KR101704772B1 - IkBα와 RPS6KA2의 상호작용 저해제를 유효성분으로 포함하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 IkBα와 RPS6KA2의 상호작용을 통해 스크리닝한 화합물을 포함하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로 보다 바람직하게는 IkBα와 RPS6KA2의 결합을 억제하는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 방법은 화학식 1로 표시되는 화합물을 포함하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물이암 세포를 사멸시키는 것을 통해 암을 치료하는 데에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

IkBα와 RPS6KA2의 상호작용 저해제를 유효성분으로 포함하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical composition comprising small-molecule inhibitors of IkBαand RPS6KA2 interaction for preventing and treating cancer}

본 발명은 IkBα와 RPS6KA2의 상호작용 저해제를 유효성분으로 포함하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로 보다 바람직하게는 IkBα와 RPS6KA2의 결합을 억제하는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

IkBα(nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor, alpha) 단백질은 NF-κB의 활성을 저해하는 제어소단위의 한 종류이다. IkBα는 NF-kB의 핵위치신호(NLS) 부위에 결합하여 핵위치신호 부위를 가림으로써 NF-kB가 세포질 내에서 불활성화 상태로 유지되도록 한다. 또한 IkBα는 NF-kB의 번역 인자가 NF-kB이 기능하기 위해 필요한 DNA에 결합하는 것을 막는다. IkBα 단백질은 몇몇 호킨스 림프종 세포에서 IkBα 단백질 돌연변이가 발견되었다. 이 돌연변이는 IkBα를 불활성화 하여 NF-kB가 만성적으로 활성화되도록 한다. 하여 림프종 종양이 악성 종양으로의 발병과 직접적 연관이 있는 것으로 보고되었다(Cabannes E et al, Oncogene 18 (20): 306370).

RPS6KA2 (Ribosomal protein S6 kinase alpha-2) 단백질은 인간 RPS6KA2 유전자에 코딩되는 효소이다. 이 유전자는 세린과 트레오닌 카이네이즈의 RPS6KA2(ribosomal S6 kinase)군의 한 종류이다. RPS6KA2는 2개의 서로 다른 효소적 도메인과 미토겐 활성 카이네이즈(MAPK) 신호 전달 경로를 포함하는 인산화 기질을 포함한다(Moller DE et al., Am J Physiol 266: C3519). 또한 RPS6KA2는 세포 성장 및 분화 조절 활성을 가진다. 함께 상호작용 하는 단백질로는 MAPK3, MAPK1이 알려져 있다(Roux, Philippe P et al., Mol. Cell. Biol. 23 (14): 4796804).

세포들의 성장, 분화, 이동, 죽음 등은 단백질-단백질, 단백질-핵산 등의 고분자 물질들간의 상호작용(interaction)에 의해 이루어진다. 세포 외부의 신호는 세포막의 수용체를 통과하여 세포질내에서 여러 생화학적 반응을 통해 세포의 핵 내로 전달되며, 거기서 특정 유전자들을 발현시킨다. 이러한 외부 신호의 세포내 전달과정은 여러 단계의 단백질간 상호작용에 의해 이루어진다.

단백질간의 상호작용(interaction)은 세포 내에서 다양한 신호 전달 경로 및 대사, 전사 네트워크를 매개하는 기능적인 핵심단위며 특정 조직, 발생학적 과정 및 외부자극 등에 반응하여 특이적으로 전사가 일어나도록 조절한다. 이는 세포기능을 위한 기본적인 생명현상이며 정상세포나 병든 세포 모두 이러한 기본적인 생명현상을 유지한다. 이때 외부물질의 침입 또는 내부 활성 단백질의 유전적 변이 등에 의해 특정 단백질간의 상호작용이 변경, 억제, 촉진 등 비정상적으로 일어나게 된 것이 병(disorder)의 원인이라고 할 수 있다. 따라서 이러한 상호작용을 조절할 수 있는 물질은 곧 그에 기인된 병에 대한 치료의 방법을 제공할 수 있으므로 이에 관한 연구가 계속되어 왔다.

현재까지 알려진 연구 방법으로 교차결합 (crosslinking), 친화크로마토그래피 (affinity chromatography), 면역침강법 (immunoprecipitation, IP) 등의 전통적인 in vitro 방법들이 사용되고 있으나 이들 방법들은 단백질의 생산과 분리/정제 과정이 요구되며 시험관내의 완충액의 조건과 추출된 단백질의 2차적인 변형 등의 문제점이 있어 생체내에서 일어나는 실제 상호작용과 상이한 정보를 제공할 수 있다는 단점을 가지고 있다. 이를 보완하기 위해 세포내에서 직접 수행하는 이스트 투 하이브리드 (yeast two hybrid, Y2H), 형광공명에너지전이 (fluorescence resonance energy transfer, FRET), 분할 단백질의 재결합(bimolecular fluorescence complementation, Bi-FC) 방법들이 개발되어 사용되고 있다.

본 연구진은 단백질 인산화효소 C(protein kinase C) 이동모듈, 제1표지물질 및 목적물질이 포함된 제1구성물과 제2표지물질 및 표적물질이 포함된 제2구성물을 세포내에서 발현시켜 그 발현된 목적물질과 표적물질의 상호작용 여부를 확인할 수 있는 시스템을 개발하여 특허 등록을 받은 바 있다(등록번호 : 10-0948767). 이 시스템은 단백질 간의 상호작용을 확인할 수 있다는 점에서 유용한 실험 방법을 제시하였다. 또한 본 시스템을 이용한 IkBα와 RPS6KA2의 상호작용을 통해 치료제 후보물질을 스크리닝하는 방법 및 스크리닝한 화합물을 개발하여 특허 등록을 받은 바 있다(등록번호 : 10-2015-0104959). 하지만 본 시스템을 통해 암 치료제 후보물질을 스크리닝하여 추가적인 화합물을 연구할 필요가 있다.

