KR101454671B1

KR101454671B1 - 미생물 보호제 및 미생물의 동결 또는 동결건조 균체의 제조 방법

Info

Publication number: KR101454671B1
Application number: KR1020107018524A
Authority: KR
Inventors: 나오키 아즈마; 마사유키 와타나베; 히로시 우에노; 토시미츠 요시오카
Original assignee: 유키지루시 메그밀크 가부시키가이샤
Priority date: 2008-02-07
Filing date: 2009-02-03
Publication date: 2014-10-27
Also published as: EP2241615B1; US20110008875A1; KR20100131436A; NZ587266A; EP2241615A4; WO2009099075A1; AU2009211713B2; JP2009183221A; EP2241615A1; JP5270925B2; AU2009211713A1; ES2529359T3

Abstract

균체의 손상 또는 사멸을 방지하여 높은 생잔율을 가지는 미생물균체의 동결 또는 동결건조 공정에 있어서의 제조 방법을 제공한다.
동결시 또는 동결건조시의 보호제로서 젖 또는 유청을 한외여과(UF)막 처리함으로써 얻어지는 투과액을 사용하여, 높은 생잔율을 가지는 동결 또는 동결건조 미생물균체를 제조하는 방법.

Description

미생물 보호제 및 미생물의 동결 또는 동결건조 균체의 제조 방법{MICROORGANISM-PROTECTING AGENT, AND METHOD FOR PRODUCTION OF FROZEN OR LYOPHILIZED MICROBIAL CELL}

본 발명은 미생물의 동결 또는 동결건조 균체의 제조 방법, 이 제조 방법에 의해 얻어지는 균체 및 보호제에 관한 것이다. 보다 상세하게 서술하면, 젖 또는 유청을 한외여과(UF)막 처리하여 얻어지는 투과액(퍼미에이트)을 미생물균체와 혼합하여, 동결 또는 동결건조하는 것을 특징으로 하는 동결 또는 동결건조 미생물균체의 제조 방법, 이 제조 방법에 의해 얻어지는 균체 및 보호제에 관한 것이다. 또한, 본 명세서에 있어서 비피도박테리움(Bifidobacterium)에 속하는 미생물을 비피더스 균, 비피더스 균 이외의 유산균을 유산균 등, 비피더스 균 및 유산균 등을 합쳐서 유산균류라고 기재하는 경우가 있다.

유용한 장내 세균의 하나로서 널리 알려져 있는 비피더스 균은 식품의 제조에 널리 이용되고 있으며, 발효유, 유산균 음료 등의 유제품을 제조할 때에 사용되고 있다. 또한 최근에는 장내 유해균 억제 작용·감염 방어 작용(예를 들어, 비특허문헌 1 참조), 면역 조절 작용(예를 들어, 비특허문헌 2 참조), 콜레스테롤 저하 작용(예를 들어, 비특허문헌 3 참조) 등의 생균체를 섭취함으로써 발휘되는 생체 조절 기능인 프로바이오틱스 기능이 잇달아 밝혀지고 있다. 그 때문에, 비피더스 균을 섭취함으로써 건강을 유지할 목적으로서, 요구르트·치즈 등 발효유 음식품, 과자류 등 유산균류를 포함하는 각종 음식품의 개발이나, 건강 식품이나 의약품 등의 소재로서 이용하기 위한 개발이 이루어지고 있다.

이들 음식품 등에 비피더스 균을 첨가하는 경우, 미리 배양한 비피더스 균을 가공하여 첨가하는데, 그 가공에는 엄청난 노동력 및 시간을 필요로 하고, 또 가공에 있어서 높은 생잔율을 유지하기 위해서는 기술적으로 매우 곤란한 점이 있었다.

한편, 유산균 등은 예로부터 요구르트·치즈 등 다수의 유제품에 스타터로서 이용되고 있다. 또 최근, 그 정장 작용 뿐만아니라 면역 조절 작용(예를 들어, 비특허문헌 2 참조)이나 염증성 장질환 개선 작용(예를 들어, 비특허문헌 4 참조) 등의 프로바이오틱스 기능을 기대하여, 각종 식품에 첨가되고 있다.

그러나 종래 이들 유산균 등은 우유 등에서 배양함으로써 그 균체를 취득하고 있는데, 그 때문에 많은 노동력과 엄청난 시간을 필요로 하고, 또 균체의 품질 관리 등에 대해서 충분히 주의해야 한다는 문제가 있었다.

