KR101621948B1 - 항비만 활성을 갖는 생약 추출물 및 이의 제조방법 - Google Patents

항비만 활성을 갖는 생약 추출물 및 이의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 건강(Zingiberis Rhizoma) 에탄올 및 에탄올 수용액 추출물과 당 성분이 제거된 지방축적억제 또는 비만 예방 및 치료용 조성물로 이뤄지는 의약 조성물에 관한 것으로, 건강에서 지방세포 분화 및 지방축적을 억제하는 활성 분획을 효율적으로 추출하는 방법과 본 추출물의 비만 예방 및 억제 효과에 관한 것이다. 본 발명에 의한 건강 에탄올 추출물 또는 당성분이 제거된 추출물은 기존의 비만치료제에서 나타나는 러 가지 부작용이 없고, 독성이 없는 비만 질환의 예방 및 치료를 위한 천연물 유래의 비만억제 및 비만치료용 약제 또는 건강기능식품으로 유용하게 이용될 수 있다.
건강, 비만억제, 비만치료, 지방, 대사성 질환, 생약, 추출, 의약품, 건강기능식품

Description

항비만 활성을 갖는 생약 추출물 및 이의 제조방법{Herb medicine extract having anti-obesity activity and manufacturing method thereof}
본 발명은 지방세포로의 분화억제 및 지방축적억제 활성을 갖는 생약 추출물과 당 성분이 제거된 분획물이 비만질환의 예방 및 치료를 위한 약학조성물 또는 건강기능성 식품에 관한 것이다.
비만은 에너지 섭취와 소비의 불균형으로 발생하는 질병으로, 체내에 지방이 과다하게 축적되어 있는 상태를 말하고 원인으로는 유전적 소인과 환경인자, 불규칙적인 식사의 지속과 스트레스의 가중 등으로 발병된다고 밝혀지고 있다. 비만이 발생된 경우에는 체내의 물질대사 이상뿐 아니라 지방조직으로 대식세포가 침투하여 염증반응을 일으키고 지방세포 자체가 염증성 사이토카인과 여러 급성기 단백질들의 생산자가 되어 비만이 있을 때는 TNF-a, leptin, IL-6, adiponectin, resistin 등의 아디포사이토 카인이 증가될수 있다 (Trayhurn P., Br J Nutr, 92, pp347-355, 2004; Wellen KE., J clin Invest, 115, pp1111-1119, 2005). 비만은 소아비만을 시작으로 성인비만으로 이어지고, 성인이 된 후에 발병하는 대사증후인 복부비만, 이상지질대사, 혈압상승에 따른 심혈관계 질환 및 인슐린저항성에 따른 당뇨병 유발할 수 있다 (Garantoni M., Association Medica Sabin. Metabolism, 5, pp535-540, 1998)
현재 시판중인 대표적인 비만치료제는 장내의 지방분해효소인 lipase의 억제로 섭취한 지방의 소화와 흡수를 억제하는 로슈사의 전문의약품 '제니칼'과 중추신경계에 작용하여 신경말단에서 serotonin과 noradrenaline의 재흡수를 억제하여 포만감을 항진시키고 식욕을 조절하는 작용을 하는 애보트사의 전문의약품 '리덕틸'이 있다. 그러나 이 치료제들은 지방변, 위장장애, 과민증, 담즙분비장애, 지용성 비타민 흡수억제, 구토, 변비 등의 여러 가지 부작용을 나타내므로 이에 대한 문제가 제기되고 있다. 따라서 본 발명에서는 이러한 합성의약품의 부작용을 최소화하고 예로부터 식용으로 사용되어왔던 천연물 소재를 이용하여 안전성이 확보된 천연물원료 비만치료제 또는 치료보조제를 개발하고자 하였다.
