KR101611837B1 - Use of lactobacillus rhamnosus cbt lr5 in the prevention or treatment of obesity and obesity-related metabolic syndrome and composition comprising the same - Google Patents

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Abstract

The present invention relates to a Lactobacillus rhamnosus CBT LR5 (accession NO. KCTC 12202BP) strain for treating or preventing obesity and metabolic syndromes caused by obesity, and a pharmaceutical composition and an anti-obesity food composition for preventing or treating obesity and metabolic syndromes caused by obesity, comprising the strain.

Description

비만 및 비만으로 야기된 대사성 질환의 예방 또는 치료를 위한 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주 및 이를 포함하는 조성물{USE OF LACTOBACILLUS RHAMNOSUS CBT LR5 IN THE PREVENTION OR TREATMENT OF OBESITY AND OBESITY-RELATED METABOLIC SYNDROME AND COMPOSITION COMPRISING THE SAME}[0001] The present invention relates to a lactobacillus Lambsos CBT LR5 strain for the prevention or treatment of metabolic diseases caused by obesity and obesity, and a composition comprising the same. BACKGROUND ART [0002] SAME}

본 발명은 비만 및 비만으로 야기된 대사성 질환의 예방 또는 치료를 위한 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 (Lactobacillus rhamnosus CBT LR5) 균주 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 항비만 효능이 있는 락토바실루스 람노수스 CBT LR5균주 및 이를 포함하는 약제학적 또는 식품 조성물에 관한 것이다.The invention Lactobacillus for the prevention or treatment of metabolic diseases caused by obesity and obesity Ramno Versus CBT LR5 (Lactobacillus rhamnosus CBT LR5) strain, and relates to a composition comprising the same, and more particularly Lactobacillus that have anti-obesity efficacy Lambsus CBT LR5 strain and a pharmaceutical or food composition comprising the same.

비만은 대부분의 국가에서 주요한 보건 상의 문제가 되고 있다. 세계보건 기구(WHO)는 전 세계적으로 10억 명 이상의 성인은 과체중이고, 이들 중 3억 명은 임상적으로 비만인 것으로 추정하고 있다 (Hotamisligil, 2006). 비만은 심혈관 질환, 뇌졸중, 인슐린 내성, 당뇨병, 간 질환, 신경퇴행성 질환, 호흡기 질환 및 기타 중증 질환에 대한 주요한 위험 인자(risk factor)이고, 유방암 및 결장암을 포함한 일부 암에 대한 위험 인자인 것으로 확인되었다. 또한 신체 건강에 대한 영향 이외에, 비만은 우울증, 식이장애 및 낮은 자긍심을 초래하여 삶의 질 및 정신 건강에 유해한 영향을 미친다.Obesity is a major health problem in most countries. The World Health Organization (WHO) estimates that over one billion adults worldwide are overweight, and 300 million of them are clinically obese (Hotamisligil, 2006). Obesity is a major risk factor for cardiovascular disease, stroke, insulin resistance, diabetes, liver disease, neurodegenerative diseases, respiratory diseases and other serious diseases, and is a risk factor for some cancers, including breast and colon cancer . In addition to the effects on physical health, obesity has a detrimental effect on quality of life and mental health, resulting in depression, dietary disturbances and low self-esteem.

높은 에너지 부하를 갖는 식품 섭취의 꾸준한 증가 및 적은 운동과 연관된 사회적 변화들은 비만 및 비만으로 야기된 대사성 질환의 발생을 증가시키고 있다. 저칼로리 다이어트와 운동에 기초한 전통적인 치료는 비만 제어에 있어서 그다지 효과를 나타내지 못하고, 일시적인 체중 손실을 초래할 뿐이다. 체중 감소를 유도하는 안전하고 효과적인 약물의 개발이 수십 년 동안 진행되어 왔다. 그러나 현재까지, 효능을 보인 약물들은 심각한 부작용을 초래하거나 임상 실험에서 그다지 효능이 우수하지 못하였다. 예를 들면, 암페타민은 식욕 억제제로 효과적으로 사용되었으나, 다른 부작용과 함께 의존성의 강한 위험을 갖는다. 렙틴(leptin)의 발견은 비만의 치료에서 획기적인 발전으로 주목 받았으나, 렙틴은 임상 실험에서 기대만큼 효과적이지 않았다. 칸나비노이드 수용체 길항제가 항비만 약물로서 개발되고 있었으나, 심각한 정신과적 부작용을 초래하였다. 따라서 비만 및 비만으로 야기된 대사성 질환을 개선하고 이러한 병리상태를 예방할 수 있는 새로운 접근 방법이 요구되고 있다.The steady increase in food intake with high energy loads and the social changes associated with less exercise increase the incidence of metabolic diseases caused by obesity and obesity. Conventional treatments based on low-calorie diets and exercises have little effect on obesity control and only result in temporary weight loss. The development of safe and effective drugs to induce weight loss has been going on for decades. However, to date, efficacious drugs have had serious side effects or are not as effective in clinical trials. For example, amphetamine has been used effectively as an appetite suppressant, but has a strong risk of dependence with other side effects. The discovery of leptin has attracted attention as a breakthrough in the treatment of obesity, but leptin was not as effective as expected in clinical trials. Cannabinoid receptor antagonists have been developed as antiobesity drugs, but have resulted in serious psychiatric side effects. Therefore, a new approach is needed to improve metabolic diseases caused by obesity and obesity and to prevent such pathological conditions.

프로바이오틱스는 대사 및 면역학적 기능을 조절할 수 있는 능력을 통하여, 비만 및 관련 질병에 관련된 신규한 인자인 것으로 인식되고 있다(Sanz 등, 2010. Proc. Nutr. Soc., 14: 1~8.). 이와 관련하여 국내 공개 특허 제2010-0109661호에는 혈중콜레스테롤 강하와 비만억제 효능을 갖는 신규의 락토바실루스 커베터스 균주가 개시되어 있고, 국내 공개 특허 제2012-0128260호에는 비피도박테리움의 혼합 유산균을 포함하는 비만 및 비만관련질환의 치료 또는 예방용 조성물이 개시되어 있으며, 국내 공개특허 제2010-0010015호에는 혈중 콜레스테롤 저하 및 항비만 활성을 갖는 락토바실루스 존소니 균주가 개시되어 있으나, 그 효과가 만족스러운 수준에 이르지 못하고 있다.Probiotics are recognized as a novel factor associated with obesity and related diseases through their ability to control metabolic and immunological functions (Sanz et al., 2010. Proc. Nutr. Soc., 14: 1-8). In this regard, Korean Patent Publication No. 2010-0109661 discloses a novel Lactobacillus having the blood cholesterol lowering and obesity inhibitory effect Better Kerr switch and strains is disclosed, Korean Patent Publication No. 2012-0128260 discloses, and obesity and for the treatment or prevention of obesity-related disorders are disclosed compositions comprising a mixture of lactic acid bacteria of the Bifidobacterium, Korean Patent Publication No. 2010 - 0010015 discloses that lactobacillus having a blood cholesterol lowering and anti-obesity activity Johnsoni strain has been disclosed, but its effect has not reached a satisfactory level.

본 발명자들은 항비만 효능이 뛰어난 프로바이오틱스를 발굴하기 위해서 예의 연구한 결과, 락토바실루스 람노수스 CBT LR5(Lactobacillus rhamnosus CBT LR5) 균주의 항비만 제품으로서의 적용가능성을 실험적으로 확인하여 본 발명을 완성하였다. 본 발명의 목적은 항비만 효능이 우수하여 비만 및 비만으로 야기된 대사성 질환의 예방 또는 치료에 유효한 락토바실루스 람노수스 CBT LR5(Lactobacillus rhamnosus CBT LR5 ) 균주를 제공하는 것이다. The present inventors have made intensive studies in order to discover an excellent anti-obesity effect probiotics, Lactobacillus The present invention has been accomplished by experimentally confirming the applicability of the Lactobacillus rhamnosus CBT LR5 strain as an anti-obesity product. An object of the present invention is effective Lactobacillus in the prevention or treatment of metabolic diseases caused by obesity and obesity is excellent in anti-obesity effect Lambsus CBT LR5 ( Lactobacillus rhamnosus CBT LR5 ) .

본 발명의 다른 목적은 지방전구세포에서 지방세포로의 분화를 억제하고, 중추신경계에서 IL-6, TNF-α 및 IL-1β의 분비를 감소시키고, 체중 및 복부 지방을 감소시키고, 혈중 콜레스테롤을 감소시키기 위한 락토바실루스 람노수스 CBT LR5(Lactobacillus rhamnosus CBT LR5) 균주의 새로운 용도에 관한 것이다.Another object of the present invention is to inhibit the differentiation into adipocytes in adipose precursor cells, reduce the secretion of IL-6, TNF-a and IL-1 beta in the central nervous system, reduce body weight and abdominal fat, decrease blood cholesterol Lactobacillus This invention relates to a novel use of Lactobacillus rhamnosus CBT LR5 strain.

본 발명의 또 다른 목적은 항비만 효능이 우수한 락토바실루스 람노수스 CBT LR5(Lactobacillus rhamnosus CBT LR5) 균주를 포함하는 약제학적 조성물 또는 식품 조성물을 제공하는 것이다. Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition containing lactobacillus Lambsus CBT LR5 ( Lactobacillus rhamnosus CBT LR5). ≪ / RTI >

상술한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 하나의 양상은 한국생명공학연구원 유전자은행(Korean Collection for Type Culture; KCTC)에 수탁 번호 KCTC 12202BP로서 국제기탁된 락토바실루스 람노수스 CBT LR5(Lactobacillus rhamnosus CBT LR5) 유산균에 관한 것이다. One aspect of the present invention for achieving the above object is to provide a method for producing Lactobacillus sp. Lactobacillus (Lactobacillus sp.) Deposited with the Korean Collection for Type Culture (KCTC) under accession number KCTC 12202BP Ramno Versus CBT LR5 (Lactobacillus rhamnosus CBT LR5) relates to lactic acid bacteria.

본 발명의 다른 양상은 비만 및 비만으로 야기된 대사성 질환의 예방 또는 치료를 위한, 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5의 균주를 포함하는 약제학적 조성물 또는 항비만 기능성 식품 조성물에 관한 것이다.Another aspect of the present invention relates to the use of the lactobacillus of the present invention for the prevention or treatment of metabolic diseases caused by obesity and obesity The present invention relates to a pharmaceutical composition comprising a strain of Lambsus CBT LR5 or an anti-obesity functional food composition.

본 발명의 또 다른 양상은 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주(KCTC 12202BP)와 비피도박테리움 브레베 CBT BR3(Bifidobacterium breve CBT BR3)(KCTC 12201BP) 균주를 포함하는 항비만 조성물에 관한 것이다. Another aspect of the present invention relates to a method of producing lactobacillus Ramno Seuss CBT LR5 strain (KCTC 12202BP) and Bifidobacterium breve CBT BR3 (Bifidobacterium breve CBT BR3) (KCTC 12201BP).

본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5(Lactobacillus rhamnosus CBT LR5(KCTC 12202BP)) 균주는 항비만 효능이 우수하고, 식후 혈당의 증가를 완화시키고, 혈중 콜레스테롤을 감소시킨다.The lactobacillus of the present invention Lambsus CBT LR5 ( Lactobacillus rhamnosus CBT LR5 (KCTC 12202BP)) has excellent anti-obesity efficacy, relieves postprandial increase in blood glucose, and decreases blood cholesterol.

또한 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5(Lactobacillus rhamnosus CBT LR5(KCTC 12202BP)) 균주 및 이를 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 지방세포 분화의 억제, 체지방량의 감소, 내장 지방량의 감소, 총콜레스테롤 농도의 감소, 혈장 중성지방 및 간조직 중성지방의 감소를 초래하여, 궁극적으로 비만, 또는 비만으로 야기된 대사성 질환의 예방 또는 치료 활성을 나타낸다. 또한, 본 발명의 조성물은 혈당, 콜레스테롤, 및 인슐린 농도의 유의한 감소를 초래하여 인슐린 저항성을 개선하는 효능도 발휘한다.In addition, the lactobacillus Ramno Versus CBT LR5 (Lactobacillus rhamnosus CBT LR5 ( KCTC 12202BP)) strains and compositions of the invention comprising the same as an active ingredient inhibiting adipocyte differentiation, reduction in body fat, visceral fat reduction, reduction of the total cholesterol, serum neutral Fat and liver tissue triglycerides, and ultimately exhibits the preventive or therapeutic activity of obesity, or metabolic diseases caused by obesity. In addition, the composition of the present invention also exhibits a significant reduction in blood glucose, cholesterol, and insulin concentrations, thereby improving insulin resistance.

본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5(Lactobacillus rhamnosus CBT LR5(KCTC 12202BP)) 균주는 항비만 효능이 우수하여 비만 및 비만으로 야기된 대사성 질환의 치료 또는 예방을 위한 약제학적 조성물 및 항비만 기능성 식품 조성물로 유리하게 이용될 수 있다. The lactobacillus of the present invention Lambsus CBT LR5 ( Lactobacillus rhamnosus CBT LR5 (KCTC 12202BP)) can be advantageously used as a pharmaceutical composition and an anti-obesity functional food composition for the treatment or prevention of metabolic diseases caused by obesity and obesity because of its excellent anti-obesity effect.