따라서, 미리 동결 또는 동결건조한 유산균류의 생균체를 사용함으로써 유산균류를 함유하는 음식품, 예를 들어 요구르트나 치즈 등의 유제품을 간단히 제조할 수 있다. 그러나, 이들 제품에 필요한 균 농도를 가지는 동결 또는 동결건조 유산균류를 조제하는 것은 융해시 또는 동결건조시에 있어서 균체가 입는 손상 또는 사멸을 방지해야 되기 때문에 매우 곤란했다.

종래, 이들 문제를 해결하기 위해서 많은 동결 보호 물질 및 동결건조 보호 물질이 개발되었다. 이들 물질에는 탈지유·글루타민산나트륨·젤라틴 및 자당(예를 들어, 특허문헌 1 참조)·페닐알라닌·히스티딘·구연산·숙신산·주석산 및 탄산알칼리(예를 들어, 특허문헌 2 참조) 등이 알려져 있고, 그 밖에 젖당·트레할로스·탈지분유·소르비톨·아스코르빈산 소다(예를 들어, 비특허문헌 5 참조) 등도 알려져 있다.

그러나, 이들 종래 기술에 의해서도, 동결시 및 동결건조시의 균체의 손상 또는 사멸은 막대하며, 고농도 또한 안정된 동결 균체 또는 동결건조 균체를 조제하는 것은 곤란했다. 특히 균체 조제시에 균체 분산액과 균이 자화하는 보호 물질을 혼합한 상태에 있어서는, 가급적으로 저온에서 또한 신속하게 동결 작업을 실시하지 않으면, 균의 활발한 대사에 의해 생산되는 산에 의해 동결해야 할 균체 분산액의 pH가 저하되어, 생잔율이 현저하게 저하된다. 또한, 동결시의 균체 분산액의 pH는 융해시 또는 동결건조시의 균체의 손상 또는 사멸에 현저한 영향을 주기 때문에, 동결전의 균체 분산액의 pH에는 충분히 주의를 기울여, 경우에 따라서는 알칼리 등으로 중화할 필요가 있었다.

또한, 동결 또는 동결건조 균체의 제조 공정에 있어서는, 균체 분산액을 동결하는 속도가 균체의 손상 또는 사멸에 있어서 막대한 영향을 준다. 즉, 가급적으로 신속하게 액온을 저하시키는 것이 바람직하지만, 공업적 규모로 제조하는 경우에는 급속 동결을 실시함에 있어서 극복해야 하는 문제가 다수 존재하고 있었다.

일본 특허 공고 소53-8792호 공보 일본 특허 공개 소61-265085호 공보

A. Garcia-Lafuente et al. Modulation of colonic barrier function by the composition of the commensal flora in the rat. Gut. 48(4):503-507, 2001. E. Isolauri et al. Probiotics in the management of atopic eczema. Clinical & Experimetal Allergy. 30(11):1604-1610, 2000. J. Z. Xiao et al. Effects of Milk Products Fermented by Bifidobacterium longum on Blood Lipids in Rats and Healthy Adult Male Volunteers. Journal of Dairy Science. 86:2452-2461, 2003. K. L. Madsen et al. Lactobacillus species prevents colitis in interleukin 10-gene-deficient mice. Gastroenterology. 116:1107-1114, 1999. Ana S. Carvalho et al. Relevant factors for the preparation of freeze-dried lactic acid bacteria. International Dairy Journal. 14(10):835-847, 2004.

이상과 같이, 종래, 미생물의 동결 또는 동결건조 공정에 있어서 균체의 손상 또는 사멸을 방지할 수 있는 범용 보호제는 존재하지 않으며, 그 개발이 기대되고 있었다. 따라서, 본 발명은 이들 문제점을 고려하여, 미생물의 생잔성 향상에 우수한 효과를 가지고, 또한 제품의 풍미에 악영향을 주지 않으며, 제조 비용이 들지 않는 신규의 미생물의 생잔성 향상제를 제공하는 것을 과제로 한다.

