KR101486066B1 - 절대혐기성 미생물 배양용 혐기배양기 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 절대혐기성 미생물의 고체배양용 배양기에 있어서, 가스 치환 및 가스 가압용 부틸러버스토퍼(butyl rubber stopper)가 장착되어 있는 것을 특징으로 하는 절대혐기성 미생물의 고체배양용 배양기에 관한 것이다.
발명에 따르면, 산소오염없이 절대혐기성 미생물을 간편하게 고체 배양할 수 있어, 기존의 절대혐기성 미생물의 배양 뿐만 아니라, 이산화탄소와 전자로 부터 메탄 등의 전자연료를 생산할 수 있는 전자연료 생산 미생물의 스크리닝에 효율적으로 사용될 수 있다.

Description

절대혐기성 미생물 배양용 혐기배양기{Anaerobic Culture Jar for Incubating Obligate Anearobic Microorganisms}
본 발명은 절대혐기성 미생물의 고체배양용 배양기에 관한 것으로, 가스 치환 및 가스 가압용 부틸러버스토퍼(butyl rubber stopper)가 장착되어 있는 것을 특징으로 하는 절대혐기성 미생물의 고체배양용 배양기에 관한 것이다.
전기를 이용해 아세테이트, 부탄올, 메탄 등과 같은 유기분자를 만들 수 있는 미생물들이 최근 알려지면서, 이 미생물들을 이용하여 바이오연료를 생성하도록 하는 연구가 수행되고 있다.
전자연료의 개발은 미국 에너지부 Arpa-e (Advanced Research Projects Agency-Energy)에 의하여 주도되고 있으며, 식물, 조류 등 광합성 유기체 보다 효율적인 바이오 연료 제조법을 대상으로 하며, 에탄올, 부탄올 등과 같은 연료를 직접 만들어 현재 사회기반시설을 그대로 이용하는 것이 가능하도록 하는 것을 목표로 삼고 있으며, 광합성을 이용하지 않고 이산화탄소를 바로 유기물질로 전환시킬 수 있는 유기체를 이용하여 수행하는 것을 목표로 하고 있으며, 전기를 이용해 아세테이트와 같은 유기분자를 만드는 미생물이 밝혀져 이들 미생물들을 연구하여 액체 연료를 생성하는 방법에 대한 연구가 수행중이다.
Microbial electrosynthesis를 통해 전자와 이산화탄소로부터 유기물을 합성할 수 있는 미생물로 보고된 균주는 Sporomusa균주, Clostridium균주 및 Moorella균주 등의 절대혐기성 균주들이 알려져 있으며, 이산화탄소로부터 유기물 합성이 가능한 균주의 스크리닝을 위해서는 산소가 완벽히 차단된 조건에서의 배양하는 방법의 개발이 요구되고 있다.
한편, 기존의 탄소고정 및 질소고정의 절대혐기성 미생물 배양을 위한 혐기jar의 경우, 뚜껑부분에 가스를 주입하거나 빨아들이는 관이 달려있어 혐기 jar 내의 가스를 다른 가스로 치환하고 싶을 경우, 우선 진공펌프를 연결하여 혐기 jar 내의 가스를 제거하고 다시 원하는 가스를 집어넣고 가압을 함으로써 혐기jar 내의 상태를 혐기성으로 유지하였다. 그러나 이 경우, 관을 진공펌프나 가스통에 연결하는 과정에서 미량의 산소가 혐기 jar 내로 주입되게 되고 따라서 미량으로 들어간 산소를 제거하기 위한 별도의 조치를 취해야 했었다.
배양용기에 러버스토퍼를 사용한 기술로는 러버스토퍼를 구비하는 배양용기에서 센서디바이스가 스토퍼에 위치하고, 캐눌라가 러버스토퍼를 관통하는 기술이 있으며(EP0790299A2), 이 기술에서는 러버스토퍼가 가스치환용이 아닌 센서디바이스용 캐눌라를 관통시키는데 사용되고 있었다.
