KR101499696B1 - 젓갈 유래 엔테로코쿠스속 미생물 및 이를 이용하여 s-아데노실-l-메티오닌을 대량 생산하는 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 SAM을 대량 생산하는 신규한 젓갈 유래 미생물 및 이를 이용하여 SAM을 대량 생산하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 신규 젓갈 유래 엔테로코쿠스속 미생물은 SAM을 대량 생산하는 성질을 가지며, 생산된 SAM은 다양한 기능 및 활성이 있다. 따라서, 대량 생산한 SAM은 이를 함유한 다양한 약학 또는 식품 조성물로 활용될 수 있을 것이다.

Description

젓갈 유래 엔테로코쿠스속 미생물 및 이를 이용하여 S-아데노실-L-메티오닌을 대량 생산하는 방법{ENTEROCOCCUS SP. MICROORGANISMS FROM SALTED FISH AND MASS PRODUCTION METHOD OF S-ADENOSYL-L-METHIONINE USING THE SAME}
본 발명은 젓갈 유래 엔테로코쿠스속 미생물 및 이를 이용하여 S-아데노실-L-메티오닌을 대량 생산하는 방법에 관한 것이다.
S-아데노실-L-메티오닌(SAM)은 1952년에 Cantoni에 의해 발견된 물질로 대부분 생물체 내 조직과 체액 중에 존재하며, 5-메틸히드로폴레이트(5-MTHF)로 인한 메틸화 반응에서 메틸기의 공여자로서의 역할을 담당한다 (Shelly, C. L., 2000, Int. J. Biochem. Cell. Bio., 32, 391-395). SAM은 생체 내 필수아미노산 중 하나인 L-메티오닌이 ATP를 소모하여 메티오닌 아데노실전달효소(methionine adenosyltransferase)에 의해서 생성되는 중요한 생체조절물질이다 (Wang, W., Kramer, P. M., Yang, S., Pereira, M. A. and Tao, L. H. (2001). J. Chromatography B. 762, 59-65). 대부분이 간에서 생합성되며 그 양은 하루에 8 g 정도이고, 수많은 생화학적 대사에 관여한다 (Horikawa, J,. S., K, Shimizu, H. O. and Tsukada, K. (1990). J. Biol. Chem. 23, 13683-13686).
SAM은 유럽과 미국 등 서구 지역에서는 기능성을 인정받았으며 세포 내 폴리아민 합성뿐 아니라 호르몬, 신경전달물질, 핵산, 인지질, 세포막 등의 합성과 활성화 및 대사 등의 과정에서 필수적인 물질로 보고되어 있다. 또한 신경전달물질과 포스파티딜콜린, 포스파티딜세린 등의 인지질과 같이 중요한 뇌 화합물들의 제조에 필요하며 뇌 기능 향상에 효과가 있는 것으로 알려져 있다. SAM의 생체 내 대사 반응은 메틸기전이반응(transmethylation), 황전이반응(transsulfuration), 그리고 폴리아민화반응(polyamination)으로 구분된다. 메틸화반응에서 SAM의 메틸기는 DNA, 인지질, 단백질과 같은 각종 수용체에 메틸기를 공여한다. 시스테인의 생합성과정에서는 황화에 관여하는 황전이반응의 역할을 하게 되는데, 황전이반응에서 SAM은 여러가지 효소 반응을 거쳐 세포 내 주요한 항산화 물질인 타우린(taurine)과 글루타치온(glutathione)의 전구체가 되는 시스테인으로 전환된다 (Porter, C. W., and Sufrin, J. R. (1986). Anticancer Res. 6, 525-542). 또한, 정상세포 생장에 꼭 필요한 물질인 폴리아민의 합성에 SAM이 이용된다. 스퍼민(spermine)과 폴리아민스퍼미딘(polyaminspermidine)의 생합성에서 프로폴리아민기에 메틸기를 공여한다 (Lee, N. K., E. H. Jeon, H. J. Lee, I. J. Cho, and Y. T. Hahm. (2006). J. Korean. Soc. Appl. Biol. Chem. 49(4), 276-280).
SAM에는 다양한 약리효과가 알려져 있다. 알코올성 간질환에 있어서 임상적으로 간기능 회복에 기여하고, 섬유근육통증후군 환자에게는 근육 피로와 경직성 등을 감소시키며, 우울증 환자에는 66 % 정도 의학적 개선이 이루어진다고 보고된바 있다 (Koning, B. (1987). Am J. Med. 20, 89-94, Lieber, C. S. (1999). J. Hepatol. 30, 1155-1159). 현재까지 SAM에 대한 연구는 우울증 치료제, 관절염, 간경화 등에 대한 효과가 중심을 이루고 있으며, 미국에서는 건강식품으로 인정받아 400 mg이라는 하루 섭취량이 권장되고 있다. 우리나라 전통 발효식품인 청국장, 젓갈 등에도 SAM이 함유되어 있다.
본 발명에서는 생리학적 기능성물질인 SAM을 다량 생성하는 젓갈 유래 균주 미생물을 분리하여 선별해 동정하고, SAM을 과량 생성하며 식중독균과 같은 유해균에 대한 항균 활성을 통해 프로바이오틱스(probiotics)로서의 기능을 갖는 균주를 발굴함을 목적으로 한다.
