KR101514162B1

KR101514162B1 - 옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일 화합물 및 암의 치료를 위한 그의 용도

Info

Publication number: KR101514162B1
Application number: KR1020137014068A
Authority: KR
Inventors: 데이빗 앤드류 코티스; 레이몬드 길모어; 호세 알프레도 마르틴; 에바 마리아 마르틴 데 라 나바
Original assignee: 일라이 릴리 앤드 캄파니
Priority date: 2010-12-03
Filing date: 2011-11-17
Publication date: 2015-04-21
Also published as: UA109677C2; US20120142724A1; PE20140008A1; ES2567271T3; JP2013544835A; BR112013013282A2; CA2819822A1; KR20130093140A; CL2013001518A1; ECSP13012653A; CA2819822C; AR083868A1; JP5726321B2; NZ610289A; CN103221415B; EP2646445A1; MX2013006184A; EA021241B1; US8288548B2; TW201300397A

Abstract

본 발명은 암의 치료에 유용한 옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일 화합물을 제공한다.

Description

옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일 화합물 및 암의 치료를 위한 그의 용도 {OXAZOLO[5,4-B]PYRIDIN-5-YL COMPOUNDS AND THEIR USE FOR THE TREATMENT OF CANCER}

p38 MAP 키나제는 세린/트레오닌 키나제 슈퍼패밀리에 속하는 미토겐-활성화 단백질 (MAP) 키나제이다. 이 키나제는 세포외 스트레스, 예컨대 열, UV 광 및 삼투 스트레스, 뿐만 아니라 염증성 자극, 예컨대 리포폴리사카라이드에 의해 활성화된다. 활성화될 때, p38 MAP 키나제는 염증유발 시토카인 종양 괴사 인자α (TNFα), 인터류킨-1β (IL-1β), 인터류킨 6 (IL-6) 및 인터류킨 8 (IL-8)의 생합성을 조절하는 세포내 단백질 기질을 인산화시킨다. 이러한 시토카인은 수많은 만성 염증성 장애의 병리상태와 관련되어 있다. 만성 염증은 암 발병에 대한 주요 위험 인자이다. 예를 들어, p38 MAP 키나제 경로는 만성 염증 및 육종 발병을 야기하는 카포시 육종 연관 헤르페스 바이러스 (KSHV)의 표적이다. 또한, p38 MAP 키나제에 의해 조절되는 시토카인, 예컨대 IL-8은 종양 성장과 연관된 혈관신생을 구동하는데 관련되어 있다. 미토겐-활성화 단백질 키나제-단백질 키나제 2의 인산화 형태 (또는 pMAPKAPK2)는 또한 p38 MAP 키나제 경로에서의 키나제이고, p38 MAP 키나제에 의해 직접적으로 활성화될 수 있다. MAPKAPK2의 마우스 녹아웃 연구는 시토카인 제조의 감소를 나타내며, 이는 MAPKAPK2가 염증 반응의 주요 조절제일 수 있고, 또한 항염증 요법 및/또는 암 요법에 대한 잠재적 표적일 수 있음 (WO2005120509)을 시사한다.

아자벤조티아졸릴 p38 MAP 키나제 억제제 (예를 들어, WO2007016392)는 항염증성 질환의 치료를 위해 당업계에 개시된 바 있다. 추가로, 아자벤즈이미다졸릴 p38 MAP 키나제 억제제 (예를 들어, WO2005075478)는 암의 치료를 위해 당업계에 개시된 바 있다. 또한, WO200917822는 PI3 키나제의 억제제로서 유용한 이미다졸릴 옥사졸 및 옥사졸로[4,5-b]피리딘-6-일을 개시한다.

그러나, 특정 p38 MAP 키나제 억제제 또는 시토카인 억제제는 그의 생체내 효과 및 치료 용도를 제한하는 생체이용률 및 흡수 문제를 가질 수 있다. 추가로, 특정 p38 MAP 키나제 억제제는 환자에 대한 독성학적 부작용 (특히 GI 독성)을 나타내고, 환자 약물-약물 상호작용의 위험성을 보유할 수 있다. 따라서, 대안적인 시토카인 억제 약물에 대한 필요성이 존재한다. 바람직하게는 이러한 화합물은 개선된 효능 및 더 큰 생체이용률로 p38 MAP 키나제를 억제할 수 있다. 바람직하게는 이러한 화합물은 또한 개선된 독성학 프로파일 (특히 GI 독성) 및 감소된 환자 약물-약물 상호작용 위험성을 갖는다.

본 발명은 암, 특히 난소암 및/또는 다발성 골수종의 치료를 위한 단일 작용제로서의 임상 용도를 가질 수 있는 신규 옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일 화합물을 제공한다. 또한, 본 발명은 암, 특히 신암의 치료를 위한 또 다른 치료제, 예컨대 수니티닙과 조합하여 임상 용도를 가질 수 있는 신규 옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일 화합물을 제공한다. 추가로, 본 발명의 화합물은 강력한 p38 MAP 키나제 억제제 (p38α, p38β, 및 암 세포에서의 p38 MAP 키나제 신호전달)이고, 특정의 종래 공지된 p38 MAP 키나제 억제제와 비교시 개선된 독성학 프로파일 (특히 GI 독성) 및 감소된 환자 약물-약물 상호작용 위험성을 가질 수 있다.

본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:

<화학식 I >

상기 식에서,

X는 메톡시에틸 또는 에톡시메틸이고;

Q는 시클로프로필, 2-메틸-프로판올-2-일, 3-메틸옥세탄-3-일, 또는 1-히드록시메틸-1-시클로프로필이다.

본 발명은 또한 15.06에서의 피크, 및 19.94, 10.31 및 20.78에서의 1개 이상의 피크 (2θ +/- 0.2°)를 포함하는 X선 분말 회절 패턴 (Cu 방사선, λ = 1.54060 Å)을 특징으로 하는, 결정질 2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로판-1-올을 제공한다.

본 발명은 또한 13.73에서의 피크, 및 16.54, 22.87 및 18.57에서의 1개 이상의 피크 (2θ +/- 0.2°)를 포함하는 X선 분말 회절 패턴 (Cu 방사선, λ = 1.54060 Å)을 특징으로 하는, 결정질 2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로판-1-올을 제공한다.

본 발명은 2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로판-1-올인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.

본 발명은 5-[2-시클로프로필-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-4-일]-N-[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]옥사졸로[5,4-b]피리딘-2-아민인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.

본 발명은 5-[5-(2,4-디플루오로페닐)-2-(3-메틸옥세탄-3-일)-1H-이미다졸-4-일]-N-[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]옥사졸로[5,4-b]피리딘-2-아민인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.

본 발명은 [1-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-2-에톡시-1-메틸-에틸]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]시클로프로필]메탄올인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.

본 발명은 난소암의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 유효량의 본 발명의 화합물 또는 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서의 난소암의 치료 방법을 제공한다.

본 발명은 다발성 골수종의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 유효량의 본 발명의 화합물 또는 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서의 다발성 골수종의 치료 방법을 제공한다.

본 발명은 암, 특히 신암의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 유효량의 본 발명의 화합물 또는 염을 수니티닙과 동시, 개별 또는 순차적 조합으로 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서의 암, 특히 신암의 치료 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 본 발명의 화합물 또는 염을 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제와 조합하여 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 특정한 실시양태에서, 조성물은 하나 이상의 다른 치료제를 추가로 포함한다. 보다 상세하게는, 다른 치료제는 수니티닙이다.

본 발명은 또한 요법에 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 염을 제공한다. 본 발명은 또한 암의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 암을 치료하기 위한 의약의 제조에 있어서 본 발명의 화합물 또는 염의 용도를 제공한다. 추가로, 본 발명은 암의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 염의 용도를 제공한다. 특히 상기 암은 난소암이다. 추가로, 상기 암은 다발성 골수종이다.

본 발명은 또한 요법에서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위한 조합 제제로서의 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 수니티닙을 제공한다.

본 발명은 또한 암의 치료에서 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염과 동시, 개별 또는 순차적 조합으로 사용하기 위한 수니티닙을 제공한다. 대안적으로, 본 발명은 암의 치료에서 수니티닙과 동시, 개별 또는 순차적 조합으로 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 보다 상세하게는, 암은 신암이다.

숙련된 독자는 화학식 I의 화합물이 염을 형성할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 본 발명의 화합물은 염기성 헤테로사이클을 함유하고, 따라서 임의의 많은 무기 및 유기 산과 반응하여 제약상 허용되는 산 부가염을 형성한다. 이러한 제약상 허용되는 산 부가염 및 이를 제조하기 위한 통상의 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [P. Stahl, et al., HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2008); S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 66, No. 1, January 1977]를 참조한다.

당업자는 본 발명의 화합물이 1개 이상의 키랄 중심을 함유한다는 것을 인지할 것이다. 본 발명은 모든 개별 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체, 뿐만 아니라 상기 화합물의 거울상이성질체 및 부분입체이성질체의 혼합물, 예컨대 라세미체를 고려한다. 1개 이상의 키랄 중심을 함유하는 본 발명의 화합물이 단일 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체로 존재하는 것이 바람직하다. 단일 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체는 키랄 시약으로 시작하거나, 또는 입체선택적 또는 입체특이적 합성 기술에 의해 제조될 수 있다. 대안적으로, 단일 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체는 표준 키랄 크로마토그래피 또는 결정화 기술에 의해 혼합물로부터 단리될 수 있다.

수텐트(SUTENT)®로 시판되는 수니티닙은 신세포 암종 및 이마티닙-내성 위장 기질 종양의 치료를 위해 FDA에 의해 승인된, 경구, 소분자, 다중-표적 수용체 티로신 키나제 억제제이다. 수니티닙은 WO200160814에 개시되어 있다.

반응식 I

R이 시클로프로필 또는 3-메틸옥세탄-3-일이고; X가 상기 정의된 바와 같은 것인 화학식 I의 화합물의 제조.

오르토-히드록시피리딜-3-아민 (A)를 에탄올 중, 라세미 또는 단일 거울상이성질체일 수 있는 이소티오시아네이트 (B)로 처리하면서 가열한다. 가열 동안 및 정기적으로, 과량의 N,N'-이치환된-카르보디이미드를 첨가하여 황화수소를 제거한다. 예를 들어, N,N'-디시클로헥실-카르보디이미드, N,N'-디이소프로필-카르보디이미드 또는 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카르보디이미드 히드로클로라이드가 사용될 수 있다. 라세미 또는 단일 거울상이성질체일 수 있는 이소티오시아네이트 (B)의 합성은 하기 제조예에 기재되어 있다.

반응식 II

R이 메틸 2-메틸-프로판카르복실레이트-2-일 또는 메틸 시클로프로판 카르복실레이트-1-일이고; X가 상기 정의된 바와 같은 것인 화학식 I의 화합물의 제조.

5-(1H-이미다졸-4-일)옥사졸로[5,4-b]피리딘 (C)를 에테르 중 수소화붕소리튬으로 환원시켜 화학식 I의 화합물을 제공한다. 중간체 (C)는, 반응식 I에서와 같이, 상응하는 히드록시피리딜-3-아민 (A) (반응식 I) (여기서, R은 메틸 2-메틸-프로판카르복실레이트-2-일 또는 메틸 시클로프로판 카르복실레이트-1-일임)와 이소티오시아네이트 (B)로부터 유사하게 제조된다.

반응식 III

R이 메틸 2-메틸-프로판카르복실레이트-2-일, 메틸 시클로프로판 카르복실레이트-1-일, 시클로프로필 또는 3-메틸옥세탄-3-일인 중간체 (A)의 합성.

6-(1H-이미다졸-4-일)-3-니트로-피리딘-2-아민 (D)는 2-피리딜 아민 기의 디아조화에 이은 물 켄칭, 이 후 3-피리딜 니트로 기의 수소화를 포함하는, 피리딘 고리 상의 관능기 조작을 거쳐 중간체 (A)를 제공한다.

반응식 IV

R이 반응식 III에 정의된 바와 같은 것인 중간체 (D)의 합성.

중간체 (D)는 아세트산암모늄과 함께 디옥산 중에서 가열함으로써 1-(6-아미노-5-니트로-2-피리딜)-2-(2,4-디플루오로페닐)에탄-1,2-디온 (F) 및 공지된 알데히드 (E)로부터 제조된다. 중간체 (F)의 합성은 하기 제조예에 기재되어 있다.

본 발명의 화합물은 본질적으로 하기 반응식, 제조예 및 실시예에 설명된 바와 같이 제조된다. 시약 및 출발 물질은 당업자에게 용이하게 입수가능하거나, 또는 유기 및 헤테로시클릭 화학의 표준 기술, 구조적으로 유사한 공지된 화합물의 합성과 유사한 기술, 및 하기 실시예에 기재된 절차, 예컨대 임의의 신규 절차로부터 선택된 절차에 의해 제조될 수 있다. 제조예 및 실시예가 예시로서 비제한적으로 기재되며, 다양한 변형이 당업자에 의해 이루어질 수 있음을 이해해야 한다.

하기 제조예 및 실시예의 명명은 시믹스(SYMYX)® 드로우 버전 3.2.NET에서 IUPAC 명명화 특징을 이용하여 일반적으로 이루어진다.