도 1은 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 (Lactobacillus rhamnosus CBT LR5) KCTC 12202BP 균주의 16S rRNA 서열, 및 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5와 락토바실루스 람노수스 T (ATCC 7469)의 16S rRNA 서열의 상동성 및 계통발생적 관계(phylogenetic relationship)를 비교 도시한 것이다.
도 2는 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주의 지놈 DNA의 RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA) 분석 결과이다.
도 3은 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 (Lactobacillus rhamnosus CBT LR5) KCTC 12202BP 균주의 지놈 DNA의 PFGE(Pulsed Field Gel Electrophoresis) 분석 결과이다.
도 4는 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 (Lactobacillus rhamnosus CBT LR5) KCTC 12202BP 균주의 효소 활성 분석 결과이다.
도 5는 분화된 3T3-L1 세포에서 지방축적에 대한 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주의 효과를 나타낸 사진이다.
도 6은 비만 유도 3T3-L1 세포에서 IL-6, TNF-α, IL-1β를 포함하는 전염증성 사이토카인 분비에 대한 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주의 효과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 쥐의 공동배양된 3T3-L1 지방세포-PBMC에서 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주에 의한 LPS-유도된 NO의 저해를 보여주는 막대 그래프이다.
도 8은 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주에 의한 체지방 축적 억제를 확인한 실험 결과를 나타낸 사진이다. Brief Description of the Drawings Fig. 1 is a cross- Lambsus CBT LR5 ( Lactobacillus rhamnosus CBT LR5) 16S rRNA sequence of KCTC 12202BP strain, and Lactobacillus Lambsus CBT LR5 and Lactobacillus The comparison of the homology and phylogenetic relationship of the 16S rRNA sequence of Laminothus T (ATCC 7469).
Figure 2 is a photograph of the lactobacillus < RTI ID = Ramno a RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) analysis of the genomic DNA of the strain Versus CBT LR5.
Figure 3 is a Lactobacillus of the present invention Lambsus CBT LR5 ( Lactobacillus rhamnosus CBT LR5) Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) analysis of the genomic DNA of KCTC 12202BP strain.
4 is a Lactobacillus of the present invention Lambsus CBT LR5 ( Lactobacillus rhamnosus CBT LR5) KCTC 12202BP strain.
Figure 5 is a graph showing the activity of the inventive Lactobacillus < RTI ID = 0.0 > This is a photograph showing the effect of the Lambsus CBT LR5 strain.
FIG. 6 is a graph showing the effect of the present inventive Lactobacillus on the pro-inflammatory cytokine secretion comprising IL-6, TNF-alpha, IL-1 beta in obesity-induced 3T3- A graph showing the effect of ramno Versus CBT LR5 strain.
7 is co-cultured 3T3-L1 adipocytes Lactobacillus of the present invention in the rat -PBMC It is a bar graph showing the inhibition of LPS-induced NO by the Lambsus CBT LR5 strain.
Fig. 8 is a graph showing the activity of the lactobacillus This is a photograph showing the results of experiments confirming inhibition of body fat accumulation by the Lambsus CBT LR5 strain.

본 명세서에 사용되는 경우에, "치료하다(treat)", 및 "치료(treatment)"라는 용어는 대상체에서 질병 또는 병리학적 상태의 결과로서 유발된 효과를 제어하는 것을 의미하며, 구체적으로 비만 및 비만으로 야기된 대사성 질환 증상의 예방, 감소, 경감 또는 제거를 의미한다. As used herein, the terms "treat" and "treatment" refer to controlling effects caused as a result of a disease or pathological condition in a subject, Means prevention, reduction, alleviation or elimination of metabolic disease symptoms caused by obesity.

본 명세서에서 "예방"이라는 용어는 대상체에서 비만 및 비만으로 야기된 대사성 질환에 대한 소인이 있는 경우 질병 또는 병리학적 상태가 일어나는 것을 방지하는 것을 의미한다. As used herein, the term "prevention" means preventing a disease or pathological condition from occurring when a subject is diagnosed with a metabolic disease caused by obesity and obesity.

본 발명에서 “비만”은 단순 비만, 증후성 비만, 소아비만, 성인비만, 세포 증식형 비만, 세포 비대형 비만, 상체 비만, 하체 비만, 내장지방형 비만 및 피하지방형 비만을 포함하나, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.In the present invention, "obesity" includes obesity, symptomatic obesity, childhood obesity, adult obesity, cell proliferative obesity, cell non-obesity obesity, upper body obesity, lower body obesity, visceral obesity obesity and subcutaneous obesity, It is not.

본 발명의 하나의 양상은 비만 및 비만으로 야기된 대사성 질환의 예방 또는 치료에 효과적인 한국생명공학연구원 유전자은행(Korean Collection for Type Culture; KCTC)에 수탁 번호 KCTC 12202BP로서 국제기탁된 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 (Lactobacillus rhamnosus CBT LR5) 유산균이다. One aspect of the present invention is obesity and the metabolic Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology Gene Bank effective in the prevention or treatment of diseases caused by obesity; as the accession number KCTC 12202BP the (Korean Collection for Type Culture KCTC) the deposit of Lactobacillus International Lambsus CBT LR5 ( Lactobacillus rhamnosus CBT LR5) is a lactic acid bacterium.

비만은 체지방의 과도한 증가를 일으키는, 섭취(consumption)와 에너지 소비간의 양성적이며 장기간의 불균형의 결과로서 발생한다. 인슐린은 지방 조직의 적절한 작용 제어 및 그 안에서의 트리글리세라이드의 축적의 제어 및 글루코오스 섭취에 있어서 가장 중요한 호르몬이다. 지방은 인슐린 및 렙틴에 대한 반응물로서, 지단백질 리파제를 자극하고 지방분해는 억제함으로써 정상의 인슐린-민감성 지방조직에 저장된다. 그러나 비만과 관련된 지방 조직에서 지방산의 과도한 축적은 인슐린 민감성을 감소시키고, 이는 트리글리세라이드(TG) 형태의 유리 지방산의 축적을 몇몇 기관과 조직으로 전환시켜서 렙틴 생산 또는 민감성에서의 변경을 일으키고 전염증성 사이토카인 합성을 증가시키는데, 이는 대사성 증후군, 심혈관 질환 등과 같은 관련 질환들의 발병 위험을 더욱 높인다. Obesity occurs as a result of a positive and long-term imbalance between consumption and energy consumption, causing an excessive increase in body fat. Insulin is the most important hormone in the control of the proper functioning of adipose tissue, the control of the accumulation of triglycerides therein, and the glucose uptake. Fat is a reactant to insulin and leptin, which is stored in normal insulin-sensitive adipose tissue by stimulating lipoprotein lipase and inhibiting lipolysis. However, excessive accumulation of fatty acids in obesity-related adipose tissue reduces insulin sensitivity, which translates the accumulation of free fatty acids in triglyceride (TG) form into some organs and tissues, resulting in changes in leptin production or sensitivity, Which increases the risk of developing related diseases such as metabolic syndrome, cardiovascular disease and the like.

한편, 비만은 가벼운 만성 염증 상태로도 인식되고 있고, 사이토카인, 아디포카인 및 기타 전염증성 단백질의 지방 조직에서 높은 생산에 의하여 특징된다 (Tilg and Moschen, 2006. Nat. Rev. Immunol., 6: 772~783). 비만 및 대사 장애들에 관련된 염증 인자들은 특히 전염증성 사이토카인 TNF-α 및 IL6를 포함한다. 특히, TNF-α는 인슐린의 작용에 관련된 유전자들의 발현을 감소시키고, 인슐린 신호화를 약화시키고, 인슐린-자극된 지단백질 리파제의 작용을 억제한다. On the other hand, obesity is also recognized as a mild chronic inflammatory state and is characterized by high production in adipose tissue of cytokines, adipocytes and other proinflammatory proteins (Tilg and Moschen, 2006. Nat. Rev. Immunol., 6 : 772-783). Inflammatory factors associated with obesity and metabolic disorders include in particular the proinflammatory cytokines TNF-a and IL6. In particular, TNF-a reduces expression of genes involved in the action of insulin, weakens insulin signaling, and inhibits the action of insulin-stimulated lipoprotein lipases.

또한 비만은 인슐린 저항성, 글루코오스 내성, 고지혈증, 심혈관질환 등 대사성 증후군과 밀접하게 연관되어 있다. 대사 증후군은 다수의 대사 질환으로 이루어져 있으며, 이들 중 다수는 동맥경화증의 발병을 촉진시키고 심혈관 질환 발병의 위험성을 증가시킨다. 대사 증후군의 주요 병상으로서는 죽종형성성 지방이상증, 혈압 상승, 혈장내 글루코오스의 증가 및 프로트롬빈증이 있다. 죽종형성성 지방이상증은 트리글리세리드의 증가, 저밀도 지단백질 콜레스테롤(LDL)의 증가 및 고밀도 지단백질 콜레스테롤(HDL)의 감소를 특징으로 한다. 대사 증후군의 기본을 이루는 기작은 완전히 밝혀지지는 않았으나, 이 증후군을 앓고 있는 대부분의 환자들은 인슐린 농도가 증가하고 인슐린의 세포성 작용에 저항성이 있다.Obesity is also closely related to metabolic syndrome such as insulin resistance, glucose tolerance, hyperlipidemia, and cardiovascular disease. Metabolic syndrome consists of many metabolic diseases, many of which promote the onset of atherosclerosis and increase the risk of developing cardiovascular disease. Major pathologies of metabolic syndrome include atherogenic lipid abnormality, elevated blood pressure, increased plasma glucose and prothrombinemia. Atherogenic lipodystrophy is characterized by an increase in triglycerides, an increase in low density lipoprotein cholesterol (LDL), and a decrease in high density lipoprotein cholesterol (HDL). The mechanism underlying the metabolic syndrome is not fully understood, but most patients with this syndrome have increased insulin levels and are resistant to the cellular effects of insulin.

본 발명의 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주는 장 미생물총의 조성을 회복시켜, 비만 및 비만으로 야기된 대사성 질환에 관련된 변경들 및 이들 변경을 유발하는 염증성 효과를 정상화시키고, 또한 기타 병리학적 조건들과 관련된 변경들도 정상화시킨다. 본 발명의 균주는 중추 신경계에서 비만을 증가시키고 인슐린과 렙틴 내성의 발달에 기여하여, 체중 조절 및 당 대사 조절기능을 저해하는 TNF-α 합성을 상당히 감소시킨다. The inventive lactobacillus < RTI ID = 0.0 > The Lambsus CBT LR5 strain restores the composition of intestinal microbial counts and normalizes inflammatory effects that cause changes associated with metabolic diseases caused by obesity and obesity and these changes and also normalizes changes related to other pathological conditions . The strain of the present invention significantly reduces the synthesis of TNF-a which inhibits body weight regulation and glucose metabolism regulation by increasing obesity in the central nervous system and contributing to the development of insulin and leptin resistance.

비만(obesity)은 음식물의 섭취와 에너지 소비 사이의 불균형으로 인한 대사장애로, 체내에 지방이 과잉 축적된 상태를 의미한다. 비만은 섭취된 음식물에 포함되어 있는 지방이 리파아제의 의해 분해 및 흡수되어 세포 내에 축적되거나, 축적된 지방이 지방전구세포를 지방세포로 분화하는 것을 유도하여 지방세포의 부피나 수가 늘어날 때 주로 많이 발생한다.Obesity is a metabolic disorder caused by an imbalance between the consumption of food and energy consumption, which means that the body is over-accumulated. Obesity is mainly caused by the accumulation and accumulation of fat in lipids contained in the ingested food by the lipase and the accumulation of fat in the lipids leads to the differentiation of fat precursor cells into adipocytes. do.

하기 실시예에서 입증된 바와 같이, 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5는 지방세포 분화 억제, 체지방량의 감소, 내장 지방량의 감소, 총콜레스테롤 농도의 감소, 혈장 중성지방 및 간조직 중성지방의 감소를 초래하여 고지방 식이로 유도된 비만 현상을 현저히 완화하는 효능을 발휘한다. 또한, 본 발명의 락토바실루스 람 노수스 CBT LR5는 혈당의 유의한 감소를 초래하여 인슐린 저항성을 개선함으로써, 대사성 질환을 개선하는 효능도 발휘한다.As demonstrated in the following examples, the inventive lactobacillus < RTI ID = 0.0 > Lambsos CBT LR5 significantly inhibits fat-induced obesity by inhibiting adipocyte differentiation, reducing body fat, reducing visceral fat, decreasing total cholesterol, and reducing plasma triglyceride and triglyceride levels . In addition, Lactobacillus person furnace Versus CBT LR5 of the present invention, by improving insulin resistance and results in a significant reduction in blood glucose, also exert efficacy to improve metabolic disease.

본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주는 지방전구세포의 지방세포로의 분화를 억제시키는데, 이러한 사실은 본 발명의 균주가 과체중 및 비만을 일으킬 수 있는 지방세포 증가의 치료에 유용하다는 것을 증명한다. 이는 큰 크기의 지방세포들이 예비지방세포 분화를 통한 지방세포형성을 촉발하고, 피드백 과정을 생성하는 성장 인자들을 보다 높은 농도로 분비하기 때문이다. 비대성 지방세포는 염증성 시토카인 및 케모카인 (TNF-a, MCP-1, IL-6, 레지스틴(resistin), 등)의 비정상적인 높은 농도를 더욱 생산하며, 이는 간 세포에서의 인슐린 신호화를 저해하고 인슐린 내성 및 기타 합병증을 유발한다. 따라서 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주는 유사하게 이들 관련 병리상태들을 예방 또는 개선시킬 수 있다. The lactobacillus of the present invention The Lambsus CBT LR5 strain inhibits the differentiation of adipose precursor cells into adipocytes, which demonstrates that the strains of the present invention are useful in the treatment of adipocyte growth that can cause overweight and obesity. This is because large-sized adipocytes induce adipocyte formation through preadipocyte differentiation and secrete growth factors that produce the feedback process at higher concentrations. Hypertrophic adipocytes further produce abnormal high concentrations of inflammatory cytokines and chemokines (TNF-a, MCP-1, IL-6, resistin, etc.), which inhibit insulin signaling in hepatic cells, And other complications. Therefore, the lactobacillus of the present invention The Lambsus CBT LR5 strain can similarly prevent or ameliorate these related pathological conditions.

본 발명의 다른 양상에 따르면, 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주는 프로바이오틱 유산균으로 사용되거나, 다양한 유제품 및 기타 발효 제품에 사용 가능하고, 실시예에 따라서 동물사료 첨가제로 사용할 수도 있다.According to another aspect of the present invention, there is provided a method for producing lactobacillus The Lambsus CBT LR5 strain can be used as probiotic lactic acid bacteria or in a variety of dairy products and other fermented products, and may also be used as an animal feed additive, depending on the embodiment.

