로프로필메틸)(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)에탄-1-온을 56.0%의 수율로 얻었다.
5 mL 둥근바닥 플라스크에 72.0 mg의 (R)-2-클로로-1-(3-((싸이클로프로필메틸)(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)에탄-1-온을 넣고, 1.50 mL의 N,N-디메틸폼아미드 (N,N-dimethylformamide)로 녹였다. 이 용액에 28.7 mg의 청산 칼륨 (potassium cyanide)을 넣었다. 그리고 반응혼합물을 1시간 동안 30~40℃에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물에 10.0 mL의 증류수 (deionized water)와 10.0 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)을 넣고 5분간 교반했다. 유기층을 분리하여 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)로 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 38.4 mg의 (R)-3-(3-((시클로프로필메틸)(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴을 54.0%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.15 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.15 (t, J = 3.6 Hz, 1H), 6.71 (dd, J = 5.6, 3.6 Hz, 1H), 5.37-5.30 (m, 1H), 4.05-3.94 (m, 2H), 3.69-3.53 (m, 4H), 3.48 (d, J = 14.4 Hz, 2H), 2.50-2.30 (m, 2H), 1.23-1.16 (m, 1H), 0.73 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 0.30 (t, J = 4.8 Hz, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C17H20N6O + H+) 325.2, found 325.2.
실시예 36. (R)-3-((3-(( 시클로프로필메틸 )(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노)피롤리딘-1-일) 설폰일 ) 벤조니트릴
Figure 112015081486502-pat00045
5 mL 둥근바닥 플라스크에 62.0 mg의 (R)-N-(싸이클로프로필메틸)-N-(피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.20 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 50.4 mg의 3-시아노벤젠설포닐 클로라이드 (3-cyanobenzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0420 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)로 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 62.2 mg의 (R)-3-((3-((시클로프로필메틸)(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴을 61.0%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.08 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.94 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.75 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.10-5.06 (m, 1H), 3.72-3.61 (m, 4H), 3.52-3.48 (m, 1H), 3.34-3.28 (m, 1H), 2.31-2.25 (m, 2H), 1.17-1.10 (m, 1H), 0.71-0.67 (m, 2H), 0.38-0.35 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C21H22N6O2S + H+) 423.2, found 423.1.
실시예 37. 3-(4-(메틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노)피페리딘-1-일)-3- 옥소프로판니트릴
Figure 112015081486502-pat00046
100 mL 둥근바닥 플라스크에 2.00 g의 4-아미노-1-벤질피페리딘을 넣고, 20.0 mL의 증류수 (deionized water)와 20.0 mL의 포화된 탄산수소 나트륨 (NaHCO3)을 넣었다. 그리고 2.41 g의 디-터트-부틸 디카바메이트 (Boc2O)를 넣었다. 반응혼합물을 4시간 동안 격렬히 교반시켰다. 반응혼합물을 감압농축했다. 그리고 수용액층을 20.0 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)로 추출하였다. 유기층을 15.0 mL의 증류수 (deionized water)와 5.00 mL의 포화 소금물 (brine)로 세척했다. 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 그 결과 3.04 g의 터트-부틸 (1-벤질피페리딘-4-일)카바메이트를 99.7%의 수율로 얻었다.
100 mL 둥근바닥 플라스크에 3.04 g의 터트-부틸 (1-벤질피페리딘-4-일)카바메이트를 넣고, 45.0 mL의 테트라하이드로퓨란 (tetrahydrofuran)을 넣었다. 이후 2.50 g의 리튬 알루미늄 하이드라이드 (LiAlH4)를 넣었다. 반응혼합물을 4시간 동안 환류시켰다. 4시간 뒤 상온에서 냉각시켰다. 냉각시키면서 4.50 mL의 증류수 (deionized water)를 천천히 넣었다. 5분 동안 교반 후, 4.50 mL의 15% 수산화 나트륨 (NaOH) 수용액을 넣었다. 다시 5분 동안 교반 후, 13.5 mL의 증류수 (deionized water)를 넣어서 반응을 종료시켰다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 그 결과 2.22 g의 1-벤질-N-메틸피페리딘-4-아민을 정량적인(quantitative) 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥 플라스크에 1.00 g의 1-벤질-N-메틸피페리딘-4-아민을 넣고, 20.0 mL의 증류수 (deionized water)를 넣었다. 이후 790 mg의 6-클로로-7-데아자퓨린 (6-chloro-7-deazapurine)을 넣었다. 반응혼합물에 1.35 g의 탄산 칼륨 (K2CO3)을 넣었다. 이 혼합물을 24시간 동안 환류시켰다. 24시간 이후 상온에서 냉각시켰다. 반응혼합물을 10.0 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 세 번 추출했다. 모아진 유기층을 감압농축했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 그 결과 607 mg의 N-(1-벤질피페리딘-4-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 38.7%의 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥 플라스크에 350 mg의 N-(1-벤질피페리딘-4-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 7.00 mL의 메탄올 (methanol)과 1.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)로 용해시켰다. 이후 350 mg의 10w/w% 팔라듐/탄소 (Pd/C)를 넣고, 수소 풍선을 반응 플라스크 위에 장치하였다. 반응혼합물을 24시간 동안 격렬히 교반했다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 필터한 용액을 감압농축했다. 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 220 mg의 N-메틸-N-(피페리딘-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 87.7%의 수율로 얻었다.
5 mL 둥근바닥 플라스크에 150 mg의 N-메틸-N-(피페리딘-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.50 mL의 n-부탄올 (n-butanol)로 녹였다. 이 용액에 0.690 mL의 에틸 시아노아세테이트 (ethyl cyanoacetate)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0485 mL의 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 (DBU)으로 처리했다. 이후 24시간 동안 80oC로 가열했다. 반응을 끝낸 후 반응액을 감압증류하여 용매를 제거했다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 6.20 mg의 3-(4-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴을 3.20%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ12.65 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 6.90 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.52 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.08 (s, 2H), 3.81 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.27-3.20 (m, 3H), 2.82-2.75 (m, 1H), 2.03-1.91 (m, 1H), 1.77 (s, 2H), 1.23-1.18 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C15H18N6O + H+) 299.2, found 299.1.
실시예 38. N- 메틸 -N-(1-( 페닐설폰일 )피페리딘-4-일)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-아민
Figure 112015081486502-pat00047
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 N-메틸-N-(피페리딘-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 2.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0400 mL의 벤젠설포닐 클로라이드 (benzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0780 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 50.0 mg의 N-메틸-N-(1-(페닐설폰일)피페리딘-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 45.5%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.97 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.81 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.66 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.03 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.91-4.85 (m, 1H), 3.99 (d, J = 12 Hz, 2H), 3.26 (s, 3H), 2.50-5.45 (m, 2H), 2.04-1.82 (m, 4H).
LRMS (ESI) calcd for (C18H21N5O2S + H+) 372.2, found 372.1.
실시예 39. 3-((4-(메틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노)피페리딘-1-일) 설폰일 ) 벤조니트릴
Figure 112015081486502-pat00048
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 N-메틸-N-(피페리딘-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.50 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 61.0 mg의 3-시아노벤젠설포닐 클로라이드 (3-cyanobenzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0790 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 23.1 mg의 3-((4-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴을 19.6%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.22 (s, 1H), 8.10 (t, J = 1.2 Hz, 1H), 8.05-8.02 (m, 1H), 7.95-7.92 (m, 1H), 7.76 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.62 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.00-4.97 (m, 1H), 4.05-4.02 (m, 3H), 3.34 (s, 2H), 2.58-2.50 (m, 3H), 2.08-1.97 (m, 2H), 1.93 (d, J = 12.0 Hz, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C19H20N6O2S + H+) 397.1, found 397.1.
실시예 40. (R)-3-(3-(메틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노)피페리딘-1-일)-3-옥 소프로판니트 릴
Figure 112015081486502-pat00049
100 mL 둥근바닥 플라스크에 500 mg의 (R)-3-아미노-1-벤질피페리딘을 넣고, 5.00 mL의 증류수 (deionized water)와 5.00 mL의 포화된 탄산수소 나트륨 (NaHCO3)을 넣었다. 그리고 602 mg의 디-터트-부틸 디카바메이트 (Boc2O)를 넣었다. 반응혼합물을 4시간 동안 격렬히 교반시켰다. 반응혼합물을 감압농축했다. 그리고 수용액층을 20.0 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)로 추출하였다. 유기층을 10.0 mL의 증류수 (deionized water)와 15.0 mL의 포화 소금물 (brine)로 세척했다. 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 그 결과 730 mg의 터트-부틸 (R)-(1-벤질피페리딘-3-일)카바메이트를 95.7%의 수율로 얻었다.
100 mL 둥근바닥 플라스크에 730 mg의 터트-부틸 (R)-(1-벤질피페리딘-3-일)카바메이트를 넣고, 12.0 mL의 테트라하이드로퓨란 (tetrahydrofuran)을 넣었다. 이후 601 mg의 리튬 알루미늄 하이드라이드 (LiAlH4)를 넣었다. 반응혼합물을 4시간 동안 환류시켰다. 4시간 뒤 상온에서 냉각시켰다. 냉각시키면서 1.5 mL의 증류수 (deionized water)를 천천히 넣었다. 5분 동안 교반 후, 1.5 mL의 15% 수산화 나트륨 (NaOH) 수용액을 넣었다. 다시 5분 동안 교반 후, 2.0 mL의 증류수 (deionized water)를 넣어서 반응을 종료시켰다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 그 결과 580 mg의 (R)-1-벤질-N-메틸피페리딘-3-아민을 정량적인 (quantitative) 수율로 얻었다.
