KR102105252B1 - Composition for controlling Red mite using Beauveria bassiana JEF-410 and method for preventing Red mite using the same - Google Patents

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김재수
박소은
이미롱
김종철
이세진
김시현
신태영
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전북대학교산학협력단
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Abstract

The present invention relates to a Beauveria bassiana JEF-410 strain having a chicken mite control effect, a composition for controlling chicken mite using the same, and a method for controlling chicken mite using the same.

Description

닭진드기 방제효과를 갖는 보베리아 바시아나 JEF-410 균주, 이를 이용한 닭진드기 방제용 조성물 및 닭 진드기 방제방법 {Composition for controlling Red mite using Beauveria bassiana JEF-410 and method for preventing Red mite using the same}Boberia bassiana JEF-410 strain having chicken mite control effect, composition for controlling mite using chicken and method for controlling chicken mite {Composition for controlling Red mite using Beauveria bassiana JEF-410 and method for preventing Red mite using the same}

본 발명은 닭진드기 방제효과를 가지는 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주, 이를 이용한 닭진드기 방제용 조성물 및 이를 이용한 닭진드기 방제방법에 관한 것이다.The present invention relates to a Boberia bassiana JEF-410 strain having a chicken mite control effect, a composition for controlling chicken mites using the same, and a method for controlling chicken mites using the same.

닭진드기(와구모, red mite)는 봄부터 가을까지 산란계 농가 생산성 하락의 주요 원인으로, 주요 질병을 전파하는 요인으로 양계업에 큰 영향을 미치고 있다. 유럽 11개국의 조사 결과, 전체 농가 중 83%가 닭진드기에 감염된 것으로 나타났으며, 이로 인한 손실액은 연간 약 1,982억 달러로 추정되고 있음. 우리나라에서도 닭진드기 감염률이 90% 이상으로 추정되며, 연간 손실액은 약 1,050억원으로 알려져 있다.Chicken mite (wagumo, red mite) is a major cause of decline in productivity of spawning farms from spring to autumn, and is a factor that spreads major diseases and has a great influence on poultry industry. A survey of 11 countries in Europe found that 83% of all farm households were infected with chicken mites, which is estimated to amount to about $ 198 billion annually. In Korea, the infection rate of chicken mite is estimated to be over 90%, and the annual loss is known to be about 1,050 billion won.

닭진드기에 감염된 양계는 흡혈에 의한 스트레스를 받게 되며, 이로 인해 빈혈, 쇠약, 깃털 탈락 등을 유발시켜 산란율은 약 20% 감소하고, 폐사율이 최대 4%까지 증가한다고 보고되고 있다. 이러한 닭진드기는 생존력이 뛰어나 1년 내내 번식이 가능하고, 섭식 활동 없이 9개월 간 생존이 가능한 것으로 알려져 있으며, 25℃ 조건에서 6일 만에 개체수가 2배로 증가되어 방제가 매우 어려운 해충으로 알려져 있다.It is reported that poultry infected with chicken mite is stressed by vampire, which causes anemia, weakness, and dropping of feathers, resulting in a decrease of about 20% in spawning and an increase in mortality of up to 4%. These chicken mites are known to be very difficult to control because they have excellent viability and can reproduce all year round, and can survive for 9 months without feeding activity, and the population doubles in 6 days at 25 ℃. .

현재 우리나라에서 닭진드기 방제에 등록된 살충제 수는 13종류로 알려져 있으나, 5종류는 판매가 중단되었고, 나머지 중 4종류의 살충제는 빈 축사에서만 사용해야하는 적용상의 한계점이 있다. 현실적으로 닭이 사육되는 상태에서 사용할 수 있는 닭진드기 방제용 약품의 수는 4종류로 인식되고 있으나, 닭진드기의 약제 저항성 증가와, 잔류독성 및 환경오염 등이 근래 크게 대두되고 있음에 따라, 새로운 생물적 살충제에 대한 개발이 사회적으로 강하게 요구되고 있다.Currently, the number of pesticides registered for the control of chicken mites in Korea is known to be 13, but five of them have been discontinued, and among the remaining four, pesticides have limitations in application that should only be used in empty houses. In reality, the number of chemicals for controlling chicken mites that can be used while chickens are kept is recognized as four types, but as the resistance of chicken mites to chemicals, residual toxicity and environmental pollution have recently increased, new organisms are emerging. The development of enemy pesticides is strongly demanded socially.

종래 기술에서는 닭진드기 방제와 관련하여 살충성 정유 또는 식품 첨가물을 이용한 닭진드기 살충성 조성물이 대한민국 공개특허 제 10-2013-0142588호에 의해 제시된바 있다. 하지만 식물 추출물은 작용 특성상 식물 추출물에 직접 접촉한 닭진드기에만 방제 효과가 있고, 축사 내에 숨어있는 등 직접 접촉하지 않은 닭진드기에는 방제효과가 없는 한계점을 가지고 있다. 최근까지 살충제와 직접적으로 접촉하지 않은 닭진드기들까지도 효과적으로 방제할 수 있는 곤충병원성 진균을 이용하는 기술에 대하여는 알려진 바 없다.In the related art, a chicken mite pesticidal composition using an insecticidal essential oil or a food additive in connection with the control of a chicken mite has been proposed by Korean Patent Publication No. 10-2013-0142588. However, the plant extract has a limitation in that it has a control effect only on chicken mites that are in direct contact with the plant extract due to its action characteristics, and has no control effect on chicken mites that are not directly contacted, such as hiding in a barn. Until recently, there is no known technique using insect-pathogenic fungi that can effectively control even chicken mites that do not directly contact pesticides.

이에 본 발명자들은, 기존 합성 살충제의 저항성 문제와 환경 잔류문제를 획기적으로 극복하면서도, 닭진드기에 간접적으로 접촉하여도 방제효과가 있는 미생물 기반 신규 곤충병원성 진균의 발굴 및 효과적인 닭진드기 관리 시스템을 구축하고자 예의 노력하였다.Accordingly, the present inventors have attempted to discover a new insect pathogenic fungus based on microorganisms and have an effective chicken mite management system, which has a control effect even when it is indirectly contacted with chicken mite, while dramatically overcoming the resistance problem and environmental residual problem of existing synthetic pesticides. I tried to be polite.

그 결과, 인축에 무해하며 환경에 안전한 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주의 뛰어난 살충력을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.As a result, the present invention was completed by confirming the excellent insecticidal power of the Beauveria bassiana JEF-410 strain, which is harmless to humans and environmentally safe.

본 발명은 상기와 같은 문제를 해결하기 위해 안출된 것으로, 본 발명자들은 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주의 뛰어난 살충력을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.The present invention has been devised to solve the above problems, and the inventors have completed the present invention by confirming the excellent insecticidal power of the Beauveria bassiana JEF-410 strain.

본 발명의 목적은 닭진드기 방제효과를 가지는 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주 (KFCC11791P) 를 제공하는 것이다. An object of the present invention is to provide a strain of chicken mite (Beauveria bassiana) JEF-410 strain (KFCC11791P) having a control effect.

본 발명의 또 다른 목적은 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주(KFCC11791P), 상기 균주의 포자 또는 상기 균주의 배양액를 포함하는 닭진드기 방제용 조성물을 제공하는 것이다. Another object of the present invention is to provide a composition for controlling chicken mites comprising a Boberia bassiana JEF-410 strain (KFCC11791P), a spore of the strain, or a culture medium of the strain.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 닭진드기 방제용 조성물을 처리하여 닭진드기를 방제하는 방법을 제공하는 것이다. Another object of the present invention is to provide a method for controlling chicken mites by treating the composition for controlling chicken mites.