본 발명에 따른 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주는 혈중 콜레스테롤의 양을 감소시킴은 물론 비만 억제 효과가 매우 뛰어나므로 항비만 기능성 식품 및 비만 치료 및 예방용 약제학적 조성물 등으로 이용될 수 있다. 본 발명의 다른 양상은 비만 및 비만으로 야기된 대사성 질환의 예방 또는 치료에 유용한 약제학적 조성물이고, 본 발명의 또 다른 양상은 항비만 기능성 식품 조성물에 관한 것이다. 상기 식품 조성물은 식품, 건강기능식품(nutraceutical), 보충제(supplement), 생균제 또는 공생제(symbiotic)이다. Lactobacillus < RTI ID = 0.0 > The Lambsus CBT LR5 strain can be used as an anti-obesity functional food, a pharmaceutical composition for the treatment and prevention of obesity, etc., because it has a very high effect of inhibiting obesity as well as reducing the amount of cholesterol in the blood. Another aspect of the present invention is a pharmaceutical composition useful for the prevention or treatment of metabolic diseases caused by obesity and obesity, and still another aspect of the present invention relates to an anti-obesity functional food composition. The food composition is a food, a nutraceutical, a supplement, a probiotic or a symbiotic.

본 발명에서 “식품 조성물”이라는 용어는, 그를 섭취하는 대상체에 제공되는 영양소에 관계없이, 그 생물의 하나 이상의 기능에 유리하게 작용하여 보다 나은 건강 상태를 제공하는 식품을 의미한다. 결과적으로, 상기 식품 조성물은 질병 또는 질병-유발 인자의 예방 또는 치료를 위해 사용될 수 있다. 따라서 본 발명의 "식품 조성물"이라는 용어는 기능성 식품 또는 특정 영양 목적을 위한 식품 또는 의약 식품의 동의어로서 사용될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 것과 같은, "생균제"라는 용어는 적합한 양으로 공급되는 경우, 숙주 생물의 건강에 유익한 살아있는 미생물을 의미한다. 본 명세서에서 사용된 것과 같은, "공생제"라는 용어는 프리바이오틱(prebiotic) 및 생균제의 혼합물을 함유하는 식품들을 의미한다. The term " food composition " in the context of the present invention refers to a food which, without regard to the nutrients provided to a subject ingesting it, serves to favor one or more functions of the organism to provide a better health condition. As a result, the food composition can be used for the prevention or treatment of disease or disease-inducing factors. Thus, the term "food composition" of the present invention may be used as a synonym for a functional food or a food or medicinal food for a specific nutritional purpose. As used herein, the term "probiotic agent" means a live microorganism beneficial to the health of a host organism when supplied in an appropriate amount. As used herein, the term "symbiotic" refers to foods containing a mixture of prebiotic and probiotic.

본 발명의 조성물은 실시예에 따라서 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주 이외에 락토바실루스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 락토바실루스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실루스 헬베티쿠스(Lactobacillus helveticus), 락토바실루스 퍼멘툼(Lactobacillus fermentum), 락토바실루스 파라카세이(Lactobacillus paracasei), 락토바실루스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실루스 델브루에키(Lactobacillus delbrueckii), 락토바실루스 레우테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실루스 부츠네리(Lactobacillus buchneri), 락토바실루스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실루스 존스니(Lactobacillus johonsonii), 락토바실루스 케피르(Lactobacillus kefir), 락토코쿠스 락티스(Lactococcus lactis), 비피도박테리움 비피둠(Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움 인판티스(Bifidobacterium infantis), 비피도박테리움 수도롱굼(Bifidobacterium pseudolongum), 비피도박테리움 써모필룸 (Bifidobacterium themophilum), 비피도박테리움 아돌센티스 (Bifidobacterium adolescentis)로 구성되는 군에서 선택되는 1종 이상의 프로바이오틱 유산균을 추가로 포함할 수 있다. The composition of the present invention may contain, depending on the embodiment, lactobacillus In addition to the Lambsus CBT LR5 strain, Lactobacillus Wu raised Bari's (Lactobacillus salivarius), Lactobacillus Brevis (Lactobacillus brevis), Lactobacillus Helveticus (Lactobacillus helveticus), Lactobacillus Fur lactofermentum (Lactobacillus fermentum), Lactobacillus The para-casein (Lactobacillus paracasei), Lactobacillus Kasei (Lactobacillus casei), Lactobacillus Del Brewer station (Lactobacillus delbrueckii), Lactobacillus Leu Terry (Lactobacillus reuteri), Lactobacillus Boots Tenerife (Lactobacillus buchneri), Lactobacillus In addition Lee (Lactobacillus gasseri), Lactobacillus Jones you (Lactobacillus johonsonii), Lactobacillus Kane pireu (Lactobacillus kefir), Nose Lactobacillus Syracuse Lactis (Lactococcus lactis), Bifidobacterium BP Doom (Bifidobacterium bifidum ), bifidobacterium Infante Tees (Bifidobacterium infantis), Bifidobacterium Also ronggum (Bifidobacterium pseudolongum), Bifidobacterium spent a brush Room (B ifidobacterium themophilus m, Bifidobacterium Adolfo sentiseu (Bifidobacterium adolescent < / RTI > bacteria), and at least one probiotic lactic acid bacteria selected from the group consisting of < RTI ID = 0.0 >

본 발명의 락토바실루스 플란타룸 LP3 균주는 유산균의 배양에 통상 이용되는 배지를 사용하여 통상 사용되는 조건 하에서 배양함으로써 증식하여 회수할 수 있다. 배양 후 얻어지는 배양물을 그대로 사용해도 되고 나아가 필요에 따라 원심분리 등에 의한 조(粗)정제 및/또는 여과 등에 의한 고액분리나 멸균조작을 행해도 된다. 바람직하게는 원심분리를 행하여 유산균의 균체만을 회수한다. 아울러 본 발명에서 사용하는 유산균은 습윤 균체여도 되고 또는 건조 균체여도 된다. 예컨대, 동결건조에 의해 생균제 형태로 제조하여 이용될 수 있다.The lactobacillus of the present invention The Flora room LP3 strain can be recovered by growing it by culturing under the usual conditions using a medium usually used for culturing the lactic acid bacteria. The culture obtained after cultivation may be used as is, or further subjected to solid-liquid separation or sterilization by, for example, rough purification by centrifugation or the like and / or filtration. Preferably, centrifugation is carried out to recover only the microbial cells of the lactic acid bacteria. In addition, the lactic acid bacteria used in the present invention may be wet cells or dried cells. For example, it can be prepared into a biocide form by lyophilization and used.

본 발명의 조성물은 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주 이외에 통상적인 제약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 추가로 포함할 수 있으며, 이 외에도 바인더, 분해제, 코팅제, 윤활제 등과 같은 제약학적으로 통상적으로 사용되는 다양한 첨가제와 제형화되어 조제될 수 있다. The composition of the present invention comprises lactobacillus In addition to the Lambsus CBT LR5 strain, conventional pharmaceutical acceptable carriers or excipients may be further included. In addition, various additives commonly used in pharmaceuticals such as binders, disintegrating agents, coating agents, lubricants, .

"부형제"라는 용어는 본 발명의 조성물의 임의의 성분의 흡수를 돕고, 상기 성분들을 안정화시키는 의미에서 의약 조성물의 제조를 보조하는 물질을 의미한다. 따라서 부형제는 성분들을 서로 결합된 채로 유지시키는 기능, 감미 기능, 착색 기능, 의약품의 보호 기능, 예로서 의약품을 공기 또는 수분으로부터 분리시키는 기능, 정제, 캡슐 또는 임의의 다른 제형용 충전제 기능, 성분들의 용해 및 그들의 장 흡수를 촉진시키는 붕괴 기능을 가진다. The term "excipient" means a material that assists in the absorption of any component of the composition of the present invention and assists in the manufacture of the pharmaceutical composition in the sense of stabilizing the components. Thus, the excipient may be selected from the group consisting of a function of keeping the components bound to each other, a sweetening function, a coloring function, a protective function of the medicament, for example a function of separating the medicament from air or moisture, a function of a filler for tablets, capsules or any other form, And has a disintegration function that promotes dissolution and their intestinal absorption.

"담체" 또는 비히클은, 바람직하게는 불활성 성분이다. 담체의 기능은 다른 성분들의 혼입을 촉진시켜 더 양호한 투약 및 투여를 가능하게 하거나, 또는 약제학적 조성물일관성 및 형태를 제공하도록 하는 것이다. 따라서 담체는 의약품에서 본 발명의 의약 조성물의 임의의 성분들을 특정 부피 또는 중량으로 희석하는데 사용되는 물질; 또는 상기 성분들을 희석하지도 않고, 더욱 양호한 투약 및 투여를 가능하게 하거나 또는 의약품에 일관성 및 형태를 제공할 수 있는 물질이다. The "carrier" or vehicle is preferably an inert component. The function of the carrier is to facilitate the incorporation of other components to enable better dosing and administration, or to provide the consistency and form of the pharmaceutical composition. Thus, the carrier may be a substance used to dilute any of the components of the pharmaceutical composition of the present invention in a certain volume or weight in a medicament; Or that do not dilute the ingredients, allow for better dosing and administration, or provide consistency and form to the medicament.

본 발명의 조성물은 상기 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주와 적절한 담체, 부형제, 보조 유효 성분 등과의 혼합에 의하여 분말제, 과립제, 정제, 캡슐 또는 액상의 형태로 제형화 될 수 있다. 또한 본 발명의 조성물은 공지의 방법을 사용하여, 위장을 통과한 뒤 소장에 도달하여 활성 성분인 미생물이 신속하게 장내에 방출되도록 장용 피복되어 제품화될 수 있다. The composition of the present invention comprises the lactobacillus Ramno Versus CBT LR5 may be strains with a suitable carrier, excipient and powder, by mixing as a secondary active ingredient, granules, tablets, formulations in the form of a capsule or liquefaction. In addition, the composition of the present invention can be commercialized using a known method, after being passed through the stomach and reaching the small intestine so that the microorganism as the active ingredient is quickly released into the intestines.

본 발명에서 사용가능한 부형제는 수크로오스, 락토오스, 만니톨, 글루코오스 등과 같은 설탕 및 옥수수 전분, 감자 전분, 쌀 전분, 부분적으로 전젤라틴화된 전분 등의 전분을 포함한다. 바인더는 덱스트린, 소듐알지네이트, 카라지난, 구아검, 아카시아, 아가 등의 폴리사카라이드, 트라가칸트, 젤라틴, 글루텐 등의 천연-발생 거대분자 물질, 히드록시프로필셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 히드록시프로필 에틸셀룰로오스, 카복시메틸셀룰로오스소듐 등의 셀룰로오스 유도체 및 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐알코올, 폴리비닐아세테이트, 폴리에틸렌글리콜, 폴리아크릴산, 폴리메타크릴산 및 비닐아세테이트 수지 등의 고분자를 포함한다.Excipients usable in the present invention include sugars such as sucrose, lactose, mannitol, glucose and the like and starches such as corn starch, potato starch, rice starch, and partially pregelatinized starch. The binder may be a natural-occurring macromolecular substance such as a polysaccharide such as dextrin, sodium alginate, carrageenan, guar gum, acacia or agar, tragacanth, gelatin or gluten, hydroxypropylcellulose, methylcellulose, Cellulose derivatives such as cellulose, ethyl cellulose, hydroxypropyl ethyl cellulose and carboxymethyl cellulose sodium, and cellulose derivatives such as polyvinyl pyrrolidone, polyvinyl alcohol, polyvinylacetate, polyethylene glycol, polyacrylic acid, polymethacrylic acid and vinyl acetate resin Polymer.

분해제로는 카복시메틸셀룰로오스, 카복시메틸셀룰로오스칼슘, 저치환 히드록시프로필셀룰로오스 등의 셀룰로오스 유도체 및 소듐카복시메틸 전분, 히드록시프로필 전분, 옥수수 전분, 감자 전분, 쌀 전분 및 부분적으로 전젤라틴화된 전분 등의 전분을 사용할 수 있다.Examples of the decomposing agent include cellulose derivatives such as carboxymethylcellulose, carboxymethylcellulose calcium and low substituted hydroxypropylcellulose, and sodium carboxymethyl starch, hydroxypropyl starch, corn starch, potato starch, rice starch and partially pregelatinized starch Of starch can be used.

본 발명에서 사용가능한 윤활제의 예들은 활석, 스테아르산, 칼슘스테아레이트, 마그네슘스테아레이트, 콜로이드성 실리카, 히드로스실리콘다이옥사이드, 다양한 종류의 왁스 및 히드로게네이티드 오일 등을 포함한다.Examples of lubricants that can be used in the present invention include talc, stearic acid, calcium stearate, magnesium stearate, colloidal silica, hydrous silicon dioxide, various types of waxes and hydrogenated oils and the like.

코팅제로는 디메틸아미노에틸메타크릴레이트-메타크릴산 공중합체, 폴리비닐아세탈디에틸아미노아세테이트, 에틸아크릴레이트-메타크릴산 공중합체, 에틸아크릴레이트-메틸메타크릴레이트-클로로트리메틸암모늄에틸메타크릴레이트 공중합체, 에틸셀룰로오스 등의 수불용성 중합체, 메타크릴산-에틸아크릴레이트 공중합체, 히드록시프로필메틸셀룰로오스프탈레이트, 히드록시프로필메틸셀룰로오스아세테이트석시네이트 등의 장성 중합체 및 메틸셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 폴리에틸렌글리콜 등의 수용성 중합체를 포함하나, 반드시 이들로 제한되는 것은 아니다. Examples of the coating agent include dimethylaminoethyl methacrylate-methacrylic acid copolymer, polyvinyl acetal diethylaminoacetate, ethyl acrylate-methacrylic acid copolymer, ethyl acrylate-methyl methacrylate-chlorotrimethylammonium ethyl methacrylate A water-insoluble polymer such as a copolymer, a water-insoluble polymer such as ethylcellulose, a methacrylic acid-ethyl acrylate copolymer, hydroxypropylmethylcellulose phthalate, hydroxypropylmethylcellulose acetate succinate and the like and a thickener such as methylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose , Polyvinyl pyrrolidone, polyethylene glycol, and the like, but are not limited thereto.