100 mL 둥근바닥 플라스크에 580 mg의 (R)-1-벤질-N-메틸피페리딘-3-아민을 넣고, 12.0 mL의 증류수 (deionized water)를 넣었다. 이후 458 mg의 6-클로로-7-데아자퓨린 (6-chloro-7-deazapurine)을 넣었다. 반응혼합물에 785 mg의 탄산 칼륨 (K2CO3)을 넣었다. 이 혼합물을 24시간 동안 환류시켰다. 24시간 이후 상온에서 냉각시켰다. 반응혼합물을 10.0 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 세 번 추출했다. 모아진 유기층을 감압농축했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 그 결과 440 mg의 (R)-N-(1-벤질피페리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 48.2%의 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥 플라스크에 438 mg의 (R)-N-(1-벤질피페리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 5.00 mL의 메탄올 (methanol)로 용해시켰다. 이후 400 mg의 10w/w% 팔라듐/탄소 (Pd/C)를 넣고, 수소 풍선을 반응 플라스크 위에 장치하였다. 반응혼합물을 24시간 동안 격렬히 교반했다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 필터한 용액을 감압농축했다. 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 310 mg의 (R)-N-메틸-N-(피페리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 98.4%의 수율로 얻었다.
5 mL 둥근바닥 플라스크에 90.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피페리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.70 mL의 n-부탄올 (n-butanol)로 녹였다. 이 용액에 0.414 mL의 에틸 시아노아세테이트 (ethyl cyanoacetate)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0291 mL의 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 (DBU)으로 처리했다. 이후 24시간 동안 80oC로 가열했다. 반응을 끝낸 후 반응액을 감압증류하여 용매를 제거했다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)로 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 42.0 mg의 (R)-3-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴을 36.2%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.41 (d, J = 84 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.13-7.12 (m, 1H), 6.62-6.59 (m, 1H), 4.79-4.72 (m, 1H), 4.67 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.91-3.55 (m, 3H), 3.38 (s, 2H), 3.27 (s, 1H), 3.12 (q, J = 11.2, 13.2 Hz, 1H), 2.65-2.58 (m, 1H), 2.11-2.08 (m, 1H), 2.02-1.69 (m, 3H).
LRMS (ESI) calcd for (C15H18N6O + H+) 299.2, found 299.1.
실시예 41. (R)-3-((3-(메틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노)피페리딘-1-일)설폰일) 벤조니트릴
Figure 112015081486502-pat00050
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 (R)-N-메틸-N-(피페리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.50 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 64.0 mg의 3-시아노벤젠설포닐 클로라이드 (3-cyanobenzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0790 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)로 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 70.0 mg의 (R)-3-((3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴을 59.3%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.81 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.15 (t, J = 1.2 Hz, 1H), 8.10-8.08 (m, 1H),7.93-7.91 (m, 1H), 7.74 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.11 (q, J = 2.4, 3.6 Hz, 1H), 6.60 (q, J = 1.6, 3.6 Hz, 1H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.06 (dd, J = 4.4, 11.6 Hz, 1H), 3.94 (d, J = 12 Hz, 1H), 3.24 (s, 3H), 2.52 (t, J = 11.2 Hz, 1H), 2.46-2.40 (m, 1H), 2.00-1.94 (m, 1H), 1.93-1.91 (m, 1H), 1.84-1.73 (m, 1H), 1.71-1.67 (m, 1H).
LRMS (ESI) calcd for (C19H20N6O2S + H+) 397.1, found 397.1.
실시예 42. 3-(((3R,4R)-4- 메틸 -3-(메틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노)피페리딘-1-일) 설폰일 ) 벤조니트릴
Figure 112015081486502-pat00051
25 mL 둥근바닥 플라스크에 500 mg의 (3R,4R)-1-벤질-N,4-디메틸피페리딘-3-아민 디히드로클로라이드를 넣고, 5.00 mL의 증류수 (deionized water)를 넣었다. 이후 277 mg의 6-클로로-7-데아자퓨린 (6-chloro-7-deazapurine)을 넣었다. 반응혼합물에 1.08 g의 탄산 칼륨 (K2CO3)을 넣었다. 이 혼합물을 24시간 동안 환류시켰다. 24시간 이후 상온에서 냉각시켰다. 반응혼합물을 10.0 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 세 번 추출했다. 모아진 유기층을 감압농축했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 그 결과 282 mg의 N-((3R,4R)-1-벤질-4-메틸피페리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 48.9%의 수율로 얻었다.
25 mL 둥근바닥 플라스크에 282 mg의 N-((3R,4R)-1-벤질-4-메틸피페리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 3.00 mL의 메탄올 (methanol)로 용해시켰다. 이후 280 mg의 10w/w% 팔라듐/탄소 (Pd/C)를 넣고, 수소 풍선을 반응 플라스크 위에 장치하였다. 반응혼합물을 24시간 동안 격렬히 교반했다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 필터한 용액을 감압농축했다. 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 200 mg의 N-메틸-N-((3R,4R)-4-메틸피페리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 97.1%의 수율로 얻었다.
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 N-메틸-N-((3R,4R)-4-메틸피페리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.50 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 57.0 mg의 3-시아노벤젠설포닐 클로라이드 (3-cyanobenzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0750 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼으로 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 85.9 mg의 3-(((3R,4R)-4-메틸-3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴을 73.4%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.40 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.09-8.08 (m, 1H), 8.03-8.01 (m, 1H), 7.95-7.92 (m, 1H), 7.64 (t, J = 3.6 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.66 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.49 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 3.79 (dd, J = 4.4, 12.4 Hz, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.10 (dd, J = 4.4, 12.4 Hz, 1H), 2.83-2.77 (m, 1H), 2.20-2.11 (m, 1H), 1.92-1.86 (m, 3H), 0.98 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
LRMS (ESI) calcd for (C20H22N6O2S + H+) 411.2, found 411.1.
실시예 43. (R)-3-(3,3-디메틸-4-(메틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노) 피롤리딘 -1-일)-3- 옥소프로판니트릴
Figure 112015081486502-pat00052
100 mL 둥근바닥 플라스크에 6 g의 에틸 아세토아세테이트 (ethyl acetoacetate)를 넣고, 60 mL의 톨루엔 (toluene)으로 녹였다. 이 용액에 4.78 mL의 벤질 알코올 (benzyl alcohol)을 넣었다. 그리고 반응혼합물을 1.21 g의 트리페닐포스핀 (triphenylphosphine)으로 처리했다. 이후 12시간 동안 환류시켰다. 환류를 끝낸 후 반응액을 감압증류하여 용매를 제거했다. 잔류물을 컬럼으로 정제했다 (EtOAc:n-Hexane=1:20). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 6.69 g의 벤질 3-옥소부타노에이트를 75.1%의 수율로 얻었다.
250 mL 둥근바닥 플라스크에 6.69 g의 3-옥소부타노에이트를 넣고, 67.0 mL의 테트라하이드로퓨란 (tetrahydrofuran)으로 용해시켰다. 이후 3.48 g의 소듐 하이드라이드 (sodium hydride, 60wt%)를 0℃에서 넣었다. 반응혼합물을 상온에서 1시간동안 교반시켰다. 1시간 뒤 6.48 mL의 아이오도메탄 (iodomethane)을 0℃에서 넣었다. 반응혼합물을 상온에서 12시간 동안 교반시켰다. 교반을 끝낸 후 반응액을 감압증류하여 용매를 제거했다. 이후 100 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)와 100 mL의 포화 소금물 (brine)과 50 mL의 염화암모늄 (NH4Cl)을 넣고 추출하였다. 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (EtOAc:n-Hexane=1:8). 그 결과 6.91 g의 벤질 2,2-디메틸-3-옥소부타노에이트를 90.1%의 수율로 얻었다.
250 mL 둥근바닥 플라스크에 9.69 g의 2,2-디메틸-3-옥소부타노에이트를 넣고, 195 mL의 벤젠 (benzene)을 넣었다. 이후 4.90 mL의 에틸렌 글라이콜 (ethylene glycol)을 넣는다. 반응혼합물에 0.41 g의 p-톨루엔술폰산 수화물 (p-toluenesulfonic acid monohydrate)을 넣었다. 이 혼합물을 24시간 동안 딘-스탁 트랩 (Dean-Stark trap)을 사용하여 120℃에서 환류시켰다. 환류를 끝낸 후 반응액을 감압증류하여 용매를 제거했다. 이후 100 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)와 200 mL의 포화 소금물 (brine)과 100 mL의 탄산수소 나트륨 (NaHCO3) 포화수용액을 넣고 추출하였다. 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (EtOAc:n-Hexane=1:10). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 9.47 g의 벤질 2-메틸-2-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)프로파노에이트를 81.6%의 수율로 얻었다.
100 mL 둥근바닥 플라스크에 9.47 g의 벤질 2-메틸-2-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)프로파노에이트를 넣고 95.0 mL의 메탄올 (methanol)로 녹였다. 이 용액에 9.47 g의 10w/w% 팔라듐/탄소 (Pd/C)를 넣고, 수소 풍선을 반응 플라스크 위에 장치하였다. 반응혼합물을 24시간 동안 격렬히 교반했다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 필터한 용액을 감압농축했다. 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 5.94 g의 2-메틸-2-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)프로판산을 95.2%의 수율로 얻었다.
