KR101499266B1

KR101499266B1 - 6-알콕시알킬 에스트라디올 유도체 및 사용법

Info

Publication number: KR101499266B1
Application number: KR1020097013710A
Authority: KR
Inventors: 제임스 야르거
Original assignee: 엔디씨, 엘엘씨
Priority date: 2006-11-30
Filing date: 2007-11-29
Publication date: 2015-03-05
Also published as: EP2099460A4; EP2099460A2; CN101594874A; KR20090101914A; MX342437B; JP2010511625A; ES2604079T3; CA2670773A1; JP5290189B2; WO2008067450A3; DK2099460T3; AU2007325092B2; EP2099460B1; WO2008067450A2; BRPI0721050A2; AU2007325092A1; CA2670773C; CN101594874B; MX2009005803A

Abstract

본 구조를 보유하는 화합물: R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇및 R₉는 독립적으로 수소, C₁ 내지 C₆ 알킬 또는 치환된 알킬, 할로겐, 설페이트, 또는 글루쿠로나이드 모이티(moieties)이고;

기호는 단일 또는 이중 결합을 나타내고,

기호가 이중 결합일 때 3번 또는 17번 위치에 케토기를 형성하고, 이로 인해 R₆또는 R₇은 각각 존재하지 않고; --- 는 10번 위치에서 결합의 존재 또는 부재(不在)를 나타내며;

기호는 입체 화학과 상관없이 임의의 종류의 결합을 나타낸다. 또한, 화합물은 거울이성질체, 다른 입체화학적 이성질체, 수화물, 용매화합물, 호변체(tautomers) 및 이의 약학적으로 수용 가능한 염을 포함한다.

에스트라디올, 에스트로겐, 고형암

Description

6-알콕시알킬 에스트라디올 유도체 및 사용법{6-ALKOXYALKYL ESTRADIOL DERIVATIVES AND METHODS OF USE}

관련 출원의 전후 참조

본 발명은 2006년 11월 30일에 출원된 미국 가출원 번호 제60/867,980호의 우선권을 주장한다. 또한, 본 출원은 2005년 9월 30일에 출원된 미국 가출원 번호 제60/722,204호의 우선권을 주장하는, 현재 계류 중인 2006년 10월 2일에 출원된 미국 출원 번호 제11/541,987호의 일부계속출원이다. 상기 모든 출원의 교시는 전문이 본원에 참고 인용된다.

기술 분야

본 발명은 화학식(Ⅰ)인 6-알콕시알킬 에스트라디올 화합물 및 (R 또는 S) 6 하이드록시메틸- 또는 (R 또는 S) 6-메틸옥시메틸- (8 R 또는 S, 9S, 13 R 또는 S, 14 S, 17 R 또는 S)-13-메틸-7,8,9,11,12,14,15,16,17-데세하이드로사이클로펜타 [a] 페난트렌-3, 17-디올 및 이의 약학적으로 수용가능한 염, 또는 이의 전구약물 화합물을 제조하는 방법 및 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 암과 같은 증식증의 치료 및 진단 적용을 위해 생체외 및 생체내에 이러한 화합물을 함유하는 제약 조성물에 관한 것이다.

특히, 종양 및 1차 악성 종양{본원에서는 암(들)}과 같은 세포 증식성 질환은 이웃하는 조직을 침범하고 신체에서 먼 기관에 전이되는 경향때문에 문제가 된다. 종양 중 특히 고형 종양의 치료에 가장 빈번하게 사용되는 방법은 수술, 방사선 테라피, 약물 테라피, 및 이의 결합을 포함한다.

매년 백만 종의 암이 진단되고, 매년 미국에서 50만 이상의 생명을 빼앗기 때문에, 이러한 증상에 대항하는 새로운 치료 양상에 대한 수요가 증가한다. 전립선, 폐 및 결장은 남자들 사이에서 가장 일반적인 암이고; 유방, 결장 및 폐 암은 여자들 사이에서 가장 일반적인 암이다.

최근에 이러한 증상 관리에 상당한 발전이 있었다. 암의 임상적 관리에서 성공한 일 경우는 1차 유방암의 조기 진단 및 이제는 가능한 치료 선택이다. 에스트로겐의 활동을 차단하는, 유효하고 비독성인 항에스트로겐제의 도입이 유효한 것으로 밝혀졌다.

타목시펜은 전이성 질병의 치료 및 보조요법 그리고 유방암의 호르몬 치료의 제일선의 요법이 되는 첫 번째 선택성 에스트로겐 수용기 조절물 중 우선적인 하나 이다. 타목시펜은 DNA에 에스트로겐 결합 요소로 에스트로겐이 결합하는 것을 저해하는 에스트로겐 수용기의 에스트로디올 결합의 경쟁 억제제이다. 또한, 유방암과같은 호르몬성 질병에 영향을 미칠 수 있는 에스트로겐의 특히 국소적 생산을 차단하기 위한 아로마타제 억제제(aromatase inhibitors)의 사용에 대한 관심이 증가해왔다.

아로마타제(CYP19)는 예비- 및 폐경기 이후 여성에게 안드로겐을 에스트로겐으로 전환하는 주요 효소로 기술된다. 아로마타제 억제를 통한 에스트로겐의 상실은 호르몬 의존 유방암에 걸린 폐경기 이후의 일부 환자에게 유효하고 선택적인 치료로 기술된다. (아로마신으로 판매되고, 화학적으로 6-메틸렌안드로스타-1,4-디엔-3,17-디온으로 기술되는) 엑스메스탄은 비가역적인 스테로이드계 아로마타제 불활성화제로 작용한다. 이는 아로마타제 효소용 가성 기질(false substrate)로 작용하고, 이의 불활성화를 초래하는 중간체의 활성 부위에 비가역적으로 결합하는 중간체로 처리되는 것으로 믿어진다. 미국 특허 번호 제4,808,616호 및 제4,904,650호는 본원에 전문이 참고 인용되고, 엑스메스탄과 같은 6-알킬이데난드로스타-1,4-디엔-3,17-디온 유도체 및 이의 제조 방법을 기술한다. 미국 특허 번호 제4,876,045호는 안드로스타-1,4-디엔-3,17-디온의 6-메틸렌 유도체의 제조 방법을 기술한다. 미국 특허 번호 제4,990,635호는 안드로스타-1,4-디엔-3,17-디온의 6-메틸렌 유도체를 제조하는 방법을 개시한다.

엑스메스탄을 제조하는데 유용할 수 있는 중간체의 제조는 미국 특허 번호 제3,274,176호에 개시된다. 독일 특허 DD 258,820는 6-하이드록시메틸-안드로스타- 1,4-디엔-3,17-디온이 1,3-디피롤이디노안드로스타-3,5-디엔-17-온을 통해 안드로스타-1,4-디엔-3,17-디온으로부터 제조되는 것을 개시한다.

동시 계류 중인 2005년 1월 14일에 출원된 국제 특허 번호 PCT/US2005/001,248은 또한 엑스메스탄을 제조하는데 유용한 중간체의 제조를 개시한다. 엑스메스탄의 구조는 하기와 같다.

참고문헌[쉬네더 외의 "스테로이드성 3,5-디엔아민과 포름알데히드 반응 과정", Helvetica Chimica Acta (1973), 56(7), 2,396-2,404]은 하기 화합물을 개시한다:

(상기 화학식에서,

기호가 이중 결합을 나타낼 때는, 케토기를 나타내고 R₆은 존재하지 않고,

기호가 단일 결합을 나타낼 때는, R₆은 수소이다(즉, 알콜기 ). 본 발명의 화합물과 다르게, 쉬네더 화합물은 에스트로이드성 테스토스테론 또는 디하이드로테스토스테론 변형을 포함하지 않다)

트리-하이드록시가 치환된 에스테란(estranes)의 유도체는 타다니어 외의 미국 특허 번호 제3,377,363호에 개시되고, 본 화합물의 방향족 고리에 3개의 하이드록시 치환체가 개시되지 않는다.

드 푸나리 외의 미국 특허 번호 제5,914,324호는 고혈압 및 심부전용 6개의 하이드록시 및 옥시 안드로스테인 유도체를 개시한다. 고비니 외의 미국 특허 번호 제6,384,250호는 (E,Z) 3-(2-아미노에톡시이미노)-안드로스테인-6,17-디온의 제조시 6번째 위치에 하이드록시 및 케톤 치환체를 개시한다. 이 화합물은 심부전 치료용이다. 6번째 위치에서 알킬 하이드록시 치환체의 효과는 개시되지 않는다.

참고문헌[타네바움 외의 "에스트로겐 및 프로게스테론 수용기의 리간드 결합 영역의 결정학상 비교", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Biochemistry, Vol. 95, pp 5,998-6,003]은 ER 수용기의 매카니즘을 개시하고, 3-하이드록시 치환체가 있는 방향족 고리를 포함하는 에스트라디올이 ER 리간드 결합 영역과 잘 결합함을 주지한다. 19개의 메틸 치환체가 없는 평면 방향족이 우세한 것이 기술된다. 상기에 따르면, 암을 치료하는 새로운 유효제를 식별할 필요성이 여전히 존재한다.

발명의 개요

본 발명은 화학요법 화합물, 조성물 및 이의 사용 및 제조 방법에 관한 것으로, 상기 기술된 것을 포함해서 종래 기술의 다양한 결함 및 단점을 극복한다.

본 발명의 관점은 화학식 Ⅰ 및 화학식 Ⅱ에 관한 것이다.

