KR101568812B1 - 식물 병원균에 대한 항균활성 물질의 제조방법 및 이를 포함하는 항균 조성물 - Google Patents

식물 병원균에 대한 항균활성 물질의 제조방법 및 이를 포함하는 항균 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 식물 병원균에 대한 항균활성 물질의 제조방법 및 이를 포함하는 항균 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 선충 공생세균인 포토랍두스 속 균주로부터 식물병원균에 대한 항균활성 물질이 분비되는 것을 발현 및 촉진시키는 배지를 이용한 식물 병원균에 대한 항균활성 물질의 제조방법 및 이를 포함하는 항균 조성물에 관한 것이다.
식물 병원균에 대한 항균활성 물질의 제조방법은 (a) 프롤린(proline)이 첨가된 Luria-Bertani(LB) 배지에 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주를 접종하는 단계; (b) 상기 접종된 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주를 배양하는 단계; 및 (c) 배지 배양액을 여과지로 걸러내어 식물 병원균에 대한 항균활성 물질을 획득하는 단계를 포함한다.
본 발명에 따르면, 선충 공생세균인 포토랍두스 속 균주로부터 식물병원균에 대한 항균물질의 생산을 최대화시킬 수 있으므로, 기존에 사용되어지는 화학 살충제 및 BTI 수입제제를 대체하면서, 식물병원균을 보다 효과적으로 방제할 수 있다.

Description

식물 병원균에 대한 항균활성 물질의 제조방법 및 이를 포함하는 항균 조성물 {Method for Preparing Anti-microbial Agent Against Plant Pathogen and Anti-microbial Composition Having Thereof}
본 발명은 식물 병원균에 대한 항균활성 물질의 제조방법 및 이를 포함하는 항균 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 선충 공생세균인 포토랍두스 속 균주로부터 식물병원균에 대한 항균활성 물질이 분비되는 것을 발현 및 촉진시키는 배지를 이용한 식물 병원균에 대한 항균활성 물질의 제조방법 및 이를 포함하는 항균 조성물에 관한 것이다.
화학 농약의 과다 사용은 환경오염과 생태계 불균형 문제 등을 야기 시키고, 특히 토양과 수질의 심각한 오염원이 되며, 인체나 가축에도 심각한 부작용을 나타내어 사회 문제가 되고 있다. 이에 따라 각 국가별로 화학농약 및 비료의 사용을 점차 줄이는 추세이다.
식물병원균 방제를 위해 길항미생물을 이용한 방제 연구가 많이 이루어지고 있으며, 현재 이를 이용한 제품 또한 많이 나오고 있기는 하지만 만족스러운 결과를 얻지 못하고 있다. 이는 미생물을 이용한 병해 방제효과가 농약에 비해 뚜렷하지 못하고, 한정된 병해에만 효과를 나타내기 때문에 그 이외의 병해가 발생할 경우 화학농약에 의존할 수밖에 없는 등 아직 많은 문제점을 안고 있기 때문이다.
한편, 곤충병원성 선충 내 공생세균은 항생물질을 생산하는 것으로 보고되고 있다. 선충에서 분리한 공생세균이 생산하는 항생물질은 아직 밝혀진 것이 극히 일부이기 때문에 항균 스펙트럼을 확인하고, 생산성 증대를 위해 생산조건을 최적화하는 연구가 필요하다.
그러나, 곤충병원성 선충 내 공생세균은 그 균주의 특성에 따라서 최적의 배지의 조성 및 배양 조건이 상이하며, 이들 조건이 맞지 않으면 증식이 이루어지지 않을 뿐만 아니라, 증식이 되어도 유용한 활성물질의 분비가 제대로 이루어지지 않는 것으로 알려졌다.