제조예 1

tert-부틸 (3S)-3-[벤질-[(1S)-1-페닐에틸]아미노]부타노에이트

제조예 1 및 2는 R,R 거울상이성질체에 대해 WO 2006/076595에 기재된 바 있다. (E)-부트-2-에노에이트 (크로토네이트)로부터 3-아미노부타노에이트의 비대칭 합성을 위해 또한 문헌 [Davies, S. G. and Ichihara, O. Tetrahedron: Asymmetry 1991, 2, 183-186]을 참조한다.

(1S)-N-벤질-1-페닐-에탄아민 (28.53 g, 135 mmol)을 무수 테트라히드로푸란 (THF) 중에 용해시키고, 용액을 아르곤 분위기 하에 0℃로 냉각시켰다. N-부틸리튬 (헥산 중 2.5 M, 54 mL, 135 mmol)을 30분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반한 다음, -78℃로 냉각시켰다. 무수 THF (75 mL) 중 tert-부틸 (E)-부트-2-에노에이트 (10 g, 70.32 mmol)의 용액을 반응 혼합물에 20분에 걸쳐 첨가하였다. 75분 후, 반응물을 NH₄Cl의 포화 용액 (175 mL) 및 포화 수성 NaCl (염수, 100 mL)을 첨가하여 켄칭하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 디에틸 에테르 (2 x 125 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 황색 오일을 수득하였다. 조 생성물을 헥산 (250 mL) 중에 용해시키고, 10% 수성 시트르산 용액 (3 x 75 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (24.12 g, 97%)을 황색 오일로서 수득하였다.

제조예 2

(3S)-3-[벤질-[(1S)-1-페닐에틸]아미노]부탄-1-올

tert-부틸 (3S)-3-[벤질-[(1S)-1-페닐에틸]아미노]부타노에이트 (24 g, 67.9 mmol)를 무수 THF (237 mL) 중에 용해시키고, 아르곤 분위기 하에 0℃로 냉각시켰다. THF 중 1 M 수소화알루미늄리튬 (237 mL, 237 mmol)을 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온 (RT)으로 냉각시키고, 디에틸 에테르 (500 mL)로 희석시켰다. 반응물을 셀라이트(CELITE)®의 혼합물로 켄칭하고, Na₂SO₄.10 H₂O (1:1)를 15분에 걸쳐 부분씩 첨가하였다. 혼합물을 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (17.54 g, 90%)을 무색 오일로서 수득하였다.

제조예 3

(2S)-N-벤질-4-메톡시-N-[(1S)-1-페닐에틸]부탄-2-아민

(3S)-3-[벤질-[(1S)-1-페닐에틸]아미노]부탄-1-올 (17.54 g, 61.9 mmol)을 무수 THF (186 mL) 중에 용해시키고, 아르곤 분위기 하에 0℃로 냉각시켰다. 수소화나트륨 (4.95 g, 광유 중 60% 현탁액, 123.8 mmol)을 10분에 걸쳐 부분씩 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반한 다음, 실온으로 가온되도록 하였다. 메틸 아이오다이드 (10.54 g, 74.28 mmol)를 30분에 걸쳐 적가하였다. 추가 30분 동안 교반한 후, 반응물을 물 중 NH₄Cl의 포화 용액의 첨가에 의해 켄칭하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 디에틸 에테르 (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 농축시키고, 조 물질을 정상 크로마토그래피 (2개의 120 g 실리카-겔 카트리지, 헥산 중 10% 메틸 tert-부틸 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물 (14.96 g, 81%)을 무색 오일로서 수득하였다.

제조예 4

(S)-4-메톡시부탄-2-아민 히드로클로라이드

(2S)-N-벤질-4-메톡시-N-[(1S)-1-페닐에틸]부탄-2-아민 (14.96 g, 50.29 mmol)을 메탄올 (400 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 이를 통해 질소를 버블링시킴으로써 탈산소화시켰다. 탄소상 20% 수산화팔라듐 (1.50 g)을 용액에 첨가하고, 생성된 현탁액을 수소로 포화시키고, 수소 분위기 하에 16시간 동안 교반하였다. 이 시점에 존재하는 주요 생성물은 모노 탈-벤질화된 생성물이다. 현탁액을 셀라이트® 패드를 통해 여과하고, 탄소상 20% 수산화팔라듐 1.1 g을 생성된 용액에 첨가하였다. 현탁액을 수소 분위기 하에 24시간 동안 교반하였다. 현탁액을 셀라이트® 패드를 통해 여과하고, 디에틸 에테르 중 HCl의 2 N 용액 (60 mL)을 혼합물에 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 용액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (7.01 g, 99%)을 백색 고체로서 수득하였다.

제조예 5

(R)-N-[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]-2-메틸-프로판-2-술핀아미드

하기 절차를 문헌 [Ellman, J. A. et al. J. Org. Chem. 2007, 72, 626-629]로부터 조정하였다.

HCl의 1 N 용액 (7.0 mL, 7.00 mmol)에 1,3,3-트리메톡시부탄 (53.19 mL, 337.38 mmol)을 적가하고, 생성된 용액을 50℃로 가열하고, 30분 동안 교반하였다. 중탄산나트륨 (16.50 g, 196.41 mmol)을 실온으로 사전 냉각된 혼합물에 첨가하고, 이어서 디에틸 에테르 및 MgSO₄를첨가하였다. 여과에 이어서 용매의 증발로 케토-에테르 중간체, 4-메톡시부탄-2-온을 황색 오일로서 수득하였다. 오일을 THF (482 mL) 중 (R)-(+)-2-메틸-2-프로판술핀아미드 (36.80 g, 303.64 mmol) 및 티타늄 (IV) 에톡시드 (123.14 g, 539.80 mmol)의 용액에 질소 분위기 하에 25℃에서 첨가하였다. 생성된 황색 현탁액을 60℃로 가열하고, 그 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시킨 다음, -48℃로 냉각시켰다. THF 중 1.0 M 리튬 트리(sec-부틸)보로히드라이드 (539.80 mL, 539.80 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 메탄올 (1100 mL)을 첨가하면서, 기체 발생이 더 이상 관찰되지 않을 때까지 빠르게 교반하였다. 생성된 현탁액을 셀라이트®의 플러그를 통해 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과물을 염수로 세척하고, 염수 층을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 황색 오일로 증발시켰다.

조 물질을 실리카 겔 상에 흡착시키고, 실리카 겔 칼럼을 통해 헥산/에틸 아세테이트 구배 (7:1에서 100% 에틸 아세테이트)를 사용하여 정제하여 목적 생성물을 수득하였다. 비극성 불순물 및 목적 생성물을 함유하는 다른 분획을 수집하고, 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 다시 정제하였다. 비극성 불순물을 헥산/에틸 아세테이트 4:1로 제거하였다. 목적 생성물을 디클로로메탄/메탄올 95:5로 용리시켜 추가의 물질을 수득하였다. 물질의 2개 배치를 합하여 38 g (54%)을 얻었고, 이는 LCMS에 의해 나타난 바와 같이 약 3:1 비의 목적/목적하지 않은 부분입체이성질체였다.

이 물질 (38 g)을 동일한 일반적 절차를 이용하여 제조된 또 다른 로트의 물질 (23 g)과 합하고, 부분입체이성질체 (3:1 비, 61 g)를 키랄 상 고성능 액체 크로마토그래피 (고정상: OD-H; 칼럼 크기: (20 μm, 80 x 250 mm); 용리 모드: 등용매; 이동상: 헥산/이소프로판올; 유량: 300 mL/분; UV 검출: 215.16 nm; 로딩: 4 g/6분)에 의해 분리하였다. 제1 용리 피크는 부차적 부분입체이성질체였다 (T_R = 4.75분). 제2 용리 피크는 주요 부분입체이성질체 (표제 화합물)였다 (T_R = 6.61분). 표제 화합물을 키랄 크로마토그래피로부터 약간 황색 오일 (43.5 g)로서 수득하였다.

제조예 6

(S)-4-메톡시부탄-2-아민 히드로클로라이드

디옥산 중 염화수소, 4.0 M (110.15 g, 419.61 mmol)을 1,4-디옥산 (109 mL) 중 (R)-N-[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]-2-메틸-프로판-2-술핀아미드 (43.5 g, 209.80 mmol)의 용액에 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 톨루엔 중에 재현탁시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 진공 하에 15분 동안 건조시켰다. THF를 첨가하고, 백색 고체를 침전시켰다. 백색 고체를 여과하고, THF로 세척하고, 건조되도록 하고, 수집하여 표제 화합물 (25.4 g, 87%)을 수득하였다.

아민의 절대 배위는 (S)-(-)-α-메톡시-α-트리플루오로메틸페닐-아세트산으로의 유도체화 및 키랄 경로로부터 수득되는 제조예 4의 (S)-4-메톡시부탄-2-아민의 동일한 유도체를 사용한 NMR의 비교에 의해 확인될 수 있다.

제조예 7

(3S)-3-이소티오시아네이토-1-메톡시-부탄

(S)-4-메톡시부탄-2-아민 히드로클로라이드 (25.4 g, 181.92 mmol)를 THF (609 mL) 중에 현탁시키고, 트리에틸아민 (TEA, 32.17 mL, 230.78 mmol)을 첨가하였다. 1,1'-티오카르보닐디이미다졸 (46.74 g, 251.76 mmol)을 백색 현탁액에 첨가하고 (약간 발열 반응), 생성된 황색 현탁액을 질소 분위기 하에 밤새 교반하였다. 에틸 아세테이트 (500 mL)를 황색 현탁액에 첨가하고, 이어서 1 N HCl (500 mL)을 첨가하였다. 유기 상을 분리하고, 1 N HCl (3 x 200 mL), 물 (200 mL) 및 염수 (200 mL)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (25.3 g, 83%)을 황색 오일로서 수득하였다.

제조예 8

메틸 2,2-디메틸-3-옥소-프로파노에이트

메틸 3-히드록시-2,2-디메틸-프로파노에이트 (52.4 g, 396.49 mmol)를 디클로로메탄 (495 mL) 중에 용해시키고, 혼합물을 빙수조에서 냉각시켰다. 트리클로로이소시아누르산 (101.36 g, 436.14 mmol)을 부분씩 첨가하고, 이어서 2,2,6,6-테트라메틸피페리딘-N-옥시드 (6.20 g, 39.65 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반한 다음, 실온으로 가온되도록 하고, 추가 60분 동안 교반하였다. 이어서, 고체를 셀라이트®를 통해 여과하고, 디클로로메탄 (300 mL)으로 헹구었다. 여과물을 물 중 Na₂CO₃의 포화 용액으로 세척하였다. 유기 상을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (41.24 g, 80%)을 녹색빛 오일로서 수득하였다. 생성물을 후속 반응 단계에 추가의 정제 없이 사용하였다.

제조예 9

6-[2-(2,4-디플루오로페닐)에티닐]-3-니트로-피리딘-2-아민

6-클로로-3-니트로-피리딘-2-일아민 (1254 g, 7.23 mol), 트리에틸아민 (1510 mL, 10.84 mol) 및 아세토니트릴 (10 L)을 질소 하에 기계식 교반기가 장착된 20 L, 4-구 둥근 바닥 플라스크에 채웠다. 생성된 황색 현탁액에, 아이오딘화구리 (I) (13.9 g, 72.3 mmol) 및 비스(트리페닐포스핀)팔라듐 (II) 클로라이드 (50.72 g, 72.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 연오렌지색 현탁액을 0-5℃로 냉각시킨 다음, 10분 동안 질소로 탈기시켰다. 아세토니트릴 (2.5 L) 중에 용해된 1-에티닐-2,4-디플루오로-벤젠 (1100 g, 7.95 mol)의 용액을 60분 동안 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온 (30℃)에서 밤새 교반되도록 두었다. 혼합물을 0-5℃로 냉각시켰다. 톨루엔 (6 L)을 현탁액에 첨가하고, 혼합물을 45분 동안 교반하고, 프릿을 통해 여과하였다. 고체를 톨루엔 (3 x 3 L), 물 (2 x 3 L)로 세척하고, 진공 오븐에서 밤새 건조시켜 표제 화합물 (1750 g, 92%)을 황색 고체로서 수득하였다.

제조예 10

1-(6-아미노-5-니트로-2-피리딜)-2-(2,4-디플루오로페닐)에탄-1,2-디온

아세톤 (10 L) 중 6-[2-(2,4-디플루오로페닐)에티닐]-3-니트로-피리딘-2-아민 (500 g, 1.82 mol)의 차가운 현탁액 (0-10℃)에 차가운 완충제 [NaH₂PO₄ (0.8 M) /Na₂HPO₄ (0.8 M) = 85/15 (V/V)] (pH = 6.0; 0-10℃; 10 L)을 첨가하였다. 온도를 15℃에서 유지하였다. 과망가니즈산칼륨 (1035 g, 6.55 mol)을 부분씩 (3 부분) 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 4시간 동안 교반하였다. pH를 pH = 5.0으로 조정하고, 온도를 15℃ 미만으로 유지하였다. 28% 티오황산나트륨 용액 (2054 mL, 3.64 mol)을 천천히 첨가하면서, 온도를 15℃ 미만 및 pH를 7.5 미만으로 유지하였다. 염수 (7.5 L), 및 메틸 tert-부틸 에테르 (3.75 L) 및 에틸 아세테이트 (3.75 L)의 혼합물을 현탁액에 첨가하였다. 혼합물을 13℃에서 15분 동안 교반하였다. 2개 상을 분리하고, 수성 갈색 현탁액을 메틸 tert-부틸 에테르 (3.5 L)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 수집하고, 염수 (2 x 3 L)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물 (375 g)을 황색 고체로서 수득하였다. 실험을 동일한 조건 하에 2회 더 반복하였다. 생성된 배치를 합하여 1080 g을 수득하였다.

