KR101554000B1 - Method for screening an antiviral agent of plant diseases - Google Patents
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Abstract
본 발명은 (a) 지표식물의 잎에 검증용 시료를 도말하는 단계; (b) (a)의 지표식물 좌측 반엽에 표준시료를 도말하는 단계; (c) (b) 단계의 잎에 괴사병반(local lesion)이 나타나도록 방치하는 단계; 및 (d) (c) 단계로 잎 상에 나타난 괴사병반 수를 계수하고, 역가(CVT) 검정공식에 대입하여 시험 물질의 방제능을 판독하는 단계를 포함하는 식물병 저항성 유도물질의 스크리닝 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 스크리닝 방법은 식물 항바이러스 활성 역가 계량화를 통한 합격기준 및 색인(index)을 제시함에 따라, 항식물바이러스제 활성검정 표준방법의 확립에 의한 친환경 농자재 개발이 용이한 수단을 제공하는 효과가 있고, 친환경 농자재의 객관적인 품질관리에 유용하다(A) smearing a test sample on leaves of an indicator plant; (b) smearing a standard sample on the left half of the indicator plant of (a); (c) allowing the lesion of step (b) to show a local lesion; And (d) counting the number of necrotic lesions appearing on the leaves in step (c), and substituting the number of necrotic lesions on the leaves, and reading the control ability of the test substance .
The screening method according to the present invention provides an acceptance criteria and an index through quantification of plant antiviral activity and provides an easy means to develop an eco-friendly farm material by establishing a standard method for assaying the activity of an anti-plant virus agent And is useful for objective quality control of eco-friendly farm materials
Description
본 발명은 식물체 잎에 나타난 괴사병반 수를 기준으로 검정용 시료 물질의 방제능의 역가를 판독하여 식물병 저항성 유도물질을 스크리닝하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for screening a plant disease resistance inducing substance by reading the potency of the controlling ability of a test substance on the basis of the number of necrotic lesions on the leaf of a plant.
농작물 재배 과정에서 식물병 방제 수단으로 보편적으로 사용되는 것이 화학적 방제법인 농약살포라 할 수 있는데, 맹독성이고 비선택적인 농약의 지속적인 대량살포는 환경파괴는 물론 인류의 생존에도 직접 또는 간접적으로 위협을 초래하고 있다.The chemical spraying method, which is commonly used as a means of controlling plant diseases in the cultivation process of crops, is the spraying of pesticides which is a chemical control method. The continuous massive spraying of toxic and non-selective pesticides threatens the destruction of environment as well as the survival of mankind directly or indirectly .
국내에서의 화학농약의 사용량은 1990년대 중반 1,205 kg/㎢으로 OECD 회원국 중에 일본에 이어 2위이며, OECD 평균 사용량 263 kg의 4.6배, 농약 최소 사용국인 뉴질랜드(25kg)의 48배에 해당하며, 농약의 과다 사용으로 인한 자연 환경 생태계 파괴, 지하수 오염, 농작물의 잔류 독성 및 저항성 해충의 출현 등의 심각한 문제를 야기하고 있는 것이 현실이다. 이러한 문제를 해결하기 위하여 '92 Rio 환경회의에서는 화학농약의 사용량을 2004년까지 50% 감소하자는 국가 간의 협약을 체결하기에 이르렀고, 미국을 예로 들면, 1997년 이미 채소 과수 재배에서 평균 50%가 기존의 유기합성 살충제 대신 천적곤충, 곤충병원성 곰팡이와 같은 대체 농약 사용으로 전환하여 화학농약 비중이 현저히 감소된 것으로 조사되었으며, 이러한 경향은 지속적으로 증가할 것으로 전망되고 있다. Domestic chemical pesticide use amounted to 1,205 kg / ㎢ in the mid-1990s, second only to Japan among OECD member countries, 4.6 times the OECD average 263 kg, 48 times the New Zealand 25 kg minimum pesticide use, It is a reality that the excessive use of pesticides causes serious problems such as destruction of natural environment ecosystem, groundwater pollution, residual toxicity of crops and appearance of resistant pest. In order to solve this problem, the '92 Rio Environmental Conference has reached an agreement between countries to reduce the use of chemical pesticides by 50% by 2004. In the United States, for example, an average of 50% The use of alternative pesticides such as nematode insects and insect pathogenic fungi has been replaced by organic synthetic insecticides. As a result, the proportion of chemical pesticides has been significantly reduced, and the trend is expected to continue to increase.