이에, 본 발명자들은 상기 문제점을 해결하기 위하여 예의 노력한 결과, 곤충병원성 선충 내에 높은 함량으로 존재하는 아미노산인 프롤린(proline)이 첨가된 Luria-Bertani(LB) 배지 또는 Tryptic Soy Broth(TSB) 배지에서 포토랍두스 속 균주를 배양시킬 경우, 균주의 증식뿐 만 아니라, 균주의 식물병원균에 대한 항균활성 물질 분비능이 발현 또는 촉진되는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 목적은 식물병원균에 대한 항균활성 물질을 고수율로 제조하는 방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 식물 병원균에 대하여 우수한 항균활성을 갖는 항균 조성물을 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (a) 프롤린(proline)이 첨가된 Luria-Bertani(LB) 배지에 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주를 접종하는 단계; (b) 상기 접종된 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주를 배양하는 단계; 및 (c) 배지 배양액을 여과지로 걸러내어 식물 병원균에 대한 항균활성 물질을 획득하는 단계를 포함하는 식물 병원균에 대한 항균활성 물질의 제조방법을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 프롤린(proline)은 50~100mM 첨가되는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 식물 병원균은 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea), 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici) 및 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare)로 구성된 군으로부터 선택되는 1 이상인 것을 특징으로 한다.
본 발명은 또한, (a) 프롤린(proline)이 첨가된 Tryptic Soy Broth(TSB) 배지에 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주를 접종하는 단계; (b) 상기 접종된 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주를 배양하는 단계; 및 (c) 배지 배양액을 여과지로 걸러내어 식물 병원균에 대한 항균활성 물질을 획득하는 단계를 포함하는 식물 병원균에 대한 항균활성 물질의 제조방법을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 프롤린(proline)은 25~100mM 첨가되는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 식물 병원균은 푸사리움 옥시스포럼(Fusarium oxysporum), 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici), 마르쏘니나 로재(Marssonina rosae), 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare) 및 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea)로 구성된 군으로부터 선택되는 1 이상인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주는 포토랍두스 템페라타 템프라타 ECOWIN_104(Photorhabdus temperata subsp. temperata ECOWIN_104)(수탁번호: KACC 91741P)인 것을 특징으로 한다.
본 발명은 또한, 상기 방법에 의하여 제조된 항균활성 물질을 포함하고, 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea), 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici) 및 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare)로 구성된 군으로부터 선택되는 식물 병원균에 대하여 항균활성을 갖는 항균 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 방법에 의하여 제조된 항균활성 물질을 포함하고, 푸사리움 옥시스포럼(Fusarium oxysporum), 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici), 마르쏘니나 로재(Marssonina rosae), 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare) 및 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea)로 구성된 군으로부터 선택되는 식물 병원균에 대하여 항균활성을 갖는 항균 조성물을 제공한다.
본 발명에 따르면, 선충 공생세균인 포토랍두스 속 균주로부터 식물병원균에 대한 항균물질의 생산을 최대화시킬 수 있으므로, 기존에 사용되어지는 화학 살충제 및 BTI 수입제제를 대체하면서, 식물병원균을 보다 효과적으로 방제할 수 있다.
도 1은 배지에 따른 포토랍두스 속 균주의 압축세포용적(packed cell volume)을 나타낸 그래프이다.
도 2는 Tryptic Soy Broth(TSB) 배지 배양액의 식물병원균에 대한 항균활성을 실험한 사진이다.
도 3은 농도별로 L-프롤린이 첨가된 신규 조성 배지에서 배양된 포토랍두스 속 균주의 압축세포용적(packed cell volume)을 나타낸 그래프이다.
도 4는 L-프롤린의 농도가 50mM 및 100mM이 되도록 첨가된 Luria-Bertani(LB)에서의 포토랍두스 속 균주의 압축세포용적(packed cell volume)을 나타낸 그래프이다.
도 5는 L-프롤린 농도가 100mM이 되도록 첨가된 Luria-Bertani(LB) 배지 배양액의 식물 병원균에 대한 항균활성을 확인한 사진이다.
도 6은 L-프롤린의 농도가 25mM, 50mM 및 100mM이 되도록 첨가된 Tryptic Soy Broth(TSB)에서 배양된 포토랍두스 속 균주의 압축세포용적(packed cell volume)을 나타낸 그래프이다.