본 발명의 또 다른 목적은 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주 (KFCC11791P) 및 이사리아 푸모소로세아(Isaira fumosorosea) JEF150 (KFCC11757P), 상기 균주의 포자 또는 상기 균주의 배양액를 포함하는 닭진드기 방제용 조성물을 제공하는 것이다. Another object of the present invention is the Boberia bassiana (Beauveria bassiana) JEF-410 strain (KFCC11791P) and Isaria fumosorosea (Isaira fumosorosea) JEF150 (KFCC11757P), spores of the strain or chickens comprising a culture of the strain It is to provide a composition for controlling ticks.

상기의 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 닭진드기 방제효과를 가지는 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주를 제공할 수 있다. In order to achieve the above object, the present invention can provide a Boberia bassiana (Beauveria bassiana) JEF-410 strain having a control effect of chicken mites.

본 발명의 바람직한 일실시에에 따르면, 상기 닭진드기는 데르마니수스 갈리나에(Dermanyssus gallinae)인 것일 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the chicken mite may be Dermanyssus gallinae.

본 발명은 또한 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주, 상기 균주의 포자 또는 상기 균주의 배양액를 포함하는 닭진드기 방제용 조성물을 제공할 수 있다. The present invention can also provide a composition for controlling chicken mites comprising a Beveria bassiana JEF-410 strain, a spore of the strain, or a culture medium of the strain.

본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 닭진드기 방제용 조성물은 액상제형, 분말제형 및 입상제형으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나로 제형화되는 것일 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the composition for controlling chicken mites may be formulated as any one selected from the group consisting of liquid formulations, powder formulations, and granular formulations.

본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 닭진드기 방제용 조성물은 증량제 및 계면활성제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 추가로 포함하여 제형화하는 것일 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the composition for controlling chicken mites may be formulated to further include any one or more selected from the group consisting of bulking agents and surfactants.

본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 계면활성제는 닭진드기 방제용 조성물이 액상제형인 경우 소듐 리그노설포네이트(Sodiumlignosulfonate), 이소트리데실 알코올 에톡실레이트(isotridecyl alcohol ethoxylate) 및 아세틸렌 다이올(acetylene diol)으로 구성된 군에서 선택된 어느 하나 이상인 비이온 계면활성제인 것일 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the surfactant is sodium lignosulfonate (Sodiumlignosulfonate), isotridecyl alcohol ethoxylate (isotridecyl alcohol ethoxylate) and acetylene diol (when the composition for controlling chicken mites is in liquid form) acetylene diol) may be one or more nonionic surfactants selected from the group consisting of.

본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 계면활성제는 닭진드기 방제용 조성물이 분말제형 또는 입상제형인 경우 소듐 리그노설포테이트(Sodium lignosulfonate) 또는 E0/P0/E0 블록 중합체(EO/PO/EO block copolymer)인 비이온 계면활성제인 것일 수 있다.According to one preferred embodiment of the present invention, the surfactant is sodium lignosulfonate or E0 / P0 / E0 block polymer (EO / PO / EO) when the composition for controlling chicken mites is in powder form or granular form. block copolymer).

본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 증량제는 광물성 분말인 것일 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the extender may be a mineral powder.

본 발명은 또한 상기 서술한 닭진드기 방제용 조성물을 처리하는 단계를 포함하는 닭진기를 방제하는 방법을 제공할 수 있다.The present invention can also provide a method for controlling chicken mite comprising the step of treating the composition for controlling the aforementioned chicken mite.

본 발명은 또한 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주 (KFCC11791P) 및 이사리아 푸모소로세아(Isaira fumosorosea) JEF150 (KFCC11757P), 상기 균주의 포자 또는 상기 균주의 배양액를 포함하는, 닭진드기 방제용 조성물을 제공할 수 있다. The present invention also includes the control of chicken mites, including the Boberia bassiana JEF-410 strain (KFCC11791P) and Isaira fumosorosea JEF150 (KFCC11757P), spores of the strain, or cultures of the strain. It is possible to provide a composition.

본 발명의 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주를 이용한 닭진드기 방제방법을 이용하여 닭진드기에 분무처리하는 경우 기존에 보고된 살충용 조성물보다 현저히 높은 방제 효과가 있다. 본 발명의 닭진드기 방제용 조성물은 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주를 포자형태로 포함하고 있어, 조성물에 직접적으로 접촉하지 않은 닭진드기에 대하여도 방제효과가 있다. 또한 본 발명의 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주 및 이사리아 푸모소로세아(Isaira fumosorosea) JEF150 (KFCC11757P)를 이용하여 닭진드기에 처리할 경우 각각을 처리할 때보다 같이 처리 할 때 현저히 높은 방제 효과가 있다. When spraying chicken mite using the method for controlling chicken mite using the Boberia bassiana JEF-410 strain of the present invention, there is a significantly higher control effect than the previously reported insecticidal composition. The composition for controlling chicken mites of the present invention includes a Boberia bassiana JEF-410 strain in a spore form, and thus has a control effect against chicken mites that do not directly contact the composition. In addition, when treating with a chicken mite using the Boberia bassiana JEF-410 strain and Isaira fumosorosea JEF150 (KFCC11757P) of the present invention, when treating with each other than when treating each It has a remarkably high control effect.