이에 본 발명자들은 IkBα와 RPS6KA2의 상호작용을 확인하는 시스템을 토대로 IkBα와 RPS6KA2의 결합 억제 유무에 따른 암 치료제 스크리닝 방법을 통하여 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

<화학식 1>

(상기 화학식에서 R1은 탄소수 1 내지 6인 알킬 또는 할로겐 치환된 페닐 그룹이고, R2는 수소 또는 탄소수 1 내지 6인 알킬 그룹이고, R3는 할로겐 또는 탄소수 1 내지 6인 알콕시 그룹이고, R4는

,

및

으로 이루어진 그룹에서 선택된다.)

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

<화학식 1>

(상기 화학식에서 R1은 탄소수 1 내지 6인 알킬 또는 할로겐 치환된 페닐 그룹이고, R2는 수소 또는 탄소수 1 내지 6인 알킬 그룹이고, R3는 할로겐 또는 탄소수 1 내지 6인 알콕시 그룹이고, R4는

,

및

으로 이루어진 그룹에서 선택된다.)

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

<화학식 1>

(상기 화학식에서 R1은 탄소수 1 내지 6인 알킬 또는 할로겐 치환된 페닐이고, R2는 수소 또는 탄소수 1 내지 6인 알킬이고, R3는 할로겐 또는 탄소수 1 내지 6인 알콕시이고, R4는

,

및

으로 이루어진 그룹에서 선택된다.)

보다 바람직하게는 상기 화학식에서 R1은 메틸 또는 파라-치환 플루오르화페닐(p-fluorophenyl)이고, R2는 수소 또는 메틸이고, R3는 브롬 또는 메톡시이고 R4는

,

및

으로 이루어진 그룹에서 선택된다.

본 발명에서 ‘알킬(알킬기, alkyl group)’은 1개 내지 6개의 탄소 원자를 포함하는, 직쇄 또는 측쇄일 수 있는 지방족 탄화수소 그룹을 의미한다. 바람직한 알킬 그룹은 상기 쇄 내에 약 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 탄소 원자를 포함한다. 측쇄는 하나 이상의 저급 알킬 그룹, 예를 들면, 메틸, 에틸 또는 프로필이 선형 알킬 쇄에 부착되어 있는 것을 의미한다. "저급 알킬"은 직쇄 또는 측쇄일 수 있는 쇄 내에 약 1개 내지 약 6개의 탄소 원자를 갖는 그룹을 의미한다. "알킬"은 치환되지 않을 수 있거나 또는, 동일하거나 또는 상이할 수 있는 하나 이상의 치환체에 의해 임의로 치환될 수 있고,각 치환체는 할로겐, 알킬, 아릴, 사이클로알킬, 시아노, 하이드록시, 알콕시, 알킬티오, 아미노, 카르복시 등일 수 있다. 바람직하게 알킬은 부틸 또는 이소부틸일 수 있다. 본 발명에서‘메틸(메틸기, methyl group)’는 탄소 원자 1개에 수소 원자 3개가 결합한 구조로 가장 작은 알킬기이다. 이 메틸기는 음이온, 양이온, 유리기라는 세 가지 형태로 존재할 수 있다.

본 발명의 상기 ‘페닐(페닐기, phenyl group)’은 탄소와 수소로 이루어진 작용기로 -C₆H₅의 화학식을 가지며 6개의 탄소 원자가 순환 고리 구조를 이루며 배열되어 있다. 페닐기는 매우 안정적이며 방향족 탄화수소의 일종으로 많은 유기 화합물에서 발견된다. 페닐기를 포함하는 가장 단순한 화합물은 페놀(C₆H₅OH)로, 하이드록시기가 결합된 구조이다. 또한 상기 ‘할로겐 치환 페닐 그룹’은 페닐고리의 오쏘(ortho), 메타(meta), 파라(para)위치의 수소가 할로겐 원소로 치환된 그룹인 것을 의미하고, 상기 ‘파라-치환 플루오르화페닐(p-fluorophenyl)’은 페닐고리의 파라 위치에 할로겐 원소 중 하나인 플루오르(F)가 결합한 작용기이다.

본 발명의 ‘할로겐’은 불소 원자, 염소 원자, 브롬 원자 및 요오드 원자를 포함할 수 있고, 바람직하게는 불소 원자, 염소 원자 또는 브롬 원자일 수 있다.

본 발명의 상기 ‘알콕시 그룹(알콕시기, alkoxy group)’은 산소와 결합된 알킬기, 즉 알킬-O-그룹을 의미한다. 적합한 알콕시 그룹의 예로는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시 및 n-부톡시를 포함한다. 모 잔기에 대한 결합은 산소를 통한다. 바람직하게는 알콕시는 메톡시일 수 있다.

한편, 본 발명은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

<화학식 2>

또한, 본 발명은 하기 화학식 3으로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

<화학식 3>

또한, 본 발명은 하기 화학식 4로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

<화학식 4>

본 발명의 일실시예에서는 본 발명의 발명자들에 의해 개발된 상호작용 검출에 의한 스크리닝 시스템에 의해서 IkBα와 RPS6KA2의 상호작용을 억제하는 화합물을 화합물 라이브러리의 스크리닝을 통해서 스크리닝하였으며, 그 결과로 상기 화학식 2, 화학식 3 및 화학식 4의 화합물이 IkBα와 RPS6KA2의 상호작용을 억제하는 것을 확인하였다.