도 7은 L-프롤린 농도가 25mM이 되도록 첨가된 Tryptic Soy Broth(TSB) 배지 배양액의 식물 병원균에 대한 항균활성을 확인한 사진이다.
도 8은 L-프롤린 농도가 50mM이 되도록 첨가된 Tryptic Soy Broth(TSB) 배지 배양액의 식물 병원균에 대한 항균활성을 확인한 사진이다.
도 9는 L-프롤린 농도가 100mM이 되도록 첨가된 Tryptic Soy Broth(TSB) 배지 배양액의 식물 병원균에 대한 항균활성을 확인한 사진이다.
본 발명에서는 곤충병원성 선충 내에 높은 함량으로 존재하는 아미노산인 프롤린(proline)이 첨가된 Luria-Bertani(LB) 배지 또는 Tryptic Soy Broth(TSB) 배지에서 포토랍두스 속 균주를 배양시킬 경우, 균주의 증식뿐 만 아니라, 균주의 식물병원균에 대한 항균활성 물질 분비능이 발현 또는 촉진된다는 것을 확인하고자 하였다.
본 발명에서는 자체적으로 개발한 배양용 배지, Luria-Bertani(LB), Tryptic Soy Broth(TSB), Tryptone-Yeast extract broth(TY) 및 Yeast extract-Sodium chloride broth (YS) 배지와 상기 배지에 프롤린(proline)을 첨가시킨 배지에 포토랍두스 속 균주를 접종하고, 배양하였다. 그 결과, 프롤린(proline)이 첨가된 Luria-Bertani(LB) 배지 또는 Tryptic Soy Broth(TSB) 배지에서 포토랍두스 속 균주를 배양시킬 경우, 식물병원균에 대한 항균활성 물질 분비능이 발현 또는 촉진되는 것을 확인할 수 있었다.
따라서, 본 발명은 일 관점에서, (a) 프롤린(proline)이 첨가된 Luria-Bertani(LB) 배지에 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주를 접종하는 단계; (b) 상기 접종된 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주를 배양하는 단계; 및 (c) 배지 배양액을 여과지로 걸러내어 식물 병원균에 대한 항균활성 물질을 획득하는 단계를 포함하는 식물 병원균에 대한 항균활성 물질의 제조방법에 관한 것이다.
상기 Luria-Bertani(LB) 배지는 통상적으로 알려진 배지를 이용할 수 있으며, 박토-트립톤(Bacto-tryptone), 박토-효모 추출물(Bacto-yeast extract) 및 소듐클로라이드(NaCl)를 포함한다.
본 발명에 있어서, 상기 프롤린은 곤충병원성 선충 내에 높은 함량으로 존재하는 아미노산으로서, 통상적으로 판매되는 것을 이용할 수 있으며, L-프롤린인 것이 바람직하다. 상기 프롤린(proline)은 50~100mM 첨가되는 것이 바람직하다. 상기 프롤린이 50mM 미만 첨가될 경우, 식물 병원균에 대한 항균활성 물질 분비능이 발현되지 않거나 촉진되지 않을 우려가 있고, 100mM을 초과하여 첨가될 경우 경제적으로 바람직하지 않다.
상기 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주는 식물 병원균에 대한 항균활성 물질 분비능이 있는 것이라면 특별히 제한되지 않으나, 포토랍두스 템페라타 템프라타 ECOWIN_104(Photorhabdus temperata subsp. temperata ECOWIN_104)(수탁번호: KACC 91741P)인 것이 바람직하다.
상기 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주의 배양방법은 특별히 제한되지는 않으나, 균주의 원활한 증식과 대사를 위하여 0.1~1.0vvm의 공기(Air)를 주입하면서, 18~31℃에서 50~500RPM의 회전속도로 배양하는 것이 바람직하다.
포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주 배양액은 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주에서 분비된 식물 병원균에 대한 항균활성 물질을 포함하고 있으므로, 그대로 항균 조성물로 이용할 수 있으나, 불순물을 제거하기 위하여, 배지 배양액을 여과지로 걸러내어 식물 병원균에 대한 항균활성 물질을 획득하는 것이 바람직하다.