100 mL 둥근바닥 플라스크에 5.94 g의 2-메틸-2-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)프로산을 넣고, 53 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)을 넣었다. 이후 9.51 mL의 트리에틸아민 (triethylamine)을 -20℃에서 넣었다. 반응혼합물에 3.59 mL의 에틸 클로로포메이트 (ethyl chloroformate)를 넣고 -20℃에서 40분 동안 교반했다. 이후 -20℃에서 4.78 mL의 (R)-(+)-1-페닐에틸아민 ((R)-(+)-1-phenylethylamine)을 천천히 적가했다. 반응혼합물을 상온에서 12시간 동안 교반했다. 이후 50 mL의 물을 넣고 추출하였다. 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (EtOAc:n-Hexane=1:8). 그 결과 1.89 g의 (R)-2-메틸-2-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)-N-(1-페닐에틸)프로판아미드를 20.0%의 수율로 얻었다.
100 mL 둥근바닥 플라스크에 1.89 g의 (R)-2-메틸-2-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)-N-(1-페닐에틸)프로판아미드를 넣고, 18.0 mL의 디에틸에테르(diethyl ether)와 8.00 mL의 1,4-디옥산 (1,4-dioxane)으로 용해시켰다. 이후 30.0 mL의 1,4-디옥산 (1,4-dioxane)에 0.590 mL의 브롬 (bromine)을 용해시킨 혼합물을 0℃에서 천천히 적가한다. 반응혼합물을 12시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응혼합물을 감압농축하여 용매를 제거했다. 이후 18.0 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)와 18.0 mL의 포화 소금물 (brine)과 18.0 mL의 티오황산 나트륨 (Na2S2O3) 포화용액을 넣고 추출하였다. 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (EtOAc:n-Hexane=1:10). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 2.29 g의 (R)-2-(2-(브로모메틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-2-메틸-N-(1-페닐에틸)프로판아미드를 94.2 %의 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥 플라스크에 2.29 g의 (R)-2-(2-(브로모메틸)-1,3-디옥솔란-2-일)-2-메틸-N-(1-페닐에틸)프로판아미드를 넣고 22.0 mL의 N,N-디메틸폼아미드 (N,N-dimethylformamide)로 용해시켰다. 이후 0.440 g의 소듐 하이드라이드 (sodium hydride, 60wt%)를 0℃에서 넣었다. 반응혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반했다. 반응혼합물에 200 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)와 500 mL의 포화 소금물 (brine)을 넣고 추출하였다. 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (EtOAc:CH2Cl2=1:100). 그 결과 1.07 g의 (R)-9,9-디메틸-7-(1-페닐에틸)-1,4-디옥사-7-아자스피로[4.4]노난-8-온을 60.5%의 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥플라스크에 1.07 g의 (R)-9,9-디메틸-7-(1-페닐에틸)-1,4-디옥사-7-아자스피로[4.4]노난-8-온을 넣고, 11.0 mL의 아세톤 (acetone)을 넣었다. 이후 4.67 mL의 1N 염산 용액 (1N HCl)을 상온에서 넣었다. 반응혼합물을 60℃에서 12시간 동안 환류시켰다. 반응혼합물을 감압농축했다. 그리고 반응혼합물에 50.0 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)와 50.0 mL의 포화 소금물 (brine)을 넣고 추출하였다. 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압농축했다. 그 결과 0.840 g의 (R)-3,3-디메틸-1-(1-페닐에틸)피롤리딘-2,4-디온을 93.2%의 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥 플라스크에 0.840 g의 (R)-3,3-디메틸-1-(1-페닐에틸)피롤리딘-2,4-디온을 넣고, 9.00 mL의 에탄올 (ethanol)을 넣었다. 이후 395 mg의 하이드록시아민 하이드로클로라이드 (hydroxylamine hydrochloride), 0.782 mL의 트리에틸아민 (triethylamine)을 넣었다. 반응혼합물을 상온에서 5시간 동안 교반했다. 반응혼합물을 감압농축했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (EtOAc:CH2Cl2=1:3). 그 결과 730 mg의 (R)-4-(히드록시이미노)-3,3-디메틸-1-(1-페닐에틸)피롤리딘-2-온을 94.1%의 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥 플라스크에 730 mg의 (R)-4-(히드록시이미노)-3,3-디메틸-1-(1-페닐에틸)피롤리딘-2-온을 넣고, 36.5 mL의 메탄올 (methanol)을 넣었다. 이후 1.56 mL의 라니-니켈 (Raney®-nickel)을 넣고, 수소 풍선을 반응 플라스크 위에 장치하였다. 반응혼합물을 12시간 동안 격렬히 교반했다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 필터한 용액을 감압농축했다. 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 그 결과 264 mg의 (R)-4-아미노-3,3-디메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-2-온을 38.4 %의 수율로 얻었고, 300 mg의 (S)-4-아미노-3,3-디메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-2-온을 43.7%의 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥 플라스크에 264 mg의 (R)-4-아미노-3,3-디메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-2-온을 넣고, 13.0 mL의 테트라하이드로퓨란 (tetrahydrofuran)을 넣었다. 이후 189 mg의 리튬 알루미늄 하이드라이드 (LiAlH4)를 0℃에서 천천히 적가하였다. 반응혼합물을 12시간 동안 환류시켰다. 12시간 후 0℃에서 냉각시켰다. 냉각시키면서 1.15 mL의 증류수 (deionized water)를 천천히 넣었다. 5분 동안 교반 후 1.15 mL의 15% 수산화나트륨 (NaOH) 수용액을 넣어 반응을 종료시켰다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 그리고 반응혼합물에 10.0 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)와 10.0 mL의 포화 소금물 (brine)을 넣고 추출하였다. 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압농축했다. 그 결과 240 mg의 (R)-4,4-디메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-3-아민을 96.8%의 수율로 얻었다.
25 mL 둥근바닥 플라스크에 240 mg의 (R)-4,4-디메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-3-아민을 넣고, 2.40 mL의 테트라하이드로퓨란 (tetrahydrofuran)과 2.40 mL의 탄산수소 나트륨 (NaHCO3) 포화 수용액을 넣었다. 이후 252 mg의 디-터트-부틸 디카바메이드 (Boc2O)를 넣었다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 격렬히 교반시켰다. 반응혼합물을 감압농축했다. 그리고 반응혼합물에 5.00 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)와 5.00 mL의 포화 소금물 (brine)을 넣고 추출하였다. 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압농축했다. 그 결과 335 mg의 터트-부틸 ((R)-4,4-디메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-3-일)카바메이트를 95.7%의 수율로 얻었다.
25 mL 둥근바닥 플라스크에 335 mg의 터트-부틸 ((R)-4,4-디메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-3-일)카바메이트를 넣고 5.03 mL의 테트라하이드로퓨란 (tetrahydrofuran)을 넣었다. 이후 252 mg의 리튬 알루미늄 하이드라이드 (LiAlH4)를 0℃에서 천천히 적가하였다. 반응혼합물을 12시간 동안 환류시켰다. 12시간후 0℃에서 냉각시켰다. 냉각시키면서 1.00 mL의 증류수 (deionized water)를 천천히 넣었다. 5분 동안 교반후, 1.00 mL의 15% 수산화나트륨 (NaOH) 수용액을 넣어 반응을 종료시켰다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 여과된 용액을 감압농축했다. 그 결과 238 mg의 (R)-N,4,4-트리메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-3-아민을 97.9%의 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥 플라스크에 238 mg의 (R)-N,4,4-트리메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-3-아민을 넣고, 4.80 mL의 증류수 (deionized water)를 넣었다. 이후 165 mg의 6-클로로-7-데아자퓨린 (6-chloro-7-deazapurine)을 넣었다. 반응혼합물에 284 mg의 탄산 칼륨 (K2CO3)을 넣었다. 이 혼합물을 24시간 동안 환류시켰다. 24시간 이후 상온에서 냉각시켰다. 반응혼합물을 10.0 mL의 디클로로메테인 (CH2Cl2)으로 세번 추출했다. 모아진 유기층을 감압농축했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 그 결과 106 mg의 N-((R)-4,4-디메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 30.7%의 수율로 얻었다.
10 mL 둥근바닥 플라스크에 106 mg의 N-((R)-4,4-디메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.06 mL의 메탄올 (methanol)로 용해시켰다. 이후 106 mg의 10w/w% 팔라듐/탄소 (Pd/C)를 넣고, 수소 풍선을 반응 플라스크 위에 장치하였다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 격렬히 교반했다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 필터한 용액을 감압농축했다. 그 결과 58.2 mg의 (R)-N-(4,4-디메틸피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 79.1%의 수율로 얻었다.
10 mL 둥근바닥 플라스크에 57.0 mg의 (R)-N-(4,4-디메틸피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.14 mL의 n-부탄올 (n-butanol)로 녹였다. 이 용액에 0.247 mL의 에틸 시아노아세테이트 (ethyl cyanoacetate)를 넣었다. 그리고 반응혼합물에 0.0174 mL의 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 (DBU)으로 처리했다. 이후 24시간 동안 80oC로 가열했다. 반응을 끝낸 후 반응액을 감압증류하여 용매를 제거했다. 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 41.4 mg의 (R)-3-(3,3-디메틸-4-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴을 57.1%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.58 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.07 (q, J = 3.6, 5.6 Hz, 1H), 6.61 (q, J = 2.0, 3.6 Hz, 1H), 5.76-5.63 (m, 1H), 4.08-3.97 (m, 1H), 3.87-3.76 (m, 1H), 3.57-3.52 (m, 1H), 3.47 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 3.41-3.35 (m, 1H), 3.34 (d, J = 11.6 Hz, 3H), 1.27 (s, 3H), 1.04 (s, 3H).