제조예 11

메틸 2-[4-(6-아미노-5-니트로-2-피리딜)-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로파노에이트

환류 응축기가 구비된 둥근 바닥 플라스크에 1-(6-아미노-5-니트로-2-피리딜)-2-(2,4-디플루오로페닐)에탄-1,2-디온 (50 g, 162.75 mmol), 아세트산암모늄 (126.72 g, 1.63 mol), 메틸 2,2-디메틸-3-옥소-프로파노에이트 (42.36 g, 325.51 mmol) 및 1,4 디옥산 (163 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1.5시간 동안 80℃로 가열하였다. 초기 오렌지색 용액을 가열하면서 암색이 되도록 하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 디옥산을 제거하고, 잔류물을 고진공 하에 밤새 건조시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (800 mL) 중에 재용해시키고, 물 중 Na₂CO₃의 2 M 용액으로 추출하였다. 유기 상을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 농축시키고, 고진공 하에 밤새 건조시켜 표제 화합물 (80 g)을 조 오렌지색 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가의 정제 없이 사용하였다.

제조예 12

메틸 2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-(6-히드록시-5-니트로-2-피리딜)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로파노에이트

디메틸 술폭시드 (DMSO, 400 mL) 및 물 (320 mL) 중 메틸 2-[4-(6-아미노-5-니트로-2-피리딜)-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로파노에이트 (56 g, 134.17 mmol)의 용액에 황산 95-97% (80 mL)를 적가하였다. 이어서, 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 상기 혼합물에 물 (80 mL) 중 아질산나트륨 (18.70 g, 268.35 mmol)의 용액을 0℃에서 15분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 그 온도에서 20분 동안 교반한 다음, 냉각 조를 제거하고, 온도가 실온으로 상승하도록 하였다. 반응 혼합물에 완충 인산나트륨 일염기성 0.8 M 수용액 (1200 mL, pH = 6)을 첨가하였다. 황색 현탁액이 나타났다. 이 현탁액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 물로 세척하고, 오븐 내에서 건조시켜 표제 화합물 (49.5 g, 88%)을 오렌지색 고체로서 수득하였다.

제조예 13

메틸 2-[4-(5-아미노-6-히드록시-2-피리딜)-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로파노에이트

메탄올 (1.18 L) 중 메틸 2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-(6-히드록시-5-니트로-2-피리딜)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로파노에이트 (49.5 g, 118.32 mmol) 및 활성탄 상 5 중량% (건량 기준) 팔라듐 (4.95 g, 2.33 mmol)의 혼합물을 실온에서 수소 분위기 (풍선) 하에 밤새 교반하였다. 현탁액을 셀라이트®를 통해 여과하고, 메탄올로 세정하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 표제 화합물 (39 g)을 갈색 고체로서 수득하였다.

수회의 실행로부터의 조 물질 (90 g, 231.74 mmol)을 하기에 따라 정제하였다. 물질을 디클로로메탄 (450 mL) 및 에틸 아세테이트 (450 mL)의 1:1 혼합물 중에 현탁시켰다. 현탁액을 실온에서 밤새 교반하였다. 현탁액을 여과하고, 고체를 디클로로메탄/에틸 아세테이트의 1:1 혼합물로 세척하였다. 갈색 고체를 건조되도록 하고, 수집하여, 액체 크로마토그래피 질량 분광측정법에 의해 >98% 순도의 표제 화합물 67 g을 수득하였다.

제조예 14

메틸 2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로파노에이트

(3S)-3-이소티오시아네이토-1-메톡시-부탄 (24.68 g, 169.94 mmol)을 실온에서 에탄올 (550 mL) 중 메틸 2-[4-(5-아미노-6-히드록시-2-피리딜)-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로파노에이트 (55 g, 141.62 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 하에 밤새 교반한 다음, 50℃로 냉각시켰다. 디시클로헥실카르보디이미드 (37.99 g, 184.10 mmol)를 혼합물에 첨가하고, 생성된 현탁액을 환류 하에 20시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온에 도달하도록 하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔에 흡착시키고, 실리카 겔 칼럼을 통해 여과하여 (먼저 디클로로메탄을 용리액으로서 사용하여 대부분의 비극성 불순물을 제거한 다음, 디클로로메탄/메탄올 95:5를 사용하여 목적 생성물을 용리함) 표제 화합물 (52 g, 74%)을 암갈색 발포체로서 수득하였다.

제조예 15

2-[(1S)-2-히드록시-1-메틸-에틸]이소인돌린-1,3-디온

(2S)-2-아미노프로판-1-올 (26 mL, 333 mmol) 및 프탈산 무수물 (51.7 g, 349.4 mmol)의 혼합물을 140℃에서 밤새 가열하였다. 이 시간 동안, 고체는 오렌지색 액체가 되었다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 (10 mL/g)로 희석하였다. 유기 상을 포화 NaHCO₃ 및 10% 시트르산으로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (68.3 g, 98%)을 백색 고체로서 수득하였으며, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.

제조예 16

2-[(1S)-2-에톡시-1-메틸-에틸]이소인돌린-1,3-디온

THF (376 mL) 중 2-[(1S)-2-히드록시-1-메틸-에틸]이소인돌린-1,3-디온 (47 g, 229 mmol) 및 아이오도에탄 (89.3 g, 572.5 mmol)의 용액에 칼륨 tert-부톡시드 (64.25 g, 572.5 mmol)를 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 질소 분위기 하에 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 염수 (200 mL)로 세척하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시킨 다음, 고진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (39.4 g,74%)을 오렌지색 고체로서 수득하였으며, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.

제조예 17

(2S)-1-에톡시프로판-2-아민 히드로클로라이드

2-[(1S)-2-에톡시-1-메틸-에틸]이소인돌린-1,3-디온 (12.84 g, 55 mmol)을 메탄올 (120 mL) 중에 용해시켰다. 히드라진 1수화물 (6.9 mL, 138 mmol)을 천천히 첨가하고, 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 교반하였다 (백색 고체가 형성됨). NaOH (1 mL)를 첨가하고, pH를 13-14로 상승시켰다. 고체를 여과하고, 디클로로메탄으로 세척하였다. 여과물 층을 분리하고, 수성 층을 추가로 디클로로메탄으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였다. 에테르 중 2 N HCl (70 mL, 140 mmol)을 용액에 첨가하였다. 혼합물을 15분 동안 교반하고, 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물 (6.61 g, 86%)을 백색 고체로서 수득하였다.

제조예 18

(2S)-1-에톡시-2-이소티오시아네이토-프로판

디메틸포름아미드 (DMF, 20 mL) 및 TEA (1.85 mL, 13.24 mmol) 중 (2S)-1-에톡시프로판-2-아민 히드로클로라이드 (2 g, 12.03 mmol)의 용액에 1,1'-티오카르보닐디이미다졸 (2.36 g, 13.24 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 질소 분위기 하에 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 1 N HCl, 물 및 염수로 완전히 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 감압 (조 온도가 20℃를 초과하지 않아 생성물을 증발시키지 않음) 하에 농축시켜 표제 화합물을 함유하는 조 물질 (1.84 g)을 수득하였으며, 이를 추가의 정제 없이 그대로 사용하였다.

제조예 19

3-메틸옥세탄-3-카르브알데히드

(3-메틸옥세탄-3-일)메탄올 (6.0 g, 58.75 mmol)을 디클로로메탄 (117 mL) 중에 용해시켰다. 트리클로로이소시아누르산 (13.93 g, 59.92 mmol)을 -5℃에서 부분씩 첨가한 다음, 2,2,6,6-테트라메틸피페리딘-1-옥실 (TEMPO) (0.92 g, 5.87 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 -5℃에서 20분 동안 교반하고, 실온으로 가온되도록 하고, 추가 20분 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트® 패드를 통해 여과하고, 디클로로메탄 (200 mL)으로 희석하고, 포화 수성 Na₂CO₃ (100 mL), 1 N HCl (100 mL) 및 염수 (50 mL)로 세척하였다. 유기 부를 농축시켜 표제 화합물 (4.17 g, 71%)을 오렌지색 오일로서 수득하였으며, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.

대안적 제조:

브로민화칼륨 (11.65 g, 0.098 mol)을 0℃에서 디클로로메탄 (2 L) 중 (3-메틸옥세탄-3-일)메탄올 (200 g, 1.96 mol) 및 TEMPO (3.06 g, 0.019 mol)의 혼합물에 첨가하였다. 이어서, 고체 NaHCO₃을 사용하여 pH= 9로 조정된 10% 차아염소산나트륨의 수용액 (1.6 L, 2.35 mol)을 상기 용액에 적가하였다 (3시간 첨가, 내부 온도는 < 10℃에서 유지하였음). 생성된 혼합물을 15분 동안 교반하고, 2개 상을 분리하였다. 수성 상 중에서의 박층 크로마토그래피에 의해 더 이상 생성물이 검출되지 않을 때까지 수성 상을 10% 2-프로판올/디클로로메탄 혼합물로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 티오황산나트륨 용액으로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (114 g, 58%)을 오렌지색 오일로서 수득하였다.

제조예 20

1-메톡시카르보닐시클로프로판카르복실산

디메틸 시클로프로판-1,1-디카르복실레이트 (26.08 mL, 189.87 mmol)를 메탄올 (319 mL) 중에 용해시키고, 용액을 0℃로 냉각시켰다. 물 중 1 N NaOH (190 mL, 190 mmol, 1 당량)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용액을 감압 하에 농축시켜 메탄올을 제거하고, 생성된 수용액을 디클로로메탄 (3 x 50 mL)으로 세척하고, 1 N HCl (pH = 2-3)로 산성화시켰다. 이어서, 용액을 에틸 아세테이트 (5 x 100 mL) 및 디클로로메탄 (3 x 50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 부를 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (16.4 g, 60%)을 수득하였다.

제조예 21

메틸 1-(히드록시메틸)시클로프로판카르복실레이트

1-메톡시카르보닐시클로프로판 카르복실산 (16.4 g, 113.89 mmol), TEA (17.6 mL, 127.55 mmol) 및 THF (325 mL)를 둥근 바닥 플라스크에 채웠다. 혼합물을 -10℃로 냉각시키고, 이소부틸 클로로포르메이트 (16.5 mL, 127.55 mmol)를 적가하였다. 용액을 1시간 동안 교반하였다. 분리형 플라스크에서, 수소화붕소나트륨 (13 g, 341.67 mmol)을 THF (165 mL) 및 물 (40 mL)의 혼합물 중에 용해시키고, 빙조에서 냉각시켰다. 불용성 물질을 제1 용액으로부터 여과에 의해 제거하였다. 보로히드라이드 용액에 상기 기재된 1-메톡시카르보닐시클로프로판 카르복실산 용액을 1.5시간의 기간에 걸쳐 적가하였다. 생성된 용액을 동일한 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉각된 시트르산의 20% 수용액에 붓고, 에틸 아세테이트 (3 x 150 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (13.5 g, 91%)을 수득하였다.

제조예 22

메틸 1-포르밀시클로프로판카르복실레이트

메틸 1-(히드록시메틸)시클로프로판카르복실레이트 (16.0 g, 123.07 mmol)를 디클로로메탄 (320 mL) 중에 용해시키고, 혼합물을 -5℃로 냉각시켰다. 트리클로로이소시아누르산 (29.1 g, 125.5 mmol)을 부분씩 첨가한 다음, TEMPO (1.9 g, 12.3 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 -5℃에서 20분 동안 교반하고, 실온으로 가온되도록 하고, 20분 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트® 패드를 통해 여과하고, 디클로로메탄 (500 mL)으로 희석하였다. 용액을 포화 Na₂CO₃ (300 mL), 1 N HCl (300 mL), 염수 (300 mL) 및 포화 염화암모늄 (3 x 200 mL)으로 세척하였다. 유기 부를 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 디클로로메탄 (이론적 15.75 g)을 여전히 함유하는 표제 화합물 19 g을 수득하였다. 물질을 후속 반응에 그대로 사용하였다.

제조예 23

6-[2-시클로프로필-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-니트로-피리딘-2-아민

키맥스(KIMAX)® 튜브에 1-(6-아미노-5-니트로-2-피리딜)-2-(2,4-디플루오로페닐)에탄-1,2-디온 (5 g, 16.28 mmol), 1,4-디옥산 (50 mL) 및 아세트산암모늄 (6.27 g, 81.38 mmol)을 채웠다. 시클로프로판카르브알데히드 (3.42 mL, 48.83 mmol)를 혼합물에 적가하였다. 생성된 혼합물을 질소로 퍼징하고, 튜브를 밀봉하고, 이것을 80℃에서 밤새 가열하고; 그 후에 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 이어서, 혼합물을 감압 하에 농축 건조시켰다. 에틸 아세테이트 (700 mL) 및 포화 NaHCO₃ 수용액을 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 염수 (3 x 250 mL)로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 표제 화합물 (5.5 g)을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가의 정제 없이 사용하였다.