이에, 본 발명자들은 절대혐기성 미생물을 배양하는데 있어서, 산소오염 가능성을 완벽히 제거하며 동시에 원하는 가스(수소, 질소 또는 이산화탄소)를 치환할 수 있는 배양용기를 개발하고자 예의 노력한 결과, 배양용기의 뚜껑에 부틸러버 스토퍼를 장착시키는 경우, 산소오염 없이, 간편하게 부틸러버스토퍼를 통하여 주사바늘로 가스의 치환 및 가압이 가능하다는 것을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 목적은 절대 혐기성 미생물을 배양하는데 사용되는 배양기에 있어서, 가스치환 시에 산소오염 가능성이 없고, 진공펌프가 필요없는 고체배지 배양기로 특히 전자합성이 가능한 절대혐기성 미생물의 스크리닝에 유용하게 사용될 수 있는 절대혐기성 배양기를 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 절대혐기성 미생물의 고체배양용 배양기에 있어서, 가스 치환 및 가스 가압을 위하여, 러버스토퍼(butyl rubber stopper)가 장착되어 있는 것을 특징으로 하는 절대혐기성 미생물의 고체배양용 배양기를 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 절대혐기성 미생물의 고체배양용 배양기를 이용하는 것을 특징으로 하는 절대혐기성 전자합성 미생물의 배양방법을 제공한다.
발명에 따르면, 산소오염 없이 절대혐기성 미생물을 간편하게 고체 배양할 수 있어, 기존의 절대혐기성 미생물의 배양 뿐만 아니라, 이산화탄소와 전자로 부터 아세테이트, 부탄올, 메탄 등의 전자연료를 생산할 수 있는 전자연료 생산 미생물의 스크리닝에 효율적으로 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 부틸러버스토퍼(butyl rubber stopper)가 장착되어 있는 절대혐기성 미생물의 고체배양용 배양기를 나타낸 사진이다.
도 2는 본 발명에 따른 부틸스토퍼가 장착된 배양기의 뚜껑의 윗면과 아랫면을 나타낸 사진이다.
도 3은 본 발명에 따른 절대혐기성 미생물의 고체배양용 배양기에서의 가스 치환 및 가압과정을 나타낸 사진이다.
도 4는 신규 분리된 신종 절대혐기성 미생물의 전자합성에 의한 유기물 합성 결과를 나타낸 것이다.
본 발명은 절대혐기성 미생물의 고체배양용 배양기에 있어서, 가스 치환 및 가스 가압을 위하여, 러버스토퍼(rubber stopper)가 장착되어 있는 것을 특징으로 하는 절대혐기성 미생물의 고체배양용 배양기에 관한 것이다.
본 발명에 있어서, 상기 가스치환 및 가스 가압은 관이 연결된 주사바늘을 통하여 수행되는 것을 특징으로 할 수 있으며, 상기 가스 치환 및 가스 가압은 진공펌프를 사용하지 않는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 러버스토퍼는 부틸러버스토퍼(butyl rubber stopper)인 것을 특징으로 할 수 있다.
기존의 혐기성 미생물 배양을 위한 혐기배양기는 가스 주입 및 배출 시에, 뚜껑에 연결된 관을 진공펌프에 연결하여, 혐기 배양기 내의 가스를 제거하고, 원하는 가스를 집어 넣고 가압하여 배양기 내를 혐기상태로 유지하였으나, 이 경우, 진공펌프나 관을 통하여 산소의 주입을 피할 수 없어, 미량의 산소가 배양기 내로 들어가게 되고, 이러한 산소오염은 산소에 민감한 탄소 또는 질소 고정 절대 혐기성 미생물의 고체배양 또는 colony형성을 어렵게 하므로, 이를 제거하기 위한 별도의 방법(산소제거 팩 삽입)이 필요하였다.
본 발명의 혐기배양기는 배양기의 뚜껑 내에 조그만 천공을 내고 이 천공을 부틸러버스토퍼(butyl rubber stopper)로 밀폐시키고, 가스를 치환할 때, 진공펌프를 사용하지 않고, 주사기 바늘과 가스관을 사용하여, 기존 가스를 제거하고 원하는 가스로 치환하도록 하였다 (도 1 및 도 2).
본 발명의 혐기배양기를 사용하면, 가스를 치환하는 과정에서 전혀 산소가 혐기jar내에 들어가지 않아 별도의 산소제거 조치를 취하지 않고도 쉽게 탄소 또는 질소 고정의 절대혐기성 미생물을 고체배양 할 수 있다(도 3).
본 발명에 의한 혐기 배양기를 사용한 경우, 기존 혐기 jar를 사용한 경우 보다 더빠른 시간 내에 효율적으로 가스이용 절대 혐기성 미생물 colony를 획득할 수 있음을 확인하였다.
