KR101615668B1 - 히알루론산을 이용한 겔 시트 제조방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명의 일 실시예에 따른 히알루론산을 이용한 겔 시트 제조방법은 고분자 히알루론산의 알칼리 염을 알칼리 용액에 녹여 수용액을 제조하는 단계, 제조된 수용액을 판(plate) 위에 도포하는 단계 및 상기 도포된 수용액을 진공오븐에서 건조시키는 단계를 포함할 수 있다.

Description

히알루론산을 이용한 겔 시트 제조방법{Method for preparing hydro gel sheet using Hyaluronic acid}
본 발명은 히알루론산을 이용하여, 기계적 강도와 생체 적합성을 높인 겔 시트 제조방법에 관한 것이다.
히알루론산은, β-N-아세틸-D-글루코사민과 β-D-글루쿠론산이 교대로 결합된 직쇄상의 고분자로 분자량이 보통 50,000 ~ 10,000,000Da 또는 그 이상인 다당류이다. 히알루론산은 생체 결합조직의 기본물질로, 주로 포유동물의 피부, 관절의 활액(synovial fluid), 눈의 초자체액(vitreous humor), 탯줄(umbilical cord), 혈청(serum), 닭 벼슬(cock's comb) 등에 분포해 있으며, 연쇄상구균류의 협막 등에도 존재하는 것이 알려져 있다. 히알루론산을 얻기 위한 일반적인 방법으로는 닭 벼슬, 탯줄 등에서 추출하는 방법과, 연쇄상구균인 란스필드그룹 A 및 C, 유전자 재 조합된 고초균(B. subtilis)등을 배양한 후 이것으로부터 추출하여 정제하는 방법 등이 있다.
천연 히알루론산은 분자량에 비례한 다분(polydisperse) 산성이며, 종간 특이성을 갖지 않고 또한 조직이나 장기특이성을 갖지 않아, 그 유래에 관계없이 생체에 이식 또는 주입한 경우에 우수한 생체적합성을 나타내 안과용 주사제등으로 이용되고 있다.
그러나, 히알루론산은 체내에 존재하는 히알루로니다아제(Hyaluronidase)라는 효소에 의해 쉽게 분해되므로 생체조직 내에서의 반감기가 0.5 - 3일 정도로 체내 체류시간이 비교적 짧아, 천연 고분자를 의용재료 등으로 직접 이용하기에는 한계가 있다. 따라서 이의 용도를 의용재료로 확장하기 위해, 히알루론산을 여러 종류의 화학수식제(chemical modifier)를 이용하여 가교결합(cross-linking)을 하거나 작용기를 붙이는 방법으로 변성하여 체내 지속성을 향상시키는 것이 시도되어 왔다.
이 중 대표적인 것은, 디비닐술폰, 비스에폭시드 또는 포름알데히드와 같은 이작용성 가교제를 사용하여 수득한 고 팽윤성의 가교된 히알루론산 겔이다 (USP 4,582,865, JP1994-037575, JP3107488).
히알루론산의 테트라부틸암모늄염이 디메틸 술폭시드(DMSO)와 같은 유기 용매에 용해하는 특징을 이용한 히알루론산의 화학적 변성 방법도 제안되고 있다 (JP-A-3-105003). 히알루론산의 테트라부틸암모늄염을 디메틸 술폭시드 중에서, 트리에틸아민과 2-클로로-1-메틸피리디늄 요오드로 처리하여, 히알루론산의 카르복실기와 히드록실기 사이에서 에스테르 결합을 형성시키는 방법도 제안되어 있다 (EP-A-0341745A1).
또한, 공유 결합하는 화학 약품을 사용하지 않고, 히알루론산을 물에 불용화하는 접근으로서, 아미노기 또는 이미노기를 가지는 고분자와 히알루론산을, 히알루론산의 카르복실기와 고분자의 아미노기 또는 이미노기를 통해 이온 결합시켜 히알루론산-고분자 착화물을 제조하는 방법도 제안되어 있다 (JP-A-6-73103).
또 가교제로 카보디이미드 또는 숙신이미딜활성에스테르를 사용한 방법이 제안되어 있다 (WO94/2517, USP 4,970,298).
본 발명의 목적은 본 발명은 히알루론산을 이용하여, 기계적 강도와 생체 적합성을 높인 겔 시트 제조방법을 제공하고자 함에 있다.