1-(6-아미노-5-니트로-2-피리딜)-2-(2,4-디플루오로페닐)에탄-1,2-디온 및 적절한 알데히드를 출발 물질로서 사용하여, 본질적으로 제조예 23에 기재된 바와 같은 절차에 따라, 하기 표의 중간체를 제조하였다.

*반응은 90℃에서 1.5시간 동안 수행하였다. 후처리 동안, 고체 침전물을 중탄산염 용액으로부터 수집하였다. 여과물을 적색 오일을 수득하기 전과 같이 후처리하였다. 오일을 에틸 아세테이트/헥산의 4:1 혼합물 중에서 음파처리하여 현탁액을 얻고, 이를 여과하였다.

제조예 26

6-[2-시클로프로필-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-니트로-피리딘-2-올

6-[2-시클로프로필-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-니트로-피리딘-2-아민 (5.51 g, 15.41 mmol)을 디메틸 술폭시드 (DMSO, 32 mL), 물 (25 mL) 및 진한 H₂SO₄ (6 mL) 중에 현탁시켰다. 현탁액을 0℃에서 냉각시키고, 아질산나트륨(2.13 g, 30.81 mmol)을 온도가 5℃ 미만으로 유지되는 그러한 속도로 부분씩 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 실온으로 가온되도록 하고, 액체 크로마토그래피/질량 분광측정법 (LC/MS)이 출발 물질의 완전한 전환을 나타낼 때까지 (1시간) 교반하였다. 인산나트륨 일염기성 0.8 M 수용액 (200 mL)을 혼합물에 첨가하였다. 황색 현탁액이 형성되었다. 이어서, 수성 1 N NaOH를 pH가 8로 상승할 때까지 첨가하였다. 혼합물을 30시간 동안 교반하고, 여과하고, 고체를 물로 세정하고, 이어서 감압 하에 건조시켜 표제 화합물 (4.53 g, 82%)을 수득하였다.

적절한 3-니트로-피리딘-2-아민을 출발 물질로서 사용하여, 본질적으로 제조예 26에 기재된 바와 같은 절차에 따라, 하기 표의 중간체를 제조하였다.

제조예 29

3-아미노-6-[2-시클로프로필-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-4-일]피리딘-2-올

6-[2-시클로프로필-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-니트로-피리딘-2-올 (4.525 g, 12.63 mmol)을 에탄올 (63 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 질소 기체 버블링으로 탈기시켰다. 10% Pd/C (920 mg)를 혼합물에 부분씩 첨가하고, 혼합물을 수소로 포화시켰다. 혼합물을 주말 동안 실온에서 수소 분위기 (풍선) 하에 교반하고, 이때 LC/MS는 완전한 전환을 나타내었다. 현탁액을 셀라이트® 패트를 통해 여과하여 촉매를 제거하고, 용액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (3.97 g, 89%)을 수득하였다.

출발 물질로서 적절한 3-니트로-피리딘올을 사용하여, 본질적으로 제조예 29에 기재된 바와 같은 절차에 따라, 하기 표의 중간체를 제조하였다.

제조예 32

메틸 1-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-2-에톡시-1-메틸-에틸]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]시클로프로판카르복실레이트

메틸 1-[4-(5-아미노-6-히드록시-2-피리딜)-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]시클로프로판카르복실레이트 (4 g, 10.35 mmol) 및 (2S)-1-에톡시-2-이소티오시아네이토-프로판 (2.379 g, 15.53 mmol)의 혼합물을 에탄올 (34 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물을 밀봉된 플라스크에서 85℃로 16시간 동안 가열하였다. 디이소프로필 카르보디이미드 (3.21 g, 20.71 mmol)를 적가하고, 혼합물을 85℃에서 16시간 동안 교반하고, 이 후에 디이소프로필 카르보디이미드 추가 3 g을 첨가하고, 혼합물을 85℃에서 추가로 4시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 헥산-에탄올 구배를 사용하는 정상 크로마토그래피 (120 g 실리카-겔 카트리지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.180 g, 24%)을 수득하였다.

실시예 1 대안의 합성을 위한 제조예

제조예 33

(S)-N-[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]-2-메틸-프로판-2-술핀아미드

N-tert-부탄술피닐 이민의 환원에서 L-셀렉트리드(Selectride) 대 수소화붕소나트륨의 비교에 대하여 문헌 [Faul, M. M. J. Org. Chem. 2007, 71, 6859-6862]을 참조한다.

1,3,3-트리메톡시부탄 (145.4 g, 0.98 mol)을 1 N 수성 염산 (50.0 mL, 0.05 mol)과 합하고, 1-2시간 동안 실온에서 질소 분위기 하에 교반하였다. THF (1.5 L)를 첨가하고, 용매를 표준 대기압 하에 70℃ 미만에서 2회 증발시켰다. THF (1.5 L)를 첨가하여 THF 중 4-메톡시부탄-2-온의 용액을 제조하였다. (S)-(-)-2-메틸-2-프로판술핀아미드 (124.4 g, 1.03 mol) 및 티타늄 (IV) 에톡시드 (447.0 g, 1.96 mol)를 첨가하고, 반응물을 16-17시간 동안 65-70℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 -10 내지 0℃로 냉각시켰다. 수소화붕소나트륨 (37.0 g, 0.98 mol)을 부분씩 첨가한 다음, 혼합물을 동일한 온도에서 1-2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 1-2시간 동안 교반하였다. 이어서, 이것을 10-20℃로 냉각시키고, 메탄올 (100 mL)을 1-2시간에 걸쳐 적가하였다. 25% 수성 염화나트륨 (300 mL)을 첨가하고, 혼합물을 실온으로 가온하였다. 에틸 아세테이트 (500 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1-2시간 동안 교반한 다음, 여과하였다. 필터케이크를 추가의 에틸 아세테이트 (807 mL)로 헹구었다. 층을 분리하고, 유기 상을 25% 수성 염화나트륨 (1.0 L)으로 세척하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (500 mL)로 추출하였다. 유기 부를 합하고, 용매를 대기압 (진공이 아님) 하에 75℃ 미만에서 증류시켜 전체 부피 300-500 mL의 용액에 도달하였다. 에틸 아세테이트 (600 mL) 및 티오황산나트륨 (150.0 g)을 첨가하고, 혼합물을 20-30℃에서 1-2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켰다. 부분입체이성질체를 초임계 유체 크로마토그래피로 분리하여 표제 화합물 (205.0 g, 65%)을 황색 오일로서 수득하였다. 칼럼: 키랄팩(ChiralPak)® AD 10 μm, 50 x 300 mm; 용리 모드: 등용매; 이동상: CO₂/에탄올; 유량: 280 mL/분; UV 검출: 215.16 nm; 로딩: 300 mg/mL. 제1 용리 피크는 부차적 부분입체이성질체였다 (T_R = 15.17분). 제2 용리 피크는 표제 화합물을 나타내는 주요 부분입체이성질체였다 (T_R = 17.11분).

제조예 34

(3S)-3-이소티오시아네이토-1-메톡시-부탄

질소 분위기 하에 메탄올 (185 mL), THF (1.76 L) 및 N-S-[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]-2-메틸-프로판-2-술핀아미드 (220.0 g, 1.06 mol)를 합하고, -10 내지 0℃로 냉각시켰다. 염산 (1.26 L, 5.3 mol, THF 중 4.2 N)을 적가하고, 온도를 10℃ 미만으로 유지하였다. 반응 혼합물을 0-10℃에서 3-4시간 동안 교반하고, 감압 하에 45℃ 미만에서 농축시켜 용액 부피 400.0-600.0 mL를 수득하였다. THF (880 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 감압 하에 45℃ 미만에서 용액 부피 400-600 mL로 농축시켰다. 반응 혼합물을 20-30℃로 냉각시키고, 0.5-1시간 동안 교반하였다. (S)-4-메톡시부탄-2-아민, 히드로클로라이드의 종자 결정을 첨가하였다 (5.0 g, 35.8 mmol). (종자 결정은 제조예 4 또는 6으로부터 수득된 고체로부터 생성될 수 있거나, 또는 당업자에게 일반적인 다른 방법, 예컨대 소량 분취액의 재결정화를 이용하여 수득될 수 있음.) 메틸 tert-부틸 에테르 (660 mL)를 또한 첨가하고, 혼합물을 20-25℃에서 2-4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0-5℃로 냉각시키고, 2-4시간 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 필터케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (110 mL)로 세척하였다. 고체를 반응 용기로 옮기고, 메틸 tert-부틸 에테르 (660 mL)를 실온에서 첨가하였다. 티오황산나트륨 (270.0 g, 1.9 mol) 및 수산화나트륨 (42.5 g, 1.06 mol)을 첨가하고, 혼합물을 10-20℃에서 1-2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 필터케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (440 mL)로 세척하여 (S)-4-메톡시부탄-2-아민 (87.5 g)을 메틸 tert-부틸 에테르 중 조 용액으로서 수득하였다. 물질을 하기와 같이 후속 반응에 사용하였다.

질소 분위기 하에 N,N-티오카르보닐디이미다졸 (97.0 g, 0.55 mol) 및 THF (470 mL)를 첨가하고, 혼합물을 15-30분 동안 교반하였다. 혼합물을 -10 내지 0℃로 냉각시키고, 메틸 tert-부틸 에테르 (389 mL) 중 (S)-4-메톡시부탄-2-아민 (46.9 g, 0.455 mol)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 10-20℃로 가온하였다. 반응 혼합물을 이 온도에서 15-20시간 동안 교반한 다음, 0-10℃로 냉각시켰다. 염산 (275 mL, 물 중 4 N)을 첨가하여 pH 1 내지 2에 도달하게 하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 층을 분리하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (235 mL)로 추출하고, 유기 층을 합하고, 물 (140 mL)로 세척하였다. 유기 용액을 감압 하에 45℃ 미만에서 농축시키고, 에틸 아세테이트 (211.5 mL)를 첨가하고, 용액을 감압 하에 45℃ 미만에서 2회 농축시키고, 에틸 아세테이트 (235 mL)를 첨가하였다. 티오황산나트륨(32.3 g, 227.0 mmol)을 첨가하고, 용액을 여과하고, 필터케이크를 에틸 아세테이트 (104 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 45℃ 미만에서 농축시켜 표제 화합물 (55.0 g, 77%)을 황색 오일로서 수득하였다.

제조예 35

메틸 2,2-디메틸-3-옥소-프로파노에이트

메틸 3-히드록시-2,2-디메틸-프로파노에이트 (25.4 kg, 192.2 mol) 및 디클로로메탄 (241 L)을 질소 분위기 하에 실온에서 교반하면서 합하였다. (2,2,6,6-테트라메틸-피페리딘-1-일)옥실 (0.61 kg, 3.9 mol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0-5℃로 냉각시켰다. 트리클로로이소시아누르산 (31.2 kg, 134.5 mol)을 0-5℃에서 부분씩 첨가하고, 반응 혼합물을 이 온도에서 16-18시간 동안 교반하였다. 반응물을 여과하고, 필터케이크를 디클로로메탄 (25.4 L)으로 세척하고, 여과물을 감압 하에 50℃ 미만에서 농축시켰다. 1,4-디옥산 (25.4 L)을 첨가하고, 유기 상을 감압 하에 65℃ 미만에서 농축시켜 표제 화합물 (127.8 kg, 77%)을 황색 액체로서 수득하였으며, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다.

제조예 36

6-[2-(2,4-디플루오로페닐)에티닐]-3-니트로-피리딘-2-아민

6-클로로-3-니트로-피리딘-2-일아민 (16.2 kg, 93.3 mol), 아세토니트릴 (130.8 L), 아이오딘화제1구리 (0.18 kg, 1.0 mol) 및 비스(트리페닐포스핀) 팔라듐 (II) 클로라이드 (0.66 kg, 0.9 mol)를 질소 분위기 하에 20-25℃에서 교반하면서 합하였다. 트리에틸아민 (19.7 L, 141.3 mol)을 첨가하고, 혼합물을 30-35℃로 가열하였다. 아세토니트릴 (32.6 L) 중 1-에티닐-2,4-디플루오로-벤젠 (18.0 kg, 130.3 mol)의 용액을 질소분위기 하에 30-35℃에서 첨가하였다. 혼합물을 15-25℃에서 2-4시간 동안 교반하였다. 톨루엔 (80.0 L)을 첨가하고, 혼합물을 0.5-1시간 동안 교반한 다음, 0-5℃로 냉각시키고, 2-4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 원심분리하고, 필터 케이크를 톨루엔 (2 x 64 L) 및 물 (2 x 32.4 L)로 헹구었다. 고체를 감압 하에 50℃ 미만에서 건조시켜 표제 화합물 (21.7 kg, 83%)을 황색 고체로서 수득하였다.