본 발명에서는 젓갈류에서 분리한 SAM 고생산성 미생물 균주를 선별 및 동정하였다. 그 결과 SAM을 다량으로 생산할 수 있는 신규 엔테로코쿠스속 미생물 균주를 발견하여 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
본 발명의 신규 미생물은 SAM을 대량 생산하는 성질을 가지며, 생산된 SAM은 다양한 기능 및 활성이 있다. 따라서, 대량 생산한 SAM은 이를 함유한 다양한 약학 또는 식품 조성물로 활용될 수 있을 것이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 다만, 본 발명은 다양한 형태로 변경되어 구현될 수 있으며, 여기에서 설명하는 구현예에 한정되는 것은 아니다.
일 측면에서, 본 발명은 젓갈에서 새롭게 분리 및 동정된 신규 균주 엔테로코쿠스 두란스 J6-9(Enterococcus durans J6-9, 수탁번호 KCCM11446P)에 관한 것이다.
본 발명자들은 다양한 젓갈류로부터 수많은 미생물 균주를 분리한 후 SAM 생성량 등을 평가하여 최적의 미생물을 선별하였으며, 선별된 미생물을 동정하여 엔테로코쿠스 두란스가 포함되어 있음을 확인하였다. 이를 J6-9 균주라고 명명하고, 2013년 8월 21일자로 한국미생물보존센터에 기탁번호 KCCM11446P로 기탁하였다.
다른 측면에서, 본 발명은 엔테로코쿠스 두란스를 이용하여 S-아데노실-L-메티오닌(SAM)을 생산하는 방법에 관한 것이다. 엔테로코쿠스 두란스는 엔테로코쿠스 두란스 J6-9인 것이 바람직하다.
본 발명의 방법에 따라 대량 생산된 SAM은 이를 유효성분으로 함유하는 다양한 용도의 약학 조성물 또는 건강기능식품으로 이용될 수 있다.
약학 조성물 또는 건강기능식품의 용도는 이미 알려진 SAM의 용도 또는 앞으로 알려질 SAM의 새로운 용도를 포함한다. 예를 들어, 우울증, 간 질환, 골관절염, 알츠하이머병 등을 들 수 있으나, 이에 제한된 것은 아니다.
본 발명에 따른 약학 조성물은, 각각 통상적인 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 멸균 주사용액, 사전 충전식 주사(pre-filled syringe) 용액제의 형태 또는 동결건조(lyophilized)된 형태로 제형화할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
제형화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조될 수 있다. 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 유효 성분에 적어도 하나 이상의 부형제, 예컨대, 전분, 칼슘 카르보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 혼합하여 제조할 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에도 마그네슘 스테아레이트, 탈크와 같은 윤활제도 사용될 수 있다.
경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데, 통상적으로 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 다양한 부형제, 예컨대 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 함께 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제 등이 포함된다.
본 발명의 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 증상의 정도, 질병의 종류, 약물 형태, 투여 경로 및 기간에 따라 적절하게 선택될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 건강기능식품은 식품용으로 허용되는 하나 이상의 첨가제를 추가로 함유할 수 있다. 식품용으로 허용되는 하나 이상의 첨가제는 특별히 제한되지 않으며 식품에 배합될 수 있는 통상적인 성분, 예를 들어 물, 풍미제, 향미제, 착색제, 안정화제, 방부제, 알코올, 탄산화제, 과육, 증점제, 비타민, 식물 추출물, 유기산, 미네랄, 영양제 등일 수 있다.
본 발명의 건강기능식품의 형태는 특별히 제한되지 않으나, 음료, 껌, 차, 과자, 비타민 복합체 및 건강 보조식품으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 형태일 수 있다.
본 발명에서 제시된 균주는 장 내 정장작용에 관여할 수 있다. 실시예에서는 균의 발효 특성을 알아보기 위해 10 가지 균주의 기질 이용성에 대해 연구한 결과 균주에 따라 발효할 수 있는 기질의 종류가 다양해 당을 이용할 수 있는 효소를 가진 균주인 것으로 보이며, 식품 섭취를 통해 생체 내에 얻을 수 있는 다양한 당을 발효할 수 있을 것으로 판단된다.
본 발명의 젓갈 유래 균주들은 담즙 내성과 항균 활성이 우수하여 향후 발효 식품의 종균으로 사용할 경우, 식품 내에서 SAM을 섭취할 수 있는 동시에 프로바이오틱스로서의 영향도 기대할 수 있다. 또한 약산에 대한 내성으로 인해 공복시 보다 만복시 높은 pH를 갖는 위의 특성을 이용해 후식 식품 개발에 미생물을 이용할 수 있을 것으로 보이며, 산에 대한 내성을 보완하기 위해 캡슐 등 균주 코팅을 이용한 식품에 적용도 가능할 것이다.