한편, 치즈를 제조할 때에 대량의 유청(치즈 훼이)이 부산물로서 배출된다. 유청에는 독특한 풍미가 있어, 그대로는 음용에 적합하지 않기 때문에, 그래서 훼이 단백질을 농축한 WPC나, 이온 교환 수지 흡착법을 행한 후에 농축, 건조시킨 분리 훼이 단백질(WPI)의 생산에 주로 사용된다. 이들은 카세인과 비교하여 아미노산 조성이 우수하며, 영양 가치가 높고 게다가 저렴한 식품 소재로서 폭넓게 이용되고 있다. 그러나, 최근, 치즈의 소비량 증가에 따라 WPC나 WPI를 제조할 때에 생기는 폐액량도 증가하고 있어, 환경 보호나 자원의 유효 이용의 면에서도 추가적인 이용 방법의 개발이 필요하게 되고 있다.

본 발명자들은 이 WPC 및 WPI를 제조할 때에 생기는 폐액이 저렴하며 대량으로 입수 가능한 것에 주목하는 한편, 상기 과제를 해결하기 위해 상기 동결건조 미생물균체의 제조 방법에 대해서 예의 연구를 행한 결과, 젖 또는 유청을 한외여과(UF)막 처리함으로써 얻어지는 투과액(퍼미에이트)을 미생물균체와 혼합하여, 동결 또는 동결건조함으로써, 공정에 있어서 균체의 손상 또는 사멸을 방지할 수 있는 것을 알아내어, 본 발명을 완성시켰다.

따라서, 본 발명은 하기의 구성으로 이루어지는 발명이다.

(1) 젖 또는 유청을 한외여과(UF)막 처리하여 얻어지는 투과액(퍼미에이트)을 미생물균체와 혼합하여, 동결 또는 동결건조하는 것을 특징으로 하는 동결 또는 동결건조 미생물균체의 제조 방법.

(2) 젖 또는 유청을 한외여과(UF)막 처리하여 얻어지는 투과액(퍼미에이트)중의 젖당을 효소 및/또는 열에 의해 분해한 후에, 미생물균체와 혼합하여, 동결 또는 동결건조하는 것을 특징으로 하는 동결 또는 동결건조 미생물균체의 제조 방법.

(3) 미생물이 비피도박테리움(Bifidobacterium)속, 락토바실러스(Lactobacillus)속, 스트렙토코커스(Streptococcus)속, 락토코커스(Lactococcus)속 중 어느 1종 이상인 것을 특징으로 하는 상기 제조 방법.

(4) (1) 또는 (2) 중 어느 하나에 기재된 방법에 의해 얻어지는 미생물의 동결 또는 동결건조 균체.

(5) 젖 또는 유청을 한외여과(UF)막 처리하여 얻어지는 투과액(퍼미에이트)을 비피도박테리움(Bifidobacterium)속, 락토바실러스(Lactobacillus)속, 스트렙토코커스(Streptococcus)속, 락토코커스(Lactococcus)속 중 어느 1종 이상의 미생물균체와 혼합하여, 동결 또는 동결건조함으로써 얻어지는 미생물의 동결 또는 동결건조 균체.

(6) 젖 또는 유청을 한외여과(UF)막 처리하여 얻어지는 투과액(퍼미에이트)중의 젖당을 효소 및/또는 열에 의해 분해한 후에, 비피도박테리움(Bifidobacterium)속, 락토바실러스(Lactobacillus)속, 스트렙토코커스(Streptococcus)속, 락토코커스(Lactococcus)속 중 어느 1종 이상의 미생물균체와 혼합하여, 동결 또는 동결건조함으로써 얻어지는 미생물의 동결 또는 동결건조 균체.

(7) 젖 또는 유청을 한외여과(UF)막 처리하여 얻어지는 투과액(퍼미에이트)을 유효 성분으로 하는 미생물의 동결 또는 동결건조 보호제.

본 발명은 동결 또는 동결건조 공정에 있어서 균체의 손상 또는 사멸이 적고, 또한 생잔율이 높은 동결 또는 동결건조 미생물균체의 제조 방법, 이 제조 방법에 의해 얻어지는 균체 및 보호제를 제공하는 것을 목적으로 하고 있다.

본 발명의 제조 방법의 특징은 젖 또는 유청을 한외여과(UF)막 처리하여 얻어지는 투과액(퍼미에이트)을 미생물균체와 혼합하여, 동결 또는 동결건조하는 것에 있다. 이하, 본 발명에 대해서 상세하게 설명한다.