[화학식 I]

(상기 화학식에서, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇,R₈및 R₉는 독립적으로 수소, C₁ 내지 C₆ 알킬 또는 치환된 알킬, 할로겐, 설페이트, 또는 글루쿠로나이드 모이티(moieties)이고;

기호는 단일 또는 이중 결합을 나타내고,

기호가 이중 결합일 때 3번 또는 17번 위치에 케토기를 형성하고, 이로 인해 R₆또는 R₇은 각각 존재하지 않고; --- 기호는 10번 위치에서 결합의 존재 또는 부재(不在)를 나타내며;

기호는 입체 화학과 상관없이 임의의 종류의 결합을 나타낸다. 또한, 화합물은 거울이성질체, 다른 입체화학적 이성질체, 수화물, 용매화합물, 호변체(tautomers) 및 이의 약학적으로 수용 가능한 염을 포함한다)

본 발명은 포유류 대상(예컨대, 인간 환자)에 암을 요법적으로 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 관점에서, 포유류 대상내에서 종양 또는 암 세포 성장을 억제하는 방법이 제공된다. 이러한 방법에서, 세포는 화학식 (Ⅰ) 또는 (Ⅱ)의 화합물 또는 약학적으로 수용 가능한 거울이성질체, 다른 입체화학적 이성질체, 수화물, 용매 화합물, 호변체, 또는 이의 염에 접촉되거나 노출된다. 본 발명의 특정 비제한 양태에서, 화학식 (Ⅰ) 또는 (Ⅱ)의 화합물이 본원에 기술된 암 상태를 요법적으로 치료하는데 사용된다. 본 발명의 방법의 또 다른 특정 비제한 양태에서, 화학식 (Ⅰ) 또는 (Ⅱ)의 화합물을 함유하는 조성물이 본원에 기술된 암 상태를 요법적으로 치료하기 위해 사용된다.

본 발명의 화합물은 호르몬 및/또는 에스트로겐 관련 활성도에 직접 또는 간접적으로 영향을 미칠 수 있는 임의의 종양을 치료하는데 사용될 수 있고, 이의 종류로는 유방암, 췌장암, 폐암, 결장암, 전립선암, 난소암뿐만 아니라, 뇌암, 간암, 비장암, 신장암, 림프절암, 소장암, 혈구암, 뼈암, 위암, 자궁내막암, 고환암, 난소암, 중추신경계암, 피부암, 두경부암, 식도암, 또는 골수암; 백혈병, 급성 전골수성 백혈병, 림프종, 다발성 골수종, 척수형성이상증, 골수증식 질환, 또는 난치성 빈혈과 같은 혈액암과 관련된 고형 종양을 포함하되 어떠한 방법으로도 제한되지는 않는다.

또한, 본 발명의 화합물은 포유류 대상의 결합계 요법적 암 치료에 사용될 수 있다. 이러한 방법은 화학치료, 방사선 요법, 유전자 요법, 호르몬 요법 및 종래 기술에서 공지되는 다른 암 요법과 같은 다른 부가 암 요법과 함께 화학식 (Ⅰ) 또는 (Ⅱ) 화합물의 투여를 포함할 수 있다.

본 발명의 임의의 화합물은 약물, 전구약물 또는 심지어 활성 대사 산물의 형태로 포유류 대상으로 투여되는 것으로 예상된다. 본 발명의 처리방법에서, "투여"라는 용어는 상세하게 기술된 화합물 또는 상세하게 기술되지 않을 수 있는 화합물로 다양한 조건에서 처리하는 것을 포함하되, 환자에게 투여된 후 생체내에서 기술된 화합물로 전환되서 요법 활성도를 나타낸다.

본 발명의 또 다른 관점은 화학식 (Ⅲ)의 전구약물을 환자에게 제공하는 단계를 포함하는 암세포의 성장을 억제하는 방법에 관한 것이다.

(상기 화학식에서, R₅는 메틸 또는 수소이고; 화학식 (Ⅳ),(Ⅴ),(Ⅵ),(Ⅶ),(Ⅷ)의 대사산물을 형성하며, 화학식 (Ⅱ)의 대응물 중 R₃, R₄, R₅, R₇, R₈ 중 임의의 것은 메틸 또는 수소일 수 있다). 이러한 대사산물은 예컨대 하기 도시되는 구조를 포함할 수 있다:

A - NDC - 1088

[화학식 IV]

B - NDC - 1099

A - NDC - 1033

[화학식 V]

B - NDC -1022

A- NDC - 1110

[화학식 VI]

B - NDC - 1044

A - NDC - 1066

[화학식 VII]

B - NDC - 1055

A

[화학식 VIII]

B

본 발명의 다른 목적, 특징, 이익 및 이점은 하기 특정 양태의 기술 및 요약으로 분명해 질 것이고, 다양한 화학요법 화합물, 방법 및/또는 작업 방식에 대한 지식을 보유하는 당업자는 쉽게 분명해질 것이다.

발명의 자세한 설명

달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적이고 과학적인 용어는 당업자에게 통상적으로 이해되는 동일한 의미를 가진다. 본 발명은 하기 기술되는 의미를 가지는 것으로 이해되야 한다. 본원에서 언급되는 모든 간행물 및 특허문서는 이의 전문이 참고 인용된다. 달리 명시되지 않는 한, 특정 화합물에 대한 참고문헌은 라세믹 및 다른 혼합물을 포함하는 모든 이성질 형태를 포함한다. 달리 명시되지 않는다면, 특정 화합물에 대한 참고문헌은 또한 본원에 기술되는 이온성, 염, 용매화합물(예컨대, 수화물), 보호형태(protected forms), 전구약물, 및 이의 다른 입체이성질체를 포함한다.

활성 화합물의 이에 상응하는 염, 예컨대, 약학적으로 수용가능한 염을 제조, 정제 및/또는 다루기에 통상적이거나 바람직할 수 있다. 약학적으로 수용가능 한 염의 예는 참고문헌[Berge et al., 1977, "Pharmaceutically Acceptable Salts," J. Pharm. Sci., Vol. 66, pp. 1-19] 및 본원에 기술된다.

본 발명의 항증식 화합물은 암치료에 적용되고, 그러므로 본 발명은 추가로 항암제를 제공한다. 본원에 사용되는 "항암제"라는 용어는 암을 치료하는 화합물에 관한 것이다(즉, 암 치료에 유용한 화합물). 항암 효과는 하나 이상의 매카니즘을 통해 생길 수 있고, 세포 증식 조절, 신생혈관억제(inhibition of angiogenesis)(새로운 혈관의 형성), 전이 억제(이의 기관으로부터 종양의 전파), 침입 억제(이웃하는 정상 구조로의 종양 세포의 전파), 또는 아포토시스의 촉진(프로그램화된 세포사)을 포함하되, 이에 제한되지는 않는다.

본 발명은 추가로 요법으로 인간 또는 동물 신체의 치료 방법으로 사용하기 위한 활성 화합물을 제공한다. 이러한 방법은 활성 화합물의 치료학적으로 유효한 양을 바람직하게는 추가로 본원에 기술되는 약제 조성물의 형태로 이러한 대상에 투여하는 단계를 포함할 수 있다.

본원에서 상태를 치료하는 문맥에서 사용되는 "치료" 또는 "요법"이라는 용어는 일반적으로 인간 또는 비인간인 동물(예컨대, 수의적 적용)인 포유류 대상의 치료 및 요법에 관한 것으로, 일부 소기의 요법적 효과는 예컨대 상태의 진행 억제가 달성되고, 진행율의 감소, 진행 속도의 정지, 상태의 개선, 및/또는 상태의 치료를 포함한다. 예방법으로서의 치료가 또한 포함된다. 치료는 결합 치료 및 요법을 포함하고, 두 가지 이상의 치료 또는 요법이 예컨대 순차적으로 또는 동시에 결합된다. 치료 및 요법의 예는 화학요법(예컨대 약물, 항체(예컨대, 면역요법), 전 구약물(예컨대, 인산 유도체 및 포스피네이트를 포함하는 보호기를 3번 또는 17번 위치와 같은 적합한 위치에서 사용하고, 광역학적인 요법, GDEPT, ADEPT 등에 사용되는 다른 화합물)을 포함하는 활성제의 투여); 수술; 방사능 요법; 및 유전자 요법을 포함하되, 이에 제한되지는 않는다.

본원에서 사용되는 "입체화학적 이성질체" 용어는 원자가 공간에서 기인되는 방법으로만 각각 다른 이성질체를 언급한다. 본 발명에서 특히 중요한 두 가지의 입체이성질체는 두 개의 이성질체가 각각 거울상인지 아닌지에 따라서 거울이성질체(enantiomer) 및 부분입체이성질체(diastereomers)이다. 바람직한 양태에서, 청구된 제형은 분리, 용해 및 "부분적으로 다른 이성질체가 없는" 화합물을 함유한다.

본원에 사용되는 "치료학적으로 유효한 양"이란 용어는 활성 화합물 또는 일부 소기의 치료 효과를 산출하고, 적당한 이득/위험 비율에 적합한 유효한 활성 화합물을 포함하는 재료, 조성물 또는 1회 투약 형태의 양을 의미한다.

"환자"라는 용어는 포유동물, 바람직하게는 인간을 포함하는 동물을 의미한다.

"환자 범위"라는 용어는 증식성 장애, 암 또는 종양으로 고통받는 환자의 일부 또는 특정 부류, 및 일부 예에서는 전체 환자 부류를 의미한다. 이러한 범위의 예는 폐영역, 위장 영역, 유방 영역, 신장 영역뿐 아니라 맥관 및 순환 시스템, 암 조직을 포함하는 다른 신체상 영역, 조직, 림프구, 수용기, 장기 및 이와 유사물이다. "환자 범위"는 예컨대, 개시된 화합물 및 조성물로 치료된 부류를 포함한다. " 환자 범위"는 외부적일 수 있더라도, 바람직하게는 내부적이다.

"조직"이라는 용어는 일반적으로 특정 기능을 수행할 수 있는 특화 세포를 의미한다. "조직"이라는 용어는 예컨대, 막, 혈액 또는 장기와 같은 개별 세포 또는 세포 집합체(aggregate)나 다발(plurality)을 의미할 수 있다. 또한, "조직"이라는 용어는 비정상적인 세포 또는 비정상적인 세포 다발을 포함한다. 전형적인 조직은 유방 세포를 포함하는 유방 조직, 내피 및 상피를 포함하는 막 조직, 라미나(laminae), 간질성 조직 및 종양을 포함하는 결합 조직을 포함한다.

