KR101462206B1 - 트립토판 대사 변화를 이용한 위암 진단용 기초 정보 제공 방법 - Google Patents

트립토판 대사 변화를 이용한 위암 진단용 기초 정보 제공 방법 Download PDF

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Abstract

본 명세서에 개시되는 기술은 일측면에서 트립토판 대사 비율을 이용한 위암 진단을 위한 기초 정보 제공에 관한 것으로서, 정상인과 차별화되는 위암환자의 트립토판 대사 비율변화를 이용한 발명에 관한 것이다.

Description

트립토판 대사 변화를 이용한 위암 진단용 기초 정보 제공 방법 {METHOD FOR PROVIDING BASIC INFORMATION FOR DIAGNOSING STOMACH CANCER USING THE CHANGE OF TRYPTOPHAN METABOLISM}
본 명세서에 개시되는 기술은 일측면에서 트립토판 대사 비율을 이용하여 암 발생여부를 판단하는데 도움이 되는 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다.
트립토판은 필수아미노산으로 그 자체가 체단백을 구성할 뿐 아니라 다양한 생리활성을 갖는 물질들의 전구체 역할을 한다. 인체 내 트립토판의 대사경로는 크게 3가지로 구성된다. 세로토닌(serotonin) 경로, 키누레닌(kynurenine) 경로, 장내 미생물에 의한 대사경로이다. 세로토닌 경로에서는 트립토판 대사효소인 트립토판 하이드록실레이즈(tryptophan hydroxylase；TPH)에 의해 트립토판으로부터 세로토닌이 생합성된다. 카이뉴레린 경로에서는 인돌아민-피롤 2,3-디옥시게나제(indoleamine-pyrrole 2,3-dioxygenase, IDO)와 트립토판 2,3-디옥시게나제(tryptophan 2,3-dioxygenase, TDO)에 의해 트립토판이 키누레닌(kynurenine)으로 분해된다. 이후 키누레닌(kynurenine)은 안트라닐산(anthranilic acid), 니코틴아마이드(nicotinamide), 니코틴산(nicotinic acid)으로 대사된다. 장내 미생물에 의한 대사경로에서는 트립토판이 장내 미생물에 의해 인돌(indole)로 분해되고, 간으로 전달되며 간에서 인돌 설페이트(3-indoxyl sulfate)로 대사되어 신장으로 배설된다.
1. Zhu W, Stevens AP, Dettmer K, Gottfried E, Hoves S, Kreutz M, Holler E, Canelas AB, Kema I, Oefner PJ. Quantitative profiling of tryptophan metabolites in serum, urine, and cell culture supernatants by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Anal Bioanal Chem. 2011 Dec;401(10):3249-61. 2. Surjana D, Halliday GM, Damian DL. Role of nicotinamide in DNA damage, mutagenesis, and DNA repair. J Nucleic Acids. 2010; 2010: 157591. 3. Sucher R, Kurz K, Weiss G, Margreiter R, Fuchs D, Brandacher G. IDO-Mediated Tryptophan Degradation in the Pathogenesis of Malignant Tumor Disease. Int J Tryptophan Res. 2010;3:113-20.
본 발명은 일측면에서 사람의 혈액 중 트립토판 대사의 변화 및 그 비율의 변화를 이용하여 위암 진단에 기초자료로서 이용될 수 있는 정보를 제공하고자 한다.
본 발명은 다른 일측면에서 사람의 혈액 중에 포함된 트립토판, 안트라닐산, 세로토닌, 키누레닌, 인돌 설페이트, 니코틴산 및 니코틴아마이드의 농도 변화를 통해서 위암 진단에 기초자료로서 이용될 수 있는 정보를 제공하고자 한다.
본 발명은 또 다른 일측면에서 사람의 혈액 중 트립토판 대사 비율을 이용하여 혈액을 분석하는 방법을 제공하고자 한다.
본 발명은 또 다른 일측면에서 사람의 혈액 중에 포함된 트립토판, 안트라닐산, 세로토닌, 인돌 설페이트, 니코틴산 및 니코틴아마이드의 농도 변화를 통해서 혈액을 분석하는 방법을 제공하고자 한다.