우리나라는 농업과학기술원의 보고에 따르면, 아직까지 화학농약의 오남용으로 인한 농작물 피해가 심각한 실정이기 때문에, 이를 개선하기 위해서는 개별 농가에서 농약의 아전 사용기준을 준수하는 것도 중요하지만, 근본적으로 친환경 농약 제품의 기술 개발과 이의 보급하는 것이 매우 시급한 상황이다.According to the report of the National Institute of Agricultural Science and Technology in Korea, since crop damage caused by misuse of chemical pesticides is still serious, it is important to observe the use standards of pesticides at individual farms in order to improve them. However, It is very urgent to develop the technology and disseminate it.
농촌진흥청(www.rda.go.kr)에 등록된 친환경유기농자재 중에서 식물추출물 을 유효성분으로 하는 작물병해관리용 자재는 총 30 여 건, 미생물을 유효성분으로 하는 자재는 약 50 여건으로 개발이 상당히 미흡하기 때문에, 보다 효과적인 친환경 물질 발굴이 필요하며, 이를 위해서는 기존에 사장될 수 있는 많은 국내 토착 미생물, 약용 식물의 추출물을 이용한 살충제, 살균제 및 영양제 등의 선별기술 개발이 요구되고 있으나, 지금까지 개발된 선별방법은 방제와 관련된 식물체 내 유전자 발현변화로 판단하는 것이 대부분으로, 이는 유전자 추출이라는 번거로운 작업을 수행해야하기 때문에, 보다 편리한 방법 개발이 요구되고 있다.
Among the eco-friendly organic materials registered at the Rural Development Administration (www.rda.go.kr), there are about 30 kinds of materials for controlling crop disease and about 50 kinds of materials containing microorganisms as active ingredients, Therefore, it is required to develop technology for screening of many domestic indigenous microorganisms, insecticides, fungicides and nutrients using extracts of medicinal plants that can be used in the past. Most of the developed screening methods are judged by changes in gene expression in plants related to control, and it is required to develop a more convenient method since it is necessary to perform troublesome work such as gene extraction.
이에 본 발명자들은, 신속하고 편리한 친환경 방제물질의 선별방법을 개발하고자 예의 노력한 결과, 담배 잎에 검증용 식물 추출물과 담배모자이크바이러스(TMV) 감염액을 함께 도말한 후, 상기 식물 추출물에 방제능이 있을 경우에는 담배모자이크바이러스(TMV)에 의한 괴사병반(local lesion)의 수가 특정 수준 이하로 떨어짐을 관찰하고, 이를 계수화할 수 있는 기준을 공식화하여 상기 기준으로 검정용 시료의 방제능을 보다 용이하게 판단할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
Accordingly, the present inventors have made intensive efforts to develop a screening method for a quick and convenient environmentally friendly control agent. As a result, the present inventors have found that the plant extract and the tobacco mosaic virus (TMV) , The number of necrotic lesions caused by tobacco mosaic virus (TMV) is observed to fall below a certain level, and a criterion for quantifying the number of local lesions is formulated so that the control ability of the test sample can be more easily judged And completed the present invention.
