KR101578372B1 - Violacein supported particle, and Manufacturing method of the same - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 바이오라세인 담지 입자 및 그 제조방법에 관한 것으로서, 상세하게는 항균성, 항암성, 항진균성 등 다양한 효과를 가지는 고기능성 물질인 바이오라세인을 기능성을 유지하면서도 안정적으로 담지시켜 다양한 분야에 적용가능하도록 하는 바이오라세인 담지 입자 및 그 제조방법에 대한 것이다.
TECHNICAL FIELD The present invention relates to a biorecein-supported particle and a method for producing the same. More particularly, the present invention relates to a biorecein-containing particle having various effects such as antimicrobial activity, anticancer activity and antifungal activity, And to a method for producing the same.
바이오라세인(하기 화학식 참조)은 박테리아로부터 생산되는 보라색 색소로서, 항균성(Duran et al., 2012), 항암성(Kodach et al., 2006, Duran et al., 2007, Ferreira et al., 2004), 항진균성(Becker et al., 2009), 항궤양성(Antonisamy et al., 2009) 등 다양한 효과에 대한 연구가 진행되고 있다. (Duran et al., 2004), anticancer activity (Kodach et al., 2006, Duran et al., 2007, Ferreira et al., 2004), which is a purple pigment produced from bacteria ), Antifungal (Becker et al., 2009), and anti-ulcer (Antonisamy et al., 2009).
특히, 바이오라세인은 슈퍼박테리아라고 불리는 다재항생제 내성균주에도 항균효과를 나타내는 등 강한 항균효과를 가지지만 포유류에는 독성이 매우 낮아(쥐에 구강 투입하였을 40 mg/kg까지 독성이 나타나지 않음), 의료계 등에서 그 활용가치가 매우 크다. 도 1은 다재항생제 내성 균주인 Methicillin resistant Staphylococcus aureus 에 대한 바이오라세인의 항균성을 보여주는 사진으로서, 슈퍼박테리아에도 바이오라세인의 높은 항균효과를 보이는 것을 확인할 수 있다. In particular, bio-racine has a strong antimicrobial effect, such as showing antibacterial activity against a broad-spectrum antibiotic-resistant bacterium called superbacteria, but it is very toxic to mammals (oral toxicity is not shown up to 40 mg / kg when oral administration to rats) The value of the application is very large. Figure 1 is a schematic representation of a multi-agent antibiotic resistant strain, Methicillin resistant Staphylococcus aureus This is a photograph showing the antimicrobial activity of bioraceae against super bacteria.
그러나, 상기 바이오라세인은 소수성이 매우 강한 물질로 물에 거의 녹지 않으며, 지지체(support) 부착시 화학적 변형이 발생하여 그 기능을 상실할 가능성이 높은 관계로, 다양한 분야에 적용하는데에 실질적인 어려움이 있었다. However, the bio-lacein is a substance having a very high hydrophobicity and hardly dissolves in water. Since bio-lacein is likely to lose its function due to chemical deformation when a support is attached, it is difficult to apply it to various fields there was.
한편, 수산화아파타이트(hydroxyapatite)는 인간 신체의 뼈를 구성하는 물질과 성분이 유사하여 인공 뼈 재료로 각광받고 있으며, 생체용 세라믹스의 강화재, 골 결손부의 충진재, 중금속 이온의 교환체, 크로마토그래피 충진재, 생체 고분자 물질이나 아미노산 등의 흡착재, 항균 및 방취용 재료 등 매우 광범위한 분야에 활용되고 있다.On the other hand, hydroxyapatite is found in artificial bone material because it is similar to the material constituting the bones of the human body. The hydroxyapatite is used as a reinforcing material for biomedical ceramics, a filling material for bone defect, an exchanger for heavy metal ions, Absorbent materials such as biopolymers and amino acids, antibacterial and antifungal materials, and the like.