제조예 37

6-[2-(2,4-디플루오로페닐)에티닐]-3-니트로-피리딘-2-아민 (2.0 kg, 7.3 mol) 및 아세톤 (40.5 L)을 질소 분위기 하에 반응기에 첨가하고, 혼합물을 교반하면서 0-10℃로 냉각시켰다. 물 (38.3 L), 인산이수소나트륨 (3.3 kg), 및 인산수소이나트륨 (0.7 kg)의 완충 용액을 0-15℃에서 첨가하였다. 혼합물을 3-6℃로 냉각시키고, 3-6℃에서 고체 과망가니즈산칼륨 (4.1 kg, 25.9 mol)을 채웠다. 혼합물을 3시간 내지 5시간 동안 교반한 다음, 반응 혼합물의 일부를 15-20℃에서 물 (9.3 L) 및 티오황산나트륨 5수화물 (3.6 kg)을 함유하는 용기로 옮겼다. 혼합물을 15-25℃에서 교반하였다. 물 (50 L)을 첨가하고, 혼합물을 0.5-1시간 동안 교반하고, 여과하였다. 여과물을 감압 하에 45℃ 미만에서 농축시켰다. 용매의 증류가 완결되면, 물 (40 L)을 20-25℃에서 첨가하고, 혼합물을 0.5-1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 필터케이크를 40℃ 미만에서 건조시켜 표제 화합물 (1.7 kg, 75%)을 황색 고체로서 수득하였다.

제조예 38

메틸 2-[4-(6-아미노-5-니트로-2-피리딜)-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로파노에이트, 메탄술포네이트

아세트산암모늄 (30.0 kg, 389.2 mol), 1,4-디옥산 (193.6 L) 및 메틸 2,2-디메틸-3-옥소-프로파노에이트 (10.2 kg, 78.4 mol)를 20-25℃에서 0.5-1시간 동안 교반하면서 질소 분위기 하에 합하였다. 1-(6-아미노-5-니트로-2-피리딜)-2-(2,4-디플루오로페닐)에탄-1,2-디온 (18.5 kg, 60.2 mol)을 첨가하고, 혼합물을 20-25℃에서 10-14시간 동안 교반하였다. 톨루엔 (36.9 L)을 첨가하고, 용액을 감압 하에 65℃ 미만에서 농축시켰다. 톨루엔 (76.8 L)을 첨가한 다음, 용액을 감압 하에 65℃ 미만에서 농축시켰다. 톨루엔 (36.9 L) 및 에틸 아세테이트 (37.1 L)를 첨가하고, 혼합물을 여과하였다. 여과물을 따로 모아 두고, 필터케이크를 분리 반응기로 옮기고, 에틸 아세테이트 (37.1 L)를 첨가하였다. 혼합물을 교반하면서 50-60℃로 20-30분 동안 가열하였다. 혼합물을 20-25℃로 냉각시키고, 여과하고, 여과물을 이전 여과물과 합하였다. 합한 여과물을 감압 하에 60℃ 미만에서 농축시키고, 톨루엔 (76.8 L)을 첨가하였다. 혼합물을 감압 하에 65℃ 미만에서 농축시켰다. 에틸 아세테이트 (18.6 L) 및 톨루엔 (18.3 L)을 첨가하고, 용액을 50-70℃로 가열하였다. 에틸 아세테이트 (18.6 L) 중 메탄술폰산 (4.3 L, 66.2 mol)을 첨가하고, 반응물을 1-2시간 동안 교반하였다. 반응물을 10-25℃로 냉각시키고, 2-5시간 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 필터케이크를 에틸 아세테이트 (18.6 L)로 세척하여 표제 화합물 (17.0 kg, 96.2% 순도, 46.2% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다.

제조예 39

질소 분위기 하에 메틸 2-[4-(6-아미노-5-니트로-2-피리딜)-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로파노에이트 메탄술포네이트 (68.9 g, 134.2 mmol), 디메틸 술폭시드 (275.5 mL), THF (116.2 mL) 및 물 (303.2 mL)을 첨가하고, 혼합물을 20-25℃에서 교반하였다. 황산 95-97% (93.6 mL)를 반응 혼합물에 적가하고, 온도를 30℃ 미만에서 유지하였다. 반응 혼합물을 0-5℃로 냉각시키고, 물 (82.7 mL) 중 아질산나트륨 (18.6 g, 0.27 mmol)의 용액을 0-10℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 이 온도에서 1-2시간 동안 교반하였다. 10% 수성 인산이수소나트륨(930.0 mL)을 적가하여 온도를 25℃ 미만으로 유지하였다. 생성된 혼합물을 15-25℃에서 2-3시간 동안 교반하고, 고체를 여과에 의해 수집하였다. 필터케이크를 물 (138 mL)로 세척하고, 고체를 반응 용기로 옮겼다. 메탄올 (566 mL)을 첨가하고, 혼합물을 60-65℃로 1-2시간 동안 가열하였다. 물 (87 mL)을 첨가하고, 혼합물을 60-65℃에서 1-2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 15-25℃로 냉각시키고, 혼합물을 15-25℃에서 2-4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 케이크를 메탄올 (87 mL)로 세척하고, 진공 하에 70℃ 미만에서 건조시켜 표제 화합물 (53.28 g, 93%)을 황색 고체로서 수득하였다.

제조예 40

메틸 2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-(6-히드록시-5-니트로-2-피리딜)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로파노에이트 (90.0 g, 0.22 mol), 습윤 10% Pd/C (4.5 g) 및 메탄올 (1.77 L)을 15-25℃에서 합하였다. 반응물을 20-25 psig 수소 분위기 하에 3-6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토 상에서 여과하고, 필터 보조제를 메탄올 (227 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 40℃ 미만에서 농축시키고, 메틸 tert-부틸 에테르 (729.3 mL)를 첨가하였다. MTBE를 감압 하에 40℃ 미만에서 제거하고, 추가의 메틸 tert-부틸 에테르 (729.3 mL)를 첨가하였다. MTBE를 감압 하에 40℃ 미만에서 제거하였다. 메틸 tert-부틸 에테르 (182 mL) 및 메탄올 (46 mL)을 첨가하고, 혼합물을 50-60℃로 1-2시간 동안 가열하였다. 혼합물을 10-15℃로 냉각시키고, 2-4시간 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 필터케이크를 메틸 tert-부틸 에테르 (61 mL)로 세척하였다. 고체를 진공 하에 50℃ 미만에서 건조시켜 표제 화합물 (75.0 g, 88%)을 황색 고체로서 수득하였다.

제조예 41

디메틸 술폭시드 (713 mL)를 25-30℃에서 0.5-1시간 동안 질소 분위기 하에 질소로 탈기시켰다. 메틸 2-[4-(5-아미노-6-히드록시-2-피리딜)-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로파노에이트 (35.0 g, 90.0 mmol) 및 (3S)-3-이소티오시아네이토-1-메톡시-부탄 (19.58 g, 0.14 mol)을 첨가하고, 반응물을 63-68℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 18-24시간 동안 이 온도에서 교반한 다음, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카르보디이미드 히드로클로라이드 (19.3 g, 100.7 mmol)를 부분씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 60-65℃에서 2-4시간 동안 교반하였다. 반응이 완전 전환에 도달하지 않은 경우에 추가의 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카르보디이미드 히드로클로라이드 (1.9 g, 9.9 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 20-30℃로 냉각시키고, 규조토 상에서 여과하였다. 에틸 아세테이트 (351 mL) 및 물 (350 mL)을 여과물에 첨가하였다. 층을 분리하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (312 mL)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 물 (2 x 210 mL)로 세척한 다음, 헵탄 (626 mL)을 첨가하였다. 용액을 0.5-1시간 동안 교반하고, 실리카 겔 상에서 여과하면서, 에틸 아세테이트 (351 mL) 및 헵탄 (348 mL)의 혼합물로 헹구었다. 용액을 감압 하에 45℃ 미만에서 농축시키고, 에틸 아세테이트 (156 mL)를 첨가하였다. 활성탄 (3.5 g)을 첨가하고, 혼합물을 0.5-1시간 동안 교반하면서 60-70℃로 가열하였다. 혼합물을 20-30℃로 냉각시키고, 여과하고, 여과물을 감압 하에 45℃ 미만에서 농축시켰다. 톨루엔 (242 mL)을 생성된 잔류물에 채우고, 물질을 감압 하에 45℃ 미만에서 농축시켰다. 톨루엔 (40 mL)을 첨가하고, 혼합물을 0.5-1시간 동안 교반하면서 60-70℃로 가열하였다. 혼합물을 25-30℃로 냉각시키고, 2-4시간 동안 교반한 다음, 0-5℃로 냉각시켰다. 혼합물을 0-5℃에서 2-4시간 동안 교반하고, 고체를 여과에 의해 수집하였다. 필터케이크를 톨루엔 (40 mL)으로 세척하고, 감압 하에 60℃ 미만에서 건조시켜 표제 화합물 (33.0 g, 71%)을 회백색 고체로서 수득하였다.

실시예 1

2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로판-1-올

메틸 2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노] 옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로파노에이트 (497 mg, 0.99 mmol)를 디에틸 에테르 (5 mL) 및 THF (2.5 mL)의 혼합물 중에 용해시켰다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 수소화붕소리튬 (45.6 mg, 1.99 mmol)을 부분씩 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 1 M HCl을 천천히 pH=1까지 첨가하고, 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 혼합물을 고체 NaHCO₃으로 염기성화시키고, 층을 분리하였다. 수성 층을 디클로로메탄으로 추출하고, 합한 유기 층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 정상 크로마토그래피 (40 g 실리카-겔 카트리지, 헥산 중 20% 에탄올)에 의해 정제하였다. 갈색 고체 (298 mg)를 수득하였으며, 이를 추가의 역상 크로마토그래피 (엑스브릿지(XBRIDGE)™ 칼럼 (5 μm, 19 x 100 mm): 물 중 탄산암모늄 용액 중 35에서 38%의 아세토니트릴 구배 (pH = 9). 유량 25 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 193 mg (41%)을 수득하였다.

실시예 1 대안적 정제

메틸 2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노] 옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로파노에이트 (50 g, 100.1 mmol)를 디에틸 에테르 (1 L) 및 THF (500 mL)의 혼합물 중에 용해시켰다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 수소화붕소리튬 (4.36 g, 200.19 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 1 M HCl (600 mL)을 천천히 첨가하고 (기체 발생), 생성된 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 층을 분리하고, 수성 상을 메틸 tert-부틸 에테르로 추출하였다. 수성 층을 2 M NaOH (200 mL)의 첨가에 의해 염기성화시키고 (pH= 8), 디클로로메탄 (3 x 400 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 갈색 발포체를 수득하였다. 조 물질을 실리카 겔 칼럼 (용리액: 디클로로메탄/메탄올 중 3N NH₃ 95:5)을 통해 용리시켜 목적 생성물 (35 g)을 보라색 발포체로서 수득하였다. 고체를 2:1 헵탄/메틸 tert-부틸 에테르의 혼합물 중에 현탁시키고, 음파처리하였다. 현탁액을 실온에서 밤새 교반하였다. 고체를 여과하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (30 g, 64%)을 결정질 회백색 고체로서 수득하였다.

실시예 1: 제조예 33-41의 대안적 경로

2-메틸테트라히드로푸란 (135 mL)을 질소 하에 -5 내지 0℃로 냉각시키고, 수소화붕소리튬 (4.95 g, 0.23 mol)을 온도를 10℃ 미만으로 유지하면서 부분씩 첨가하였다. 2-메틸테트라히드로푸란 (225 mL) 중 메틸 2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로파노에이트 (45.0 g, 0.09 mol)의 용액을 -5 내지 0℃에서 적가하고, 12-14시간 동안 교반하였다. 2 M 수성 염산 (203 mL)을 -5 내지 0℃에서 적가하고, 반응 혼합물을 1-2시간 동안 교반하면서 30-40℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 15-25℃로 냉각시키고, 층을 분리하였다. 유기 상을 물 (135 mL) 및 2 M 수성 염산 (45 mL)의 혼합물로 추출하고, 유기 상을 버렸다. 수성 층을 합하고, 25% 수성 수산화나트륨 (75 mL)을 적가하여 pH = 8-9로 조정하였다. 수성 층을 실온에서 디클로로메탄 (225 mL)으로 추출하고, 층을 분리하였다. 유기 부를 물 (2 x 180 mL)로 세척한 다음, 감압 하에 40℃ 미만에서 농축시켰다. 메틸 tert-부틸 에테르 (231 mL)를 첨가하고, 용액을 감압 하에 40℃ 미만에서 2회 농축시켰다. 에틸 아세테이트 (101 mL)를 첨가하고, 혼합물을 1-2시간 동안 교반하면서 50-60℃로 가열하였다. 용액을 2-4시간 동안 교반하면서 0-5℃로 냉각시켰다. 고체를 여과하고, 필터케이크를 헵탄 (66 mL)으로 세척하였다. 고체를 반응 용기에 옮기고, 에틸 아세테이트 (181 mL)를 첨가한 다음, 혼합물을 0.5-1시간 동안 교반하면서 70-75℃로 가열하였다. 혼합물을 50-60℃로 냉각시키고, 헵탄 (157 mL)을 적가하고, 2-4시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 2-4시간 동안 교반하면서 10-15℃로 냉각시켰다. 고체를 여과하고, 필터케이크를 헵탄 (66 mL)으로 세척하였다. 고체를 반응 용기로 옮기고, 에틸 아세테이트 (406 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 0.5-1시간 동안 교반하면서 60-75℃로 가열하였다. 이어서, 이것을 40-45℃로 냉각시키고, 감압 하에 45℃ 미만에서 농축시켜 전체 부피 대략 200 mL의 용액에 도달하였다. 혼합물을 0.5-1시간 동안 교반하면서 70-75℃로 가열한 다음, 다시 50-60℃로 냉각시켰다. 헵탄 (268 mL)을 첨가하고, 이어서 종자 결정 (2.25 g)을 첨가하였다. (시드 결정은 실시예 1의 이전 로트의 생성물로부터 수득된 고체로부터 생성될 수 있거나, 또는 당업자에게 일반적인 다른 방법, 예컨대 소량 분취액의 재결정화를 이용하여 수득될 수 있음.) 혼합물을 50-60℃에서 2-4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 10-15℃로 냉각시키고, 2-4시간 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 필터케이크를 에틸 아세테이트 (18 mL) 및 헵탄 (16 mL)의 혼합물로 세척하였다. 케이크를 감압 하에 65℃ 미만에서 건조시켜 표제 화합물 (27.5 g, 63%)을 회백색 고체로서 수득하였다. HPLC 방법: 칼럼: 키랄팩® AD-H, 5 μm, 4.6 x 250 mm; 용리 모드: 등용매; 이동상: 헥산/이소프로판올/디에틸아민 (92:8:0.1); 유량: 1.0 mL/분; UV 검출: 337 nm. T_R = 22.6분, 100% ee.