건강 (Zingiberis Rhizoma)은 말린 생강 (Zingiberis officinale Rosc.)으로 생강과 (Zingiberaceae)의 뿌리로써, 대한약전과 중국약전에 기재되어 있으며, 소화불량 구토설사에 효과가 있고, 혈액 순환을 촉진하며, 항염증과 진통 효과 등 다양한 약리작용들이 기록되어 있다. 건강에서 분리된 화합물들에는 gingerol류 [(+)-(S)-6-gingerol, 4-gingerol, 10-gingediol, 10-gingerol, 12-gingerol, 14-gingerol, 및 16-gingerol)] gingerenone A/B 등과 함께 shogaol류 [methyl-10-gingerol, methyl-10-shogaol (anti form), methyl-10-shogaol (syn form), methyl-12-gingerol, methyl-6-gingerol, methyl-6-shogaol (syn form), methyl-6-shogaol, methyl-8-shogaol (anti form), 및 methyl-8-shogaol (syn form)] 등의 주요한 성분을 함유하고 있는 것으로 알려져 있다.
건강의 주요화합물인 6-징게롤 (6-gingerol) (BioFactors 22(1-4): 153-156, 2004), 6-쇼가올 (6-shogaol) (대한민국 등록특허 제10-0588469호) 등에 대한 비만억제효과가 보고된 바 있다. 그러나 상기 특허는 건강에서 6-쇼가올 등의 추출 및 각종 유기용매를 이용한 기술로써, 이를 사용하기 위해서는 분리 정제된 쇼가올과 함께 분리 과정 중에 포함될 수 있는 각종 유기용매들에 대한 순도를 결정짓는 일이 매우 중요하다고 할 수 있다. 식품 및 의약품으로 사용될 소재에 대해서, 식품의약품 안전청에서는 규정하고 있는 안전성에 부합하기 위해서는 많은 비용과 시간이 소요된다고 할 수 있다. 따라서 이들 비만 억제 활성을 포함하면서도 건강으로부터 안전성 및 안정성을 확보하는 추출법을 이용하되, 비만 억제 효과를 확보하는 추출방법이 무엇보다 중요하다고 할 수 있다.
또한, 건강의 근원식물인 생강을 돌아보면, 고형분의 40∼60%를 전분 (starch)가 차지하고 있는 점을 고찰해 보아야 한다. 생강을 건강으로 조제하는 건조과정에서, 6-징게롤의 물분자 (H2O)하나가 떨어져 나가면서, 6-쇼가올이 생성된다. 따라서 건조과정에서 전분의 분해로 인한 작은 단위체의 올리고당이 생성될 수 있다. 건강 추출과정에서 이들 전분 및 올리고당은 함께 추출되어지면, 이들은 에탄올 추출물 속에 함께 혼합물 상태로 함유하게 된다.
체내에서 혈당은 항상 일정하게 유지되는데, 이 과정에는 췌장의 베타세포와 알파세포에서 각각 분비되는 인슐린과 글루카곤이 관여한다. 체내에 당이 공급되 면, 혈당이 상승하고 이 때 분비된 인슐린은 간, 근육, 지방세포 등의 말초조직에 에너지원으로 사용할 수 있게 공급하고, 또한 간에 포도당을 글리코겐으로 저장시켜 혈당을 조절한다. 이런 문제들 때문에, 많은 연구자들이 일반적인 에탄올 추출물과 열수추출물등이 지방세포 (3T3-L1)대사에 미치는 영향을 조사하였다. 3T3-L1 전지방세포는 인슐린과 같은 유도물질의 존재 하에서는 효소활성을 급격히 증가시켜 3T3-L1 전지방세포를 분화시킨다. 열수추출물은 섭씨 100도에서 약재 등을 다리는 방법으로, 약재를 다릴 때 가장 많이 사용하는 방법이라 할 수 있다. 물추출물 상태의 약재들은 이들 방법을 가장 많이 사용하나, 이 방법을 통해서, 약효 성분뿐만 아니라 다양한 당 성분등이 함께 추출되어진다. 이재은 등은 조위승청탕의 알코올 및 열수추출물에 대한 비만세포 대사에 미치는 영향을 조사하는 논문에, 알코올추출물이 전반적으로 열수추출물보다 비만 치료에 큰 효과를 나타낸다고 결론지었다. (대한약침학회지 11(1): 127-141, 2008) 이상민 등이 알코올 추출물과 열수추출물 등 추출방법에 따른 방풍통성산의 지방세포 (3T3-L1)에 미치는 영향에서도 농도별 차이가 확연하게 다른 것을 알 수 있다. (대한약침학회지 11(1): 163-176, 2008) 이는 추출법에 따른 당 함유량이 비만세포에 대한 억제 효과 차이가 있음을 알 수 있다. 따라서 비만을 억제하기 위한 건강 추출물을 사용함에 있어서, 당 성분을 제거하는 것은 매우 중요한 의미를 갖는다고 말할 수 있다.