도 1은 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주를 육안으로 관찰한 것(도 1(a)) 및 실체현미경으로 관찰한 균사와 포자의 생장 형태 (도 1(b))를 나타낸 것이다.
도 2는 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주의 ITS (Internal Transribed Spacer)의 염기서열을 나타낸 것이다.
도 3은 기존에 보고된 균주들과 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주의 유연관계를 비교 분석한 결과이다.
도 4는 Italian millet을 이용한 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주의 포자 생산 (도 4(a)) 및 고체배양생산 과정 (도 4(b))를 나타낸 것이다.
도 5는 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주의 분리처리에 의한 닭진드기의 살충률 (단반복) (도 5(a)) 및 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주에 의해 치사된 닭진기(14일차) (도 5(b))를 나타낸 것이다.
도 6는 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주의 분리처리에 의한 닭진드기의 살충률 (3 반복) (도 6(a)) 및 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주에 의해 치사된 닭진드기(14일차) (도 5(b))를 나타낸 것이다.
도 7는 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주와 레카니실리움 아테나텀 (Lecanicillium attenuatum) JEF 145 또는 이사리아 푸모소로세아(Isaira fumosorosea) (KFCC11757P) 균주와의 혼합처리에 의한 닭진드기의 살충률 (도 7)을 나타낸 것이다.
도 8은 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주를 이용한 수화제 제조 방법의 모식도로써, 기장에 고체 배양된 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주(도 8 (a)), 수확된 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주의 포자 (도 8 (b)) 및 상기 수확된 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주의 포자 및 증량제, 계면활성제를 혼합을 통합 수화제 제조 (도 8 (c))를 나타낸 것이다.
도 9은 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주를 이용한 액상 제형의 제조 방법의 모식도로써, 기장에 고체 배양된 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주(도 9 (b)), 수확된 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주의 포자(도 9 (b)), 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주의 포자와 게면활성제의 혼합물 (도 9 (c)) 및 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주의 액상 제형의 제조(도 9 (d))를 나타낸 것이다.
Figure 1 shows the growth of the mycelium and spores observed with the naked eye (FIG. 1 (b)) observed by the naked eye (FIG. 1 (a)) and the Boberia bassiana ( Beauveria bassiana ) JEF-410 strain. .
Figure 2 shows the nucleotide sequence of the ITS (Internal Transribed Spacer) of the Beauveria bassiana ( Beauveria bassiana ) JEF-410 strain.
3 is a result of comparing and analyzing the relationship between the previously reported strains and the Boberia bassiana (Beauveria bassiana) JEF-410 strain.
4 shows spore production (FIG. 4 (a)) and solid culture production process (FIG. 4 (b)) of the Boeveria bassiana JEF-410 strain using an Italian millet.
FIG. 5 shows the insecticidal rate (short repetition) of chicken mites (FIG. 5 (a)) and the Boberia bassiana JEF-410 strain by separating treatment of the Beauveria bassiana JEF-410 strain. The chicken tick (day 14) killed by (Fig. 5 (b)) is shown.
FIG. 6 shows the insecticidal rate of chicken mites (3 repetitions) (FIG. 6 (a)) and the Boberia bassiana JEF-410 strain by separation treatment of the Boberia bassiana JEF-410 strain. Chicken mites killed by day (Day 14) (Fig. 5 (b)).
Figure 7 is a chicken mite by mixing treatment with the Beauveria bassiana JEF-410 strain and Lecanicillium attenuatum JEF 145 or Isaira fumosorosea (KFCC11757P) strain. The insecticidal rate of (Fig. 7) is shown.
Figure 8 is a schematic diagram of a method for preparing a hydrating agent using a Beveria bassiana JEF-410 strain, and a Beveria bassiana JEF-410 strain (Fig. 8 (a)) solid-cultured in millet, harvested Incorporating a mixture of spores of the Beauveria bassiana JEF-410 strain (FIG. 8 (b)) and the spores and extenders of the harvested Boberia bassiana JEF-410 strain, surfactants, and surfactants Preparation (Fig. 8 (c)).
Figure 9 is a schematic diagram of a method for preparing a liquid formulation using a Boberia bassiana JEF-410 strain, a Boberia bassiana JEF-410 strain solid cultured in millet (Fig. 9 (b)) , Spores of harvested Boberia bassiana JEF-410 strain (Fig. 9 (b)), mixture of spores and surfactants of Boberia bassiana JEF-410 strain (Fig. 9 (c) ) And Boberia bassiana (Beauveria bassiana) shows the preparation of the liquid formulation of the JEF-410 strain (Fig. 9 (d)).

이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

상술한 바와 같이, 기존 합성 살충제의 저항성 문제와 환경 잔류 문제를 획기적으로 극복할 수 있으며, 기존 식물 추출물의 기반의 살충성분이 닭진드기에 직접적으로 접촉하는 경우에만 방제효과가 나타나는 점을 개선하는 미생물 기반 신규 살충성 진균의 발굴 및 효과적인 닭진드기 관리 시스템의 개발이 요구되고 있다. As described above, it is possible to dramatically overcome the resistance problem and environmental residual problem of the existing synthetic pesticides, and improve the point that the control effect appears only when the insecticidal component based on the existing plant extract directly contacts chicken mites. There is a need to discover new insecticidal fungi based and to develop an effective chicken mite management system.

본 발명에 따른 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주를 이요한 닭진드기 방제용 조성물은 인축에 무해하고, 환경에 안전하며 뛰어난 살충력을 제공하므로, 닭진드기 방제용 조성물로서 효과적이다. The composition for controlling chicken mite using the Beauveria bassiana JEF-410 strain according to the present invention is harmless to livestock, is safe to the environment, and provides excellent insecticidal power, and thus is effective as a composition for controlling chicken mite.

따라서 본 발명은 닭 진드기 방제효과를 가지는 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주를 제공한다. Accordingly, the present invention provides a strain of Boberia bassiana JEF-410 having a control effect against chicken mites.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 강원도 정선군에서 토양을 채집하였다. 채집된 토양에 갈색거저리 유충을 처리하였다. 그 결과 토양에 있는 곤충병원성 진균에 의해 치사된 갈색거저리 유충을 확보하였다. 치사된 갈색거저리 유충에서 곤충병원성진균의 단일 균총 (single colony)를 분리하였다 (1/4 Sabouraud dextrose agar, 25±2℃)In a specific embodiment of the present invention, the inventors collected soil from Jeongseon-gun, Gangwon-do. The collected soil was treated with brown larvae. As a result, brown larvae killed by insect-pathogenic fungi in the soil were obtained. A single colony of insect pathogenic fungi was isolated from the lethal brown larvae (1/4 Sabouraud dextrose agar, 25 ± 2 ℃)

본 발명의 다른 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 실시예 1에서 얻은 균주를 시퀀싱하여 최종적으로 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주로 동정하였고 (도 2), 기존에 보고된 15종의 보베리아 (Beauveria) 속의 균주와 ITS (internal transcribed spacer) 시퀀스의 유연관계를 비교하여 (도 3) 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주가 기존의 균주와 유전적인 차이가 있는 신규한 isolate임을 확인하였다. In another specific embodiment of the present invention, the present inventors sequenced the strain obtained in Example 1 and finally identified as the Boberia bassiana JEF-410 strain (FIG. 2), and 15 previously reported strains. By comparing the flexible relationship between the strains of the genus Boberia (Internal transcribed spacer) and the ITS sequence (FIG. 3), the new strains of the Beauveria bassiana JEF-410 strain have genetic differences from existing strains Was confirmed.

상기 닭진드기는 와구모 내지 Red Mite라고 불리는 데르마니수스 갈리나에(Dermanyssus gallinae)인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The chicken mite is preferably but not limited to Dermanyssus gallinae, which is called Red Mite.

본 발명은 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주, 상기 균주의 포자 또는 상기 균주의 배양액를 포함하는 닭진드기 방제용 조성물을 제공한다. The present invention provides a composition for the control of chicken mites comprising a Beveria bassiana JEF-410 strain, a spore of the strain or a culture medium of the strain.

상기 닭진드기 방제용 조성물은 상기 균주의 현탁액을 곡물배지에 접종하여 고체배양을 통해 제조된 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 기장(millet), 쌀(rice), 조(Italian millet), 보리, 콩, 수수, 조, 쌀 및 현미로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 곡물로 이루어진 배지를 사용하는 것이고, 그 중 기장(millet)배지에 접종하여 고체 배양하는 것이 가장 바람직하다(도 4). The composition for controlling the chicken mite is preferably prepared through solid culture by inoculating the suspension of the strain in the grain medium, more preferably millet, rice, Italian millet, barley, soybean , It is to use a medium consisting of one or more grains selected from the group consisting of sorghum, crude, rice, and brown rice, and among them, it is most preferable to inoculate the millet medium and solid culture (FIG. 4).

본 발명의 상기 닭진드기 방제용 조성물에 있어서, 상기 고체배양은상기 균주의 현탁액을 배지에 접종한 후, 바람직하게는 20 내지 30℃에서 5일 내지 20일 동안 배양한 후, 실온 조건에서 1 내지 30일 동안 건조할 수 있고, 더욱 바람직하게는 25℃ 조건에서 14일간 배양 후, 실온 조건에서 1일간 건조시키는 것이 바람직하다.In the composition for controlling chicken mites of the present invention, the solid culture is inoculated with a suspension of the strain in a medium, and preferably cultured at 20 to 30 ° C. for 5 to 20 days, and then at room temperature. It can be dried for 30 days, more preferably after 14 days of incubation at 25 ° C, and preferably for 1 day at room temperature.