본 발명에서 사용하는 "상호작용"이라는 용어는 IkBα와 RPS6KA2 두 단백질이 직접적으로 결합하여 IkBα와 RPS6KA2의 기능을 저해하는 것을 의미한다.

본 발명에서 사용하는 "상호작용 억제"라는 용어는 IkBα와 RPS6KA2 간의 상호작용을 억제, 경감, 제거하는 것을 모두 포함한다. 상호작용 저해에는 IkBα와 RPS6KA2 상호간의 작용 자체를 저해할 수도 있으나 IkBα 또는 RPS6KA2의 활성을 감소시켜 상호간의 결합을 저해하는 것도 포함된다.

본 발명의 다른 실시예에서는 동물세포에 IkBα와 RPS6KA2를 발현시켜 상기 화학식 2로 표시되는 화합물(화합물 2) 또는 화학식 4로 표시되는 화합물(화합물 4)을 처리하였을 때 단백질간의 상호작용이 감소하는 것을 알 수 있었다(도 1 참조).

본 발명의 또 다른 실시예에서는 상기 화학식 2로 표시되는 화합물(화합물 2) 또는 화학식 3으로 표시되는 화합물(화합물 3)을 위암 세포주(AGS), 대장암 세포주(HCT116), 자궁암 세포주(Hela), 유방암 세포주(MCF-7), 간암 세포주(HepG2), 폐암 세포주(A549)에 처리하였을 때 세포의 생존율이 감소하는 것을 알 수 있었다(도 2 참조).

본 발명의 또 다른 실시예에서는 화학식 4로 표시되는 화합물(화합물 4)을 대장암 세포주(HCT116)에 처리하였을 때 암 세포의 생존율이 감소하는 것을 알 수 있었다(도 2 참조).

따라서, 본 발명의 화합물은 암세포의 사멸을 유도하고, 이의 증식을 억제하여 항암 효과를 나타내며 암 예방 및 치료제의 제조에 이용될 수 있다.

본 발명에서 사용하는 "항암"이라는 용어는 암의 성장을 억제하거나 예방하는 것을 의미한다. "암의 성장을 억제하거나 예방한다"는 것은 치료하거나 처리하지 않았을 때와 비교시에 암의 성장 및 암전이를 감소시키는 것을 포함하는 개념이다.

본 발명에서 암은 이에 제한되지는 않으나, 유방암, 대장암, 폐암, 소세포폐암, 위암, 간암, 혈액암, 골암, 췌장암, 피부암, 두부 또는 경부암, 피부 또는 안구내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부근암, 결장암, 유방암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암, 질암, 음문암종, 호지킨병, 식도암, 소장암, 내분비선암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 방광암, 신장 또는 수뇨관 암, 신장세포 암종, 신장골반 암종, CNS 종양, 1차 CNS 림프종, 척수 종양, 뇌간신경교종 및 뇌하수체 선종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 한다.

보다 바람직하게는 본 발명에서의 암은 위암, 대장암, 자궁암, 유방암, 간암 및 폐암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.

본 발명의 일실시예에서는 위암 세포주, 대장암 세포주, 자궁암 세포주, 유방암 세포주, 간암 세포주, 폐암 세포주에서 화합물 2 내지 화합물 4의 치료 효과가 있는 것을 알 수 있다(도 2 참조).

본 발명의 조성물은 상기 본 발명의 스크리닝 방법에 의해 스크리닝 된 물질 또는 그 물질의 약제학적으로 허용되는 담체의 유효량을 포함한다. 본 명세서에서 용어 “유효량”은 암의 치료 효능을 발휘하는 데 충분한 양을 의미한다.

본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 탄수화물류 화합물 (예: 락토스, 아밀로스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 셀룰로스, 등), 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 염 용액, 알코올, 아라비아 고무, 식물성 기름 (예: 옥수수 기름, 목화 종자유, 두유, 올리브유, 코코넛유), 폴리에틸렌 글리콜, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시 벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

“약학적으로 허용되는”이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 활성성분의 작용을 저해하지 않으며 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 비독성의 조성물을 말한다. 본 발명의 약학적 조성물은 암 예방 및/또는 치료의 효과를 내기 위해 약학적으로 허용되는 담체와 함께 당업계에 공지된 방법으로 투여경로에 따라 다양하게 제형화될 수 있다. 상기 담체로는 모든 종류의 용매, 분산매질, 수중유 또는 유중수 에멀젼, 수성 조성물, 리포좀, 마이크로비드 및 마이크로좀이 포함된다.

본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 투여 경로로는 경구적 또는 비경구적으로 투여될 수 있다. 비경구적인 투여방법으로는 이에 한정되지는 않으나 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장내 투여일 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 적합한 1일 투여량은, 0.0001-100 mg/kg(체중)이다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 암 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

본 발명의 상기 “치료”란 특정 질병 또는 장애 증상을 개선시키는 것을 지칭하고, 이는 이러한 장애를 치유하거나, 장애 발병을 실질적으로 예방하거나, 또는 대상체의 상태를 개선시키는 것을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "치료"는 환자를 고통스럽게 하는 소정의 장애에 대한 전 스펙트럼의 치료를 지칭하는데, 이에는 해당 장애로부터 비롯된 한 가지 증상 또는 대부분의 증상을 완화시키거나, 특정 장애를 치유하거나, 또는 장애 발병을 예방하는 것이 포함된다.