본 발명은 일측면에서, 평가 대상으로부터 채취한 혈액 중 트립토판, 안트라닐산, 세로토닌, 키누레닌, 인돌 설페이트, 니코틴산 및 니코틴아마이드 농도를 측정하는 단계; 및 혈액 중에 포함된 트립토판, 안트라닐산, 세로토닌, 키누레닌 및 인돌 설페이트로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 농도가 정상인의 혈중 농도보다 낮거나, 혈액 중에 포함된 니코틴산 및 니코틴아마이드로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 농도가 정상인의 혈중 농도보다 높은 경우 위암 가능성이 있는 것으로 정보를 제공하는 단계를 포함하는 위암 진단용 기초 정보 제공 방법을 제공한다.
다른 일측면에서, 본 발명은 정상인에 비하여 혈액 중에 포함된 안트라닐산/트립토판의 농도비 감소, 세로토닌/트립토판의 농도비 감소, 키누레닌/트립토판의 농도비 증가, 니코틴산/트립토판의 농도비 증가, 및 니코틴아마이드/트립토판의 농도비 증가로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상에 해당되는 경우 위암 가능성이 있는 것으로 정보를 제공하는 것을 포함하는 위암 진단용 기초 정보 제공 방법을 제공한다.
또 다른 일측면에서, 본 발명은 안트라닐산/트립토판의 농도비가0.0005~0.003, 세로토닌/트립토판의 농도비가 0.003~0.006, 키누레닌/트립토판의 농도비가 0.01~0.04, 니코틴산/트립토판의 농도비가 0.005~0.02, 및 니코틴아마이드/트립토판의 농도비가 0.05~0.08로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상에 해당되는 경우 위암 가능성이 있는 것으로 정보를 제공하는 것을 포함하는 위암 진단용 기초 정보 제공 방법을 제공한다.
본 발명은 일측면에서, 평가 대상으로부터 채취한 혈액 중 트립토판, 안트라닐산, 세로토닌, 키누레닌, 인돌 설페이트, 니코틴산 및 니코틴아마이드 농도를 측정하는 단계; 및 혈액 중에 포함된 트립토판, 안트라닐산, 세로토닌, 키누레닌 및 인돌 설페이트로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 농도가 정상인의 혈중 농도보다 낮거나, 혈액 중에 포함된 니코틴산 및 니코틴아마이드로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 농도가 정상인의 혈중 농도보다 높은지 여부를 체크하는 단계를 포함하는 혈액 분석 방법을 제공한다.
다른 일측면에서, 본 발명은 정상인에 비하여 혈액 중에 포함된 안트라닐산/트립토판의 농도비 감소, 세로토닌/트립토판의 농도비 감소, 키누레닌/트립토판의 농도비 증가, 니코틴산/트립토판의 농도비 증가, 및 니코틴아마이드/트립토판의 농도비 증가로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상에 해당하는지 여부를 체크하는 것을 포함하는 혈액 분석 방법을 제공한다.
또 다른 일측면에서, 본 발명은 안트라닐산/트립토판의 농도비가0.0005~0.003, 세로토닌/트립토판의 농도비가 0.003~0.006, 키누레닌/트립토판의 농도비가 0.01~0.04, 니코틴산/트립토판의 농도비가 0.005~0.02, 및 니코틴아마이드/트립토판의 농도비가 0.05~0.08로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상에 해당하는지 여부를 체크하는 것을 포함하는 혈액 분석 방법을 제공한다.
일측면에서, 혈액에 포함된 트립토판과 대사체의 농도 변화, 또는 트립토판과 그 대사체의 비율 변화를 이용하여, 혈액 검사만을 통해서도 위암의 발병 여부를 쉽게 예측할 수 있는 기초 정보를 얻을 수 있다. 또한, 위암 발병여부를 조기에, 더 정확하게 진단할 수 있는 정보를 제공받을 수 있다.
도 1은 트립토판 및 그 대사체들의 혈중 농도를 나타낸 것이다. 도 1a는 트립토판과 그 대사체들을 분석한 전체를 포함하였고, 도 1b는 분석한 대사체들만 포함하였다.
도 2는 트립토판의 혈중 농도와 그 대사체들의 혈중 농도와의 비율을 나타낸 것이다.
도 3은 정상 대조군과 위암 환자군에서 트립토판의 대사 경로 비율을 나타낸 것이다.
본 명세서에 개시되는 용어 "정상인"은 일측면에서, 건강한 정신과 신체 조건을 가진 사람을 포함한 포유동물을 의미하며, 다른 일측면에서 암에 걸리지 않은 사람을 의미한다.
본 명세서에 개시되는 용어 "평가 대상"은 일측면에서, 사람을 포함한 포유동물을 의미한다.