상기 식물 병원균은 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea), 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici) 및 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare)로 구성된 군으로부터 선택된다.
상기 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea)는 잿빛곰팡이병, 상기 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici)는 고추역병, 상기 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare)는 참외탄저병을 유발하는 것으로 알려졌다.
본 발명은 다른 관점에서, 상기 방법에 의하여 제조된 항균활성 물질을 포함하고, 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea), 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici) 및 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare)로 구성된 군으로부터 선택되는 식물 병원균에 대하여 항균활성을 갖는 항균 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또 다른 관점에서, (a) 프롤린(proline)이 첨가된 Tryptic Soy Broth(TSB) 배지에 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주를 접종하는 단계; (b) 상기 접종된 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주를 배양하는 단계; 및 (c) 배지 배양액을 여과지로 걸러내어 식물 병원균에 대한 항균활성 물질을 획득하는 단계를 포함하는 식물 병원균에 대한 항균활성 물질의 제조방법에 관한 것이다.
상기 Tryptic Soy Broth(TSB) 배지는 통상적으로 알려진 배지를 이용할 수 있으며, 카제인의 췌장 소화물(Pancreatic digest of casein), 콩의 파파익 소화물(Papaic digest of soybean), 덱스트로즈(Dextrose), 소듐클로라이드(NaCl) 및 디포타슘포스페이트(K2HPO4)를 포함한다.
본 발명에 있어서, 상기 프롤린은 곤충병원성 선충 내에 높은 함량으로 존재하는 아미노산으로서, 통상적으로 판매되는 것을 이용할 수 있으며, L-프롤린인 것이 바람직하다. 상기 프롤린(proline)은 25~100mM 첨가되는 것이 바람직하다. 상기 프롤린이 25mM 미만 첨가될 경우, 식물 병원균에 대한 항균활성 물질 분비능이 발현되지 않거나 촉진되지 않을 우려가 있고, 100mM을 초과하여 첨가될 경우 경제적으로 바람직하지 않다.
상기 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주, 이의 배양방법 그리고 불순물 제거방법은 앞서 기재한 바와 동일하다.
상기 식물 병원균은 푸사리움 옥시스포럼(Fusarium oxysporum), 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici), 마르쏘니나 로재(Marssonina rosae), 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare) 및 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea)로 구성된 군으로부터 선택된다.
상기 푸사리움 옥시스포럼(Fusarium oxysporum)은 시들음병, 상기 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici)는 고추역병, 상기 마르쏘니나 로재(Marssonina rosae)는 흑반병, 상기 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare)는 참외탄저병, 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea)는 잿빛곰팡이병을 유발하는 것으로 알려졌다.
본 발명은 또 다른 관점에서, 상기 방법에 의하여 제조된 항균활성 물질을 포함하고, 푸사리움 옥시스포럼(Fusarium oxysporum), 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici), 마르쏘니나 로재(Marssonina rosae), 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare) 및 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea)로 구성된 군으로부터 선택되는 식물 병원균에 대하여 항균활성을 갖는 항균 조성물에 관한 것이다.
[실시예]
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 포토랍두스 속( Photorhabdus spp.) 균주 배양용 배지
포토랍두스 템페라타 템프라타 ECOWIN_104(Photorhabdus temperata subsp. temperata ECOWIN_104)(수탁번호: KACC 91741P)를 표 1의 신규조성 배지, Luria-Bertani(LB), Tryptic Soy Broth(TSB), Tryptone-Yeast extract broth (TY) 및 Yeast extract-Sodium chloride broth(YS) 배지 각각에 접종(1×109 CFU/ml의 0.5%) 하고, 28℃에서 200RPM의 회전속도, 0.5vvm의 공기주입 조건에서 7일간 배양시키면서, 배양일 마다 배양액을 채취하고, 채취된 배양액으로부터 균주 증식능 및 식물 병원균에 대한 항균활성 물질 생성 여부를 확인하고, 그 결과를 도 1 및 도 2에 나타내었다.