LRMS (ESI) calcd for (C16H20N6O + H+) 313.1, found 313.2.
실시예 44. (S)-3-(3,3-디메틸-4-(메틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노) 피롤리딘 -1-일)-3- 옥소프로판니트릴
Figure 112015081486502-pat00053
50 mL 둥근바닥 플라스크에 300 mg의 (S)-4-아미노-3,3-디메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-2-온 (실시예 43 합성시 얻어진 중간체)을 넣고, 15.0 mL의 테트라하이드로퓨란 (tetrahydrofuran)을 넣었다. 이후 215 mg의 리튬 알루미늄 하이드라이드 (LiAlH4)를 0℃에서 천천히 적가하였다. 반응혼합물을 12시간 동안 환류시켰다. 12시간후 0℃에서 냉각시켰다. 냉각시키면서 1.50 mL의 증류수 (deionized water)를 천천히 넣었다. 5분 동안 교반후, 1.50 mL의 15% 수산화나트륨 (NaOH) 수용액을 넣어 반응을 종료시켰다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 그리고 반응혼합물에 10.0 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)와 10.0 mL의 포화 소금물 (brine)을 넣고 추출하였다. 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압농축했다. 그 결과 254 mg의 (S)-4,4-디메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-3-아민을 90.4%의 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥 플라스크에 250 mg의 (S)-4,4-디메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-3-아민을 넣고, 2.50 mL의 테트라하이드로퓨란 (tetrahydrofuran)과 2.50 mL의 탄산수소 나트륨 (NaHCO3) 포화수용액을 넣었다. 이후 262 mg의 디-터트-부틸 디카바메이트 (Boc2O)를 넣었다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 격렬히 교반시켰다. 반응혼합물을 감압농축했다. 그리고 반응혼합물에 3.00 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)와 6.00 mL의 포화 소금물 (brine)을 넣고 추출하였다. 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압농축했다. 그 결과 354 mg의 터트-부틸 ((S)-4,4-디메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-3-일)카바메이트를 96.7%의 수율로 얻었다.
25 mL 둥근바닥 플라스크에 354 mg의 터트-부틸 ((S)-4,4-디메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-3-일)카바메이트를 넣고, 5.30 mL의 테트라하이드로퓨란 (tetrahydrofuran)를 넣었다. 이후 265 mg의 리튬 알루미늄 하이드라이드 (LiAlH4)를 0℃에서 천천히 적가하였다. 반응혼합물을 12시간 동안 환류시켰다. 12시간후 0℃에서 냉각시켰다. 냉각시키면서 1.00 mL의 증류수 (deionized water)를 천천히 넣었다. 5분 동안 교반후 1.00 mL의 15% 수산화나트륨 (NaOH) 수용액을 넣어 반응을 종료시켰다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 여과된 용액을 감압농축했다. 그 결과 247 mg의 (S)-N,4,4-트리메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-3-아민을 96.1%의 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥 플라스크에 247 mg의 (S)-N,4,4-트리메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-3-아민을 넣고, 4.94 mL의 증류수 (deionized water)를 넣었다. 이후 171 mg의 6-클로로-7-데아자퓨린 (6-chloro-7-deazapurine)을 넣었다. 반응혼합물에 293 mg의 탄산 칼륨 (K2CO3)을 넣었다. 이 혼합물을 24시간 동안 환류시켰다. 24시간 이후 상온에서 냉각시켰다. 반응혼합물을 5 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 세번 추출했다. 모아진 유기층을 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 그 결과 97.0 mg의 N-((S)-4,4-디메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 26.2%의 수율로 얻었다.
25 mL 둥근바닥 플라스크에 96.8 mg의 N-((S)-4,4-디메틸-1-((R)-1-페닐에틸)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.00 mL의 메탄올 (methanol)로 용해시켰다. 이후 96.8 mg의 10w/w% 팔라듐/탄소 (Pd/C)를 넣고, 수소 풍선을 반응 플라스크 위에 장치하였다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 격렬히 교반했다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 필터한 용액을 감압농축했다. 그 결과 63.0 mg의 (S)-N-(4,4-디메틸피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 92.6%의 수율로 얻었다.
10 mL 둥근바닥 플라스크에 63.0 mg의 (S)-N-(4,4-디메틸피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민을 넣고, 1.26 mL의 n-부탄올 (n-butanol)로 녹였다. 이 용액에 0.237 mL의 에틸 시아노아세테이트 (ethyl cyanoacetate)를 넣었다. 그리고 반응혼합물에 0.0192 mL의 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 (DBU)으로 처리했다. 이후 24시간 동안 80℃로 가열했다. 반응을 끝낸 후 반응액을 감압증류하여 용매를 제거했다. 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압증류하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 26.3 mg의 (S)-3-(3,3-디메틸-4-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴을 32.8%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.45 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.07 (q, J = 3.2, 5.6 Hz, 1H), 6.61 (q, J = 2.0, 3.6 Hz, 1H), 5.76-5.63 (m, 1H), 4.08-3.97 (m, 1H), 3.89-3.75 (m, 1H), 3.59-3.52 (m, 1H), 3.47 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 3.43-3.35 (m, 1H), 3.34 (d, J = 11.6 Hz, 3H), 1.28 (s, 3H), 1.04 (s, 3H).
LRMS (ESI) calcd for (C16H20N6O + H+) 313.1, found 313.1.
실시예 45. 3-(4-((7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일) 옥시 )피페리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴
Figure 112015081486502-pat00054
100 mL 둥근바닥 플라스크에 2.00 g의 4-하이드록시피페리딘 (4-hydroxypiperidine)을 넣고, 20.0 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)과 20.0 mL의 포화된 탄산수소 나트륨 (NaHCO3)을 넣었다. 그리고 4.32 g의 디-터트-부틸 디카바메이트 (Boc2O)를 넣었다. 반응혼합물을 15시간 동안 격렬히 교반시켰다. 반응혼합물을 감압농축했다. 그리고 수용액층을 20.0 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)로 추출하였다. 유기층을 10.0 mL의 증류수 (deionized water)와 15.0 mL의 포화 소금물 (brine)로 세척했다. 유기층에 황산 나트륨(Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 그 결과 3.871 g의 터트-부틸 4-하이드록시피페리딘-1-카복실레이트를 97.2%의 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥 플라스크에 300 mg의 6-클로로-7-데아자퓨린 (6-chloro-7-deazapurine)을 넣고, 3.75 mL의 N,N-디메틸폼아미드 (N,N-dimethylformamide)를 넣었다. 이후 86.0 mg의 소듐 하이드라이드(sodium hydride, 60wt%)를 0℃에서 넣었다. 반응혼합물을 상온에서 15분 동안 환류시켰다. 15분 뒤 0.403 mL의 2-(트리메틸실릴)에톡시메틸 클로라이드 (2-(trimethylsillyl)ethoxymethyl chloride)를 넣고 30분간 교반했다. 반응혼합물을 감압농축했다. 그리고 반응혼합물을 4.50 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)와 4.50 mL의 증류수 (deionized water)로 추출하였다. 유기층에 황산 마그네슘 (MgSO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 그 결과 534 mg의 4-클로로-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 96.6%의 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥 플라스크에 408 mg의 터트-부틸 4-하이드록시피페리딘-1-카복실레이트를 넣고, 5.60 mL의 디메틸설폭사이드 (DMSO)을 넣었다. 이후 61.4 mg의 소듐 하이드라이드(sodium hydride, 60wt%)를 0℃에서 넣었다. 반응혼합물을 상온에서 1.5시간 동안 환류시켰다. 1.5시간 뒤 4.60 mL의 디메틸설폭사이드 (DMSO)에 용해된 574 mg의 4-클로로-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 천천히 적가했다. 반응혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반했다. 2시간 이후 상온으로 냉각했다. 그리고 반응혼합물을 10.0 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)와 10.0 mL의 증류수 (deionized water)로 추출하였다. 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (EtOAc:Hexane=1:5). 그 결과 457 mg의 터트-부틸 4-((7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)피페리딘-1-카복실레이트를 66.6%의 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥 플라스크에 452 mg의 터트-부틸 4-((7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)피페리딘-1-카복실레이트를 넣고, 5.00 mL의 테트라히드로퓨란 (tetrahydrofuran)을 넣었다. 이후 20.4 mL의 1.0 M 테트라부틸암모늄 플루오라이드 테트라히드로퓨란 용액 (1.0 M tetrabutylammonium fluoride in tetrahydrofuran)을 넣었다. 반응혼합물을 상온에서 5시간 동안 환류시켰다. 5시간 이후 상온으로 냉각했다. 반응혼합물을 감압농축했다. 그리고 반응혼합물을 100 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)와 100 mL의 증류수 (deionized water)로 추출하였다. 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (EtOAc:Hexane=1:6). 그 결과 310 mg의 터트-부틸 4-((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)피페리딘-1-카복실레이트를 95.7%의 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥 플라스크에 310 mg의 터트-부틸 4-((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)피페리딘-1-카복실레이트를 넣고, 6.00 mL의 1,4-디옥산 (1,4-dioxane)을 넣었다. 이후 10.0 mL의 4N 염산 (HCl)를 넣었다. 반응혼합물을 상온에서 2시간 동안 교반시켰다. 그리고 반응혼합물을 20.0 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)를 넣고 10% 암모니아수 (ammonium hydroxide)로 염기화시켰다. 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 그 결과 230 mg의 4-(피페리딘-4-일옥시)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 정량적인 (quantitative) 수율로 얻었다.