화합물

본 발명은 화학식 (Ⅰ)-(Ⅱ)의 화학요법 화합물에 관한 것이다:

[화학식 I]

[화학식 II]

(상기 화학식에서, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈ 및 R₉는 독립적으로 수소, C₁ 내지 C₆의 알킬 또는 치환된 알킬, 할로겐, 설페이트, 또는 글루쿠로나이드 모이티이고;

기호는 단일 또는 이중 결합을 나타내고,

기호가 이중 결합일 때 3번 또는 17번 위치에서 케토기를 형성하고, 이로 인해 R₆또는 R₇은 각각 존재하지 않고; --- 는 10번 위치에서 결합의 존재 또는 부재(不在)를 나타내며;

기호는 입체 화학과 상관없는 임의의 종류의 결합을 나타낸다. 또한, 화합물은 거울이성질체, 다른 입체화학적 이성질체, 수화물, 용매화합물, 호변체(tautomers) 및 이의 약학적으로 수용 가능한 염을 포함한다)

화학식 Ⅰ의 양태에서, R₅, R₆, R₇, R₉는 수소 원자, 메틸 또는 Cl이고; R₁, R₂는 수소 또는 메틸이고; R₃, R₄는 C₁내지 C₆ 알킬 또는 치환된 알킬, 할로겐이며

는 알콜기에 상응하는 단일 결합이다. 또 다른 양태에서, C₆ 탄소에서의 입체화학은 S 또는 R 거울 이성질체 또는 부분입체이성질체를 포함한다.

본 발명의 양태적 화합물은 제약 조성물에 사용될 수 있다. 이러한 조성물은 상기에서 기술된 것에서 선택된 하나 이상의 화합물을 포함할 수 있다. 특정 양태에서, 이러한 조성물은 약학적으로 수용가능한 담체 성분을 함유할 수 있다. 제한 없이, 이러한 조성물은 화합물의 라세믹 혼합물을 함유할 수 있다. 특정 양태에서, 이러한 화합물은 S 및 R 거울 이성질체, 바람직하게는 다른 이성질체가 실질적으로 없는 분리 및 정제 형태로 존재하고, R₅ 또는 R₇은 H, C₁ 내지 C₆알킬 또는 치환된 알킬, 및 할로겐에서 선택될 수 있다.

본 발명의 화합물은 비대칭 중심을 보유할 수 있고, 라세메이트, 라세믹 혼합물 또는 (S)6-메틸옥시메틸(8S, 9S, 13S, 14S, 17S)-13-메틸-7,8,9,11,12,14,15,16,17-데세하이드로사이클로펜타 [a] 페난테렌-3,17-디올; (R)6-메틸옥시메틸(8R, 9S, 13R, 14S, 17R)-13-메틸-7,8,9,11,12,14,15,16,17-데세하이드로사이클로펜타 [a]페난테렌-3,17-디올(NDC-1022); 또는 (S)6-메틸옥시메틸(8R, 9S, 13R, 14S, 17R)-13-메틸-7,8,9,11,12,14,15,16,17-데세하이드로사이클로펜타 [a] 페난테렌-3,17-디올(NDC-1033)과 같은 개별적인 부분입체이성질체 또는 거울 이성질체로 존재할 수 있다.

본 발명의 양태는 6번이 치환된 에스트라디올의 R 또는 S 거울 이성질체, R 또는 S 부분입체이성질체의 제조에 관한 것이다. 이러한 이성질 형태의 제조(예컨대, 비대칭 합성) 및 분리(예컨대, 분별 결정 및 크로마토그래픽 장치)는 일반적으로 당해 기술에서 공지되거나 본원에서 교시되는 방법을 채택함으로써 쉽게 수득된다. 이러한 계통적 분류법은 공동 계류 중인 미국 특허 시리얼번호 11/541,987에 개시되고, 이의 교시는 전문이 본원에 참고인용된다.

본 발명의 또 다른 양태는 에스트라디올의 6-하이드록시메틸 또는 6-메틸옥시메틸 유도체를 제조하는 방법에 관한 것이다. 에스트라디올 유도체를 제조하는 반응식은 하기 반응식 1에 제시된다. 이러한 방법은 하기 단계로 인해 LIDAKKOR/THF/포름알데히드와 에스트라디올의 t-부틸디메틸실리 유도체의 반응으로 6-하이드록실화된 화합물을 수득하는 단계를 포함할 수 있다: (ⅰ) 가수분해로 에스트라디올의 6-하이드록시메틸 유도체, NDC-1066을 수득; 및/또는 (ⅱ) 디메틸설 페이트로 처리 후 가수분해로 에스트라디올의 6-메틸옥시메틸 유도체, NDC-1033을 수득하는 단계. NDC-1088은 C-17 하이드록시 위치에서 NDC-1033의 추가적인 산화로 수득될 수 있다.

대안적인 접근으로, 본 발명의 화합물은 또한 하기 단계를 포함하는 방법으로 제조될 수 있다: (1) 에스트라디올 화합물을 보호하는 단계, (ⅱ) 보호된 에스트라디올 화합물을 벤질 6번 위치에서 LIDAKOR/부틸-리튬/디이소프로필아민/포타슘 tert-아밀레이트로 아실화하는 단계, (ⅲ) 6번 알데히드 위치를 리튬 알루미늄 하이드라이드로 환원시키는 단계, (ⅳ) 에스트라디올 화합물의 보호 영역을 비보호하는 단계. 에스트라디올 유도체를 제조하는 반응식은 하기 반응식 2에 제시된다.

본 발명의 화합물은 하기 반응식에서 도시되는 방법으로 합성될 수 있다:

본 발명의 화합물을 제조하는 방법.

본 발명의 화합물을 제조하는 대안적인 방법.

본 발명에 따른 다양한 메틸옥시알킬 유도체는 알킬화제의 선택으로만 오직 제한된다. 이러한 유도체는 당업자에게 본 발명으로 제조될 수 있는 것으로 이해될 것이고, 본원에 기술된 종류의 합성 절차 또는 이의 직접적인 수정을 통해 가능하고, 이러한 수정은 당업자에게 이해될 것이다. 따라서, 제한 없이, 다양한 C₁ 내지 C₆ 알킬 및 치환된 알킬(예컨대, C₁ 내지 C₆선형, 치환된 선형, 분지쇄형 및 치환된 분지쇄형 알킬, 이러한 치환체는 당업자에게 이해될 수 있을 것이다) 시약이 이에 상응하는 메틸옥시알킬 유도체를 제조하기 위해 본원에 기술된 바와 같이 사용될 수 있다.

본 발명은 포유류 대상(예컨대, 인간 환자)의 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 이 관점에서, 종양 또는 암 세포 성장을 억제하는 방법이 제공된다. 이러한 방법에서, 세포는 화학식 (Ⅰ) 또는 약학적으로 수용 가능한 염 또는 이의 수화물에 노출 또는 접촉된다:

[화학식 I]

(상기 화학식에서, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈ 및 R₉는 독립적으로 수소, C₁ 내지 C₆ 알킬 또는 치환된 알킬, 할로겐, 설페이트, 또는 글루쿠로나이드 모이티이고;

기호는 단일 또는 이중 결합을 나타내고,

기호가 이중 결합일 때는 3번 또는 17번 위치에 케토기를 형성하고, 이로 인해 R₆또는 R₇은 각각 존재하지 않고; --- 기호는 10번 위치에서 결합의 존재 또는 부재(不在)를 나타내며;

기호는 입체 화학과 상관없이 임의의 종류의 결합을 나타낸다. 또한, 본 화합물은 거 울이성질체, 다른 입체화학적 이성질체, 수화물, 용매화합물, 호변체(tautomers) 및 이의 약학적으로 수용 가능한 염을 포함한다)

이러한 방법은 호르몬 및/또는 에스트로겐 관련 활성도에 직접 또는 간접적으로 영향을 받을 수 있는 임의의 종양을 치료하는데 사용될 수 있고, 유방암, 췌장암, 폐암, 결장암, 전립선암, 난소암뿐만 아니라, 뇌암, 간암, 비장암, 신장암, 림프절암, 소장암, 혈구암, 뼈암, 위암, 자궁내막암, 고환암, 난소암, 중추신경계암, 피부암, 두경부암, 식도암, 또는 골수암; 백혈병, 급성 전골수성 백혈병, 림프종, 다발성 골수종, 척수형성이상증, 골수증식 질환, 또는 난치성 빈혈과 같은 혈액암과 관련된 고형 종양을 포함하되, 어떠한 방법으로도 제한되지는 않는다.

또한, 다양한 암 상태를 치료하기 위해 본 발명의 화합물을 투여하는 것은 화학요법, 방사선요법, 유전자요법, 호르몬요법 및 당해 기술자에게 공지되는 다른 암 요법과 같은 다른 부가적인 암 요법과 결합한 화학식 (Ⅰ) 화합물의 투여를 포함할 수 있다. 다른 항암제 또는 화학요법제와 현재 기술된 화합물의 결합은 본 발명의 범위내에 있다. 이러한 작용제의 예는 참고문헌[Cancer Principle and Practice of Oncology by V. T. Devita and S. Hellman (editer), 6^th edition(Feb. 15, 2001), Lippincott Williams & Wilkins Publishers]에서 발견될 수 있다. 당해 분야에서 보통의 기술을 보유하는 의사, 수의사 또는 임상의는 작용제의 결합이 관련 암 및 약물의 특정 특성을 기반으로 유용할 수 있다는 것을 분별할 수 있을 것이다. 이러한 항암제는 하기를 포함한다: 에스트로겐 수용기 조절물, 안드로겐 수 용기 조절물, 레티노이드 수용기 조절물, 세포독성제, 항증식제, 프레닐-단백질 전이 효소 억제제, HMG-CoA 환원 효소 억제제, EHV 단백질 분해 효소 억제제, 역 전사 효소 억제제, 아로마타즈 억제제, 및 신생혈관형성(angiogenesis) 억제제를 포함한다.