기존 혐기 배양기의 경우, 가스 치환 및 가압 시에 산소에 의한 오염으로 산소 indicator인 resazurin이 함유된 고체배지의 색이 적색으로 변하여 산소를 제거하고 배지색이 원래의 색으로 돌아오는데 짧게는 반나절에서 길게는 하루 이상을 기다려야 하였으나, 본 발명의 혐기배양기를 사용한 경우, 산소가 혐기 배양기 내로 전혀 들어가지 않아 혐기 배양기 내의 고체배지의 색깔에 변화가 없었으며, 기존 혐기배양기의 경우 가스치환 과정에서 오염된 산소를 제거하기 위하여 gaspack이나 촉매 등의 산소제거작업을 하여야 하나 본 발명의 혐기배양기의 경우, 가스치환과정에서 산소가 전혀 오염되지 않아 산소제거과정을 거치지 않고서도 절대혐기성 미생물의 colony가 기존 혐기 배양기를 이용한 경우보다 더많이 더빠른 시간내에 형성됨을 확인하였다.
다른 관점에서, 본 발명은 상기 절대혐기성 미생물의 고체배양용 배양기를 이용하는 것을 특징으로 하는 절대혐기성 미생물의 배양방법을 제공한다.
본 발명의 일 양태에서는 혐기 배양기(jar)에 부틸러버스토퍼(butyl rubber stopper)를 장착하여, 상기 부틸러버스토퍼를 통하여 가스를 치환시켜, 기존의 혐기 배양기와달리 가스치환을 위한 진공펌프가 필요하지 않으며, 산소의 오염가능성을 완벽히 제거하였고, 이를 통해 electrofuel을 생산할 수 있는 후보미생물을 효율적으로 스크리닝할 수 있다.
따라서, 본 발명에 있어서, 상기 절대 혐기성 미생물은 전자연료(electrofuel)를 생산하는 절대 혐기성 미생물인 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에 있어서 상기 전자연료를 생산하는 절대 혐기성 미생물은 Sporomusa균주, Clostridium균주 및 Moorella균주 등을 들 수 있으나 이에 국한되는 것은 아니다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시에는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: Sporomusa 균주, Clostridium 균주 및 Moorella 균주의 고체배양
본 발명 러버스토퍼 부착 절대혐기성 미생물의 고체배양용 배양기를 이용하여, 기존의 미생물 전자합성(microbial electrosynthesis)을 통해 아세테이트 및 2-oxobutyrate를 생산하는 것으로 알려진 표준미생물인 Sporomusa ovata (=DSM 2662T), Clostridium ljungdahlii (=DSM 13528T) 및 Moorella thermoacetica (=DSM 21394)의 고체배양을 통한 콜로니 형성을 확인하였다.
Sporomusa ovata (=DSM 2662T) 배양에는 DSM medium 311(표 1) 배지에서 betaine, fructose, Casitone, resazurin를 첨가하지 않은 배지를 사용하였고, Clostridium ljungdahlii (=DSM 13528T)의 배양에는 DSM medium 879(표 2) 배지에서 fructose를 첨가하지 않은 배지를 사용하였으며, Moorella thermoacetica (=DSM 21394)의 배양에는 DSM medium 60(표 3)에서 fructose, glucose를 첨가하지 않고 yeast extract는 1 gL-1로 양을 줄인 배지를 사용하였다.
Figure 112011091013190-pat00001
Figure 112011091013190-pat00002
Figure 112011091013190-pat00003
혐기챔버 시설을 이용하여 절대혐기의 조건에서 상기 3 균주의 액체배양액을 고체배지에 도말하고 도말된 고체배지를 본 발명의 고체배양기에 넣고 두껑을 닫아 밀폐시킨 후에 배양기내의 가스치환을 위해 고체배양기를 혐기챔버에서 꺼내 gassing manifold 시스템 (도 3)에 연결시켰다.