필수아미노산인 트립토판은 일부 대사체와 함께 암과 관련성이 있다. 또한 위암을 포함하여 다양한 암세포에서 키누레닌(kynurenine)의 대사경로가 활성화되어 있으며, 대사산물들 중 키누레닌(kynurenine)과 니코틴아마이드(nicotinamide)는 발암 기전에서 일정한 역할을 한다. 따라서 위암 환자들의 혈액에서 트립토판의 대사 경로를 탐색하여 그 변화 양상을 관찰하면, 수많은 위암 발생 여부를 판단할 수 있는 정보 내지 판단 기초 자료 중 하나로써 활용될 수 있는 기초 정보를 알 수 있다.
본 발명은 일측면에서 위암 환자들과 정상인들의 혈액 중에서 트립토판과 그 대사체들을 정량 분석하여 농도를 측정하고, 이로부터 트립토판 대비 각 대사체들의 비율을 계산하고, 정상인과 위암 환자의 대사 비율을 비교하여 그 차이를 이용하여 위암 진단에 기초자료로 사용될 수 있는 정보 또는 혈액 분석 방법을 제공한다. 또한, 위암 환자들과 정상인들의 혈액 중에 포함된 트립토판과 그 대사체들을 정량 분석하여, 혈액 중 트립토판과 그 대사체들의 혈중 농도 변화를 통해서, 위암 진단에 기초자료로 사용될 수 있는 정보 또는 혈액 분석 방법을 제공한다.
트립토판과 그 대사체인 세로토닌(serotonin), 키누레닌(kynurenine), 안트라닐산(anthranilic acid), 니코틴아마이드(nicotinamide), 니코틴산(nicotinic acid), 인돌 설페이트(3-indoxyl sulfate)를 농도를 측정한 결과, 위암 환자군에서 니코틴아마이드와 니코틴산의 혈중 농도가 정상인에 비해서 유의적으로 증가되었고, 트립토판, 세로토닌, 키누레닌, 안트라닐산, 및 인돌 설페이트의 혈중 농도는 정상인에 비해서 유의적으로 감소하였다. 또한 체내 트립토판의 대사비율을 확인하기 위해 트립토판의 혈중 농도 대비 각 대사체들의 혈중 농도 비율을 계산한 결과, 위암 환자군의 혈중에서의 “세로토닌/트립토판”, “안트라닐산/트립토판”의 비율은 정상 대조군의 혈중에서 보다 유의적으로 감소하였고, “키누레닌/트립토판", "니코틴아마이드/트립토판”, "니코틴산/트립토판"의 비율은 유의적으로 증가하였다.
일측면에서, 트립토판 대비 각 대사체들의 농도비에 있어서, 안트라닐산/트립토판의 농도비가 0.0005~0.003, 세로토닌/트립토판의 농도비가 0.003~0.006, 키누레닌/트립토판의 농도비가 0.01~0.04, 니코틴산/트립토판의 농도비가 0.005~0.02, 및 니코틴아마이드/트립토판의 농도비가 0.05~0.08로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상에 해당되는 경우 위암 가능성이 있는 것으로 판단될 수 있는 기초 정보 중 하나가 될 수 있다.
이하 본 발명의 실시예에서 보다 상세하게 설명한다. 이들 실시예는 예시적으로 본 발명을 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
실험대상 및 분석대상물질 표준용액 제조
1-1: 실험대상 환자와 환자 정보
위암 환자들 및 정상인들은 대한민국 서울에 소재한 서울성모병원에서 모집하였다. 위암환자군은 위암 1단계에서 4단계까지의 성인남녀 위암환자 66명을 포함하고, 정상 대조군에는 건강한 성인 남녀 39명을 포함하였다.
1-2 : 혈액 표본의 수집과 전처리
실험 참가자로부터 정맥혈을 얻은 후, 항응고제로서 EDTA가 표면 처리된 멸균 플라스틱 시험관에 채집하였고, 곧바로 원심분리를 시행하였다. 모든 표본은 사용하기 전까지 섭씨 -70도(℃)에 보관하였다.