본 발명의 적어도 일 관점에서, 발명자는 하기 표 Ⅰ에 본 발명의 화합물을 예증한다:

R₁, R₂, R₃, R₄: 독립적으로 H, C₁-C₆ 알킬, 치환된 알킬, 또는 할로겐

R₅, R₇: H, C₁-C₆ 알킬, 치환된 알킬, 설페이트, 또는 글루쿠로나이드

R₆:

이 단일 결합일 때는, H, C₁-C₆ 알킬, 또는 치환된 알킬, 설페이트, 또는 글루쿠로나이드이고;

이 이중 결합일 때는 존재하지 않는다

R₆:

이 이중 결합일 때는 존재하지 않는다

R₆:

이 이중 결합일 때는 존재하지 않는다

표 Ⅰ의 바람직한 화합물은 화학물 15 및 20을 포함한다. 본 발명의 적어도 일 관점은 이러한 바람직한 화합물, 이의 사용 방법 및 제조 방법에 관한 것이다.

본 발명의 적어도 일 관점에서, 발명자는 하기 표 Ⅱ의 본 발명의 화합물을 예증한다:

R₅: H, C₁-C₆ 알킬, 치환된 알킬, 설페이트, 또는 글루쿠로나이드

R₆: H, C₁-C₆ 알킬, 또는 치환된 알킬, 설페이트, 또는 글루쿠로나이드

R₈:

이 단일 결합일 때는, H, C₁-C₆ 알킬, 또는 치환된 알킬이고;

이 이중 결합일 때는 존재하지 않는다

R₈:

이 이중 결합일 때는 존재하지 않는다

R₈:

이 이중 결합일 때는 존재하지 않는다

_{* R8이 메틸일 때는 NDC-1077; ** R8이 메틸일 때는 NDC-1011; *** R8이 메틸일 때는 NDC-1110; *** R8이 메틸일 때는 NDC-1044.}

표 Ⅱ의 바람직한 화합물은 화합물 89, 90, 98, 및 128을 포함한다. 본 발명의 적어도 일 관점은 바람직한 화합물, 이의 사용 방법 및 제조 방법에 관한 것이다.

본원에 기술된 암 상태의 치료를 위한 일 특정 비제한예는 하기 화학식 (Ⅸ)을 보유하는 화학식 (Ⅰ)의 화합물을 포함한다.

A-NDC-1033

[화학식 IX]

B-NDC-1022

본원에 기술된 암 상태의 치료를 위한 또 다른 특정 비제한예는 하기 화학식 (Ⅹ)을 보유하는 화학식 (Ⅰ)의 화합물을 사용하는 것을 포함한다:

A-NDC-1066

[화학식 X]

B-NDC-1055

또한, 상기 활성 화합물은 예컨대, 후보 호스트(host)가 해당 화합물로 치료해서 이로운지를 측정하기 위해 시험관내 검사의 일부로 사용될 수 있다. 본 발명의 임의의 활성 화합물은 또한 예컨대 다른 활성 화합물, 다른 항증식제, 다른 항염증제 등을 식별하기 위한 검사의 표준으로 사용될 수 있다.

본 발명의 적어도 일 관점에서, 후보 화합물은 이의 에스트로겐 수용기 길항 활성도로 평가됐다. 화합물이 에스트로겐 수용기의 길항제인지 아닌지에 대한 평가는 당해 기술에서 공지된 다양한 방법론으로 수행될 수 있다. 본 출원에서, 이러한 수용력은 본원에 기술되는 스크리닝 방법에 따라 발광 효소 결합 검사를 수행함으로써 측정됐다.

본 발명의 이 관점의 보다 바람직한 양태에서, 에스트로겐 수용기의 결합 수행력은 일시적으로 CV-1 세포를 ER(α) 또는 ER(β)에 추가로 ERE-tk-발광 효소 수용기 구성물인 발현 구성물로 감염시킴으로써 평가됐다. 이후에 이 세포를 대조군 및 후보군으로 나누고, 대조군은 아무런 치료를 받지 않거나 에스트라디올 단독(1 nM)으로 처리되고, 후보군은 에스트라디올에 추가로 다양한 농도의 엔디시(Endece) 화합물로 처리됐다. 16-24 시간후 세포는 상업적으로 입수 가능한 검사 키트를 사용해서 발광 효소의 활성도가 획득되고 측정됐다.

본 발명의 또 다른 관점에서, 후보 화합물의 반(half) 최대 억제 농도 또는 IC₅₀은 약물 효능 및 생체내 사용시 잠재적인 처방 계획을 평가하기 위해 측정됐다. 당해 기술에서 보통의 기술을 보유한 자는 통상적으로 공지된 방법론을 사용해서 이러한 정보를 쉽게 확인할 수 있다. 당해 기술에서 잘 기술된 것과 같이, IC₅₀은 어떠한 생물학적 공정을 50%까지 억제하는데 얼마나 많은 특정 물질/분자가 필요한지를 측정하고 나타낸다. 이러한 경우에, 후보 화합물의 IC₅₀은 대조군 세포와 비교해서 50%의 반응을 유도하는 농도로 측정됐다.

본원에서 공지되는 본 발명의 화합물의 염은 비독성의 "약학적으로 수용 가능한 염"을 의미한다. 그러나, 다른 염이 본 발명에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 수용 가능한 염의 제조에 유용할 수 있다. 본 발명의 화합물이 염기 그룹(basic group)을 함유할 때, "약학적으로 수용 가능한 염"의 용어에 포함되는 염은 유리 염기(free base)를 적합한 유기산 또는 무기산과 반응시킴으로써 일반적으 로 제조되는 비독성 염을 의미한다. 대표적인 염은 당해 기술에서 공지되는 임의의 이러한 염을 포함한다. 본 발명의 화합물이 산성 모이티를 보유하면, 이의 적합한 약학적으로 수용 가능한 염은 알칼리 금속 염, 예컨대, 나트륨 또는 칼륨 염; 알칼리성 토금속 염, 예컨대, 칼슘 또는 마그네슘 염; 및 적합한 유기 리간드, 예컨대, 4차 암모늄 염으로 생성된 염을 포함할 수 있다.

인간 환자와 같은 포유류 대상을 치료하기 위해서, 본 발명의 하나 이상의 화합물의 유효량 또는 이의 약학적으로 수용 가능한 염이 암 세포 또는 타겟 종양 성장에의 노출 또는 접촉을 촉진시키기 위해서 포유류 대상에 투여된다. 유효한 투약 형태, 투여 방법 및 투약량은 경험적으로 측정될 수 있고, 이러한 결정사항을 제조하는 것은 당해 기술내에 있다. 투약량은, 사용된 특정 화합물의 활성도 및/또는 질병 상태의 진전, 투여 경로, 화합물의 배설속도, 환자의 신장 및 간장 기능, 치료의 지속, 대상에 투여되는 임의의 다른 약물의 본질, 의학 기술에서 널리 공지되는 나이, 사이즈 및 이와 같은 인자에 따라 달라질 것이라는 것을 의사, 수의사 또는 임상자에 의해 이해된다. 본원에 기술되는, 본 발명의 화합물은 정제, 캡슐(각각은 지속 방출(sustained release) 또는 시간당 방출 제형(timed release formulation)을 포함한다), 알약, 분말, 미분화 조성물, 과립, 연금약액(elixers), 팅크(tinctures), 현탁액, 시럽 및 에멀전과 같은 구강 투약 형태로 투여될 수 있다. 다른 점에서, 본 발명의 화합물은 정맥내(환약 또는 주입액), 내성검사, 국소적(예컨대, 시각적 눈물), 피하, 근육내 또는 경피성(예컨대, 패치) 형태로 모두 제약 기술분야의 당업자에게 공지되는 형태를 사용해서 투여될 수 있다. 다시, 당 업계의 의사, 수의사 또는 임상자는 상태의 진행을 방지, 대항 또는 정지시키는데 필요한 약물의 유효량을 쉽게 결정하고 처방할 수 있다.

본 발명의 구강 투약은 지시된 효과를 위해 사용될 때 약 0.01 mg/몸무게 kg/일(mg/kg/일) 내지 약 100 mg/kg/일, 바람직하게는 0.01 내지 10 mg/kg/일, 그리고 가장 바람직하게는 0.1 내지 5.0 mg/kg/일의 범위일 것이다. 구강 투여의 경우, 본 조성물은 치료받는 환자의 증상에 따른 투약량의 조절을 위해 바람직하게는 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0, 2.5, 5.0, 10.0, 15.0, 25.0, 50.0, 100 및 500 mg의 활성 성분을 함유하는 정제의 형태로 제공된다. 약제는 통상적으로 약 0.01 mg 내지 약 500 mg의 활성 성분, 바람직하게는 약 1 mg 내지 약 100 mg의 활성 성분을 함유한다. 정맥내로, 가장 바람직한 투약량은 일정한 속도의 투여시 약 0.1 내지 약 10 mg/kg/분의 범위일 것이다. 본 발명의 화합물은 하루에 한번의 투약량으로 투여될 수 있거나, 하루 총 투약량이 하루에 두번, 세번, 또는 네번에 나누어서 투여될 수 있다.

본원에 기술되는 바, 본 발명의 화합물은 포유류 대상의 치료 범위를 향상시킬 다른 항암제 또는 다른 작용제와 혼합해서 사용될 수 있다. 이러한 혼합물의 개별 성분들은 요법의 과정 중에 다른 시간대에 따로따로 투여되거나, 이러한 요법이 필요한 환자 또는 이러한 환자 부류에 나눠서나 단일 혼합물 형태로 동시에 투여될 수 있다. 그러므로, 본 발명은 동시 또는 교차 처리 방식을 포함하는 것으로 이해되고, "투여"라는 용어는 이에 따라 적절히 해석된다. 타겟의 암 상태를 치료하는데 유용한 다른 작용제와 본 발명의 화합물의 혼합의 범주는 에스트로겐 기능과 관 련된 장애를 치료하는데 유용한 임의의 제약 조성물과의 임의의 혼합물을 포함한다.

본원에서 사용된, "조성물"이란 용어는 특정량의 특정 성분을 포함하는 생성물뿐만 아니라 특정량의 특정 성분의 직접 또는 간접 혼합물을 초래하는 임의의 생성물을 포함하는 것으로 의도된다.