본 발명의 실시 예에 따른 히알루론산을 이용한 겔 시트 제조방법은 히알루론산 염을 알칼리 용액에 녹여 수용액을 제조하는 단계; 상기 제조된 수용액을 판(plate) 위에 도포하는 단계; 및 상기 도포된 수용액을 진공오븐에서 건조시키는 단계를 포함할 수 있다.
상기 판(plate) 위에 도포하기 이전에 상기 제조된 수용액의 pH를 조정하는 단계를 더 포함할 수 있다.
상기 pH를 조정하는 단계는, 상기 제조된 수용액의 pH를 5.5 내지 8.5로 조정하는 단계이다.
상기 알칼리 용액의 pH는 9.0 내지 12.0인 것을 특징으로 한다.
상기 건조시키는 단계는, 상기 기설정된 온도의 진공오븐에서 12시간 이상 상기 도포된 수용액을 건조시키는 단계이며, 상기 기설정된 온도가 높을수록 건조 시간이 짧도록 조정하는 단계를 더 포함할 수 있다.
상기 수용액을 제조하는 단계에서, 상기 수용액의 농도는 1 내지 10 중량% 농도(w/v)인 것을 특징으로 한다.
상기 알칼리 용액의 pH는 상기 알칼리 염의 농도가 높을수록 높은 것을 특징으로 한다.
상기 건조시키는 단계에서 건조된 수용액인 1차 겔시트를 저분자 유기산의 무수물 원액 또는 무수물을 구성하는 단위 유기산으로 희석한 희석액에 침지시키는 단계를 더 포함할 수 있다.
상기 침지시킨 1차 겔시트를 상기 원액 또는 희석액에서 꺼내어, 상기 진공오븐에서 재건조시키는 단계를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따라 제조된 겔 시트는 그 형태가 오랫동안 유지될 수 있고, 기계적 강도가 향상되며, 통상의 생체 조건인 pH 5.5 내지 8.5 정도의 수용액 또는 생리식염수나 완충용액에 용해되지 않아 생 분해 속도가 낮고, 생체친화성이 높다는 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 히알루론산을 이용한 겔 시트 제조방법을 도시한 순서도이다.
본 명세서 또는 출원에 개시되어 있는 본 발명의 실시 예들에 대해서 특정한 구조적 내지 기능적 설명들은 단지 본 발명에 따른 실시 예를 설명하기 위한 목적으로 예시된 것으로, 본 발명에 따른 실시 예들은 다양한 형태로 실시될 수 있으며 본 명세서 또는 출원에 설명된 실시 예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 아니 된다.
본 발명에 따른 실시 예는 다양한 변경을 가할 수 있고 여러가지 형태를 가질 수 있으므로 특정 실시 예들을 도면에 예시하고 본 명세서 또는 출원에 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명의 개념에 따른 실시 예를 특정한 개시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변경, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
제1 및/또는 제2 등의 용어는 다양한 구성 요소들을 설명하는데 사용될 수 있지만, 상기 구성 요소들은 상기 용어들에 의해 한정되어서는 안된다. 상기 용어들은 하나의 구성 요소를 다른 구성 요소로부터 구별하는 목적으로만, 예컨대 본 발명의 개념에 따른 권리 범위로부터 이탈되지 않은 채, 제1 구성요소는 제2 구성요소로 명명될 수 있고, 유사하게 제2 구성요소는 제1 구성요소로도 명명될 수 있다.
어떤 구성요소가 다른 구성요소에 "연결되어" 있다거나 "접속되어" 있다고 언급된 때에는, 그 다른 구성요소에 직접적으로 연결되어 있거나 또는 접속되어 있을 수도 있지만, 중간에 다른 구성요소가 존재할 수도 있다고 이해되어야 할 것이다. 반면에, 어떤 구성요소가 다른 구성요소에 "직접 연결되어" 있다거나 "직접 접속되어" 있다고 언급된 때에는, 중간에 다른 구성요소가 존재하지 않는 것으로 이해되어야 할 것이다. 구성요소들 간의 관계를 설명하는 다른 표현들, 즉 "~사이에"와 "바로 ~사이에" 또는 "~에 이웃하는"과 "~에 직접 이웃하는" 등도 마찬가지로 해석되어야 한다.
본 명세서에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시 예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 명세서에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 설시된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부분품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부분품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미이다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미인 것으로 해석되어야 하며, 본 명세서에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.