따라서 본 발명자 등은 건강 에탄올 추출물로부터 미분화된 지방세포 내에서 지방의 형성을 억제하는 작용과 비만이 유도된 상태에서 장내지방의 양과 체중을 등을 감소시켜 항비만의 효과를 우수하게 나타내는 추출물을 얻는 방법을 구축하는 것으로, 건강 추출물의 유효성분은 그대로 유지하면서 비만억제에 비활성 성분으로 작용 될 수 있는 당을 선택적으로 제거하여 비활성 성분이 될 수 있는 당을 제거하지 않은 기존의 건강 추출물보다 월등히 우수한 건강 추출방법을 개발 제조함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 건강을 에탄올 및 에탄올 수용액 추출법으로 재차 추출하는 단계를 포함하는 건강 추출물의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명은 건강 추출물중 에탄올 및 에탄올 수용액 추출물을 포함하는 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.
본 발명의 다른 목적은 건강 에탄올 및 에탄올수용액 추출물중 당 성분을 제거하는 방법을 포함하는 비만의 예방 및 치료용 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.
본 발명의 다른 목적은 건강 에탄올 및 에탄올수용액 추출물중 당 성분을 제거하는 방법을 포함하는 비만의 예방 및 치료용 조성물을 제공하는데 있어서, 반복적이고, 대량화, 및 표준화를 통해, 일반제약 생산의 기반을 제공하는데 그 목적이 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 건강 에탄올 및 에탄올수용액 추출물중 당 성분을 제거하는 방법을 통해, 6-징게롤 및 6-쇼가올 이외의 유효성분을 포함하는 비만의 예방 및 치료용 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 건강 에탄올 및 에탄올 수용액 추출물을 포함하는 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 제공하는데 있어서, 가장 추출률이 높은 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 건강 에탄올 및 에탄올 수용액 추출물을 포함하는 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 제공하는데 있어서, 수용성인 당 성분을 제거하여, 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는 방법을 제공한다.
이와 같은 본 발명을 더욱 상세하게 설명하면 다음과 같다.
본 발명에 따른 건강의 에탄올 및 에탄올 수용액 추출물은 전구지방세포 (Preadipocyte)가 성숙한 지방세포 (Adipocyte)로 분화해 가는 과정을 억제하여 지방의 형성을 방해하는 효과가 뛰어나다. 3T3-L1인 전구지방세포는 선택적 조건하에서 성장시키면 지방세포로 분화하는 성질을 가지고 있는데, 건강의 에탄올 및 에탄올 수용액 추출물과 에탄올 추출물을 XAD-4, XAD-7, XAD-7HP, Diaion HP-20, MCI gel 레진 (resin)들을 이용한 컬럼을 통과한 후 얻어진 에탄올 분획물들은 이러한 전구지방세포인 3T3-L1 세포를 성숙한 지방세포로 분화되는 것을 억제시키는 효능을 확인할 수 있었다.
따라서 본 발명에 따른 건강의 에탄올 및 에탄올 수용액 추출물을 섭취하는 경우 및 건강의 에탄올 및 에탄올 수용액 추출물로부터 당 성분을 제거한 추출물을 섭취하는 경우 지방세포로의 분화를 억제하고 지방세포 내의 지방형성을 억제하여 체지방의 증가를 효과적으로 막을 수 있다.