25 mL 둥근바닥 플라스크에 177 mg의 4-(피페리딘-4-일옥시)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 넣고, 3.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0480 mL의 클로로아세틸 클로라이드 (chloroacetyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.211 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼으로 정제했다 (EtOAc:Hexane=1:6). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 56.0 mg의 1-(4-((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)피페리딘-1-일)-2-클로로에탄-1-온을 23.5%의 수율로 얻었다.
25 mL 둥근바닥 플라스크에 55.6 mg의 1-(4-((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)피페리딘-1-일)-2-클로로에탄-1-온을 넣고, 1.00 mL의 N,N-디메틸폼아미드 (N,N-dimethylformamide)로 녹였다. 이 용액에 24.3 mg의 청산 칼륨 (potassium cyanide)을 넣고 30~40℃에서 하룻밤 동안 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼으로 정제했다 (EtOAc:Hexane=1:1). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 35.4 mg의 3-(4-((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)피페리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴을 49.4%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ12.03 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.35 (t, J = 3.2 Hz, 1H), 6.47 (q, J = 2.0, 3.6 Hz, 1H), 5.58-5.43 (m , 1H), 4.08 (s, 2H), 3.90-3.86 (m, 1H), 3.63-3.59 (m, 1H), 3.47-3.32 (m, 2H), 2.09-2.00 (m, 2H), 1.82-1.77 (m, 1H), 1.69-1.61 (m, 1H).
LRMS (ESI) calcd for (C14H15N5O2 + H+) 286.1, found 286.1.
실시예 46. 3-((4-((7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일) 옥시 )피페리딘-1-일) 설폰일 ) 벤조니트릴
Figure 112015081486502-pat00055
25 mL 둥근바닥 플라스크에 50.0 mg의 4-(피페리딘-4-일옥시)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 넣고, 1.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 46.0 mg의 3-시아노벤젠설포닐 클로라이드 (3-cyanobenzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0600 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 하룻밤 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼으로 정제했다 (EtOAc:Hexane=1:1). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 27.7 mg의 3-((4-((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)피페리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴을 31.4%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ12.02 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.26-8.21 (m, 2H), 8.11-8.08 (m, 1H), 7.89 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.32 (q, J = 2.4, 2.8 Hz, 1H), 6.30 (q, J = 2.0, 3.2 Hz, 1H), 5.32-5.27 (m, 1H), 3.38-3.50 (m, 2H), 3.01-2.95 (m, 2H), 2.11-2.07 (m, 2H), 1.85-1.77 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C18H17N5O3S + H+) 384.1, found 384.1.
실시예 47. 3-(3-(((7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일) 옥시 ) 메틸 )피페리딘-1-일)-3- 옥소프로판니트릴
Figure 112015081486502-pat00056
100 mL 둥근바닥 플라스크에 1.05 g의 3-피페리딘메탄올 (3-piperidinemethanol)을 넣고, 19.0 mL의 테트라히드로퓨란 (tetrahydrofuran)과 19.0 mL의 포화된 탄산수소 나트륨 (NaHCO3)을 넣었다. 그리고 1.19 g의 디-터트-부틸 디카바메이트 (Boc2O)를 넣었다. 반응혼합물을 48시간 동안 교반시켰다. 그리고 24시간 동안 환류했다. 반응혼합물에 2.53 mL의 트리에틸아민 (triethylamine)을 넣고 1시간 동안 상온에서 교반했다. 그리고 수용액층을 20.0 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)로 추출하였다. 유기층을 10.0 mL의 증류수 (deionized water)와 15.0 mL의 포화 소금물 (brine)로 세척했다. 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 얻어진 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 그 결과 964 mg의 터트-부틸 3-(하이드록시메틸)피페리딘-1-카복실레이트를 49.0%의 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥 플라스크에 307 mg의 6-클로로-7-데아자퓨린 (6-chloro-7-deazapurine)을 넣고, 4.00 mL의 N,N-디메틸폼아미드 (N,N-dimethylformamide)를 넣었다. 이후 132 mg의 소듐 하이드라이드 (sodium hydride, 60wt%)를 0℃에서 넣었다. 반응혼합물을 상온에서 20분 동안 교반시켰다. 20분 뒤 0.370 mL의 2-(트리메틸실릴)에톡시메틸 클로라이드 (2-(trimethylsillyl)ethoxymethyl chloride)를 넣고 상온에서 1시간 동안 교반했다. 반응혼합물을 감압농축했다. 그리고 반응혼합물을 5.00 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)와 5.00 mL의 증류수 (deionized water)로 추출하였다. 유기층에 황산 마그네슘 (MgSO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 그 결과 252 mg의 4-클로로-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 45.0%의 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥 플라스크에 192 mg의 터트-부틸 3-(히드록시메틸)피페리딘-1-카복실레이트를 넣고, 2.50 mL의 디메틸설폭사이드 (DMSO)를 넣었다. 이후 53.4 mg의 소듐 하이드라이드 (sodium hydride, 60wt%)를 0℃에서 넣었다. 반응혼합물을 상온에서 1.5시간 동안 교반시켰다. 1.5시간 뒤 2.00 mL의 디메틸설폭사이드 (DMSO)에 용해된 252 mg의 4-클로로-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 천천히 적가했다. 반응혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반했다. 2시간 이후 상온으로 냉각했다. 그리고 반응혼합물을 10.0 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)와 10.0 mL의 증류수 (deionized water)로 추출하였다. 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 그 결과 282 mg의 터트-부틸 3-(((7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)메틸)피페리딘-1-카복실레이트를 71.0%의 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥 플라스크에 280 mg의 터트-부틸 3-(((7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)메틸)피페리딘-1-카복실레이트를 넣고, 3.00 mL의 테트라히드로퓨란 (tetrahydrofuran)을 넣었다. 이후 2시간에 걸쳐 6.20 mL의 1.0 M 테트라부틸암모늄 플루오라이드 테트라히드로퓨란 용액 (1.0 M tetrabutylammonium fluoride in tetrahydrofuran)을 넣었다. 반응혼합물을 상온에서 24시간 동안 교반시켰다. 24시간 이후 반응혼합물을 감압농축했다. 그리고 반응혼합물을 100 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)와 100 mL의 증류수 (deionized water)로 추출하였다. 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 그 결과 120 mg의 터트-부틸 3-(((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)메틸)피페리딘-1-카복실레이트를 58.0%의 수율로 얻었다.
50 mL 둥근바닥 플라스크에 203 mg의 터트-부틸 3-(((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)메틸)피페리딘-1-카복실레이트를 넣고, 2.00 mL의 1,4-디옥산 (1,4-dioxane)을 넣었다. 이후 4.00 mL의 4N 염산 (HCl)을 넣었다. 반응혼합물을 상온에서 2시간 동안 교반시켰다. 2시간 이후 반응혼합물을 감압증류했다. 그리고 10.0 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)를 넣고 10.0 mL의 10% 암모니아수 (ammonium hydroxide)를 넣어 염기화시켰다 (pH=10). 유기층에 황산 나트륨 (Na2SO4)을 넣고 필터했다. 여과된 용액을 감압증류했다. 그 결과 141 mg의 4-(피페리딘-3-일메톡시)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 61%의 수율로 얻었다.
25 mL 둥근바닥 플라스크에 140 mg의 4-(피페리딘-3-일메톡시)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 넣고, 2.50 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 0.0710 mL의 클로로아세틸 클로라이드(chloroacetyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.250 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 54.9 mg의 1-(3-(((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)메틸)피페리딘-1-일)-2-클로로에탄-1-온을 30.0%의 수율로 얻었다.
5 mL 둥근바닥 플라스크에 54.9 mg의 1-(3-(((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)메틸)피페리딘-1-일)-2-클로로에탄-1-온을 넣고, 1.10 mL의 N,N-디메틸폼아미드 (N,N-dimethylformamide)로 녹였다. 이 용액에 22.4 mg의 청산 칼륨 (potassium cyanide)을 넣었다. 그리고 반응혼합물을 1시간 동안 30~40℃에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물에 5.00 mL의 증류수 (deionized water)와 5.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)을 넣고 5분간 교반했다. 유기층을 분리하여 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 34.4 mg의 3-(3-(((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)메틸)피페리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴을 64.0 %의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ12.03 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 6.54-6.46 (m, 1H), 4.43-4.39 (m, 1H), 4.35-4.26 (m, 2H), 4.06-4.02 (m, 2H), 3.07-3.01 (m, 1H), 2.76-2.67 (m, 2H), 1.98-1.91 (m, 1H), 1.90-1.84 (m, 1H), 1.74-1.66 (m, 1H), 1.45-1.37 (m, 2H).
LRMS (ESI) calcd for (C15H17N5O2 + H+) 300.2, found 300.1.