따라서 본 발명은 IkBα와 RPS6KA2의 상호작용을 통해 스크리닝한 화합물을 포함하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다. 더욱 상세하게는 IkBα와 RPS6KA2의 결합을 억제하는 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 암 예방 및 치료용 조성물을 제공한다. 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물을 포함하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물은 암 세포 생존율을 낮추는 점에서 암 치료제로서 유용하게 이용될 수 있다.

도 1은 화학식 2로 표시되는 화합물(화합물 2), 화학식 3으로 표시되는 화합물(화합물3) 및 화학식 4로 표시되는 화합물(화합물 4)의 IkBα와 RPS6KA2의 상호결합에 미치는 영향을 확인하기 위해 발광효소(luciferase) 활성을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 2는 화학식 2로 표시되는 화합물 2와 화학식 3으로 표시되는 화합물 3 또는 화학식 4로 표시되는 화합물 4의 항암효능을 위암 세포주 AGC(도 2A, B), 대장암 세포주 HCT116(도 2C, D, E), 자궁암 세포주 Hela(도 2F, G), 유방암 세포주 MCF-7(도 2H, I), 간암 세포주 HepG2(도 2J, K), 그리고 폐암 세포주 A549(도 2L, M)에서 측정한 그래프이다(가로축 : 화합물 농도(μM), 세로축 : 세포독성(대조군에 대한 %)).
도 3은 TMD-mRFP-IkBα(제1구성물)과 EGFP-RPS6KA2(제2구성물)을 HEK293T 에 동일한 방법으로 과발현 시키고 화학식 2로 표시되는 화합물 2와 화학식 3으로 표시되는 화합물 3 또는 화학식 4로 표시되는 화합물 4를 각각 50 을 3시간씩 처리하였다. 그 후 1 의 외부자극을 3분간 처리하여 두 단백질의 결합 억제를 실시간으로 분석한 사진이다(초록색: 제1구성물, 빨간색: 제2구성물).

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1>

동물세포주 및 형질전환

<1-1> 동물세포주 및 이의 배양

본 발명에서의 실험은 CHO-K1(ATCC CCL-61, Cricetulus griseus, hamster, chinese), HEK293(ATCC CRL-1573, Homo sapiens, Human), HCT116(ATCC CCL-347, Homo sapiens, human), Hela(ATCC, Homo sapiens, human), MCF-7(ATCC HTB-22, Homo sapiens, human), AGS(ATCC CRL-1739, Homo sapiens, human), A549 (ATCC CCL-185 Homo sapiens, human), HepG2 (ATCC HB-8065, HepG2, Homo sapiens, human) 세포주를 사용하였다. 본 발명에 사용된 동물세포주의 배양조건은 각 세포주의 분양기관인 ATCC(American Type Culture Collection)사의 세포주 배양방법을 이용하였다. 단, CHO-k1과 AGS는 F-12 배양액을 사용하였고, HEK293, HCT116, Hela와 MCF-7은 DMEM high glucose 배양액을 사용하였고, A549, HepG2 세포주는 RPMI 1640 배양액을 사용하였으며 기타 배양조건은 동일하게 사용하였다. 한편, 각 세포들의 공통적인 배양방법은 다음과 같다(목적에 따라 세부적인 배양 조건은 달라질 수 있다): 25 mM HEPES, 10% FBS(fetal bovine serum, v/v), 100 units/ml 페니실린, 100 ug/ml 스트렙토마이신이 들어있는 pH7.4의 배양액(F-12 및 DMEM) 속에서 각 세포주를 온도 37℃, CO₂ 분압 5%가 유지되는 배양기에서 배양하였다.

<1-2> 세포주의 형질전환

본 발명의 실시예에서 사용된 세포내 유전자 도입방법은 일반적으로 사용되는 리포좀-기반 방법 중의 하나인 Fugene HD (Promega)을 사용하였으며, 유전자의 농도 등 유전자 도입을 위한 모든 조건은 제조사의 지침을 따라 수행하였다. 보다 구체적으로는 6-플레이트에 커버슬립을 넣고 세포를 하루 동안 배양한 후, 페니실린과 스트렙토마이신, FBS가 없는 2 ml의 신선한 배양액으로 교환하였다. 약 1 μg 정도의 형질전환 시료들을 0.1 ml의 페니실린과 스트렙토마이신, FBS가 없는 배양액에 첨가한 후 완전히 섞고 3 μl의 Fugene HD 시약을 첨가하여 섞어주었다. 이 용액을 상온에서 15분간 놓아둔 후 세포가 자라고 있는 커버슬립이 들어있는 6-플레이트의 각 웰(well)에 첨가하여 4시간 동안 배양 한 뒤 FBS를 200 μl 넣고 18시간 형질전환 되도록 하였다.

<실시예 2>

제1구성물 및 제2구성물의 디자인 및 제작

<2-1> 제1구성물의 설계 및 제작

본 발명에서 제1구성물이란 세포질에서 고르게 발현되어 있는 단백질이 신호물질을 처리하였을 때 세포막으로 이동할 수 있는 모듈(이동모듈)을 포함하며, 이들 현미경을 이용하여 분석할 수 있는 적색형광단백질이 표지되어 결합되어 있고 마지막으로 목적물질이 결합될 수 있는 융합서열로 구성된다. 제1구성물은 TMD-mRFP-empty 벡터에 IkBα 및 RPS6KA2를 제한효소 EcoRI/KpnI (IkBα) 및 EcoRI/XmaI (RPS6KA2)를 이용하여 제작하였다. TMD-mRFP-empty 벡터는 서열번호 5로 표시되는 Protein Kinase C mutant(TMD)와 서열번호 7로 표시되는 mRFP를 포함하는 벡터이다.