본 발명의 상기 닭진드기 방제용 조성물은 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주의 포자를 포함하고 있으므로, 포자가 숙주곤충에 부착한 후 발아하여 진균증 등을 일으켜 살충효과가 나타나게 된다. 또한 이에 직접적으로 접촉한 닭진드기 외에 조성물에 직접적으로 접촉하지 않은 닭진드기라도 포자의 전달로 인해 방제효과가 나타날 수 있다.Since the composition for controlling chicken mites of the present invention contains spores of the Boberia bassiana JEF-410 strain, the spores attach to the host insects and germinate to cause fungi and the like, resulting in a pesticidal effect. In addition, in addition to chicken mites directly contacted therewith, even chicken mites not directly in contact with the composition may exhibit a control effect due to the transmission of spores.

본 발명의 상기 닭진드기 방제용 조성물은 액상, 분말 또는 입상제형인 것이 바람직하다. 상기 분말제형은 가루형태를 의미하며, 상기 입상제형은 고체 배양체를 증량제를 이용하여 중량 대비 1~100 배로 희석한 낟알이나 알갱이 형태를 의미하나 이에 한정되지 않는다.The composition for controlling chicken mites of the present invention is preferably in the form of a liquid, powder or granule. The powder formulation means a powder form, and the granular formulation means a grain or granule form in which a solid culture is diluted 1 to 100 times by weight using an extender, but is not limited thereto.

본 발명의 상기 분말 또는 입상제형은, 닭진드기 방제용 조성물과 계면활성제 및 증량제를 바람직하게는 각각 001~50%, 001~30% 및 1~70%의 중량비율로 혼합하여 제조하며, 더욱 바람직하게는 각각 5 : 5 : 90 의 중량비율로 혼합하여 제조하는 것이 바람직하다(도 8, 실시예 7). 만일 계면활성제의 함량이 상기 비율보다 높아지는 경우에는 경제성이 떨어지고 닭진드기로부터 방제용 조성물이 흘러내려 방제 비용 대비 적합한 방제효과를 볼 수 없으며, 상기 비율보다 낮아지는 경우에는 닭진드기에 방제용 조성물이 충분하게 부착되지 않아 방제효과가 떨어질 수 있다.The powder or granule formulation of the present invention is prepared by mixing a composition for controlling chicken mites, a surfactant and an extender in a weight ratio of 001 to 50%, 001 to 30% and 1 to 70%, respectively, and more preferably It is preferable to prepare by mixing at a weight ratio of 5: 5: 90, respectively (FIG. 8, Example 7). If the content of the surfactant is higher than the above ratio, economical efficiency is lowered and the control composition flows out from the chicken mite, so that a suitable control effect cannot be seen compared to the control cost, and if it is lower than the ratio, the control composition for the chicken mite is sufficient. Because it is not attached, the control effect may be deteriorated.

본 발명의 상기 액상 제형은 닭진드기 방제용 조성물과 계면활성제를 각각 0.01~80% 및 0.01~20%의 중량비율로 혼합하고, 물에 1 : 10 내지 1 : 2000의 중량비율로 희석하여 제조하며, 이때 증량제를 전체 중량대비 1 ~ 95%로, 바람직하게는 1 ~ 50%로 첨가할 수 있다. 보다 바람직하게는 닭진드기 방제용 조성물과 계면활성제를 100 : 1으로, 더욱 바람직하게는 2 : 1로 중량비율로 혼합하여 물에 1 : 10 내지 1 : 1000으로, 더욱 바람직하게는 1 : 100 내지 1 : 1000의 중량비율로 희석하여 제조하는 것이 바람직하다(도 9, 실시예 7) 만일 계면활성제의 함량이 상기 비율보다 높아지는 경우에는 경제성이 떨어지고 닭진드기로부터 방제용 조성물이 흘러내려 방제 비용 대비 적합한 방제효과를 볼 수 없으며, 상기 비율보다 낮아지는 경우에는 닭진드기에 방제용 조성물이 충분하게 부착되지 않아 방제 효과가 떨어질 수 있다.The liquid formulation of the present invention is prepared by mixing a composition for controlling chicken mites and a surfactant at a weight ratio of 0.01 to 80% and 0.01 to 20%, respectively, and diluting it with water at a weight ratio of 1: 10 to 1: 2000, In this case, the extender may be added at 1 to 95% by weight, preferably 1 to 50% by weight. More preferably, the composition and the surfactant for controlling chicken mite are mixed in a weight ratio of 100: 1, more preferably 2: 1, and water is 1:10 to 1: 1000, more preferably 1: 100 to water. 1: It is preferable to prepare by diluting at a weight ratio of 1000 (FIG. 9, Example 7) If the content of the surfactant is higher than the above ratio, economical efficiency is lowered and the composition for control flows out from chicken mites, which is suitable for the control cost. If the control effect is not seen, and if it is lower than the above ratio, the control effect may be lowered because the control composition is not sufficiently attached to the chicken mite.

본 발명의 상기 계면활성제는 작물보호제에 사용가능한 모든 계면활성제를 의미하며, 그 중 비이온 계면활성제인 것이 바람직하다. 상기 비이온 계면활성제는 폴리카르복실레이트(polycarboxylate), 소듐 리그노설포네이트(Sodium lignosulfonate), 소듐 다이알킬 설포석시네이트(sodium dialkyl sulfosuccinate), 소듐 알킬 설포네이트(sodium alkyl sulfonate), 폴리옥시에틸렌 알킬 페닐 에테르, 소듐 트리폴리포스페이트(sodium tripolyphosphate), 소듐 알킬 아릴 설포네이트(sodium alkyl aryl sulfonate),이소트리데실 알코올 에톡실레이트(isotridecyl alcohol ethoxylate), 아세틸렌 다이올(acetylene diol), 폴리옥시에틸렌 알킬 페닐 에테르(polyoxyethylene alkyl phenyl ether), 폴리옥시에틸렌 알킬 아릴 포스포릭 에스테르(polyoxyethylene aryl phosphoric ester), 폴리옥시에틸렌 알킬 아릴 에테르(polyoxyethylene alkyl aryl ether), 폴리옥시에틸렌 알킬 아릴 폴리머(polyoxyethylene alkyl aryl polymer), 폴리옥시에틸렌 알킬 아릴 폴리머 스페셜, 폴리옥시알킬온 알킬 페닐 에테르(polyoxyalkylone alkyl phenyl ether), 폴리옥시에틸렌 노닐 페닐 에테르(polyoxyethylene nonyl phenyl ether), 소듐 설포네이트나프탈렌 포름알데히드(sodium sulfonatenaphthalene formaldehyde), E0/P0/E0 블록 중합체(EO/PO/EO block copolymer), 트리톤 100 및 트윈 80 등인 것이 바람직하다.The surfactant of the present invention means all surfactants that can be used in crop protection agents, and among them, it is preferable that they are nonionic surfactants. The nonionic surfactant is polycarboxylate, sodium lignosulfonate, sodium dialkyl sulfosuccinate, sodium alkyl sulfonate, polyoxyethylene Alkyl phenyl ether, sodium tripolyphosphate, sodium alkyl aryl sulfonate, isotridecyl alcohol ethoxylate, acetylene diol, polyoxyethylene alkyl phenyl Ether (polyoxyethylene alkyl phenyl ether), polyoxyethylene alkyl aryl phosphoric ester, polyoxyethylene alkyl aryl ether, polyoxyethylene alkyl aryl polymer, polyoxyethylene alkyl aryl polymer, poly Oxyethylene alkyl aryl polymer special, polyoxyalkylone alkyl peg Polyoxyalkylone alkyl phenyl ether, polyoxyethylene nonyl phenyl ether, sodium sulfonatenaphthalene formaldehyde, E0 / P0 / E0 block polymer (EO / PO / EO block copolymer) , Triton 100 and twin 80 are preferred.