참고로, 항균활성 물질 생성 여부는 agar diffusion법으로 측정하였다. 시험 균주는 표 2에 기재된 식물병원균을 사용하였으며, PDA 배지(potato starch 4g, dextrose 20 g, agar 15 g/L, pH 5.1, Difco Co.)에 계대배양한 후 4℃에 보관하면서 사용하였다. 항진균 활성은 시료 40 μL를 paper disc (φ= 8 mm, Advantec Co.)에 첨가하여 건조시킨 후 검정 균주가 함유된 평판배지 위에 얹고 7일간 배양한 후 생성된 inhibitory zone의 유무를 통해 판단하였다.
Media Composition Content(g/L)
신규조성 배지 Skim milk 10.00
Yeast extract 3.00
Peptone 5.00
Egg yolk 2.50
Cholesterol 0.05
NH4H2PO4 1.00
K2HPO4 2.00
MgSO47H2O 1.00
NaCl 5.00
Lecithin 0.50
Luria-Bertani (LB) Bacto-tryptone 10.00
Bacto-yeast extract 5.00
NaCl 5.00
Tryptic Soybean broth (TSB) Pancreatic digest of casein 17.00
Papaic digest of soybean 3.00
Dextrose 2.50
NaCl 5.00
K2HPO4 2.50
Tryptone-yeast extract broth (TY) Bacto-tryptone 2.00
Bacto-yeast extract 5.00
NaCl 10.00
Yeast extract-sodium chloride broth (YS) Bacto-Yeast extract 5.00
NaCl 5.00
NH4H2PO4 0.50
K2HPO4 0.50
MgSO47H2O 0.20
시험균주
Fusarium oxysporum f. sp. Lycopersici (Saccardo) Snyder & Hansen KACC 40037(시들음병)
Rhixoctonia solani AG(IA) Kuhn KACC 40101(벼 잎집무늬마름병)
Rhixoctonia solani AG Kuhn KACC 40142(참외 줄기썩음병)
Phytophthora capsici Leonian KACC 40476(고추역병)
Marssonina rosae (Lib.) Died. KACC 40490(흑반병)
Colletotrichum orbiculare (Berkeley & Montagen) von Arx KACC 40808(참외 탄저병)
Botrytis cinerea Pers. KACC 40854(잿빛곰팡이병)
Fusarium oxysporum f. sp. Niveum W.C. Snyder & H.N. Hansen KACC 40902(덩굴 쪼김병)
Botryris cinerea Pers. KACC 40965(프리뮬러 잿빛곰팡이병)
Botrytis cinerea Pers. KACC 41008(감 잿빛곰팡이병)
도 1에 도시된 바와 같이, 포토랍두스 템페라타 템프라타 ECOWIN_104는 신규조성 배지에서 가장 높게 증식하였다. 그러나, 신규 조성 배지에서는 식물 병원균에 대한 항균활성 물질이 생성되지 않았다. 따라서, 신규 조성 배지는 공시균주의 생육을 최적으로 증가시키기 위해 사용하는 전 배양 배지로 사용하는 것이 적합할 것으로 사료된다.
한편, Luria-Bertani(LB), Tryptone-Yeast extract broth (TY) 및 Yeast extract-Sodium chloride broth(YS) 배지에서는 식물 병원균에 대한 항균활성 물질이 생성되지 않았으나, Tryptic Soy Broth(TSB) 배지에서는 배양 2일 이후 채취된 배양액에서 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare)(KACC 40808)에 대한 항균활성 물질이 생성되었고, 5일 및 6일째 채취된 배양액에서는 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea)(KACC 40854)에 대한 항균활성 물질이 생성된 것을 확인할 수 있었다(도 2).
참고로, 도 2로부터 Tryptic Soy Broth(TSB) 배지 배양액은 푸사리움 옥시스포럼(Fusarium oxysporum)(KACC 40902)에 대한 항균활성이 뚜렷하게 나타내지 않았으나, 푸사리움 옥시스포럼(Fusarium oxysporum)(KACC 40902)만 접종한 배지(도 2의 좌측에서 3번째 사진)와 비교하였을 때 생육에 영향을 주는 것으로 확인되었다.