선행문헌(Zhu W, et al. Quantitative profiling of tryptophan metabolites in serum, urine, and cell culture supernatants by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Anal Bioanal Chem. 2011 Dec;401(10):3249-61.)에 기술한 바와 같이, 메탄올을 이용한 제단백 방법을 사용하였다. 간단히 설명하자면, 상온에서 녹인 혈액 표본에 1% 포름산(formic acid) 수용액과 내부 표준물질용액(10 μM 트립토판-d3와 50 μM 키누레닌산-d5)을 일정 부피로 넣은 후 4배 부피의 차가운 메탄올(ice-cold methanol)을 첨가하고 수분 동안 완전히 섞어 준 후 원심분리를 시행하였다. 상층액을 일정량 수집하고, 질소가스 하에서 건조시킨 뒤 일정부피의 0.1% 포름산(formic acid) 수용액으로 다시 용해하여 LC-MS/MS 분석하였다.
1-3 : 트립토판과 그 대사체들을 분석하기 위한 표준용액 제조
분석 대상 물질은 트립토판, 세로토닌, 키누레닌, 안트라닐산, 니코틴아마이드, 니코틴산, 인돌 설페이트 등을 포함하였고 내부 표준물질로 트립토판-d3와 키누레닌산-d5를 사용하였다. 각 물질의 표준용액은 0.1% 포름산(formic acid) 수용액에 녹여 1μM이 되도록 제조하고 -80℃에 보관하였다. 분석에 사용하기 직전에 0.1% 포름산(formic acid) 수용액으로 일정한 농도까지 계열 희석하여 분석에 사용하였다.
액체크로마토그래피-질량분석기(LC-MS/MS) 분석법
트립토판 포함 총 7종의 물질 분석은 액체크로마토그래피-질량분석기(liquid chromatography-Tandem Mass Spectrometry; LC-MS/MS)를 사용하였다. ESI(electrospray ionization)의 포지티브 모드(positive mode)와 네거티브 모드(negative mode)를 순간적으로 전환하면서 MRM(multiple reaction monitoring) 모드(mode)로 동시 분석하였다. LC 컬럼(column)은 Atlantis T3 (2.1×150 mm, 3 μm)를 사용하였고, 컬럼(column) 온도와 auto-sampler 온도는 각각 35 ℃, 4 ℃로 설정하였다. 이동상으로는 0.1% 포름산(formic acid)이 포함된 5% 메탄올(이동상 A)과 0.1% 포름산(formic acid)이 포함된 95% 메탄올(이동상 B)을 사용하여 gradient condition으로 분석하였다.
위암 환자군과 정상 대조군의 혈액 중 트립토판 및 그 대사체들의 정량 분석
모든 시료표본에서 얻어진 트립토판 및 그 대사체의 질량분석 데이터를 해당 검량선에 적용하여 혈중 농도를 계산하였다. 정상 대조군과 위암 환자군의 트립토판 및 그 대사체들의 혈중농도를 비교하였을 때, 유의적 차이는 스튜던트 t-test를 실시하여 검증하였다. 그 결과는 표 1 및 도 1a, 1b에 나타내었다.
물질명 정상 대조군의 혈중 농도 위암 환자군의 혈중 농도 P-값
평균 표준편차 평균 표준편차
트립토판(Tryptophan) 65.72821 1.53674 40.29705 2.54039 <0.01
안트라닐산(Anthranilic acid) 0.900513 0.1519605 0.041268 0.01693 <0.01
세로토닌(Serotonin) 0.800128 0.106607 0.147875 0.044741 <0.01
니코틴산(Nicotinic acid) 0.149667 0.012755 0.352834 0.035486 <0.01
니코틴아마이드(Nicotinamide) 0.095062 0.001432 1.63071 0.740712 <0.01
키누레닌(Kynurenine) 1.351282 0.482658 0.992892 0.739419 0.09
인돌 설페이트(3-Indoxyl sulfate) 7.585641 0.78212 3.026382 0.343759 <0.01
상기 표 1에서 알 수 있듯이 정상 대조군에 비해 위암 환자군에서 트립토판, 안트라닐산, 세로토닌, 키누레닌 및 인돌 설페이트의 혈중 농도는 유의적으로 감소하였고, 니코틴 아마이드와 니코틴산은 유의적으로 증가하였다.
트립토판의 대사 경로 비율 확인
정상 대조군과 위암 환자군의 대사 경로 비율을 확인하기 위해서, 트립토판의 혈중 농도에 대한 각 대사체의 혈중 농도의 비를 산정하고, 두 군의 차이를 비교하였다. 유의적 차이는 스튜던트 t-test를 실시하여 검증하였고 그 결과는 표 2에 나타내었다. 또한, 트립토판과 그 대사체들의 혈중 농도 비율을 도 2에 나타내었다.