전구약물 형태로 활성 화합물을 제조, 정제 및/또는 다루는 것이 편하거나 바람직할 수 있다. 본원에서 사용된 "전구약물"이라는 용어는 물질대사시 소기의 활성 화합물을 수득하거나 그 자체가 활성 화합물인 화합물에 관한 것이다. 이것은 예컨대, 인산 에스테르 모이티를 3, 6, 10 또는 17번과 같은 적합한 위치에서 첨가시키는 것을 포함한다. 통상적으로, 전구약물은 활성 화합물보다 불활성 또는 보다 덜 활성이지만, 이로운 취급, 투여, 또는 물질대사 특성을 제공할 수 있다. 예컨대, 일부 전구약물은 활성 화합물의 에테르이고; 물질대사시 에테르기는 활성 약물을 수득하기 위해 분해된다. 또한, 일부 전구약물은 활성 화합물, 또는 추가적인 화학 반응으로 활성 화합물을 수득하는 화합물을 수득하기 위해 효소적으로 활성화된다. 그러므로, 본원에 기술된 본 발명의 치료 방법에서, "투여"라는 용어는 상세하게 기술된 화합물 또는 상세하게 기술될 수 없되 환자에 투여후 생체내에서 지정된 화합물로 변환되는 화합물로 상기 기술된 다양한 상태를 치료하는 것을 포함해야 한다. 이러한 화합물의 대사산물은 본 발명의 화합물을 포유류 대상에 도입함으로써 제조된 활성종을 포함한다.

본 발명의 화합물은 강력한 항증식제의 전구약물일 수 있다. 낮거나 중간 정 도의 고유 활성도를 나타내는 전구약물로 작용할 수 있고, 보다 강력한 화합물을 발생시키기 위해 물질대사적으로 활성화될 수 있다(예컨대, 생체내에서). 이것은 물질대사 활성화가 종양에서 발현되는 효소에 의해 달성될 수 있는 암 요법에 특히 유용하다. 기질로 작용하는 전구약물은 CYP19, 17β-HSD, HS-디메틸라아제 또는 또 다른 스테로이드성 결합 효소로 물질대사되서 강력한 항암제를 발생시킬 수 있다. 엑스메스탄의 (R) 또는 (S)-6-메틸옥소알킬 유도체는 유방암외의 수만의 암형태에서 활성일 수 있다는 것을 지시한다. 유방암, 폐암, 결장암, 전립선암, 자궁내막암 및 난소암에서 유래된 세포계내 종양 세포 성장을 억제시키는 활성도는 NDC-1011 거울이성질체에서 관찰됐다. 예컨대, 종양 세포 성장의 시험관내 연구에서 CYP19 양성인 세포계(MDA-MB-213 및 SK-OV-3)가 가장 높고 CYP19 음성인 세포계(MCF-7 및 NIH:OVCAR-3)에서 감소되는데 이것은 NDC-1011이 전구약물로 작용할 수 있음을 지시한다. NDC-1077및 NDC-1011 구조용 하기 화학식 (ⅩⅠ) 및 화학식 (ⅩⅡ)를 참조.

NDC-1077

NDC-1011

어떠한 특정 이론을 고수하지 않고, 예컨대, NDC-1011이 전구약물이라면, 신체의 정상적인 스테로이드생성(steroidogenic) 효소는 NDC-1011에 활성이어서 NDC-1011를 활성 대사산물로 전환시켜야 한다. 본 발명의 이 관점은 S 및 R 부분입체이성질체에도 동일한 방법으로 적용될 수 있다.

본 발명의 전구약물 화합물은 내생의 안드로스톤디온에서 관찰된 것과 유사한 방법으로 작용하고, NDC-1011은 이의 탄소 3번 위치에서 CYP19를 통해 하이드록실화로 방향족 고리로 전환되서 대사산물인 NDC-1099를 초래한다. 안드로스텐디온이 CYP19를 통해 에스트론으로 전환되는 에스트라디올 바이오합성 경로인 도 1를 참조. NDC-1099는 17β-하이드록시스테로이드 탈수소효소(17β-HSD)의 역작용을 통해 탄소 17번 위치에 추가로 하이드록실화를 겪어서 디올 화합물인 NDC-1022를 수득할 수 있다.

에스트라디올과 같이, 디올 화합물 NDC-1022는 방향족 고리를 보유하지만, 탄소 6번 위치의 메틸옥시알킬 치환체와 관련해서는 에스트라디올과 다르다. NDC-1011의 디올 화합물 NDC-1022로의 물질대사는 도 2에 도시되는 임의의 순서로 발생 해야 한다. 예컨대, 17β-HSD로 생성된 NDC-1044는 CYP19 방향족화 활성화로 인해 NDC-1022 디올로 전환된다.

어떠한 이론으로 고수하지 않고, 에스트라디올은 C17-OH(His 524를 통해); 및 C3-OH(Arg 394 및 Glu 353를 통해)를 통해 에스트로겐 수용기(ERα 및 ERβ)의 수용기 리간드 포켓에 결합되는 것으로 보고되었다. 에스트라디올과 같이, 유사한 아미노산 결합을 통해 ERα 및 ERβ의 동일한 리간드 포켓에서 NDC-1022 디올의 결합이 발생할 수 있다. 추가로, NDC-1022 화합물의 탄소 6번 위치에서 메틸옥시알킬 치환체의 존재는 정상적인 리간드와 결합한 수용기의 형태를 바꿔서 항종양 활성도에 해당하는 활성도를 변형시킬 수 있다.

또한, NDC-1011(또는 NDC-1011의 대사산물 중 하나)의 6번 탄소 위치에서의 메틸기에 관한 디메틸라아제 효소의 활성도는 트리올 대사산물 NDC-1055의 생성을 지시할 수 있다. C-3, C-6 및 C-17 탄소에서 알콜기를 보유하는 NDC-1055 트리올 대사산물과 같은 화합물은 C-3, C-6 및 C-17 알콜의 다양한 결합을 포함하는 조직에 폭넓은 스펙트럼의 스테로이드 수용기에 결합될 수 있다. 이러한 대사산물의 일 예는 하기 도시되는 화학식 (Ⅶ)B의 화합물을 포함한다:

[화학식 VII] B-NDC-1055

본 발명의 약학 제형은 구강, 코, 국소(구강(buccal) 및 혀밑), 직장, 질 및/또는 비경구적인 투여에 적합한 것을 포함한다. 선택된 투여 경로와 상관없이, 활성 성분(들)은 당해 기술자에게 공지되는 통상적인 방법으로 인해 약학적으로 수용 가능한 투약 형태로 제형화된다.

단일 투약 형태를 제조하기 위해 담체 재료와 혼합될 활성 성분(들)의 양은 치료될 호스트, 특정 투여 방식 및 상기 기술된 모든 다른 인자에 따라 달라질 것이다. 단일 투약 형태를 제조하기 위해 담체 재료와 혼합될 활성 재료(들)의 양은 일반적으로 요법 효과를 산출하기에 유효한 가장 낮은 투약 활성 성분(들)의 양일 것이다.

약학 제형 또는 조성물을 제조하는 방법은 활성 성분(들)을 담체, 및 선택적으로 하나 이상의 부수적인 성분과 함께 가져오는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 활성 성분(들)을 액체 담체 또는 정교하게 분열된 고체 담체, 또는 둘 다와 함께 균일하게 그리고 촘촘하게 가져온 후 필요하다면 생성물을 형태화해서 제조된다.

구강 투여용으로 적합한 본 발명의 제형은 캡슐, 교갑, 알약, 정제, (통상적으로 자당 및 아카시아 또는 트래거캔스 고무인 향이 나는 주성분을 사용한)마름모꼴 정제, 분말, 과립의 형태일 수 있거나, 수성 또는 비수성 액체인 용액 또는 현탁액, 또는 오일-인-워터(oil-in-water) 또는 워터-인-오일(water-in-oil) 액체 에멀젼, 또는 연금약액 또는 시럽, 또는 (젤라틴 및 글리세린, 또는 자당 및 아카시아와 같은 불활성 베이스를 사용한)선향 및/또는 구강 청정제 및 이의 유사물일 수 있고, 각각의 지정된 양의 활성 성분(들)을 함유한다. 활성 성분(들)은 또한 환약, 연약 또는 페이스트로 투여될 수 있다.

구강 투여(캡슐, 정제, 알약, 당의정, 분말, 과립 및 이의 유사물)을 위한 본 발명의 고체 투약 형태에서, 전구약물(들), 활성 성분(들)(이의 미분화 형태)은 나트륨 시트레이트 또는 디칼슘 포스페이트, 및/또는 하기 중 임의의 것과 같은 하나 이상의 약학적으로 수용가능한 담체와 혼합된다: (1) 녹말, 젖당, 자당, 포도당, 마니톨, 및/또는 규산과 같은 충전제 또는 증량제; (2) 예컨대, 카복시메틸-셀루로오즈, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 자당 및/또는 아카시아와 같은 결합제; (3) 글리세롤과 같은 보습제; (4) 아가(agar)-아가, 칼슘 카보네이트, 감자 또는 타피오카 녹말, 알긴산, 특정 실리케이트, 및 나트륨 카보네이트와 같은 붕해제; (5) 파라핀과 같은 용액 지연제(retarding agents); (6) 4차 암모늄 화합물과 같은 흡수 촉진제; (7) 예컨대, 세틸 알콜 및 글리세롤 모노스테아레이트와 같은 습윤제; (8) 카올린 및 벤토나이트 점토와 같은 흡수제; (9) 탈크, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 라우릴 설페이트, 및 이의 혼합물과 같은 윤활제; 및 (10) 착색제. 캡슐, 정제 및 알약의 경우, 약학 조성물은 또한 완충제를 함유할 수 있다. 또한, 유사한 타입의 고체 조성물이 자당 또는 우유 설탕뿐만 아니라 고분자량의 폴리에틸렌 글리콜 및 이와 유사물과 같은 부형제를 사용한 부드럽고 딱딱하게 충전된 젤라틴 캡슐에서 충전제로 사용될 수 있다.