본 발명은
1) 건강을 세절 및 마쇄하고, 추출 후 바로 사용가능한 탄소수 2의 에탄올 또는 에탄올 수용액으로 추출하고 여과한 후 그 여액을 감압농축하여 그 추출물을 얻는 단계 (단계 1)
2) 상기 1 단계에서 얻어진 추출물을 Amberlite XAD-4 레진 (resin)으로 당을 제거하는 단계 (단계 2)
3) 상기 1 단계에서 얻어진 추출물을 Amberlite XAD-7 레진 (resin)으로 당을 제거하는 단계 (단계 3)
4) 상기 1 단계에서 얻어진 추출물을 Amberlite XAD-7HP 레진 (resin)으로 당을 제거하는 단계 (단계 4)
5) 상기 1 단계에서 얻어진 추출물을 Diaion HP-20 레진 (resin)으로 당을 제거하는 단계 (단계 5)
6) 상기 1 단계에서 얻어진 추출물을 MCI gel 레진 (resin)으로 당을 제거하는 단계 (단계 6)이며,
이하 실시예에서 자세히 설명하는 바와 같다.
이상에서 상술한 바와 같이, 본 발명은 건강 에탄올 및 에탄올 수용액 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것으로서, 당 성분을 제거한 비만예방 및 비만치료용 약제 또는 건강기능식품의 유효성분으로 활용하는 경우, 천연물의 성분이 적용된 것이므로 사용자의 거부감을 없앨 수 있으며, 비만억제에 따른 다른 신체부위 및 장기에 부정적인 영향이 없는 우수한 제품의 제공이 가능하게 된다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으 며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
본 발명을 단계별로 상세히 설명하면 다음과 같다.
먼저, 단계 1의 건강을 세절 및 마쇄한 다음 건강 중량(kg)의 1 ~ 100배 량(L) 바람직하게는 5 ~ 15배량의 탄소수 2의 에탄올 및 에탄올 수용액으로 추출하고 여과한 후 그 여액을 감압 농축하여 건강 추출물을 얻는다.
제조예 1: 건강 추출물의 제조
건강은 건조물로써 세절 및 마쇄하고, 세절 및 마쇄한 건강 1 kg을 100% 에탄올 7~20 L씩 3회 반복 추출하여 그 추출물을 여과하여 건조한다.
제조예 2: 건강 추출물의 제조
건강 건조물로써 세절 및 마쇄하고, 세절 및 마쇄한 건강 1 kg을 70% 에탄올수용액 7~20 L씩 3회 반복추출 후 여과하여 건조한다.
제조예 3: 건강 추출물의 제조
건강 건조물로써 세절 및 마쇄하고, 세절 및 마쇄한 건강 1 kg을 50% 에탄올수용액 7~20 L씩 3회 반복추출 후 여과하여 건조한다.
제조예 4: 건강 추출물의 제조
건강 건조물로써 세절 및 마쇄하고, 세절 및 마쇄한 건강 1 kg을 30% 에탄올수용액 7~20 L씩 3회 반복추출 후 여과하여 건조한다.
단계 1에서 얻은 추출물에 대해서, 각 단계에서 제시한 resin을 이용하여 당 성분이 가장 확실하게 제거된 조성물을 얻는다.