본 발명의 비만 예방 또는 치료용 조성물에서 유효성분인 상기 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주의 투여량은 치료나 예방의 목적, 치료 또는 예방하려는 환자의 종류, 환자의 증상, 체중, 연령이나 성별 등을 고려하여 적절하게 결정될 수 있다. 일례로, 본 발명의 조성물은 조성물 총 중량에 대해, 유효성분으로서 락토바 실루스 람노수스 CBT LR5 균주를 치료유효량 또는 영양적으로 유효한 농도로 포함하는데, 바람직하게는 108 내지 1012 cfu/g의 함량으로 포함하거나, 동등한 수의 생균을 가진 배양물을 포함한다. 일반적으로, 성인 환자의 경우, 1×106 cfu/g 이상의 생균, 바람직하게는 1×108 내지 1×1012 cfu/g의 생균이 필요에 따라 한번 또는 수차례에 걸쳐서 나누어서 투여될 수 있다.In the composition for preventing or treating obesity of the present invention, the above-mentioned lactobacillus Ramno Seuss dose of CBT LR5 strains considering the purpose of treatment or prevention, treatment, or the kind of patient to the prevention, symptoms, weight, age, gender, etc. can be appropriately determined. In one example, the composition of the present invention the composition, relative to the total weight, comprising as an active ingredient Lactobacillus Basil loose ramno Versus CBT LR5 effective concentration of the strains in a therapeutically effective amount or nutritional, preferably from 10 8 to 10 12 cfu / g , Or an equivalent number of viable bacteria. Generally, in the case of adult patients, live cells of 1 x 10 6 cfu / g or more, preferably 1 x 10 8 to 1 x 10 12 cfu / g may be administered once or several times as needed .

또한, 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5를 유효성분으로 함유하는 항비만 건강기능성식품에는 상기 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 이외에 영양보조성분으로서 비타민 B1, B2, B5, B6, E 및 초산에스테르, 니코틴산 아미드, 올리고당 등이 첨가될 수 있다. In addition, the lactobacillus of the present invention Antiobesity health containing ramno Versus CBT LR5, as an active ingredient, a functional food is the Lactobacillus Vitamin B1, B2, B5, B6, E and acetic acid ester, nicotinic amide, oligosaccharide and the like can be added as nutritional supplement components in addition to Lambsus CBT LR5.

본 발명의 또 다른 양상은 락토바실루스 람노수스 CBT LR5(수탁번호: KCTC 12202BP) 균주와 비피도박테리움 브레베 CBT BR3 (Bifidobacterium breve CBT BR3)(수탁번호: KCTC 12201BP) 균주를 포함하는 항비만 조성물 관한 것이다. 본 발명의 이러한 혼합 균주 조성물은 지방전구세포에서 지방세포로의 분화를 억제하고, 중추신경계에서 IL-6, TNF-α 및 IL-1β의 분비를 감소시키고, 체중 및 복부 지방을 감소시키고, 혈중 콜레스테롤을 감소시키는 2종의 프로바이오틱 유산균 또는 그 배양물을 포함하므로, 본 발명에 따르면 비만의 개선에 유용한 조성물이 제공될 수 있다. 이러한 조성물은 비만을 개선하거나 예방하기 위한 조성물로서 의약품, 식품, 또는 건강기능성 식품으로 유용하게 활용될 수 있다.Another aspect of the present invention relates to a method of producing lactobacillus Ramno Seuss CBT LR5 (accession number: KCTC 12202BP) strain and the Bifidobacterium Breve CBT BR3 (Bifidobacterium breve CBT BR3) (accession number: KCTC 12201BP). This mixed strain composition of the present invention inhibits differentiation into adipocytes in lipid precursor cells, reduces the secretion of IL-6, TNF-a and IL-1 beta in the central nervous system, reduces body weight and abdominal fat, The present invention can provide a composition useful for improving obesity. The present invention also provides a composition useful for improving obesity. Such a composition is useful as a medicine, a food, or a health functional food as a composition for improving or preventing obesity.

이러한 조성물은 각 유산균을 동일한 비율로 포함하거나, 락토바실루스 속 유산균과 비피도박테리움속 비피더스균을 2:1~10:1의 비율로 포함할 수 있다. 상기 조성물은 조성물 총 중량에 대해, 유효성분으로서 유산균 균주의 혼합물을 108 내지 1012 CFU/g의 함량으로 포함하거나, 동등한 수의 생균을 가진 배양물을 포함할 수 있다. Such a composition may contain the same proportion of each lactic acid bacterium or may contain lactic acid bacteria of the genus Lactobacillus and bifidobacteria of the genus Bifidobacterium in a ratio of 2: 1 to 10: 1. The composition may comprise a mixture of lactic acid bacteria strains as an active ingredient in an amount of 10 8 to 10 12 CFU / g, or an equivalent number of live bacteria, relative to the total weight of the composition.

이하에서 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 다만, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해서 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples. However, the following examples are illustrative of the present invention, and the contents of the present invention are not limited by the following examples.

실시예Example

실시예Example 1.  One. 락토바실루스Lactobacillus 람노수스Lumosus CBT LR5( CBT LR5 ( Lactobacillus Lactobacillus rhamnosusrhamnosus CBT LR5) 균주의 분리 및 동정 CBT LR5) Isolation and Identification

1-1. 균주의 선발1-1. Selection of strain

사람 분변 1g을 멸균 혐기수에 연속 희석(serial dilution)한 후 각 희석액 1㎖을 Man-Rogosa-Sharpe(MRS. BD. USA) 고체 배지에 부어서 혐기 조건에서 3일간 배양하였다. 생성된 콜로니를 MRS에 BCP(Bromocresol purple, 0.17g/L)가 첨가된 락토바실루스 선택배지(BL 고체배지)에 옮긴 후 같은 조건에서 3일간 배양하였다. BCP 지시약은 유산균이 젖산을 형성하여 주변 pH가 낮아지면 보라색에서 노란색으로 변하게 된다. 콜로니 주변의 색이 노란 색으로 변한 유산균 콜로니를 선택한 후 생화학적, 분자생물학적 동정을 진행하였고, 이 후 균주의 기능성 및 안정성이 가장 우수한 균주 1종을 최종 선발하였다.1 g of human feces was serially diluted in sterile anaerobic water and 1 ml of each dilution was poured into a Man-Rogosa-Sharpe (MRS, USA) solid medium and incubated for 3 days under anaerobic conditions. The resulting colonies were transferred to MRS in a lactobacillus selective medium (BL solid medium) supplemented with BCP (Bromocresol purple, 0.17 g / L) and then cultured for 3 days under the same conditions. The BCP indicator changes from purple to yellow when the lactic acid bacteria form lactic acid and the surrounding pH is lowered. The colony was transformed into a yellow color, and biochemical and molecular biochemical identification was carried out. One strain with the best functionality and stability was finally selected.

1-2. 선발된 균주의 동정1-2. Identification of selected strains

1) API 1) API 키트를Kit 이용한 생화학적 동정 Biochemical identification using

선발된 균주의 당 이용성을 알아보기 위하여 API 50 CHL Carbohydrate Test Kit(bioMerieux Co., France)를 이용하였다. 10 ㎖의 MRS(Man-Rogosa-Sharpe) 액체배지에서 37℃에서 16시간 배양한 후, 1 ㎖의 배양액을 회수하여 CHL 용액으로 2회 세정하였다. 이어서 원심분리(MICRO-17, Hanil, KR)에 의해 균체를 모아 9 ㎖의 CHL 용액에 재현탁시켰다. 150 ㎕의 균주 현탁액을 API 50 CHL 키트의 각 웰에 넣은 후, 오토클레이브한 파라핀 오일을 웰 내의 균주 현탁액 위에 분주하였다. 37℃에서 3일간 배양한 후 각각의 당 이용성을 비교하였다. 49가지 탄소원에 대하여 미생물 증식에 의한 색의 변화 여부를 관찰하여 각 탄소원의 이용 여부를 관찰하였고, 최종 동정 결과는 동정용 프로그램 API web을 이용하여 해석하여 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다. 동정 결과, L. rhamnosus와 99.9% 동일한 생화학적 특성을 보였다. The API 50 CHL Carbohydrate Test Kit (bioMerieux Co., France) was used to determine the sugar availability of selected strains. After culturing in a 10 ml MRS (Man-Rogosa-Sharpe) medium for 16 hours at 37 ° C, 1 ml of the culture broth was collected and washed twice with CHL solution. The cells were then collected by centrifugation (MICRO-17, Hanil, KR) and resuspended in 9 mL of CHL solution. 150 [mu] L of strain suspension was placed in each well of the API 50 CHL kit, and autoclaved paraffin oil was dispensed onto the strain suspension in the wells. After 3 days of incubation at 37 ° C, the sugar availability was compared. The use of each carbon source was observed by observing changes in color due to microbial growth for 49 carbon sources. The results of the final identification were analyzed using the identification program API web, and the results are shown in Table 1 below. As a result of identification, L. rhamnosus showed 99.9% similar biochemical characteristics.

No.No. CarbohydrateCarbohydrate UtilizedUtilized No.No. CarbohydrateCarbohydrate UtilizedUtilized 00 ControlControl -- 2525 EsculineEsculine ++ 1One GlycerolGlycerol ++ 2626 SalicineSalicine ++ 22 ErythritolErythritol -- 2727 CellobioseCellobiose ++ 33 D-ArabinoseD-Arabinose ++ 2828 MaltoseMaltose ++ 44 L-ArabinoseL-Arabinose -- 2929 LactoseLactose ++ 55 RiboseRibose ++ 3030 MelibioseMelibiose -- 66 D-XyloseD-Xylose -- 3131 SaccharoseSaccharose ++ 77 L-XyloseL-Xylose -- 3232 TrehaloseTrehalose ++ 88 AdonitolAdonitol -- 3333 InulineInuline -- 99 β-Methyl-xylosideβ-Methyl-xyloside -- 3434 MelezitoseMelezitose ++ 1010 GalactoseGalactose ++ 3535 D-RaffinoseD-Raffinose -- 1111 D-GlucoseD-Glucose ++ 3636 AmidonAmidon -- 1212 D-FructoseD-Fructose ++ 3737 GlycogeneGlycogene -- 1313 D-MannoseD-Mannose ++ 3838 XylitolXylitol -- 1414 L-SorboseL-Sorbose ++ 3939 β-Gentiobioseβ-Gentiobiose ++ 1515 RhamnoseRhamnose ++ 4040 D-TuranoseD-Turanose -- 1616 DulcitolDulcitol -- 4141 D-LyxoseD-Lyxose -- 1717 InositolInositol ++ 4242 D-TagatoseD-Tagatose ++ 1818 MannitolMannitol ++ 4343 D-FucoseD-Fucose -- 1919 SorbitolSorbitol ++ 4444 L-FucoseL-Fucose ++ 2020 α-Methyl-D-mannosidealpha -Methyl-D-mannoside -- 4545 D-ArabitolD-arabitol -- 2121 α-Methyl-D-glucosidealpha -Methyl-D-glucoside -- 4646 L-ArabitolL-Arabitol -- 2222 N-Acetyl glucosamineN-Acetyl glucosamine ++ 4747 GluconateGluconate ++ 2323 AmygdalineAmygdaline ++ 4848 2-Ceto-gluconate2-Ceto-gluconate -- 2424 ArbutineArbutine ++ 4949 5-Ceto-gluconate5-Ceto-gluconate --

2) 16s 2) 16s rDNArDNA 유전자 염기서열 결정을 통한 동정 Identification through gene sequencing

분리된 균주로부터 지놈 DNA를 추출하여 16s rRNA 염기서열을 분석하였다. Genomic DNA was extracted from isolated strains and analyzed for 16s rRNA sequences.

분변에서 분리한 균주의 순수 배양액 1 ㎖에서 Accuprep 지놈 추출 키트(Bioneer, Korea)를 이용하여 지놈 DNA를 추출하였다. 추출한 DNA를 주형으로 16s rDNA 영역을 프라이머 F (5‘-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)와 프라이머 R (5‘-AAGGAGGTGATCCAGCC-3’)을 이용하여 PCR (MyCycler, BIO-RAD, USA)을 수행하였다. Genomic DNA was extracted from 1 ml of the pure culture of the strain isolated from the feces using Accuprep genome extraction kit (Bioneer, Korea). (MyCycler, BIO-RAD, USA) was performed using primers F (5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3 ') and primer R (5'-AAGGAGGTGATCCAGCC-3') as a template for the extracted DNA as a template.

PCR 산물은 pGEM-Teasy 벡터(Promega, USA)에 연결하여 E. coli 균주 DH5α에 형질전환시킨 후 LB/x-gal/ampplate에 도말하여 37℃에서 밤새 배양하였다. 스크리닝을 통하여 형질전환체로부터 삽입체를 포함하는 재조합 플라스미드를 분리한 후, DNA 염기서열 분석을 진행하였다. DNA 염기서열 분석은 DNA star program의 Cluster V method를 이용하여 락토바실루스 람노수스 T (ATCC 7469)와 상동성을 비교하였다. 분리된 균주의 16s rRNA 염기서열은, 도 1에 도시된 바와 같이, 락토바실루스 람노수스 T (ATCC 7469)와 99.5%의 상동성을 보였다.The PCR product was connected to the pGEM-Teasy vector (Promega, USA) E. coli The strain DH5α was transformed into LB / x-gal / ampplate and cultured overnight at 37 ° C. After the recombinant plasmid containing the insert was isolated from the transformant through screening, DNA sequencing was performed. DNA sequencing was performed using the Cluster V method of the DNA star program. Lactobacillus We were compared homology with ramno Versus T (ATCC 7469). 16s rRNA base sequence of the separated strain, a, Lactobacillus As shown in Figure 1 Ramno Versus T (ATCC 7469) and showed a homology of 99.5%.

3)3) RAPDRAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) 분석 (Random Amplified Polymorphic DNA) analysis

RAPD 분석은 분변에서 분리한 균주로부터 지놈 DNA를 추출하였으며, 분리한 DNA를 주형으로 (GTG)5 (5’-GTGGTGGTGGTGGTG-3’)프라이머를 이용하여 PCR-RAPD (MyCycler, BIO-RAD, USA)를 수행하였다. 최종 산물인 PCR 산물은 EtBr (ethidium bromide)에 염색 후 G:BOX (SYNGENE, UK)로 관찰하였다. RAPD 결과에서 분리한 균주는, 도 2에 도시된 바와 같이, 락토바실루스 람노수스T (ATCC 7469)와 다른 밴드 패턴을 보이고 있음을 확인할 수 있었다. 따라서 위 결과로부터 분변에서 분리한 균주는 락토바실루스 람노수스T(ATCC 7469)와 다른 신규 균주임을 확인하였다. 도 2에서 레인 2는 락토바실루스 람노수스T (ATCC 7469)의 결과이고, 레인 1은 시험 균주의 결과를 나타낸다.RAPD analysis was performed by PCR-RAPD (MyCycler, BIO-RAD, USA) using primers (GTG) 5 (5'-GTGGTGGTGGTGGTTG-3 ' Respectively. The final product, PCR product, was stained with EtBr (ethidium bromide) followed by G: BOX (SYNGENE, UK). As shown in FIG. 2, the strain isolated from the RAPD results showed a band pattern different from that of Lactobacillus lambatusus T (ATCC 7469). Therefore, it was confirmed that the strain isolated from the feces from the above results is a novel strain different from Lactobacillus lambatusus T (ATCC 7469). In Fig. 2, lane 2 is the result of Lactobacillus laminosus T (ATCC 7469), and lane 1 is the result of the test strain.