Gassing manifold system (도 3)에서 하나의 가스라인을 주사기에 연결(가스주입라인)하여 수소:이산화탄소 (80:20) 혼합가스를 본 발명의 고체배양기의 러버스토퍼를 통해 주입하고 주사기가 연결되지 않은 주사기바늘(가스배출용)을 연결하여 고체배양기 안의 기존 질소가스를 배출하여 고체배양기 내의 가스상태를 수소:이산화탄소 (80:20) 혼합가스로 치환하도록 한다 (도 3a). 20분간 가스치환을 한 후에 주사기가 연결되지 않은 주사기바늘을 제거함으로써 고체배양기 내에 수소:이산화탄소 (80:20) 혼합가스가 계속해서 주입되도록하고 고체배양기에 부착된 압력게이지를 통해 수소:이산화탄소 (80:20) 혼합가스 압력이 3기압에 도달하게 되면 연결된 라인을 제거함으로써 고체배양기 내의 압력이 3기압을 유지하도록 하였다 (도 3b).
그 결과, 상기 3가지 균주의 콜로니가 모두 1-2일 이내에 형성됨을 확인하였으며, 이는 기존의 절대혐기 고체배양기를 사용하였을 때에 비해 더 많은 콜로니가 최소 2-4일 정도 더 빠르게 형성되는 것을 확인할 수 있다.
실시예 2: 절대혐기성 미생물 고체배양을 통한 신규 전자합성 미생물 선별
환경시료로부터 전자합성 미생물 혼합배양을 수행하였다. 하수 슬러지 및 갯벌에서 채취한 시료를 이용하여 reverse microbial fuel cell에 접종하여 전극(electrode) 내에 미생물 바이오필름이 형성되도록 한 후 (Nevin et al.의 방법 - Applied and Environmental Microbiology, 77:2882-2886, 2011), 미생물 전자합성 모드(microbial electrosynthesis mode)에서 지속적으로 배양하였다.
상기 형성된 미생물 바이오필름을 절대혐기조건에서 채취하여 이를 실시예 1에서와 같은 방법으로 고체배지에 도말하고 single colony isolation을 하여 전자함성이 가능할 것으로 추정되는 미생물을 순수 분리하였으며, 분리된 미생물에는 상기의 Sporomusa, Clostridium균주 및 Moorella 균주 이외에 기존에 보고되지 않은 배양되지 않았던 박테라아(uncultured bacterium) 3종이 분리되었고, 이들은 16S rDNA 시퀀싱 결과 새로운 genus의 미생물인 것으로 동정되었으며, 기존의 절대혐기 고체배양기를 사용하였을 경우에는 이러한 신규 박테리아가 분리되지 않았다.
상기 신규 분리된 미생물의 전자합성여부를 분석하였다. 신규 분리된 미생물을 revesrse microbial fuel cell 내에서 배양하여 아세테이트와 2-oxobutyrate 형성여부를 HPLC를 통해 분석하여 신종으로 분리된 이들 미생물 모두에서 전자합성이 가능한 것을 확인하였다 (도 4).
본 발명의 고체배양기를 사용하였을 경우 기존의 고체배양기에서 확인되지 않는 다양한 절대혐기성 미생물이 분리되었으며, 이 중 전자합성이 가능한 균주가 더 존재할 것으로 추정된다.
이상으로, 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (6)

  1. 절대혐기성 미생물의 고체배양용 배양기에 있어서, 가스 치환 및 가스 가압용 부틸러버스토퍼(butyl rubber stopper)가 장착되어 있고, 가스 가압은 관이 연결된 주사바늘을 통하여 수행되며, 진공펌프를 사용하지 않는 것을 특징으로 하는 절대혐기성 미생물의 고체배양용 배양기.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제1항에 있어서, 절대 혐기성 미생물은 전자연료(electrofuel)를 생산하는 절대 혐기성 미생물인 것을 특징으로 하는 절대혐기성 미생물의 고체배양용 배양기.
  6. 제1항 또는 제5항 중 어느 한 항의 절대혐기성 미생물의 고체배양용 배양기를 이용하는 것을 특징으로 하는 절대혐기성 미생물의 배양방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006025617A (ja) * 2004-07-12 2006-02-02 Oyo Corp フレキシブル培養バッグ及びそれを用いる嫌気培養試験装置
JP2009178055A (ja) * 2008-01-29 2009-08-13 Ihi Corp 高圧試験方法および装置

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006025617A (ja) * 2004-07-12 2006-02-02 Oyo Corp フレキシブル培養バッグ及びそれを用いる嫌気培養試験装置
JP2009178055A (ja) * 2008-01-29 2009-08-13 Ihi Corp 高圧試験方法および装置

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