본 발명의 목적은 지표식물의 잎에 검증용 시료와 바이러스 감염액인 표준시료를 도말한 다음, 나타나는 괴사병반 수에 대한 컷오프(cutoff) 기준에 따라 방제능을 판독할 수 있는 식물병 저항성 유도물질을 스크리닝하는 방법을 제공하는데 있다.The object of the present invention is to provide a plant disease resistance inducing substance capable of reading a controlling ability according to a cutoff criterion for the number of necrotic lesions after laminating a test sample and a virus sample to a leaf of an indicator plant, And a method for screening the same.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (a) 지표식물의 잎에 검증용 시료를 도말하는 단계; (b) (a)의 지표식물 좌측 반엽에 표준시료를 도말하는 단계; (c) (b) 단계의 잎에 괴사병반(local lesion)이 나타나도록 방치하는 단계; 및 (d) (c) 단계로 잎 상에 나타난 괴사병반 수를 계수하고, 역가(CVT) 검정공식에 대입하여 시험 물질의 방제능을 판독하는 단계를 포함하는 식물병 저항성 유도물질의 스크리닝 방법을 제공한다.In order to accomplish the above object, the present invention provides a method for producing a plant, comprising: (a) smearing a test sample on leaves of an indicator plant; (b) smearing a standard sample on the left half of the indicator plant of (a); (c) allowing the lesion of step (b) to show a local lesion; And (d) counting the number of necrotic lesions appearing on the leaves in step (c), and substituting the number of necrotic lesions on the leaf for the potency resistance (CVT) test formula to read out the control ability of the test substance. to provide.
본 발명에 따른 스크리닝 방법은 식물 항바이러스 활성 역가 계량화를 통한 합격기준 및 색인(index)을 제시함에 따라, 항식물바이러스제 활성검정 표준방법의 확립에 의한 친환경 농자재 개발이 용이한 수단을 제공하는 효과가 있고, 친환경 농자재의 객관적인 품질관리에 유용하다.The screening method according to the present invention provides an acceptance criteria and an index through quantification of plant antiviral activity and provides an easy means to develop an eco-friendly farm material by establishing a standard method for assaying the activity of an anti-plant virus agent And is useful for objective quality control of eco-friendly farm materials.
도 1은 검증용 시료 및 담배모자이크바이러스(TMV) 감염액을 처리하여 나타난 괴사병반에 따른 역가(CVT) 측정값의 비교사진이다.FIG. 1 is a comparative photograph of the measured values of potency (CVT) according to necrotic lesions obtained by treating a test sample and a cigarette mosaic virus (TMV) infectious fluid.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
농약의 과다 사용으로 인한 자연 환경 생태계 파괴, 지하수 오염, 농작물의 잔류 독성 및 저항성 해충의 출현 등의 심각한 문제를 해결에 필요한 친환경 농약 제품 개발을 위하여, 많은 국내 토착 미생물, 약용 식물의 추출물을 이용한 살충제, 살균제 및 영양제 등의 선별 수단의 개발이 필요한 실정이며, 지금까지 개발된 선별방법은 방제와 관련된 식물체 내 유전자 발현변화로 판단하는 것이 대부분으로, 이는 유전자 추출이라는 번거로운 작업을 수행해야하기 때문에, 보다 편리한 방법 개발이 요구되고 있다.In order to develop eco-friendly pesticide products needed to solve serious problems such as destruction of natural environment ecosystem due to excessive use of pesticides, groundwater pollution, residual toxicity of crops and appearance of resistant insect pests, many domestic indigenous microorganisms, insecticides , A disinfectant, and a nutrient. Therefore, the screening method developed so far is mostly determined by a change in gene expression in the plant in relation to the control. Since it is necessary to carry out troublesome work such as gene extraction, Development of a convenient method is required.
이에 본 발명자들은, 신속하고 편리한 친환경 방제물질의 선별방법을 개발하고자 예의 노력한 결과, 담배 잎에 검증용 시료인 식물 추출물과 담배모자이크바이러스(TMV) 감염액을 함께 도말한 후, 상기 식물 추출물에 방제능을 경우에는 담배모자이크바이러스(TMV)에 의한 괴사병반(local lesion)의 수가 특정 수준 이하로 떨어짐을 관찰하고 이를 계수화할 수 있는 기준을 공식화하였으며, 상기 기준으로 검정용 시료의 방제능을 보다 용이하게 판단할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
Accordingly, the present inventors have made intensive efforts to develop a screening method for an environmentally friendly control agent, which is quick and convenient. As a result, the inventors of the present invention have found that, after lyophilizing a plant extract and a cigarette mosaic virus (TMV) The number of necrotic lesions caused by cigarette mosaic virus (TMV) fell below a certain level, and a criterion for quantifying the number of local lesions was formulated. As a result, And the present invention has been completed.