또한, 수산화아파타이트는 소수성 물질이 잘 흡착되는 성질을 가지면서도 수용액 상에서 엉김(aggregation) 현상이 나타나지 않기 때문에 소수성 물질을 담지하기에 유리하며, 소수성 결합(phobic interaction)을 통하여 소수성 물질의 고유한 특성을 유지하면서도 안정적 담지가 가능하다.
In addition, since apatite hydroxide has a property of adsorbing a hydrophobic substance well, it does not show an aggregation phenomenon in an aqueous solution, so it is advantageous to support a hydrophobic substance, and a hydrophobic interaction is used to impart a unique property of a hydrophobic substance But it is possible to carry it with stability.
이에 본 발명의 목적은 다양한 효과에도 불구하고 소수성, 안정성 등으로 인하여 활용이 어려웠던 바이오라세인의 문제점을 해결하여, 기능성을 그대로 유지하면서도 지지체 등에 안정적으로 부착되어 다양한 분야에 안정적으로 적용가능한 바이오라세인 담지 입자 및 그 제조방법을 제공하는 것이다.
Accordingly, it is an object of the present invention to solve the problem of bio-lacein which is difficult to utilize due to hydrophobicity and stability despite various effects and to provide bio-lacein which can be stably attached to a support, And a method for producing the same.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 칼슘염과 인산염을 반응시켜 수산화아파타이트 입자를 합성하는 단계, 및 상기 합성된 수산화아파타이트 입자에 바이오라세인을 흡착시키는 단계를 포함하는 바이오라세인 담지 입자의 제조방법을 제공한다. In order to accomplish the above object, the present invention provides a method for producing biolacea-supported particles, comprising the steps of: reacting a calcium salt with a phosphate to synthesize apatite hydroxide particles, and adsorbing bioracea on the synthesized hydroxyapatite particles; ≪ / RTI >
이때, 상기 수산화아파타이트 입자의 합성은 수용액 상태에서 이루어지는 것이 바람직하며, 일 실시예로 상기 칼슘염은 아세트산 칼슘, 질산 칼슘, 염화 칼슘, 수산화 칼슘 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있으며, 상기 인산염은 인산 암모늄, 인산 나트륨, 인산 칼륨 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다. In one embodiment, the calcium salt may include at least one of calcium acetate, calcium nitrate, calcium chloride, and calcium hydroxide, and the phosphate may be at least one selected from the group consisting of phosphoric acid Ammonium, sodium phosphate, and potassium phosphate.
또한, 상기 수산화아파타이트 입자의 합성은 pH 7~8, 35~45℃에서 이루어지는 것이 바람직하며, 수산화아파타이트 입자 합성단계에서 계면활성제가 0.1~1 vol% 추가로 첨가될 수 있다. In addition, the synthesis of the hydroxyapatite particles is preferably carried out at a pH of 7 to 8 at 35 to 45 ° C, and 0.1 to 1 vol% of a surfactant may be added at the step of synthesizing the apatite hydroxide particles.
한편, 상기 바이오라세인을 흡착시키는 단계는, 합성된 수산화아파타이트를 바이오라세인 용액에 넣고 반응시키는 단계, 및 상기 바이오라세인 용액으로부터 바이오라세인이 흡착된 수산화아파타이트를 분리하는 단계를 포함할 수 있다. Meanwhile, the step of adsorbing bioracea may include a step of reacting the synthesized hydroxyapatite in a solution of bioracea, and a step of separating bioracea-adsorbed apatite from the bioracea solution have.
이때, 상기 바이오라세인이 흡착된 수산화아파타이트를 분리하는 단계는, 원심분리를 통해 상층액과 수산화아파타이트를 분리하는 단계, 및 상기 분리된 수산화아파타이트로부터 수산화아파타이트에 흡착되지 않은 바이오라세인을 제거한 후 건조하는 단계를 포함할 수 있다. At this time, the step of separating the apatite hydroxide adsorbed on the bioraceae includes separating the supernatant and apatite hydroxide through centrifugation, and removing the biotaxis not adsorbed on the apatite hydroxide from the separated apatite Drying step.