IkBα는 주형으로 pcDNA3.1-IkBα 벡터 (NCBI Reference Sequence: NM_020529.2; purchased from Mediscov Inc)를 사용하고, 서열번호 1 및 서열번호 2의 프라이머를 사용하여 PCR을 수행하여 제조하였다. 또한, RPS6KA2는 주형으로 pPTB7-RPS6KA2 벡터 (GenBank : BC002363)를 사용하고, 서열번호 3 및 서열번호 4의 프라이머를 사용하여 PCR을 수행하였다. 프라이머를 사용하여 PCR 증폭한 후 수득물을 pTMD-mRFP-C3 벡터의 EcoRI/KpnI (IkBα) 및 EcoRI/XmaI (RPS6KA2)위치에 삽입하여 제작하였다.

<2-2> 제2구성물의 설계 및 제작

제2구성물이란 제1구성물에 결합된 목적물질과 결합하는 내재적인 특성을 가진 표적물질의 이동을 분석하기 위한 표지물을 포함한다. 제2구성물은 제1구성물에 포함된 표지와 다른 형광인 녹색형광단백질(EGFP)을 이용한다. 제2구성물은 기존에 등록된 특허 (등록번호: 10-1217718)의 EFRP-C3 벡터(clontech)에 IkBα 및 RPS6KA2를 제한효소 EcoRI/KpnI (IkBα) 및 EcoRI/XmaI (RPS6KA2)를 이용하여 제작하였다.

IkBα는 주형으로 pcDNA3.1-IkBα 벡터 (NCBI Reference Sequence: NM_020529.2; purchased from Mediscov Inc)를 사용하고, 서열번호 1 및 서열번호 2의 프라이머를 사용하여 PCR을 수행하여 제조하였다. 또한, RPS6KA2는 주형으로 pPTB7-RPS6KA2 벡터 (GenBank : BC002363)를 사용하고, 서열번호 3 및 서열번호 4의 프라이머를 사용하여 PCR을 수행하였다. 프라이머를 사용하여 PCR 증폭한 후 수득물을 pTMD-mRFP-C3 벡터의 EcoRI/KpnI (IkBα) 및 EcoRI/XmaI (RPS6KA2)위치에 삽입하여 제작하였다.

<실시예 3>

IkBα과 RPS6KA2의 결합을 억제하는 화합물 스크리닝

상기 스크리닝 방법을 이용하여 상기에서 제조한 제1구성물 및 제2구성물을 6-플레이트 내에 HEK293T세포가 자라고 있는 커버슬립(coverslip)에 형질전환 하였다. 그 후 IkBα 단백질과 RPS6KA2 단백질 결합 억제제 후보물질을 3시간동안 처리하였다. 커버슬립(coverslip)을 유체기(perfusion chamber)에 고정시켜 공초점 레이저형광 현미경(칼자이스 LSM710)의 제물대에 장착하고 외부 자극 전과 외부자극(1μM PMA(Phorbol ester) 후의 구성물 벡터들에 대한 영상을 획득하였다.

그 결과, IkBα 단백질과 RPS6KA2 단백질의 상호작용을 억제하는 하기 화학식 2 내지 4로 표시되는 화합물을 스크리닝 하였다.

<화학식 2>

<화학식 3>

<화학식 4>

또한 도 3에서 보듯이, 상기 화합물의 IkBα 단백질과 RPS6KA2 단백질의 결합 저해 효과를 분석하였을 때, 상기 화합물에 의해 IkBα 단백질과 RPS6KA2 단백질이 결합하지 못하고 이동모듈 및 IkBα를 반영하는 적색형광은 세포막으로 이동하였으나 RPS6KA2 단백질을 반영하는 녹색형광은 그대로 세포질에 위치하였음을 확인하였다. 따라서 상기 화학식 2 내지 4로 표시되는 화합물이 IkBα와 RPS6KA2의 결합을 저해하는 저해제로 사용될 수 있다는 것을 보여준다.

<실시예 4>

발광효소를 이용하여 세포에서 단백질 혼합 분석

단백질간의 상호결합에 상기 방법으로 스크리닝된 화합물이 미치는 영향을 확인하기 위해 Mammalian two hybrid assay를 시험하였다 96-플레이트에 발광효소(luciferase) 벡터인 pG5-Luc, IkBα와 RPS6KA2로 형질전환시킨 세포를 하루 동안 배양한 후 10, 25 μM의 화합물 2, 화합물 3 및 화합물 4를 처리하고, 다른 웰에 25, 50 μM의 억제제(등록번호: 10-2015-0104959)를 처리하였다. 24, 48시간 배양한 뒤 배양액을 제거하고 상온에서 10분간 luciferase lysis buffer 50μl를 첨가하였다. Dual Glo kit를 이용하여 luciferase 활성을 측정하였다.

그 결과 도 1에서 보듯이, 화합물을 처리하지 않은 것과 비교했을 때, 화학식 2로 표시되는 화합물(화합물 2)을 처리한 것에서 luciferase 활성이 더 낮은 것으로 나타났다. 그리고 화학식 3으로 표시되는 화합물(화합물 3) 및 화학식 4로 표시되는 화합물(화합물 4)에서도 luciferase 활성이 더 낮은 것으로 나타났다. 즉, 상기 방법으로 스크리닝된 화학식 2 내지 화학식 4로 표시되는 화합물은 IkBα와 RPS6KA2의 결합을 억제한다는 것을 보여주었다.