본 발명은 일 관점에서, (a) 지표식물의 잎에 검정용 시료를 도말하는 단계; (b) (a)의 좌측 반엽에 표준시료를 도말하는 단계; (c) (b) 단계의 잎에 괴사병반(local lesion)이 나타나도록 방치하는 단계; 및 (d) (c) 단계로 잎 상에 나타난 괴사병반 수를 계수하고, 다음의 역가(CVT) 검정공식에 대입하여 시험 물질의 방제능을 판독하는 단계를 포함하는 식물병 저항성 유도물질의 스크리닝 방법에 관한 것이다. In one aspect, the present invention provides a method for producing a plant, comprising: (a) smearing a test sample on leaves of an indicator plant; (b) smearing a standard sample on the left half of (a); (c) allowing the lesion of step (b) to show a local lesion; And (d) counting the number of necrotic lesions present on the leaves in step (c) and reading the control efficacy of the test substance by substituting in the following formula for the titration (CVT) ≪ / RTI >
본 발명에 있어서, 상기 공식의 '약제처리 반엽병반수'는 검정용 시료인 먹물버섯 열수추출물이 도말된 엽부위의 괴사병반수를, 그리고 상기 공식의 '무처리 반엽 병반수'는 표준시료가 도말된 엽부위의 괴사병반수를 계수하는 것을 특징으로 하는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the 'half-treated half-blotch of drug treatment' in the above formula is the number of necrotic lesions of the lobe where the hot water extract of mushroom, which is a test sample, is applied, and the number of the untreated half- And counting the number of necrotic lesions of the stained leaf area.
본 발명에 있어서, 상기 검정용 시료는 먹물버섯 열수추출물을 사용하였으며, 이에 한정되는 것은 아니다.In the present invention, the mushroom hot water extract is used as the test sample, but is not limited thereto.
본 발명에 있어서, (d) 단계에서 역가(CVT)가 표준 대비 90% 이상이면 방제능이 합격임을 판정하는 것을 특징으로 한다.In the present invention, when the potency (CVT) in the step (d) is 90% or more of the standard, it is determined that the control ability is acceptable.
본 발명에서 있어서, 상기 (a) 단계 이전에 지표식물의 잎 전체에 탄소가루(carborundum)을 처리하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 탄소가루는 지표식물에 감염성 인자가 포함된 접종원을 접촉시킬 때, 감염을 촉진시키기 위하여 잎의 표면에 도발하여 사용하는 것으로, 사용하는 방법 및 용량은 당업자에게 자명하다.
In the present invention, the step (a) may further include the step of treating carbon flour (carborundum) on the whole leaf of the indicator plant. The carbon powder is used on the surface of the leaf to induce infection when the inoculum containing the infectious agent is contacted with the indicator plant. The method and the dosage are obvious to those skilled in the art.
식물병은 특정 병원체는 특정 식물체에만 감염되는 식으로 매우 선택적인 특징이 있으며, 이러한 식물을 기주식물이라고 한다. 이는 식물의 세포벽, 왁스층 및 큐티클층과 같은 물리적 장애와 많은 항균물질에 대한 방어작용이 일어나기 때문이다. Plant diseases are very selective in that certain pathogens are infected only to specific plants, and these plants are called host plants. This is due to the physical defects such as plant cell walls, wax and cuticle layers, and defense against many antimicrobial substances.
따라서, 본 발명의 지표식물은 토끼풀(white clover), 사탕수수(surgarcane fiji), 알팔파(alfalfa), 오이(cucumber), 포도(grapevane), 보리(barley), 감자(potato), 담배(tobacco) 등으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있으며, 이에 한정된 것은 아니다. Thus, the indicator plants of the present invention can be used in a variety of applications including white clover, surgarcane fiji, alfalfa, cucumber, grapevane, barley, potato, tobacco, And the like, but the present invention is not limited thereto.
본 발명의 표준시료는 감염성 인자를 포함하는 시료로서, 양성대조군의 지표가 된다. 감염성 인자는 [표 1]과 같이, 지표식물과의 기주관계를 고려하여 선택할 수 있으나, 이에 한정된 것은 아니다.The standard sample of the present invention is a sample containing an infectious agent and is an indicator of a positive control. The infectious agent can be selected in consideration of the host relationship with the indicator plant, as shown in [Table 1], but is not limited thereto.