4) PFGE (Pulsed Field Gel Electrophoresis) 분석 4) Pulsed Field Gel Electrophoresis ( PFGE ) analysis

MRS broth에서 순수 배양된 락토바실루스 람노수스 CBT LR5, L. rhamnosus T(ATCC 7469) 및 L. rhamnosus GG(ATCC 53103)의 O.D.를 측정한 후 2% Low Melting Agarose를 이용하여 최종 O.D=4에 맞춰 플러그(plug)를 제작하였다. 제작된 플러그를 1㎖ 라이소자임 완충액(2 mg/㎖ Lysozyme (Sigma), 0.05% N-lauorylsarcosine (Sigma))에 넣고 4 mg/㎖ Lysostaphin(Sigma) 10 ㎕을 가한 후 37℃에서 밤새 반응시켰다. 플러그를 조심스럽게 꺼내 NDS 완충액(1 ㎖ 1M Tris-HCl(pH=8.0), 10 ㎖ 100% SDS, 89 ㎖ 0.5M EDTA(pH=8.5) 4 ㎖에 넣고 50℃에서 밤새 반응시켰다. 이후 가볍게 진탕하면서 50 mM EDTA(pH 8.5) 10 ㎖에서 플러그를 6번 세정한 후 처리하고자 하는 효소 완충액 400 ㎕에 플러그를 조심스럽게 옮기고 상온에서 30분 방치다. 플러그를 새로운 효소 완충액 400㎕에 옮긴 후 제한효소(20U)를 넣고 37℃에서 밤새 반응시켰다. 이때 제한효소는 NotI을 사용하였다. 전기영동은 CHEF 시스템(BIO-RAD, USA)을 이용하여 0.5X TBE에서 5.3cm/V, 1s~15s 펄스 타임, 20 시간 동안으로 실시하였다. In the MRS broth,Lactobacillus Lumosus CBT LR5,L. rhamnosus T(ATCC 7469) andL. rhamnosus After measuring OD of GG (ATCC 53103), a plug was made to the final OD of 4 using 2% Low Melting Agarose. The prepared plugs were placed in 1 ml lysozyme buffer (2 mg / ml Lysozyme (Sigma), 0.05% N-lauorylsarcosine (Sigma)) and 10 μl of 4 mg / ml Lysostaphin (Sigma) was added thereto and reacted overnight at 37 ° C. The plug was carefully removed and placed in 4 ml of NDS buffer (1 ml 1M Tris-HCl (pH = 8.0), 10 ml 100% SDS, 89 ml 0.5 M EDTA (pH = 8.5) and reacted overnight at 50 ° C. After washing the plug six times with 10 ml of 50 mM EDTA (pH 8.5), carefully transfer the plug to 400 μl of the enzyme buffer to be treated, and allow to stand for 30 minutes at room temperature. After transferring the plug to 400 μl of the new enzyme buffer, (Bio-Rad, USA), electrophoresis was performed using 0.5X TBE at 5.3 cm / V, 1s ~ 15s pulse time using a CHEF system (BIO-RAD, USA) , ≪ / RTI > for 20 hours.

전기영동이 완료된 후, EtBr 용액으로 염색한 후 G:BOX (SYNGENE, UK)로 밴드 패턴을 관찰하였다. NotI을 이용한 PFGE 결과, 분변에서 분리한 락토바실루스 람노수스 CBT LR5는 L. rhamnosus T(ATCC 7469) 및 L. rhamnosus GG(ATCC 53103)와 상이한 밴드패턴을 보이는 새로운 균주임을 확인하였다. 도 3에서 레인 1은 시험 균주의 결과이고, 레인 2는 락토바실루스 람노수스T(ATCC 7469)의 결과이며, 레인 3은 L. rhamnosus GG(ATCC 53103)의 결과이다. After the electrophoresis was completed, the band pattern was observed with G: BOX (SYNGENE, UK) after staining with EtBr solution. As a result of PFGE using NotI, Fecal Lactobacillus lambsos CBT LR5 was isolated from L. rhamnosus T (ATCC 7469) and L. rhamnosus GG (ATCC 53103) with a different band pattern. Lane 1 is the result of the test strain, lane 2 is the result of Lactobacillus laminosus T (ATCC 7469), lane 3 is the result of L. rhamnosus GG (ATCC 53103).

4) 기타 4) Other 균학적Mycology 특성  characteristic

본 발명에 따른 락토바실루스 람노수스 CBT LR5의 특성은 다음과 같다. Lactobacillus < RTI ID = 0.0 > Ramno Seuss Properties of CBT LR5 are as follows:

Figure 112015055170941-pat00001
Figure 112015055170941-pat00001

이상의 결과를 토대로 상기 균주를 “락토바실루스 람노수스 CBT LR5 (Lactobacillus rhamnosus CBT LR5)”균주로 명명하고, 2012년 5월 7일자로 대한민국 특허균주 기탁기관인 미생물자원센터(KCTC)에 기탁하여 수탁번호 KCTC 12202BP를 부여받았다. Based on the above results,Lactobacillus Lumosus CBT LR5 (Lactobacillus rhamnosus CBT LR5)"And deposited on May 7, 2012 with Microorganism Resource Center (KCTC), the depository of the Korean patented microorganism, and received the accession number KCTC 12202BP.

1-3. 기능성 및 안전성 1-3. Functionality and Safety

1) 효소활성 시험 (API 1) Enzyme activity test (API ZYMZYM kit) kit)

락토바실루스 람노수스 CBT LR5의 효소활성을 측정하기 위해 API ZYM 키트를 사용하여 생성 효소의 차이를 확인하였다. API ZYM 측정 결과, 락토바실루스 람노수스 CBT LR5(L. rhamnosus CBT LR5), L . rhamnosus T (ATCC 7469) 및 L. rhamnosus GG(ATCC 53103)의 효소 활성 여부를 확인하였을 때 락토바실루스 람노수스 CBT LR5와 L. rhamnosus GG(ATCC 53103)는 20개의 효소 지표 중 Naphol-AS-BI-포스포하이드롤라제, β-갈락토시다제 및 β-글루코시다제의 효소 활성이 동일하였다. Naphol-AS-BI-포스포하이드롤라제의 역할은 백혈구의 호중구가 식균 작용을 활성화하고 β-갈락토시다제의 역할은 대두와 같은 곡류에 많이 존재하여 대장 내 가스 발생을 유발하는 raffinose나 stachyose와 같은 당류를 분해시키는 효소이므로, 사람이나 동물에 있어서 정장효과를 내는 효소이다. β-글루코시다제의 역할은 그람 음성 병원체 균주 세포벽의 펩티도글리칸에 포함되어 있는 글루코스를 분해하여 병원성 균주의 성장을 저해시키는 효소이다. Lactobacillus In order to measure the enzymatic activity of ramno Versus CBT LR5 it confirmed the difference in the enzyme using API ZYM kit. The results of the API ZYM measurement, Lactobacillus Ramno Versus CBT LR5 (L. rhamnosus LR5 CBT), L. When the enzymatic activity of rhamnosus T (ATCC 7469) and L. rhamnosus GG (ATCC 53103) was confirmed, Lactobacillus lambatusus CBT LR5 and L. rhamnosus GG (ATCC 53103) The enzyme activities of phosphohydrolase,? -Galactosidase and? -Glucosidase were the same. The role of Naphol-AS-BI-phosphohydrolase is that neutrophils in white blood cells activate phagocytosis and the role of β-galactosidase is present in many cereals such as soybean, raffinose or stachyose , And thus it is an enzyme that produces a dressing effect in humans and animals. The role of? -glucosidase is an enzyme that degrades the pathogenic strain by degrading the glucose contained in the peptidoglycan of the cell wall of gram-negative pathogenic strain.

위와 같이 분변에서 분리된 락토바실루스 람노수스 CBT LR5는 L. rhamnosus GG(ATCC 53103)와 거의 유사한 효소활성을 보이며, L. rhamnosus T (ATCC 7469) 보다는 더 우수한 균주라고 여겨진다. Lactobacillus isolated from feces Ramno Versus CBT LR5 is seen a substantially similar activity and L. rhamnosus GG (ATCC 53103), is considered as better than the strain L. rhamnosus T (ATCC 7469).

2) 항생제 내성 실험2) Antibiotic resistance test

분리된 락토바실루스 람노수스 CBT LR5(L. rhamnosus CBT LR5)의 안전성을 검증하기 위해 항생제 내성을 분석하였다. 항생제 내성실험은 European Food Safety Authority (EFSA)에서 추천하는 micro-dilution 방법을 이용하여 수행하였으며, 실험에 사용된 항생제는 10종으로 암피실린(AMP), 반코마이신(VAN), 젠타미신(GEN), 카나마이신(KAN), 스트렙토마이신(STM), 에리트로마이신(ERM), 시너시드(Q/D), 클린다마이신(CLM), 테트라사이클린(TET) 및 클로람페니콜(CP)이다.Isolated Lactobacillus To verify the safety of ramno Versus CBT LR5 (L. rhamnosus CBT LR5) antibiotic resistance were analyzed for. Antibiotic resistance tests were carried out using the micro-dilution method recommended by the European Food Safety Authority (EFSA). Ten antibiotics were used: ampicillin (AMP), vancomycin (VAN), gentamicin (GEN), kanamycin (KAN), streptomycin (STM), erythromycin (ERM), cinnamic acid (Q / D), clindamycin (CLM), tetracycline (TET) and chloramphenicol (CP).

클린다마이신을 제외한 항생제에 대해서는 ISO-sensitest broth 10%와 MRS broth 90%를 혼합한 broth에 256, 128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0.5 ㎍/㎖의 농도로 첨가하고, 클린다마이신은 락토바실루스 그룹의 EFSA 브레이크 포인트 값이 0.25 ㎍/㎖ 이하이기 때문에 항생제의 농도는 16, 8, 4, 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0.0625, 0.03125 ㎍/㎖의 농도로 첨가해 사용하였다. 또한, 시너시드는 BioMeriux 사의 E-테스트 스트립을 이용하여 진행하였다. For antibiotics except for clindamycin, the concentrations of 256, 128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1 and 0.5 ㎍ / ㎖ were added to broth mixed with ISO-sensitized broth 10% and MRS broth 90% Since clindamycin has an EFSA breakpoint value of less than 0.25 μg / ml in the Lactobacillus group, antibiotics are added at concentrations of 16, 8, 4, 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0.0625 and 0.03125 μg / Respectively. In addition, the thinner was carried out using an E-test strip of BioMeriux.

마이크로플레이트를 37℃하 혐기성 조건하에서 48시간 동안 인큐베이션하고, 이어서 MIC를 가시적인 성장이 관찰되지 않는 최저 항생제 농도로 측정하였다. EFSA 브레이크포인트에 기초하여, 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 (Lactobacillus rhamnosus CBT LR5)가 각각의 항생제에 대해서 내성이 있는지 여부를 확인하여 하기 표 2에 나타었다. The microplate was incubated at 37 캜 under anaerobic conditions for 48 hours, and then the MIC was measured at the lowest antibiotic concentration at which no visible growth was observed. Based on the EFSA breakpoint, Lactobacillus The results are shown in Table 2 below, confirming the resistance of the respective antibiotics to LAMBO LR5 ( Lactobacillus rhamnosus CBT LR5 ).

항생제Antibiotic MICMIC of CBT LR5 of CBT LR5 EFSAEFSA breakpoint (mg/L) breakpoint (mg / L) 암피실린 (AMP)Ampicillin (AMP) <1<1 44 반코마이신(VAN)Vancomycin (VAN) >256> 256 nrnr 젠타마이신(GEN)Gentamicin (GEN) <16<16 1616 카나마이신(KAN)Kanamaishi (KAN) <64<64 6464 스트렙토마이신(ST)Streptomycin (ST) <32<32 3232 에리쓰로마이신(ERM)Erythromycin (ERM) <0.5<0.5 1One 클린다마이신(CM)Clindamycin (CM) <1<1 1One 시너시드(Q/D)Thinner (Q / D) <0.38<0.38 44 테트라사이클린(TET)Tetracycline (TET) <1<1 88 클로람페니콜(CP)Chloramphenicol (CP) <4<4 44

분리된 락토바실루스 람노수스 CBT LR5은 실험에 사용된 모든 항생제에 대한 내성이 EFSA 항생제 내성기준 보다 낮게 나타났기 때문에 EFSA의 항생제에 대한 안정성 기준에 적합한 것으로 확인되었다. Isolated Lactobacillus Lambsos CBT LR5 was found to be suitable for the antibiotic safety criteria of EFSA because the resistance to all antibiotics used in the experiment was lower than the EFSA antibiotic resistance standard.

3) 3) 장정착성Long-term fixability 실험 Experiment

락토바실루스 람노수스 CBT LR5의 장 정착성 측정은 락토바실루스 람노수스 T (ATCC 7469)를 대조군으로 하여 사람의 대장 상피세포에서 유래한 HT-29 세포주에서 실시하였다. HT-29 세포주에 각 균주들을 1시간 처리한 후 그람 염색과 생균수를 측정함으로써 균주들의 장 정착능을 비교하여 하기 표 3에 타내었다. Lactobacillus The measurement of intestinal fixation of Lambsus CBT LR5 was carried out using Lactobacillus L-carnosus T (ATCC 7469) was used as a control in HT-29 cell line derived from human colon epithelial cells. HT-29 cell lines treated with each strain for 1 hour, and then the number of viable cells and the number of viable cells were measured. The results are shown in Table 3 below.