더욱 바람직하게는 상기 닭진드기 방제용 조성물이 액상 제형인 경우 상기 계면활성제는 소듐 리그노설포네이트(Sodium lignosulfonate), 이소트리데실 알코올 에톡실레이트(isotridecyl alcohol ethoxylate) 및 아세틸렌 다이올(acetylene diol)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상이고, 상기 닭진드기 방제용 조성물이 분말 또는 입상제형인 경우 상기 계면활성제는 소듐 리그노설포네이트(Sodium lignosulfonate) 및 E0/P0/E0 블록 중합체(EO/PO/EO block copolymer)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. More preferably, when the composition for controlling chicken mites is a liquid formulation, the surfactants are sodium lignosulfonate, isotridecyl alcohol ethoxylate, and acetylene diol. Any one or more selected from the group consisting of, when the composition for controlling chicken mites is a powder or granular formulation, the surfactant is sodium lignosulfonate and E0 / P0 / E0 block polymer (EO / PO / EO block) copolymer) is preferably at least one selected from the group consisting of, but is not limited thereto.

본 발명의 상기 증량제는 규조토, 탈크, 석회, 인회석, 돌로마이트(dolomite), 운모(mica), 카올리나이트(kaolinite), 벤토나이트(bentonite) 또는 파이로필라이드(Pyrophyllite) 등의 광물성 분말인 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 파이로필라이드(Pyrophyllite)인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The extender of the present invention is preferably a mineral powder such as diatomaceous earth, talc, lime, apatite, dolomite, mica, kaolinite, bentonite or pyrophyllite, Pyrophyllite is most preferable, but is not limited thereto.

본 발명은 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주는 닭진드기 성충에 진균증을 일으켜 닭진드기 방제에 탁월한 효과를 나타낸다. The present invention, Boberia bassiana (Beauveria bassiana) JEF-410 strain causes a fungus on the adult chicken mite, showing an excellent effect on the control of chicken mites.

본 발명은 또한 상기 서술한 닭진드기 방제용 조성물을 처리하는 단계를 포함하는 닭진기를 방제하는 방법을 제공할 수 있다.The present invention can also provide a method for controlling chicken mite comprising the step of treating the composition for controlling the aforementioned chicken mite.

상기 닭진드기 방제용 조성물은 현탁액으로 제조할 수 있다. The composition for controlling chicken mites may be prepared as a suspension.

상기 닭진드기 방제용 조성물은 접촉 처리, 분무 처리할 수 있으며, 가장 바람직하게는 분무 처리할 수 있다. The composition for controlling chicken mites may be contact-treated or spray-treated, and most preferably spray-treated.

본 발명의 상기 현탁액은 닭진드기 방제용 고체 배양체 내지 조성물인 배양된 균주의 포자를 수확하여 세포계산기(hemocytometer)로 계수한 후, 다양한 계면활성제를 이용하여 처리 농도에 맞춰 희석하여 제조하는 것이 바람직하다.The suspension of the present invention is preferably prepared by harvesting spores of a cultured strain that is a solid culture or composition for controlling chicken mites, counting it with a hemocytometer, and diluting it according to the treatment concentration using various surfactants. .

이때, 고체배양 완료 후 포자를 세포계산기(hemocytometer)로 계수하였을 때, 포자수는 1x107 포자(conidia)/g 내지 1x1010 포자(conidia)/g 일 수 있으며, 바람직하게는 5x108 포자(conidia)/g 내지 5x10 9포자(conidia)/g 인 것이 바람직하다.In this case, when the spores are counted by a hemocytometer after solid culture is completed, the number of spores may be 1x10 7 spores / g to 1x10 10 spores (conidia) / g, preferably 5x10 8 spores (conidia) It is preferred that / g to 5x10 9 spores (conidia) / g.

상기 계면활성제의 바람직한 종류는 전술하였는바 그 기재로 대신한다. 현탁액의 처리 농도는 1x105 포자(conidia) 내지 1x108 포자(conidia)/㎖인 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 1*107 포자(conidia)/㎖인 것이 바람직하다.The above-mentioned preferred types of surfactants are replaced by the above description. The treatment concentration of the suspension is preferably 1x10 5 spores (conidia) to 1x10 8 spores (conidia) / ml, more preferably 1 * 10 7 spores (conidia) / ml.

본 발명의 상기 닭진드기 방제방법에 있어서, 닭진드기에 분무처리 하는 것은 닭진드기에 100마리당 0.1 내지 10 ㎖의 현탁액을 뿌리는 것을 의미하며, 바람직하게는 1㎖의 현탁액으로 분무처리하는 것이 바람직하다. 상기 용량을 초과하여 현탁액을 처리하는 경우 처리량 대비 방제의 경제성을 확보하기 어려우며, 상기 용량보다 미만으로 현탁액을 처리하는 경우 높은 방제 활성을 보기 어렵다.In the method for controlling the chicken mite of the present invention, spraying the chicken mite means spraying 0.1 to 10 ml of suspension per 100 birds on the chicken mite, preferably spraying with 1 ml of suspension. . When the suspension is processed in excess of the above capacity, it is difficult to secure the economics of the control against the throughput, and when treating the suspension below the above capacity, it is difficult to see a high control activity.

본 발명의 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주 포자 현탁액을 제조하여 닭진드기 약충에 분무 처리하는 경우, 높은 살충 활성을 보이는 것을 확인하였다 (도 5). When the spore suspension of the Boberia bassiana JEF-410 strain of the present invention was prepared and sprayed on a chicken mite nymph, it was confirmed that it shows high insecticidal activity (FIG. 5).

본 발명은 또한 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주 (KFCC11791P) 및 이사리아 푸모소로세아(Isaira fumosorosea) JEF150 (KFCC11757P), 상기 균주의 포자 또는 상기 균주의 배양액를 포함하는 닭진드기 방제용 조성물을 제공할 수 있다. The present invention is also for the control of chicken mites comprising the Boberia bassiana JEF-410 strain (KFCC11791P) and Isaira fumosorosea JEF150 (KFCC11757P), spores of the strain, or cultures of the strain. Compositions can be provided.

본 발명의 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주 (KFCC11791P) 및 이사리아 푸모소로세아(Isaira fumosorosea) JEF150 (KFCC11757P)균주를 포자현탁액으로 분무 처리한 경우, 단독으로 처리한 것 보다 닭진드기의 살충효과가 향상되는 것을 확인하였다 (도 6). When the Boberia bassiana JEF-410 strain (KFCC11791P) and Isaira fumosorosea JEF150 (KFCC11757P) strains of the present invention were sprayed with a spore suspension, chickens were treated rather than alone. It was confirmed that the insecticidal effect of ticks was improved (Fig. 6).

상기 닭진드기는 와구모 내지 Red Mite라고 불리는 데르마니수스 갈리나에(Dermanyssus gallinae)인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The chicken mite is preferably but not limited to Dermanyssus gallinae, which is called Red Mite.