본 발명에서, 투과액(퍼미에이트)을 조제할 때에 사용하는 원재료로서 젖 또는 유청을 들 수 있다. 젖으로서는 식품 제조에 통상 사용되는 젖이면 어느 젖을 사용해도 되며, 예를 들어 전유, 탈지조제유, 환원유, 농축유, 버터 밀크, 크림, 탈지분유, 또는 이들의 혼합물을 들 수 있다.

유청으로서는 우유, 물소, 산양 등의 포유동물의 젖으로부터 치즈를 제조한 부산물, 젖의 pH를 산성으로 하여 산 카세인을 얻은 부산물, 젖을 정밀 여과막 등으로 처리하여 얻어진 투과액 등을 사용할 수 있다. 이들이 산성인 경우에는, 수산화나트륨, 탄산나트륨, 수산화칼륨 등의 pH 조정제에 의해 pH를 중성 부근으로 재조정함으로써 사용할 수 있다. 이들은 분말상이어도 되지만, 이것을 효소 반응시킬 때는 수용액의 상태로 사용할 수 있다.

이들 원재료를 한외여과(UF)막 처리하여, 투과액(퍼미에이트)을 얻을 수 있다. 이 때의 막처리로서는 분자량 5,000커트 이상 또는 10,000커트 이상의 한외여과(UF)막을 사용하면 된다. 얻어진 투과액에는 주로 8∼20g/100g의 젖당 외에, 미네랄류, 비타민류, 아미노산, 펩티드 등의 저분자 물질이 포함된다.

미네랄류로서는 젖중에 포함되는 수용성의 미네랄, 예를 들어, 20mg∼1,000mg/100g의 칼슘, 30∼1,000mg/100g의 칼륨, 30∼300mg/100g의 인, 10∼100mg/100g의 마그네슘 등을 들 수 있다.

비타민류로서는 젖중에 포함되는 수용성의 비타민, 예를 들어, 0.04mg∼2mg/100g 비타민 B₂, 0.01∼0.5mg/100g의 비타민 B₁, 0.03∼1.5mg/100g의 니아신, 0.5∼25mg/100g의 비타민 C 등을 들 수 있다.

얻어진 투과액(퍼미에이트)은 수용액인채로, 또는 농축이나 건조시킴으로써 분말화하여 미생물균체와 혼합하여, 동결 또는 동결건조 균체를 조제할 수 있다.

본 발명의 동결 또는 동결건조 보호제의 실시 태양으로서는, 얻어진 투과액(퍼미에이트)을 수용액인채로, 또는 농축이나 건조시킴으로써 분말화하여, 미생물균체와 혼합하여, 동결 또는 동결건조 균체를 조제할 수 있다. 분말화한 경우는 보존이나 운반 등의 점에서 이점이 있다. 또, 분말화한 것을 다시 용액으로 한 후, 미생물균체와 혼합할 수도 있다.

본 발명에 있어서의 미생물 보호제의 적응의 대상이 되는 미생물은 동결 또는 동결건조하여 사용되는 유용한 미생물이며, 그 종류는 특별히 한정되는 것은 아니지만, 구체적으로는, 예를 들어 비피더스 균, 유산균 등, 세균, 곰팡이, 효모 등이다. 보다 구체적으로는, 비피더스 균은 비피도박테리움(Bifidobacterium)속에 속하는 미생물이며, 예를 들어 비피도박테리움·롱검(Bifidobacterium longum) 등을 들 수 있다. 또한, 사용하는 비피더스 균은 이들 균종에 한정되는 것은 아니다.

또, 유산균 등은 일반적으로 유산균으로 분류되어 있는 미생물이며, 락토바실러스(Lactobacillus)속, 특히 락토바실러스·가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스·델브루키·아종·불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus) 등, 스트렙토코커스(Streptococcus)속에 속하는 미생물, 특히 스트렙토코커스·서모필러스(Streptococcus thermophilus), 락토코커스(Lactococcus)속에 속하는 미생물, 특히 락토코커스·락티스·아종·락티스(Lactococcus lactis ssp. lactis)를 들 수 있다. 한편, 사용하는 유산균 등은 이들 균종에 한정되는 것은 아니다.