락토바실루스 람노수스 CBT LR5Lactobacillus Lambosus CBT LR5 락토바실루스 람노수스T Lactobacillus Lambosus T 장정착률(%)Long-term settlement rate (%) 90.8590.85 75.1075.10

장 정착성 측정 결과, 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주는 락토바실루스 람노수스 T (ATCC 7469) 균주 보다 우수한 장 정착성을 보이는 균주임을 확인하였다. 이러한 결과는 본 발명의 상기 균주가 장 상피세포에 부착하여 장내 환경을 개선할 수 있음을 나타낸다. Chapter fixing performance measurement, Lactobacillus The Lambsus CBT LR5 strain was transformed with Lactobacillus It was confirmed that the strains exhibit excellent intestinal fixation properties than the Lambnosus T (ATCC 7469) strain. These results indicate that the strain of the present invention can improve the intestinal environment by adhering to the epithelial cells.

실시예Example 2. 비만 및  2. Obesity and 대사성증후군에Metabolic Syndrome 대한  About 락토바실루스Lactobacillus 람노수스Lumosus CBT LR5 균주의 투여 영향 Effect of administration of CBT LR5 strain

이하 실시예에서 본 발명의 균주의 특성과 항비만 효능을 입증한다. 모든 실시예의 실험 결과는 평균(mean)±표준편차(SD)로 표시하였고, 실험 결과의 통계처리는 GraphPad PrismTM 6.0을 이용하였으며 실험군 간 평균의 차이는 one-way ANOVA로 유의성을 확인한 후 Tukey's multiple range test를 이용하여 사후 검증하였다. The following examples demonstrate the characteristics and anti-obesity efficacy of the strains of the present invention. The results of all the experiments were expressed as mean ± SD. Statistical analysis of the experimental results was performed using GraphPad Prism ™ 6.0. The mean difference between the experimental groups was determined by one-way ANOVA and then Tukey's multiple range test.

2.1. 본 발명의 균주의 배양물 및 그를 포함하는 조성물의 제조2.1. The culture of the strain of the invention and the preparation of a composition comprising it

생체내(in vitro) 실험을 위해서, 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주(KCTC 12202BP)를 MRS 아가(BD Diagnstics, Sparks, MD)에서 24시간 37℃에서 배양하였고, 인산염 버퍼 용액(PBS, 10 mM 인산나트륨, 130mM 염화나트륨, pH 7.4)에 1011 CFU/ml로 희석하여 초음파처리 후, 상청액을 원심 분리하여 0.45 ㎛ 포어 사이즈의 필터로 여과하고, 동결 건조한 후 -20℃에 생체내 실험 전까지 보관하였다. For in vitro experiments, Lactobacillus &lt; RTI ID = 0.0 &gt; The Lambsus CBT LR5 strain (KCTC 12202BP) was cultured in MRS agar (BD Diagnostics, Sparks, MD) for 24 hours at 37 ° C and 10 11 CFU in phosphate buffer solution (PBS, 10 mM sodium phosphate, 130 mM sodium chloride, pH 7.4) / ml. After the supernatant was centrifuged, the supernatant was filtered through a 0.45 mu m pore size filter, lyophilized and stored at -20 DEG C until in vivo experiment.

- 항비만 조성물 제조- Preparation of anti-obesity composition

본 발명의 혼합균주 조성물에 포함되는 유산균 균주의 배양을 위한 발효 배지는 탈지분유와 대두 분리 단백질을 각각 단독 혹은 혼합하여 1%-10% (w/v) 수용액으로 만든 후 유산균종에 따라 단백질 대비 0.01%-1% (w/w) 범위의 단백분해 효소 (Delvolase; DSM, 네덜란드) 용액을 가하여 효소처리하였다. The fermentation medium for the cultivation of the lactic acid bacteria strain contained in the mixed strain composition of the present invention is prepared by preparing a 1% -10% (w / v) aqueous solution of skimmed milk powder and soy protein isolate, respectively, (Delvolase; DSM, Netherlands) solution in the range of 0.01% -1% (w / w).

혼합 균주 조성물은 다음과 같이 제조하였다. 효소처리 후 상기 효소처리 반응액에 0.1%-5% (w/v) 범위의 포도당, 유당, 과당, 혹은 자당 등의 당류, 0.1%-5% (w/v) 범위의 효모추출물, 0.1%-5% (w/v) 범위의 소이펩톤, 0.01%-0.1% (w/v) 범위의 암모니움 시트레이트, 소디움 아세테이트, 디포타시움 포스페이트, 마그네슘 설페이트, 망간 설페이트, 소디움 클로라이드의 이온성분을 첨가하고 용해시켜 유산균 배양배지를 준비하였다. 준비된 유산균 배양배지는 열교환기 (Heat exchanger)를 이용하여 살균하였다. 준비된 유산균 발효 배지에 전배양한 유산균 종균을 0.1%-1% (v/v) 수준으로 접종하고 37℃, pH 5.0-6.0 범위에서 유지되도록 하여 8시간-10시간 동안 발효배양하였다. 유산균 배양이 종료된 후 유산균체를 연속식 원심분리기를 이용하여 분리 및 농축하였다. 분리된 유산균체는 동결보호제 등을 첨가하여 동결건조시킨 후 분쇄기를 이용하여 유산균체를 분쇄하여 일정한 입도를 가지게 한 후 유산균 원말로 제조하였다. 제조된 유산균 원말은 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 유산균 (1.25X108 CFU/g 이상)와 비피도박테리움 브레베 CBT BR3 비피더스균 (1.25X108 CFU/g 이상)을 포함하였다. 각 유산균종을 부형제와 함께 혼합하여 캡슐당 500 mg이 되도록 혼합하였으며, 총 생균수는 2.5x109 CFU/g이 되도록 히드록시프로필메틸셀룰로오스 캡슐로 제조하였다. The mixed strain composition was prepared as follows. After the enzyme treatment, the yeast extract in the range of 0.1% to 5% (w / v), the yeast extract in the range of 0.1% to 5% (w / v), the starch such as sucrose, Addition of ionic constituents of soymilk citrate, sodium acetate, dipotassium phosphate, magnesium sulfate, manganese sulfate, sodium chloride in the range of 5% (w / v) soy peptone, 0.01% -0.1% (w / v) And dissolved to prepare a lactic acid bacteria culture medium. The prepared culture medium for lactic acid bacteria was sterilized using a heat exchanger. The lactic acid bacteria that had been pre-cultured in the prepared lactic acid fermentation medium were inoculated at a level of 0.1% -1% (v / v) and fermented for 8 hours to 10 hours so as to maintain the pH at 5.0-6.0 at 37 ° C. After the cultivation of the lactic acid bacteria was completed, the lactic acid bacteria were separated and concentrated using a continuous centrifuge. The isolated lactic acid bacteria were lyophilized by adding a cryoprotectant, etc., followed by pulverizing the lactic acid bacteria using a pulverizer to have a uniform particle size and then producing lactic acid bacteria. Lactic acid bacteria are Lactobacillus powder concentrate produced Ramno Seuss CBT LR5 lactic acid bacteria (1.25X10 8 CFU / g or more) and Bifidobacterium Breve CBT was BR3 include bifidobacteria (1.25X10 8 CFU / g or higher). Each lactic acid bacterium was mixed with excipient and mixed to 500 mg per capsule. The total number of viable cells was adjusted to 2.5 x 10 9 CFU / g to prepare a hydroxypropylmethylcellulose capsule.

2.2. 비만 동물 모델 및 샘플링2.2. Obese animal models and sampling

동물실험은 Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC)의 Animal use and Care Protocol을 준수하여 진행하였다. 실험동물은 ㈜새론바이오 (Uiwang, Korea)에서 수컷 SD 실험용 쥐 6주령을 (그룹당 6마리) 구입하여 일주일 동안 적응기간을 가진 후, 8주간 사육이 진행되었고, 사육환경은 24℃, 습도 55%에서 light cycle이 12시간 유지되었다. 비만을 유도하기 위해, 8주간 고지방사료 (60 kcal% fat; Research Diets Inc, NJ, USA)를 섭취하도록 하였으며, 음용수는 자유롭게 섭취하도록 하였다. Animal experiments were conducted in accordance with the Animal Use and Care Protocol of the Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). Experimental animals were purchased for 6 weeks for male SD rats from Uiwang, Korea. After 6 weeks of adaptation period, they were fed for 8 weeks. Breeding conditions were 24 ℃, 55% The light cycle was maintained for 12 hours. To induce obesity, high fat diets (60 kcal% fat; Research Diets Inc, NJ, USA) were consumed for 8 weeks.

동물들을 임의의 3개 군으로 나누었다: The animals were divided into random groups of 3:

실험군 I(NC): 정상 식이 정상 대조군,  Experimental group I (NC): normal diet, normal control group,

실험군 II(PC): 고지방 식이 공급 비만 유도군 Experimental group II (PC): high fat diets fed obesity group

실험군 III(CBT LR5) 고지방 식이 공급 비만 유도+ 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주 투여된 군. Experimental group III (CBT LR5) High fat diet supply Obesity induction + Lactobacillus Ramno Versus CBT LR5 the group administered strain.

실험군 IV(CBT LR5+CBT BR3) 고지방 식이 공급 비만 유도+ 락토바실루스 람노수스 CBT LR5+비피도박테리움 브레베 CBT BR3 균주 투여된 군. Experimental group IV (CBT LR5 + CBT BR3) High fat diets fed Obesity induction + Lactobacillus Lambsos CBT LR5 + Bifidobacterium breve CBT BR3 strain.

실험군 III 및 IV의 경우에는,고지방 식이에 의해서 비만 유도 후, 동결건조된 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주 또는 락토바실루스 람노수스 CBT LR5와 비피도박테리움 브레베 CBT BR3 균주를 음용수에 섞어 위장관을 통하여 8주 동안 107 cfu/마리/일의 매일 투여량으로 투여하였다. 정상대조군(NC) 및 비만유도군(PC)에는 위약으로서 동일한 방식으로 PBS를 투여하였다.In the case of Experiments III and IV, after induction of obesity by high fat diet, the freeze-dried lactobacillus of the present invention Lambsus CBT LR5 strain or Lactobacillus Ramno Versus through the CBT LR5 and Bifidobacterium breve CBT gastrointestinal mix BR3 strain in the drinking water was administered in a daily dose of 10 7 cfu / tablets / day for 8 weeks. Normal control (NC) and obesity induction group (PC) were administered PBS in the same manner as placebo.

2.3 본 발명의 균주의 3T3-L1 2.3 The 3T3-L1 of the strain of the present invention 지방전구세포에서In fat precursor cells 지방세포로의 분화 억제 효과 Inhibitory effect on the differentiation of adipocytes

3T3-L1 지방전구세포(ATCC, Manassas, VA, USA)를 10% 우아혈청(calf serum)(Gibco, Grand Island, NY, USA)을 첨가한 Dulbecco's modified Eagle's 배지(DMEM, Gibco)에 1% 페니실린-스트렙토마이신(PS, Lonza, Allendale, NJ, USA)을 넣어 배양시켰다. 지방세포의 분화를 유도하기 위해, 0.5 mM 3-이소부틸-1-메틸크산틴, 100 μM 인도메타신, 0.25 μM 덱사메타손, 167 nM 인슐린을 배지에 넣어 이틀간 배양하였다. 그 후부터 이틀 간격으로 167 nM 인슐린과 10% 우태아 혈청 (Gibco)을 첨가한 DMEM으로 배지를 교환하여 10일간 분화를 유도하였다. 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주 상청액 (100 ㎍/㎖)은 분화 시작부터 10일간 배지와 함께 처리하였으며 이틀 주기로 교환하여 처리하였다. (Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM, Gibco) supplemented with 10% calf serum (Gibco, Grand Island, NY, USA) was inoculated with 1% penicillin - streptomycin (PS, Lonza, Allendale, NJ, USA). To induce differentiation of adipocytes, 0.5 mM 3-isobutyl-1-methylxanthine, 100 μM indomethacin, 0.25 μM dexamethasone, and 167 nM insulin were added to the culture medium for two days. After that, the medium was replaced with DMEM supplemented with 167 nM insulin and 10% fetal bovine serum (Gibco) at intervals of two days to induce differentiation for 10 days. Lactobacillus The supernatants of Lambsus CBT LR5 strain (100 占 퐂 / ml) were treated with the medium for 10 days from the beginning of differentiation and treated by exchanging them every two days.

3T3-L1 지방전구세포에 24 시간동안 지질다당체(LPS)(10 ㎍/㎖; Sigma, St. Lpuis, MO, USA)와 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주 상청액을 함께 자극하거나 LPS만으로 단독 자극하였다. 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주가, 3T3-L1 세포가 지방전구세포에서 지방세포로 분화되는 과정에 작용하여 지방구의 생성을 억제하는지를 확인하기 위해서, 오일 레드 O(Sigma Chemicals Co.) 염색액을 이용하여 염색하였다. 염색된 3T3-L1 세포 내에 생성된 지방구를 현미경으로 관찰하며 촬영하였다. 이후 지질의 정량(lipid content)을 위해, 이소프로판올로 30분간 탈염시켜서 염색약을 회수하고 520 nm에서 세포단층의 흡광도를 측정하여 아래와 같이 산출하고, 그 결과를 도 4에 나타내었다.For 24 hours in 3T3-L1 preadipocytes lipid polysaccharide (LPS) (10 ㎍ / ㎖ ; Sigma, St. Lpuis, MO, USA) and Lactobacillus ramno Versus stimulation with CBT LR5 strain supernatant was alone or stimulation of only LPS. The lactobacillus of the present invention In order to confirm that the Lambsus CBT LR5 strain acts on the differentiation of 3T3-L1 cells from adipocyte precursor cells into adipocytes and inhibits the production of lipid spheres, a dyeing solution of Oil Red O (Sigma Chemicals Co.) Respectively. The lipids produced in the stained 3T3-L1 cells were observed under a microscope. Then, for lipid content of lipids, the dye was recovered by desalting with isopropanol for 30 minutes, and the absorbance of the cell monolayer was measured at 520 nm and calculated as follows. The results are shown in FIG.