실시예 2: 프롤린이 첨가된 포토랍두스 속( Photorhabdus spp.) 균주 배양용 배지
표 1의 신규조성 배지, Luria-Bertani(LB), Tryptic Soy Broth(TSB), Tryptone-Yeast extract broth (TY) 및 Yeast extract-Sodium chloride broth(YS) 배지 각각에 L-프롤린(Junsei Chemical Co.)의 농도가 25, 50, 100mM이 되도록 첨가(배지 1L당 2.8782g, 5.7565g 및 11.5130g)하고, 실시예 1과 동일한 방법으로 포토랍두스 템페라타 템프라타 ECOWIN_104(Photorhabdus temperata subsp. temperata ECOWIN_104)(수탁번호: KACC 91741P)를 접종하고, 배양시킨 다음, 배양일 마다 배양액을 채취하고, 채취된 배양액으로부터 균주 증식능 및 식물 병원균에 대한 항균활성 물질 생성 여부를 확인하고, 그 결과를 도 3~9에 나타내었다.
도 3은 L-프롤린의 농도가 25mM, 50mM 및 100mM이 되도록 첨가된 신규 조성 배지에서의 포토랍두스 템페라타 템프라타 ECOWIN_104의 증식능(packed cell volume)을 나타낸 것으로서, 이로부터 L-프롤린을 첨가하지 않고 배양하였을 때보다 L-프롤린을 25mM, 50mM 및 100mM로 첨가하였을 때 배양 초기의 압축세포용적(packed cell volume)이 증가된 것을 확인하였다. 한편, L-프롤린이 첨가된 신규조성 배지에서는 식물 병원균에 대한 항균활성 물질이 생성되지 않았다.
도 4는 L-프롤린의 농도가 50mM 및 100mM이 되도록 첨가된 Luria-Bertani(LB)에서의 포토랍두스 템페라타 템프라타 ECOWIN_104의 증식능(packed cell volume)을 나타낸 것으로서, 이로부터 L-프롤린을 첨가하지 않고 배양하였을 때보다 L-프롤린을 50mM로 첨가하였을 때 증가하였으며, 100mM로 첨가하였을 때 배양 초기의 생육을 촉진하는 것을 확인 하였다.
도 5는 L-프롤린 농도가 100mM이 되도록 첨가된 Luria-Bertani(LB) 배지 배양액의 식물 병원균에 대한 항균활성을 확인한 사진으로서, 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici)(KACC 40476), 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea)(KACC 40854), 및 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare)(KACC 40808)에 대한 항균활성이 있는 것을 확인할 수 있었다.
도 6은 L-프롤린의 농도가 25mM, 50mM 및 100mM이 되도록 첨가된 Tryptic Soy Broth(TSB)에서의 포토랍두스 템페라타 템프라타 ECOWIN_104의 증식능(packed cell volume)을 나타낸 것으로서, L-프롤린을 첨가하지 않고 배양하였을 때보다 L-프롤린의 농도가 증가될수록 배양 초기의 생육을 촉진하는 것을 확인 하였다.
도 7은 L-프롤린 농도가 25mM이 되도록 첨가된 Tryptic Soy Broth(TSB) 배지 배양액의 식물 병원균에 대한 항균활성을 확인한 사진으로서, 3~4일째 채취된 배양액의 경우, 푸사리움 옥시스포럼(Fusarium oxysporum)(KACC 40037), 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici)(KACC 40476), 마르쏘니나 로재(Marssonina rosae)(KACC 40490), 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare)(KACC 40808) 및 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea)(KACC 40854, KACC 40965)에 대한 항균활성이 있는 것을 확인할 수 있었다.
도 8은 L-프롤린 농도가 50mM이 되도록 첨가된 Tryptic Soy Broth(TSB) 배지 배양액의 식물 병원균에 대한 항균활성을 확인한 사진으로서, 3~4일째 채취된 배양액의 경우, 푸사리움 옥시스포럼(Fusarium oxysporum)(KACC 40037), 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici)(KACC 40476), 마르쏘니나 로재(Marssonina rosae)(KACC 40490), 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare)(KACC 40808) 및 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea)(KACC 40854, KACC 40965)에 대한 항균활성이 있으나, L-프롤린 농도가 25mM이 되도록 첨가된 Tryptic Soy Broth(TSB) 배지 배양액보다는 항균활성이 낮다는 것을 확인할 수 있었다.