실시예 1의 화합물, X선 분말 회절 (XRPD)

CuKa 공급원 (λ=1.54060 Å) 및 반텍(Vantec) 검출기가 장착되어 있으며 35 kV 및 50 mA에서 작동하는 브루커 D4 엔데버(Bruker D4 Endeavor) X선 분말 회절계에서 결정질 고체의 XRPD 패턴을 얻었다. 이 샘플을, 0.009° (2θ)의 스텝 크기 및 0.5초/스텝의 스캔 속도를 사용하고 0.6 mm 발산, 5.28 고정된 산란방지기 및 9.5 mm 검출기 슬릿을 사용하여 4 내지 40°(2θ)에서 스캐닝하였다. 건조 분말을 석영 샘플 홀더에 패킹하고, 유리 슬라이드를 사용하여 평활한 표면을 획득하였다. 결정 형태 회절 패턴을 주위 온도 및 상대 습도에서 수집하였다. 본 경우에, 피크 위치 가변도 ± 0.2 (2θ)는 지시된 결정 형태의 명백한 확인을 방해하지 않으면서 이들 잠재적인 변화를 고려할 것이다. 결정 형태의 확인은, 통상적으로 더 두드러진 피크인, 특징적 피크 (°2θ 단위)의 임의의 독특한 조합을 기준으로 이루어질 수 있다. 주위 온도 및 상대 습도에서 수집된 결정 형태 회절 패턴은 8.853 및 26.774 도 2-세타에서의 NIST 675 표준 피크를 기준으로 하여 조정된다.

표 1:

따라서, 본 발명의 결정질 2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로판-1-올 형태 I은 회절각에 대한 허용오차가 0.2 도인, 표 1에서 기재된 바와 같은 회절 피크 (2-세타 값), 특히 피크 19.94, 10.31 및 20.78에서의 1개 이상의 피크와 조합된 15.06에서의 피크; 보다 특히 15.06에서의 피크를 갖는, CuK_α 방사선을 이용한 X선 회절 패턴을 특징으로 할 수 있다.

실시예 1 (유리 염기 형태 II):

실시예 1의 유리 염기 형태 II는 125 mL 플라스크에서 유리 염기 8.01 g을 메틸 tert-부틸 에테르 100 mL와 혼합하여 갈색 고체 슬러리를 얻음으로써 제조되었다. 샘플을 300 rpm 및 50℃에서 밤새 슬러리화시켰다. 18시간 후에, 샘플을 와인-적색 상청액 하의 회백색 고체의 슬러리이다. 샘플을 증발시켜 대략 절반의 부피로 감소시키고, 회백색 고체를 진공 여과에 의해 회수하였다. 회백색 고체의 생성된 케이크를 65℃ 진공 오븐에서 2시간 동안 건조시켰다. 고체 7.15 g을 회수하였다 (89%).

표 2:

따라서, 본 발명의 결정질 2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로판-1-올 형태 II는 회절각에 대한 허용오차가 0.2 도인, 표 1에서 기재된 바와 같은 회절 피크 (2-세타 값), 특히 피크 16.54, 22.87 및 18.57에서의 1개 이상의 피크와 조합된 13.73에서의 피크; 보다 특히 13.73에서의 피크를 갖는, CuK_α 방사선을 이용한 X선 회절 패턴을 특징으로 할 수 있다.

실시예 2

2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로판-1-올, 메탄술포네이트

2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로판-1-올 (37.5 mg, 0.080 mmol)을 디클로로메탄/메탄올의 1:1 혼합물 (총 1 mL) 중에 용해시켰다. 메탄올 중 메탄술폰산의 0.5 M 용액 (0.16 mL)을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성된 잔류물을 tert-부틸 메틸 에테르로 2회 연화처리하였다. 잔류물을 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (42 mg, 93%)을 수득하였다.

실시예 3

2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로판-1-올, 히드로클로라이드

60℃에서 메틸 tert-부틸 에테르 (771 mL) 중 2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로판-1-올 (25.7 g, 54.51 mmol)의 약간 분홍색 현탁액에 디옥산 중 4.0 M HCl 용액 (16.35 mL, 65.41 mmol)을 첨가하였다. 생성된 현탁액을 60℃로 30분 동안 가열한 다음, 서서히 실온에 도달하게 하였다. 고체가 형성되었고, 이를 질소 불활성 분위기 하에 여과하고, 신속하게 수집하고, 진공 하에 60℃에서 밤새 건조시켜 표제 화합물 (27 g, 98%)을 크림성 고체로서 수득하였다.

실시예 4

2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1R)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로판-1-올

표제 화합물을 제조예 1에서 (1R)-N-벤질-1-페닐-에탄아민을 S 거울상이성질체 대신에 사용한 것을 제외하고는 그의 S 거울상이성질체에 대해서와 본질적으로 동일한 합성 경로를 이용하여 제조하였다.

실시예 5

2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1R)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로판-1-올 메탄술포네이트

표제 화합물을 그의 S 거울상이성질체에 대해 실시예 2에 기재된 바와 본질적으로 동일한 절차를 이용하여 제조하였다.

실시예 6

5-[2-시클로프로필-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-4-일]-N-[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]옥사졸로[5,4-b]피리딘-2-아민

키맥스® 튜브를 3-아미노-6-[2-시클로프로필-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-4-일]피리딘-2-올 (0.7 g, 2.13 mmol) 및 에탄올 (7 mL)로 채웠다. (3S)-3-이소티오시아네이토-1-메톡시-부탄 (0.46 g, 3.2 mmol)을 첨가하고, 플라스크를 밀봉하고, 혼합물을 85℃로 가열하였다. 16시간 후, N,N'-디시클로헥실카르보-디이미드 (0.88 g, 4.26 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 85℃에서 4시간 동안 교반하였다. 이 후, 추가의 N,N'-디시클로헥실카르보디이미드 (0.44 g, 2.13 mmol)를 혼합물에 첨가하였다. 가열을 85℃에서 밤새 계속하였다. 이 후, 추가의 N,N'-디시클로헥실-카르보디이미드 (0.88 g, 4.26 mmol)를 혼합물에 첨가하고, 가열을 85℃에서 4시간 동안 계속하였다. 조 반응물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 정상 크로마토그래피 (120 g 실리카-겔 카트리지, 디클로로메탄 - 에탄올 구배)에 의해 정제하였다. 목적 화합물을 함유하는 분획을 엑스브릿지™ 칼럼 (5 μm, 19 x 100 mm) 및 NH₄HCO₃ 20 mM (pH 9) 중 아세토니트릴 36%의 등용매 프로그램 (5분)을 유량 25 mL/분으로 사용하여 반-정제용 역상 고성능 (LC/MS)에 의해 추가로 정제하여 표제 화합물 (0.15 g, 16%)을 수득하였다.

실시예 7

5-[2-시클로프로필-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-4-일]-N-[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]옥사졸로[5,4-b]피리딘-2-아민 메탄술포네이트

5-[2-시클로프로필-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-4-일]-N-[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]옥사졸로[5,4-b]피리딘-2-아민 (0.090 g, 0.23 mmol)을 디클로로메탄 및 메탄올의 1:1 혼합물 (총 3 mL) 중에 용해시켰다. 메탄올 중 메탄술폰산의 0.5 M 용액 (0.47 mL)을 용액에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 메탄올과 혼합하고, 2회 농축시켜 표제 화합물 (0.111 g, 89%)을 수득하였다.

실시예 8

5-[5-(2,4-디플루오로페닐)-2-(3-메틸옥세탄-3-일)-1H-이미다졸-4-일]-N-[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]옥사졸로[5,4-b]피리딘-2-아민

키맥스® 튜브를 3-아미노-6-[5-(2,4-디플루오로페닐)-2-(3-메틸옥세탄-3-일)-1H-이미다졸-4-일]피리딘-2-올 (2.28 g, 6.36 mmol) 및 에탄올 (18 mL)로 채웠다. (3S)-3-이소티오시아네이토-1-메톡시-부탄 (1.39 g, 9.54 mmol)을 첨가하고, 플라스크를 밀봉하고, 혼합물을 85℃로 가열하였다. 16시간 후, (3S)-3-이소티오시아네이토-1-메톡시-부탄 (700 mg)을 첨가하고, 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 85℃에서 48시간 동안 교반하였다. N,N'-디이소프로필카르보디이미드 (1.04 g)를 첨가하고, 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 85℃에서 3시간 동안 교반하였다. 조 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 정상 크로마토그래피 (120 g 실리카-겔 카트리지, 헥산 - 에탄올)에 의해 정제하였다. 목적 화합물을 3% 에탄올로 용리하여 표제 화합물 (2.61 g, 87%)을 갈색 고체로서 수득하였다.

실시예 9

5-[5-(2,4-디플루오로페닐)-2-(3-메틸옥세탄-3-일)-1H-이미다졸-4-일]-N-[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]옥사졸로[5,4-b]피리딘-2-아민 메탄술포네이트

5-[5-(2,4-디플루오로페닐)-2-(3-메틸옥세탄-3-일)-1H-이미다졸-4-일]-N-[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]옥사졸로[5,4-b]피리딘-2-아민 (0.72 g, 1.54 mmol)을 디클로로메탄/메탄올의 1:1 혼합물 (총 15 mL) 중에 용해시켰다. 메탄올 중 메탄술폰산의 0.5 M 용액 (3.07 mL)을 용액에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 tert-부틸 메틸 에테르로 연화처리하여 표제 화합물 (0.841 g, 97%)을 갈색 고체로서 수득하였다.

실시예 10

[1-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-2-에톡시-1-메틸-에틸]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]시클로프로필]메탄올

메틸 1-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-2-에톡시-1-메틸-에틸]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]시클로프로판카르복실레이트 (0.9 g, 1.99 mmol)를 건조 디에틸 에테르 (20 mL) 및 건조 THF (7 mL) 중에 질소 분위기 하에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. 수소화붕소리튬 (87 mg, 3.99 mmol)을 부분씩 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 나머지 반응물을 pH=1까지 1 N HCl을 혼합물에 실온에서 30분 동안 적가하여 켄칭하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 세척하고, 수성 층을 NaOH로 염기성화시키고 (pH = 8까지), 디클로로메탄으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 헥산-에탄올의 구배를 사용하는 정상 크로마토그래피 (120 g 실리카-겔 카트리지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.56 g, 60%)을 수득하였다.

실시예 11

[1-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-2-에톡시-1-메틸-에틸]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]시클로프로필]메탄올 메탄술포네이트

[1-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-2-에톡시-1-메틸-에틸]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]시클로프로필]메탄올 (0.56 g, 1.19 mmol)을 디클로로메탄/메탄올의 1:1 혼합물 (총 12 mL) 중에 용해시켰다. 메탄올 중 메탄술폰산의 0.5 M 용액 (2.37 mL)을 용액에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 메탄올과 혼합하고, 2회 농축시켜 표제 화합물 (0.64 g, 96%)을 수득하였다.

생물학적 검정

하기 검정은 본 발명의 예시된 화합물이 p38α MAP 키나제의 강력한 억제제이고, p38β MAP 키나제의 강력한 억제제이고, 암 세포에서의 p38 MAP 키나제 신호전달의 강력한 억제제임을 입증한다. 하기 검정은 또한 실시예 1 또는 실시예 1의 염 (실시예 2 또는 3)이 강력한 생체내 활성을 갖고, 단독으로 및/또는 다른 종양용해제와 조합하여 효과적인 항암제이다.

p38α MAP 키나제 효소 활성의 억제

시약 제조:

키나제 반응 완충제는 1 M 4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산 (HEPES) (pH 7.5) 1440 μL, 1 M MgCl₂ 240 μL, 1 M 디티오트레이톨 (DTT) 72 μL, 10% 트리톤(TRITON)® X-100 25 μL, H₂O 43223 μL를 함유하는 원액으로서 제조하였다. 기질 혼합물은 키나제 반응 완충제 2775 μL, 아데노신 트리포스페이트 (ATP) (10 mM) 75.0 μL, EGFR 펩티드 (업스테이트 바이오테크놀로지(Upstate Biotechnology)/밀리포어(Millipore)) (4 mM) 270 μL (9.17 mg/mL) 및 ³³P-ATP 12.5 μL를 배합함으로써 제조하였다. p38α MAP 키나제 효소 원액은 정제된 인간 p38α MAP 키나제의 0.1 mg/mL 용액을 반응 완충제 3000 μL 중에 희석함으로써 제조하였다. 시험 화합물의 원액은 화합물을 100% 디메틸 술폭시드 (DMSO) (10 mM) 중에 용해시킴으로써 생성하였다. 100 μM 원액 희석 플레이트는 10 mM 원액 2 μL 를 20% DMSO 198 μL 중에 희석함으로써 생성하였다. 20% DMSO 중 1:3 희석액은 테칸(Tecan) 액체 취급기를 이용하여 100 μM 원액으로부터 생성하였다.