비율 정상 대조군의 혈중 농도비 위암 환자군의 혈중 농도비 P-값
평균 표준편차 평균 표준편차
안트라닐산/트립토판(Anthranilic acid/Tryptophan) 0.013576 0.001249 0.001372 0.000649 0.001249
세로토닌/트립토판(Serotonin/Tryptophan) 0.012401 0.004304 0.004381 0.000466 0.004304
니코틴산/트립토판(Nicotinic acid/Tryptophan) 0.002289 0.001141 0.01047 0.000562 0.001141
니코틴아마이드/트립토판(Nicotinamide/Tryptophan) 0.001465 0.000155 0.068215 0.001107 0.000155
키누레닌/트립토판(Kynurenine/Tryptophan) 0.020768 0.001466 0.025921 0.004704 0.001466
인돌 설페이트/트립토판(3-Indoxyl sulfate/Tryptophan) 0.01209 0.0065383 0.007602 0.0050593 0.065383
상기 표 2에서 알 수 있듯이, 위암 환자군의 혈중에서의 “세로토닌/트립토판”, “안트라닐산/트립토판”의 비율은 정상 대조군보다 유의적으로 감소하였고, “키누레닌/트립토판”,"니코틴아마이드/트립토판”, "니코틴산/트립토판"의 비율은 유의적으로 증가하였다. 이를 통해서 위암 환자군에서 트립토판의 대사경로 중 세로토닌 경로로의 대사비율은 감소하였고 키누네린 경로의 대사비율은 증가하였으며, 장내 미생물에 의한 경로의 대사비율은 영향을 받고 있지 않음을 확인하였다.
일측면에서 안트라닐산/트립토판의 농도비가 0.0001~0.010, 세로토닌/트립토판의 농도비가 0.001~0.010, 키누레닌/트립토판의 농도비가 0.005~0.10, 니코틴산/트립토판의 농도비가 0.001~0.10, 및 니코틴아마이드/트립토판의 농도비가 0.01~0.15 중 하나 이상에 해당되는 경우 위암 가능성이 있는 것으로 정보를 제공할 수 있다.
다른 일측면에서 안트라닐산/트립토판의 농도비는 0.0001~0.010, 0.0002~0.007, 또는 0.0003~0.005일 수 있다. 일측면에서 세로토닌/트립토판의 농도비는 0.001~0.010, 0.001~0.008, 또는 0.002~0.007일 수 있다. 일측면에서 키누레닌/트립토판의 농도비는 0.005~0.10, 0.007~0.08, 또는 0.008~0.06일 수 있다. 일측면에서 니코틴산/트립토판의 농도비는 0.001~0.10, 0.003~0.08, 또는 0.003~0.05일 수 있다. 일측면에서 니코틴아마이드/트립토판의 농도비는 0.01~0.15, 0.02~0.12, 또는 0.03~0.10일 수 있다.
또 다른 일측면에서 안트라닐산/트립토판의 농도비가 0.0005~0.003, 세로토닌/트립토판의 농도비가 0.003~0.006, 키누레닌/트립토판의 농도비가 0.01~0.04, 니코틴산/트립토판의 농도비가 0.005~0.02, 및 니코틴아마이드/트립토판의 농도비가 0.05~0.08 중 하나 이상에 해당되는 경우 위암 가능성이 있는 것으로 정보를 제공할 수 있다.
정상 대조군과 위암 환자군에서의 각 대사경로의 비율은 “세로토닌/트립토판”, “키누레닌/트립토판”, “인돌설페이트/트립토판”을 비교하여 산정하였고, 그 결과는 표 3와 도 3에 나타내었다.