실시예 48. 3-((3-(((7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일) 옥시 ) 메틸 )피페리딘-1-일) 설폰일 ) 벤조니트릴
Figure 112015081486502-pat00057
25 mL 둥근바닥 플라스크에 32.4 mg의 4-(피페리딘-3-일메톡시)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 넣고, 1.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 녹였다. 이 용액에 30.2 mg의 3-시아노벤젠설포닐 클로라이드 (3-cyanobenzenesulfonyl chloride)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0250 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-diisopropylethylamine)으로 처리했다. 반응혼합물을 1시간 동안 상온에서 교반했다. 감압농축 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=0:100→1:80→1:50). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 30.1 mg의 3-((3-(((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥시)메틸)피페리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴을 54.0%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.45 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 8.00 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.70 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.57 (dd, J = 10.8, 5.2 Hz, 1H), 4.45 (dd, J = 10.8, 8.0 Hz, 1H), 3.92-3.84 (m, 1H), 3.65 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.60-2.55 (m, 1H), 2.45 (t, J = 10.8 Hz, 1H), 2.42-2.34 (m, 2H), 1.90-1.87 (m, 2H), 1.79-1.74 (m, 1H).
LRMS (ESI) calcd for (C19H19N5O3S + H+) 398.1, found 398.1.
실시예 49. 3-((4 aR ,7 aR )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일) 옥타하이드로 -6H-피 롤로[3,4-b]피리 딘-6-일)-3- 옥소프로판니트릴
Figure 112015081486502-pat00058
25 mL 둥근바닥 플라스크에 100 mg의 (R,R)-6-벤질-옥타하이드로-피롤로[3,4-b]피리딘 디히드로클로라이드를 넣고, 2.00 mL의 증류수 (deionized water)를 넣었다. 이후 55.8 mg의 6-클로로-7-데아자퓨린 (6-chloro-7-deazapurine)을 넣었다. 반응혼합물에 191 mg의 탄산 칼륨 (K2CO3)을 넣었다. 이 혼합물을 36시간 동안 환류시켰다. 36시간 이후 상온에서 냉각시켰다. 반응혼합물을 3.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 세 번 추출했다. 모아진 유기층을 감압농축했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 그 결과 93.6 mg의 4-((4aR,7aR)-6-벤질-옥타하이드로-1H-피롤로[3,4-b]피리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 81.4%의 수율로 얻었다.
25 mL 둥근바닥 플라스크에 93.6 mg의 4-((4aR,7aR)-6-벤질-옥타하이드로-1H-피롤로[3,4-b]피리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 넣고, 1.00 mL의 메탄올 (methanol)로 용해시켰다. 이후 40.0 mg의 10w/w% 팔라듐/탄소 (Pd/C)를 넣고, 수소 풍선을 반응 플라스크 위에 장치하였다. 반응혼합물을 24시간 동안 격렬히 교반했다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 필터한 용액을 감압농축했다. 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 60.1 mg의 4-((4aR,7aR)-옥타하이드로-1H-피롤로[3,4-b]피리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 88.4%의 수율로 얻었다.
5 mL 둥근바닥 플라스크에 60.1 mg의 4-((4aR,7aR)-옥타하이드로-1H-피롤로[3,4-b]피리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 넣고, 1.50 mL의 n-부탄올 (n-butanol)로 녹였다. 이 용액에 0.237 mL의 에틸 시아노아세테이트 (ethyl cyanoacetate)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0169 mL의 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 (DBU)으로 처리했다. 이후 24시간 동안 80oC로 가열했다. 반응을 끝낸 후 반응액을 감압증류하여 용매를 제거했다. 잔류물을 컬럼으로 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 50.0 mg의 3-((4aR,7aR)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥타하이드로-6H-피롤로[3,4-b]피리딘-6-일)-3-옥소프로판니트릴을 63.3%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ10.04 (s, 1H), 8.36 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.15-7.12 (m, 1H), 6.58-6.54 (m, 1H), 5.65-5.51 (m, 1H), 4.65-4.57 (m, 1H), 4.01-3.49 (m, 4H), 3.46 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 3.41-3.20 (m, 1H), 2.53-2.39 (m, 1H), 2.01-1.94 (m, 2H), 1.80-1.69 (m, 1H), 1.54-1.42 (m, 1H).
LRMS (ESI) calcd for (C16H18N6O + H+) 311.2, found 311.1.
실시예 50. 3-((4 aS ,7 aS )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일) 옥타하이드로 -6H-피 롤로[3,4-b]피리 딘-6-일)-3- 옥소프로판니트릴
Figure 112015081486502-pat00059
25 mL 둥근바닥 플라스크에 100 mg의 (S,S)-6-벤질-옥타하이드로-피롤로[3,4-b]피리딘 디히드로클로라이드를 넣고, 2.00 mL의 증류수 (deionized water)를 넣었다. 이후 55.8 mg의 6-클로로-7-데아자퓨린 (6-chloro-7-deazapurine)을 넣었다. 반응혼합물에 191 mg의 탄산 칼륨 (K2CO3)을 넣었다. 이 혼합물을 36시간 동안 환류시켰다. 36시간 이후 상온에서 냉각시켰다. 반응혼합물을 3.00 mL의 디클로로메탄 (CH2Cl2)으로 세 번 추출했다. 모아진 유기층을 감압농축했다. 얻어진 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 사용하여 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 그 결과 114 mg의 4-((4aS,7aS)-6-벤질옥타하이드로-1-피롤로[3,4-b]피리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 99.1%의 수율로 얻었다.
25 mL 둥근바닥 플라스크에 114 mg의 4-((4aS,7S)-6-벤질옥타하이드로-1-피롤로[3,4-b]피리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 넣고, 1.50 mL의 메탄올 (methanol)로 용해시켰다. 이후 20.0 mg의 10w/w% 팔라듐/탄소 (Pd/C)를 넣고, 수소 풍선을 반응 플라스크 위에 장치하였다. 반응혼합물을 24시간 동안 격렬히 교반했다. 반응혼합물을 여과제 (filter agent)인 셀라이트 545 (CeliteTM 545) 층을 통해 필터했다. 필터한 용액을 감압농축했다. 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 370 mg의 4-((4aS,7aS)-옥타히드로피롤로[3,4-b]피리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 66.0%의 수율로 얻었다.
5 mL 둥근바닥 플라스크에 70.0 mg의 4-((4aS,7aS)-옥타히드로피롤로[3,4-b]피리딘-1-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 넣고, 1.50 mL의 n-부탄올 (n-butanol)로 녹였다. 이 용액에 0.240 mL의 에틸 시아노아세테이트(ethyl cyanoacetate)를 넣었다. 그리고 반응혼합물을 0.0170 mL의 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 (DBU)으로 처리했다. 이후 12시간 동안 80oC로 가열했다. 반응을 끝낸 후 반응액을 감압증류하여 용매를 제거했다. 잔류물을 컬럼으로 정제했다 (MeOH:CH2Cl2=2:98). 얻어진 분액을 감압농축하고, 진공하에서 농축시켰다. 그 결과 36.0 mg의 3-((4aS,7aS)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥타하이드로-6H-피롤로[3,4-b]피리딘-6-일)-3-옥소프로판니트릴을 56.4%의 수율로 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.28 (s, 1H), 8.37 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.18-7.13 (m, 1H), 6.58-6.54 (m, 1H), 5.66-5.54 (m, 1H), 4.65-4.54 (m, 1H), 4.01-3.49 (m, 4H), 3.46 (d, J = 12.4 Hz, 2H), 3.45-3.38 (m, 1H), 2.52-2.39 (m, 1H), 2.03-1.95 (m, 2H), 1.78-1.71 (m, 1H), 1.54-1.42 (m, 1H).
LRMS (ESI) calcd for (C16H18N6O + H+) 311.2, found 311.1.
실시예 51. (R)-3-(3-(메틸(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)아미노) 피롤리딘 -1-일)-3-옥 소프로판니트 릴 하이드로클로라이드 ( 실시예 1의 염산염 제조)
Figure 112015081486502-pat00060
50 mL 둥근바닥 플라스크에 750 mg의 (R)-3-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴 (실시예 1)을 넣고, 48.0 mL의 무수 테트라하이드로퓨란 (tetrahydrofuran)를 넣었다. 이 혼합물을 투명한 용액이 될 때까지 환류시켰다. 이 용액에 2.77 mL의 디에틸에테르 (diethyl ether)에 녹은 1M 염산용액 (HCl) (Aldrich)을 천천히 적가했다. 5분간 환류시키면서 교반했다. 5분 후 상온으로 냉각시킨 뒤 1시간 동안 교반했다. 반응혼합물을 필터 후, 얻어진 고체를 진공하에서 건조하였다. 그 결과 596 mg의 (R)-3-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴 하이드로클로라이드을 70.7%의 수율로 얻었다.
상기 실시예 1 내지 36의 각 화합물을 정리하면 다음과 같다.
Figure 112015081486502-pat00061
Figure 112015081486502-pat00062
Figure 112015081486502-pat00063

시험예 1: JAK 억제 효과
1. 시험관적 인산화효소 억제 실험법
(1) 인산화효소 희석
인산화효소 (kinase)는 사람 유래 JAK1, JAK2, JAK3 및 TYK2 (Millipore, 독일)를 사용하였으며, 아래에 명시된 각 효소별로 적합한 완충액에 희석한 후 반응시약과 혼합하였다.
(1.1) JAK1 희석 완충액 조성
증류수 (deionized water)에 트리스(히드록시메틸)아미노메탄 (tris(hydroxymethyl)aminomethane: TRIS)과 에틸렌디아민테트라아세트산 (ethylenediaminetetraacetic acid: EDTA)을 각각 20 mM 및 0.2 mM이 되게 용해시키고, 100 mL 기준 100 μL β-메르캅토에탄올, 10 μL Brij-35TM, 및 5 mL 글리세롤을 첨가하여, JAK1 희석 완충액을 제조하였다.