정제는 선택적으로 하나 이상의 부수적인 성분을 압축 또는 성형(molding)해 서 제조될 수 있다. 압축된 정제는 혼합제(예컨대, 젤라틴 또는 하이드록시프로필메틸 셀룰로오즈), 윤활제, 불활성 희석제, 보전제, 붕해제(예컨대, 나트륨 녹말 글리코레이트 또는 가교 결합된 나트륨 카복실메틸 셀룰로오즈), 표면 활성제 또는 분산제를 사용해서 제조될 수 있다. 성형된 정제는 불활성 액체 희석제로 습윤된 분말 활성 성분(들)의 혼합물을 적합한 기계에서 성형함으로써 제조될 수 있다.

당의정, 캡슐, 알약 및 과립과 같은 본 발명의 약학 조성물의 고체 투약 형태, 및 정제는 선택적으로 장 코팅물 및 약학 제형 기술에서 널리 공지되는 다른 코팅물과 같은 코팅물 및 외형물로 제조될 수 있다. 또한, 이것은 예컨대 소기의 방출 프로필, 다른 중합체 매트리스, 리포좀 및/또는 마이크로스피어를 제공하기 위해 다양한 비율의 하이드록시프로필메틸 셀룰로즈를 사용해서 활성 성분(들)의 느리거나 조절된 방출물을 제공하기 위해 제형화될 수 있다. 이것은 예컨대 박테리아 보유 여과기(bacterial-retaining fillter)를 통해 여과시켜서 멸균될 수 있다. 또한, 이 조성물은 선택적으로 불투명화제를 함유할 수 있고, 활성 성분(들)만을 우선적으로 특정 비율의 위장에서 선택적으로 지연 방식으로 방출시키는 조성물일 수 있다. 사용될 수 있는 삽입 조성물의 예는 중합체 물질 및 왁스를 포함한다. 또한, 활성 성분(들)이 미세캡슐화된 형태일 수 있다.

활성 성분(들)의 구강 투여를 위한 액체 투약 형태는 약학적으로 수용가능한 에멀전, 미세에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽 및 연금약액을 포함한다. 활성 성분(들)에 추가로, 액체 투약 형태는 당해 기술에서 통상적으로 사용되는 불활성 희석제로, 예컨대, 물 또는 다른 용매, 가용화제 및 에멀젼화제, 예컨대, 에틸 알콜, 이 소프로필 알콜, 에틸아세테이트, 부틸 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 글리콜, 오일(특히, 면실, 땅콩, 밀, 배종(germ), 올리브, 비버향(castor) 및 참기름), 글리세롤, 아밀 알콜, 테트라하이드로퓨릴 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르 및 이의 혼합물을 포함할 수 있다.

불활성 희석제외에 구강 조성물은 또한 습윤제, 에멀젼화제 및 현탁제, 감미제, 착향제, 착색제, 방향제 및 보존제와 같은 보조제를 함유할 수 있다. 활성 성분(들)에 추가로 현탁액은 에톡실화 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 및 소르비탄 에스테르, 미세결정성 셀룰로오즈, 알루미늄 메타하이드록시드, 벤토나이트, 아가-아가 및 트랜가캔스, 및 이의 혼합물과 같은 현탁제를 함유할 수 있다.

직장 및 질 투여를 위한 본 발명의 약학 조성물의 제형은 좌약으로 제시될 수 있고, 활성 성분(들)을 하나 이상의 적합한 비자극 부형제, 또는 상온에서는 고체이지만 체온에서는 액체여서 직장 및 질 공간에서 용융되서 활성 성분(들)을 방출시킬, 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜, 왁스 또는 살리실레이트를 포함하는 담체를 혼합함으로써 제조될 수 있다. 또한, 질 투여에 적합한 본 발명의 제형은 당해 기술에서 적합한 것으로 공지되는 상기 담체를 함유하는 질좌약, 탐폰, 크림, 젤, 페이스트, 폼 또는 스프레이 제형을 포함한다.

활성 성분(들)의 국소적 또는 경피성 투여를 위한 투약 형태는 분말 스프레이, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 젤, 용액, 패치 및 흡입제를 포함한다. 활성 성분(들)은 약학적으로 수용가능한 담체, 및 필요할 수 있는 임의의 완충제 또는 추진제와 함께 멸균 조건에서 혼합될 수 있다.

연고, 페이스트, 크림 및 젤은 활성 성분(들)에 추가로 동물성 및 식물성 지방, 오일, 왁스, 파라핀, 녹말, 트래거캔스, 셀룰로오즈 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실릭산, 탈크 및 징크 옥사이드, 또는 이의 혼합물과 같은 부형제를 함유할 수 있다. 분말 및 스프레이는 활성 성분(들)에 추가로 자당, 탈크, 실릭산, 알루미늄 하이드록시드, 칼슘 실리케이트 및 폴리아미드 분말, 또는 이러한 물질의 혼합물과 같은 부형제를 함유할 수 있다. 스프레이는 추가적으로 클로로플루오로하이드로카본, 및 부탄, 프로판과 같은 휘발성 비치환 하이드로카본과 같은 추진제를 함유할 수 있다.

본 발명의 화합물은 당해 기술자에게 잘 공지되는 피부 패치의 형태를 사용해서 적합한 비강 매질의 국소적 사용 또는 경피 루트를 통해 비강 형태로 투여될 수 있다. 경피성 전달 시스템은 투약 계획을 통해 연속적인 투여를 제공한다. 경피성 패치는 활성 성분(들)의 신체로의 조절된 전달을 제공하는 추가된 이점을 제공한다. 이러한 투약 형태는 엘라스토머 매트릭스 재료와 같은 적합한 매질에 활성 성분(들)을 용해, 분산 또는 달리 혼입해서 제조될 수 있다. 또한, 흡수 강화제가 활성 성분(들)의 피부에서의 유동을 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 이러한 유동 속도는 속도 조절막을 제공하거나 활성 성분(들)을 중합체 매트릭스 또는 젤에 분산시킴으로써 조절될 수 있다.

또한, 본 발명의 화합물은 작은 유니라멜라 소포(unilamellar vesicle), 큰 유니라멜라 소포 및 멀티라멜라 소포와 같은 리포좀 전달 시스템의 형태로 투여될 수 있다. 리포좀은 콜레스테롤, 스테아릴아민 또는 포스파티딜클로린과 같은 다양 한 인지질로부터 생성될 수 있다.

본 발명의 화합물의 또 다른 전달 방식은 화합물 분자가 커플링되는 개별적인 담체로서 단일클론 항체의 사용을 통해 전달될 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물은 타겟이 될 수 있는 약물 담체로서 가용성 중합체로 커플링될 수 있다. 이러한 중합체는 폴리비닐피롤리돈, 피란 공중합체, 폴리하이드록시프로필메타아크릴아미드-페놀, 폴리하이드록시-에틸아스파르트아미드-페놀, 또는 팔미토일 잔기로 치환된 폴리에틸렌옥사이드-폴리라이신을 포함할 수 있다. 추가로, 본 발명의 화합물은 예컨대, 폴리락틱산, 폴리글리콜릭산, 폴리락틱산과 폴리글리콜릭산의 공중합체, 폴리엡실론 카프로락톤, 폴리하이드록시 부티릭산, 폴리오르소에스테르, 폴리아세탈, 폴리디하이드로피란, 폴리시아노아크릴레이트 및 하이드로겔의 가교결합 또는 양친매성 블록 공중합체와 같은 약물의 조절된 방출을 획득하는데 유용한 생체분해성 중합체군에 결합될 수 있다.

비경구성 투여에 적합한 본 발명의 약학 조성물은 산화방지제, 완충제, 이 제형에 미리 받기로 한 자(recipient)의 혈액 또는 현탁제나 증점제로 등장성을 제공하는 용질을 함유할 수 있는, 하나 이상의 약학적으로 수용 가능한 멸균성 수성 등장액 또는 비수성 등장액, 현탁액 또는 에멀전, 또는 사용 바로 전에 멸균성의 주입 가능한 용액 또는 현탁액으로 재구성될 수 있는 멸균성 분말 중 하나 이상과 혼합한 활성 성분(들)을 함유한다.

본 발명의 약학 조성물에 사용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예는 물, 에탄올, 폴리올(글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 및 이와 유사물), 및 이의 적합한 혼합물, 올리브 오일과 같은 식물성 유지, 에틸 올리에이트와 같은 주입 가능한 유기 에스테르를 포함한다. 적합한 유동성은 예컨대, 레시틴와 같은 코팅 재료의 사용, 요구되는 입자 크기의 유지, 및 계면활성제의 사용으로 유지될 수 있다.

또한, 이러한 조성물은 습윤제, 유화제 및 분산제와 같은 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 설탕, 염화나트륨 및 이와 유사물과 같은 등장액이 조성물에 함유되는 것이 바람직할 수 있다. 또한, 주입 가능한 제약 형태는 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴과 같은 흡수를 지연시키는 작용제를 함유해서 지속적으로 흡수될 수 있다.

일부 경우에, 활성 성분(들)의 효과를 지속시키기 위해서 피하 또는 근육내 주입으로 약물의 흡수를 늦추는 것이 바람직할 수 있다. 이것은 열등한 수 용해도를 보유하는 결정성 또는 무정형 재료의 액체 현탁액의 사용으로 달성될 수 있다. 활성 성분(들)의 흡수율은 이의 용해율에 따라 다르고, 결국 결정 크기 및 결정 형태에 의존할 수 있다. 대안적으로, 비경구적으로 투여된 활성 성분(들)의 흡수의 지연은 오일 매질에 활성 성분(들)을 용해시키거나 현탁시켜서 달성된다.

주입 가능한 저장 형태는 활성 성분(들)을 폴리락티드-폴리글리콜리드와 같은 생체 분해성 중합체에 미세캡슐화 매트리스를 형성함으로써 제조된다. 활성 성분(들) 대 중합체의 비율에 따라서, 사용된 특정 중합체의 특성, 활성 성분(들)의 방출율이 조절될 수 있다. 다른 생체 분해성 중합체의 예는 폴리(오르소에스테르) 및 폴리(언하이드라이드)를 포함한다. 또한, 주입 가능한 제형은 신체 조직과 친화 성인 활성 성분(들)을 리포좀 또는 마이크로에멀전에 주입시켜서 제조된다. 주입 가능한 재료는 예컨대, 박테리아 보유 여과기를 통한 여과로 인해 멸균될 수 있다.