상기 닭진드기 방제용 조성물은 상기 균주의 현탁액을 곡물배지에 접종하여 고체배양을 통해 제조된 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 기장(millet), 쌀(rice), 조(Italian millet), 보리, 콩, 수수, 조, 쌀 및 현미로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 곡물로 이루어진 배지를 사용하는 것이고, 그 중 기장(millet)배지에 접종하여 고체 배양하는 것이 가장 바람직하다 (도 6). The composition for controlling the chicken mite is preferably prepared through solid culture by inoculating the suspension of the strain in the grain medium, more preferably millet, rice, Italian millet, barley, soybean , It is to use a medium consisting of one or more grains selected from the group consisting of sorghum, crude, rice and brown rice, and among them, it is most preferable to inoculate the millet medium and solid culture (FIG. 6).

본 발명의 상기 닭진드기 방제용 조성물에 있어서, 상기 고체배양은상기 균주의 현탁액을 배지에 접종한 후, 바람직하게는 20 내지 30℃에서 5일 내지 20일 동안 배양한 후, 실온 조건에서 1 내지 30일 동안 건조할 수 있고, 더욱 바람직하게는 25℃ 조건에서 14일간 배양 후, 실온 조건에서 1일간 건조시키는 것이 바람직하다.In the composition for controlling chicken mites of the present invention, the solid culture is inoculated with a suspension of the strain in a medium, and preferably cultured at 20 to 30 ° C. for 5 to 20 days, and then at room temperature. It can be dried for 30 days, more preferably after 14 days of incubation at 25 ° C, and preferably for 1 day at room temperature.

본 발명의 상기 닭진드기 방제용 조성물은 액상, 분말 또는 입상제형인 것이 바람직하다. 상기 분말제형은 가루형태를 의미하며, 상기 입상제형은 고체 배양체를 증량제를 이용하여 중량 대비 1~100 배로 희석한 낟알이나 알갱이 형태를 의미하나 이에 한정되지 않는다.The composition for controlling chicken mites of the present invention is preferably in the form of a liquid, powder or granule. The powder formulation means a powder form, and the granular formulation means a grain or granule form in which a solid culture is diluted 1 to 100 times by weight using an extender, but is not limited thereto.

본 발명은 또한 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주 (KFCC11791P) 및 이사리아 푸모소로세아(Isaira fumosorosea) JEF150 (KFCC11757P)의 비율은 10:1 내지 1:10 일 수 있고, 바람직하게는 5:1 내지 1:5일 수 있으며, 가장 바람직하게는 1:1일 수 있다. The present invention can also be a ratio of Boberia bassiana JEF-410 strain (KFCC11791P) and Isaira fumosorosea JEF150 (KFCC11757P), preferably from 10: 1 to 1:10. May be 5: 1 to 1: 5, and most preferably 1: 1.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are only for illustrating the present invention, it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not to be construed as limited by these examples.

실시예 1. 균주의 분리 및 동정Example 1. Isolation and identification of strains

1-1. 균주의 분리 1-1. Isolation of strain

본 발명자들은 다음과 같은 조건에서 토양 샘플에서 곤충병원성 진균을 분리하였다. 채집된 토양 20 g 에 1차 증류수 5 ml을 처리 후 갈색거저리 유충을 토양에 방사하였다. 그 결과 갈색거저리 유충이 치사된 후 진균의 균사가 충체에서 관찰되었다. 충체에서 균사를 분리하여 25±2℃ 조건에서 1/4 SDA(Sabouraud dextrose agar)에 배양하였다.The present inventors isolated insect-pathogenic fungi from soil samples under the following conditions. After treating 5 g of primary distilled water with 20 g of collected soil, brown larvae were spun into the soil. As a result, the mycelium of the fungus was observed in the body after the brown larvae were killed. The hyphae were isolated from the body and cultured in 1/4 SDA (Sabouraud dextrose agar) at 25 ± 2 ° C.

1-2. 분리된 균주의 생육 및 형태1-2. Growth and morphology of isolated strains

보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주가 배양된 agar block을 Sabraud Dextrose Agar (SDA)에 옮겨 2일간 배양(25℃, dark)한 후 육안관찰 및 광학현미경 (400 배)에서 관찰하였다 (도 1). 보베리아 (Beauveria)속 균주의 전형적인 특징인 흰색 포자 및 포자 형성 방법이 관찰되었다. The agar block cultured with the Beauveria bassiana JEF-410 strain was transferred to Sabraud Dextrose Agar (SDA) and cultured for 2 days (25 ° C, dark), followed by visual observation and optical microscopy (400 times) ( Figure 1). White spores and methods of spore formation, typical features of the strain of the genus Beauveria, have been observed.

실시예 2. 실시예 1의 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) 균주의 DNA 시퀀싱Example 2. DNA sequencing of the Beauveria bassiana strain of Example 1

본 발명은 실시예 1의 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana)를 동정하였다. 구체적으로 다음과 같은 조건에서 PCR을 진행하였다. 94℃에서 5분, 94℃ 60초, 62℃ 30초, 72℃ 30초를 30회 실시하였고, 최종적으로 72℃에서 3분간 후처리(post maturation) 시켰다. 서열은 하기 표 1의 β-튜불린 프라이머를 이용하여 진행 되었다. PCR 산물은 0.8% agarose gel 및 Eco dye를 사용하여 140 V로 25분간 전기영동하였다. 최종적으로 얻어진 산물을 시퀀싱하여 최종적으로 B. bassiana로 동정되었다 (도 2). 본 발명자들은 실시예 1의 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana)를 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주로 명명하였다. 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주의 β-튜불린 서열은 서열번호 3번으로 기재하였다. 더불어 기존에 알려진 Beauveria 속 균주들과 유연관계를 확인하고자, 미국 국립생물정보센터(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)에 보고되어 있는 15 종의 Beauveria 속 균주의 β-tublin 서열을 Beauveria JEF-410과의 유연관계를 비교하였다 (도3). 분석 결과, 기존에 알려진 균주들과 유전적인 차이가 있는 것으로 확인되었다.The present invention identified the Boberia bassiana of Example 1. Specifically, PCR was performed under the following conditions. 5 minutes at 94 ° C, 60 seconds at 94 ° C, 30 seconds at 62 ° C, and 30 seconds at 72 ° C were performed 30 times, and finally, post maturation was performed at 72 ° C for 3 minutes. The sequence was performed using the β-tubulin primer of Table 1 below. PCR products were electrophoresed at 140 V for 25 minutes using 0.8% agarose gel and Eco dye. The finally obtained product was sequenced and finally identified as B. bassiana (FIG. 2). The inventors of the present invention named Boberia bassiana of Example 1 as the Boberia bassiana JEF-410 strain. The β-tubulin sequence of the Beauveria bassiana JEF-410 strain is set forth in SEQ ID NO: 3. In addition to want to make a flexible relationship with the existing known Beauveria spp, the US National Biological Information Center of Beauveria sp 15 species reported in (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) β-tublin The sequence was compared to the flexible relationship with Beauveria JEF-410 (Fig. 3). As a result of the analysis, it was confirmed that there is a genetic difference from the known strains.