<실시예 5>

스크리닝된 화합물의 암세포에 대한 세포독성 측정

발명의 실시예에서 사용된 화합물의 세포독성은 일반적으로 사용되는 CCK8 키트 (Dojindo Molecular Technologies)를 사용하였으며 모든 조건은 제조사의 지침을 따라 수행하였다. 보다 구체적으로 96-플레이트에 세포를 하루 동안 배양한 후 10, 50, 100 μM의 화합물을 처리하고 24, 48 시간 배양한 뒤 CCK8 용액을 10 μl 넣고 한 시간 뒤 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과 도 2에서 보듯이, 위암 세포주 AGS(도 2A, B) 및 대장암 세포주 HCT116(도 2C-E), 자궁암 세포주 Hela(도 2F, G), 유방암 세포주 MCF-7(도 2H, I), 간암 세포주 HepG2(도 2J, K), 그리고 폐암 세포주 A549(도 2L, M)에서 세포독성을 측정한 결과 IkBα와 RPS6KA2의 상호작용을 저해하는 화합물에 의해 이들 암세포의 세포사멸이 증가하였다.

<제제예> 약학적 제제의 제조

1. 산제의 제조

본 발명에 따른 화학식 1의 화합물 2 g

유당 1 g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

2. 정제의 제조

본 발명에 따른 화학식 1의 화합물 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유 당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

3. 캡슐제의 제조

본 발명에 따른 화학식 1의 화합물 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유 당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

4. 환의 제조

본 발명에 따른 화학식 1의 화합물 1 g

유당 1.5 g

글리세린 1 g

자일리톨 0.5 g

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1환 당 4 g이 되도록 제조하였다.

5. 과립의 제조

본 발명에 따른 화학식 1의 화합물 150 ㎎

대두추출물 50 ㎎

포도당 200 ㎎

전분 600 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 30 % 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 섭씨 60 ℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.

이상 살펴본 바와 같이 본 발명은 IkBα와 RPS6KA2의 상호작용을 통해 스크리닝한 화합물을 포함하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다. 더욱 상세하게는 IkBα와 RPS6KA2의 결합을 억제하는 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 암 예방 및 치료용 조성물을 제공한다. 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물을 포함하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물은 암 세포 생존율을 낮추는 점에서 암을 치료하는 데에 유용하게 이용될 수 있다.