제조예 5: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) Amberlite XAD-4 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) Amberlite XAD-4 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 1에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으로 흘려보내준다. 그리고, 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (Amberlite XAD-4 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 6: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) Amberlite XAD-7 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) Amberlite XAD-7 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 1에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으로 흘려보내준다. 그리고, 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (Amberlite XAD-7 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 7: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) Amberlite XAD-7HP 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) Amberlite XAD-7HP 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 1에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으로 흘려보내준다. 그리고 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (Amberlite XAD-7HP 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 8: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) Diaion HP-20 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) Diaion HP-20 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 1에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그 램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으로 흘려보내준다. 그리고, 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (Diaion HP-20 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 9: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) MCI gel 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) MCI gel 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 1에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으로 흘려보내준다. 그리고 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (MCI gel 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 10: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) Amberlite XAD-4 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) Amberlite XAD-4 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 2에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으로 흘려보내준다. 그리고, 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (Amberlite XAD-4 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 11: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) Amberlite XAD-7 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) Amberlite XAD-7 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 2에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으로 흘려보내준다. 그리고, 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (Amberlite XAD-7 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 12: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) Amberlite XAD-7HP 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) Amberlite XAD-7HP 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 2에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으 로 흘려보내준다. 그리고, 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (Amberlite XAD-7HP 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 13: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) Diaion HP-20 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) Diaion HP-20 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 2에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으로 흘려보내준다. 그리고, 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (Diaion HP-20 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압 농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 14: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) MCI gel 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) MCI gel 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 2에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으로 흘려보내준다. 그리고, 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (MCI gel 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 15: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) Amberlite XAD-4 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) Amberlite XAD-4 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간 당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 3에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으로 흘려보내준다. 그리고, 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (Amberlite XAD-4 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 16: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) Amberlite XAD-7 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) Amberlite XAD-7 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 3에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으로 흘려보내준다. 그리고, 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (Amberlite XAD-7 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 17: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) Amberlite XAD-7HP 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) Amberlite XAD-7HP 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 3에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으로 흘려보내준다. 그리고, 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (Amberlite XAD-7HP 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 18: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) Diaion HP-20 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) Diaion HP-20 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 3에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으로 흘려보내준다. 그리고, 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (Diaion HP-20 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 19: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) MCI gel 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) MCI gel 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 3에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그 램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으로 흘려보내준다. 그리고, 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (MCI gel 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 20: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) Amberlite XAD-4 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) Amberlite XAD-4 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 4에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으로 흘려보내준다. 그리고, 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (Amberlite XAD-4 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하 여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 21: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) Amberlite XAD-7 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) Amberlite XAD-7 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 4에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으로 흘려보내준다. 그리고, 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (Amberlite XAD-7 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 22: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) Amberlite XAD-7HP 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) Amberlite XAD-7HP 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 4에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으로 흘려보내준다. 그리고, 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (Amberlite XAD-7HP 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 23: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) Diaion HP-20 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) Diaion HP-20 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 4에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으 로 흘려보내준다. 그리고, 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (Diaion HP-20 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
제조예 24: 당성분이 제거된 건강 추출물의 제조
1) MCI gel 레진 베드 (bed)를 30분간 에탄올에 부풀린다. (swelling)
2) 부풀려진 (swelling) MCI gel 레진 베드를 최소 50 센티미터 (cm)에서 수 미터 (m)에 해당하는 컬럼 (column)에 옮겨 충진한다.
3) 충진되어진 컬럼에 증류수 수∼수십 베드볼륨 (bed volume)의 물을 시간당 수∼수십 리터로 흘려준다.
4) 제조예 4에서 얻어진 추출물에 대해서, 물 리터 (liter) 당 수∼수십 그램 (gram) 이 로딩 (loading)될 수 있도록 현탁시킨 후, 컬럼 내부 레진 (resin)으로 흘려보내준다. 그리고, 컬럼을 통해 빠져 나온 (eluing) 물에는 당을 포함한 가장 극성이 높은 물질이 씻겨 나오므로, 이를 제거한다.
5) 로딩된 물이 다 내려오기 전에, (MCI gel 레진이 마르지 않도록) 100% 에탄올 10∼30 베드볼륨 (bed volume)을 흘려내려 (eluting) 이를 감압농축하여 비만의 예방 및 치료용 의약 또는 식품 조성물을 얻는다.
실시예 1 : 실험동물 세포주 등의 확보
마우스의 전구지방 세포주 3T3-L1은 ATCC (American Type Culture Collection)에서 구입하였고, DMEM 배양액, 트립신, FBS (Fetal bovine serum)와 BCS (Bovine calf serum)은 깁코 (GibcoTM, Invitrogen corporation)에서 구입하였다.