프라이머primer 방향direction 서열order 서열목록 번호Sequence number ITS (internal transcribed spacer)ITS (internal transcribed spacer) 정방향Forward 5'-CCG TAG GTG AAC CTG CGG-3'5'-CCG TAG GTG AAC CTG CGG-3 ' 1One 역방향Reverse 5'-TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC-3'5'-TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC-3 ' 22

실시예 3. 기장 (Millet)을 이용한 고체배양조건에서의 포자 생산Example 3. Production of spores under solid culture conditions using millet

배양용 polyvinyl bag에 기장(millet) 200 g씩 넣은 후, 50% citric acid 0.16 ㎖을 추가로 처리하였다. Microwave를 5분간 처리하여 수분이 충분히 millet에 흡수되도록 하였다. Polyvinyl bag의 입구 부분은 원활한 산소공급을 위해 종이컵과 멸균 거즈를 이용하여 제조하였다. Millet이 담긴 polyvinyl bag은 121℃ 조건에서 15 min 간 멸균되었다. 상온에서 냉각 후, B. bassiana JEF-410 균주현탁액 (1x107 conidia/ml)을 1 ml 씩 polyvinyl bag에 접종하였다. 25℃ 조건에서 14일간 배양 후, 실온 조건에서 1일간 건조 시킨 각 균주의 포자를 최종 생산하였다 (도 4). After adding 200 g of millet to the cultured polyvinyl bag, 0.16 ml of 50% citric acid was further treated. The microwave was treated for 5 minutes so that moisture was absorbed into the millet sufficiently. The inlet part of the polyvinyl bag was prepared using a paper cup and sterile gauze for smooth oxygen supply. The polyvinyl bag containing millet was sterilized for 15 min at 121 ° C. After cooling at room temperature, 1 ml of B. bassiana JEF-410 strain suspension (1x10 7 conidia / ml) was inoculated into a polyvinyl bag. After incubation for 14 days at 25 ° C, spores of each strain dried for 1 day at room temperature were finally produced (FIG. 4).

실시예 4. 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주의 닭진드기에 대한 방제 효과Example 4. Control effect on chicken mite of Beauveria bassiana JEF-410 strain

기장 (Millet)에 배양된 B. bassiana JEF-410 을 이용하여 포자 현탁액 (1x107 conidia/ml) 조제한 후 닭진드기 약충에 분무 처리하였다. 25℃ 조건에서 분무 7일차에 생충수와 사충수를 조사하였다. 실험 결과 JEF-410 경우 처리 후 3일차 경과 하였을 때 0.03% silwet을 분무처리한 negative control 보다 50%이상의 빠른 살충률을 확인할 수 있었으며, 처리 5일차에 95% 이상의 살충효과를 보였으며, 이는 기존 화학약제 처리구보다 높은 살충효과를 보였다 (도 5). 따라서 본 결과를 바탕으로 B. bassiana JEF-410 균주가 다른 B. bassiana 균주에 비해 닭진드기에 높은 살충활성을 보인다고 판단되었으며, 저항성을 보이는 화학약제보다 적용가능성이 높은 것으로 추정되었다. A spore suspension (1x10 7 conidia / ml) was prepared using B. bassiana JEF-410 cultured in millet, and then sprayed with chicken mite nymphs. On the 7th day of spraying at 25 ° C. conditions, live and dead water were investigated. As a result of the experiment, JEF-410 was able to confirm the insecticidal rate of more than 50% faster than the negative control sprayed with 0.03% silwet after 3 days after treatment, and showed an insecticidal effect of more than 95% on the 5th day of treatment. It showed a higher insecticidal effect than the drug treatment (Fig. 5). Therefore, based on the results, it was judged that the B. bassiana JEF-410 strain showed higher insecticidal activity than chicken B. bassiana strain, and it was estimated that the applicability was higher than that of the resistant chemical agent.

실시예 5. 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주의 닭진드기에 대한 방제 효과Example 5. Control effect on chicken mite of Beauveria bassiana JEF-410 strain

기장 (Millet)에 배양된 B. bassiana JEF-410 을 이용하여 포자 현탁액 (1x107 conidia/ml)을 조제한 후 닭진드기 약충에 분무 처리하였다. 25℃ 조건에서 분무 10일차에 생충수와 사충수를 조사하였다. 실험 결과 JEF-410균주 처리 5일차에 0.03% silwet을 분무 처리한 negative control 보다 50%이상의 빠른 살충률을 확인할 수 있었으며, 처리 10일차에 100% 의 살충효과를 보였다. 이는 기존 화학약제 처리구보다 높은 살충효과를 보였다 (도 6). 따라서 본 결과를 바탕으로 B. bassiana JEF-410 균주가 다른 B. bassiana 균주에 비해 닭진드기에 높은 살충활성을 보인다고 판단되었으며, 저항성을 보이는 피레스로이드계 화학약제 (alpha cypermethrin)보다 적용가능성이 높은 것으로 추정되었다. A spore suspension (1 × 10 7 conidia / ml) was prepared using B. bassiana JEF-410 cultured in millet, and then sprayed onto chicken mite nymphs. On the 10th day of spraying at 25 ° C, the number of live and dead insects was investigated. As a result of the experiment, JEF-410 strain was found to be 50% faster than the negative control sprayed with 0.03% silwet on the 5th day of treatment, and showed a 100% insecticidal effect on the 10th day of treatment. This showed a higher insecticidal effect than the conventional chemical treatment (Fig. 6). Therefore, based on the results, it was judged that the B. bassiana JEF-410 strain showed higher insecticidal activity than chicken B. bassiana strain, and was more applicable than the pyrethroid-based chemical drug (alpha cypermethrin) that showed resistance. It was estimated.

실시예 6. 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주와 레카니실리움 아테나텀 (Lecanicillium attenuatum) JEF 145 또는 이사리아 푸모소로세아(Isaira fumosorosea) JEF150 (KFCC11757P) 균주와의 혼합처리군의 닭진드기에 대한 방제 효과(분무 처리) Example 6.Beauveria bassiana (Beauveria bassiana) JEF-410 strain and Lecanicillium attenuatum JEF 145 or Isaria fumosorosea (Isaira fumosorosea) JEF150 (KFCC11757P) Control effect on chicken mites (spray treatment)