또한, 본 발명은 수산화아파타이트로 이루어진 지지체 및 상기 지지체에 흡착된 바이오라세인을 포함하는 바이오라세인 담지 입자를 제공하며, 상기 바이오라세인 담지 입자는 담지 효율(loading efficiency)이 70% 이상인 것을 특징으로 한다.
The present invention also provides a biolacea-supported particle comprising a support made of apatite hydroxide and biorecein adsorbed on the support, wherein the bioreceane-supported particle has a loading efficiency of 70% or more .
본 발명의 바이오라세인 담지 입자 및 그 제조방법은 종래의 소수성, 안정성 등으로 인하여 활용이 어려웠던 바이오라세인의 문제점을 해결하여, 바이오라세인의 기능성을 그대로 유지하면서 지지체 등에 안정적으로 부착하여 의료계 등 다양한 분야에 안정적으로 활용할 수 있다.
The bioerase-carried particles of the present invention and the method of manufacturing the same solve the problems of bio-lacein, which was difficult to utilize because of the conventional hydrophobicity and stability, and stably attach the bi laceane to a support while maintaining the functionality of bio- And can be utilized in various fields in a stable manner.
도 1 - 다재항생제 내성 균주인 Methicillin resistant Staphylococcus aureus 에 대한 바이오라세인의 항균성을 보여주는 사진이다.
도 2 - 본 발명의 수산화아파타이트 입자의 합성 과정을 보여주는 도식도
도 3 - 합성된 수산화아파타이트 입자의 XRD 패턴을 보여주는 그래프
도 4 - 바이오라세인 담지 전의 수산화아파타이트(좌)와 바이오라세인 담지 후의 수산화아파타이트(우)의 비교 사진
도 5 - 수산화아파타이트 입자의 합성 효율을 보여주는 그래프Fig. 1 is a photograph showing the antimicrobial activity of biolasein against methicillin resistant Staphylococcus aureus, which is a multi-agent antibiotic-resistant strain.
Fig. 2 - Schematic diagram showing the synthesis process of the hydroxyapatite particles of the present invention
Figure 3 - Graph showing XRD pattern of synthesized apatite hydroxide particles
Figure 4 - Comparison of apatite hydroxide (left) before and after biorecein deposition and apatite hydroxide (right) after bioreceane deposition
Figure 5 - Graph showing synthesis efficiency of apatite hydroxide particles
이하, 본 발명의 바이오라세인 담지 입자 및 그 제조방법을 첨부된 도면 및 실시예들을 참조하여 상세히 설명하기로 한다.BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings and embodiments.
본 발명의 바이오라세인 담지 입자의 제조방법은 a) 칼슘염과 인산염을 반응시켜 수산화아파타이트 입자를 합성하는 단계, 및 b) 상기 합성된 수산화아파타이트 입자에 바이오라세인을 흡착시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다. The process for producing biarasane-supported particles of the present invention comprises the steps of: a) synthesizing apatite hydroxide particles by reacting a calcium salt with a phosphate, and b) adsorbing bioracea to the synthesized apatite hydroxide particles .
종래에는 바이오라세인의 물에 거의 녹지 않는 성질과 낮은 안정성으로 인하여, 바이오라세인을 수용액 상태 또는 지지체에 부착한 형태로 활용하는 데 어려움이 있었다. Conventionally, there has been a difficulty in utilizing bioracea in the form of an aqueous solution or a form adhered to a support because of the property of bioraceain hardly dissolving in water and low stability.
이에, 본 발명은 소수성 물질이 잘 흡착되는 성질을 가지면서도 수용액 상에서 엉김 현상이 거의 나타나지 않으며, 소수성 결합을 통하여 안정적 담지가 가능한 수산화아파타이트를 바이오라세인의 흡착제로 활용하는 것을 특징으로 한다.
Accordingly, the present invention is characterized in that apatite hydroxide capable of stable adsorption through hydrophobic bonding is used as an adsorbent of bioracea, while hydrophobic substances are adsorbed well and little entanglement occurs in aqueous solution.