도 9는 L-프롤린 농도가 100mM이 되도록 첨가된 Tryptic Soy Broth(TSB) 배지 배양액의 식물 병원균에 대한 항균활성을 확인한 사진으로서, 3~4일째 채취된 배양액의 경우, 푸사리움 옥시스포럼(Fusarium oxysporum)(KACC 40037), 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici)(KACC 40476), 마르쏘니나 로재(Marssonina rosae)(KACC 40490), 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare)(KACC 40808) 및 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea)(KACC 40854, KACC 40965, KACC 41008)에 대한 항균활성이 있는 것을 확인할 수 있었다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (10)

  1. 다음의 단계를 포함하는 식물 병원균에 대한 항균활성 물질의 제조방법:
    (a) 프롤린(proline)이 첨가된 Luria-Bertani(LB) 배지에 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주를 접종하는 단계;
    (b) 상기 접종된 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주를 배양하는 단계; 및
    (c) 배지 배양액을 여과지로 걸러내어 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea), 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici) 및 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare)로 구성된 군으로부터 선택되는 1 이상인 것을 특징으로 하는 식물 병원균에 대한 항균활성 물질을 획득하는 단계.
  2. 제1항에 있어서, 상기 프롤린(proline)은 50~100mM 첨가되는 것을 특징으로 하는 식물 병원균에 대한 항균활성 물질의 제조방법.
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서, 상기 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주는 포토랍두스 템페라타 템프라타 ECOWIN_104(Photorhabdus temperata subsp. temperata ECOWIN_104)(수탁번호: KACC 91741P)인 것을 특징으로 하는 식물 병원균에 대한 항균활성 물질의 제조방법.
  5. 다음의 단계를 포함하는 식물 병원균에 대한 항균활성 물질의 제조방법:
    (a) 프롤린(proline)이 첨가된 Tryptic Soy Broth(TSB) 배지에 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주를 접종하는 단계;
    (b) 상기 접종된 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주를 배양하는 단계; 및
    (c) 배지 배양액을 여과지로 걸러내어 푸사리움 옥시스포럼(Fusarium oxysporum), 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici), 마르쏘니나 로재(Marssonina rosae), 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare) 및 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea)로 구성된 군으로부터 선택되는 1 이상인 것을 특징으로 하는 식물 병원균에 대한 항균활성 물질을 획득하는 단계.
  6. 제5항에 있어서, 상기 프롤린(proline)은 25~100mM 첨가되는 것을 특징으로 하는 식물 병원균에 대한 항균활성 물질의 제조방법.
  7. 삭제
  8. 제5항에 있어서, 상기 포토랍두스 속(Photorhabdus spp.) 균주는 포토랍두스 템페라타 템프라타 ECOWIN_104(Photorhabdus temperata subsp. temperata ECOWIN_104)(수탁번호: KACC 91741P)인 것을 특징으로 하는 식물 병원균에 대한 항균활성 물질의 제조방법.
  9. 제1항, 제2항 및 제4항중 어느 한 항의 방법에 의하여 제조된 항균활성 물질을 포함하고, 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea), 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici) 및 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare)로 구성된 군으로부터 선택되는 식물 병원균에 대하여 항균활성을 갖는 항균 조성물.
  10. 제5항, 제6항 및 제8항중 어느 한 항의 방법에 의하여 제조된 항균활성 물질을 포함하고, 푸사리움 옥시스포럼(Fusarium oxysporum), 파이토프토라 캡사이시(Phytophthora capsici), 마르쏘니나 로재(Marssonina rosae), 콜레토트리쿰 오비큘레어(Colletotrichum orbiculare) 및 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea)로 구성된 군으로부터 선택되는 식물 병원균에 대하여 항균활성을 갖는 항균 조성물.
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