이 제형은 예컨대, 앰플 및 바이얼과 같은 1회 투약 또는 다회 투약 밀봉 용기에 존재할 수 있고, 사용 바로 전에 주입을 위한 물과 같은 멸균성 액체 담체의 첨가가 필요한, 감압하에 동결 건조된 상태로 저장될 수 있다. 일회성 주입 용액 및 현탁액은 상기 기술된 타입의 멸균성 분말, 과립 및 정제로 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 제약 조성물은 하기를 포함하는 수의학적 제형의 형태로 사용될 수 있다: (1) 물약(drenches)(수용액 또는 비수용액이나 현탁액), 정제, 환약, 분말, 공급물질과 혼합하기 위한 과립 또는 펠렛, 혀에 적용하기 위한 페이스트; (2) 예컨대, 멸균액 또는 현탁액으로 피하, 근육내 또는 정맥내 주입, 또는 현탁액이나 용액이 이의 젖꼭지를 통해 동물의 젖통으로 도입되는 것이 적합할 때는 유방내 주입으로 앰플용 비경구 투여; (3) 예컨대, 피부에 도포되는 크림, 연고 또는 스프레이로 국소 적용; (4) 예컨대, 질 좌약, 크림 또는 폼이나 관심 영역에 투여하기 위한 당해 기술에서 적합한 임의의 다른 방법으로 질내 적용.

본 발명이 특정 양태를 참고로 기술됐지만, 당업자는 기술된 양태가 예증의 목적으로 제시된 것이지 발명을 제한하는 것은 아니고 이 외의 방법으로도 실시될 수 있다는 것을 인식할 것이다.

도 1은 에스트라디올 생합성 방법을 도시한다.

도 2는 본 화합물의 예견되는 대사경로를 도시한다.

도 3은 발광 효소 발현(RLU = 상대적인 발광정도)으로 측정한 에스트로겐 수용기 베타 (ER-β) 활성도에 미치는 NDC-1022, NDC-1033, NDC-1044, NDC-1055 및 NDC-1066의 영향을 도시한다. CV-1 세포는 두 개의 플라스미스 구성체, 수용기 구성체 ERE-tk-발광 효소 및 CMV-ER-β 구성체로 감염되었다. 감염된 대조군(Ctrl) CV-1 세포는 아무런 처리를 하지 않았고, 에스트라디올 처리된 세포(E2)는 10^-9 M(1 nM)의 농도로 에스트라디올이 단독으로 첨가됐다. NDC 화합물의 경우, 각각의 화합물은 각각 10^-8 M (10 nM)(각각의 시험 화합물의 왼쪽 기둥에 해당) 또는 10^-8에 추가로 10^-9 M의 농도의 에스트라디올(E2)(각각의 시험 화합물의 오른쪽 기둥에 해당)이 단독으로 첨가됐다.

도 4는 발광 효소 발현(RLU = 상대적인 발광정도)으로 측정된 에스트로겐 수용기 알파(ER-α) 활성도에 미치는 NDC-1011, NDC-1033, NDC-1055 및 NDC-1066의 영향을 도시한다. CV-1 세포는 두 개의 플라스미드 구성체, 수용기 구성체 ERE-tk-발광 효소 및 CMV-ER-α 구성체로 감염되었다. 감염된 대조군(Ctrl) CV-1 세포는 에스트라디올 (E2)이 단독으로 10^-9 M (1 nM)으로 첨가되는 동안 치료를 받지 않았다. NDC 화합물의 경우, 각각의 화합물은 각각 10^-8 M으로 단독으로 첨가되거나(각각의 시험 화합물에서 왼쪽 기둥에 해당), 10^-9 M의 에스트라디올 (E2)과 함께 10^-8M로 첨가되었다(각각의 시험 화합물에서 오른쪽 기둥에 해당).

도 5는 각각의 세포계, HT-29, SK-OV-3, NCI-H23, MCF-7, MDA-MB-231, OVCAR-3, CAPAN-1, CAPAN-2, SH-SY5Y, A-549 및 PC-3에서 측정한 NDC-1022(왼쪽 기둥), NDC-1033(중간 기둥) 및 NDC-1044(오른쪽 기둥)의 IC₅₀ 성장 억제 데이터(μM)를 도시한다.

도 6은 각각의 세포계, HT-29, SK-OV-3, NCI-H23, MCF-7, MDA-MB-231, OVCAR-3, CAPAN-1, CAPAN-2, SH-SY5Y, A-549 및 PC-3에서 측정한 NDC-1022, NDC-1033 및 NDC-1044의 수치적인 IC₅₀ 성장 억제 데이터(μM)를 도시한다.

본 발명의 상기 표 Ⅰ 및 표 Ⅱ에 예시된 화합물의 제조를 위한 반응식 1 및 2의 일반적인 방법은 추가로 하기 실시예로 예증된다. 상세하게, 6-알콕시알킬 에스트라디올 화합물의 제조를 위한 반응식 1 및 2에 제시된 방법은 하기 도시되는 실시예 1-5에 의해 예증된다. 에스트로겐 수용기 결합 수용력을 평가하는 예는 실시예 4와 연관되고, 최종적으로 본 발명의 바람직한 화합물의 IC₅₀및 이의 비교 효능의 평가는 실시예 5에 제시된다. 달리 기술되지 않는다면, 모든 출발 물질 및 시약은 표준 공업용 등급이고, 추가적인 정제없이 사용되거나 통상적인 방법으로 이러한 재료로부터 쉽게 제조된다. 유기 합성분야의 당업자는 출발 물질 및 반응 조건이 소기의 최종산물을 획득하기 위해 달라질 수 있다는 것을 인식할 것이다.

실시예 1

6-하이드록시메틸-안드로스타-1,4-디엔-3,17-디온의 제조 방법.

반응 시스템에서, 충분한 양의 (+)안드로스타-1,4-디엔-3,17-디온 (ADD), 12.2 당량의 피롤리딘, 촉매성 아세틱산, 변성 에탄올(95/5 에탄올/메탄올) 및 6-7% 테트라하이드로퓨란(THF)을 30 내지 40℃로 최소 16 시간동안 가열해서 1,3-디피롤리디노안드로스타-3,5-디엔-17-온을 생성했다. ADD 함량이 HPLC 영역으로 3% 미만에 도달하거나 변화가 없어지거나 또는 결과 디피롤리딘노안드로스타디엔이 ADD로 역전환되기 시작하면, 반응 혼합물을 5 ± 5℃로 냉각시켰다. 이후에 결과 화합물을 모아서 차가운 변성 에탄올로 세척했다. 수율은 통상적으로 건조 기준으로 70-80%이고, HPLC 영역 비율로 통상적으로 90-95%의 순도를 보유했다.

이후에, 수득된 1,3-디피롤리디노안드로스타-3,5-디엔-17온 1 당량을 10 ml의 디클로로메탄/g에서 2.6 당량의 포르말린(포름알데히드)와 상온에서 혼합했다. 이의 반응 혼합물을 2%의 황산 용액으로 약 2의 pH로 산성화시켰다. 이로 인해, 유기층이 생성됐고, 2% 황산 및 1:1 물/브라인으로 세척했다. 이후에 용매를 톨루엔(대략 10 ml/g)으로 교체 실시했고, 톨루엔 교체가 진행되면서 생성물이 결정화됐다. 상기 생성물은 모아서 세척하고 건조시켜서 6-하이드록시메틸-안드로스타-1,4-디엔-3,17 디온을 제공했다. 당업자는, 원하다면 당해 기술에서 공지된 기술을 사용해서 추가로 6번 위치의 입체화학을 개질시킬 수 있다.

실시예 2

화합물 NDC-1022 및 NDC-1033의 제조방법

반응식 2에 도시된 에스트라디올 유도체 NDC-1022, NDC-1033을 하기 방법으로 합성했다. 톨루엔설폰산 또는 캄포어설폰산을 촉매로 사용해서 THF에서 화합물 1과 디하이드로피란을 반응시켜서 보호된(protected) 에스트라디올 화합물 2를 제조했다. 당업자는 이 반응이 평형반응이라는 것을 인식할 수 있기 때문에 상기 조건에서 완료까지 가지 않을 것이다. 그러므로, 하나가 보호된(mono-protected) 에스트라디올이 반응 생성물에서 발견될 수 있다. 이 미정제 반응 혼합물은 소기의 비스-THP 에스트라디올이 약 70%의 수율로 결정화되도록 아세토니트릴로 마쇄 단계를 겪을 것이다.

반응식 2에 도시되는 바와 같이 주요 중간 화합물 3을 LiDAKOR라고 불리는 강염기 혼합물(부틸 리튬, 디이소프로필아민, 및 칼륨 tert-아밀레이트)로 벤질 6번 위치에서의 아실화를 통해 수득했다. 당업자는 - 70℃의 조건하에서, 벤질 위치에서 프로톤의 제거를 인식할 수 있다. 이후에, 중간 화합물 3을 컬럼 크로마토그래피로 정제해서 컬럼 용매 및 소량의 불순물을 함유하는 약 50%의 수율의 시럽(syrup)을 수득했다. 과량의 리튬 알루미늄 하이드라이드로 알데히드를 환원함으로써 유리질 발포체로 고수율의 라세믹 하이드록시메틸 에스트라디올 화합물 4를 수득했다.