하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐 실시예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
시료의 준비
SAM 생성 증진균의 선발을 위하여 젓갈 총 18 종을 대상으로 자연적으로 존재하는 균주를 분리하여 균총을 분석하였다. 연구에 사용된 시료는 2012년 4월에 충청남도 강경에서 구매한 젓갈 18종(토하젓, 자리돔젓, 꼴뚜기젓, 청어알젓, 가리비젓, 조개젓, 키조개젓, 갈치젓, 전어젓, 갈치속젓, 까나리액젓, 벤댕이젓, 아가미젓, 새우젓, 멸치젓, 오징어젓, 낙지젓, 명란젓)이다.
시료는 멸균 환경에서 10 배(0.85% NaCl 225 ㎖ + 시료 25 g) 희석한 후 스토마커(speed level 5, 1 분)로 균질화하였다. 그 후 총균, 젖산균, 혐기균, 효모 및 곰팡이 등을 분리하고자 각각의 선택 배지에 도말한 후 배양하였다. 미생물 분리 수집은 생성된 미생물의 군집 형태에 따라 분리하였다. 서로 다른 선택 배지에서 성장한 미생물을 확인하였다. 미생물 분리는 총균수 분석을 위하여 tryptic soy agar(TSA, Merck사 제조)를 사용하였다. 또한 총 젖산균 분석을 위하여 pH를 5.5로 조절한 MRS agar를 사용하였다. 젖산균의 세부 분석으로 m-LBS(락토바실러스속), KF-Streptococcus(엔테로코쿠스속 및 페디오코쿠스속) 및 PES(류코노스톡속)를 사용하였다. 또한 효모 및 곰팡이 분석을 위하여 타르타르산으로 pH를 조절한 Potato dextrose agar(PDA, Difco사 제조)를 사용하였다. 선택 배지의 종류와 분리 균총을 하기 표 1에 정리하였다.
Figure 112013093544665-pat00001
18 종의 젓갈을 이용하여 균총을 분석한 결과를 하기 표 2에 나타내었다. 균은 모양과 색상, 특징별로 그룹화하였고 총 169 개의 균총을 분리하였다.
Figure 112013093544665-pat00002
균주의 선별
SAM 생성량 확인
상기 표 1의 6 종의 선택 배지를 이용해 각 배지마다 선별된 균주를 중복되지 않게 분리한 169 개의 균주들의 SAM 생성능을 알아보기 위해 영양 배지인 TSB에 접종하여 35℃에서 24 시간 내지 48 시간 동안 108 내지 109 CFU/㎖이 되도록 배양한 후, 원심분리(4000 rpm, 4℃, 10 분)하여 균체를 제거하고 상등액인 배양액을 수거해 분석하였다.
SAM은 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 이용하여 하기 표 3에 기재된 조건으로 그 양을 분석하였다. 균주를 배양한 후 원심분리한 시료는 0.45 ㎛ 시린지 필터로 여과하였으며 -20℃에서 냉동 보관하면서 분석용 시료로 사용하였다. SAM의 표준 물질은 Sigma-aldrich사에서 구입하여 사용하였으며, 분석에 사용된 암모늄 아세테이트와 메탄올 등의 모든 시약은 HPLC용 시약을 사용하였다.
Figure 112013093544665-pat00003
18 종류의 젓갈로부터 분리한 균주 169 종에 대한 SAM 생성량을 측정하였다. 젓갈의 주된 발효 균주로 알려진 바실러스속은 TSA 배지를 이용한 전체 미생물 분리하는 방법으로 하였고, 젓갈에서의 다양한 에코시스템을 가진 균주를 발굴하고 적용하고자 유산균을 포함하여 곰팡이나 효모를 선택 배지를 이용해 분리하고자 하였으나 우세균의 대부분이 바실러스속과 엔테로코쿠스속으로 확인되었다.
최대로 SAM을 생성한 균주는 조개젓에서 분리한 J6-9번 균주와 키조개젓에서 분리한 J7-5번 균주로 각각 1.41 mM과 1.37 mM의 SAM을 생산하였다. 이 외에도 토하젓(J1-9), 청어알젓(J4-3), 가리비젓(J5-9), 키조개젓(J7-10), 갈치젓(J8-3, J8-4), 전어젓(J9-8), 아가미젓(J13-4) 등의 총 11개 분리 균주에서 1.00 mM 수준의 SAM을 생산하는 균주를 확인하였다.
169 개의 균주 중 각 젓갈별로 유래한 균 중 SAM 생성이 뛰어난 10 종의 균주를 선발하였다. 균주의 특성 조사 및 동정이 이루어져야 할 것으로 판단하여 169 개 균주 중 SAM 생성량이 높은 10 종의 균주를 ㈜마크로젠에 의뢰해 16S rRNA의 염기서열을 구하였고 NCBI의 blast search를 통하여 동정하여 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다. 바실러스속의 9 개 균주들과 1 개의 엔테로코쿠스속의 균주가 동정되었다.
Figure 112013093544665-pat00004
당 발효능 분석
분리 균주들 중 엔테로코쿠스속의 J6-9 균주는 API 20 Strep system kit(프랑스 bioMereux사 제조)를 사용하였고, 바실러스속의 9 개의 균주들은 API 50 CHB system kit(프랑스 bioMereux사 제조)를 사용하여 균주의 당 발효능을 분석하였다. API kit의 매뉴얼에 따라 희석한 균을 각 균주에 맞는 배지에 옮긴 후 37℃, 24 시간 내지 48 시간 동안 배양하여 각각의 당 발효 유무를 색 변화를 통해 확인하였다.