먼저, 상기 수산화아파타이트 입자는 다양한 방법에 의하여 제조될 수 있으며, 입자의 합성효율이 높으면서도 바이오라세인과의 소수성 결합이 안정적으로 이루어질 수 있는 형태로 합성되는 것이 바람직하다. First, the apatite hydroxide particles can be prepared by various methods, and it is preferable that the particles are synthesized in such a form that the synthesis efficiency of the particles is high and the hydrophobic bond with the bioracea is stably achieved.
일 실시예로, 상기 수산화아파타이트 입자의 합성은 도 2에 도시된 것과 같이 수용액 상태에서 이루어지는 것이 바람직하며, 이때 상기 칼슘염은 아세트산 칼슘, 질산 칼슘, 염화 칼슘, 수산화 칼슘 등 다양한 칼슘염이 사용될 수 있으며, 상기 인산염은 인산 암모늄, 인산 나트륨, 인산 칼륨 등 다양한 인산염이 사용될 수 있다. In one embodiment, the synthesis of the apatite hydroxide particles is preferably performed in an aqueous solution state as shown in FIG. 2, wherein the calcium salt may be various calcium salts such as calcium acetate, calcium nitrate, calcium chloride, And various phosphates such as ammonium phosphate, sodium phosphate, and potassium phosphate can be used as the phosphate.
또한, 합성효율 및 바이오라세인의 담지효율을 높이기 위하여, 상기 수산화아파타이트 입자의 합성은 pH 7~8, 35~45℃에서 이루어지는 것이 바람직하며, 이때 Tween20 등의 계면활성제가 0.1~1 vol% 추가로 첨가될 수 있다.
In order to increase the synthesis efficiency and the biotaxis support efficiency, it is preferable that the apatite hydroxide is synthesized at a pH of 7 to 8 and at a temperature of 35 to 45 ° C, and 0.1 to 1 vol% of a surfactant such as Tween 20 is added Lt; / RTI >
한편, 합성된 수산화아파타이트에는 바이오라세인을 흡착시키게 되는데, 상기 흡착은 다양한 방법으로 이루어질 수 있으나, 바람직하게는 합성된 수산화아파타이트를 바이오라세인 용액에 넣고 반응시킨 후, 상기 바이오라세인 용액으로부터 바이오라세인이 흡착된 수산화아파타이트를 분리하여 이루어질 수 있다. In addition, the synthesized hydroxyapatite adsorbs bioraceae. The adsorption can be performed by various methods. Preferably, the synthesized hydroxyapatite is added to a solution of bioracea and reacted. Then, And separating the apatite hydroxide adsorbed by lacein.
상기 바이오라세인이 흡착된 수산화아파타이트의 분리는 다양한 방식으로 이루어질 수 있으나, 일 실시예로 원심분리를 통해 반응액을 상층액과 수산화아파타이트로 분리한 후, 및 상기 분리된 수산화아파타이트로부터 수산화아파타이트에 흡착되지 않은 바이오라세인을 증류수를 이용하여 제거한 후 건조하여 이루어질 수 있다.
The separation of the bioactive apatite from the bioactive apatite can be accomplished in various ways. In one embodiment, the reaction solution is separated into an upper layer and apatite hydroxide by centrifugation, and then separated from the separated hydroxyapatite by apatite And then removing the unabsorbed bio-racein by using distilled water and then drying it.
이와 같이 제조된 본 발명의 바이오라세인 담지 입자는 수산화아파타이트로 이루어진 지지체 및 상기 지지체에 흡착된 바이오라세인으로 구성되며, 70% 이상의 높은 담지 효율(loading efficiency)을 보이는 것을 특징으로 한다. The biolacea-supported particle of the present invention thus produced is composed of a support made of apatite hydroxide and bioreceans adsorbed on the support, and has a high loading efficiency of 70% or more.
이하 본 발명의 바이오라세인 담지 입자 제조방법의 일 실시예를 통하여 본 발명의 효과를 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the effect of the present invention will be described in detail with reference to an embodiment of the method for producing a bioerase-supported particle of the present invention. However, these embodiments are intended to illustrate one or more embodiments, and the scope of the invention is not limited to these embodiments.