키나제 검정:

키나제 검정을 위해, 희석된 화합물 5 μL를 반응 플레이트에 옮긴 다음, 효소 원액 10 μL를 첨가하였다 (멀티드롭(MULTIDROP)® 액체 분배기를 이용하여 첨가함). 반응을 시작하기 위해, 기질 혼합물 10 μL를 멀티드롭®으로 첨가하고, 플레이트를 30초 동안 진탕시켰다. 최종 반응 조건은 다음과 같았다: 25 mM HEPES (pH 7.5), 4.25 mM MgCl₂, 1.30 mM DTT, 0.004% 트리톤® X-100, 100 μM ATP, 100 μM EGFR 펩티드, 11.8 nM p38α MAP 키나제 및 4% DMSO. 반응물을 60분 동안 실온에서 인큐베이션한 다음, 5% 아세트산 (새로 제조됨) 75 μL를 첨가하여 정지시켰다. 정지 후에, 반응 혼합물 100 μL를 0.5% 아세트산 100 μL로 미리 세척된 포스포셀룰로스 필터 플레이트 (밀리포어, NAPH)에 옮겼다. 반응 혼합물을 30분 동안 포스포셀룰로스 플레이트 상에서 인큐베이션하고, 진공 매니폴드를 이용하여 여과하고, 0.5% 오르토인산 300 μL로 1회 및 이어서 200 μL로 2회 세척하였다. 세척 단계 후에, 마이크로신트(MICROSCINT)^™20 80 μL를 첨가하고, 방사능을 트리룩스 마이크로베타(Trilux MICROBETA)®에서 계수하였다. IC₅₀ 값을 액티비티 베이스 소프트웨어(Activity Base software) (IDBS)를 이용하여 계산하였다. 모든 예시된 화합물은 0.050 μM 미만의 IC₅₀을 갖는다. 예를 들어, 실시예 1은 IC₅₀ = 0.003 μM을 갖는다. 이 검정은 실시예 1의 화합물이 p38α MAP 키나제의 강력한 억제제임을 입증한다.

p38β MAP 키나제 효소 활성의 억제

시약 제조:

키나제 반응 완충제는 본질적으로 상기 기재된 바와 같이 제조된다. 기질 혼합물은 키나제 반응 완충제 2840 μL, ATP (10 mM) 15.0 μL, EGFR 펩티드 (4 mM) (9.174 mg/ml) 125 μL, ³³P-ATP 18.75 μL를 배합함으로써 제조하였다. p38β MAP 키나제 효소 원액은 상업적 p38β MAP 키나제 (업스테이트 바이오테크놀로지/밀리포어) 0.57 mg/mL 용액 2.25 μL를 반응 완충제 2000 μL 중에 희석함으로써 제조하였다. 시험 화합물의 원액은 본질적으로 상기 기재된 바와 같이 제조하였다.

키나제 검정:

키나제 검정은 본질적으로 p38α MAP 키나제에 대해 기재된 바와 같이 수행하였다. 최종 반응 조건은 다음과 같았다: 25 mM HEPES (pH 7.5), 4.25 mM MgCl₂, 1.30 mM DTT, 0.004% 트리톤® X-100, 20 μM ATP, 65 μM EGFR 펩티드, 0.25 ng/μL p38β MAP 키나제, 4% DMSO. 모든 예시된 화합물은 0.050 μM 미만의 IC₅₀을 갖는다. 예를 들어, 실시예 1은 IC₅₀ = 0.007 μM을 갖는다. 이 검정은 실시예 1의 화합물이 p38β MAP 키나제의 강력한 억제제임을 입증한다.

세포-기반 검정에서 p38 MAP 키나제의 억제

HeLa 세포에서 p38 MAP 키나제 억제는 시험 화합물의 존재 하에 TNFα 자극 후의 p-MAPKAPK2 수준을 측정함으로써 검정하였다. 인간 HeLa 세포 (ATCC)를 10% 태아 소 혈청 (FBS, 깁코(GIBCO))을 함유한 둘베코 변형 이글 배지(Dulbecco's Modification of Eagle's Medium) (DMEM 배지) 중에 배양하였다. 시험 화합물을 최종 DMSO 농도 0.1%를 갖는 세포 배양 배지 중에 1:3 연속 희석물로 제조하였다. 검정을 위해, 웰당 60,000개의 세포를 96 웰 폴리-D-리신 플레이트에서 10% 태아 소 혈청을 함유한 DMEM 배지 100 μL 중에 플레이팅하였다. 세포를 5% CO₂ 인큐베이터 내 37℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 다음 날, 플레이트를 뒤집어 배지를 버리고, DMSO (대조 웰) 또는 시험 화합물 연속 희석물을 함유한 신선한 배지 90 μL를 첨가하였다. 플레이트를 5% CO₂의 존재 하에 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 1시간 후에, 인간 TNFα의 100 ng/mL 용액 (DMEM/FBS 중에 제조됨) 20 μL를 웰에 첨가하여, 최종 농도 18.2 ng/mL를 얻었다. TNFα를 수용하지 않는 최소 신호 대조 웰을 제외한 모든 웰을 TNFα로 처리하였다. 세포를 TNFα와 함께 15분 동안 인큐베이션하여 (37℃/5% CO₂) MAPKAPK-2 (p38 MAP 키나제 기질)의 인산화를 자극하였다.

cELISA 검정을 위해, 플레이트를 뒤집어 배지를 제거하였다. 세포를 실온에서 30분 동안 프러퍼(PREFER)® 고정제 (아나테크 리미티드(Anatech Ltd))를 첨가함으로써 고정시켰다. 세포를 0.1% 트리톤® X-100을 함유한 포스페이트 완충 염수 (PBS) (이 혼합물은 PBST로서 확인됨) 100 μL로 매회 5분 동안 3회 세척하였다. PBST 중 0.6% H₂O₂ 100 μL를 15분 동안 세포에 첨가하여 퍼옥시다제를 켄칭한 다음, 다시 PBST로 매회 당 5분 동안 3회 세척하였다. 5% 소 혈청 알부민 (BSA) 용액을 실온에서 1시간 동안 첨가함으로써 세포를 블로킹하였다. 세포를 PBST로 매회 5분 동안 3회 세척하였다. 세포를 5% BSA를 함유한 PBST 중 p-MAPKAPK-2 Thr334 (셀 시그널링(Cell Signaling))에 대해 지시되는 1차 항체의 1/1000 희석물과 함께 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 세포를 PBST로 매회 5분 동안 3회 세척하였다. 세포를 5% BSA를 함유한 PBST 중 1/1000 희석된 2차 항체인 퍼옥시다제-접합 항-토끼 Ig 항체 (아머샴(Amersham))로 1시간 동안 실온에서 처리하였다. 세포를 PBST로 매회 5분 동안 3회 세척하였다.

신호의 검출을 위해, 슈퍼시그널(SUPERSIGNAL)® ELISA 펨토 키트(femto kit) (피어스(Pierce))를 이용하였다. 동일 부의 펨토 루미날/인핸서 및 퍼옥시다제를 사용 전에 혼합하였다. 혼합물 100 μL를 각 웰에 첨가하고, 마이크로플레이트 혼합기를 이용하여 1분 동안 진탕시켰다. 상대 광 유닛은 빅터(Victor) 1420 발광측정기를 이용하여 결정하였다. 상대 IC₅₀ 값은 액티비티 베이스 소프트웨어 (IDBS)를 이용하여 결정하였다. 모든 예시된 화합물은 0.050 μM 미만의 IC₅₀을 갖는다. 예를 들어, 실시예 1은 IC₅₀ = 0.0016 μM을 갖는다. 이 검정은 실시예 1의 화합물이 암 세포에서 p38 MAP 키나제 신호전달의 강력한 억제제임을 입증한다.

나이브 C57BL/6 마우스에서 p38 MAP 키나제의 생체내 표적 억제 (IVTI)

p38 MAP 키나제의 IVTI는 시험 화합물을 경구 투여한 마우스의 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)에서의 p-MAPKAPK2 (p38 MAP 키나제 기질)에 대한 유동 세포측정 검정을 이용하여 측정하였다.

살아있는 상태:

수컷 C57BL/6 마우스 (6-8주령)를 4개의 군으로 랜덤화하였다. 시험 화합물을 비히클 (1% 히드록시에틸 셀룰로스 (HEC), 0.25% 트윈(TWEEN)® 80, 0.05% 소포제) 0.1 mL 부피로 경구 위관영양에 의해 투여하였다. 대조군 동물에게는 시험 화합물이 없는 비히클 0.1 mL를 투여하였다. 단일 용량 및 용량 반응 연구를 위해, 동물을 투여 2시간 후에 희생시켰다. 시간-경과 연구를 위해, 동물을 상이한 투여 후 시점, 전형적으로 1, 2, 4, 6, 18 및 24시간째에 희생시켰다. 전혈을 EDTA-코팅된 튜브 (아퀴셀(AQUISEL))에 수집하였다.

유동 세포측정법에 의한 PBMC에서의 포스포-MAPKAPK2 검출:

마우스 전혈 100 μL를 각각의 EDTA 튜브 내에 첨가하고, 37℃에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 3종 항체의 혼합물을 염색/세척 완충제 중 하기 희석으로 제조하였다: FITC-접합 래트 항-마우스 Ly-6G mAb (BD 바이오사이언시스(BD Biosciences)) 1:25; APC-접합 래트 항-마우스 CD11b mAb (BD 바이오사이언시스) 1:10; 및 마우스 BD Fc 블록 (BD 바이오사이언시스) 1:100. 아니소마이신 원액 (시그마(Sigma))을 DMSO 중 5 mg/mL의 농도로 제조하였다. 원액 아니소마이신 15 μL를 단일 튜브에 분취하고, 단일 사용을 위해 -20℃에서 보관하였다. 검정 당일에, 아니소마이신을 원액 (5 mg/mL)으로부터 염색/세척 완충제 (BD) 중에 100 μg/mL로 희석하였다. 동일 부피의 희석된 아니소마이신을 항체 혼합물과 혼합하였다.

상기 혼합물 20 μL를 한 튜브당 매 20초씩 각각의 전혈 튜브 내로 첨가하였다. 샘플을 써모믹스에서 부드럽게 진탕시키면서 15분 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 용해/고정 완충제 (BD 바이오사이언시스)를 물 중에 5x 희석하고, 37℃로 가온하였다. 희석된 용해/고정 완충제 (= 1X 작업 농도) 1.6 mL를 이전과 동일한 순서로 한 튜브당 매 20초씩 각 튜브에 첨가하였다. 샘플을 진탕시키면서 10분 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 이어서, 세포를 실온에서 8분 동안 600 x g에서 스핀 다운시켰다. 세포를 3 mL 세척/염색 완충제, PBS 및 5% 탈보충 (열-불활성화) FBS로 1회 세척하였다. 세포 펠릿의 손실을 막기 위해 상청액을 조심스럽게 따라버렸다. 항-포스포-MAPKAPK-2 (Thr334) 항체 (셀 시그널링 테크놀로지, 클론 27B) 및 마우스 Fc 블록을 투과화 배지 B (칼태그(Caltag)) (둘 다에 대해 250 x 희석) 중에 함께 희석하였다. 희석된 항체 혼합물 200 μL를 사용하여 세포를 재현탁시켰다.

이어서, 세포를 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 염색/세척 완충제 3 mL를 첨가하고, 세포를 상기 기재된 바와 같이 스핀 다운시켰다. 세척을 염색/세척 완충제 3 mL로 반복하였다. 염소 F(ab')2 항-토끼 이뮤노글로불린-PE 접합체 (바이오소스(Biosource))를 염색/세척 완충제 (250 x 희석) 중에 희석하였다. 이어서, 희석된 항체 200 μL를 각 튜브에 첨가하였다.