세로토닌 경로 키누네린 경로 장내 미생물 경로
정상 대조군 1.24 2.08 1.2
위암환자군 0.4 2.5 0.7

Claims (14)

  1. 평가 대상으로부터 채취한 혈액 중 트립토판, 안트라닐산, 세로토닌, 키누레닌, 인돌 설페이트, 니코틴산 및 니코틴아마이드 농도를 측정하는 단계; 및
    혈액 중에 포함된 트립토판, 안트라닐산, 세로토닌, 키누레닌 및 인돌 설페이트로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 농도가 정상인의 혈중 농도보다 낮거나, 혈액 중에 포함된 니코틴산 및 니코틴아마이드로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 농도가 정상인의 혈중 농도보다 높은 경우 위암 가능성이 있는 것으로 정보를 제공하는 단계;
    를 포함하는 위암 진단용 기초 정보 제공 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 정보를 제공하는 단계는 정상인에 비하여 혈액 중에 포함된 안트라닐산/트립토판의 농도비 감소, 세로토닌/트립토판의 농도비 감소, 키누레닌/트립토판의 농도비 증가, 니코틴산/트립토판의 농도비 증가, 및 니코틴아마이드/트립토판의 농도비 증가로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상에 해당되는 경우 위암 가능성이 있는 것으로 정보를 제공하는 것인, 위암 진단용 기초 정보 제공 방법.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 정보를 제공하는 단계는 안트라닐산/트립토판의 농도비가 0.0005~0.003, 세로토닌/트립토판의 농도비가 0.003~0.006, 키누레닌/트립토판의 농도비가 0.01~0.04, 니코틴산/트립토판의 농도비가 0.005~0.02, 및 니코틴아마이드/트립토판의 농도비가 0.05~0.08로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상에 해당되는 경우 위암 가능성이 있는 것으로 정보를 제공하는 것인, 위암 진단용 기초 정보 제공 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 농도를 측정하는 단계는 메탄올을 이용한 제단백 방법을 사용하여 혈액을 전처리하는 것을 포함하는 것인, 위암 진단용 기초 정보 제공 방법.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 농도를 측정하는 단계는 포름산 수용액을 이용하여 표준용액을 제조하는 것을 포함하는 것인, 위암 진단용 기초 정보 제공 방법.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 농도를 측정하는 단계는 액체크로마토그래피-질량분석기를 이용하여 질량을 분석하는 것을 포함하는 것인, 위암 진단용 기초 정보 제공 방법.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 액체크로마토그래피-질량분석기의 이용은 ESI(electrospray ionization)의 포지티브 모드(positive mode) 및 네거티브 모드(negative mode)를 전환하면서 MRM(multiple reaction monitoring) 모드(mode)로 분석하는 것을 더 포함하는 것인, 위암 진단용 기초 정보 제공 방법.
  8. 평가 대상으로부터 채취한 혈액 중 트립토판, 안트라닐산, 세로토닌, 키누레닌, 인돌 설페이트, 니코틴산 및 니코틴아마이드 농도를 측정하는 단계; 및
    혈액 중에 포함된 트립토판, 안트라닐산, 세로토닌, 키누레닌 및 인돌 설페이트로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 농도가 정상인의 혈중 농도보다 낮거나, 혈액 중에 포함된 니코틴산 및 니코틴아마이드로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 농도가 정상인의 혈중 농도보다 높은지 여부를 체크하는 단계;
    를 포함하는 혈액 분석 방법.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 체크하는 단계는 정상인에 비하여 혈액 중에 포함된 안트라닐산/트립토판의 농도비 감소, 세로토닌/트립토판의 농도비 감소, 키누레닌/트립토판의 농도비 증가, 니코틴산/트립토판의 농도비 증가, 및 니코틴아마이드/트립토판의 농도비 증가로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상에 해당하는지 여부를 체크하는 것인, 혈액 분석 방법.
  10. 제8항에 있어서,
    상기 체크하는 단계는 안트라닐산/트립토판의 농도비가 0.0005~0.003, 세로토닌/트립토판의 농도비가 0.003~0.006, 키누레닌/트립토판의 농도비가 0.01~0.04, 니코틴산/트립토판의 농도비가 0.005~0.02, 및 니코틴아마이드/트립토판의 농도비가 0.05~0.08로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상에 해당하는지 여부를 체크하는 것인, 혈액 분석 방법.
  11. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 농도를 측정하는 단계는 메탄올을 이용한 제단백 방법을 사용하여 혈액을 전처리하는 것을 포함하는 것인, 혈액 분석 방법.
  12. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 농도를 측정하는 단계는 포름산 수용액을 이용하여 표준용액을 제조하는 것을 포함하는 것인, 혈액 분석 방법.
  13. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 농도를 측정하는 단계는 액체크로마토그래피-질량분석기를 이용하여 질량을 분석하는 것을 포함하는 것인, 혈액 분석 방법.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 액체크로마토그래피-질량분석기의 이용은 ESI(electrospray ionization)의 포지티브 모드(positive mode) 및 네거티브 모드(negative mode)를 전환하면서 MRM(multiple reaction monitoring) 모드(mode)로 분석하는 것을 더 포함하는 것인, 혈액 분석 방법.
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