실시예 2 : 건강 에탄올 및 에탄올 수용액 추출물, 에탄올 추출물에서 당을 제거한 분획물들의 지방세포 분화 억제 작용 확인
3T3-L1 전지방세포는 10% 혈청과 항생제가 포함된 DMEM 배지를 사용하였으며, 5%의 이산화탄소의 공급과 37℃가 유지되는 배양기에서 배양하였다. 5× 104/ml의 3T3-L1 세포를 24 well plate 에 분주해 세포가 100%로 융합될 때까지 배양하였으며, 지방세포로 분화시키기 위하여 MDI (0.5 mM 3-isobutyl-1-methyxanthine, 1 μM dexamethason, 10 ㎍/ml insulin, Sigma) 칵테일을 처리하였다. 이틀 후에 배지를 교체하고, 인슐린 (Insulin)만을 같은 농도로 처리하였으며, 이틀 후 DMEM 배지에 10% 혈청만 포함된 배양액으로 배지를 교체하여 4일 동안 배양하였다. 분화억제 활성 시험을 위해 MDI 배지 처리 시 건강 에탄올 및 에탄올 수용액 추출물과 각각의 당 제거를 위해 사용한 레진 (resin)을 통화시킨 에탄올 분획물들을 농도별로 처리하였다. 총 8일 동안 분화시킨 지방세포를 4% 포름알데하이드 (Formaldehyde) 용액으로 5시간 고정시킨 뒤 인산완충용액 (Phosphate buffered saline, PBS)으로 2번 세척하고, 지방염색용 시약 (oil red O)으로 3~4시간 동안 염색하였다. 염색된 세포를 세척한 후 현미경으로 관찰하였고, 이소프로필알콜(isoprophyl alcohol)을 이용하여 붉게 염색된 부분을 녹여내어 510nm파장에서 흡광도 값을 측정하였다.
이와 같이 건강 에탄올 추출물과 건강 에탄올 수용액 및 건강 에탄올 추출물을 XAD-4, XAD-7, XAD-7HP, Diaion HP-20, MCI gel 레진 (resin)을 통과한 후 얻은 에탄올 분획물들이 비만세포의 분화를 억제 하는 그래프와 사진은 각각 도2와 도3에 도시하였다.
실시예 3 : C57 / BL 마우스의 비만 예방 및 억제 효과
체중 18~20g의 6주령 C57/BL 마우스 (중앙실험동물에서 구입)를 6 개의 군으로 분배한 후 1군은 정상적인 사료를 공급하였으며, 나머지 6군은 60% 지방을 함유하고 있는 고지방식이사료를 공급하였다. 6주 동안 비만을 유도하면서 1군과 2군은 음용수 (D.W)를 처리하였고, 3군에는 제니칼 (Xenical, 로슈) 6 mg/kg을 4군~6군은 건강 에탄올 추출물을 XAD-7 레진 (resin)에 통과시켜 얻은 에탄올 분획물을 농도별로 6주 동안 매일 50 mg/kg, 100 mg/kg, 200 mg/kg의 각각의 농도로 경구투여 하였다. 6주 후 각 군에 대한 체중과 내장지방량의 변화 및 간조직내의 지방량을 조사하였으며 (표1, 도4,5) 6주 후 각각 혈액을 채취하여, 혈 중 총 콜레스테롤양과 중성지방의 양을 측정하였다 (도 6).
Figure 112009060658019-pat00001
상기 표 1과 도 4에서 나타낸 바와 같이 본 발명에서 당을 제거하기 위한 방법으로, 건강 에탄올 분획물을 XAD-7 레진 (resin)을 이용하여 컬럼을 통해 얻은 에탄올 분획물을 투여한 군의 경우 100mg/kg 농도에서, 비만치료제의 대표적인 약물 제니칼과 비교하여 체중감소율과 내장지방축적량을 억제하는 비율이 비슷한 수치로 관찰되는 것으로 보아 발명의 추출물이 체지방축적 억제에 따른 체중감소효과가 우수함을 알 수 있다. 또한 도 5를 통해 간조직의 지방축적억제도 확인 할 수 있으며, 도 6을 통해 혈액관련 수치 중 총 콜레스테롤 함량이 다른 투여군 보다 낮으면서도 콜레스테롤이 동맥혈관벽에 침착하여 동맥경화증을 촉진하는 중성지방 (Triglyceride)과 저밀도 지단백콜레스테롤 (LDL-cholesterol) 수치는 대조군에 비해서 상대적으로 낮은것을 확인할 수 있다.