지방 축적률(%) = 100-(A-B)/A x 100 Fat accumulation rate (%) = 100- (A-B) / A x 100

A: A520 nm [대조군] A: A 520 nm [control group]

B: A520 nm [CBT LR5 시료] B: A 520 nm [CBT LR5 sample]

지방조직생성 (adipogenesis)은 지방선구세포(preadipocyte)가 증식 및 분화과정을 거쳐 성숙한 지방세포(adipocyte)로 변화되는 과정이며, 비만은 지방세포의 부피나 수가 늘어날 때 주로 발생한다. Adipogenesis is a process in which preadipocytes are transformed into mature adipocytes through proliferation and differentiation, and obesity occurs mainly when the volume or number of adipocytes is increased.

도 5A-E를 참고하면, 분화배지 (differentiation media, DM)를 6일간 처리한 군에 비해서 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주 상청액 (100 ㎍/㎖)을 분화배지에 함께 처리한 군에서 염색된 지방구 수가 39.8%로 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과를 통해서 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주가 지방전구세포에서 지방세포로의 분화를 억제하는 효능이 우수하다는 것을 확인할 수 있다. 또한 오일-레드-O로 염색된 세포내에서 축적된 지방의 양을 분광분석기에 의해 정량한 결과, 역시 O.D. 값이 대폭 감소하였다(도 5E). 5A-E, the group treated with Lactobacillus lambosus CBT LR5 strain supernatant (100 μg / ml) of the present invention in the differentiation medium was compared with the group treated with differentiation media (DM) for 6 days And the number of dyed lipids decreased to 39.8%. These results indicate that the lactobacillus of the present invention It can be confirmed that the Lambsus CBT LR5 strain has an excellent inhibitory effect on the differentiation from adipocytes into adipocytes. Also, the amount of fat accumulated in the oil-red-O stained cells was quantified by a spectroscopic analyzer, and the OD value was also greatly reduced (FIG. 5E).

2.4 2.4 락토바실루스Lactobacillus 람노수스Lumosus CBT LR5 균주의 IL-6,  CBT LR5 strain IL-6, TNFTNF -α, 및 IL--α, and IL- 1β1β 분비 억제 효과 Secretion inhibitory effect

- 쥐의 3T3-L1 세포에서의 - in mice 3T3-L1 cells TNFTNF -α, IL-6 및 IL--α, IL-6 and IL- 1β1β 저해 Inhibition

3T3-L1 세포에 24시간 동안 LPS (10 g/ml)와 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주 상청액(100 ㎍/㎖)을 함께 자극하거나 LPS만을 단독 자극한 후에 전염증 사이토카인인 IL-6, TNF-α 및 IL-1β의 분비를 ELISA에 의해 측정하였다. 3T3-L1 cells were treated with LPS (10 g / ml) and lactobacillus Ramno Versus CBT LR5 strain supernatant was measured by a proinflammatory cytokine secretion of IL-6, TNF-α and IL-1β after stimulation with (100 ㎍ / ㎖) or LPS alone stimulated only in ELISA.

3T3-L1 세포에 LPS를 단독 자극하였을 때 IL-6, TNF-α 및 IL-1β의 분비가 정상대조군에 비해 증가하였다(p<0.001, 도 6A-C). 반면에 LPS를 락토바실루스 람 노수스 CBT LR5 균주 상청액 또는 락토바실루스 람노수스 CBT LR5와 비피도박테리움 브레베 CBT BR3 균주의 상청액과 함께 자극하였을 때 LPS 단독 자극에 비해 IL-6, TNF-α 그리고 IL-1β의 분비가 감소하였다 (p<0.001).When LPS alone stimulated 3T3-L1 cells, the secretion of IL-6, TNF-α and IL-1β was increased (p <0.001, FIG. 6A-C). On the other hand, when LPS is added to lactobacillus Ram furnace Versus CBT LR5 strain supernatant or Lactobacillus Lambsus CBT LR5 and Bifidobacterium Breve CBT when BR3 hayeoteul stimulated with the supernatant of the strains compared to LPS alone stimulated the secretion of IL-6, TNF-α and IL-1β was reduced (p <0.001).

영양소 또는 대사물질 공급과잉에 의해 발생하는 염증반응에 대하여 최근‘metaflammation’이라는 용어가 등장하고, 비만을“만성적인 낮은 수준의 염증(chronic and low-level inflammation)”으로 해석하는 등, 비만과 면역체계와의 상관관계에 대한 연구가 활발히 진행 중에 있다. 그 예로, 선천성 면역 반응(innate immune response)에 관여하는 TLR4(toll-like receptor 4)의 경우 식이성지방(특히, 포화지방산)을 리간드로 사용하여 염증반응 및 인슐린저항성 경로에서 중요한 요소로 작용한다. 고지방식이에 의해 비만이 유도되면 체액에 유리지방산 이 증가하게 되고, TLR4에 유리지방산이 리간드로 결합하면 IKK를 활성화시켜 NF-kB를 활성화시키고, 전염증성 사이토카인 (pro-inflammatory cytokine)인 TNF-α, IL-6 등의 분비를 촉진하여 염증반응을 일으키는 것으로 알려져 있다. 그 외에도 TNF-α 및 IL-6은 SOCS3(cytokine signalling 3)과 JNK를 활성화시킴으로써 인슐린 수용체 기질(IRS)의 세린(serine) 잔기를 인산화하여 당(glucose) 수송을 저해하고, 간 또는 근육 등의 말초조직에서 인슐린저항성을 유도하는 것으로 알려져 있다. 특히 TNF-α의 합성은 비만을 증가시키고 인슐린과 렙틴 내성의 발달에 기여하여, 체중 조절 및 당 대사 조절기능을 저해한다(De Souza 등, 2005. Endocrinology., 146: 4192~9).Recently, the term 'metaflammation' has emerged for the inflammatory response caused by overfeeding of nutrients or metabolites, and obesity is interpreted as 'chronic and low-level inflammation' Research on the correlation with the system is actively underway. For example, toll-like receptor 4 (TLR4), which is involved in the innate immune response, plays an important role in the inflammatory response and insulin resistance pathway by using dietary fat (especially saturated fatty acid) as a ligand . In this study, we investigated the effect of NF-κB on the proliferation of NF-κB and pro-inflammatory cytokine (TNF) -α, IL-6, and the like. In addition, TNF-α and IL-6 phosphorylate the serine residues of the insulin receptor substrate (IRS) by activating SOCS3 (cytokine signaling 3) and JNK, inhibiting glucose transport, It is known to induce insulin resistance in peripheral tissues. In particular, the synthesis of TNF-α increases obesity and contributes to the development of insulin and leptin resistance, thereby inhibiting weight control and glucose metabolism (De Souza et al., 2005. Endocrinology., 146: 4192-9).

도 6의 결과를 통해서 확인되는 바와 같이, 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주는 TNF-α, IL-1β 및 IL-6를 감소시키는데 효과적이고, 따라서 비만으로 인해 유도된 내장지방조직의 만성적 염증활성화를 현저히 개선하고, 당대사를 조절하며, 인슐린 저항성을 예방 또는 치료하는 효과가 있다는 것을 확인할 수 있다. As can be seen from the results of FIG. 6, the lactobacillus of the present invention The Lambsos CBT LR5 strain is effective in reducing TNF-a, IL-1 beta and IL-6 and thus significantly improves chronic inflammatory activation of obesity-induced visceral adipose tissue, regulates glucose metabolism, Prevention or treatment of the disease.

- 공동배양된 쥐의 3T3-L1 지방세포 및 - Co-cultured rat 3T3-L1 adipocytes and 말초혈액단핵구세포(PBMC)에서In peripheral blood mononuclear cells (PBMC) LPSLPS 유도된 NO의 저해 Inhibition of induced NO

쥐의 3T3-L1 지방세포와 말초혈액단핵구세포(PBMC)를 96 웰의 플레이트에 공동배양하고, 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5를 사용하여 1시간 동안 배양된 후 LPS (10 ㎍/mL)를 사용하여 48 시간 동안 실험하였다. 상청액을 ELISA 키트(R&D Biosystems)에 의해 NO에 관하여 분석하여, 그 결과를 도 7에 나타내었다. 도 7을 통해서 확인되는 바와 같이, 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5의 투여는 LPS 실험 이후 이들 세포에서 산화질소(NO) 제조를 저해하였다. 3T3-L1 adipocytes and peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were co-cultured in 96-well plates and cultured for 1 hour with the Lactobacillus lambatusus CBT LR5 of the present invention, followed by LPS (10 / / mL) For 48 hours. The supernatant was analyzed for NO by an ELISA kit (R & D Biosystems) and the results are shown in FIG. As can be seen from Fig. 7, the lactobacillus of the present invention Ramno Versus administration of CBT LR5 was inhibited LPS experiments since nitric oxide (NO) production in these cells.

2.5 2.5 락토바실루스Lactobacillus 람노수스Lumosus CBT LR5 균주의 글루코오스,  Glucose of CBT LR5 strain, 트리글리세라이드Triglyceride , , 총단백질Total protein 및 콜레스테롤의 혈중 농도에 대한 효과 And Cholesterol on Blood Concentration

실험용 쥐를 약 15시간 동안 절식시키고 Zoletil (30 mg/kg 체중)을 이용하여 마취 후 심장에서 혈액을 채취하였다. 채취된 혈액을 2,000×로 20분간 원심분리한 후, 자동혈액화학 검사기(automatic blood chemical analyzer) 7020 (Hitachi, Japan)를 이용하여 혈장 글루코오스, 콜레스테롤, HDL-콜레스테롤, LDL-콜레스테롤, 총단백질, 트리글리세라이드(TG) 농도를 ELISA에 의하여 측정하였다 (BDBioscience, San Diego, CA, USA). Experimental rats were fasted for about 15 hours and blood was collected from the heart after anesthesia with Zoletil (30 mg / kg body weight). Cholesterol, HDL-cholesterol, LDL-cholesterol, total protein, triglyceride, and the like were measured using an automatic blood chemical analyzer 7020 (Hitachi, Japan) after centrifuging the collected blood at 2,000 × for 20 minutes. Seride (TG) concentrations were measured by ELISA (BDBioscience, San Diego, CA, USA).

락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주의 섭취가 지질대사에 미치는 영향을 규명하기 위해 혈액화학검사기로 측정한 결과, 총단백질, 콜레스테롤, HDL, LDL, 글루코오스, 트리글리세라이드 부분에서 통계적 유의성 (p<0.001)이 있었다. Lactobacillus There was statistical significance (p <0.001) in the total protein, cholesterol, HDL, LDL, glucose and triglyceride parts of the blood samples of the Lambsus CBT LR5 strain.

　 정상대조군Normal control group 비만유도군Obesity induction group CBT LR5 투여군CBT LR5 treated group CBT LR5+ CBT BR3CBT LR5 + CBT BR3 L. L. rhamnosusrhamnosus GG GG 글루코오스Glucose 142.08±12.48142.08 ± 12.48 205.63±48.43205.63 ± 48.43 138.99±20.85# 138.99 ± 20.85 # 130.34±17.32130.34 ± 17.32 180.36±38.23180.36 + - 38.23 총단백질Total protein 6.12±0.266.12 ± 0.26 6.98±0.246.98 + 0.24 6.31±0.23## 6.31 ± 0.23 ## 6.29±0.256.29 ± 0.25 6.57±0.256.57 ± 0.25 콜레스테롤cholesterol 49.73±12.1949.73 ± 12.19 85.64±8.3885.64 8.38 60.72±9.40## 60.72 ± 9.40 ## 55.38±7.5655.38 + - 7.56 65.36±8.3865.36 8.38 TGTG 37.97±18.7137.97 ± 18.71 68.36±11.5268.36 + - 11.52 54.87±15.6454.87 ± 15.64 59.11±14.9359.11 + - 14.93 59.43±17.3659.43 ± 17.36 HDLHDL 18.47±1.6718.47 ± 1.67 16.16±2.5216.16 + - 2.52 24.74±4.51## 24.74 ± 4.51 ## 28.12±1.8528.12 ± 1.85 19.78±3.4319.78 ± 3.43 LDL LDL 5.91±1.545.91 + 1.54 14.08±2.1814.08 ± 2.18 8.90±1.12## 8.90 ± 1.12 ## 7.94±2.577.94 + - 2.57 11.14±1.7911.14 ± 1.79 숫자 옆의 기호(##)는 one-way ANOVA를 실시한 후 Turkey's multiple range 테스트를 이용하여
P < 0.001에서의 다른 식이 그룹들 (dietary groups)과 유의적인 차이를 나타낸 것이다.The symbol next to the number (##) is used for one-way ANOVA followed by Turkey's multiple range test
And significantly different from other dietary groups at P <0.001.

상기 표 4의 결과를 통해서 확인되는 바와 같이, 혈청에서 콜레스테롤, 총단백질, HDL, LDL, 글루코오스 및 트리글리세라이드의 농도는 정상대조군(NC)군과 비교하여 고지방식이 비만유도군(PC)에서 유의적으로 증가되어 LPS로 인한 비만이 유발됨을 확인하였다. 한편, 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주의 투여에 따라서 콜레스테롤, 총단백질, LDL, 글루코오스 모두가 비만유도군(PC)과 비교하여 유의적으로 감소됨을 확인하였다. 특히 CBT LR5 투여군은 비만유도군(PC)과 비교하여 글루코오스, 콜레스테롤, 및 트리글리세라이드의 농도를 대폭 감소시키는 효과가 있는 것을 확인하였다. 특히 아울러 비만유도군에게 락토바실루스 람노수스 CBT LR5을 보충 섭취시킨 결과 혈당이 33% 유의하게 감소시켰다.As can be seen from the results of Table 4, the concentration of cholesterol, total protein, HDL, LDL, glucose and triglyceride in the serum was higher in the high fat diet group than in the normal control group (NC) And it was confirmed that obesity caused by LPS was induced. On the other hand, the lactobacillus Ramno Versus CBT cholesterol according to the administration of the strains LR5, total protein, LDL, glucose, all confirmed that reduced significantly as compared to fat fed group (PC). In particular, the CBT LR5 administration group was found to have an effect of significantly reducing the concentrations of glucose, cholesterol, and triglyceride as compared with the obesity induction group (PC). Particularly, in the induction of obesity, lactobacilli Ramno Versus results were supplemented glucose intake CBT LR5 is significantly decreased by 33%.