본 발명의 식물병 저항성 유도물질은 식물 유래, 미생물 유래 또는 이의 혼합물일 수 있으며, 항바이러스성인 특징이 있다.The plant disease resistance inducing substance of the present invention may be a plant-derived, microorganism-derived, or a mixture thereof, and is characterized by being antiviral.
본 발명의 감염성 인자는 바이러스인 특징이 있다. The infectious agent of the present invention is characterized by being a virus.
본 발명의 스크리닝 방법에서, 지표식물은 3-5 엽기, 6-8 엽기 또는 9-10 엽기의 식물을 사용할 수 있으며, 당업자에게 의해 용이하게 선택이 가능하다. In the screening method of the present invention, the indicator plants may be plants of 3-5 leaf, 6-8 leaf, or 9-10 leaf stage, and can be easily selected by those skilled in the art.
또한, 본 발명의 스크리닝 방법에서, 검정용 시료를 도말한 후, 괴사병반 수를 계수하는 시기는 사용하는 표준시료에 포함된 감염성 인자의 감염력에 따라 달라질 수 있으나, 괴사병반이 50개 이상 발생하는 시점까지 방치할 수 있으며, 이는 당업자에게 의하여 용이하게 선택할 수 있다. In addition, in the screening method of the present invention, the time for counting the number of necrotic lesions after applying a test sample may vary depending on the infectivity of the infectious agent contained in the standard sample used, but 50 or more necrotic lesions , Which can be easily selected by those skilled in the art.
표준시료에 포함된 감염성 인자의 감염력은 예비실험을 통하여, 괴사병반이 반엽 당 50 내지 250개의 수준으로 발생할 수 있을 정도로 감염성 인자가 포함되도록 희석에 의하여 제조하는 것을 특징으로 한다.
The infectivity of the infectious agent contained in the standard sample is characterized in that it is prepared through dilution by preliminary experiment so that the necrotic lesion includes infectious agent such that it can occur at a level of 50 to 250 per half leaf.
본 발명은 하기의 실시예에 의하여 더욱 구체적으로 설명한다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것일 뿐, 어떤 의미로든 본 발명의 범위가 이러한 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다. The present invention will be described in more detail with reference to the following examples. However, the following examples are provided to aid understanding of the present invention, and the scope of the present invention is not limited by these examples in any sense.
이 때, 사용되는 기술 용어 및 과학 용어에 있어서 다른 정의가 없다면, 이 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 통상적으로 이해하고 있는 의미를 가지며, 하기의 설명 및 첨부 도면에서 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있는 공지기능 및 구성에 대한 설명은 생략한다.
In this case, unless otherwise defined, technical terms and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs. In the following description and the accompanying drawings, A description of known functions and configurations that may unnecessarily obscure the description of the present invention will be omitted.
[[ 실시예Example 1] One] 검정용 시료 및 담배모자이크바이러스(Black samples and tobacco mosaic virus ( TMV)TMV) 감염액의 제조 Production of Infectious Fluid
1. 담배모자이크바이러스(1. Tobacco mosaic virus ( TMVTMV ) 감염액의 제조 및 접종조건 확립Establishment of manufacturing conditions and inoculation conditions of infectious liquid
야생종 담배(Nicotiana benthamiana)의 9~10 엽기에 담배모자이크바이러스(TMV)를 감염시키고, 14일간 증식시킨 다음, 병징이 확연하게 나타난 선단부의 잎을 취하여, 멸균된 막자사발에서 잎 1g당 1M 접종용 완충액(38.5g KH2PO4+61.5g K2HPO4/1L, pH 7.0) 5ml 비율로 혼합한 후, 마쇄, 착즙하여 TMV 감염액을 수득하였다. Nicotiana (TMV) was infected with 9 to 10 leaves of benthamiana , and the leaves were taken at the tip of the leaf with the symptomatic appearance, and the 1M inoculation buffer (38.5 g KH 2 PO 4 + 61.5g K 2 HPO were mixed with 4 / 1L, pH 7.0) 5ml ratio, grinding, to give the juice liquid TMV infection.