또, 유산균류 이외의 세균으로서는 프로피온산균(Propionibacterium)속에 속하는 미생물, 특히 프로피오니박테리움·프로이덴라이히(Propionibacterium freudenreichii) 등, 바실러스(Bacillus)속에 속하는 미생물, 특히 바실러스·섭틸리스(Bacillus subtilis) 등을 들 수 있다. 또, 곰팡이는 페니실륨(Penicillium)속에 속하는 미생물, 예를 들어 페니실륨·로퀘폴티(Penicillium roqueforti) 등, 효모는 사카로미세스(Saccharomyces)속에 속하는 미생물, 예를 들어 사카로미세스·세레비시에(Saccharomyces cerevisiae) 등을 들 수 있다. 또한, 사용하는 세균·곰팡이·효모는 이들 균종에 한정되는 것은 아니다.

미생물의 균체는 상법에 의해 제조할 수 있다. 예를 들어, 글루코오스, 효모 엑기스, 펩톤 등을 포함하는 액체배지에서 상기 미생물의 1종 또는 2종 이상을 통상 25∼45℃에서 4∼24시간 배양하고, 배양액으로부터 균체를 집균하여 세정하는 등의 처리를 행한 다음 습균체를 얻는다.

얻어진 습균체에 통상 당해 투과액을 10∼75%, 바람직하게는 25∼50%의 농도로 첨가하여 균일하게 혼합한다.

혼합후, 동결 또는 동결건조는 상법에 의해 행할 수 있다. 동결하는 경우는 예를 들어 -20℃∼-160℃ 이하(액체질소 등을 사용), 동결건조하는 경우는 선반 온도 35℃ 이하, 1.0×10^-1torr정도의 진공하에서 행할 수 있다.

또, 젖 또는 유청을 한외여과(UF)막 처리하여 얻어지는 투과액(퍼미에이트)중의 젖당을 효소 및/또는 열에 의해 분해한 후에, 미생물과 혼합할 수도 있다. 젖당 분해는 β-갈락토시다아제를 사용하여 행하는 것이 바람직하다.

본 발명에 있어서는, 이상과 같이 당해 막처리 투과액을 첨가, 혼합함으로써 동결 또는 동결건조시의 미생물균체의 손상 또는 사멸을 경감시키고, 또한 높은 생잔율로 고농도의 미생물균체의 동결 또는 동결건조 균체를 얻을 수 있다.

다음에 실시예를 나타내고, 본 발명을 상세하게 설명한다.

또한, 이하에 기재하는 실시예는 본 발명을 설명하는 것이며, 실시예의 기술에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1

(유산균류의 조제)

GAM 배지(닛스이세이야쿠사제)에 최종 농도 1%가 되도록 글루코오스를 첨가한 것에, 비피도박테리움·롱검(Bifidobacterium longum) JCM 1217^T의 전(前)배양액 2%를 접종하고, 37℃에서 16시간 배양하여, 비피더스 균액 1,000mL를 얻었다. 이 균액 250mL를 냉각한 후, 500mL의 원심관에 넣어 5,000rpm×10분의 원심 분리를 행하고, 데칸테이션에 의해 상청을 적당량 제거함으로써, 25배로 비피더스 균이 농축된 비피더스 균액을 얻었다.

(투과액의 조제)

치즈 훼이 80kg을 크림 세퍼레이터에서 원심 분리후, 65℃에서 30분 살균하고, 분획분자량 10,000의 UF막(PW1812T, 재질:폴리에테르설핀, 모듈:스파이럴형, 막 면적:0.55m², DESALINATION사제)을 사용하여, 순환 유량 10L/분, 평균 압력 4kg/cm²로 19배까지 농축하여, 고형 14%, 젖당 11%, 단백질 0.3%, 미네랄 0.6%의 UF투과액 75kg을 얻었다. 얻어진 투과액은 그대로 본 발명의 동결 또는 동결건조 보호제로서 사용할 수 있다.

(동결건조 균체의 조제)

조제한 비피더스 균액에, 물(시료 1), 탈지분유(유키지루시뉴교사제) 10% 및 L-글루타민산나트륨(와코준야쿠사제) 1%를 포함하는 용액의 혼합액(시료 2), 10% 젖당(와코준야쿠사제) 수용액(시료 3), 실시예 1에서 조제한 투과액(시료 4)을 등량 가함으로써, 12.5배로 비피더스 균이 농축된 4종류의 각 비피더스 균액을 얻었다. 얻어진 각 균액을 상법에 따라서 동결건조 처리를 행하여(쿄와신쿠 동결건조 장치 RLE-308, 쿄와신쿠기주츠사제, 선반 온도:35℃ 이하, 진공도:1.0x10^-1torr), 약3g의 각 동결건조 비피더스 균체를 얻었다.