엔테로코쿠스 두란스속에 속하는 균주 J6-9는 API 20 Strep kit 내에 있는 10 가지 탄수화물 중 리보오스, 락토오스, 트레할로오스, 라피노오스에 대한 발효능을 보였다.
하기 표 5 및 6에 나타난 바와 같이, 바실러스속에 속하는 나머지 9 가지 젓갈 균주는 각자 균에 따라 발효할 수 있는 기질의 종류가 달랐지만 글루코오스, 프룩토오스, 만노오스, 글리세롤, 수크로오스, 트레할로오스, 말토오스, N-아세틸-글루코사민 기질은 강력하게 발효하였다. 표 5 및 6에서 강력하게 발효할수록 "+" 개수가 많게 표현하였다. 균주마다 발효 가능한 기질이 아주 큰 차이를 보이지 않지만 많은 당을 이용할 수 있는 효소를 가진 균주인 것으로 보이며, 식품 섭취를 통해 생체 내에 얻을 수 있는 다양한 당을 발효할 수 있을 것으로 판단된다.
Figure 112013093544665-pat00005
Figure 112013093544665-pat00006
내산성 및 내담즙성 확인
젓갈에서 분리한 10 가지 균의 프로바이오틱스 특성 중 산에 대한 내성과 담즙에 대한 내성을 알아보기 위해 실험을 진행하였다.
pH에 대한 내성을 알아보기 위하여 TSB에 균주 활성화(108 내지 109 CFU/㎖)한 후, PBS 또는 0.85 % NaCl에 세척(washing)하여 원심분리기로 원심분리 후 시료로 사용하였으며, pH 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0 및 5.5로 TSA 배지 제조 후(대조구는 pH 7.0 - 배지 pH), TSA에 점적하여 18 시간 내지 24 시간 후의 콜로니의 변화를 측정하였다.
위 내 공복시에는 사멸율이 높을 것이나 음식의 다량섭취에 따른 만복시에는 pH 상승으로 생존율이 높을 것인바, 식사 후에 투여하면 장에서 SAM을 생성할 수 있는 생균 효과가 높을 것으로 생각된다.
마찬가지로 담즙에 대한 균주의 내성을 시험하기 위하여 oxgall을 첨가하지 않은 것과 첨가한 배지에서 각 균주의 내성을 확인하였다. TSB에 균주 활성화 (108 내지 109 CFU/㎖)한 후, PBS 또는 0.85 % NaCl에 세척하여 원심분리기로 원심분리 후 시료로 사용하고, 0.3 %의 oxgall을 첨가한 배지와 무첨가배지에 세척한 균주를 1 % 접종하여 TSA에 점적하여 18 시간 내지 24 시간 후의 콜로니의 변화를 측정하였다. 대조구 배지에 비해 콜로니의 성장과 모양, 광택 등에 대한 전반적인 관찰을 통해 산성 또는 담즙 내성을 판단하였다. 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다.
Figure 112013093544665-pat00007
상기 표 7에 나타낸 바와 같이, 약산에서의 내성을 갖는 균주들로 보이며, 특히 J1-9와 J7-10 균은 pH 5.0에서도 대조구인 중성의 pH와 유사하게 자라는 것으로 확인되었고, 나머지 균주들은 pH 5.5부터 자라는 것을 알 수 있었다.
담즙 내성에 대해서는 10 가지 균 모두 대조구와 비교하였을 때 비슷한 생장을 보인 것으로 볼 때 담즙에 대한 내성을 강력하게 가진 균이라고 판단된다.
항균 활성
에셰리키아 콜리(Escherichia coli) O157:H7, 엔테로코쿠스 페칼리스(Enterococcus faecalis), 살모넬라 콜레라수이스(Salmonella choleraesuis), 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 및 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)의 5 종의 지표 균주(indicator)를 저해하는 균의 활성을 Soft agar method를 이용하여 시험하였다. TSB에 균주 활성화(108 내지 109 CFU/㎖) 후 TSA에 점적하여 12 시간 인큐베이터에 배양한 후 0.75 %의 agar 농도를 갖는 soft agar를 10 ㎖ 제조하여, agar가 굳기 전인 50℃에서 105 CFU/㎖이 되도록 지표 균주를 agar에 첨가하여 균을 키운 TSA에 고르게 분주해 4 시간 단위로 균의 콜로니 주변의 투명한 환을 관찰하였다. 그 결과를 하기 표 8에 나타내었다.
Figure 112013093544665-pat00008
soft agar method를 통해 10 개의 균 중 J7-1과 J8-3의 두 균주를 제외하고 5 가지 지표 균주 중 일부에 대한 항균 활성이 확인되었다. 특히, 엔테로코쿠스 페칼리스 균에 대해 J4-3균이 콜로니 주변에서 클리어 존(clear zone)이 비교적 넓게 분포해 강력한 항균활성을 가진 것으로 보이며, 살모넬라 콜레라수이스 균에 대해서는 J7-5 균주가 강력하게 억제하였다. 다섯 균주의 지표 균주를 모두 억제하는 균은 없었으나 적어도 4 개 균주에 대해 억제하는 젓갈 균은 두가지 균주(J1-9, J7-10)로 여러 지표 균주에 대한 억제능을 확인할 수 있었다.
한국미생물보존센터 KCCM11446P 20130821