NDC-1022 및 NDC 1033를 제조할 목적으로, 화합물 4를 나트륨 하이드라이드 및 메틸 아이오다이드로 메틸화해서 메톡시메틸 중간 화합물 7를 제조했다. 화합물 7을 컬럼 크로마토그래피로 정제해서 유리질 발포체를 수득했다. 보호기를 탈보호화해서 라세틱 6-메톡시메틸 에스트라디올 화합물 8을 수득했다. 거울 이성질체의 분리는 카이럴 예비 HPLC를 사용해서 실시해서 화합물 NDC-1022 및 NDC-1033을 수득했다. 화합물 NDC-1022의 경우, 카이럴 순도는 95:5 R:S 초과인 것으로 인식됐다. 화합물 NDC-1033의 경우는, 86:14 S:R의 카이럴 순도가 인식됐다. 6번 위치에서의 절대 입체화학을 측정하기 위해서는 당업자의 수준에서 NMR을 사용하는 것이 보통이고, 4번과 6번 위치는 진단성(diagnostic)이다.

실시예 3

NDC-1055 및 NDC-1066의 제조방법

실시예 2에서 기술된 동일한 방법을 사용해서, 화합물 4를 합성했다. 이후에 화합물 4의 탈보호화는 메탄올에서 촉매성 염화수소로 달성했고, 라세믹 화합물 5는 카이럴 예비 HPLC로 분리시켜서 하나는 NDC-1055가 많은 것과 다른 하나는 NDC-1066이 많은 것으로 두 가지 부분으로 분리했다. 각각의 화합물의 경우, 카이럴 순도는 95:5 R:S 및 S:R를 각각 보유했다. 6번 위치의 절대 입체화학은 NMR로 측정했고, 4번과 6번은 진단성이다.

실시예 4

발광 효소 활성도를 사용해서 에스트로겐 수용기 결합 수용력을 측정하는 방법

에스트로겐 수용기-음성 CV-1 신장 세포를 10%의 우태혈청 및 100 유닛/ml의 페니실린-스트렙토마이신이 보충공급된 4.5 g/L의 글루코즈를 보유하는 Dulbecco's modified Eagle's medium에서 37℃, 5% 습도의 CO₂대기에서 유지시켰다.

이후에, 세포를 숯-덱스트란이 제거된 우태혈청을 10%로 함유하는 무 페놀레드 Dulbecco's modified Eagle's medium이 담긴 6-웰 디쉬에 웰 당 2×10⁵ 세포 밀도로 평판 배양시켰다. CV-1 세포를 본 제조업자의 프로토콜에 따라 LipofectAMINE 시약을 사용해서 감염시켰다. (티미딘 키나아제 촉진제 및 발광 효소 유전자의 복제된 단일 ERE의 상부를 보유하는 ERE-tk-발광 효소를 보유하는) 1.5 ㎍의 리포터 플라스미드 및 (CMV-ERα 또는 CMV-ERβ의 전체 길이의 코딩 서열을 각각 보유하는) 0.5 ㎍의 ERa 또는 ERβ 발현 벡터를 포함하는 감염(transfection).

다음 날, 세포를 아무 처리를 하지 않거나(대조군), 에스트라디올로만(1 nM) 처리하거나 에스트라디올에 Endece 화합물을 (농도를 달리해서) 처리시켰다. 16-24 시간후에, 세포를 채취하고 발광 효소의 활성도를 측정했다.

착수시, 세포 단층을 차가운 인산염 완충 식염수로 두번 세척하고, 1X 세포 배양 라이시스 시약(위스콘신주 매디슨 프로메가로부터 입수) 250 ㎕에서 15분동안 배양했다. 세포 추출물을 신규 튜브에서 감염시키고 발광 효소 측정 시스템(프로메가로부터 입수)를 사용해서 측정했다. 각각의 측정시, 추출물 10 ㎕을 1X 세포 배양 라이시스 시약 90 ㎕로 희석시켰다. 발광율은 AutoLumat LB953 luminometer를 사용해서 측정했다.

본원에 기술된 결합 측정법으로 식별된 화합물 또는 이의 염은 에스트로겐 수용기의 리간드 결합 자리에서 에스트디올의 결합을 억제하는 화합물이다. 상세하 게, 본 화합물 또는 이의 염은 세포 증식를 정지시키기 위해 고안된 것으로 이의 약물학적 활성도를 발휘한다. 도 3 및 4에 지시되는바, 선도 화합물 NDC-1022, NDC-1033은 에스트로겐 수용기 중 하나와 결합한 에스트라디올에 강한 경쟁적 행태를 나타내서 세포 증식 활성 정지를 초래한다.

실시예 5

후보 화합물의 IC₅₀을 측정하는 방법

열거된 세포계를 약 5% CO₂,37℃, 95%의 상대 습도에서 유지시켰다. 이 세포를 이틀 내지 삼일마다 2차 배양시키고 깨끗한 96-웰 평판에서 웰당 1×10⁴ 세포의 밀도로 배양시킨 후 측정 개시전에 ca. 5% CO₂, 37℃에서 밤새 배양시켰다. 세포의 생존력 측정을 시작하기 위해서, 세포 평판내 매디아(100 ㎕)를 신규 매디아(100 ㎕)로 교체했다. 시험 물품을 연속으로 1:2의 신규 매디아로 두 배로 희석시키고, 200 ㎕의 총 부피 중 0.46, 1.37, 4.12, 12.35, 37.04, 111.1, 333.3 및 1,000 μM(≤ 1%의 DMSO)의 최종 샘플 농도로 세포(100 ㎕)에 첨가했다. 세포를 보유하지 않은 웰 및 0.1%의 트리톤-X로 용해된 세포를 보유하는 웰을 대조군의 베이스라인을 위해 사용했다. 타목시펜은 각 측정시 공지된 대조군으로 사용했고, DMSO만이 매질 대조군으로 작용할 것이다. 샘플을 ca. 37℃, 5% 습도의 CO₂대기에서 72시간동안 배양시켰다. 이 평판을 배양 기간동안 하루에 한번 관찰했고, 합류(confluence) 레벨에 특별한 관심을 기울였다. 세포가 72 시간의 배양 기간이 끝 나기 전에 합류에 도달했다면, 실험은 이 때에 종료된 후 세포의 생존 능력은 하기 기술된 바와 같이 측정된다.

세포 생존력은 상업적으로 입수 가능한 키트를 사용해서 발광으로 ATP 레벨을 측정해서 측정했다. 간단하게 말해서, 세포 평판에서 매디아를 제거하고 신규 매디아 100 ㎕로 교체한 후, 완충액 및 동결건조한 기재를 상온에서 평형시켰다. 완충액은 세포 평판(웰 당 100 ㎕) 웰에 첨가하기 바로 직전에 기재를 재건하기 위해 사용했다. 평판을 Infinite M200 plate reader에 놓고, 10분동안 진동시킨 후 10분동안 대기한 다음 감쇠없이 0.5초의 인테그레이션 타임으로 읽었다.

평균 베이스라인 대조군(트리톤 X-100이 있거나 세포가 없는 웰)을 총 형광에서 뺀 후 이 웰에 대한 순형광값을 수득했다. 총 값은 DMSO 단독인 대조군과 비교했다. IC₅₀을 매질 대조군 세포와 비교해서 50%의 결과값을 산출하는 농도로 계산했다. 도 5 및 6은 이 시험 결과를 제시한다. 따라서, 당업자는 청구된 조성물 중 R 구조가 다른 입체이성질체보다 우세하다는 것을 인식할 것이다.

Claims

하기 화학식의 구조:

(상기 화학식에서, R₁, R₂, R₃, 및 R₄는 독립적으로 수소, C₁ 내지 C₆ 알킬, 치환된 알킬, 및 할로겐으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고,

R₅, R₆, 및 R₇은 독립적으로 수소, C₁ 내지 C₆ 알킬, 치환된 알킬, -SO₃H 및 글루쿠로나이드로 이루어진 그룹으로부터 선택된다)

를 보유하는 화합물, 이 화합물의 거울이성질체, 다른 입체화학적 이성질체, 수화물, 용매화합물, 호변체(tautomers), 또는 이의 약학적으로 수용 가능한 염인 화합물.
제1항에 있어서, R₁, R₂, R₃, 및 R₄는 수소이며, R₆가수소인 화합물.
제1항에 있어서, R₁, R₂, R₃, R₄, R₆, 및 R₇이 독립적으로 수소, 메틸, 또는 에틸인 화합물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
기호가 R 또는 S 입체이성질체를 형성하는 결합을 나타내는 화합물.
제1항에 있어서, 화합물이 하기 구조:

(상기 화학식에서, R₁, R₂, R₃, 및 R₄는 독립적으로 수소, C₁ 내지 C₆ 알킬, 치환된 알킬, 및 할로겐으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고,

R₅는 C₁ 내지 C₆ 알킬이고,

R₆ 및 R₇은 독립적으로 수소 및 C₁ 내지 C₆ 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택된다)

를 보유하는 화합물.
제5항에 있어서, R₆ 및 R₇이 독립적으로 메틸 및 수소로 이루어진 그룹에서 선택되는 화합물.
제1항 또는 제5항에 있어서, R₅가 메틸이고, R₁, R₂, R₃, R₄는 수소인 화합물.
제1항에서 있어서, 하기 화학식들:

NDC-1055

로 구성된 그룹에서 선택된 화학식의 구조를 보유하는 화합물.
제1항에 있어서, 6번 위치의 탄소는 R 구조를 가진 비대칭 중심인 화합물.
제1항 또는 제5항의 화합물 및 약학적으로 수용 가능한 담체를 함유하는,

유방암, 췌장암, 폐암, 결장암, 전립선암, 난소암, 뇌암, 간암, 비장암, 신장암, 림프절암, 소장암, 혈구암, 뼈암, 위암, 자궁내막암, 고환암, 난소암, 중추신경계암, 피부암, 두경부암, 식도암, 또는 골수암으로 구성된 고형 종양 그룹에서 선택된 고형 종양의 암 세포 성장을 억제하기 위한 제약 조성물.
제10항에 있어서, 상기 화합물은 6번 위치에 R 구조를 가진 비대칭 중심을 포함하는 제약 조성물.
제11항에 있어서, 상기 화합물은 실질적으로 다른 이성질체가 존재하지 않는 제약 조성물.
제11항에 있어서, 상기 화합물은 라세믹 혼합물, 또는 개별적인 부분입체이성질체 또는 거울 이성질체로 존재하는 제약 조성물.
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