상기 수득된 담배모자이크바이러스(TMV) 감염액을 야생종 담배에 접종하였을 경우, 괴사병반이 반엽당 50 ~ 250개 수준이 발생할 정도로 희석하여 검정용 적정 농도(접종용 완충액 농도 0.01M)를 맞추어 생물검정용 접종원으로 사용하였다.
When the tobacco mosaic virus (TMV) -infectious fluid obtained was inoculated into the wild-type tobacco, the necrosis lesion was diluted to a level of 50 ~ 250 per half leaf, and the titration amount of the test solution (0.01 M buffer for inoculation) Was used as an inoculation source.
2. 2. 항식물바이러스Anti-plant virus 활성의 검정용 시료 조제 Preparation of sample for assay
항바이러스 활성을 가진 시료는 증류수로 희석하여 50배 희석액을 조제하였으며, 이 때, 표준품은 역가가 90% 이상의 순도품으로 하였다. Samples with antiviral activity were diluted with distilled water to prepare a 50-fold dilution, and the standard product was a purity product having a potency of at least 90%.
1.5ml 에펜도르프튜브(eppendorf tube)에 먹물버섯 열수 추출물을 검정용 시료로 하고, 이의 200㎕와 담배모자이크바이러스(TMV) 감염액 200㎕를 투입하여 최종 농도가 표준시료는 100배가 되도록 하고, 볼텍스(vortex)를 이용하여 강하게 3분간 교반하여 검정용 시료와 담배모자이크바이러스(TMV) 감염액을 혼합하여 검정용 시료를 조제하였다.
200 μl of this extract and 200 μl of tobacco mosaic virus (TMV) infectious solution were added to a 1.5 ml eppendorf tube as a test sample. The final concentration of the test sample was 100 times, (vortex) for 3 minutes to prepare a test sample by mixing test sample with tobacco mosaic virus (TMV) infectious solution.
[[ 실시예Example 2] 2] 항바이러스 활성검정방법Antiviral activity assay method
본엽 7~8엽기의 오리엔트종(Nicotiana tabaccum cv. Xanthi nc) 담배에서 약 12cm×8.5 cm(종×단) 크기의 잎을 엽병 부위까지 절취하여 2겹으로 겹쳐진 천에 치상한 뒤, 탄소가루(carborundum)을 골고루 뿌리고, 검정용 시료는 담배 잎의 우측 반엽에, 동일한 농도의 담배모자이크바이러스(TMV) 감염액은 좌측 반엽에 면봉을 이용하여 5반복 접종하였다. 그런 다음, 페트리디쉬(petri dish(직경 14.5cm))에 6cm×6cm로 잘려진 페이퍼타올을 깔아 놓고, 상기 검정용 시료와 담배모자이크바이러스(TMV)감염액이 처리된 담뱃잎을 치상한 뒤 엽병에 솜을 감싸고 증류수(0.1% NaOCl)를 공급한 뒤 뚜껑을 닫아 23℃ 인큐베이터(공기 비순환 방식)에서 3일간 배양하였다. 배양 중에는 하루에 2번 증류수(0.1% NaOCl)를 3ml씩 공급하여 담배 잎의 건조를 예방하였다.Orient species in the 7th to 8th leaf of the main leaf ( Nicotiana tabaccum cv. Xanthi nc) Tobacco leaves of about 12 cm × 8.5 cm (end × end) size were cut to the petiole and placed on 2 layers of overlapping cloth. Carbon powders were evenly sprayed. To the right half of the leaves, the same amount of Tobacco Mosaic Virus (TMV) infected liquid was inoculated into the left half with 5 swabs using a cotton swab. Then, a paper towel cut into 6 cm x 6 cm was put on a petri dish (14.5 cm in diameter), and the tobacco leaf treated with the test sample and the cigarette mosaic virus (TMV) infected liquid was applied to the petri dish (0.1% NaOCl). The lid was closed and incubated for 3 days in a 23 ° C incubator (air non-circulating system). During the incubation, 3 ml of distilled water (0.1% NaOCl) was supplied twice a day to prevent drying of tobacco leaves.