이하, 첨부한 도면을 참조하여 본 발명의 바람직한 실시 예를 설명함으로써, 본 발명을 상세히 설명한다. 각 도면에 제시된 동일한 참조부호는 동일한 부재를 나타낸다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 히알루론산을 이용한 겔 시트 제조방법을 도시한 순서도이다.
본 발명의 목적은 히알루론산을 이용한 겔 시트의 형태를 오랫동안 유지할 수 있고, 기계적 강도를 향상시킬 수 있으며, 통상의 생체 조건인 pH 5.5 내지 8.5 정도의 수용액 또는 생리식염수나 완충용액에 용해되지 않아 생 분해 속도가 낮고, 생체친화성이 높은 겔 시트를 제조하기 위함이다. 이러한 제조방법의 주체는 제조장치일 수 있다.
히알루론산을 이용한 겔 시트는 다음과 같은 단계에 따라 제조된다.
분자량 50,000 내지 4,000,000 정도의 고분자 히알루론산 알칼리 염을 pH 9.0 내지 14.0의 알칼리 용액에 녹여 1 내지 10 중량% 농도(w/v)의 수용액을 만든다(S101). 이 수용액의 pH를 5.5 내지 8.5로 조절한 후(S103), 유리판 또는 플라스틱판과 같은 판(plate) 위에 얇게 도포시킨다(S105).
히알루론산의 알칼리 염은 예컨대 히알루론산의 나트륨 염이나 칼륨 염을 포함할 수 있으며, 이러한 히알루론산의 알칼리 염이 물에 용해되기 위해서는 물과 히알루론산이 수소결합을 형성하여야 한다. 따라서 물의 pH를 알칼리 상태로 조정하면, 히알루론산과 결합하여 염을 이룬 나트륨이나 칼륨이 쉽게 해리되어 물과 히알루론산의 수소 결합이 더 잘 일어남으로써 히알루론산의 용해 속도가 빨라질 수 있는 효과가 있다.
용해시키고자 하는 히알루론산의 농도와 비례하여 물의 알칼리도를 높이는 것이 좋다. 그러나, pH가 너무 높으면 히알루론산이 가수분해될 수 있으므로, 알칼리 용액의 농도는 pH 9.0 내지 12.0 정도가 되도록 한다. 수산화나트륨이나 수산화칼륨을 이용하여 물(알칼리 용액)의 알칼리도를 조정할 수 있다.
히알루론산이 완전히 용해되면 희박염산 용액을 이용하여 히알루론산 수용액의 pH를 5.5 내지 8.5, 더욱 적합하게는 7.4로 조정할 수 있다. 히알루론산 수용액의 pH를 중성에 가깝게 조정하지 않을 경우, 이후 진공오븐에서 건조시 수분이 증발될 때 히알루론산 수용액 중의 수산화이온이 농축됨으로써 pH가 급격하게 높아지게 되어 히알루론산이 분해될 염려가 있기 때문이다. 따라서, 진공오븐에서 건조하기 이전에 히알루론산 수용액의 pH를 중성에 가깝게 조정하는 것이 바람직하다.
pH가 조정된 히알루론산 용액을 표면이 매끈한 유리판이나 플라스틱 판 위에 얇게 도포한다. 여기서 히알루론산 용액의 농도가 높을수록 도포된 용액의 두께가 두꺼워진다.
이후, 판 위에 얇게 도포된 히알루론산 용액을 소정의 온도로 기설정된 진공오븐(vacuum oven)에서 건조시킴으로써(S107) 히알루론산 겔 시트를 제조할 수 있다. 건조시키는 시간은 12시간 이상이 되며, 기설정된 온도가 높을수록 건조시키는 시간은 짧게 조정할 수 있다.
제조된 히알루론산 겔 시트의 두께는 히알루론산 용액의 농도와 건조 조건에 의해 상이할 수 있다. 히알루론산 용액의 농도가 높으면 더 단단하고 조밀한 겔 시트가 제조될 수 있다.
진공오븐의 온도가 높게 기설정되면 겔 시트의 건조 중에 형성되는 건조 피막(skin)이 적어, 건조속도가 빠르며 겔 시트의 기계적 강도는 상대적으로 낮다. 반면에 진공오븐의 온도가 낮게 기설정되면 겔 시트의 건조 중에 형성되는 건조 피막이 많아서 건조속도는 느리나 겔 시트의 기계적 강도는 상대적으로 높다.