<110> KOREA BASIC SCIENCE INSTITUTE <120> Pharmaceutical composition comprising small molecule inhibitors of IkBa and RPS6KA2 interaction for preventing and treating cancer <130> NP15-0076 <160> 8 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IkBa-Forward <400> 1 tggaattcat gttccaggcg gccgagcgcc cc 32 <210> 2 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IkBa-Reverse <400> 2 atggtacctc ataacgtcag acgctggcct cc 32 <210> 3 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RSK3-Forward <400> 3 gctgaattct gatggacctg agcatgaaga ag 32 <210> 4 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RSK3-Reverse <400> 4 gctcccgggc tacaaccgcg tggacgtgag 30 <210> 5 <211> 2028 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Protein Kinase C mutant(TMD) - DNA <400> 5 atggcgccgt tcctgcgcat cgccttcaac tcctatgagc tgggctccct gcaggccgag 60 gacgaggcga accagccctt ctgtgccgtg aagatgaagg aggcgctcag cacagagcgt 120 gggaaaacac tggtgcagaa gaagccgacc atgtatcctg agtggaagtc gacgttcgac 180 gcccacatct atgaggggcg cgtcatccag attgtgctaa tgcgggcagc agaggagcca 240 gtgtctgagg tgaccgtggg tgtgtcggtg ctggccgagc gctgcaagaa gaacaatggc 300 aaggctgagt tctggctgga cctgcagcct caggccaagg tgttgatgtc tgttcagtat 360 ttcctggagg acgtggattg caaacagtct atgcgcagtg aggacgaggc caagttccca 420 acgatgaacc gccgcggagc catcaaacag gccaaaatcc actacatcaa gaaccatgag 480 tttatcgcca ccttctttgg gcaacccacc ttctgttctg tgtgcaaaga ctttgtctgg 540 ggcctcaaca agcaaggcta caaatgcagg caatgtaacg ctgccatcca caagaaatgc 600 atcgacaaga tcatcggcag atgcactggc accgcggcca acagccggga cactatattc 660 cagaaagaac gcttcaacat cgacatgccg caccgcttca aggttcacaa ctacatgagc 720 cccaccttct gtgaccactg cggcagcctg ctctggggac tggtgaagca gggattaaag 780 tgtgaagact gcggcatgaa tgtgcaccat aaatgccggg agaaggtggc caacctctgc 840 ggcatcaacc agaagctttt ggctgaggcc ttgaaccaag tcacccagag agcctcccgg 900 agatcagact cagcctcctc agagcctgtt gggatatttc agggtttcga gaagaagacc 960 ggagttgctg gggaggacat gcaagacaac agtgggacct acggcaagat ctgggagggc 1020 agcagcaagt gcaacatcaa caacttcatc ttccacaagg tcctgggcaa aggcagcttc 1080 gggaaggtgc tgcttggaga gctgaagggc agaggagagt actttgccat cagggccctc 1140 aagaaggatg tggtcctgat cgacgacgac gtggagtgca ccatggttga gaagcgggtg 1200 ctgacacttg ccgcagagaa tccctttctc acccacctca tctgcacctt ccagaccaag 1260 gaccacctgt tctttgtgat ggagttcctc aacggggggg acctgatgta ccacatccag 1320 gacaaaggcc gctttgaact ctaccgtgcc acgttttatg ccgctgagat aatgtgtgga 1380 ctgcagtttc tacacagcaa gggcatcatt tacagggacc tcaaactgga caatgtgctg 1440 ttggaccggg atggccacat caagattgcc gactttggga tgtgcaaaga gaacatattc 1500 ggggagagcc gggccagcac cttctgcggc acccctgact atatcgcccc tgagatccta 1560 cagggcctga agtacacatt ctctgtggac tggtggtctt tcggggtcct tctgtacgag 1620 atgctcattg gccagtcccc cttccatggt gatgatgagg atgaactctt cgagtccatc 1680 cgtgtggaca cgccacatta tccccgctgg atcaccaagg agtccaagga catcctggag 1740 aagctctttg aaagggaacc aaccaagagg ctgggagtga cgggaaacat caaaatccac 1800 cccttcttca agaccataaa ctggactctg ctggaaaagc ggaggttgga gccacccttc 1860 aggcccaaag tgaagtcacc cagagactac agtaactttg accaggagtt cctgaacgag 1920 aaggcgcgcc tctcctacag cgacaagaac ctcatcgact ccatggacca gtctgcattc 1980 gctggcttct cctttgtgaa ccccaaattc gagcacctcc tggaagat 2028 <210> 6 <211> 676 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Protein Kinase C mutant(TMD) - protein <400> 6 Met Ala Pro Phe Leu Arg Ile Ala Phe Asn Ser Tyr Glu Leu Gly Ser 1 5 10 15 Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asn Gln Pro Phe Cys Ala Val Lys Met 20 25 30 Lys Glu Ala Leu Ser Thr Glu Arg Gly Lys Thr Leu Val Gln Lys Lys 35 40 45 Pro Thr Met Tyr Pro Glu Trp Lys Ser Thr Phe Asp Ala His Ile Tyr 50 55 60 Glu Gly Arg Val Ile Gln Ile Val Leu Met Arg Ala Ala Glu Glu Pro 65 70 75 80 Val Ser Glu Val Thr Val Gly Val Ser Val Leu Ala Glu Arg Cys Lys 85 90 95 Lys Asn Asn Gly Lys Ala Glu Phe Trp Leu Asp Leu Gln Pro Gln Ala 100 105 110 Lys Val Leu Met Ser Val Gln Tyr Phe Leu Glu Asp Val Asp Cys Lys 115 120 125 Gln Ser Met Arg Ser Glu Asp Glu Ala Lys Phe Pro Thr Met Asn Arg 130 135 140 Arg Gly Ala Ile Lys Gln Ala Lys Ile His Tyr Ile Lys Asn His Glu 145 150 155 160 Phe Ile Ala Thr Phe Phe Gly Gln Pro Thr Phe Cys Ser Val Cys Lys 165 170 175 Asp Phe Val Trp Gly Leu Asn Lys Gln Gly Tyr Lys Cys Arg Gln Cys 180 185 190 Asn Ala Ala Ile His Lys Lys Cys Ile Asp Lys Ile Ile Gly Arg Cys 195 200 205 Thr Gly Thr Ala Ala Asn Ser Arg Asp Thr Ile Phe Gln Lys Glu Arg 210 215 220 Phe Asn Ile Asp Met Pro His Arg Phe Lys Val His Asn Tyr Met Ser 225 230 235 240 Pro Thr Phe Cys Asp His Cys Gly Ser Leu Leu Trp Gly Leu Val Lys 245 250 255 Gln Gly Leu Lys Cys Glu Asp Cys Gly Met Asn Val His His Lys Cys 260 265 270 Arg Glu Lys Val Ala Asn Leu Cys Gly Ile Asn Gln Lys Leu Leu Ala 275 280 285 Glu Ala Leu Asn Gln Val Thr Gln Arg Ala Ser Arg Arg Ser Asp Ser 290 295 300 Ala Ser Ser Glu Pro Val Gly Ile Phe Gln Gly Phe Glu Lys Lys Thr 305 310 315 320 Gly Val Ala Gly Glu Asp Met Gln Asp Asn Ser Gly Thr Tyr Gly Lys 325 330 335 Ile Trp Glu Gly Ser Ser Lys Cys Asn Ile Asn Asn Phe Ile Phe His 340 345 350 Lys Val Leu Gly Lys Gly Ser Phe Gly Lys Val Leu Leu Gly Glu Leu 355 360 365 Lys Gly Arg Gly Glu Tyr Phe Ala Ile Arg Ala Leu Lys Lys Asp Val 370 375 380 Val Leu Ile Asp Asp Asp Val Glu Cys Thr Met Val Glu Lys Arg Val 385 390 395 400 Leu Thr Leu Ala Ala Glu Asn Pro Phe Leu Thr His Leu Ile Cys Thr 405 410 415 Phe Gln Thr Lys Asp His Leu Phe Phe Val Met Glu Phe Leu Asn Gly 420 425 430 Gly Asp Leu Met Tyr His Ile Gln Asp Lys Gly Arg Phe Glu Leu Tyr 435 440 445 Arg Ala Thr Phe Tyr Ala Ala Glu Ile Met Cys Gly Leu Gln Phe Leu 450 455 460 His Ser Lys Gly Ile Ile Tyr Arg Asp Leu Lys Leu Asp Asn Val Leu 465 470 475 480 Leu Asp Arg Asp Gly His Ile Lys Ile Ala Asp Phe Gly Met Cys Lys 485 490 495 Glu Asn Ile Phe Gly Glu Ser Arg Ala Ser Thr Phe Cys Gly Thr Pro 500 505 510 Asp Tyr Ile Ala Pro Glu Ile Leu Gln Gly Leu Lys Tyr Thr Phe Ser 515 520 525 Val Asp Trp Trp Ser Phe Gly Val Leu Leu Tyr Glu Met Leu Ile Gly 530 535 540 Gln Ser Pro Phe His Gly Asp Asp Glu Asp Glu Leu Phe Glu Ser Ile 545 550 555 560 Arg Val Asp Thr Pro His Tyr Pro Arg Trp Ile Thr Lys Glu Ser Lys 565 570 575 Asp Ile Leu Glu Lys Leu Phe Glu Arg Glu Pro Thr Lys Arg Leu Gly 580 585 590 Val Thr Gly Asn Ile Lys Ile His Pro Phe Phe Lys Thr Ile Asn Trp 595 600 605 Thr Leu Leu Glu Lys Arg Arg Leu Glu Pro Pro Phe Arg Pro Lys Val 610 615 620 Lys Ser Pro Arg Asp Tyr Ser Asn Phe Asp Gln Glu Phe Leu Asn Glu 625 630 635 640 Lys Ala Arg Leu Ser Tyr Ser Asp Lys Asn Leu Ile Asp Ser Met Asp 645 650 655 Gln Ser Ala Phe Ala Gly Phe Ser Phe Val Asn Pro Lys Phe Glu His 660 665 670 Leu Leu Glu Asp 675 <210> 7 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> mRFP - DNA <400> 7 tggaattcat gttccaggcg gccgagcgcc cc 32 <210> 8 <211> 225 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mRFP - protein <400> 8 Met Ala Ser Ser Glu Asp Val Ile Lys Glu Phe Met Arg Phe Lys Val 1 5 10 15 Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Glu Ile Glu Gly Glu 20 25 30 Gly Glu Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Thr Ala Lys Leu Lys Val 35 40 45 Thr Lys Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ala Trp Asp Ile Leu Ser Pro Gln 50 55 60 Phe Gln Tyr Gly Ser Lys Ala Tyr Val Lys His Pro Ala Asp Ile Pro 65 70 75 80 Asp Tyr Leu Lys Leu Ser Phe Pro Glu Gly Phe Lys Trp Glu Arg Val 85 90 95 Met Asn Phe Glu Asp Gly Gly Val Val Thr Val Thr Gln Asp Ser Ser 100 105 110 Leu Gln Asp Gly Glu Phe Ile Tyr Lys Val Lys Leu Arg Gly Thr Asn 115 120 125 Phe Pro Ser Asp Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Thr Met Gly Trp Glu 130 135 140 Ala Ser Thr Glu Arg Met Tyr Pro Glu Asp Gly Ala Leu Lys Gly Glu 145 150 155 160 Ile Lys Met Arg Leu Lys Leu Lys Asp Gly Gly His Tyr Asp Ala Glu 165 170 175 Val Lys Thr Thr Tyr Met Ala Lys Lys Pro Val Gln Leu Pro Gly Ala 180 185 190 Tyr Lys Thr Asp Ile Lys Leu Asp Ile Thr Ser His Asn Glu Asp Tyr 195 200 205 Thr Ile Val Glu Gln Tyr Glu Arg Ala Glu Gly Arg His Ser Thr Gly 210 215 220 Ala 225