Claims (3)

  1. 엔테로코쿠스 두란스 J6-9(Enterococcus durans J6-9, 수탁번호 KCCM11446P).
  2. 엔테로코쿠스 두란스 J6-9(Enterococcus durans J6-9, 수탁번호 KCCM11446P)를 이용하여 S-아데노실-L-메티오닌(SAM)을 생산하는 방법
  3. 삭제
KR1020130123580A 2013-10-16 2013-10-16 젓갈 유래 엔테로코쿠스속 미생물 및 이를 이용하여 s-아데노실-l-메티오닌을 대량 생산하는 방법 KR101499696B1 (ko)

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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11785244B2 (en) 2016-04-29 2023-10-10 Intellectual Discovery Co., Ltd. Method and apparatus for encoding/decoding video signal

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20010042606A (ko) * 1998-04-10 2001-05-25 미즈노 마사루 아미딘 화합물
KR20120083795A (ko) * 2011-01-18 2012-07-26 씨제이제일제당 (주) Ｌ-아미노산의 생산능이 향상된 미생물 및 이를 이용하여 ｌ-아미노산을 생산하는 방법

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20010042606A (ko) * 1998-04-10 2001-05-25 미즈노 마사루 아미딘 화합물
KR20120083795A (ko) * 2011-01-18 2012-07-26 씨제이제일제당 (주) Ｌ-아미노산의 생산능이 향상된 미생물 및 이를 이용하여 ｌ-아미노산을 생산하는 방법

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Food Sci. Biotechnol., Vol.17, pp.184-178(2008.) *
Food Sci. Biotechnol., Vol.17, pp.184-178(2008.)*

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11785244B2 (en) 2016-04-29 2023-10-10 Intellectual Discovery Co., Ltd. Method and apparatus for encoding/decoding video signal
US12028546B2 (en) 2016-04-29 2024-07-02 Intellectual Discovery Co., Ltd. Method and apparatus for encoding/decoding video signal

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