건조가 완료되면 건조가 완료된 히알루론산 겔 시트를 저분자 유기산의 무수물 원액이나 무수물을 구성하는 단위 유기산으로 희석한 5 내지 100 부파%농도(v/v)의 희석액에 침지(S109)하여 4℃ 내지 70℃의 온도에서 2시간 내지 120시간 유지시킨다.
무수물은 저분자의 유기산의 무수물로서, 저분자 유기산은 생물학적 시스템에 광범위로 존재하는 것이 바람직하다. 종류는 한정되지 않으나, 예로써 저분자의 유기산의 무수물은 아세트산의 무수물(acetic anhydride), 프로피온산의 무수물(propionic anhydride), 부티르산의 무수물(butyric anhydride), 카프로익산의 무수물(caproic anhydride), 이소부티르산의 무수물(isobutyric anhydride) 등을 포함할 수 있다.
이러한 무수물은 축합반응을 촉진하여 히알루론산 겔 시트의 강도를 높일 수 있다. 무수물들은 이들을 구성하는 단위 유기산에 각각 섞어 부피%농도를 조정할 수 있다. 예컨대, 아세트산의 무수물은 아세트산으로, 프로피온산의 무수물은 프로피온산으로, 부티르산의 무수물은 부티르산으로 희석하여 사용가능하며, 5 내지 100 부피%농도로 희석하는 것이 바람직하다.
히알루론산 겔 시트를 유기산의 무수물 원액 또는 무수물을 구성하는 단위 유기산으로 희석한 희석액에서 꺼내어, 이를 다시 기설정된 진공도가 유지되며, 기설정된 온도의 진공오븐에 넣는다(S111). 이러한 단계를 통하여 잔류 무수물을 제거함으로써 기계적 강도가 향상된 백색에 가까운 반투명의 히알루론산 겔 시트가 제조될 수 있다.
히알루론산 겔 시트에 남아있는 저분자 유기산과 그 유기산의 무수물을 완전히 제거하기 위해서 진공오븐의 기설정된 진공도는 절대압력 기준으로 100Torr 이하여야 한다. 진공오븐의 기설정된 온도는 60℃ 내지 180℃ 일 수 있다. 진공오븐 내에서 유기산의 무수물 원액 또는 희석액에서 깨낸 히알루론산 겔 시트는 2시간 이상 건조될 수 있다. 바람직하게는 12시간 이상 건조될 수 있다.
진공오븐 내의 진공도가 충분하지 않은 상태에서 진공오븐 내의 온도를 급격히 상승시키면 히알루론산 겔 시트의 분해가 일어날 수 있으므로, 상온에서 진공오븐 내의 진공도를 높인 후, 기설정된 진공도인 100Torr 이하의 진공도가 되었을 때에 진공오븐 내의 온도를 상승시킨다. 진공오븐 내의 온도가 높아지면 축합반응에 필요한 에너지를 쉽게 공급받을 수 있어, 히알루론산 겔 시트의 기계적 강도를 높일 수 있는 효과가 있다.
이하 본 발명의 실시예 및 비교예들을 통하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명하고자 한다. 그러나 본 발명이 이들 실시예들로만 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1 내지 4]
극한점도 값이 1.8 m3/kg으로 환산 분자량이 1,300,000 Da 정도인 히알루론산 나트륨 0.24g을 상온에서 0.05mol/l 농도의 수산화나트륨용액 20ml에 용해시켜 1.2중량% 농도의 수용액을 제조한다.
이 히알루론산 수용액의 pH를 희박 염산용액을 이용하여 pH 7.4로 조절한다. pH 조절된 히알루론산 수용액을 각각 5ml씩 취하여 4개의 직경 60㎜의 페트리디시에 도포하여 수용액의 두께가 약 2㎜ 정도가 되게 하였다. 이들 페드리디시들을 모두 진공오븐으로 옮기고 감압하여 진공오븐의 압력을 100mTorr 이하로 유지하였다.
진공오븐의 온도를 60℃로 설정하여 120분 동안 유지하였다. 다시 진공오븐의 온도를 80℃의 올리고 240분간 유지하였다. 이 진공오븐의 온도를 120℃로 올리고 18시간 유지하여 건조된 미백색의 겔 시트를 1차로 얻었다.