수산화아파타이트의 합성Synthesis of hydroxyapatite
0.1M의 아세트산 칼슘(calcium acetate)을 동일한 부피의 60mM 인산 암모늄(ammonium phophate)에 첨가하여 반응시켰다. 이때, 60mM의 인산 암모늄은 40℃로 온도를 유지해주었으며, 자동 pH 조절기를 이용하여 0.5M의 수산화 암모늄(ammonium hydroxide)를 첨가하여 반응 동안 pH가 7.4로 유지되도록 하였다. 또한, 계면활성제인 Tween20 을 0.5% 첨가하였다. 0.1 M calcium acetate was added to the same volume of 60 mM ammonium phophate to effect reaction. At this time, 60 mM ammonium phosphate was maintained at 40 ° C. and 0.5 M ammonium hydroxide was added using an automatic pH regulator so that the pH remained at 7.4 during the reaction. In addition, 0.5% Tween 20, a surfactant, was added.
도 3은 합성된 입자의 XRD 패턴을 나타낸 것으로서, 전형적인 수산화아파타이트의 패턴과 일치하는 것을 확인할 수 있었다.
FIG. 3 shows the XRD pattern of the synthesized particles, and it was confirmed that the pattern corresponds to a typical pattern of apatite hydroxide.
바이오라세인의Biologically 흡착 absorption
바이오라세인을 에탄올에 녹여 383mg/L의 용액을 준비하였다. 상기 준비된 바이오라세인 용액에 수산화아파타이트 50mg을 넣고 rotary 회전을 시키며 24시간동안 반응시켰다. Biorecein was dissolved in ethanol to prepare a solution of 383 mg / L. 50 mg of apatite hydroxide was added to the prepared biorecein solution, and the mixture was reacted for 24 hours while being rotated.
반응 후 원심분리를 통해 상층액과 수산화아파타이트를 분리한 후, 3차 증류수를 넣어서 수산화아파타이트에 흡착되지 않은 바이오라세인을 제거하였다. 이후, 바이오라세인이 흡착된 수산화아파타이트를 진공펌프에 연결된 건조기에서 24시간 보관하며 건조시켜 최종적으로 바이오라세인이 흡착된 수산화아파타이트를 얻었다. After the reaction, the supernatant and the apatite hydroxide were separated by centrifugation, and then the third order distilled water was added to remove the biotaxis not adsorbed to the apatite hydroxide. Thereafter, the apatite hydroxide adsorbed on the bioracea was stored and dried in a dryer connected to a vacuum pump for 24 hours to finally obtain bioraceae-adsorbed apatite hydroxide.
도 4는 바이오라세인 담지 전의 수산화아파타이트와 바이오라세인 담지 후의 수산화아파타이트를 비교한 사진으로서, 담지 후 수산화아파타이트 입자가 바이오라세인의 고유색으로 인하여 파란색으로 변한 것을 확인할 수 있다.
FIG. 4 is a photograph comparing apatite hydroxide before carrying biorecein and hydroxyapatite after carrying bioreceane, and it can be confirmed that apatite particles after loading have turned blue due to the unique color of bioraceae.
담지 효율(Loading efficiency ( loadingloading efficiencyefficiency ) 및 담지 함량() And supported amount ( loadingloading contentcontent ) 측정결과) Measurement result
상기 실시예 2에서 원심분리를 통해 분리된 상층액에 포함된 바이오라세인의 양을 측정하여 수산화아파타이트 내에 흡착된 바이오라세인의 담지 효율 및 담지 함량을 측정하였다.In Example 2, the amount of biorecein contained in the supernatant separated through centrifugation was measured to measure the loading efficiency and supporting amount of biorecein adsorbed in apatite hydroxide.