샘플을 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 염색/세척 완충제 3 mL를 첨가하고, 세포를 스핀 다운시켰다. 세척을 염색/세척 완충제 3 mL로 반복하였다. 마지막으로, 세포를 PBS + 1%의 탈보충 (열-불활성화) FBS 250 μL 중에 재현탁시켰다. 샘플을 유동 세포측정법 (FACS칼리버(FACScaliber), BD)에 의해 분석하였다. 측방 및 전방 산란에 의해 생존 단일 세포 집단을 규정한 후에, p-MAPKAPK2의 수준을 CD11b^hiLy6G^-에 의해 규정된 (게이팅된) 단핵구 집단에서 측정하였다

데이터 분석:

단핵구 세포에서의 중앙 형광 강도를 분석하여 p-MAPKAPK2의 수준을 결정하였다. 비히클 대조군 동물로부터, 아니소마이신 자극된 단핵구에서의 p-MAPKAPK2 (pMK2)의 수준 - 비자극된 단핵구에서의 p-MAPKAPK2 (pMK2)의 수준을 이용하여 신호 윈도우를 결정하였다. 시험 화합물에 의한 억제 퍼센트는 하기 반응식을 이용하여 결정하였다:

이 프로토콜을 이용하여, 실시예 1의 화합물의 경우에 70% 억제를 위한 역치 유효 용량 (TED₇₀)은 투여 2시간 후에 5.1 mg/kg이었다. 동일한 검정에서 혈장 중 순환 화합물을 측정함으로써 결정되는 70% 억제를 위한 역치 유효 농도 (TEC₇₀)는 투여 2시간 후에 39.4 ng/ml (0.084 μM)였다. 본 검정은 실시예 1의 화합물이 강력한 생체내 활성을 갖는다는 것을 입증한다.

종양-보유 마우스에서 p38 MAP 키나제의 생체내 억제

인간 종양 세포주인 U87MG를 이용하는 뮤린 이종이식 모델을 종양에서의 p38 MAP 키나제 억제의 평가에 사용하였다.

살아있는 상태:

암컷 무흉선 누드 마우스 (24-26 g, 하를란)에게 동물당 5 x 10⁶개 U87MG 세포를 후방 옆구리에 피하로 주사하였다. 세포를 세포 배양 배지 및 BD 매트리겔(BD MATRIGEL)™ 매트릭스의 1:1 혼합물과 함께 0.2 mL 부피로 주사하였다. 이식 7일 후에 종양을 캘리퍼 및 기록된 데이터를 이용하여 측정하였다. 종양을 그 후 주 2회 측정하고, 종양 크기를 기록하였다. 종양이 대략 250 mm³의 평균 부피에 도달했을 때 (보통 이식 후 10-15일), 동물을 치료를 위해 8-10마리의 군으로 랜덤화하였다. 이어서, 동물에게 단독의 비히클 (1% HEC, 0.25% 트윈® 80, 0.05% 소포제) 또는 시험 화합물을 함유한 비히클 0.2 mL를 경구로 투여하였다. 투여 2시간 후에, 동물을 안락사시켰다. 종양을 절제하고, 완전 프로테아제 및 포스파타제 억제제 칵테일 (로슈(Roche) 표준 완전 정제, EDTA-무함유 프로테아제 억제제의 칵테일. cat# 11873580001)을 갖는 1% 트리톤® X-100의 용액 중에 즉시 균질화시킴으로써 가공하였다. 추가로, 혈액을 노출 분석을 위해 96 웰 플레이트 포맷으로 생성된 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA)-코팅된 튜브 및 혈장에 수집하였다.

종양 용해물에서의 p-MAPKAPK2 검정:

종양 용해물 중 p-MAPKAPK2 수준은 메조스케일 디스커버리(Mesoscale Discovery) (MSD) 포획 ELISA 키트 (2 포스포-MAPKAPK-2 (Thr334))를 이용하여 결정하였다. 용해물 중 단백질의 농도는 바이오라드(BioRad) DC 단백질 검정 키트 (바이오라드)를 이용하여 결정하였다. 각 종양 용해물로부터의 단백질 샘플을 1% 트리톤® X-100의 용액을 사용하여 2 mg/mL로 조정하였다. p-MAPKAPK2의 메조스케일 검출을 위해, 종양 용해물 50 μg을 포획 항체 (= 전체 MAPKAPK2 단백질에 대한 항체)로 미리 스팟팅된 탄소 전극-함유 96-웰 플레이트에 첨가하였다. p-MAPKAPK2 수준은 루테늄-표지된 항 p-MAPKAPK2 검출 항체를 사용하여 프로빙하였다. 검출 항체와의 인큐베이션 후에, MSD 플레이트를 세척한 다음, MSD 판독 완충제를 첨가하였다. 전극 상의 전류의 통과 후에, 전기-화학발광은 MSD 섹터(Sector) 6000 기기를 이용하여, 정량화되는 광의 발생을 야기하였다. 각각의 연구를 위해, 억제 퍼센트는 비히클 대조군에 대해 계산하였고, ANOVA (분산의 통계적 분석을 계산하는 수단) 분석은 통계적 유의성의 결정을 위한 JMP 소프트웨어 패키지를 이용하여 수행하였다. 분석은 각 연구에서의 면역블롯에 의해 확인된다. 이 연구로부터, 실시예 1의 화합물이 종양에서의 p38 MAP 키나제 표적 억제에 대해 2.9 mg/kg의 TED₇₀을 갖고, TEC₇₀이 31.3 ng/mL임이 결정되었다. 이 데이터는 화학식 1의 화합물에 대해 표적 억제 효능이 PBMC에서와 같이 종양에서 유사함을 입증한다.

이종이식 모델에서의 생체내 효능의 결정

A2780 이종이식 모델:

대략 22-25 g의 암컷 CD1 nu/nu 마우스는 찰스 리버 래보러토리즈(Charles River Laboratories)로부터 입수하였다. 1주 적응 후에, 2 x 10⁶개 A2780 인간 난소 암종 세포를 세포 배양 배지 및 BD 매트리겔™ 매트릭스의 1:1 혼합물 중 0.2 mL 부피로 각 마우스의 후방 옆구리에 피하로 주사하였다. 종양 크기는 주 2회 캘리퍼 측정에 의해 모니터링하였다. 평균 종양 크기가 150 mm³에 도달했을 때, 동물을 10개의 군으로 랜덤화하였다. p38 MAP 키나제 억제제 치료는 랜덤화 후에 시작하였다. 실시예 2를 1% HEC, 0.25% 트윈® 80, 0.05% 소포제 (HEC/트윈®) 중 0.2 mL 부피로 경구로 투여하였다. 화합물을 1, 3 및 10 mg/kg의 용량으로 투여하였다. 투여를 4일 지속, 3일 정지 스케줄로 1일 3회 (TID) 수행하였다. 3회 투여 주기를 수행하였다. 종양 부피를 투여 기간 동안 주 2회 모니터링하고, 효능 (종양 성장 억제)을 비히클 대조군 (n=10 동물)과 비교하여 모니터링하였다. 마지막 p38 MAP 키나제 억제제 투여 1, 2 및 8시간 후에, 혈장을 동물로부터 채취하여 동물에서의 화합물의 순환 수준을 결정하였다.

OPM-2 다발성 골수종 이종이식 모델:

20-22 g 체중의 암컷 CB-17 SCID 마우스를 타코닉(Taconic)으로부터 입수하였다. 1주 적응 후에, 마우스를 2.5 그레이의 선량으로 조사하였다. 조사 후 24시간 내에, 마우스에서 1.0 x 10⁷개 OPM-2 세포를 세포 배양 배지 및 BD 매트리겔™ 매트릭스의 1:1 혼합물 중 0.2 mL 부피로 후방 옆구리에 피하로 주사하였다. 종양 크기는 주 2회 캘리퍼 측정에 의해 모니터링하였다. 종양 크기가 100-150 mm³에 도달했을 때, 동물을 용량 군으로 랜덤화하였다. 화합물 치료는 랜덤화 후에 시작하였다. 실시예 2를 1% HEC, 0.25% 트윈® 80, 0.05% 소포제 (HEC/트윈®)의 0.2 mL 부피로 경구로 투여하였다. 화합물을 15 및 30 mg/kg의 용량으로 투여하였다. 투여를 치료 28일 동안 1일 2회 (BID) 수행하였다. 종양 부피를 투여 기간 동안 주 2회 모니터링하고, 효능 (종양 성장 억제)을 비히클 대조군 (n=10 동물)과 비교하여 모니터링하였다.

수니티닙과 조합된 786-O 이종이식 모델:

24-26 g 체중의 무흉선 누드 마우스를 하를란 랩스(Harlan Labs)로부터 입수하였다. 1주 적응 후에, 마우스에게 5 x 10⁶개 786-O 인간 신세포 암종 세포를 세포 배양 배지 및 BD 매트리겔™ 매트릭스의 1:1 혼합물 중 0.2 mL 부피로 후방 옆구리에 피하로 주사하였다. 종양 크기는 주 2회 캘리퍼 측정에 의해 모니터링하였다. 종양 크기가 150-200 mm³에 도달했을 때, 동물을 8-10마리의 군으로 랜덤화하였다. p38 MAP 키나제 억제제 치료는 랜덤화 후에 시작하였다. 화합물을 1% HEC, 0.25% 트윈® 80, 0.05% 소포제 (HEC/트윈®)의 0.2 mL 부피로 경구로 투여하였다. 투여를 단독으로 또는 10 mg/kg 또는 20 mg/kg의 수니티닙과 조합하여 15 mg/kg으로 1일 2회 (BID) 수행하고, 또한 동일한 비히클을 경구로 BID 투여한다. 종양 부피를 주 2회 모니터링하고, 효능 (종양 성장 억제)을 비히클-치료된 동물과 비교하여 모니터링하였다.

이 연구로부터의 데이터는 p38 MAP 키나제 억제 (15 mg/kg BID)가 20 mg/kg로 투여된 수니티닙의 항종양 효능을 향상시킴을 입증한다. 상승작용의 통계적 평가는 로그 종양 부피 대 시간 대한 분산 분석의 2-원 반복 측정을 이용하여 수행하였다. 이 분석은 p38 MAP 키나제 억제제 15 mg/kg BID 및 수니티닙 20 mg/kg BID 사이에 전체적으로 유의한 상승작용 (p> 0.0001)을 입증하였다.

본 발명의 화합물은 바람직하게는 다양한 경로에 의해 투여되는 제약 조성물로서 제제화된다. 가장 바람직하게는, 이러한 조성물은 경구 또는 정맥내 투여를 위한 것이다. 이러한 제약 조성물 및 이를 제조하는 방법은 당업계에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY (D. Troy, et al., eds., 21^st ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2005)]을 참조한다.

본 발명의 화합물은 일반적으로 넓은 투여량 범위에 걸쳐 효과적이다. 예를 들어, 1일 투여량은 정상적으로 약 14-155 mg의 범위에 포함된다. 일부 경우에, 상기 범위의 하한치 미만의 투여량 수준이 더 적절할 수 있는 반면에, 다른 경우에는 더 많은 용량이 임의의 유해한 부작용을 야기하지 않고 사용될 수 있으며, 따라서 상기 투여량 범위는 어떠한 방식으로든지 본 발명의 범위를 제한하고자 함은 아니다. 실제로 투여되는 화합물의 양은 치료할 상태, 선택된 투여 경로, 투여되는 실제 화합물 또는 화합물들, 개별 환자의 연령, 체중 및 반응, 및 환자 증상의 증증도를 비롯한 관련 상황에 비추어, 의사에 의해 결정될 것이라는 점이 이해될 것이다.

Claims

하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.

상기 식에서,
X는 메톡시에틸 또는 에톡시메틸이고;
Q는 시클로프로필, 2-메틸-프로판올-2-일, 3-메틸옥세탄-3-일, 또는 1-히드록시메틸-1-시클로프로필이다.
제1항에 있어서, 2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로판-1-올인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항 또는 제2항에 있어서, 15.06°2θ에서의 피크, 및 19.94°2θ, 10.31°2θ 및 20.78°2θ에서의 1개 이상의 피크 (2θ +/- 0.2°)를 포함하는 X선 분말 회절 패턴 (Cu 방사선, λ = 1.54060 Å)을 특징으로 하는 결정질 2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로판-1-올인 화합물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 13.73°2θ에서의 피크, 및 16.54°2θ, 22.87°2θ 및 18.57°2θ에서의 1개 이상의 피크 (2θ +/- 0.2°)를 포함하는 X선 분말 회절 패턴 (Cu 방사선, λ = 1.54060 Å)을 특징으로 하는 결정질 2-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸-프로판-1-올인 화합물.
제1항에 있어서, 5-[2-시클로프로필-5-(2,4-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-4-일]-N-[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]옥사졸로[5,4-b]피리딘-2-아민인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항에 있어서, 5-[5-(2,4-디플루오로페닐)-2-(3-메틸옥세탄-3-일)-1H-이미다졸-4-일]-N-[(1S)-3-메톡시-1-메틸-프로필]옥사졸로[5,4-b]피리딘-2-아민인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항에 있어서, [1-[5-(2,4-디플루오로페닐)-4-[2-[[(1S)-2-에톡시-1-메틸-에틸]아미노]옥사졸로[5,4-b]피리딘-5-일]-1H-이미다졸-2-일]시클로프로필]메탄올인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제2항에 따른 화합물 또는 염을 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제와 함께 포함하는 암 치료를 위한 제약 조성물.
제8항에 있어서, 수니티닙을 추가로 포함하는 제약 조성물.
제2항에 따른 화합물 또는 염을 포함하는, 암 치료를 위한 제약 조성물.
제10항에 있어서, 암이 난소암인 제약 조성물.
제10항에 있어서, 암이 다발성 골수종인 제약 조성물.
제2항에 따른 화합물 또는 염을 포함하는, 암 치료에서 수니티닙과 동시, 개별 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 제약 조성물.
제13항에 있어서, 암이 신암인 제약 조성물.
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