얻어진 동결건조 비피더스 균체를 37℃하에서 강제 열화 시험에 제공하고, 시험 개시로부터 3주간후의 샘플중의 생균수를 측정하여 생잔율을 산출했다. 결과를 표 1에 나타낸다.

실시예 2

(유산균류의 조제)

M17 배지(DIFCO사제)에 최종 농도 0.5%가 되도록 락토오스를 첨가한 것에, 락토코커스·락티스·아종·락티스(Lactococcus lactis ssp. lactis) JCM 5805^T의 전배양액 2%를 접종하고, 30℃에서 16시간 배양하여 유산균액 1,000mL를 얻었다. 이 균액을 실시예 1과 동일한 처리를 행함으로써 25배로 유산균이 농축된 유산균액을 얻었다.

(동결건조 균체의 조제)

이 균액에, 물(시료 1), 탈지분유(유키지루시뉴교사제) 10% 및 L-글루타민산나트륨(와코준야쿠사제) 1%를 포함하는 용액의 혼합액(시료 2), 10% 젖당(와코준야쿠사제) 수용액(시료 3), 실시예 1에서 조제한 투과액(시료 4)을 등량 가함으로써, 12.5배로 유산균이 농축된 4종류의 각 유산균액을 얻었다.

얻어진 각 균액을 상법에 따라서 동결건조 처리를 행하여 약3g의 각 동결건조 유산균체를 얻었다.

얻어진 동결건조 유산균체를 37℃하에서 강제 열화 시험에 제공하고, 시험 개시로부터 3주간후의 샘플중의 생균수를 측정하여 생잔율을 산출했다. 결과를 표 1에 나타낸다.

실시예 3

(유산균류의 조제)

MRS 배지(DIFCO사제)에 락토바실러스·델브루키·아종·불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus) JCM 1002^T, 또는 락토바실러스·가세리(Lactobacillus gasseri) JCM 1131^T, 또는 락토바실러스·카세이(Lactobacillus casei)JCM 1134^T, 또는 락토바실러스·플란타룸(Lactobacillus plantarum) JCM 1149^T의 전배양액 2%를 접종하고, 37℃에서 16시간 배양하여 유산균액 1,000mL를 얻었다. 이 균액을 실시예 1과 동일한 처리를 행함으로써 25배로 유산균이 농축된 각 유산균액을 얻었다.

(동결건조 균체의 조제)

이 균액에, 물(시료 1), 탈지분유(유키지루시뉴교사제) 10% 및 L-글루타민산나트륨(와코준야쿠제) 1%를 포함하는 용액의 혼합액(시료 2), 10% 젖당(와코준야쿠제) 수용액(시료 3), 실시예 1에서 조제한 투과액(시료 4)을 등량 가함으로써, 12.5배로 농축된 4종류의 각 유산균액을 얻었다.

얻어진 각 균액을 상법에 따라서 동결건조 처리를 행하여, 약3g의 각 동결건조 유산균체를 얻었다. 얻어진 동결건조 유산균체를 37℃하에서 강제 열화 시험에 제공하고, 시험 개시로부터 3주간후의 샘플중의 생균수를 측정하여 생잔율을 산출했다. 결과를 표 1에 나타낸다.

표 1에 나타내는 결과로부터, 어느 유산균류에 대해서도 당해 막처리 투과액을 사용한 시료 4는 보호제를 사용하지 않은 시료 1, 공지의 보호제를 사용한 2 및 3과 비교하여 높은 생잔율을 가지는 것이 확인되었다. 또한, 본 발명품인 시료 4는 시료 3과 동일한 정도의 젖당량이지만, 시료 3에 비교하여 높은 생잔성을 나타내어, 당해 막처리 투과액의 생잔성 효과에 있어서의 우위성이 확인되었다.

실시예 4

(유산균류의 조제)

실시예 1과 동일한 방법으로 25배로 농축된 비피도박테리움·롱검(Bifidobacterium longum) JCM 1217^T의 균액을 얻었다.

(투과액의 조제)

실시예 1과 동일한 방법으로 UF 투과액 75kg을 얻었다. 그 후, 얻어진 투과액을 감압 농축에 의해 전체 고형율이 65중량%가 되도록 농축했다. 얻어진 농축 UF막 투과액 5kg에 β-갈락토시다아제(스미락토L, 신니혼카가쿠코교사제) 25g을 첨가하여, 55℃에서 2시간 효소 반응을 행한 후, 홀드 튜브를 가지는 플레이트식 열교환기를 사용하여, 85℃에서 5분간 가열하여 효소 반응을 정지시켰다. 이와 같이 하여 젖당 분해 시럽상 조성물 4kg을 얻었다. 얻어진 투과액은 그대로 본 발명의 동결 또는 동결건조 보호제로서 사용할 수 있다.