비만에서, 세포 당 세포질의 트리글리세라이드의 양이 증가되면 새로운 지방 세포의 생성 때문에 지방 조직 덩어리(adipose tissue mass)가 증가하고, 이로 인해서 지방세포가 발달되는데, 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 투여군은 비만유도군(PC)과 비교하여 트리글리세라이드를 20% 이상 감소시켰다. 또한 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 투여군은 비만유도군(PC)과 비교하여 조직세포에 존재하는 과잉의 콜레스테롤을 제거하는 기능이 있는 HDL은 증가시켰고, 죽상동맥경화증을 일으킬 수 있는 LDL은 50% 가까이 감소시키는 것을 확인하였다. In obesity, when the amount of cytoplasmic triglyceride per cell is increased, adipose tissue mass is increased due to the production of new adipocytes, and adipose cells are developed thereby. Lactobacillus The Lymphosus CBT LR5 treated group reduced triglyceride by more than 20% compared with the obese induction group (PC). Also, Lactobacillus The LR5-treated group of Lambsus CBT increased the HDL, which is capable of eliminating excess cholesterol present in tissue cells, compared with the obese induction group (PC), and confirmed that LDL, which can cause atherosclerosis, was reduced by 50% Respectively.

2.6 2.6 락토바실루스Lactobacillus 람노수스Lumosus CBT LR5 균주가  CBT LR5 strain 비만유도Induction of obesity 실험동물에서 체중,  In the experimental animals, 간조직Liver tissue 무게에 미치는 효과 Effect on weight

락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주의 비만억제 효과를 관찰하기 위해, 실험용 쥐를 8주 동안 고지방사료를 섭취하도록 하여 비만을 유도하였다. 실험 전과 종료 후, 각 그룹의 실험용 쥐들의 체중을 측정하였고, 실험 종료 후, Zoletil을 사용하여 마취한 후, 개복하여 간을 적출한 후, 무게를 측정하여, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다. Lactobacillus In order to observe the effect of Lambsus CBT LR5 on obesity, obesity was induced by consuming high fat diets for 8 weeks in experimental rats. Before and after the experiment, the body weight of the experimental rats in each group was measured. After completion of the experiment, the mice were anesthetized using Zolethyl, and then the liver was harvested and weighed. The results are shown in Table 5 .

체중 변화, 간 및 지방조직 무게에 미치는 영향을 알아보기 위해 측정한 결과, 실험동물의 체중 변화는 정상대조군(NC)에 비해 비만유도군 (NC; 515.67vs PC; 650.71)의 체중이 증가되어 비만이 유도되었음을 확인하였다. 체중 변화량은 비만유도군(PC)에 비해 CBT LR5을 섭취한 군에서 유의미하게 감소하였다 (p<0.001). 락토바실러스 람노수스 CBT LR5을 섭취한 군은 고지방 식이만 섭취한 군(PC)과 비교하여 체중 증가가 현저히 억제되었음을 알 수 있었다. 하기의 표 4에 나타난 바와 같이 8주간의 체중 증가량을 보면, 락토바실러스 람노수스 CBT LR5군은 534.63이고, 고지방식이군은 650.71로서 락토바실러스 람노수스 CBT LR5에 의해 체중 증가가 대략 50% 정도 억제되었음을 확인하였다.Weight change, liver and adipose tissue weight were measured. The body weights of the experimental animals were increased by obesity induction group (NC: 515.67vs PC; 650.71) compared to the normal control group Was induced. Body weight change was significantly decreased in CBT LR5 fed group compared to obese group (p <0.001). Lactobacillus The body weight gain was significantly inhibited in the group fed with Lambsus CBT LR5 compared with the group fed only with high fat diet (PC). As shown in the following Table 4, when the weight gain for 8 weeks was examined, The Lambsus CBT LR5 group was 534.63, the high-fat diet group was 650.71, and the Lactobacillus It was confirmed that weight gain was inhibited by approximately 50% by Lambsus CBT LR5.

간의 경우에도 비만유도군(PC)에 비해 락토바실러스 람노수스 CBT LR5을 섭취한 군(CBT LR5) 및 락토바실루스 람노수스 CBT LR5와 비피도박테리움 브레베 CBT BR3 균주의 혼합 균주를 섭취한 군에서 유의적인 차이가 나타났다 (p<0.05). 비만의 경우, 체내 지방 대사 및 당 대사가 비정상적으로 일어나 간 내에 지질 성분이 축적되어 간의 무게가 증가된다고 알려져 있는데, 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주를 투여한 군에서는 간의 무게가 정상 수준에 가깝게 유의하게 감소되었다. 따라서 본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주는 탁월한 체중 및 내장지방량 감소 효과가 있음이 확인되었다. Lactobacillus ( Lactobacillus < RTI ID = 0.0 &gt; The group that ingested Lamsos CBT LR5 (CBT LR5) and Lactobacillus Lambsus CBT LR5 and Bifidobacterium There was a significant difference between the groups in which the mixed breed of breve CBT BR3 strain was ingested (p <0.05). For obese, also known that the increase in weight between the lipid component is accumulated in the liver body fat metabolism and glucose metabolism is up abnormally, Lactobacillus of the present invention In the group treated with Lambsus CBT LR5, the weight of the liver was significantly decreased to the normal level. Therefore, the lactobacillus of the present invention The Lambsos CBT LR5 strain was found to have excellent weight and visceral fat reduction.

　 정상대조군Normal control group 비만유도군Obesity induction group CBT LR5 투여군CBT LR5 treated group CBT LR5+
CBT+BR3 CBT LR5 +
CBT + BR3 L. L. rhamnosusrhamnosus GG GG 초기 체중Initial weight 231.81±10.66231.81 + - 10.66 231.26±12.24231.26 ± 12.24 226.95±14.21226.95 ± 14.21 228.31±11.43228.31 + - 11.43 231.54±11.42231.54 + - 11.42 최종 체중Final weight 515.67±23.61515.67 ± 23.61 650.71±24.38650.71 + - 24.38 534.63±32.29534.63 ± 32.29 510.51±27.58510.51 ± 27.58 610.63±22.87610.63 + - 22.87 간 무게(g)Liver weight (g) 14.2±1.314.2 ± 1.3 19.6±2.719.6 ± 2.7 15.4±0.7 15.4 ± 0.7 14.8±2.314.8 ± 2.3 18.67±2.418.67 ± 2.4 숫자 옆의 기호(##)는 one-way ANOVA를 실시한 후 Turkey's multiple range 테스트를 이용하여
P < 0.001에서의 다른 식이 그룹들 (dietary groups)과 유의적인 차이를 나타낸 것이다.The symbol next to the number (##) is used for one-way ANOVA followed by Turkey's multiple range test
And significantly different from other dietary groups at P <0.001.

2.7 복부 지방에 대한 2.7 for abdominal fat 락토바실루스Lactobacillus 람노수스Lumosus CBT LR5 균주 투여의 효과 Effect of CBT LR5 strain administration

본 발명의 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 균주의 섭취에 따른 복부 지방 평가를 위해 한국기초과학지원연구원을 통해 자기공명영상(MRI)을 이용하여 요추뼈 (L2-L5) 부위를 촬영하였다. 획득한 MRI 영상에서 복부 내장지방과 복부 피하지방간의 부피를 관찰하여, 그 결과를 도 6에 나타내었다. The lactobacillus of the present invention The lumbar spine (L2-L5) region was photographed using magnetic resonance imaging (MRI) through the Korea Basic Science Institute for evaluation of abdominal fat according to the intake of the Lambsus CBT LR5 strain. The volume of abdominal visceral fat and abdominal subcutaneous fat was observed in the acquired MRI images, and the results are shown in Fig.

생체 내 자기공명영상을 이용한 복부 지방을 측정한 결과, 한편, 도 8을 통해서 확인되는 바와 같이, 비만유도군(PC)에 비해 락토바실루스 람노수스 CBT LR5을 섭취한 군 및 락토바실루스 람노수스 CBT LR5와 비피도박테리움 브레베 CBT BR3 균주의 혼합 균주를 섭취한 군에서 총 복부 지방 함량과 복부 피하지방 함량이 감소하였다. 이 결과들은 락토바실루스 람노수스 CBT LR5이 체지방 감소, 특히 내장지방 감소에 효과를 가지며 비만억제에 도움을 줄 수 있다는 것을 입증한다. As a result of measurement of abdominal fat using in vivo MRI, as shown in FIG. 8, it was found that lactobacillus Ramno Seuss CBT group and a Lactobacillus intake LR5 Lambsus CBT LR5 and Bifidobacterium Mixture of breve CBT BR3 strain Total abdominal fat and abdominal subcutaneous fat content decreased in the group fed the strain. These results suggest that Lactobacillus Lambsos CBT LR5 proved to be effective in reducing body fat, especially visceral fat, and helping to control obesity.

이상 본 발명의 실시예들을 통한 실험 결과를 토대로 볼 때, 본 발명의 락토 바실루스 람노수스 CBT LR5 균주(KCTC 12202BP) 및 락토바실루스 람노수스 CBT LR5와 비피도박테리움 브레베 CBT BR3 균주의 혼합 균주는 우수한 항비만 활성을 갖는다는 사실을 확인할 수 있다.As viewed on the basis of the above results with the embodiments of the present invention, the Lactobacillus of the present invention ramno Versus CBT LR5 strain (KCTC 12202BP) and Lactobacillus Lambsus CBT LR5 and Bifidobacterium It can be confirmed that the mixed strain of breve CBT BR3 strain has excellent anti-obesity activity.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위 내에서 다양하게 변형 또는 변경된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 따라서 본 발명의 진정한 보호범위는 전술한 실시예가 아니라 이하의 특허청구범위 및 그와 균등한 범위로 해석되어야 할 것이다.The present invention has been described with reference to the preferred embodiments. It will be understood by those skilled in the art that various changes in form and details may be made therein without departing from the spirit and scope of the invention as defined by the appended claims. Accordingly, the true scope of protection of the present invention is not limited to the above-described embodiments, but should be interpreted within the scope of the following claims and equivalents thereof.

한국생명공학연구원Korea Biotechnology Research Institute KCTC12202BPKCTC12202BP 2012050720120507 한국생명공학연구원Korea Biotechnology Research Institute KCTC12201BPKCTC12201BP 2012050720120507

Claims (7)

장정착성이 우수하고, IL-6, TNF-α 및 IL-1β의 분비를 억제하여 항염증 활성을 갖는 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 (수탁번호: KCTC 12202BP) 균주를 포함하는 비만, 과체중 또는 고지혈증 치료 또는 예방을 위한 의약.
 Lactobacillus lambosus CBT LR5 (accession number: KCTC 12202BP) strain, which has excellent anti-inflammatory activity by inhibiting the secretion of IL-6, TNF-α and IL-1β Medicament for the treatment or prevention of obesity, overweight or hyperlipidemia.
제1항에 있어서, 상기 균주는 지방전구세포에서 지방세포로의 분화를 억제하고, 체중 및 복부 지방을 감소시키고, 및 혈중 콜레스테롤을 감소시키는 것을 특징으로 하는 비만, 과체중 또는 고지혈증 치료 또는 예방을 위한 의약.
The method according to claim 1, wherein the strain is a drug for the treatment or prevention of obesity, overweight or hyperlipidemia, which is characterized by inhibiting differentiation into adipocytes from adipose precursor cells, reducing body weight and abdominal fat, and reducing blood cholesterol .
제약학적으로 허용되는 담체 및 장정착성이 우수하고, IL-6, TNF-α 및 IL-1β의 분비를 억제하여 항염증 활성을 갖는 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 (수탁번호: KCTC 12202BP) 균주를 포함하는 비만, 과체중 또는 고지혈증의 예방 또는 치료를 위한 약제학적 조성물.
 Lactobacillus lambosus CBT LR5 (accession number: KCTC 12202BP) strain, which is excellent in pharmacologically acceptable carrier and intestinal fixation property and inhibits secretion of IL-6, TNF-α and IL-1β and has anti- A pharmaceutical composition for the prevention or treatment of obesity, overweight or hyperlipidemia.
제3항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 (수탁번호: KCTC 12202BP) 균주를 조성물 총중량에 대해서 108 내지 1012 cfu/g 포함하는 것을 특징으로 하는 비만, 과체중 또는 고지혈증의 예방 또는 치료를 위한 약제학적 조성물.
The pharmaceutical composition according to claim 3, wherein the pharmaceutical composition comprises 10 8 to 10 12 cfu / g of Lactobacillus lambatusus CBT LR5 (Accession No: KCTC 12202BP) to the total weight of the composition. &Lt; / RTI &gt; or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
장정착성이 우수하고, IL-6, TNF-α 및 IL-1β의 분비를 억제하여 항염증 활성을 갖는 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 (수탁번호: KCTC 12202BP) 균주를 포함하는 것을 특징으로 항비만 기능성 식품 조성물.
 Lactobacillus lambosus CBT LR5 (accession number: KCTC 12202BP) strain, which is excellent in the fixation property and inhibits the secretion of IL-6, TNF-α and IL-1β and has anti-inflammatory activity, Functional food composition.
제5항에 있어서, 상기 식품 조성물은 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 (수탁번호: KCTC 12202BP) 균주의 생균 또는 건조균을 총 중량에 대해서 108 내지 1012 cfu/g 포함하는 것을 특징으로 하는 항비만 기능성 식품 조성물.
6. The food composition according to claim 5, wherein the food composition comprises 10 8 to 10 12 cfu / g, based on the total weight of live bacteria or dry bacteria of Lactobacillus lambatusus CBT LR5 (Accession No .: KCTC 12202BP) Functional food composition.
장정착성이 우수하고, IL-6, TNF-α 및 IL-1β의 분비를 억제하여 항염증 활성을 갖는 락토바실루스 람노수스 CBT LR5 (수탁번호: KCTC 12202BP) 균주와 비피도박테리움 브레베 CBT BR3 (Bifidobacterium breve CBT BR3)(수탁번호: KCTC 12201BP) 균주를 포함하는 것을 특징으로 하는 항비만 기능성 식품 조성물.
 Lactobacillus lambosus CBT LR5 (accession number: KCTC 12202BP) strain , which has excellent anti-inflammatory activity and has excellent anti-inflammatory activity and is excellent in the fixation property and inhibits secretion of IL-6, TNF-α and IL-1β and Bifidobacterium breve CBT BRC ( Bifidobacterium breve CBT BR3) (accession number: KCTC 12201BP).
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