실시예 4 : 독성실험
마우스를 이용하여 건강 에탄올 추출물을 XAD-7 레진 (resin)에 통과시켜 얻은 에탄올 분획물의 반복독성 시험을 실시하였다. 수컷 C57/BL 마우스를 열 마리씩 5군으로 나누어서 50 mg/kg, 100 mg/kg, 500 mg/kg, 1000 mg/kg, 1500 mg/kg 체중의 용량으로 위의 분획물을 21일간 투여하였고 대조군은 물을 투여하였다. 독성의 징후는 체중의 변화, 혈액분석 및 조직검사를 통해서 21일 후 확인하였다.
실험결과 건강의 에탄올 추출물을 XAD-7 레진 (resin)에 통과시켜 얻은 에탄올 분획물은 전 농도에서 사망현상 및 체중의 유의성 있는 증감, 사료섭취량 조직검사, 혈구 혈청검사 결과에서 수치에서 큰 유의성 있는 변화를 발견할 수 없었으므로 본 실험을 수행할 수 있었다.
(1) 체중 및 육안 관찰 결과
Figure 112009060658019-pat00002
(2) 혈액학 검사 결과
Figure 112009060658019-pat00003
(3) 혈청 생화학 검사 결과
Figure 112009060658019-pat00004
(4) 조직검사 결과 : 육안으로 관찰한 결과 신장, 비장, 간, 흉선의 조직에서 별다른 이상이 관찰되지 않았다.
도 1은 건강 에탄올 및 에탄올 수용액 추출물, 건강 에탄올 추출물에서 항비만 활성이 다량 함유된 분획물 조제과정을 나타낸 것이다.
도 2a, 2b는 건강의 각 에탄올 및 에탄올 수용액 추출물과 에탄올 추출물에서 당을 제거하기 위해 사용된 각각의 레진들을 통과후 얻어진 추출물을 30 /ml의 농도로 전구지방세포에 (3T3-L1) 처리하여 지방세로로의 분화가 억제효과 되는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 3a, 3b는 도 2의 결과인 전구지방세포 (3T3-L1)에서 지방세포로의 분화억제효과를 사진으로 나타낸 것이다.
도 4a, 4b는 건강 에탄올 추출물을 XAD-7 레진 (resin) 통과 시켜 얻은 분획물과 비만치료제 제니칼 시료가 고지방식이를 섭취한 쥐의 체중과 내장지방량을 감소시키는 효과를 나타낸 것으로, 모두 6주 후의 실험 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 건강 에탄올 추출물을 XAD-7 레진 (resin) 통과 시켜 얻은 분획물이 간조직내의 지방량을 감소시키는 효과를 나타내는 간조직 염색 사진이다.
도 6a, 도6b는 건강 에탄올 추출물을 XAD-7 레진 (resin) 통과 시켜 얻은 분획물을 고지방식이를 섭취한 쥐에 6주 동안 처리한 후 혈액 내 총 콜레스테롤 수치와 중성지방수치를 감소시키는 영향을 나타낸 결과도이다.

Claims (5)

  1. 삭제
  2. 당 성분이 제거된, 건강 (Zingiberis Rhizoma) 에탄올 또는 에탄올 수용액 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 개선용 식품 조성물.
  3. 삭제
  4. 당 성분이 제거된, 건강 (Zingiberis Rhizoma) 에탄올 또는 에탄올 수용액 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  5. 삭제
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Basic & Clinical Pharmacology & Toxicology, 104(5), 366-373(2009.05.)*

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