1차로 얻은 히알루론산 겔 시트를 다음 [표 1]에 기재된 바와 같이 각각 5부피%, 20부피%, 50부피%, 100부피% 농도의 아세트산 무수물(acetic anhydride) 용액 15ml에 넣는다. 정확히는 1차로 얻은 히알루론산 겔 시트가 포함된 페트리디시에 무수물 용액을 넣어 40℃로 유지되는 인큐베이터(incubator)에서 24시간 유지한다. 이후, 페트리디시를 진공오븐으로 옮기고 진공오븐을 감압하여 진공도가 100Torr 이하가 되었을 때 진공오븐을 가열하기 시작한다.
진공오븐의 온도는 100℃로 설정하여 유지하였으며, 24시간 경과 후 백색에 가까운 반투명의 2차 히알루론산 겔시트들을 취하였다. 이렇게 취한 2차 히알루론산 겔시트들을 모두 2등분 한 후 각각 pH 5.5와 7.4의 완충용액에 담가, 40℃로 유지되는 인큐베이터(incubator)에 넣고 24시간 간격으로 관찰하여 168시간 동안 2차 히알루론산 겔시트의 유지 여부 및 분해 정도를 확인하였다.
4가지 실시 예 모두 겔 시트의 형태를 잘 유지하였으며 분해되어 풀어지는 경우는 없었다. 이렇게 확인한 결과는 아래의 표 1에 기재하였다.
또한, 세포독성 여부를 다음과 같이 확인하였다. 2차 히알루론산 겔시트를 각각 50mg을 취한 후 균질기(homogenizer)를 이용하여 기계적으로 분쇄하였다. 이들을 각각 2ml의 세포배양 배지(10부피%의 우태혈청이 포함된 DMEM)에 혼합하여 냉장실(4℃)에 7일간 유지시켰다. 이로써 히알루론산 겔 시트 성분이 충분히 추출될 수 있게 하였다.
7일 후 원심분리를 하여 겔 시트를 제거하고 상층액만 취하여 이를 각각 6-well dish의 well에 넣었다. 각각의 well에 1X104 세포를 접종하여 배양을 시작하였으며, 배양 시작 후 2일, 4일, 6일, 8일 후에 현미경 상에서 세포 밀도를 관찰하여 세포독성 여부를 확인하였다.
히알루론산 겔 시트에 노출되지 않은 10부피%의 우태혈청이 포함된 DMEM에서 증식하는 세포군을 대조구로 하였다. 이렇게 측정한 세포독성 결과를 아래 표 1에 기재하였다.
[실시예 5 내지 8]
실시예 1 내지 4에 있어서 히알루론산 농도가 4.0중량%가 되도록 4.8g의 히알루론산 나트륨을 이용하였다. 그리고 실시예 1 내지 4와 동일한 조작을 실시하였다.
[실시예 9 내지 12]
실시예 1 내지 4에 있어서 5℃, 72시간의 조건으로 아세트산 무수물 용액에 침지하였다. 그리고 실시예 1 내지 4와 동일한 조작을 실시하였다.
[실시예 13 내지 16]
실시예 1 내지 4에 있어서 프로피온산 무수물 용액에 24시간 동안 침지하였다. 그리고 실시예 1 내지 4와 동일한 조작을 실시하였다.
[비교예 1]
실시예 1 내지 4에 있어서 아세트산 무수물 용액에 침지하는 단계와, 진공오븐에서의 강화, 건조 단계를 생략하였다. 그리고 실시예 1 ~ 4와 동일한 조작을 실시하여 1차 겔시트만 취하였으며, 세포독성 시험은 수행하지 않았다.
[비교예 2]
실시예 1 내지 4에 있어서 순수 아세트산에 침지하였다. 그리고 실시예 1 ~ 4와 동일한 조작을 실시하였으며, 세포독성 시험은 수행하지 않았다.
[비교예 3]
실시예 5 내지 8에 있어서 순수 아세트산에 침지하였다. 그리고 실시예 5 ~ 8과 동일한 조작을 실시하였으며, 세포독성 시험은 수행하지 않았다.
[비교예 4]
실시예 13 내지 16에 있어서 순수 프로피온산에 침지하였다. 그리고 실시예 13 ~ 16과 동일한 조작을 실시하였으며, 세포독성 시험은 수행하지 않았다.