Claims (6)

1. 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물;
   
   <화학식 1>
   

   

   
   [상기 화학식에서
   R1은 탄소수 1 내지 6인 알킬 또는 할로겐 치환된 페닐이고,
   R2는 수소 또는 탄소수 1 내지 6인 알킬이고,
   R3는 할로겐 또는 탄소수 1 내지 6인 알콕시이고,
   R4는

   

   ,

   

   및

   

   으로 이루어진 그룹에서 선택
   된 것이다.]
   
2. 제1항에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 상기 화학식 1에서
   R1은 메틸 또는 파라-치환 플루오르화페닐(p-fluorophenyl)이고,
   R2는 수소 또는 메틸이고,
   R3는 브롬 또는 메톡시이고
   R4는

   

   ,

   

   및

   

   으로 이루어진 그룹에서 선택
   된 것을 특징으로 하는 조성물. ]
   
3. 제1항에 있어서, 상기 화합물은 화학식 2로 표시되는 것을 특징으로 하는 조성물.
   
   <화학식 2>
   

   

   
   
4. 제1항에 있어서, 상기 화합물은 화학식 3으로 표시되는 것을 특징으로 하는 조성물.
   
   <화학식 3>
   

   

   
   
5. 제1항에 있어서, 상기 화합물은 화학식 4로 표시되는 것을 특징으로 하는 조성물.
   
   <화학식 4>
   

   

   
   
6. 제1항에 있어서, 상기 암은 유방암, 대장암, 폐암, 소세포폐암, 위암, 간암, 혈액암, 골암, 췌장암, 피부암, 두부 또는 경부암, 피부 또는 안구내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부근암, 결장암, 유방암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암, 질암, 음문암종, 호지킨병, 식도암, 소장암, 내분비선암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 방광암, 신장 또는 수뇨관 암, 신장세포 암종, 신장골반 암종, CNS 종양, 1차 CNS 림프종, 척수 종양, 뇌간신경교종 및 뇌하수체 선종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 조성물.
   

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