기장 (Millet)에 배양된 B. bassiana JEF-410, L.attenuatum JEF 145, I.fumosorosea JEF150 을 이용하여 두 가지 조건으로 포자현탁액을 분무처리하였다. 첫 번째로 단일 균주의 처리구의 경우 포자 현탁액 (1x107 conidia/ml) 조제한 후 닭진드기 약충에 분무 처리하였다. 두 번째로 혼합 균주의 처리구의 경우 포자 현탁액 (2x107 conidia/ml)을 조제한 후 JEF-410 + JEF-145 (1:1) 또는 JEF-410 +JEF-150 (1:1) 조건으로 혼합하여 닭진드기 약충에 최종 1x107 conidia/ml 농도로 처리되도록 분무하였다. 25℃ 조건에서 분무후 매일 생충수와 사충수를 조사하여 8일차까지 진행하였다. 실험 결과 B. bassiana JEF-410과 Isaria fumosorosea JEF-150과의 혼합처리에서 처리 2일차부터 6일차까지 살충효과의 상승을 확인하였다 (도 6). 2일차 생충율은 JEF-410은 53.2%, JEF-150은 81.4%를 보였으나, JEF-410+JEF-150 혼합처리의 경우 35.9%로 JEF-410 단일균주 처리보다 월등히 낮은 생충율을 보였다. 4일차 생충율은 JEF-410은 39.4%, JEF-150은 67.3%를 보였으나, JEF-410+JEF-150 혼합처리의 경우 22.6%로 JEF-410 단일균주 처리보다 낮은 생충율을 보였다. 마지막으로 6일차 생충율은 JEF-410은 22.5%, JEF-150은 44.1%를 보였으나, JEF-410+JEF-150 혼합처리의 경우 17.1%로 JEF-410 단일균주 처리보다 낮은 생충율을 보였다. 따라서 본 결과를 바탕으로 B. bassiana JEF-410 균주를 I.fumosorosea JEF150 균주와 혼합 처리할 경우, 살충효과가 향상되는 사실을 확인하였다. 그러나 B. bassiana JEF-140과 L. attenuatum JEF-145와 혼합처리에 의한 상승효과는 확인되지 않았다 (데이터 제시않음).Spore suspensions were sprayed under two conditions using B. bassiana JEF-410, L.attenuatum JEF 145 , and I.fumosorosea JEF150 cultured in millet. First, for the treatment of a single strain, a spore suspension (1x10 7 conidia / ml) was prepared, and then sprayed with chicken mite nymphs. Second, in the case of the treatment of the mixed strain, a spore suspension (2x10 7 conidia / ml) was prepared and then mixed under JEF-410 + JEF-145 (1: 1) or JEF-410 + JEF-150 (1: 1) conditions. Chicken mite nymphs were sprayed to be processed to a final concentration of 1x10 7 conidia / ml. After spraying at 25 ° C., the number of live and dead insects was investigated every day to proceed to the 8th day. As a result of the experiment, B. bassiana JEF-410 and Isaria fumosorosea JEF-150 were confirmed to increase the insecticidal effect from day 2 to day 6 in the mixed treatment (FIG. 6). Day 2 viability was 53.2% for JEF-410 and 81.4% for JEF-150, but 35.9% for JEF-410 + JEF-150 mixed treatment, which was significantly lower than JEF-410 single strain treatment. On the fourth day, the viability was 39.4% for JEF-410 and 67.3% for JEF-150, but 22.6% for JEF-410 + JEF-150 mixed treatment, which was lower than that of JEF-410 single strain treatment. Lastly, on the 6th day, JEF-410 showed 22.5% and JEF-150 showed 44.1%, but JEF-410 + JEF-150 mixed treatment showed 17.1%, which was lower than JEF-410 single strain treatment. . Therefore, based on the results, the B. bassiana JEF-410 strain was I.fumosorosea JEF150. When mixed with the strain, it was confirmed that the insecticidal effect is improved. However, the synergistic effect of mixing with B. bassiana JEF-140 and L. attenuatum JEF-145 was not confirmed (data not shown).

실시예 7. 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 수화제 및 액상 제형 제조.Example 7. Preparation of Beauveria bassiana JEF-410 hydrating agent and liquid formulation.

수화제 제조는 하기 과정을 통해 제조 되었다. 기장 (millet)을 이용하여 진행된 JEF-410 균주의 고체배양체에서 포자가 수확되었다 (도 8(A), (B)). 확보된 포자 분말 (원제), 증량제 (pyrophyllite) 그리고 계면활성제를 90 : 5 : 5의 중량비로 혼합하였다 (도 8(C)). 300 mesh 이하의 분말 입도를 확보하기 위해 sieve를 이용하여 filtering 과정을 진행하였다. 액상 제형 제조는 다음 과정을 통해 제조 되었다. 기장 (millet)을 이용하여 진행된 JEF-410 균주의 고체배양체에서 포자가 수확되었다 (도 9(A), (B)). 확보된 포자 분말 (원제) 와 계면활성제 (surfactant)를 약 2 : 1 중량비로 혼합하였다 (도 9(C)). 미세한 분말 입도를 확보하기 위해, sieve를 이용하여 미세 분말을 확보하였다. 확보된 미세분말을 물에 희석하여 농축된 액상 제형을 제작하였다 (도 9(d)).The hydrating agent was prepared through the following procedure. Spores were harvested from the solid cultures of the JEF-410 strains using millet (Fig. 8 (A), (B)). The obtained spore powder (original agent), extender (pyrophyllite) and surfactant were mixed in a weight ratio of 90: 5: 5 (Fig. 8 (C)). The filtering process was performed using a sieve to secure a particle size of 300 mesh or less. Liquid formulation was prepared through the following procedure. Spores were harvested from the solid cultures of the JEF-410 strains using millet (Fig. 9 (A), (B)). The obtained spore powder (original agent) and the surfactant (surfactant) were mixed in a ratio of about 2: 1 by weight (Fig. 9 (C)). In order to secure a fine powder particle size, a fine powder was obtained using a sieve. The obtained fine powder was diluted in water to prepare a concentrated liquid formulation (FIG. 9 (d)).

[수탁번호][Accession Number]

기탁기관명 : 한국미생물보존센터(국내)Depository name: Korea Microbial Conservation Center (domestic)

수탁번호 : KFCC11791PAccession number: KFCC11791P

수탁일자 : 20180829

[수탁번호]

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Depository name: Korea Microbial Conservation Center (domestic)
Accession number: KFCC11757P

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Claims (9)

삭제delete 보베리아 바시아나 (Beauveria bassiana) JEF-410 균주 (KFCC11791P) 및 이사리아 푸모소로세아(Isaira fumosorosea) JEF150 (KFCC11757P), 상기 균주의 포자 또는 상기 균주의 배양액를 포함하는, 닭진드기 방제용 조성물.
A composition for the control of chicken mites, comprising the Beauveria bassiana JEF-410 strain (KFCC11791P) and Isaira fumosorosea JEF150 (KFCC11757P), spores of the strain or a culture of the strain.
제 2항에 있어서, 상기 닭진드기 방제용 조성물은 액상제형, 분말제형 및 입상제형으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나로 제형화된, 닭진드기 방제용 조성물.
3. The composition for controlling chicken mites according to claim 2, wherein the composition for controlling chicken mites is formulated with any one selected from the group consisting of liquid formulations, powder formulations, and granular formulations.
제 2항의 닭진드기 방제용 조성물에 증량제 및 계면활성제로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상을 추가로 포함하여 제형화한, 닭진드기 방제용 조성물.
A composition for controlling chicken mite, further comprising at least one selected from the group consisting of a bulking agent and a surfactant in the composition for controlling chicken mite of claim 2.
제 4항에 있어서, 상기 계면활성제는 닭진드기 방제용 조성물이 액상제형인 경우 소듐 리그노설포네이트(Sodiumlignosulfonate), 이소트리데실 알코올 에톡실레이트(isotridecyl alcohol ethoxylate) 및 아세틸렌 다이올(acetylene diol)으로 구성된 군에서 선택된 어느 하나 이상인 비이온 계면활성제인, 닭진드기 방제용 조성물.
The method according to claim 4, wherein the surfactant is sodium lignosulfonate (isotridecyl alcohol ethoxylate) and acetylene diol (acetylene diol) when the composition for controlling chicken mites is in liquid form. A composition for controlling chicken mites, which is a nonionic surfactant having at least one selected from the group consisting of.
제 4항에 있어서, 상기 계면활성제는 닭진드기 방제용 조성물이 분말제형 또는 입상제형인 경우 소듐 리그노설포네이트(Sodium lignosulfonate) 또는 E0/P0/E0 블록 중합체(EO/PO/EO block copolymer)인 비이온 계면활성제인, 닭진드기 방제용 조성물.
The method according to claim 4, wherein the surfactant is sodium lignosulfonate (Sodium lignosulfonate) or E0 / P0 / E0 block polymer (EO / PO / EO block copolymer) when the composition for controlling chicken mites is in powder form or granular form. Non-ionic surfactant, composition for controlling chicken mites.
제 4항에 있어서, 상기 증량제는 광물성 분말인, 닭진드기 방제용 조성물.
The composition for controlling chicken mites according to claim 4, wherein the extender is a mineral powder.
제 3항의 방제용 조성물을 처리하여, 닭진드기를 방제하는 방법.A method of controlling chicken mite by treating the composition for control of claim 3. 삭제delete
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