(1.2) JAK2 , JAK3 , 및 TYK2 희석 완충액 조성
증류수 (deionized water)에 3-모르폴리노프로판-1-설폰산 (3-morpholinopropane-1-sulfonic acid: MOPS)과 EDTA를 각각 20 mM 및 1 mM이 되게 용해시키고, 100 mL 기준 100 μL β-메르캅토에탄올, 10 μL Brij-35TM, 5 mL 글리세롤 및 100 mg BSA를 첨가하여, JAK2, JAK3, 및 TYK2 희석 완충액을 제조하였다.
(2) 화합물 준비 및 실험 수행 방법
모든 화합물은 100% DMSO 용액에 50 μM 농도로 용해시킨다. 이렇게 만든 용액을 96-웰 플레이트의 각 웰에서 반응시약과 반응시키는데, 최종 농도는 1 μM이 되게 하였다. 각 인산화효소별 상세 실험법은 아래와 같다.
(2.1) JAK1
25 μL의 반응용액이 포함하는 물질의 최종 농도는 아래 표 1과 같다.
[표 1]
Figure 112015081486502-pat00064
γ-33P-ATP는 비방사능 표지된 ATP (non-radiolabelled ATP) (Sigma 사, Cat. no. A-7699)로부터 제조된 것을 사용하였다. 상온에서 40분 동안 반응시킨 후, 3(v/v)% 인산 용액 5 μL를 첨가하여 반응을 정지시켰다. 반응이 끝난 후 용액 10 μL를 GF/P30 filtermat (PerkinElmerTM, 1450-523)에 점적하고, 5분 동안 75 mM 인산 용액으로 3번 세척하였다. 메탄올 건조를 시행하고 신틸레이션을 측정하였다. 메탄올 건조란 수성 용액 중에 메탄올 (methanol)을 첨가하고 공비 (azeotrope) 효과를 이용하여 건조시키는 것을 나타낸다.
(2.2) JAK2
25 μL의 반응용액이 포함하는 물질의 최종 농도는 하기 표 2와 같다.
[표 2]
Figure 112015081486502-pat00065
γ-33P-ATP는 비방사능 표지된 ATP (non-radiolabelled ATP) (Sigma 사, Cat. no. A-7699)로부터 제조된 것을 사용하였다. 상온에서 40분 동안 반응시킨 후, 3(v/v)% 인산 용액 5 μL를 첨가하여 반응을 정지시켰다. 반응이 끝난 후 용액 10 μL를 GF/P30 filtermat (PerkinElmerTM, 1450-523)에 점적하고, 5분 동안 75 mM 인산 용액으로 3번 세척하였다. 메탄올 건조를 시행하고 신틸레이션을 측정하였다.
(2.3) JAK3
25 μL의 반응용액이 포함하는 물질의 최종 농도는 하기 표 3과 같다.
[표 3]
Figure 112015081486502-pat00066
γ-33P-ATP는 비방사능 표지된 ATP (non-radiolabelled ATP) (Sigma 사, Cat. no. A-7699)로부터 제조된 것을 사용하였다. 상온에서 40분 동안 반응시킨 후, 3(v/v)% 인산 용액 5 μL를 첨가하여 반응을 정지시켰다. 반응이 끝난 후 용액 10 μL를 GF/P30 filtermat (PerkinElmerTM, 1450-523)에 점적하고, 5분 동안 75 mM 인산용액으로 3번 세척하였다. 메탄올 건조를 시행하고 신틸레이션을 측정하였다.
(2.4) TYK2
25 μL의 반응 용액이 포함하는 물질의 최종 농도는 아래의 표 4와 같다.
[표 4]
Figure 112015081486502-pat00067
γ-33P-ATP는 비방사능 표지된 ATP (non-radiolabelled ATP) (Sigma 사, Cat. no. A-7699)로부터 제조된 것을 사용하였다. 상온에서 40분 동안 반응시킨 후, 3(v/v)% 인산 용액 5 μL를 첨가하여 반응을 정지시켰다. 반응이 끝난 후 용액 10 μL를 GF/P30 filtermat (PerkinElmerTM, 1450-523)에 점적하고, 5분 동안 75 mM 인산 용액으로 3번 세척하였다. 메탄올 건조를 시행하고 신틸레이션을 측정하였다.
(2.5) IC 50 값의 측정
실시예 1 내지 48 중 일부 화합물 (예, 실시예 1 및 38)에 대하여는 농도를 달리하여, JAK1, JAK2, JAK3 및 TYK2에 대한 저해 효과를 상기한 방법에 따라 측정하고, IC50 값을 측정하였다. 시험 화합물의 IC50 값은 챙-푸로소프 방법 (Biochem . Pharmacol ., 1973, 22(23), 3099-3108)을 사용하여 화합물의 각 % 억제값으로부터 계산하였다.
(3) 시험 결과
표 5 및 표 6은 실시예 1 내지 48에서 합성된 화합물이 JAK1, JAK2, JAK3 및 TYK2의 인산화 활성을 억제하는 정도를 상기 방법에 따라 측정한 결과를 나타낸다. 표 5 및 표 6에서 실시예 번호는 해당 실시예에서 합성된 화합물을 나타내고, JAK1, JAK2, JAK3 및 TYK2란의 수치는 해당 실시예에서 합성된 화합물 1 μM 농도에서 이들 효소의 인산화 활성에 대한 억제 정도를 백분율로 표시한 것이다. 표 5 및 표 6에서, 음의 수치는 실질적으로 저해 효과가 없다는 것을 나타낸다.
상기 억제 정도는 상기 화합물을 포함하지 않은 음성 대조군 실험에서 얻어진 인산화 활성 대비 해당 실험군에서 측정된 인산화 활성의 감소된 백분율을 나타낸다.
% 억제 = (시험물질 비처리군의 신틸레이션 측정값-시험물질 처리군의 신틸레이션 측정값)/(시험물질 처리군의 신틸레이션 측정값)x100
대조군으로서, Tofacitinib citrate (Hangzhou Tacon Co., Ltd.) 1 μM을 사용하였으며, JAK1, JAK2, JAK3, 및 TYK2에 대한 억제 비율은 각각 99%, 98%, 99% 및 100%이었다.
[표 5]
Figure 112015081486502-pat00068
[표 6]
Figure 112015081486502-pat00069
하기 표 7은 실시예 1 및 38의 화합물의 JAK1, JAK2, JAK3 및 TYK2에 대한 IC50 값을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
[표 7]
Figure 112015081486502-pat00070

시험예 2: 크로톤 오일 유도 염증 모델에 대한 항염증 시험
(1) 동물
ICR 마우스 (6주령, 수컷)를 일본 SLC를 통해 입수하였으며, 12시간 낮/밤 주기 (07:00~19:00)를 지켜 조명을 조정하였고, 온도는 22℃를 유지하며 사료와 음수를 자유롭게 할 수 있게 했다. 사료 제한은 실험 물질 투여 2시간 전에 실시했다.
(2) 크로톤 오일 유도 염증( 귀부종 ) 유발법 ( Croton oil - induced ear edema )
부종 유발 물질인 크로톤 오일 (croton oil, Sigma-Aldrich, Cat # C6719)을 0.2(v/v)%가 되게 아세톤 (acetone, Sigma-Aldrich, Cat # 650501)에 희석하였다. 각 군별 실험동물 개체 몸무게에 따른 실험물질의 투여량을 경구 투여 30분 후 크로톤 오일을 처리하였다. 처리는 크로톤 오일 20 ㎕를 실험동물 우측 귀 안쪽과 바깥쪽에 고르게 도포하였다.
(3) 실험 계획
화합물의 항염증 효능 확인을 위해 크로톤 오일 유도 염증유발 마우스 동물모델에 대한 시험을 실시하였다. 마우스들은 무작위로 각 군당 10마리로 분리하였다. 시험 약물의 항염증효능 확인을 위하여, (2)에서 언급한 바와 같이 음성대조군 및 모든 약물은 크로톤 오일 처리 30분 전에 1회 경구 투여하였다. 투여를 위해 사용한 부형제는 증류수 (deionized water)에 0.45(v/v)% 카복시메틸셀룰로스 (Sigma-Aldrich, Cat # C5678, 증류수 (deionized water)에 0.5(v/v)%로 제조 후 사용)와 10(v/v)% 에탄올이 포함된 수용액을 사용하였다. 음성대조군은 상기 부형제만을 체중 100 g 당 용액 1 mL 기준으로 투여하였고, 양성대조군은 상기 부형제에 인도메타신 (indomethacin) 100 mg/10 mL 함유 용액을 체중 100 g 당 용액 1 mL 기준으로 투여하여 체중 1 kg 당 100 mg 용량이 되게 하였다. 각 시험 약물은 100 mg/10 mL 농도로 준비하여, 이를 각각 체중 100 g 당 용액 1 mL 기준으로 투여하여 체중 1 kg당 100 mg이 되게 하였다. 인도메타신 (indomethacin)은 NSAID (non-steroidal anti-inflammatory drug)계열 약물로 각종 염증, 통증 및 열을 내리는 효능을 나타내며 COX (Cyclooxygenase) 효소 억제를 통해 항염증 효능을 나타낸다.