접종 3일 후, 괴사병반(local lesion)을 계수하였으며 무처리 반엽의 병반수가 50개 미만일 경우 계수에서 제외하였으며, 역가(CTV) 90% 이상에서 방제능을 확인할 수 있었다(도 1).After 3 days of inoculation, necrotic lesions were counted. When the number of lesions without treatment was less than 50, the counts were excluded from the count.
상기 역가(CTV)는 약제를 처리한 반엽의 병반수와 무처리 반엽의 병반수를 기준으로 아래의 공식에 의하여 계산하였으며, 검정하고자 하는 먹물버섯 열수수추출물의 역가(CTV)가 90% 이상인 경우 방제능이 있는 것으로 판정할 수 있다.(CTV) was calculated by the following formula based on the number of half-leaf lesions treated with the drug and the number of lesions treated with the untreated half-leaf. The CTV of the mushroom hydrothermal extract to be assayed was more than 90% It can be judged that there is a control ability.
Claims (4)
(a) 생물검정용 접종원을 3일 간 반엽에 처리하여 괴사병반이 최소 50개 발생할 수 있는 농도로 상기 접종원의 원액을 희석하는 단계;
(b) 항바이러스 활성 검정용 시료는 원액에 대해 50배 희석액으로 조제하는 단계;
(c) 지표식물의 좌측 반엽에 (a) 단계에서 제조된 희석액을 도말하여 무처리 반엽을 준비하는 단계;
(d) 상기 지표식물의 우측 반엽에 (a) 및 (b) 단계에서 제조한 희석액을 각각 1:1비율로 혼합된 용액을 도말하여 검정용 시료처리 반엽을 준비하는 단계;
(e) (c)의 무처리 반엽에 괴사병반(local lesion)이 최소 50개 발생하도록 (c)와 (d) 단계에서 도말한 잎을 포함하는 지표식물을 3일간 방치하는 단계; 및
(f) (c) 및 (d)의 반엽에 나타난 괴사병반 수를 계수하고, 다음의 역가(CVT)검정공식에 대입하여 역가가 90% 이상이면 상기 검정용 시료에 방제능이 있음으로 판정하는 단계.
A screening method for a plant disease resistance inducing substance comprising the steps of:
(a) treating the inoculation source for bioassay for 3 days with half-leaves to dilute the inoculum source concentrate at a concentration at which at least 50 necrosis lesions can occur;
(b) preparing a sample for antiviral activity assay with a 50-fold dilution of the stock solution;
(c) preparing an untreated half-leaf by smearing the diluted solution prepared in step (a) on the left half of the indicator plant;
(d) preparing a test sample-treated test strip by laminating a solution of the diluted solution prepared in step (a) and the diluted solution prepared in step (b) in a ratio of 1: 1 on the right half of the indicator plant;
(e) leaving the indicator plants containing leaves blotted in steps (c) and (d) for at least 50 occurrences of necrotic lesions on the untreated bark of (c) for 3 days; And
(f) counting the number of necrotic lesions in the half-lobes of (c) and (d) and substituting the test results in the following titration (CVT) test formula to judge that the test sample has the ability to control if the activity value is 90% .
The method of screening for a plant disease resistance inducing substance according to claim 1, wherein, in step (e), when 50 or fewer occurrences of necrotic lesions in the untreated bark of (c) are excluded from the counting.
The method for screening a plant disease resistance inducing substance according to claim 1, wherein the indicator plant is tobacco ( Nicotiana Benthamiana ).
The method according to claim 1, wherein the inoculation source for bioassay is Tobacco mozaic virus.
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| KR101091873B1 (en) * | 2009-08-12 | 2011-12-12 | 전남대학교산학협력단 | A Composition comprising microbial determinant butyl L-pyroglutamate from Klebsiella oxytoca C1036 for control of Tobacco Mosaic Virus and Botrytis cinerea disease |
-
2012
- 2012-12-21 KR KR1020120150480A patent/KR101554000B1/en active IP Right Grant
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