상기 표에서 볼 수 있듯이, 본 발명에 따라 제조된 바이오라세인 담지 입자는 담지 효율이 매우 높은 것을 알 수 있으며, 본 발명의 바이오라세인 담지 입자가 소수성, 안정성 등으로 인하여 활용이 어려웠던 바이오라세인의 다양한 활용을 위한 토대가 될 수 있음을 확인할 수 있다.As shown in the above table, it can be seen that the bioreceane-supported particles prepared according to the present invention have a very high loading efficiency, and that the bioreceane-supported particles of the present invention are bioreactive It can be seen that it can be the basis for various applications of
본 발명은 상술한 특정의 실시예 및 설명에 한정되지 아니하며, 청구범위에서 청구하는 본 발명의 요지를 벗어남이 없이 당해 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 누구든지 다양한 변형 실시가 가능하며, 그와 같은 변형은 본 발명의 보호 범위 내에 있게 된다.The present invention is not limited to the above-described specific embodiments and descriptions, and various modifications can be made to those skilled in the art without departing from the gist of the present invention claimed in the claims. And such modifications are within the scope of protection of the present invention.
Claims (11)
상기 바이오라세인을 흡착시키는 단계가, 합성된 수산화아파타이트를 바이오라세인 용액에 넣고 반응시키는 단계; 및 상기 바이오라세인 용액으로부터 바이오라세인이 흡착된 수산화아파타이트를 분리하는 단계;를 포함하며,
상기 바이오라세인이 흡착된 수산화아파타이트를 분리하는 단계가, 원심분리를 통해 상층액과 수산화아파타이트를 분리하는 단계; 및 상기 분리된 수산화아파타이트로부터 수산화아파타이트에 흡착되지 않은 바이오라세인을 제거한 후 건조하는 단계;를 포함하고,
상기 수산화아파타이트 입자를 합성하는 단계에서, 합성반응 동안 수산화 암모늄을 첨가하여 pH가 7~8을 유지하도록 하고, 합성온도를 35~45℃로 유지하며, 계면활성제가 0.1~1 vol% 첨가되고,
상기 합성된 수산화아파타이트 입자에 바이오라세인을 흡착시키는 단계에서, 합성된 수산화아파타이트의 바이오라세인의 담지 효율(loading efficiency)이 70% 이상인 것을 특징으로 하는 바이오라세인 담지 입자의 제조방법.Reacting a calcium salt aqueous solution with a phosphate aqueous solution to synthesize apatite hydroxide particles in an aqueous solution; And adsorbing biorasaine on the synthesized apatite hydroxide particles,
The step of adsorbing bioracea comprises the steps of: putting the synthesized hydroxyapatite in a solution of bioracea and reacting it; And separating the biotaxis-adsorbed hydroxyapatite from the biotaxis solution,
Separating the biotaxis-adsorbed hydroxyapatite comprises separating the supernatant and the apatite hydroxide by centrifugation; And removing the biotaxis from the separated hydroxyapatite, which is not adsorbed to the apatite hydroxide, and drying the separated biotite,
In the synthesis of the hydroxyapatite particles, ammonium hydroxide is added during the synthesis reaction so that the pH is maintained at 7 to 8, the synthesis temperature is maintained at 35 to 45 ° C, the surfactant is added in an amount of 0.1 to 1 vol%
Wherein the loading efficiency of the biotaxis of the synthesized hydroxyapatite is 70% or more in the step of adsorbing the biotaxis to the synthesized hydroxyapatite particles.
상기 칼슘염이 아세트산 칼슘, 질산 칼슘, 염화 칼슘, 수산화 칼슘 중 어느 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 바이오라세인 담지 입자의 제조방법.The method according to claim 1,
Wherein the calcium salt comprises at least one of calcium acetate, calcium nitrate, calcium chloride and calcium hydroxide.
상기 인산염이 인산 암모늄, 인산 나트륨, 인산 칼륨 중 어느 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 바이오라세인 담지 입자의 제조방법.The method according to claim 1,
Wherein the phosphate comprises at least one of ammonium phosphate, sodium phosphate, and potassium phosphate.
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2014
- 2014-10-22 KR KR1020140143580A patent/KR101578372B1/en active IP Right Grant
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