(동결건조 균체의 조제)

조제한 비피더스 균액에, 물(시료 1), 탈지분유(유키지루시뉴교사제) 10% 및 L-글루타민산나트륨(와코준야쿠사제) 1%를 포함하는 용액의 혼합액(시료 2), 10% 젖당(와코준야쿠사제) 수용액(시료 3), 젖당 분해 시럽상 조성물(시료 5)을 등량 가함으로써, 12.5배로 비피더스 균이 농축된 4종류의 각 비피더스 균액을 얻었다.

얻어진 각 균액을 실시예 1과 동일한 방법으로 동결건조 처리를 행하여 약3g의 각 동결건조 비피더스 균체를 얻었다.

얻어진 동결건조 비피더스 균체를 37℃하에서 강제 열화 시험에 제공하고, 시험 개시로부터 3주간후의 샘플중의 생균수를 측정하여 생잔율을 산출했다. 결과를 표 2에 나타낸다.

실시예 5

(유산균류의 조제)

실시예 2와 동일한 방법으로 25배로 농축된 락토코커스·락티스·아종·락티스(Lactococcus lactis ssp. lactis) JCM 5805^T의 균액을 얻었다.

(동결건조 균체의 조제)

이 균액에, 물(시료 1), 탈지분유(유키지루시뉴교사제) 10% 및 L-글루타민산나트륨(와코준야쿠사제) 1%를 포함하는 용액의 혼합액(시료 2), 10% 젖당(와코준야쿠사제) 수용액(시료 3), 실시예 4에서 조제한 젖당 분해 시럽상 조성물(시료 5)을 등량 가함으로써, 12.5배로 유산균이 농축된 4종류의 각 유산균액을 얻었다.

얻어진 각 균액을 실시예 1과 동일한 방법으로 동결건조 처리를 행하여 약3g의 각 동결건조 유산균체를 얻었다.

얻어진 동결건조 유산균체를 37℃하에서 강제 열화 시험에 제공하고, 시험 개시로부터 3주간후의 샘플중의 생균수를 측정하여 생잔율을 산출했다. 결과를 표 2에 나타낸다.

실시예 6

(유산균류의 조제)

실시예 3과 동일한 방법으로 25배로 농축된 락토바실러스·델브루키·아종·불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus)JCM 1002^T, 또는 락토바실러스·가세리(Lactobacillus gasseri) JCM 1131^T, 또는 락토바실러스·플란타룸(Lactobacillus plantarum) JCM 1149^T의 각 균액을 얻었다.

(동결건조 균체의 조제)

표 2에 나타내는 결과로부터, 어느 유산균류에 대해서도 당해 막처리 투과액을 사용한 시료 5는 보호제를 사용하지 않은 시료 1, 및 공지의 보호제를 사용한 2 및 3과 비교하여 높은 생잔율을 가지는 것이 확인되었다.

Claims

동결시 또는 동결건조시의 보호제로서, 젖 또는 유청 투과액 중의 젖당을 효소 및 열에 의해 분해한 후 락토바실러스 불가리쿠스, 락토바실러스 가세리, 락토바실러스 플란타룸, 락토코커스 락티스, 비피도박테리움 롱검 및 락토바실러스 카세이로 이루어진 군에서 선택된 어느 1종 이상의 유산균 균체와 혼합하여, 동결 또는 동결건조하는 것을 특징으로 하는 동결 또는 동결건조 유산균 균체 제조방법.
동결시 또는 동결건조시의 보호제로서, 젖 또는 유청 투과액 중의 젖당을 효소 및 열에 의해 분해한 후 락토바실러스 불가리쿠스, 락토바실러스 가세리, 락토바실러스 플란타룸, 락토코커스 락티스, 비피도박테리움 롱검 및 락토바실러스 카세이로 이루어진 군에서 선택된 어느 1종 이상의 유산균 균체와 혼합하여, 동결 또는 동결건조함으로써 얻어지는 것을 특징으로 하는 동결 또는 동결건조 유산균 균체.
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