(4) 염증( 귀부종 ) 모델 시험의 평가
염증 발생 정도는 실험동물 귀의 두께 측정을 통해 확인하였다. 두께는 디지털 외경측정기 (Digimatic micrometer, Mitutoyo corporation, Japan, Cat # MDC-25SB)를 사용하였다. 크로톤 오일 처리 4시간 후 측정을 실시하였다. 크로톤 오일을 처리한 오른쪽 귀와 아세톤만 처리한 왼쪽 귀 두께를 측정하여, 왼쪽 귀 두께 대비 증가한 양을 %로 환산한 결과를 도 1 및 2에 나타내었다.
시험예 3: 약물동력학적 시험( Pharmacokinetic Test )
실시예 1의 화합물의 염산염을 랫트에 경구 및 정맥으로 투여하고, 투여 후 24시간까지 채혈하여 약물동태 프로파일을 분석을 수행하였다. 실시예 49 (실시예 1의 염산염)를 사용하였으며, 토파시티닙 시트레이트를 비교약물로서 사용하였다.
투여용량은 20 mg/kg으로 단회 경구 및 정맥으로 투여하였으며, 채혈 시간당 3마리에서 경정맥으로 채혈하였고, 투여 후 0, 0.25 (15 분), 0.5 (30 분), 1, 2, 4, 6, 12, 24 시간에 각각 채혈을 실시하여, 약물 농도를 측정하였다. 그 결과 얻어진 약물동력학적 프로파일을 하기 표 8에 나타내었다
[표 8]
Figure 112015081486502-pat00071
상기 시험 결과에 따르면, 약물의 반감기가 길수록 투여간격은 길어질 수 있으므로, 본 발명에 따른 화합물은 종래 토파시티닙에 비해 투여간격을 현저히 늘릴 수 있어 약물의 복약순응도를 증가시킬 수 있는 장점이 있다.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로, 상기 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.
<110> Yang Ji Chemical Co., Ltd. <120> Janus kinase 1 selective inhibitors and their pharmaceutical use <130> PN107705KR <160> 4 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> JAK1 substrate <400> 1 Gly Glu Glu Pro Leu Tyr Trp Ser Phe Pro Ala Lys Lys Lys 1 5 10 <210> 2 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> JAK2 substrate <400> 2 Lys Thr Phe Cys Gly Thr Pro Glu Tyr Leu Ala Pro Glu Val Arg Arg 1 5 10 15 Glu Pro Arg Ile Leu Ser Glu Glu Glu Gln Glu Met Phe Arg Asp Phe 20 25 30 Asp Tyr Ile Ala Asp Trp Cys 35 <210> 3 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> JAK3 substrate <400> 3 Gly Gly Glu Glu Glu Glu Tyr Phe Glu Leu Val Lys Lys Lys Lys 1 5 10 15 <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TYK2 substrate <400> 4 Gly Gly Met Glu Asp Ile Tyr Phe Glu Phe Met Gly Gly Lys Lys Lys 1 5 10 15

Claims (12)

  1. 화학식 1의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체로서,
    [화학식 1]
    Figure 112017039453242-pat00078

    상기 화학식 1에서,
    R1은 수소, C1-2 알킬, 또는 시클로프로필메틸이고;
    R2는 2-시아노아세틸, 2-시아노에틸, 부틸, 2-아지도아세틸, 3-메틸부타노일, 이소부톡시카르보닐, 아닐리노카르보닐, 메틸설폰일, (트리플루오로메틸)설폰일, 에틸설폰일, 프로필설폰일, 이소프로필설폰일, (1-메틸-1H-이미다졸-4-일)설폰일, 페닐설폰일, (2-플루오로페닐)설폰일, (3-플루오로페닐)설폰일, (4-플루오로페닐)설폰일, (2-시아노페닐)설폰일, (3-시아노페닐)설폰일, (4-시아노페닐)설폰일, (2-니트로페닐)설폰일, (3-니트로페닐)설폰일, (4-니트로페닐)설폰일, m-톨릴설폰일, 토실, (4-메톡시페닐)설폰일, ((4-트리플루오로메틸)페닐)설폰일, 나프탈렌-2-일설폰일, 피페리딘-1-일설폰일, 또는 모폴리노설폰일이다.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 화학식 1의 화합물은
    (R)-3-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴;
    (R)-3-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로판니트릴;
    (R)-N-(1-부틸피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-2-아지도-1-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)에탄-1-온;
    (R)-3-메틸-1-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)부탄-1-온;
    이소부틸 (R)-3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-카르복실레이트;
    (R)-3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)-N-페닐피롤리딘-1-카르복스아미드;
    (R)-N-메틸-N-(1-(메틸설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-N-메틸-N-(1-((트리플루오로메틸)설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-N-(1-(에틸설폰일)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-N-메틸-N-(1-(프로필설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-N-(1-(이소프로필설폰일)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-N-메틸-N-(1-((1-메틸-1H-이미다졸-4-일)설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-N-메틸-N-(1-(페닐설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-N-(1-((2-플루오로페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-N-(1-((3-플루오로페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-N-(1-((4-플루오로페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-2-((3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴;
    (R)-3-((3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴;
    (R)-4-((3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴;
    (R)-N-메틸-N-(1-((2-니트로페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-N-메틸-N-(1-((3-니트로페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-N-메틸-N-(1-((4-니트로페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-N-메틸-N-(1-(m-톨릴설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-N-메틸-N-(1-토실피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-N-(1-((4-메톡시페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-N-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-N-메틸-N-(1-((4-(트리플루오로메틸)페닐)설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-N-메틸-N-(1-(나프탈렌-2-일설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-N-메틸-N-(1-(피페리딘-1-일설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (R)-N-메틸-N-(1-(모폴리노설폰일)피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민;
    (S)-3-(3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴;
    (R)-3-((3-((7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴;
    (R)-3-(3-(에틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴;
    (R)-3-((3-(에틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴;
    (R)-3-(3-((시클로프로필메틸)(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴; 또는
    (R)-3-((3-((시클로프로필메틸)(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)설폰일)벤조니트릴인
    화학식 1의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체.
  3. 화학식 2의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체로서,
    [화학식 2]
    Figure 112017039453242-pat00079

    상기 화학식 2에서,
    X는 질소 또는 산소이고,
    --- 은 상기 X가 질소일 경우 단일결합이고, 상기 X가 산소일 경우 존재하지 않고,
    R1은 메틸이고, R2는 1-(2-시아노아세틸)-3,3-디메틸피롤리딘-4-일이거나,
    R1 및 R2가 X와 함께 6-(2-시아노아세틸)옥타하이드로-6H-피롤로-[3,4-b]피리딘-1-일을 형성한다.
  4. 청구항 3에 있어서, 상기 화학식 2의 화합물은
    (R)-3-(3,3-디메틸-4-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴;
    (S)-3-(3,3-디메틸-4-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴;
    3-((4aR,7aR)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥타하이드로-6H-피롤로[3,4-b]피리딘-6-일)-3-옥소프로판니트릴; 또는
    3-((4aS,7aS)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)옥타하이드로-6H-피롤로[3,4-b]피리딘-6-일)-3-옥소프로판니트릴인
    화학식 2의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체.
  5. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체를 포함하는, 동종이식거부, 대 숙주 질환, 동종 이식 거부 반응, 및 이식편대숙주병으로 구성된 군에서 선택된 면역체계 기능장애, 설사, 접촉성 피부염, 천식, 음식 알러지, 아토피성 피부염, 및 비염으로 구성된 군에서 선택된 면역반응, 자가면역질환, 바이러스성 질환, 또는 암 치료용 약학 조성물.
  6. 삭제
  7. 청구항 5에 있어서, 상기 자가면역질환은 다발성 경화증, 류마티스성 관절염, 소아 관절염, 유형 I 당뇨병, 루푸스, 건선, 염증성 장 질환, 크론병 또는 자가면역 갑상선 질환이고, 상기 바이러스성 질환은 엡스타인 바 바이러스(EBV), B형 간염, C형 간염, HIV, HTLV 1, 수두, 대상포진 바이러스(VZV) 또는 인간 유두종 바이러스(HPV) 질환이고, 상기 암은 전립선암, 림프종, 백혈병 또는 다발성 골수종인 것인 약학적 조성물.
  8. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체를 야누스 키나제(JAK)와 접촉시켜 JAK의 활성을 억제하는 단계를 포함하는 JAK의 활성을 억제하는 방법으로서, 인 비트로 또는 사람이 아닌 포유동물에서 수행되는 것인 방법.
  9. 청구항 8에 있어서, JAK1의 활성을 JAK2의 활성에 대해 선택적으로 억제하는 것인 JAK의 활성을 억제하는 방법.
  10. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 그의 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체를 치료학적으로 유효한 양으로 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 사람이 아닌 포유동물에서 동종이식거부, 대 숙주 질환, 동종 이식 거부 반응, 및 이식편대숙주병으로 구성된 군에서 선택된 면역체계 기능장애, 설사, 접촉성 피부염, 천식, 음식 알러지, 아토피성 피부염, 및 비염으로 구성된 군에서 선택된 면역반응, 자가면역질환, 바이러스성 질환, 또는 암 을 치료하는 방법.
  11. 삭제
  12. 청구항 10에 있어서, 상기 자가면역질환은 다발성 경화증, 류마티스성 관절염, 소아 관절염, 유형 I 당뇨병, 루푸스, 건선, 염증성 장 질환, 크론병 또는 자가면역 갑상선 질환이고, 상기 바이러스성 질환은 엡스타인 바 바이러스(EBV), B형 간염, C형 간염, 수두, 또는 대상포진 바이러스(VZV)이고, 상기 암은 전립선암, 림프종, 백혈병 또는 다발성 골수종인 것인 방법.
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