[비교예 5]
실시예 1 내지 4에 있어서 100부피%의 아세트산 무수물 용액에 침지하였으나, 진공오븐에서 강화, 건조하는 단계를 생략하고, 송풍건조 하였다. 그리고 실시예 1 내지 4과 동일한 조작을 실시하였으며, 세포독성 시험은 수행하지 않았다.

 히알루론산 농도(중량%) 무수물 및 단위 유기산
 무수물 농도(부피%)
 168시간 경과 후 겔 시트의 형태
○: 유지됨
△: 일부분해
X: 완전분해		 세포독성
○: 있음
X: 없음
pH 5.5 pH 7.4
실시예 1 1.2


 아세트산 무수물/아세트산
 100 ○ ○ X
실시예 2 50 ○ ○ X
실시예 3 20 ○ ○ X
실시예 4 5 ○ ○ X
실시예 5 4.0


 아세트산 무수물/아세트산
 100 ○ ○ X
실시예 6 50 ○ ○ X
실시예 7 20 ○ ○ X
실시예 8 5 ○ ○ X
실시예 9 1.2


 아세트산 무수물/아세트산
 100 ○ ○ X
실시예 10 50 ○ ○ X
실시예 11 20 ○ ○ X
실시예 12 5 ○ ○ X
실시예 13 1.2


 프로피온산 무수물/프로피온산 100 ○ ○ X
실시예 14 50 ○ ○ X
실시예 15 20 ○ ○ X
실시예 16 5 ○ ○ X
비교예 1 1.2 - - X X -
비교예 2 1.2 아세트산 100% 0 X X -
비교예 3 4.0 아세트산 100% 0 X X -
비교예 4 1.2 프로피온산 100% 0 X X -
비교예 5 1.2 아세트산 무수물/아세트산 100 ○ △ -
이상의 설명은 본 발명의 기술 사상을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로서, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 수정 및 변형이 가능할 것이다. 따라서, 본 발명에 개시된 실시예들은 본 발명의 기술 사상을 한정하기 위한 것이 아니라 설명하기 위한 것이고, 이러한 실시예에 의하여 본 발명의 기술 사상의 범위가 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 보호범위는 아래의 청구범위에 의하여 해석되어야 하며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (9)

  1. 히알루론산 염을 알칼리 용액에 녹여 수용액을 제조하는 단계;
    상기 제조된 수용액을 판(plate) 위에 도포하는 단계; 및
    상기 도포된 수용액을 진공오븐에서 건조시키는 단계를 포함하는,
    히알루론산을 이용한 겔 시트 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 판(plate) 위에 도포하기 이전에 상기 제조된 수용액의 pH를 조정하는 단계를 더 포함하는,
    히알루론산을 이용한 겔 시트 제조방법.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 pH를 조정하는 단계는,
    상기 제조된 수용액의 pH를 5.5 내지 8.5로 조정하는 단계인,
    히알루론산을 이용한 겔 시트 제조방법.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 알칼리 용액의 pH는 9.0 내지 12.0인 것을 특징으로 하는,
    히알루론산을 이용한 겔 시트 제조방법.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 건조시키는 단계는,
    기설정된 온도의 진공오븐에서 12시간 이상 상기 도포된 수용액을 건조시키는 단계이며,
    상기 기설정된 온도가 높을수록 건조 시간이 짧도록 조정하는 단계를 더 포함하는,
    히알루론산을 이용한 겔 시트 제조방법.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 수용액을 제조하는 단계에서,
    상기 수용액의 농도는 1 내지 10 중량% 농도(w/v)인 것을 특징으로 하는,
    히알루론산을 이용한 겔 시트 제조방법.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 알칼리 용액의 pH는 기설정된 범위 내에서 상기 히알루론산 염의 농도에 비례하여 더 높은 것을 특징으로 하는,
    히알루론산을 이용한 겔 시트 제조방법.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 건조시키는 단계에서 건조된 결과물인 겔시트를 저분자 유기산의 무수물 원액 또는 무수물을 구성하는 단위 유기산으로 희석한 희석액에 침지시키는 단계를 더 포함하는,
    히알루론산을 이용한 겔 시트 제조방법.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 침지시킨 1차 겔시트를 상기 원액 또는 희석액에서 꺼내어, 상기 진공오븐에서 재건조시키는 단계를 더 포함하는
    히알루론산을 이용한 겔 시트 제조방법.
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